CN110269939A - 一种治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病标志物的药物、药物组合物、用途及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种真菌分泌蛋白介导的炎症致病机理，也公开了风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、特应性皮炎、多发性硬化症、银屑病等疾病亚型或部分发病原因，以及抗真菌治疗药物抑制细胞内和细胞外真菌的繁殖达到治疗关节炎的应用；提出了一系列抗真菌药物，包括各种现有或研发中抗真菌化疗药、甲氨蝶呤等在治疗风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、特应性皮炎、多发性硬化症、银屑病等疾病的新应用，除可通过口服、注射等方式系统用药外，还可通过外敷、涂抹等方式局部用药，为靶向性治疗相关关节炎症状，同时降低毒副作用提供了基础。

Description

一种治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病标志物的药物、药物 组合物、用途及其使用方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及抗真菌药在治疗和/或预防真菌及其分泌代谢产物引起的疾病上的新用途及其使用方法。

背景技术

全球关节炎在成年人中的发病率为25％。2017年美国CDC统计全美有5400万关节炎患者，占全美人口比例的25％。除外伤和机械损伤导致的关节炎，大部分关节包括类风湿关节、银屑病关节炎、强直性脊柱炎等，都是慢性、反复发作、加重，受季节和天气影响，但病因不明、不能治愈。这些关节炎又称为风湿病关节炎、结缔组织疾病或自身免疫性疾病等。是医学上的一大未解难题。类风湿关节炎属于慢性炎症性自身免疫性疾病，表现为慢性反复发作、多发性关节炎，早期主要临床症状有关节僵直、疼痛、肿胀等多关节滑膜炎，特别是指关节受累；而晚期病变会累及骨关节，导致骨关节疼痛、变形及全身各脏器受累，严重影响生活质量。关节炎若不得到正规治疗，约75％患者会在3年内出现不同程度残疾。

甲氨蝶呤(methotreate，MTX)为叶酸拮抗剂，通过竞争性抑制二氢叶酸还原酶，使其不能还原成有活性的四氢叶酸，从而干扰叶酸代谢，阻碍细胞核酸、蛋白的合成，由此可抑制肿瘤细胞的生长与繁殖，临床上用于治疗急性白血病、乳腺癌等。后研究发现，小剂量(15-30mg/周)甲氨蝶呤能用于治疗类风湿关节炎，口服或注射甲氨喋呤可以改变类风湿关节炎病程。

然而口服甲氨蝶呤4周以后才开始起效，且全身副作用较大，20-30％病人无法坚持用药。药物的作用机理，是条件机体的免疫系统。但其治疗类风湿关节炎的机理不明，药物副作用较为常见。口服甲氨蝶呤最常见的不良反应是胃肠道反应，还可出现骨髓抑制、口炎、脱发及头痛等，长期应用有肝、肾毒性。大约10-30％类风湿关节炎患者因为此药的副作用而停止用药。

因此有必要开发针对类风湿性关节炎等真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的低副作用的治疗药物。

发明内容

本发明旨在开发针对类风湿性关节炎等真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的低副作用的治疗药物，提出抗真菌药物的新应用，特别提供了甲氨蝶呤在治疗类风湿关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、特应性皮炎、多发性硬化症、银屑病、强制性脊柱炎等疾病中的重要作用。

通过检测指示疾病病原标志物或导致或加重疾病进展的生物标志物，多种方法抑制、控制真菌繁殖和蛋白分泌，来达到治疗关节炎，开辟了慢性关节炎的治疗、根治和预防的新靶点。所述方法包括氰基丙烯酸酯胶薄膜的物理性空气隔绝、口服或局部抗真菌化疗已及真菌感染局部甲氨蝶呤用药。

本发明提出真菌分泌蛋白介导的炎症疾病治疗靶点所述靶点为人体生物样本中的致病真菌、真-表皮细胞的杂交细胞及其分泌物中的一种或多种，该靶点可通过药物、激光、X光、或手术切除的方式处理，本发明提供了一种治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的药物，所述药物为抗真菌药及其前体、活性代谢产物、立体异构体、药学上可接受的盐、酯类和溶剂合物中的至少之一，所述药物可抑制真菌分泌蛋白介导的炎症疾病治疗靶点。

