JP6250556B2 - ピリミド［４，５−ｂ］インドール誘導体及び造血幹細胞の増殖におけるその使用 - Google Patents

ピリミド［４，５−ｂ］インドール誘導体及び造血幹細胞の増殖におけるその使用 Download PDF

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関連出願の相互参照
[0001]本願は、２０１２年１月２７日出願の米国仮出願第６１／５９１，５２１号に基づく優先権の利益を主張する。この出願の全開示内容は引用によってその全文を本明細書に援用する。
[0002]本発明はピリミド［４，５−ｂ］インドール誘導体に関する。本発明はまた、造血幹細胞の増殖のためのピリミド［４，５−ｂ］インドール誘導体の使用にも関する。さらに、本発明は、造血幹細胞が関与する疾患の医学的治療にも関する。
[0003]造血幹細胞（ＨＳＣ）の主な供給源は骨髄及び臍帯血（ＵＣＢ）である。ＨＳＣは、悪性血液疾患、骨髄不全状態、世界的に関心の高い様々な先天性疾患（例えば、鎌状赤血球貧血及びサラセミア（地中海貧血））、及び狼瘡のような自己免疫疾患を持つ患者において治癒を達成するための最も効果的な治療方策の一つを構成する移植という状況（自家移植又は同種移植）で使用される。しかしながら、この救命又は生命改善の治療のための機会は、手術を安全かつ成功裏に実施するのに十分なほどこれらの細胞をエクスビボで増幅できないために、世界中の何千人もの人々に利用されていない。より具体的には、３人の患者ごとに１人は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合ドナーが見つからないために移植の機会を見送っている。別の割合の患者は、単に移植片（すなわち臍帯血又は自家移植片）中に利用できるＨＳＣがあまりにも少なすぎて移植の成功を望めないという理由で、移植の機会を得ていない。骨髄移植の安全性及び有効性は、生着に利用できるＨＳＣ及び前駆細胞の数に直接依存する。より多く注入できるほど、より迅速に血液機能が回復し、顆粒球不足による感染のリスク又は血小板不足による出血の時間枠が短くてすむ。十分なＨＳＣを供給することの課題は、主な遺伝性血液疾患（世界中の罹患率及び死亡率の主な遺伝的原因）に対する遺伝子治療という状況のように骨髄非破壊的前処置が好適な場合、さらに高まる。
[0004]成人では、ＨＳＣは主に骨髄に存在するので、自家造血幹細胞移植でも同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）でも、アフェレーシスによる採取の前に、まずはそれを循環中に動員せねばならない。（ＨＳＣ）の代理マーカーであるＣＤ３４＋細胞の量は造血回復の成功及び速度に影響するので、適切な数のＣＤ３４＋細胞を採取することが最も重要である。いくつかの報告によれば、ＣＤ３４＋細胞の注入量が多いほど、生存の改良が独立に予測されることが示唆されている。
[0005]二つの最も一般的に使用されている動員法は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）とＧ−ＣＳＦ＋化学療法である。２００８年に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって、２０１１年にはカナダ保健省(Health Canada)によって承認されたＣＸＣＲ４アンタゴニストであるプレリキサフォル(Plerixafor)は、Ｇ−ＣＳＦと共に投与されるとＨＳＣの動員を増強する。しかしながらプレリキサフォルは白血病細胞を動員するので白血病患者には禁忌である。現在使用されている動員法で十分な数のＣＤ３４＋細胞／ｋｇを得られないというのが、患者の最大１５％に影響していると推定されている(疾患間で変動あり）。悪性血液疾患における自家ＨＳＣＴの使用は、正常及びがん幹細胞のどちらも骨髄中に存在し、そしておそらくは動員されるという事実によって制限されることが多い。
[0006]ＢＭ(骨髄）又はｍＰＢＳＣ(動員末梢血幹細胞）による同種ＨＳＣＴは別の移植選択肢である。しかしながら、このタイプの移植に適した患者の約３分の１〜４分の１は適切なドナーを見つけることができない。移植を受けた者の場合、移植片対宿主病、再発又は移植片拒絶；及び長期間の免疫不全のリスクのために、高頻度の移植関連死がある。代替として、臍帯血が同種ＨＳＣＴにおける有効な選択肢として示されている。しかしながら、単一のＣＢ単位は、通常、迅速かつ効率的な造血回復のためには成人患者には不十分なＨＳＣしか提供しない。
[0007]マウス再構成アッセイによって測定されたマウス又はヒトのＨＳＣ数のサイトカイン媒介性の短期維持又はさらには軽度増加を支持するインビトロ条件は、一般的に後期型前駆細胞集団のずっと強い増加(robust increase)を伴う。マウス及びヒトＨＳＣのより著明な増加は、最近、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質、アンジオポイエチン様増殖因子及びプレイオトロフィンのような他の因子を含有する培養物で報告されている。しかしながら、これら後者の報告は、これまでのところ単発的なものであり、第三者的な確認を待っている。インビトロで標準的サイトカインを用いて得られたＨＳＣの短期増加は、最終的なＨＳＣの枯渇も避けられない。
[0008]ヒトＨＳＣ増殖のための代替策は、それらとストローマ成分(stromal elements)又は可溶性の形態形成リガンド(soluble morphogenic ligands)との培養(例えば、Ｎｏｔｃｈ、Ｗｎｔ及びＨｅｄｇｅｈｏｇ経路の刺激）、特定の細胞内シグナル伝達経路の標的操作（ＰＧＥ２、ＲＯＳ、ｐ３８及びＭＡＰＫ阻害薬）、又は特定の転写因子の操作(例えば、Ｈｏｘ、Ｈｌｆ）を必要としてきた。ＨＳＣのエクスビボ増殖のためのその他の前臨床的手段は、ｉ）ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ１（ＳＲ１、アリール炭化水素受容体アンタゴニスト）（Ｂｏｉｔａｎｏ，ＡＥら、“アリール炭化水素受容体アンタゴニストによるヒト造血幹細胞の増殖促進(Aryl hydrocarbon receptor antagonists promote the expansion of human hematopoietic stem cells)”、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２９：１３４５−１３４８．２０１０）；ii）Ｇａｒｃｉｎｏｌ（ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害薬）（Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｔら、“ヒストンアセチルトランスフェラーゼの強力阻害薬であるＧａｒｃｉｎｏｌによるヒト造血幹細胞のエクスビボ増殖(Ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells by Garcinol, a potent inhibitor of histone acetyltransferase)”ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（９）：ｅ２４２９８．２０１１）； 及びiii）ＮＲ−１０１（非ペプチジル小分子ｃ−ＭＰＬアゴニスト）（Ｎｉｓｈｉｎｏら、“ｃ−ＭＰＬの小分子アゴニストによるヒト造血幹細胞のエクスビボ増殖(Ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells by a small-molecule agonist of c-MPL)”Ｅｘｐ．Ｈｅｍ．２００９；３７：１３６４−１３７７）とのインキュベーションを含む。ＳＲ１の特徴付けにより、低分子量(ＬＭＷ)化合物はＨＳＣ増殖促進能力を有するという原理が証明された。
