JP6263508B2

JP6263508B2 - 疾患修飾性抗リウマチ薬（ｄｍａｒｄ）および抗癌剤としてのメトトレキサートの持続性放出製剤

Info

Publication number: JP6263508B2
Application number: JP2015188829A
Authority: JP
Inventors: ダニエルガルシアルーイ; ギブソンルイス; ランバートウィリアム; リーベンジャミン; ズーリャンジン
Original assignee: パシラファーマシューティカルズインコーポレーテッド
Priority date: 2010-05-13
Filing date: 2015-09-25
Publication date: 2018-01-17
Anticipated expiration: 2031-05-12
Also published as: CN103002877A; EP2568962B1; JP5980775B2; US9770414B2; JP2013526545A; US20130183371A1; US20110280932A1; JP2017071652A; US20130183370A1; WO2011143484A1; EP2568962A4; IL222683A0; IL222683B; JP2015232049A; CN103002877B; EP2568962A1; US10028911B2

Description

関連出願
本願は、Ｇａｒｃｉａらによる、「ＳＵＳＴＡＩＮＥＤＲＥＬＥＡＳＥＦＯＲＭＵＬＡＴＩＯＮＯＦＭＥＴＨＯＴＲＥＸＡＴＥＡＳＡＤＩＳＥＡＳＥ−ＭＯＤＩＦＹＩＮＧＡＮＴＩＲＥＨＥＵＭＡＴＩＣＤＲＵＧ（ＤＭＡＲＤ）ＡＮＤＡＮ
ＡＮＴＩ−ＣＡＮＣＥＲＡＧＥＮＴ」と題された２０１０年５月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／３３４，５４６号（この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される）、ならびにＧａｒｃｉａらによる、「ＳＵＳＴＡＩＮＥＤ
ＲＥＬＥＡＳＥＦＯＲＭＵＬＡＴＩＯＮＯＦＭＥＴＨＯＴＲＥＸＡＴＥＡＳＡＤＩＳＥＡＳＥ−ＭＯＤＩＦＹＩＮＧＡＮＴＩＲＨＥＵＭＡＴＩＣＤＲＵＧ（ＤＭＡＲＤ）ＡＮＤＡＮＡＮＴＩ−ＣＡＮＣＥＲＡＧＥＮＴ」と題された２０１０年１０月２８日に出願された米国特許出願第１２／９１４，９４４号（この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される）への優先権を主張する。

本出願は、効力を維持または改善する一方、メトトレキサート（ＭＴＸ）の副作用を最小限にするＭＴＸの多胞（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ）リポソーム（ＭＶＬ）製剤に関する。

ＭＴＸは、関節リウマチ（ＲＡ）の主要な第一選択疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）であり、他の自己免疫疾患において効力が実証されている。ＭＴＸはまた、特定の癌および癌状態を処置するために用いられている。癌は、米国において死亡原因の第１位である。癌を処置するための新しいアプローチを見出すためにかなりの努力をしているにも関わらず、主要な処置選択肢は、単独かまたは併用のいずれかでの手術、化学療法、および放射線治療のままである。

世界中で、５００，０００人を超える患者が、即効型ＭＴＸ製剤で処置されている（非特許文献１）。ＭＴＸは、毎回の投薬後に重大な血漿中濃度関連の副作用（悪心、嘔吐、腹部不快感、味覚異常、食欲不振、消化不良、および下痢）を引き起こすため、それは、通常、週に１回、患者が週の労働日までに回復するように、土曜日に服用される。副作用は、主に、高いＣ_ｍａｘ（薬物の最高血漿中濃度を意味する薬物動態学的用語）によって誘発される。一般的な有効用量において、最高８０％の患者が、これらの副作用を被り、たとえＭＴＸがほとんどの患者において優れた効力を与えるにしても、最高３５％の患者がＭＴＸの使用を最終的に中止する（非特許文献２参照）。ＭＴＸの副作用の大部分は、胃腸管系であるようにみえるが、それらの一部（例えば、悪心および嘔吐）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の副作用である場合があり、それゆえに、経口投与よりむしろ皮下投与が必ずしも副作用を改善するとは限らない。

ＲＡにおけるＭＴＸの使用についての最近の推奨は、ＭＴＸの経口投与を、１０〜１５ｍｇ／週から始めて、最高２０〜３０ｍｇ／週まで段階的に増加させるべきであると示唆している。高用量の経口投与（＞１５ｍｇ）は、皮下投与より低い生物学的利用能を生じることが知られている。これは、小腸におけるＭＴＸの能動的吸収のためであり、能動的吸収とは、より高い用量において飽和する能力がある過程である（非特許文献３）。したがって、経口投与に対して不十分な臨床的応答または不耐性の場合、非経口投与を用いることができる。

ＲＡについて、ＭＴＸの効力は、ＭＴＸの最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）に関係していないが、それの血漿中濃度曲線下面積（ｐｌａｓｍａａｒｅａｕｎｄｅｒｔｈｅｃｕｒｖｅ）（「ＡＵＣ」）と直接関係している（非特許文献４）。ＭＴＸＡＵＣは、ＭＴＸ−ポリグルタメートの細胞内レベルとよく相関しており、その後者は、抗炎症効果を与えると考えられている（非特許文献５）。ＭＴＸの経口即効型剤形についての標準ＡＵＣは、２４６６ｍｃｇ／Ｌ・時間である（非特許文献６）。ＭＴＸの皮下即効型剤形についての標準ＡＵＣは、３７８６ｍｇｃ／Ｌ・時間である（同上）。

経口投与されたＭＴＸは、迅速に吸収され（ｔ_ｍａｘ１〜３時間）、迅速にクリアランスされるため（ｔ_１／２８〜１０時間）、Ｃ_ｍａｘは、通常の剤形で調節することは困難である。ｔ_ｍａｘは、最高血漿中濃度に達したとき（それは、吸収速度が排出速度に等しいときである）の薬物投与からの時間である。ＭＴＸの伝統的な即効型剤形の経口投与後のＣ_ｍａｘと皮下投与後のＣ_ｍａｘは類似している（Ｈｏｅｋｓｔｒａら、ＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ、３１６４５−６４８（２００４））。

重要なことには、ＭＴＸのＣ_ｍａｘを低く保つことは、ＭＴＸ投与の副作用の発生率を極めて低いレベルまで低下させることが観察されている。Ｃ_ｍａｘが０．１６μｍｏｌ／ｌ以下に保持された場合には、副作用の発生率は有意に減少することが見出されている（非特許文献７）。長期間にわたって、治療的有効ＡＵＣ（血漿中濃度）に加え、低いＣ_ｍａｘにおいてＭＴＸを供給する徐放性調製物は大きな利益をもたらす。

本出願の実施形態は、そのような大きな利益を提供する。本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、副作用の発生率を極めて低いレベルまで低下させる、ＭＴＸの低いＣ_ｍａｘおよび治療的有効ＡＵＣを有する徐放性製剤を提供する。

本ＭＴＸＭＶＬ製剤はまた、ＭＴＸの効力を維持するのに必要なＡＵＣを提供する。したがって、本出願に記載された徐放性ＭＴＸＭＶＬ製剤は、ＭＴＸ使用の副作用の発生率を極めて低いレベルまで低下させるのに十分低いＣ_ｍａｘを提供しながら、ＭＴＸが第一選択ＤＭＡＲＤとして機能するのに必要なＡＵＣを達成する。

特に、ＭＴＸを送達するために本明細書で用いられるＭＶＬは、各リポソーム粒子内に複数の非同心性チャンバーを含有するリポソームとして定義され、「泡状」マトリックスに似ている。そのような粒子は、同心性水性コンパートメントを封入する、多重膜リポソームとしても知られた多重膜小胞（ＭＬＶ）とは区別されるべきである。さらなる別個の粒子は、単一の内部水性コンパートメントを封入する単層リポソームとしても知られた単層小胞（ＵＬＶ）である。

ＳｗｅｉｅｒｋｏｔおよびＳｚｅｃｈｉｎｓｋｉ、ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｐｏｒｔｓ、５８、４７３−４９２（２００６）Ｒ．Ｊ．ＭｃＫｅｎｄｒｙら、ＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ２０：１８５０（１９９３）Ｓｔａｍｐら、ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ６０６７８−６８７（２００６）Ｈｉｒａｇａら、ＭｏｄＲｈｅｕｍａｔｏｌ１４：１３５（２００４）Ｈｏｒｎｕｎｇら、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、３５、１７０９−１７１５（２００８）Ｈｏｅｋｓｔｒａら、ＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ、３１６４５−４８（２００４）Ｓｈｏｄａら、Ｍｏｄ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、１７：３１１−３１６、２００７