所述抗真菌药为核苷类抗真菌药、多烯类抗真菌药、烯丙胺类抗真菌药、棘白素白类抗真菌药、唑类抗真菌药、二氢叶酸还原酶抑制剂中的一种或多种。

所述抗真菌药物选自甲氨蝶呤、特比奈芬、卡泊芬净、咪康唑、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑或其药学上可接受的盐中的一种或多种。

所述药物用于预防和/或治疗真菌及其分泌代谢产物引起的真菌分泌蛋白介导的炎症疾病。例如风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、特应性皮炎、多发性硬化症、银屑病。

所述药物通过局部或全身给药。

所述药物通过外敷、涂抹、口服，静脉注射、肌内注射或皮下注射给药。

将抗真菌药(例如甲氨蝶呤)涂抹于病变区域，利用了药物抑制二氢叶酸还原酶活性，阻碍细胞核酸、蛋白的合成，可以到达抑制和阻碍被真菌感染的细胞内的真菌核酸和蛋白合成，从而可以达到抑制和治疗病变的目的，也阻碍了病变中真菌分泌蛋白的产生和分泌，最终缓解和治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病，特别是类风湿性关节炎。

本发明可以实现下列优点至少之一：

1、本发明提供的治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的药物为抗真菌药，利用了抗真菌药对病变区域真菌的抑制作用，间接缓解和治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病，开发出了针对类风湿性关节炎等真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的低副作用的治疗药物，为这些疾病的诊断和治疗提供了新的治疗靶点。

2、本发明提供抗真菌药的新应用，抗真菌药的传统应用是深度治疗真菌感染病变慢性皮肤真菌感染，本发明首次证实“真菌在宿主细胞代谢繁殖－真菌分泌蛋白进入系统循环－诱发、加剧关节炎、皮炎和其他疾病”的现象和致病机制，抗真菌药应用在细胞内真菌-分泌蛋白-相关疾病，以及慢性关节炎等真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的诊断、治疗及预后具有重要意义。

3、本发明的治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的药物，涂抹病变局部区域，直指皮肤真菌，使高剂量药物直接作用于病变组织和病原体，大大减少用药剂量并提高治疗效果，避免身体正常组织细胞接触药物毒性，减少药物的副作用。

4、本发明通过甲氨蝶呤与抗真菌药物联合用药治疗真菌感染病变，具有互补、协同治疗真菌感染病变的作用到达减少真菌蛋白的产生和分泌，来减轻和治疗全身真菌分泌蛋白相关的炎症反应。

附图说明

图1为抗真菌药在治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病方面的作用机理；

图2为足底湘雅病变剪切后的真菌培养示意图；

图3为不同药物局部用药的治疗效果对比，其中A为特比萘芬局部用药的效果图，B为甲氨蝶呤局部用药的效果图，C为抗真菌药组合物局部用药的效果图；

图4为甲氨蝶呤局部用药中日平均手僵直(DAHS)测量值；

图5为特比萘芬局部用药中日平均手僵直(DAHS)测量值；

图6为口服特比萘芬中日平均手僵直(DAHS)测量值；

图7关节疼痛测量图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

甲氨蝶呤及其他抗真菌药物在关节炎的治疗中的作用机理如附图1所示。真菌(聚多曲霉，又称萨氏曲霉Aspergillus sydowii)在感染人体皮肤后在人的表皮细胞外部和内部增殖，驱使细胞发生增生，产生湘雅病变(Xiangya Lesion)。病变后的细胞内和细胞外真菌产生真菌蛋白，并分泌到宿主细胞外，进入宿主皮下组织，通过体循环，将蛋白带到人体各关节，与关节附近软组织中的胶原蛋白选择性结合，由此产生一系列关节炎症状和体征。而甲氨蝶呤作为抗真菌药物，通过它对二氢叶酸还原酶的抑制作用，阻碍真菌核酸、蛋白合成，抑制了细胞外真菌繁殖，抑制了细胞内真菌繁殖和角质增生，使得细胞内外聚多曲菌繁殖降低，进入人体循环的分泌霉菌蛋白减少，从而减少霉菌分泌蛋白选择性结合关节组织，改善关节炎临床表现。