[0009]臨床研究は、投与された移植細胞(transplants)の永続性だけでなく、移植後の有用な顆粒球レベル出現までの時間を最小化することの重要性に対する要件も強調している。これは、つまり、注入された短期再増殖細胞の数に依存する。サイトカインとの培養で増殖させた骨髄又は臍帯血細胞の移植は、これまでのところ、未処理細胞と比べて、造血回復の臨床的に有用な加速化を示していない。固定化Ｎｏｔｃｈリガンドを用いて増殖させた細胞を用いた初期試験結果は、何らかの(たとえわずかでも）前駆細胞増殖策に関する臨床的有用性の可能性を初めて示したものである（Ｄｅｌａｎｅｙら、“迅速な骨髄再構成が可能なヒト臍帯血前駆細胞のＮｏｔｃｈ媒介性増殖(Notch-mediated expansion of human cord blood progenitor cells capable of rapid myeloid reconstitution)”、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１６（２）：２３２−２３６．２０１０）。しかしながら、この取組は、エクスビボ増殖工程中に固定化デルタ−1融合タンパク質を使用する必要があること、及び幹細胞に対する効果が文書化（実証）されていないことによって制限されている(効果はより分化した前駆細胞に限定されているようである）。臨床試験におけるその他の取組は下記の通りである。ｉ）ＳｔｅｍＥｘ、銅キレート剤テトラエチレンペンタミン（ＴＥＰＡ）及びサイトカインと培養されたＵＣＢ細胞の組合せ、非処理ＵＣＢ細胞との同時注入；第Ｉ相試験の結果は、好中球又は血小板生着までの時間は以前の報告と比べて改善されなかったことを示している（ｄｅ Ｌｉｍａ Ｍら、“銅キレート剤テトラエチレンペンタミンを用いてエクスビボ増殖された臍帯血細胞の移植；第Ｉ／II相試験(Transplantation of ex vivo expanded cord blood cells using the copper chelator tetraethylenepentamine: a phase I/II clinical trial)”、Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８；４１（９）：７７１−７７８）；及び１６−１６ジメチルプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、第Ｉ相試験でＵＣＢＴのホーミング(homing)の改良の
ために使用。
[0010]このように、造血幹細胞及び前駆細胞の増殖を増大させるための新規方策が必要である。その関連で使用されるある種のピリミド[４，５−ｂ]インドール誘導体が当該技術分野で知られている。それらは例えば、ＷＯ ２００３／０３７８９８；ＷＯ ２００４／０５８７６４；ＷＯ １９９８／０４２７０８；ＷＯ １９９７／００２２６６；ＷＯ ２０００／０６６５８５；ＷＯ １９９３／０２００７８；ＷＯ ２００６／１１６７３３；ＷＯ ２００８／０５５２３３；ＷＯ ２０１０／００６０３２；ＷＯ １９９５／０１９９７０；ＷＯ ２００５／０３７８２５；及びＷＯ ２００９／００４３２９に開示されている。しかしながら、これらの文献には、本発明によるピリミド[４，５−ｂ]インドール誘導体も造血幹細胞及び前駆細胞の増殖におけるそれらの使用も開示されていない。
国際特許公開第ＷＯ ２００３／０３７８９８号 国際特許公開第ＷＯ ２００４／０５８７６４号 国際特許公開第ＷＯ １９９８／０４２７０８号 国際特許公開第ＷＯ １９９７／００２２６６号 国際特許公開第ＷＯ ２０００／０６６５８５号 国際特許公開第ＷＯ １９９３／０２００７８号 国際特許公開第ＷＯ ２００６／１１６７３３号 国際特許公開第ＷＯ ２００８／０５５２３３号 国際特許公開第ＷＯ ２０１０／００６０３２号 国際特許公開第ＷＯ １９９５／０１９９７０号 国際特許公開第ＷＯ ２００５／０３７８２５号 国際特許公開第ＷＯ ２００９／００４３２９号
Ｂｏｉｔａｎｏ，ＡＥら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２９：１３４５−１３４８．２０１０ Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｔら、ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（９）：ｅ２４２９８．２０１１ Ｎｉｓｈｉｎｏら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍ．２００９；３７：１３６４−１３７７ Ｄｅｌａｎｅｙら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１６（２）：２３２−２３６．２０１０ ｄｅ Ｌｉｍａ Ｍら、Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８；４１（９）：７７１−７７８
[0019]発明者らはある種のピリミド[４，５−ｂ]インドール誘導体を発見した。これらの化合物は、造血幹細胞集団、特にヒトの造血幹細胞集団の増殖に有用である。当該化合物は、造血幹細胞が関与する疾患の医学的治療にも有用である。
[0020]一側面に従って、本発明は下記一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ及びVIの化合物を提供する。
[0021]上記一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ及びVIの中の置換基、すなわち、Ｚ、Ｗ、Ｌ、Ｌｉ、Ｘ、Ｘｉ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びｍは以下の定義の通りである。
[0022]一側面に従って、本発明は一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物を含む医薬組成物を提供する。
[0023]一側面に従って、本発明は造血幹細胞を増殖させるための一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物の使用を提供する。本発明の実施態様において、造血幹細胞はヒト細胞である。