本実施形態は、ある量のメトトレキサートを含有する多胞リポソームを含む製剤であって、それを必要とする被験体への単一用量の上記製剤の投与が、即効型剤形のメトトレキサートのＣ_ｍａｘの５％〜５０％の上記メトトレキサートのＣ_ｍａｘを生じ、かつ被験体における上記メトトレキサートの持続期間が約１日間〜約３０日間である、製剤を提供する。いくつかの実施形態において、多胞リポソームは、メトトレキサートの塩をさらに含む。いくつかの実施形態において、塩はナトリウムである。他の実施形態において、塩はカリウムである。追加の実施形態において、塩は対イオンとして有機塩基を含む。いくつかの実施形態において、被験体におけるメトトレキサートの持続期間は、約１日間〜約７日間である。

他の実施形態において、多胞リポソームは、フォレート（ｆｏｌａｔｅ）をさらに含む。いくつかの実施形態において、多胞リポソームは、コレステロール、１つ以上のリン脂質または１つ以上のその塩、および１つ以上のトリグリセリドをさらに含む。特定の実施形態において、リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロールもしくはその塩、またはこれらの組み合わせである。他の実施形態において、ホスファチジルグリセロールは、ＤＰＰＧ（ジパルミトイルホスファチジルグリセロールまたは１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール））である。追加の実施形態において、ホスファチジルコリンは、ＤＥＰＣ（ジエルコイルホスファチジルコリンまたは１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。他の実施形態において、多胞リポソームは、ＤＯＰＣ（ジオレイルホスファチジルコリン（ｄｉｏｌｅｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）または１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）をさらに含む。別の実施形態において、トリグリセリドは、トリオレイン、トリカプリリン、またはその２つの組み合わせである。さらなる実施形態において、多胞リポソームはリシンをさらに含む。

いくつかの実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約１日間である。他の実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約２日間である。別の実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約３日間である。別の実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約４日間である。別の実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約５日間である。別の実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約６日間である。さらなる実施形態において、メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間は、約７日間である。

別の実施形態において、製剤は、少なくとも２年間、安定である。

いくつかの実施形態において、製剤は、２７〜３１Ｇの針ゲージを通して送達することができる。

別の実施形態は、自己免疫疾患を処置するための方法であって、本ＭＴＸ−ＭＶＬ製剤を、それを必要とする被験体に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は関節リウマチである。他の実施形態において、自己免疫疾患は乾癬である。さらなる実施形態において、自己免疫疾患はループスである。別の実施形態において、自己免疫疾患は強皮症である。別の実施形態において、自己免疫疾患はシェーグレン症候群である。他の実施形態において、自己免疫疾患はグッドパスチャー症候群である。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患はウェゲナー肉芽腫症である。追加の実施形態において、自己免疫疾患は、リウマチ性多発性筋痛である。別の実施形態において、自己免疫疾患はギラン・バレー症候群である。さらなる実施形態において、自己免疫疾患はクローン病である。

いくつかの実施形態において、多胞リポソームは、メトトレキサートのナトリウム塩またはカリウム塩をさらに含む。さらなる実施形態において、多胞リポソームはリシンをさらに含む。

いくつかの実施形態において、多胞リポソームはフォレートをさらに含む。他の実施形態において、フォレートが投与される。さらなる実施形態において、ＭＴＸを含有しないＭＶＬに被包されたフォレートが投与される。

多胞リポソームがコレステロール、リン脂質または１つ以上のその塩、およびトリカプリリンをさらに含む、方法もまた提供される。いくつかの実施形態において、多胞リポソームは、ＤＯＰＣおよびトリオレインをさらに含む。追加の実施形態において、多胞リポソームは、ＤＥＰＣをさらに含む。他の実施形態において、多胞リポソームはリシンをさらに含む。

他の実施形態において、製剤の投与は、本明細書に記載されたＭＴＸ−ＭＶＬ製剤を上記被験体に注射することを含む。いくつかの実施形態において、注射は皮下である。他の実施形態において、注射は筋肉内である。いくつかの実施形態において、注射は皮内である。さらなる実施形態において、注射は腫瘍内である。他の実施形態において、注射は脊髄内である。一つの実施形態において、注射は５〜７日ごとに投与される。別の実施形態において、注射は週に１回、投与される。

別の実施形態は、本ＭＴＸ−ＭＶＬ製剤を投与することを含む、癌を処置するための方法であって、上記製剤が、それを必要とする被験体に、多くて２日ごとに、かつ少なくて４日ごとに投与される、方法を提供する。いくつかの実施形態において、癌は固形腫瘍癌である。他の実施形態において、癌は、妊娠性絨毛腫瘍、乳癌、頭頸部癌、または肺癌である。さらなる実施形態において、癌は妊娠性絨毛腫瘍（破壊性絨毛腺腫、絨毛癌、または胞状奇胎）である。いくつかの実施形態において、癌は血液由来癌である。さらなる実施形態において、血液由来癌は、急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、菌状息肉腫、または骨肉腫である。

いくつかの実施形態において、多胞リポソームは、メトトレキサートのナトリウム塩またはカリウム塩をさらに含む。他の実施形態において、多胞リポソームは、コレステロール、リン脂質または１つ以上のその塩、およびトリカプリリンをさらに含む。追加の実施形態において、多胞リポソームは、ＤＯＰＣをさらに含む。別の実施形態において、多胞リポソームはリシンをさらに含む。

いくつかの実施形態において、製剤の投与は、上記被験体に上記製剤を注射することを含む。他の実施形態において、注射は皮下である。別の実施形態において、注射は２日ごとに投与される。