实施例1研究湘雅病变与治疗关节炎关系

如附图2所示，将关节炎病人的足底湘雅病变剪切后(组图A)在293细胞培养液中进行培养(组图B)。培养42天后，发现湘雅病变组织中生长出肿瘤(组图C)，显微镜下观察该肿瘤由鳞状上皮细胞组成(组图C2，4x物镜，组图C3，Trypan Blue染色后10x物镜)。将肿瘤组织捣碎后继续培养5天，发现肿瘤细胞消失，取而代之是成团的真菌菌丝(组图D2)，真菌菌丝突破宿主细胞(组图D3)。

实施例2甲氨蝶呤用于治疗关节炎

将关节炎病人足底湘雅病变剪切去除后，给予患处每日3次甲氨蝶呤乳剂局部涂抹，并用乳剂脚套覆盖病变区域。可见湘雅病变组织增生情况如图3(B)所示，日平均手僵直测量值如图4所示。

实施例3普通抗真菌药用于治疗关节炎

将关节炎病人足底湘雅病变剪切去除后，给予患处每日3次特比萘芬乳剂局部涂抹，并用乳剂脚套覆盖病变区域。可见湘雅病变组织增生情况如图3(A)所示，日平均手僵直测量值如图5所示。

关节炎病人口服抗真菌化疗药特比萘芬100mg/日，日平均手僵直测量值如图6所示。

实施例4抗真菌药组合物用于治疗关节炎

关节炎病人足跟疼痛，局部检查显示红，略微肿胀，触痛和发热，直径约2.5厘米。足痛和感觉疲倦，随后3天暂停日常走步运动。在这足痛的第5天在足跟病变的中间修剪掉一块0.8×1.0cm²的皮肤表面层，在病变上局部涂环吡酮胺霜，每天2次。病变的修剪区域在1天后变成暗红色。第11、15、17天，用砂纸据局部打磨，每天涂环吡酮胺和甲氨蝶呤软膏1-2次，到第35天局部肿胀和触痛逐渐消退。可见手指僵硬情况如图3(C)所示，关节疼痛测量值如图7所示。

根据菌种的类型，选择不同剂量、不同类型的抗真菌药物来治疗慢性关节炎，如下表：

通过比较甲氨蝶呤乳剂、其他抗真菌药及两者组合物局部用药对抑制湘雅病变和治疗手僵直效果，可以看出甲氨蝶呤、及其与抗真菌组合药物不但能有效抑制湘雅病变组织增生和治疗局部病变，还能很大程度改善关节炎的关节僵直。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种真菌分泌蛋白介导的炎症疾病治疗靶点，其特征在于：所述靶点为人体生物样本中的致病真菌、真-表皮细胞的杂交细胞及其分泌物中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的真菌分泌蛋白介导的炎症疾病治疗靶点，其特征在于：所述靶点可通过药物、激光、X光、或手术切除处理。

3.一种治疗真菌分泌蛋白介导的炎症疾病的药物，其特征在于，所述药物的治疗靶点为权利要求1-2所述靶点。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药物为抗真菌药及其前体、活性代谢产物、立体异构体、药学上可接受的盐、酯类和溶剂合物中的至少之一。

5.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述抗真菌药为核苷类抗真菌药、多烯类抗真菌药、烯丙胺类抗真菌药、棘白素白类抗真菌药、唑类抗真菌药、二氢叶酸还原酶抑制剂中的一种或多种。

6.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述抗真菌药物选自甲氨蝶呤、特比奈芬、两性霉素、环吡酮胺、卡泊芬净、咪康唑、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑等或其药学上可接受的盐中的一种或多种。

7.权利要求3-6所述药物的用途，其特征在于，所述药物用于预防和/或治疗真菌及其分泌代谢产物引起的疾病，任选地，所述疾病为真菌分泌蛋白介导的炎症疾病。

8.根据权利要求7所述用途，其特征在于，所述疾病为风湿性关节炎、类风湿关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、特应性皮炎、多发性硬化症、银屑病、强制性脊柱炎等结缔组织疾病相关的关节炎。

9.权利要求3-6所述药物的使用方法，其特征在于，所述药物通过局部或全身给药。

10.根据权利要求9所述药物的使用方法，其特征在于，所述药物通过外敷、涂抹、口服，静脉注射、肌内注射或皮下注射给药。