[0024]一側面に従って、本発明は、造血幹細胞又は前駆細胞の増加法を提供する。当該方法は、一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物の存在下で出発細胞集団を培養することを含む。本発明の実施態様において、出発細胞集団はインビボ、インビトロ又はエクスビボにある。また、本発明の実施態様において、出発細胞集団は、動員末梢血（ｍＰＢ）、骨髄（ＢＭ）又は臍帯血（ＵＣＢ）から採取されたＣＤ３４＋細胞を含む。さらに、本発明による方法の実施態様において、一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物の存在下における出発細胞集団の培養は、生物分子又は別の小分子である少なくとも一つの細胞増殖因子と共に実施されてもよい。
[0025]一側面に従って、本発明は、本発明の方法に従って増殖された細胞集団、さらに詳しくは、本発明による化合物を用いて増殖された細胞集団を提供する。実施態様において、本発明は、本発明の方法に従って増殖された造血幹細胞、さらに詳しくは、本発明による化合物を用いて増殖された造血幹細胞を提供する。
[0026]一側面に従って、本発明は、対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患を治療するための方法を提供する。当該方法は、そのような治療を必要とする対象に、一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物を用いて増殖された造血幹細胞、又は一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物を投与することを含む。
[0027]本発明の実施態様において、造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患は、骨髄不全状態、世界的に関心の高い様々な先天性疾患（例えば鎌状赤血球貧血及びサラセミア）、狼瘡、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常（とりわけゴーシェ病）を含む。
[0028]一側面に従って、本発明は、幹細胞又は前駆細胞の増加、又は造血幹細胞の増殖に使用するためのキットを提供する。当該キットは、一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ又はVIの化合物、及び使用説明書を含む。本発明の実施態様において、キットは、生物分子又は別の小分子である少なくとも一つの細胞増殖因子を含む。
[0011]図１は、化合物１はアリール炭化水素（ＡｈＲ）経路を通じて作用しているのではないことを示す。動員末梢血ＣＤ３４（＋）細胞を１２時間、ＤＭＳＯ、ＳＲ１［ＡｈＲアンタゴニスト １０００ｎＭ］、及び化合物１［５００ｎＭ］と培養し、細胞を採取して、ＡｈＲ−応答遺伝子（ＣＹＰ１Ｂ１及びＡｈＲＲ）に対するリアルタイム定量的ＲＴ−ＰＣＲを実施した。化合物１は、ＳＲ１と異なり、ＡｈＲ−下流標的遺伝子を抑制せず、その機能は、ＡｈＲ経路とは無関係であることを示唆している。 [0012]図２は、化合物１の作用は可逆的であることを示す。化合物１（緑で示す）又はビヒクル（ＤＭＳＯ、青で示す）と７日間培養された動員末梢血ＣＤ３４（＋）細胞を洗浄し、新鮮培地中に、化合物を添加して又は添加せずに（それぞれ実線対点線）再播種した。細胞をさらに８日間培養し、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−のパーセンテージをモニターした。化合物１を洗い落とした場合、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−のパーセンテージに急激な減少が観察され、その作用は可逆的であることを示した。 [0013]図３は、化合物１媒介性の幹細胞増殖にＦｌｔ３、ＳＣＦ、及びＴＰＯが必要であることを示す。動員末梢血ＣＤ３４（＋）細胞を増殖因子（Ｆｌｔ３＋ＳＣＦ＋ＴＰＯ）の存在下又は不在下で７日間培養した。ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞数は、増殖因子のいずれかの不在下で低く、観察された効果にはそれらが必要であることを示唆している。 [0014]図４Ａは、化合物１はＣＤ３４＋動員末梢血細胞の分化を低減することを示す。ＦＡＣＳ分析による測定の通り、化合物1は、ＤＭＳＯ処理対照細胞と比べてＣＤ３４＋細胞集団を増殖することができた。ＳＲ１は、化合物１と相乗作用して増殖培養細胞ＣＤ３４＋を維持しており、分化の阻害は組合せを用いるとなおさらに著明であることが示唆される。図４Ｂは、化合物１はＣＤ３４＋臍帯血細胞の分化を低減することを示す。図４Ｃは、化合物４０はＣＤ３４＋臍帯血細胞の分化を低減することを示す。図４Ｄは、化合物４０はＣＤ３４＋細胞分化の抑制に対して用量依存性の効果を示すことを示す。 [0015]図５Ａは、化合物１は、動員末梢血由来ＣＤ３４＋及びＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞集団をエクスビボで増殖させることを示す。全細胞数はＤＭＳＯでも化合物１処理細胞でも同じであったが、ＣＤ３４＋集団はＤＭＳＯの２倍より多かった。同様に、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−集団は、ＤＭＳＯに対して化合物１処理群で３倍を超えていた。この観察は、ＳＲ１との共処理で増強された。図５Ｂは、化合物１は、７日間の培養中、臍帯血由来ＣＤ３４＋及びＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の増殖を増強することを示す。図５Ｃは、化合物１は、１２日間の培養中、臍帯血由来ＣＤ３４＋及びＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞のインビトロ増殖に対し、プラス効果を発揮することを示す。 [0016]図６は、ＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、ＳＲ１、化合物１、及び化合物１とＳＲ１の組合せの存在下、１０日間培養したことを示す。５０，０００及び５００，０００個の処理細胞の成果をＮＳＧマウスに移植し、骨髄分析を移植１３週間後に実施し、ヒト造血細胞の生着を評価した。いずれの所与の細胞用量でも、化合物１で処理されたＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞はＤＭＳＯより良く生着した。興味深いことに、骨髄中のヒトＣＤ４５＋細胞のパーセンテージは、個別の化合物と比べて、組合せ（化合物１＋ＳＲ１）で処理された細胞を移植されたＮＳＧマウスで最も高かった。 [0017]図７Ａは、化合物１増殖細胞は、ＮＳＧマウスにおいてヒト造血細胞を再構成できることを示す。ビヒクル（ＤＭＳＯ）、ＳＲ１、化合物１及び組合せで処理された５，０００個のＣＤ３４＋ ＣＢ細胞の成果を免疫不全ＮＳＧマウスに移植した。移植８週間後、骨髄分析は、ＤＭＳＯを除くすべての処理群でヒトＣＤ４５＋の生着を示した。組合せ（化合物１＋ＳＲ１）で処理された細胞は、最高の生着レベルを示した。図７Ｂは、１２日間のインビトロ培養中、化合物４０は、ＮＳＧマウスの骨髄に生着する能力を有するヒト造血細胞の喪失を防止することを示す。 [0018]図８は、フローサイトメトリーによって測定された、流加培養方式を用いるバイオリアクターでの未分化細胞表現型（ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋、及びＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋）の増殖を示す。ＦＢ対照＝化合物４０なしの流加培養、Ｃｐｄ４０＝化合物４０ありの流加培養。