別の実施形態は、シクロデキストリン化合物を実質的に含まず、好ましくはシクロデキストリン化合物を含まない本ＭＴＸ−ＭＶＬ製剤を提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）ある量のメトトレキサートを含有する多胞リポソームを含む製剤であって、それを必要とする被験体への単一用量の該製剤の投与が、該メトトレキサートの、即効型剤形のメトトレキサートのＣ_ｍａｘに対し５％〜５０％のＣ_ｍａｘを生じ、かつ該被験体における該メトトレキサートの持続期間が約１日間〜約３０日間である、製剤。
（項目２）前記多胞リポソームがメトトレキサートの塩をさらに含む、項目１に記載の製剤。
（項目３）前記塩がナトリウム塩である、項目２に記載の製剤。
（項目４）前記塩がカリウム塩である、項目２に記載の製剤。
（項目５）前記塩が対イオンとして有機塩基を含む、項目２に記載の製剤。
（項目６）前記被験体におけるメトトレキサートの前記持続期間が、約１日間〜約７日間である、項目１に記載の製剤。
（項目７）前記多胞リポソームがフォレートをさらに含む、項目１に記載の製剤。
（項目８）前記多胞リポソームが、コレステロール、１つ以上のリン脂質または１つ以上のその塩、および１つ以上のトリグリセリドをさらに含む、項目１に記載の製剤。
（項目９）前記リン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロールもしくはその塩、またはこれらの組み合わせである、項目８に記載の製剤。
（項目１０）前記ホスファチジルグリセロールがＤＰＰＧ（ジパルミトイルホスファチジルグリセロールまたは１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール））である、項目９に記載の製剤。
（項目１１）前記ホスファチジルコリンがＤＥＰＣ（ジエルコイルホスファチジルコリンまたは１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である、項目９に記載の製剤。
（項目１２）前記多胞リポソームがＤＯＰＣ（ジオレイルホスファチジルコリンまたは１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）をさらに含む、項目９に記載の製剤。
（項目１３）前記トリグリセリドが、トリオレイン、トリカプリリン、またはそれら２つの組み合わせである、項目８に記載の製剤。
（項目１４）前記多胞リポソームがリシンをさらに含む、項目１に記載の製剤。
（項目１５）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約１日間である、項目１に記載の製剤。
（項目１６）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約２日間である、項目１に記載の製剤。
（項目１７）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約３日間である、項目１に記載の製剤。
（項目１８）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約４日間である、項目１に記載の製剤。
（項目１９）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約５日間である、項目１に記載の製剤。
（項目２０）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約６日間である、項目１に記載の製剤。
（項目２１）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約７日間である、項目１に記載の製剤。
（項目２２）前記製剤が少なくとも２年間、安定である、項目１に記載の製剤。
（項目２３）前記製剤が２７〜３１Ｇの針ゲージを通して送達することができる、項目１に記載の製剤。
（項目２４）項目１〜２３に記載の製剤を、それを必要とする被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を処置するための方法。
（項目２５）前記自己免疫疾患が関節リウマチである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）前記自己免疫疾患が乾癬である、項目２４に記載の方法。
（項目２７）前記自己免疫疾患がループスである、項目２４に記載の方法。
（項目２８）前記自己免疫疾患が強皮症である、項目２４に記載の方法。
（項目２９）前記自己免疫疾患がシェーグレン症候群である、項目２４に記載の方法。（項目３０）前記自己免疫疾患がグッドパスチャー症候群である、項目２４に記載の方法。
（項目３１）前記自己免疫疾患がウェゲナー肉芽腫症である、項目２４に記載の方法。（項目３２）前記自己免疫疾患がリウマチ性多発性筋痛である、項目２４に記載の方法。
（項目３３）前記自己免疫疾患がギラン・バレー症候群である、項目２４に記載の方法。
（項目３４）前記自己免疫疾患がクローン病である、項目２４に記載の方法。
（項目３５）前記多胞リポソームが、メトトレキサートのナトリウム塩またはカリウム塩をさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目３６）前記多胞リポソームがフォレートをさらに含む、項目２４に記載の方法。（項目３７）フォレートを投与することをさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目３８）ＭＴＸを含有しないＭＶＬ内に被包されたフォレートを投与することをさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目３９）前記多胞リポソームがリシンをさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目４０）前記多胞リポソームが、コレステロール、リン脂質または１つ以上のその塩、およびトリカプリリンをさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目４１）前記多胞リポソームがＤＯＰＣおよびトリオレインをさらに含む、項目３５に記載の方法。
（項目４２）前記多胞リポソームがＤＥＰＣをさらに含む、項目３５に記載の方法。
（項目４３）前記多胞リポソームがリシンをさらに含む、項目３５に記載の方法。
（項目４４）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約１日間である、項目２４に記載の方法。
（項目４５）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約２日間である、項目２４に記載の方法。
（項目４６）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約３日間である、項目２４に記載の方法。
（項目４７）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約４日間である、項目２４に記載の方法。
（項目４８）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約５日間である、項目２４に記載の方法。
（項目４９）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約６日間である、項目２４に記載の方法。
（項目５０）前記メトトレキサートの血漿中レベルの持続期間が約７日間である、項目２４に記載の方法。
（項目５１）前記製剤の投与が、前記被験体に該製剤を注射することを含む、項目２４に記載の方法。
（項目５２）前記注射が皮下注射である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）前記注射が筋肉内注射である、項目５１に記載の方法。
（項目５４）前記注射が皮内注射である、項目５１に記載の方法。
（項目５５）前記注射が腫瘍内注射である、項目５１に記載の方法。
（項目５６）前記注射が脊髄内注射である、項目５１に記載の方法。
（項目５７）前記注射が５日〜７日ごとに投与される、項目５１に記載の方法。
（項目５８）前記注射が週１回、投与される、項目５７に記載の方法。
（項目５９）項目１〜２３に記載の製剤を投与することを含む、癌を処置するための方法であって、該製剤が、該処置を必要とする被験体に、多くて２日ごとに、かつ少なくて４日ごとに投与される、方法。
（項目６０）前記癌が固形腫瘍癌である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）前記癌が、妊娠性絨毛腫瘍、乳癌、頭頸部癌、または肺癌である、項目６０に記載の方法。
（項目６２）前記妊娠性絨毛腫瘍が、破壊性絨毛腺腫、絨毛癌、または胞状奇胎である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）前記癌が血液由来癌である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）前記血液由来癌が、急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、菌状息肉腫、または骨肉腫である、項目６２に記載の方法。
（項目６５）前記多胞リポソームが、メトトレキサートのナトリウム塩またはカリウム塩をさらに含む、項目５９に記載の方法。
（項目６６）前記多胞リポソームが、コレステロール、リン脂質または１つ以上のその塩、およびトリカプリリンをさらに含む、項目５９に記載の方法。
（項目６７）前記多胞リポソームがＤＯＰＣをさらに含む、項目６５に記載の方法。
（項目６８）前記多胞リポソームがフォレートをさらに含む、項目５９に記載の方法。（項目６９）フォレートを投与することをさらに含む、項目５９に記載の方法。
（項目７０）ＭＴＸを含有しないＭＶＬ内に被包されたフォレートを投与することをさらに含む、項目５９に記載の方法。
（項目７１）前記多胞リポソームがリシンをさらに含む、項目６５に記載の方法。
（項目７２）前記製剤の投与が、前記被験体に該製剤を注射することを含む、項目５９に記載の方法。
（項目７３）前記注射が皮下注射である、項目７２に記載の方法。
（項目７４）前記注射が２日ごとに投与される、項目７３に記載の方法。

図１は、ＭＴＸ対照溶液および本ＭＶＬＭＴＸ製剤の例の皮下注射後の血漿中濃度を示すグラフである。図２は、ＭＴＸ対照溶液および本ＭＶＬＭＴＸ製剤の例の皮下注射後の血漿中濃度を示す、変化したｙ軸を有する、図１の改変されたグラフである。図３は、時間経過による製剤１のパーセント分解生成物を示すグラフである。

本実施形態は、ある量のメトトレキサートを含有する多胞リポソームを含む製剤であって、それを必要とする被験体への単一用量の上記製剤の投与が、即効型剤形のメトトレキサートのＣ_ｍａｘの５％〜５０％の間の上記メトトレキサートのＣ_ｍａｘを生じ、かつ被験体における上記メトトレキサートの持続期間が約１日間〜約３０日間である、製剤を提供する。

本実施形態はまた、本明細書に記載された製剤を、それを必要とする被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を処置するための方法を提供する。

本実施形態はさらに、本明細書に記載された製剤を投与することを含む癌を処置するための方法であって、上記製剤が、それを必要とする被験体に、多くて２日ごとに、かつ少なくて４日ごとに投与される、方法を提供する。

他に規定がない限り、本明細書に用いられる全ての技術的用語および科学的用語は、本出願が属する分野の当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似した方法および材料が、本出願の実施または試験に用いることができるが、適切な方法および材料は下に記載されている。本明細書に挙げられた全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、全体として参照により本出願に組み入れられている。加えて、材料、方法、および例は、例示であるのみであり、限定することを意図するものではない。

特に、ＡＵＣという用語は、血漿中濃度対時間のプロットの血漿中濃度曲線下面積を意味する；Ｃ_ｍａｘという用語は、薬物動態学的用語であり、薬物の最高血漿中濃度を意味する；ｔ_ｍａｘという用語は、Ｃ_ｍａｘに対する時間を意味する；Ｃ_ｍａｘ関連副作用という用語は、非限定的に、悪心、嘔吐、腹部不快感、味覚異常、食欲不振、消化不良、および下痢を含む、血漿中濃度に関連した副作用を意味する；ＭＴＸという用語は、メトトレキサートおよびその塩、ならびに下記で論じられているようなその溶質を意味する；ｔ_１／２という用語は、ＭＴＸの半分が血漿からクリアランスされるのにかかる時間である；ＭＶＬという用語は、多胞リポソームを意味する；ＤＭＡＲＤという用語は、疾患修飾性抗リウマチ薬を意味する；用語「ＭＴＸ血漿中レベルの持続期間」は、投与時点から、累積血漿ＡＵＣが無限時間における累積ＡＵＣの９０％のＡＵＣに達する時点までの間の時間を意味する；用語「即効型剤形」は、薬物の放出を遅らせるためのものがその剤形に存在しないことを意味する；用語「休薬期間」は、薬物が患者の血漿から本質的にクリアランスされているときの、投与と投与の間の期間である。用語「それを必要とする被験体」は、ヒトを含む哺乳類を意味する。用語「シクロデキストリン化合物」は、α、β、およびγシクロデキストリンまたはその誘導体からなる群から選択される１つ以上の化合物を意味する。そのような誘導体の１つには、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが挙げられる。他の誘導体には、スルホブチルエーテルα、β、またはγシクロデキストリンが挙げられる。

