JP6300641B2 - 皮膚バリア機能改善効果を有する放線菌培養物 - Google Patents
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Description
化粧品等の皮膚外用組成物においても、所定の生物活性を付与することを目的として、微生物由来の成分を配合することが行われている。
特開2011-201884には、放線菌培養液から回収された化合物を、医薬品や化粧品に配合することが記載されている。該化合物はメラノコルチン受容体調節活性を有する化合物であるとされている。
特開2008-255079には、火山性堆積破砕土、米糠、トウモロコシ粉末、キトサン粉末、胚芽、糖蜜等を含む有機質培地を用いた培養による、微生物(放線菌、麹菌、酵母)の代謝、発酵、分解能力を活用した化粧品成分の製造方法が記載されている。得られた化粧品は、放線菌の代謝成分であるキチナーゼを含有する。
(1)植物から分離され、ストレプトマイセス属K10-0526(微生物寄託 受託番号:NITE P-01846)、プロミクロモノスポラ属K12-0991(微生物寄託 受託番号:NITE P-01847)若しくはプロミクロモノスポラ属K12-1001(微生物寄託 受託番号:NITE P-01848)である放線菌の培養物を含む組成物。
(2)皮膚バリア機能改善作用を有する、上記(1)の組成物。
(3)角層成熟促進作用を有する、上記(1)の組成物。
(4)インボルクリン産生促進作用を有する、上記(1)の組成物。
(5)皮膚外用組成物である、上記(1)〜(4)のいずれかに記載の組成物。
本発明において、放線菌の培養物には、培養上清、菌体抽出物、培養上清・菌体の抽出物のいずれもが含まれる。
本発明で「インボルクリン産生」というときは、特に記載した場合を除き、ヒトケラチノサイト(ヒト皮膚表皮角化細胞)によるインボルクリンの産生を意味する。インボルクリン産生を促進する能力の有無及び/又はその程度は、当業者であれば適宜、公知の手段を用いて確認・測定することができる。詳細な条件は、本明細書の実施例の項を参照することができる。
皮膚外用組成物には、化粧品、医薬部外品、外用医薬品等が含まれる。
また、本発明の放線菌培養物は、インボルクリン産生促進剤の有効成分として用いることができる。
(1)放線菌の培養及び検体の調製
放線菌を種培地(培地A)を使用し、振とう培養を行った(27℃、3日間)。この培養液を1%になるように表1の培養培地(培地B〜F)から任意に2種を選択して植菌し、27℃、6日もしくは4日間振とう培養を行った。培養後、等量のエタノールを加え抽出し、遠心分離し、上澄みを試験検体とした。
ヒトケラチノサイト細胞を5×104 cell/cm2の密度で96ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地は10%ウシ胎児血清(FBS)を含むDMEM培地を使用して、CO2インキュベーター(5%CO2、37℃)内で24時間培養した。24時間後、各検体を添加した10%FBSを含むDMEM培地に置換し、72時間培養した。
A1=試料未添加の蛍光強度
A0=試料未添加で一次抗体未作用の蛍光強度
B1=試料添加の蛍光強度
B0=試料添加で一次抗体未作用の蛍光強度
上記試験でインボルクリン産生促進効果を示したwellについて、測定に使用したプレートをそのまま蛍光顕微鏡(Nikon/ECLIPSE Ti)により観察し、インボルクリン、核の蛍光画像を取得した。(核の蛍光画像のデータは示さない。)
その際に、生細胞率が明らかに減少したwellについて、分化誘導による増殖抑制か細胞毒性によるものかを観察し判断した。
インボルクリン産生促進効果の確認できた検体について再現性、培養日数、菌体抽出物と培養上清の活性比較を検討し、放線菌K10-0526とK12-0991、K12-1001の培養物に高いインボルクリン産生促進効果を確認した(表2)。更に、未実施の培養培地を用いて培養上清・菌体の抽出物からのインボルクリン産生促進効果を確認した(表3)。培養物を0.5%〜3.0%になるように各培養培地で希釈して作用させた。
培養上清は、培養後、遠心分離を行い、上澄みに等量のエタノールを加えたものを培養上清の検体とした。菌体抽出は、培養後、遠心分離を行い上清を除去した菌体に50%エタノール水溶液を加えて抽出した後に、遠心分離を行って得られる上澄みを検体(菌体抽出物)とした。培養上清・菌体抽出は、前述の実施例(1)の調製方法を用いた。
図1のインボルクリン免疫染色画像の説明は次のとおりである。図1の画像と表3は対応している。
a: サンプル無添加、
b: 1% サーマスサーモフィルス培養物(比較例)、
c: 3% サーマスサーモフィルス培養物(比較例)、
d: 0.5% K10-0526 4日培養 培地D 培養上清・菌体抽出物、
e: 1% K10-0526 4日培養 培地D 培養上清・菌体抽出物、
f: 3% K10-0526 4日培養 培地D 培養上清・菌体抽出物、
g: 0.5% K12-0991 6日培養 培地C 培養上清・菌体抽出物、
h: 1% K12-0991 6日培養 培地C 培養上清・菌体抽出物、
i: 3% K12-0991 6日培養 培地C 培養上清・菌体抽出物、
j: 0.5% K12-1001 6日培養 培地D 培養上清・菌体抽出物、
k:1% K12-1001 6日培養 培地D 培養上清・菌体抽出物、
l: 3% K12-1001 6日培養 培地D 培養上清・菌体抽出物。
プロミクロモノスポラ属K12-0991株は培養培地Cで27℃、6日間振とう培養した培養物に特に高いインボルクリン産生促進効果を示した。
Claims (5)
- 植物から分離され、ストレプトマイセス属K10-0526(受託番号:NITE P-01846)、プロミクロモノスポラ属K12-0991(受託番号:NITE P-01847)若しくはプロミクロモノスポラ属K12-1001(受託番号:NITE P-01848)である放線菌の培養物を含む組成物。
- 皮膚バリア機能改善作用を有する、請求項1に記載の組成物。
- 角層成熟促進作用を有する、請求項1に記載の組成物。
- インボルクリン産生促進作用を有する、請求項1に記載の組成物。
- 皮膚外用組成物である、請求項1〜4のいずれかに記載の組成物。
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