[0029]発明者らはある種のピリミド[４，５−ｂ]インドール誘導体を発見した。これらの化合物は、造血幹細胞集団、特にヒトの造血幹細胞集団の増殖に有用である。当該化合物は、造血幹細胞が関与する疾患の医学的治療にも有用である。
[0030]本発明による化合物は以下に示す一般式Ｉ、II、III、IV、Ｖ及びVIを有する。そのような化合物の塩又はプロドラッグも本発明による化合物の範囲内である。
[0031]式Ｉ、II、III、IV、Ｖ及びVIにおいて、置換基は以下に概説したように定義される。
[0032]Ｚは：１）−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ１）、２）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、３）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、４）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、５）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、６）−ＣＮ、７）−ＳＲ１、８）−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、９）−Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１、１０）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、１１）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１、１２）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、１３）−Ｌ、１４）−ベンジル（１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、１５）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、１６）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか一方又は両方に結合されている）、１７）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、１８）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、又は１９）−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）である。このリスト中、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく；（Ｒ１）及びＲ１が窒素原子に結合されている場合、それらは窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい。
[0033]Ｗは、Ｈ、ハロゲン、又は分子のピリミドインドール核にＮ、Ｏ、Ｓ、又はＣの原子を通じて結合している基である。任意に、Ｗは、１〜２０個の炭素原子を有する飽和、不飽和、直鎖、分枝及び／又は環状アルキル及び／又はヘテロアルキルである少なくとも一つの部分を含んでいてもよい。同じく任意に、該部分は、Ｎ、Ｏ又はＳである少なく
とも１個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい。当業者にはわかる通り、本発明による化合物の化学構造中のＷは、当該技術分野で一般的に使用されている様々なカテゴリーの化学基に属しうる。
[0034]さらに詳しくは、Ｗは：１）−Ｈ、２）−ハロゲン、３）−ＯＲ１、４）−Ｌ−ＯＨ、５）−Ｌ−ＯＲ１、６）−ＳＲ１、７）−ＣＮ、８）−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ１）、９）−ＮＨＲ１、１０）−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、１１）−Ｌ−ＮＨ２、１２）−Ｌ−ＮＨＲ１、１３）−Ｌ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、１４）−Ｌ−ＳＲ１、１５）−Ｌ−Ｓ（Ｏ）Ｒ１、１６）−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、１７）−Ｌ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ１）、１８）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、１９）−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、２０）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、２１）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、２２）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１、２３）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、２４）−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ１、２５）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、２６）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２、２７）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ１、２８）−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、２９）−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、３０）