自己免疫疾患は、身体に正常に存在する物質および組織に対する身体の過敏性免疫応答から起こる。免疫系は、身体のある部分を病原体と間違い、それを攻撃する。これは、ある特定の器官に制限される場合もあるし、種々の場所における特定の組織に関わる場合もある。自己免疫疾患の処置は、典型的には、免疫抑制 − 免疫応答を減少させる投薬法を用いて行われる。本明細書で用いられる場合、用語「自己免疫疾患」には、クローン病、皮膚筋炎、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、ループス、混合型結合組織障害、重症筋無力症、ナルコレプシー、尋常性天疱瘡、悪性（ｐｅｒｍｉｃｉｏｕｓ）貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、潰瘍性大腸炎、血管炎、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられるが、それらに限定されない。

本出願の一つの実施形態は、自己免疫疾患、特にＲＡおよび乾癬を処置するためのＭＴＸおよびその塩を含有するＭＴＸＭＶＬ製剤を提供する。本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、一般的に、即効型剤形のＭＴＸのＣ_ｍａｘの５％〜５０％の間である、ＭＴＸのＣ_ｍａｘを有する。即効型剤形において、ＭＴＸは、非常に高くかつ非常に早いＣ_ｍａｘを有し、その後、２４時間以内に定量限界（「ＬＯＱ」）より下へ急速に降下する。上記で論じられているように、本ＭＴＸＭＶＬ製剤の投与は、ＭＴＸのＣ_ｍａｘを低く保ち、そのことは、ＭＴＸ使用の副作用の発生率を極めて低いレベルまで低下させる。好ましくは、Ｃ_ｍａｘは、自己免疫疾患の処置のために０．１６μｍｏｌ／Ｌに、またはそれより下にとどまる。本出願の本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、約１日間〜約３０日間の持続期間で、治療的濃度のＭＴＸにおけるＡＵＣの持続を提供する。好ましくは、持続期間は約１日間〜約７日間である。自己免疫疾患の処置について、持続期間は好ましくは、１日間〜５日間である。

ＭＴＸはまた、特定の癌および癌状態を処置するために用いられている。本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、固形腫瘍癌を処置するために用いることができる。そのような癌は、本明細書で論じられているように、破壊性絨毛腺腫、絨毛腫、および胞状奇胎を含む特定の型の妊娠性絨毛腫瘍、ならびに、乳癌、頭頸部癌、および肺癌が挙げられるが、それらに限定されない。本ＭＴＸＭＶＬ製剤はまた、血液由来癌を処置するために用いることができる。そのような癌には、本明細書で論じられているように、急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、菌状息肉腫、および骨肉腫が挙げられるが、それらに限定されない。本ＭＴＸＭＶＬ製剤はまた、腫瘍への直接的送達（例えば、脳脊髄液への送達のための脊髄内、または腫瘍内送達による）のために用いることができる。いくつかの実施形態において、本実施形態の製剤および方法は、髄腔内注射による髄膜（ｍｅｎｎｉｎｇｅａｌ）白血病の処置に向けられる。

上記で論じられているように、本出願のＭＴＸＭＶＬ製剤は、自己免疫疾患の処置について、即効型剤形のＭＴＸのＣ_ｍａｘの５％〜５０％の間である血漿Ｃ_ｍａｘを有する。癌の全身性処置について、自己免疫疾患と比べて顕著により高いＣ_ｍａｘが、一般的に用いられる。それにも関わらず、即効型剤形のＭＴＸで投与された同じＭＴＸ用量の投与と比べてＣ_ｍａｘを低下させることによって副作用の低減を達成することができる。癌の全身性処置についての本出願のＭＴＸＭＶＬ製剤はまた、約１日間〜約３０日間の持続期間で、ＭＴＸの治療的ＡＵＣにおける曝露の持続を提供する。いくつかの実施形態において、持続期間は約１日間〜約７日間である。いくつかの癌は局所的に処置することができる。例えば、髄膜白血病は、２〜５日ごとに１ｍｇ／ｍＬの溶液を用いて１２ｍｇ／平方メートル（最高１５ｍｇ）で投薬されるＭＴＸの髄腔内注射で処置される。別の例は、腫瘍内注射を受けることができる１つ以上の腫瘍である。これらの局所処置において、血漿中濃度は無関係である。むしろ、局所濃度が重要である。本ＭＶＬＭＴＸ製剤は、それが薬物の局所レベルの持続を提供するという事実により、これらの局所処置に有用である。これは、効力を提供し、必要である注射回数を低減し、したがって、患者および介護人に便宜を与える。

自己免疫疾患について、即効型剤形のＭＴＸの血漿Ｃ_ｍａｘの５％〜５０％の間であるＣ_ｍａｘを有するＭＴＸＭＶＬ製剤を提供することに加えて、驚くべきことに、本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、同じＭＴＸ用量において即効型剤形と同じ、またはそれより良い効力を提供する。ＭＴＸの効力は、ＭＴＸのＣ_ｍａｘに関連していないが、ＡＵＣと直接的に相関する。したがって、本出願のＭＶＬ製剤は、上記のように即効型剤形のＭＴＸのＡＵＣと等価またはそれより良いＡＵＣを有する。好ましくは、本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、皮下即効型剤形のＭＴＸと同じＡＵＣを提供する。このＡＵＣは、副作用の低減がより高い投薬量を可能にする場合には、より大きくあり得る。さらに、本製剤、およびその製剤を用いる処置方法は、シクロデキストリンを実質的に含まないことも可能であり、好ましくはシクロデキストリンを含まないことが可能である。驚くべきことに、本製剤および方法について本明細書に記載された有利な効果は、シクロデキストリン化合物を用いることなく達成されている。例えば、本製剤および方法は、ＭＴＸがシクロデキストリン化合物と複合体を形成することなく、長い持続期間を達成した。

さらに、本製剤、およびその製剤を用いた処置方法は、シクロデキストリンを実質的に含まないことも可能であり、好ましくはシクロデキストリンを含まないことが可能である。齧歯類への皮下投与後のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと複合体を形成したＭＴＸを含有するＭＶＬ製剤からのＭＴＸ放出は、Ｋｉｍら（ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３３：３０３−３０６（１９９４）；米国特許第５，７５９，５７３号）によって以前に報告されている。包接複合体の形成は、放出速度の低下を生じた（段落４：２７−３４；段落５：１４−１９参照）。驚くべきことに、本製剤および方法について本明細書に記載された有利な効果は、シクロデキストリン化合物を用いることなく達成されている。例えば、本製剤および方法は、ＭＴＸがシクロデキストリン化合物と複合体を形成することなく、長い持続期間を達成した。

メトトレキサート
本実施形態は、ＭＴＸおよびその塩、水和物、ならびに、結晶性か非晶質かに関わらず、ＭＶＬに被包されたそれらの溶質を用いる。そのような塩には、ナトリウム、カリウム、リシン、アルギニン、および他の薬学的に許容され得る一価または二価の塩基付加塩が挙げられる。用語「ＭＴＸ」は、本明細書で用いられる場合、ありとあらゆるそのような形態を含む。本ＭＴＸＭＶＬ製剤および方法は、ＭＴＸをシクロデキストリンまたはその誘導体と複合体を形成させる必要なしにそれらの望ましい性質を示す。

多胞リポソーム
本実施形態の製剤は、被包して上記のＭＴＸの調節性および持続性放出を提供する、ＭＴＸ被包多胞リポソーム（ＭＴＸ−ＭＶＬ）を用いる。ＭＶＬは以下のプロセスによって作製される。

ＭＴＸを含有する「油中水」型乳濁液は、２つの不混和性の相の、脂質相と第１水相から形成される。脂質相は、揮発性有機溶媒中に少なくとも１つの両親媒性脂質および少なくとも１つの中性脂質で構成される。用語「両親媒性脂質」は、親水性「頭部」基および疎水性「尾部」基を有する分子を指し、膜形成能を有する場合がある。本明細書で用いられる場合、両親媒性脂質には、正味の負電荷を有するもの、正味の正電荷を有するもの、および双性イオンの脂質（等電点において正味の電荷をもたない）が挙げられる。用語「中性脂質」は、それら自体だけでの小胞形成能をもたず、かつ荷電した、または親水性の「頭部」基を欠く、油または脂肪を指す。中性脂質の例には、荷電した、または親水性の「頭部」基を欠く、グリセロールエステル、グリコールエステル、トコフェロールエステル、ステロールエステル、ならびにアルカンおよびスクアレンが挙げられるが、それらに限定されない。

両親媒性脂質は、同じ分子中に疎水性領域および親水性領域を有する広範な脂質から選択される。適切な両親媒性脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、リゾホスファチジルコリン、およびリゾホスファチジルエタノールアミンを含む、双性イオンのリン脂質である。ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、およびカルジオリピンなどの陰イオン性両親媒性リン脂質もまた適している。例えば、アシルトリメチルアンモニウムプロパン、ジアシルジメチルアンモニウムプロパン、ステアリルアミンなどの陽イオン性両親媒性脂質もまた適している。好ましい両親媒性脂質には、ジオレイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジエルコイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、およびジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）が挙げられる。関節リウマチなどの自己免疫疾患および癌を処置するために用いられる本ＭＴＸＭＶＬについての両親媒性脂質の特定の実施形態は、ＤＰＰＧとともに、ＤＯＰＣおよびＤＥＰＣを含む。

適切な中性脂質は、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル、エチレングリコールエステル、およびスクアレンである。本製剤および方法において有用なトリグリセリドの例は、トリオレイン（ＴＯ）、トリパルミトレイン、トリミリストレイン、トリリノレイン（ｔｒｉｌｉｎｏｅｌｉｎ）、トリブチリン、トリカプロイン、トリカプリリン、およびトリカプリンである。本出願において有用なトリグリセリド中の脂肪鎖は、全部同じであってもよいし、全部異なることを含め、全部同じとは限らなくてもよい（混合鎖トリグリセリド）。両方のプロピレングリコールエステルは、カプリル酸とカプリン酸の混合ジエステルであり得る。特に、中性脂質、例えば、トリオレインは、特に自己免疫疾患の処置において、Ｃ_ｍａｘを減少させ、それでもなおこれらの製剤によって提供される利点を保持するために、約０．０１％〜約２０％のパーセンテージ範囲へ増加することができる。特に、トリオレインについてのパーセンテージ範囲は、モル比に関しては、本製剤に用いられるトリカプリリンなどの中性脂質の約１％〜２％である。加えて、コレステロールまたは植物ステロールが、本ＭＶＬに含まれる。

エーテル、エステル、ハロゲン化エーテル、炭化水素、ハロ炭化水素、またはフレオンを含む多くの型の揮発性有機溶媒が、本出願に用いることができる。例えば、ジエチルエーテル、クロロホルム、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、およびそれらの任意の組み合わせが、製剤の作製に用いるのに適している。

必要に応じて、しかし非常に望ましいことには、他の成分が脂質相に含まれる。これらの中には、抗酸化剤、抗菌性保存剤、コレステロール、または植物ステロールがある。

第１水相は、ＭＴＸ、塩基、および浸透圧物質（例えば、塩化ナトリウム、スクロース、グルコース、フラクトース、またはそれらの混合物）を含む。脂質相および第１水相は、動羽根もしくは振動羽根の使用を通してなどの機械的乱流、振盪、バッフル化構造もしくは多孔性パイプからの押し出しにより、または超音波により混合され、油中水型乳濁液を生じる。このように、本出願のＭＴＸは、ＭＶＬ製造の第１工程において直接、被包される。

その後、油中水型乳濁液は、上記の手段によって第２水相へ分散されて、第２水相中に懸濁した溶媒球状体を形成し、水中油中水型乳濁液が形成される。用語「溶媒球状体」は、有機溶媒の顕微鏡的球状液滴を指し、その中に、水性溶液の複数のより小さい液滴が懸濁している。したがって、生じた溶媒球状体は、その中に溶解したＭＴＸを有する複数の水性液滴を含有する。第２水相は、グルコース、スクロース、および／またはリシンなどの追加の成分を含有することができる。

その後、揮発性有機溶媒は、例えば、懸濁液からの表面蒸発により、球状体から除去される。溶媒が実質的に、または完全に蒸発したとき、ＭＶＬが形成される。蒸発のために用いることができる気体には、窒素、アルゴン、ヘリウム、酸素、水素、および二酸化炭素が挙げられる。あるいは、揮発性溶媒は、スパージング、回転蒸発、ダイアフィルトレーションにより、または溶媒選択膜を用いて、除去することができる。

いくつかの実施形態において、本ＭＴＸＭＶＬ製剤における脂質の範囲は以下のとおりであり得る：コレステロールは約５ｍＭ〜約８０ｍＭであり得る；ホスファチジルコリンは約５ｍＭ〜約５０ｍＭであり得る；トリカプリリンは、約５ｍＭ〜約８０ｍＭであり得る；トリオレインは約０ｍＭ〜約８ｍＭであり得る；およびホスファチジルグリセロールは約０ｍＭ〜約１５ｍＭであり得る。ＤＰＰＧは任意選択であり、他の荷電脂質の使用も同様である。癌の処置について、ＲＡより長い持続期間が好ましい。これは、トリグリセリドの量を増加させることにより、より長い鎖のホスファチジルコリンを用いることによって短鎖トリグリセリドに対する長鎖トリグリセリドの比率を増加させることにより、またはコレステロール濃度を増加させることにより、達成することができる。

本ＭＶＬ製剤を作製する方法はまた、全体として本出願に参照により組み入れられている、Ｈａｒｔｏｕｉａｎら、米国特許公開第２００７−０２３５８８９号、およびＨａｒｔｏｕｉａｎら、ＷＯ９９／２５３１９（ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２６１）に見出すことができる。

フォレート
さらなる実施形態において、葉酸、フォリン酸（ロイコボリン）、いずれかの活性鏡像異性体、またはそれらの塩（まとめてフォレートと呼ばれる）を、ＭＴＸと組み合わせて用い、ＭＴＸに関連した副作用を、特に胃腸管、肝臓、および血液細胞に関して、低減することができる（ＰｒｅｙおよびＰａｕｌ、ＢｒｉｔＪ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１６０：６２２−６２８（２００９））。フォレートの用量および投薬頻度は、約１ｍｇ／週から約２７．５ｍｇ／週まで様々であり得る（Ｏｒｉｔｚら、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、２５（１９９８）３６−４３）。典型的な用量は、約２．５ｍｇ／週〜約５ｍｇ／週、または約１ｍｇ／日〜約２ｍｇ／日であり得る（Ｈｏｅｋｓｔｒａら、ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ、６２：４２３−４２６（２００３））。

本ＭＴＸ−ＭＶＬ製剤は、フォレートを用いて、ＭＶＬの持続性放出の性質を用いて悪心および嘔吐などのＣｍａｘ関連副作用を減少させることに加えて、フォレートによって減らすことができる副作用も減少させることができる。フォレートは、本製剤中に、例えば、１つ以上の以下の様式で、含めることができる。第一に、フォレートは、外部溶液中に存在し得る（被包されていない）。第二に、フォレートは、ＭＴＸと同じ第１水性溶液に含めることができ、したがって、投与後、ＭＴＸとだいたい同じ速度で、放出される。第三に、フォレートおよびＭＴＸは、ヘテロ小胞リポソーム内に製剤化することができる（Ｋｉｍ、米国特許第５，４２２，１２０号、１９９５年６月６日参照）。第四に、フォレートおよびＭＴＸは、ＭＶＬ粒子の別々の集団に含めることができる。最後に、フォレートおよびＭＴＸは、上記の任意の組み合わせとして含めることができる。

第四の場合において、これらの別々の集団は、本質的に同じ放出速度を提供する同じ脂質組成を有することができ、またはそれらは、フォレートの有効性を残しておいて、副作用を最適化するために異なる放出速度を提供する異なる脂質組成を有することができる。別々の集団は、１つの容器内で、別々の容器内で、または投与直前もしくは投与中にその２つを混合するように設計された２チャンバー型容器内で、組み合わせることができる。２つの別々の容器の場合、２つは、同時に、または異なる時点で投与することができる。