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、３１）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、３２）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ１、３３）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、３４）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、３５）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、３６）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、３７）−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ１、３８）−ＮＲ１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、３９）−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、４０）−Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１、４１）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、４２）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１、４３）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、４４）−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１、４５）−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１、４６）−ベンジル（１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、４７）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、４８）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、４９）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、５０）−Ｌ−ＮＲ１（Ｒ１）、５１）−Ｌ−）２ ＮＲ１、５２）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、５３）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、５４）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、５５）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、５６）−Ｏ−Ｌ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、５７）−Ｏ−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、５８）−Ｏ−Ｌ− ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、５９）−Ｏ−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、６０）−Ｏ−Ｌ）２−ＮＲ１、６１）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、６２）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、６３）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、６４）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、６５）−Ｓ−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、６６）−Ｓ−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、６７）−Ｓ−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、６８）−Ｓ−Ｌ）２ ＮＲ１、６９）−
Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、７０）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、７１）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、７２）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−アリール（１個又は複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、７３）−ＮＲ１（Ｒ１）、７４）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、７５）−Ｎ（Ｒ１）Ｌ）２−ＮＲ１、７６）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）ＲＡ、７７）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、７８）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、７９）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、８０）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、又は８１）−アリール（１個又は複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）である。このリスト中、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく；２個のＲ１置換基が同じ窒素原子上に存在する場合、各Ｒ１置換基は、以下に記載されるＲ１値のリストから独立に選ばれ；ｎは、０、１、２、３、４、又は５のいずれかに等しい整数であり；そして、（Ｒ１）及びＲ１が窒素原子に結合されている場合、それらは窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい。
[0035]Ｌは：１）−Ｃ１−６アルキル、２）−Ｃ２−６アルケニル、３）−Ｃ２−６アルキニル、４）−Ｃ３−７シクロアルキル、５）−Ｃ３−７シクロアルケニル、６）ヘテロサイクリル、７）−Ｃ１−６アルキル−Ｃ３−７シクロアルキル、８）−Ｃ１−６アルキル−ヘテロサイクリル、９）アリール、又は１０）ヘテロアリールである。このリスト中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロサイクリル、アリール及びヘテロアリール基は、それぞれ独立に、１個又は２個のＲＡ置換基で置換されていてもよい。
[0036]Ｒ１は：１）−Ｈ、２）−Ｃ１−６アルキル、３）−Ｃ２−６アルケニル、４）−Ｃ２−６アルキニル、５）−Ｃ３−７シクロアルキル、６）−Ｃ３−７シクロアルケニル、７）−Ｃ１−５過フッ素化アルキル、８）−ヘテロサイクリル、９）−アリール、１０）−ヘテロアリール、１１）−ベンジル、又は１２）５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイルである。このリスト中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリール及びベンジル基は、それぞれ独立に、１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい。
[0037]Ｒ２は：１）−Ｈ、２）−Ｃ１−６アルキル、３）−ＳＲ１、４）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、５）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１、６）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、７）−ベンジル（１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、８）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか一方又は両方に結合されている）、９）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか一方又は両方に結合されている）、１０）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか一方又は両方に結合されている）、１１）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、又は１２）−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）である。このリスト中、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよい。
[0038]ＲＡは：１）−ハロゲン、２）−ＣＦ３、３）−ＯＨ、４）−ＯＲ１、５）−Ｌ−ＯＨ、６）−Ｌ−ＯＲ１、７）−ＯＣＦ３、８）−ＳＨ、９）−ＳＲ１、１０）−ＣＮ、１１）−ＮＯ２、１２）−ＮＨ２、１３）−ＮＨＲ１、１４）−ＮＲ１Ｒ１、１５）−Ｌ−ＮＨ２、１６）−Ｌ−ＮＨＲ１、１７）−Ｌ−ＮＲ４Ｒ１、１８）−Ｌ−ＳＲ１、１
９）−Ｌ−Ｓ（Ｏ）Ｒ１、２０）−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、２１）−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、２２）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、２３）−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、２４）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、２５）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、２６）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１、２７）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、２８）−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ１、２９）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、３０）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２、３１）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ１、３２）−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、３３）−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、３４）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、３５）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、３６）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ１、３７）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、３８）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、３９）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、４０）−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、４１）−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ１、４２）−ＮＲ１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、４３）−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、４４）−Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１、４５）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、４６）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１、４７）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、４８）−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１、４９）−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１、５０）−ベンジル、５１）−Ｎ３、又は５２）−Ｃ（−Ｎ＝Ｎ−）（ＣＦ３）である。このリスト中、ベンジル基は、１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい。