投与方法
上記で論じられたＭＴＸ製剤は、ＲＡなどの自己免疫疾患の処置を含む全身性使用として、注射により、より具体的には、皮下注射、皮内注射、または筋肉内注射により、週１回の頻度で投与することができる。それらはまた、癌の処置において局所的（例えば、脊髄内または腫瘍内）に送達されてもよい。ＲＡについて、用語「治療的有効な」とは、それが本出願の組成物に関係する場合、ＭＶＬ内の第１水性相中に存在するＭＴＸが、ＭＴＸの有効ＡＵＣを達成するのに十分な様式で放出されることを意味し、そのようなＡＵＣレベルは約１０００〜５０００ｍｃｇ／Ｌ・時間である。よりはるかに高いレベルは、癌の全身性処置に用いられる。局所送達が癌の処置に用いられる場合、送達される量は、顕著に低減することができる。正確な投薬量は、年齢、性別、一般的な健康状態などの患者の因子に依存して異なる。当業者は、容易に、これらの因子を考慮し、それらを用いて、過度の実験に頼ることなく、有効な治療的濃度を確立することができる。

自己免疫疾患の処置について、本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、好ましくは、週１回、皮下に注射される。一つの例において、ＭＴＸの持続期間は約１日間〜約５日間である。したがって、本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、およそ２日間の休薬期間を提供する。この休薬期間は、ＭＴＸに関連した副作用を低下させる。

癌の処置について、本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、多くて２日ごとに注射され、別の実施形態において、皮下に７日ごとに注射される。処置は、数回の処置コースとして繰り返される。癌に用いられる大用量による副作用を低減するために、患者にまた、「ロイコボリン救助療法」を施してもよく（ＬｉｎｋＭＰ、ＧｏｏｒｉｎＡＭ、ＭｉｓｅｒＡＷら、Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆＭｅｄ．１９８６；３１４（Ｎｏ．２５）：１６００−１６０６）、または処置と処置の間に７〜１０日間の休息期間を与えてもよい。しかしながら、ロイコボリンまたは休息期間の必要性は、ＭＶＬについての低Ｃ_ｍａｘ放出プロフィールにより少なくなる。

癌の処置について、成人ヒトにおける１００ｍｇ／ｋｇ体重の３７ｍｇ／ｍ^２体表面積への換算に、１：３０のヒト剤形についてのガイドライン比が与えられている。換算率は、実際には、年齢および体格（ｂｏｄｙｂｕｉｌｄ）に依存して１：２０〜１：４０の間で変化する。

ＲＡなどの自己免疫疾患の処置について、新しい患者は、２〜５ｍｇ／週から２５〜３５ｍｇ／週までの用量設定で、総量２〜５ｍｇのＭＴＸを有した本ＭＴＸＭＶＬ製剤の１用量を受ける。そのような投与は、数時間から数日間までの期間にわたって、例えば、最高約５日間の期間、ＭＴＸの送達を与えることを意図される。即効型注射製剤または経口製剤と比べて、そのようなＭＴＸＭＶＬ製剤は、上記で列挙されているような副作用を低減し、即効型ＭＴＸ製剤の皮下注射のＡＵＣを保持し、かつ現行の即効型経口ＭＴＸ投与に対してＣ_ｍａｘを改善し、ＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＲｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙスコアリングシステムにより判断された場合、同等またはそれより良い効力をもつ。Ｆｅｌｓｏｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、３８巻、６号、１９９５年６月を参照。

癌の処置について、ＭＶＬ被包ＭＴＸ製剤は、自己免疫疾患についてと同じ様式であるが、より高い用量で投与される。この場合もやはり、上記で論じられたＭＴＸ製剤は、癌の処置における全身性使用として、注射により、より具体的には、皮下注射、皮内注射、または筋肉内注射により、週１回を基本として投与することができる。それらはまた、局所的（例えば、脊髄内）または腫瘍内に送達されてもよい。

非限定的開示および参照による組み入れ
特定の治療剤、組成物、および方法が、特定の実施形態に従って具体的に記載されているが、以下の実施例は、本発明の組成物および方法を例証する役割を果たすのみであり、それらを限定することを意図するものではない。本出願で言及された参考文献などのそれぞれは、全体として参照により本明細書に組み入れられている。

本ＭＶＬＭＴＸ製剤を、Ｋｉｍら（ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ、７２８（１９８３）３３９−３４８）によって報告されたのと類似した方法で調製した。ＭＴＸ、水酸化ナトリウム、およびスクロースを含有する水性溶液を、ＤＯＰＣまたはＤＥＰＣ、ＤＰＰＧ、トリカプリリンおよび／またはトリオレイン、ならびにコレステロールを含有するクロロホルム溶液で乳化し、油中水型（Ｗ／Ｏ）乳濁液を生じた。その後、Ｗ／Ｏ乳濁液を、リシンおよびスクロースを含有する第２水性溶液中に乳化し、Ｗ／Ｏ／Ｗ乳濁液を生成した。その後、Ｗ／Ｏ／Ｗ乳濁液を、窒素流下、３７℃で撹拌し、蒸発によりクロロホルムを除去した。生じた粒子を遠心分離し、上清をノーマルセーラインで置き換えた。洗浄後、粒子を、ノーマルセーラインへ希釈し、およそ５０％充填粒子体積（ＰＰＶ）をもつ生成物が得られた。ＰＰＶは、全製剤体積のうちのＭＶＬ粒子によって占められる割合である。

上記の方法によって４つの製剤を調製するために用いられる溶液の組成は、下記の表１に列挙されている。生じた粒子は、１３〜１５ミクロンの範囲である中央径、および約２５ｍｇ／ｍＬの有効性を有した。

粒子サイズ分布について下記の表１に用いられる場合、ｄ１０とは、粒子の１０％以下が表に同定された直径を有することを意味する。ｄ５０とは、粒子の５０％以下が表に同定された直径を有することを意味する。ｄ９０とは、粒子の９０％以下が表に同定された直径を有することを意味する。「スパン」は、ｄ１０からｄ９０を引き、その結果をｄ５０で割ることによって計算される。

表１に用いられる場合、「％遊離」とは、ＭＶＬの外側のＭＴＸのパーセントを意味し、ＰＰＶは充填粒子体積を意味する。

製剤１の最終組成は、下記の表に示されているように、近似最終組成を有する。

薬物動態（ＰＫ）研究をラットにおいて実施し、１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルにおいてＭＴＸ溶液対照をＭＶＬ被包ＭＴＸの４つの異なる製剤に対して比較した。体重が２８０〜３２０ｇの雄スプラーグドーリーラットが、ＭＴＸ溶液か、またはＭＶＬ被包ＭＴＸ製剤のうちの１つのいずれかの皮下注射を受けた。注射を、各ラットの左側方後肢に、２５Ｇ針を取り付けられた１ｍＬ注射器を用いて行った。各処置群は３匹のラットを含んだ。３００ｇの平均ラット体重と仮定して、ラットあたり１０ｍｇ／ｋｇのＭＴＸの用量を供給するように、滅菌食塩水の溶液で適切な希釈を行った（２００ｕＬの最終注射容量）。ラットを、投薬前の体重順に並べ、その後、異なる処置群へ無作為化した。

ＳａｎｔａＣｌａｒａ、ＣＡに本社を置くＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによって製造されたＡｇｉｌｅｎｔ１２００Ｓｅｒｉｅｓシステムにより実施される液−液抽出（ＬＬＥ）ＨＰＬＣ方法を用いて血清中のＭＴＸを測定する血清ＭＴＸ分析を行った。１．５ｍＬのＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内で、１．１％ギ酸（ｗ／ｖ）を含有する３００μＬのアセトニトリル溶液と、１００μＬ体積のラット血清を混合した。１分間ボルテックスし、続いて１３，０００ｇで５分間、遠心分離することにより、除タンパクを行った。全上清を、スクリューキャップ付きの１．５ｍＬの微小遠心管へ移した。５００μＬのクロロホルムを上清と混合することによりアセトニトリルを一掃した。遠心管を１分間、ボルテックスし、その後、１３，０００ｇで３分間、遠心分離した。４０μＬ体積の上層水性部分を、ＨＰＬＣ試料注入のために１００μＬのバイアルインサートへ収集した。