[0039]本発明の実施態様において、化合物は以下に示す一般式IIA、IIB、IIC、IVA又はVIAを有する。そのような化合物の塩又はプロドラッグも本発明による化合物の範囲内である。
[0040]上記一般式IIAの化合物による本発明の実施態様において、Ｒ１、Ｗ及びＲ２はそれぞれ上記定義の通りである。
[0041]上記一般式IIBの化合物による本発明の実施態様において、Ｗ及びＲ２はそれぞれ上記定義の通りであり、Ｈｅｔは３〜７員のヘテロサイクルであり、ヘテロサイクルは
１個又は複数個のＲ１又はＲＡ（上記定義の通り）で置換されていてもよい。
[0042]上記一般式IICの化合物による本発明の実施態様において、Ｗ及びＲ２はそれぞれ上記定義の通りであり；Ｒ５及びＲ６は同じ又は異なり、それぞれ独立にＬ（上記定義の通り）であるか、又はＣと一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい。さらなる実施態様において、環は５員環であり、ヘテロ原子は窒素原子である。なおさらなる実施態様において、環は４個の窒素原子を含む。なおさらなる実施態様において、Ｒ２はベンジルである。
[0043]上記一般式IVAの化合物による本発明の実施態様において、Ｗ、Ｌ、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ上記定義の通りである。また、ｍ、Ｌｉ、Ｒ３及びＲ４もそれぞれ上記定義の通りである。
[0044]上記一般式IVAの化合物による本発明の実施態様において、Ｚは、ＣＯ２Ｍｅ又は２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イルであり；Ｒ２は、ベンジル、３−チエニルメチル又は３−ピリジニルメチルであり；そしてＷはＮＨ−Ｌ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１であり、式中、ＬはＣ２−４アルキルであり、Ｒ１はＣ１−４アルキルであるか、又は（Ｒ１）及びＲ１は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい。
[0045]本発明の実施態様において、本発明の化合物は、以下の表１に描かれた化合物１〜５５番である。そのような化合物の塩又はプロドラッグも本発明による化合物の範囲内である。
[0046]本発明のさらなる実施態様において、化合物は、以下の表１に描かれた式を有する。そのような化合物の塩又はプロドラッグも本発明による化合物の範囲内である。
定義：
[0047]特に明記しない限り、下記の定義が適用される。
[0048]単数形の“ａ”、“ａｎ”及び“ｔｈｅ”は、文脈上明白に他の意味に解釈すべき場合を除いて、対応する複数形の参照も含む。
[0049]本明細書において、“含む(comprising)”という用語は、“含む”という語の後に続く要素のリストが必要とされるか又は必須であることを意味するものとするが、他の要素は任意であり、存在することも又はしないこともある。
[0050]本明細書において、“〜からなる(consisting of)”という用語は、“〜からなる”という語句の後に続く事項は何であれ含み、それに限定されることを意味するものとする。従って、“〜からなる”という語句は、リストされた要素が必要とされるか又は必須であること及びその他の要素は存在し得ないことを示す。
[0051]本明細書において、“アルキル”という用語は、特定数の炭素原子を有する分枝鎖及び直鎖の飽和脂肪族炭化水素基を含むものとする。例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルにおけるＣ１−Ｃ６は、直鎖状又は分枝状の飽和配列の１、２、３、４、５又は６個の炭素を有する基を含むと定義される。上記定義のＣ１−Ｃ６アルキルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルなどであるが、これらに限定されない。
[0052]本明細書において、“シクロアルキル”という用語は、特定数の炭素原子をその中に有する単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルにおけるＣ３−Ｃ７は、単環式飽和配列の３、４、５、６又は７個の炭素を有する基を含むと定義される。上記定義のＣ３−Ｃ７シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルなどであるが、これらに限定されない。
[0053]本明細書において、“アルケニル”という用語は、特定数の炭素原子をその中に有し、その炭素原子の少なくとも２個は二重結合によって互いに結合され、Ｅ又はＺの位置化学のいずれか及びそれらの組合せを有する不飽和直鎖又は分枝鎖炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニルにおけるＣ２−Ｃ６は、直鎖状又は分枝状
配列の２、３、４、５又は６個の炭素を有し、その炭素原子の少なくとも２個は二重結合によって共に結合されている基を含むと定義される。Ｃ２−Ｃ６アルケニルの例は、エテニル（ビニル）、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニルなどであるが、これらに限定されない。
[0054]本明細書において、“アルキニル”という用語は、特定数の炭素原子をその中に有し、少なくとも２個の炭素原子は三重結合によって共に結合されている不飽和直鎖炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ２−Ｃ４アルキニルは、２、３又は４個の炭素を鎖内に有し、その炭素原子の少なくとも２個は三重結合によって共に結合されている基を含むと定義される。そのようなアルキニルの例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニルなどであるが、これらに限定されない。
[0055]本明細書において、“シクロアルケニル”という用語は、特定数の炭素原子をその中に有する単環式不飽和脂肪族炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ３−Ｃ７シクロアルケニルにおけるＣ３−Ｃ７は、単環式配列の３、４、５、６又は７個の炭素を有する基を含むと定義される。上記定義のＣ３−Ｃ７シクロアルケニルの例は、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどであるが、これらに限定されない。
[0056]本明細書において、“ハロ”又は“ハロゲン”という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味するものとする。
[0057]本明細書において、“ハロアルキル”という用語は、上記定義のアルキルにおいて、各水素原子がハロゲン原子によって逐次的に置換されうるアルキルを意味するものとする。ハロアルキルの例は、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２及びＣＦ３などであるが、これらに限定されない。