ＨＰＬＣシステムに、３０２ｎｍに設定された検出器、および５μｍの粒子サイズカラムを有する２．１ｍｍ×２５０ｍｍのＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌＬＣ−１８−Ｓを装備した。移動相は、１０２ｍＭのリン酸ナトリウム（二塩基性）、３２．５ｍＭのクエン酸、および１０％（ｖ／ｖ）のアセトニトリル（ｐＨ約６．０）からなった。流速は０．６ｍＬ／分であり、カラム温度３５℃、および注入体積２０μＬであった。６つの異なる濃度のＭＴＸ（２２．７〜７２７．１ｎｇ／ｍＬ）を、ＭＴＸを含まないラット血清へスパイクすることによって、ＭＴＸ標準曲線を調製した。それぞれのスパイクされた標準におけるＭＴＸを、上記と同じ試料調製方法を用いて抽出した。

図１に示されているように、メトトレキサート溶液対照は、非常に高くかつ非常に早い血漿Ｃ_ｍａｘに達し、２４時間以内に同じくらい急速にＬＯＱより下へ降下した。明確にするために、図２は、同じデータを、ｙ軸スケールを変更して表し、ＭＴＸ溶液のＣ_ｍａｘを切り捨てている。ＭＶＬ被包ＭＴＸ製剤を受けた群の全部が、持続性放出の成功を示した。すなわち、それらが、驚くべきことに、許容され得る持続期間、および副作用を低減するための許容され得るＣ_ｍａｘを生じた。これらのＰＫ結果は、ＭＶＬ被包ＭＴＸ製剤の脂質組成を変化させることにより放出速度を調節することが可能であることを実証している。このように、本製剤の脂質組成における変化には、両親媒性脂質の総量および中性脂質の総量を改変すること、特定の脂質の追加または除去（例えば、ＴＯの追加）、ならびに脂質の１つを別のものの代わりに用いること（例えば、ＤＥＰＣ対ＤＯＰＣ）を挙げることができる。どれくらいのトリグリセリドレベルが改変され得るかの例は、Ｗｉｌｌｉｓ、１９９９年４月６日に発行された米国特許第５，８９１，４６７号に提供されている。Ｗｉｌｌｉｓは必ずしも、本実施形態の利点を予測したわけではなかった。ホスファチジルコリンの鎖長を増加させることは、化合物を被包する効率の増加を与えることが以前に示されている（Ｙｅら、２００１年１月９日に発行された米国特許第６，１７１，６１３号を参照）。Ｙｅは、本実施形態の利点を予測しなかった。ＭＴＸについて、図１および２におけるデータは、鎖長を増加させることが持続期間を増加させることを実証している。

図１および２は、製剤１では、それの放出の大部分が最初の４８時間以内であること、および約１．５ｕｍｏｌ／Ｌの最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）（ｓｅｒｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を有したことを示している。ＭＶＬ製剤中の脂質の量を半分、低減させることで、製剤４は、放出プロフィールが左にシフトして、より短い持続期間およびＣ_ｍａｘへのより早い時間を与えることを除いて、類似した放出プロフィールを与えた。製剤３への２％ＴＯの追加は、Ｃ_ｍａｘを有意に低下させ、かつ持続期間を大いに延ばした。製剤１のＤＯＰＣを製剤２のＤＥＰＣで置換することは、類似した、よりいっそう強い効果を与え、０次の放出速度に近づく放出プロフィールを生じた。これらまたは類似したアプローチを用いることにより、本ＭＶＬＭＴＸ製剤の生じたＰＫプロフィールを改変することは可能である。

製剤１および２に関する追加のＰＫ研究を、低減した用量のＭＴＸにおけるいくつかの研究を含め、上記のように実施した。これらの研究からのＰＫパラメータは下記に要約されている。認めることができるように、Ｃ_ｍａｘは、ＭＴＸ即効型溶液に対して有意に低下している。Ｃ_ａｖｇは、７日間にわたる平均血漿中濃度である。したがって、製剤は、驚くほど長い持続期間および低いＣ_ｍａｘであったので、副作用は低い。

安定性
さらに、本ＭＴＸＭＶＬ製剤の安定性は、業界標準により許容され得る。安定性データは、下記の表４〜６に、製剤１のロット番号１〜３について示されている。評価された性質は、簡易（ｃｏｍｐｅｎｄｉａｌ）ＲＰ−ＨＰＬＣ方法による、薬物含有量、被包されていない薬物のパーセント（％遊離）、および関連物質、ヘマトクリットに類似した様式で評価される充填粒子体積（ＰＰＶ）、視覚的評価である外観、ならびにレーザー光散乱により評価される粒子サイズを含んだ。冷蔵温度（５℃）において、１２ヶ月間を通して有意な変化は観察されない。同様に、２５℃において、３ヶ月間を通して有意な変化は観察されない。

関連物質に関して、それぞれ０．３％および０．５％の欧州薬局方の（ＥｕｒｏｐｅａｎＰｈａｒｍａｃｏｐｅａｌ）限度を有する不純物ＢおよびＣの増加が観察されている。不純物ＢおよびＣは、欧州薬局方（ＥＰ）における指定不純物であり、分解生成物（ｄｅｇｒａｄｅｎｔｓ）として見られる唯一の指定不純物である。不純物Ｂは、（２Ｓ）−２−［［４−［［（２，４−ジアミノプテリジン−６−イル）メチル］アミノ］ベンゾイル］アミノ］ペンタン二酸（４−アミノ葉酸、アミノペテリジン）である。不純物Ｃは、（２Ｓ）−２−［［４−［［（２−アミノ−４−オキソ−１，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］アミノ］ペンタン二酸（Ｎ−メチル葉酸、メトプテリジン）である。２年間の貯蔵が、一般的に、医薬品についての実行可能な貯蔵期間として認められている。既存データを外挿することによって（図３参照）、製剤１は、２年間において限度より下の不純物ＢおよびＣのレベルを十分有する可能性がある。したがって、本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、少なくとも２年間、安定である。本実施形態は、測定された安定性を有する本ＭＴＸＭＶＬ製剤、ならびに上記で論じられているような自己免疫疾患および癌についてのそのような製剤の投与方法を含む。

注射針通過性
注射について、一般的に、および特に、ＲＡなどの慢性状態について患者により自己投与される皮下注射の場合、小さい直径（または高い針ゲージ）を有する針で薬物を投与することが望ましい。そのような針は、最小の痛みまたは痛みなしでの注射を可能にする。２７〜３１Ｇの針ゲージは、細いとみなされ、好ましい。多くの持続性放出の注射物質は、高粘度（例えば、インサイチュゲル化製剤）か、または堅くおよび／もしくは比較的大きい粒子（例えば、ポリマー微粒子）かのいずれかを用いるために、そのような細い針を通って送達されることができない。本ＭＴＸＭＶＬ製剤は、そのような細い針を用いて容易に投与できることが見出されている。２７〜３１Ｇ針を通過する際、製剤１の製品特性は影響を受けない（表７参照）。これらのデータは、１ｍＬの注射器に取り付けられた上記の針を用い、約２ｍＬ／分で製剤を圧出することにより作成された。２７〜３１Ｇ針を使用する能力は、この送達テクノロジーへ独特な特質を与え、それは、粒子の低粘度、小さい粒子サイズ、および弾性によるものである可能性がある。本実施形態は、測定された注射針通過性を有する本ＭＴＸＭＶＬ製剤、ならびに上記で論じられているような自己免疫疾患および癌についてのそのような製剤の投与方法を含む。

本明細書に引用された全ての参考文献は、全体として参照により本明細書に組み入れられている。参照により組み入れられた刊行物および特許または特許出願が、本明細書に含まれる開示に矛盾する範囲内においては、本明細書が、いかなるそのような矛盾した材料にも取って代わり、および／または優先するものとする。

他に規定がない限り、（技術的および科学的用語を含む）全ての用語は、当業者にとってのそれらの通常かつ慣習的な意味を示すものとし、本明細書で明らかに規定されない限り、特定または特化された意味に限定されないものとする。

本出願に用いられる用語および句、ならびにそれらのバリエーションは、特に添付された特許請求の範囲において、明らかに他に指定がない限り、限定に対立するものとして、限度を設定しないものと解釈されるべきである。前述の例として、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」とは、「非限定的に含むこと」、「含むが、限定されない」などを意味するように読まれるべきである；本明細書に用いられる場合、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「によって特徴づけられる」と同義であり、包括的であり、または限度を設定せず、追加の言及されていない要素もしくは方法工程を排除しない；用語「有すること」とは、「少なくとも有すること」として解釈されるべきである；用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」は、「含むが、限定されない」と解釈されるべきである；用語「例」は、議論中の項目の例示的な事例を提供するために用いられるのであって、それの網羅的または限定的リストを提供するためではない；「公知の」、「通常の」、「標準の」、および類似した意味の用語などの形容詞は、記載された項目を所定の期間に、または所定の時点現在で利用可能な項目に限定するものとして解釈されるべきではなく、その代わりに、今、または未来の任意の時点において利用可能または公知である可能性がある公知の、通常の、または標準のテクノロジーを包含するように読まれるべきである；ならびに、「好ましくは」、「好ましい」、「望まれる」、または「望ましい」のような用語および類似した意味の語の使用は、特定の特徴が、本発明の構造または機能にとって重大な意味をもち、必須で、またはさらに重要であることを含意すると理解されるべきではなく、その代わりに、本発明の特定の実施形態において利用されてもよいし、されなくてもよい代替の、または追加の特徴を強調することを単に意図されるものと理解されるべきである。同様に、接続詞「および」で結びつけられた一群の項目は、それらの項目のどれもこれもがその群に存在することを必要とするとして読まれるべきではなく、むしろ、明らかに他に指定がない限り、「および／または」として読まれるべきである。同じく、接続詞「または」で結びつけられた一群の項目は、その群の中で相互排他性を必要とするとして読まれるべきではなく、むしろ、明らかに他に指定がない限り、「および／または」として読まれるべきである。

本明細書における実質的にいかなる複数形および／または単数形の用語の使用に関しても、当業者は、文脈および／または出願にとって適切であるように、複数形から単数形へ、および／または単数形から複数形へ言い換えることができる。様々な単数形／複数形交換は、明確にするために、本明細書ではっきりと示される場合がある。

導入された特許請求の範囲の言及の特定の数が意図される場合には、そのような意図は特許請求の範囲に明白に言及され、そのような言及がない場合、そのような意図は存在しないことは当業者にさらに理解されている。例えば、理解を助けるものとして、次の添付された特許請求の範囲は、特許請求の範囲の言及を導入するために、導入となる句「少なくとも１つの」および「１つ以上の」の使用を含む場合がある。しかしながら、そのような句の使用は、不定冠詞「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」による特許請求の範囲の言及の導入が、そのような導入された特許請求の範囲の言及を含むいかなる特定の特許請求の範囲をも、同じ特許請求の範囲が導入となる句「１つ以上の」または「少なくとも１つの」と「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」などの不定冠詞とを含む場合でさえも、１つのみのそのような言及を含む実施形態に限定することを含意すると解釈されるべきではない（例えば、「１つの（ａ）」および／または「１つの（ａｎ）」は典型的には、「少なくとも１つの」または「１つ以上の」を意味するように解釈されるべきである）；特許請求の範囲の言及を導入するために用いられる定冠詞の使用についても同じことがいえる。加えて、導入された特許請求の範囲の言及の特定の数が明白に言及されているとしても、当業者は、そのような言及が、典型的には、少なくともその言及された数を意味する（例えば、他の修飾成句なしに「２つの言及」のありのままの言及は、典型的には、少なくとも２つの言及、または２つ以上の言及を意味する）と解釈されるべきであることは認識している。さらに、「Ａ、Ｂ、またはＣの少なくとも１つ、など」の類似した慣例が用いられる場合、一般的には、そのような解釈は、当業者がその慣例を理解している意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、またはＣの少なくとも１つを有するシステム」は、Ａのみを、Ｂのみを、Ｃのみを、ＡとＢとを共に、ＡとＣとを共に、ＢとＣとを共に、および／またはＡとＢとＣとを共に有するシステムを含むが、それらに限定されないなど）。本明細書にあろうと、特許請求の範囲にあろうと、図面にあろうと、２つ以上の代替用語を提示する、事実上いかなる離接語および／または離接句も、それらの用語の１つ、それらの用語のいずれか、または両方の用語を含む可能性を企図すると理解されるべきであることは当業者にさらに理解されている。例えば、句「ＡまたはＢ」は、「Ａ」または「Ｂ」または「ＡおよびＢ」の可能性を含むと理解される。

本明細書に用いられる成分の量、反応条件などを表す全ての数は、全ての場合において用語「約」によって修飾されると理解されるべきである。したがって、それに反することが示されない限り、本明細書に示された数値パラメータは、獲得しようとしている所望の性質に依存して異なり得る近似値である。最低限でも、かつ本出願の優先権を主張する、任意の出願における任意の特許請求の範囲の範囲への均等論の適用を制限しようとする試みとしてではなく、各数値パラメータは、有効数字の桁数および普通の丸め近似を考慮に入れて解釈されるべきである。

本発明は、その特定の実施形態に関して記載されているが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変化がなされてもよく、かつ等価物が置き換わってもよいことは当業者に理解されているはずである。加えて、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスの工程（複数可）を本発明の目的、精神、および範囲に適応するように多くの改変がなされてもよい。全てのそのような改変は、本明細書に添付された特許請求の範囲の範囲内にあることを意図される。

Claims

注射による投与のための多胞リポソームを含む製剤であって、該多胞リポソームは、単一の生物学的活性物質としてのある量のメトトレキサート、１つ以上の両親媒性脂質もしくはその塩、および１つ以上の中性脂質を含有し、ここで、該両親媒性脂質が、１つ以上のホスファチジルコリンもしくはその塩、１つ以上のホスファチジルグリセロールもしくはその塩、またはそれらの組み合わせから選択され、ここで、１つ以上のホスファチジルコリンはＤＯＰＣ（ジオレイルホスファチジルコリン）を含み、そしてここで、該製剤の投与を必要とする被験体への単一用量の該製剤の投与が、該メトトレキサートの、即効型剤形のメトトレキサートの血漿Ｃ _ｍａｘに対し５％〜５０％の血漿Ｃ _ｍａｘを生じ、ここで、該製剤は、シクロデキストリンを実質的に含まない、製剤。
前記被験体におけるメトトレキサートの前記持続期間が、約１日間〜約７日間である、請求項１に記載の製剤。
前記製剤がメトトレキサートに関連する副作用を低減するためにフォレートをさらに含む、請求項１または２に記載の製剤。
前記多胞リポソームが、ＭＴＸを含有しないＭＶＬ内に被包されたフォレートをさらに含む、請求項１または２に記載の製剤。
前記多胞リポソームが、コレステロール、ＤＯＰＣ、１つ以上のホスファチジルグリセロールもしくはその塩、および１つ以上のトリグリセリドを含む、請求項１〜４のいずれか1項に記載の製剤。
前記ホスファチジルグリセロールがＤＰＰＧ（ジパルミトイルホスファチジルグリセロール）を含む、請求項５に記載の製剤。
前記トリグリセリドが、トリオレイン、トリカプリリン、またはそれら２つの組み合わせから選択される、請求項５に記載の製剤。
前記多胞リポソームがリシンをさらに含む、請求項１〜７のいずれか1項に記載の製剤。
注射による自己免疫疾患の処置における使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の製剤。
前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、乾癬、ループス、強皮症、シェーグレン症候群、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、リウマチ性多発性筋痛、ギラン・バレー症候群、およびクローン病からなる群から選択される、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記自己免疫疾患が関節リウマチである、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記自己免疫疾患がループスである、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記自己免疫疾患がクローン病である、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記注射が皮下注射である、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記注射が筋肉内注射である、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記注射が皮内注射である、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記注射が脊髄内注射である、請求項９に記載の使用のための製剤。
前記注射が５日〜７日ごとに投与されるものである、請求項９に記載の使用のための製剤。
注射による癌の処置における使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の製剤。
前記癌が固形腫瘍癌である、請求項１９に記載の使用のための製剤。
前記癌が、妊娠性絨毛腫瘍、乳癌、頭頸部癌、または肺癌である、請求項２０に記載の使用のための製剤。
前記癌が血液由来癌である、請求項１９に記載の使用のための製剤。
前記血液由来癌が、急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、または菌状息肉腫である、請求項２２に記載の使用のための製剤。
前記注射が腫瘍内注射である、請求項１９に記載の使用のための製剤。
前記注射が２日ごとに投与されるものである、請求項１９に記載の使用のための製剤。