[0058]本明細書において、“アリール”という用語は、単独でも又は別のラジカルとの組合せでも、６個の炭素原子を含有する炭素環式芳香族単環基を意味し、さらに芳香族、飽和又は不飽和でありうる第二の５又は６員炭素環式基に縮合されていてもよい。アリールの例は、フェニル、インダニル、１−ナフチル、２−ナフチル、テトラヒドロナフチルなどであるが、これらに限定されない。アリールは、シクロアルキル環又は芳香環上の適切な位置で別の基に接続されていてよい。
[0059]本明細書において、“ヘテロアリール”という用語は、１０個までの原子の単環式又は二環式環系であって、少なくとも一つの環は芳香族であり、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有することを意味するものとする。ヘテロアリールは、環炭素原子又はヘテロ原子の一つを介して結合できる。ヘテロアリールの例は、チエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、フリル、ベンゾフラニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、イソチアゾリル、イソクロマニル、クロマニル、イソオキサゾリル、フラザニル、インドリニル、イソインドリニル、チアゾロ［４，５−ｂ］−ピリジン、テトラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チエニル及びフルオロセイン誘導体などであるが、これらに限定されない。
[0060]本明細書において、“ヘテロサイクル”、“ヘテロサイクリック”又は“ヘテロサイクリル”という用語は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有する３、４、５、６、又は７員の非芳香族環系を意味するものとする。ヘテロサイクルの例は、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、３，５−ジメチルピペリジル、ピロリニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニルなどであるが、これらに限定されない。環への結合は、以下に記載のように環の窒素原子又は炭素原子上でなされうる。
[0061]本明細書において、“１個又は複数個の置換基で置換されていてもよい”という用語又はその等価用語である“少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい”とは、その後に記載された状況の事象が起こっても又は起こらなくてもよいことを意味するものとし、記載は、事象又は状況が起こる場合及びそれが起こらない場合を含む。定義は、０〜５個の置換基を意味するものとする。
[0062]本明細書において、“対象”又は“患者”という用語とは、ヒト及びヒト以外の哺乳動物、例えば霊長類、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ、ラット、マウスなどを意味するものとする。
[0063]置換基自体が本明細書中に記載の合成法と不適合であれば、その置換基はこれらの方法で使用される反応条件に対して安定な適切な保護基（ＰＧ）によって保護できる。保護基は、所望の中間体又は標的化合物を得るために、方法の反応順序の適切な時点で除去できる。適切な保護基及びそのような適切な保護基を用いて様々な置換基を保護及び脱保護するための方法は当業者には周知である。その例は、Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（第４版），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００７）に見出すことができ、その内容は引用によってその全文を本明細書に援用する。全体を通して使用されている保護基の例は、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、ＣＢｚ及びＣＯＣＦ３などであるが、これらに限定されない。場合によっては、置換基を、本明細書中に記載の方法で使用されている反応条件下で反応性であるように特に選択することもある。これらの状況下では、反応条件が、選択置換基を、本明細書中に記載の方法において中間体化合物に有用であるか又は標的化合物の所望置換基である別の置換基に変換する。
[0064]本明細書において、“薬学的に許容可能な塩”という用語は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を意味するものとする。
[0065]本明細書において、“薬学的に許容可能な酸付加塩”という用語は、生物学的に又はその他の点で有害ではない遊離塩基の生物学的有効性及び性質を保持している塩を意味するものとし、それらは、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、及び有機酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などを用いて形成される。
[0066]本明細書において、“薬学的に許容可能な塩基付加塩”という用語は、生物学的に又はその他の点で有害ではない遊離酸の生物学的有効性及び性質を保持している塩を意味するものとする。これらの塩は、遊離酸への無機塩基又は有機塩基の付加から製造される。無機塩基から誘導された塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などであるが、これらに限定されない。有機塩基から誘導された塩は、第一級、第二級、及び第三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩を含むが、これらに限定されない。
[0067]本発明による化合物又はそれらの薬学的に許容可能な塩は、一つ又は複数の不斉
中心、キラル軸、及びキラル面を含有しうるので、エナンチオマー、ジアステレオマー、及びその他の立体異性体を生じうる。それらは、（Ｒ）−又は（Ｓ）−、あるいはアミノ酸の場合（Ｄ）−又は（Ｌ）−のような絶対立体化学によって定義できる。本発明は、すべてのそのような可能な異性体のほか、それらのラセミ体及び光学的に純粋な形態も含むものとする。光学活性（＋）及び（−）、（Ｒ）−及び（Ｓ）−、又は（Ｄ）−及び（Ｌ）−異性体は、キラルシントン又はキラル試薬を用いて製造することも、又は逆相ＨＰＬＣのような従来技術を用いて分割することもできる。ラセミ混合物を製造し、その後、個々の光学異性体に分離しても、又はこれらの光学異性体をキラル合成によって製造してもよい。エナンチオマーは、当業者に公知の方法、例えばジアステレオマー塩の形成後、それを結晶化、気−液又は液体クロマトグラフィー、一つのエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応によって分離することにより分割できる。当業者であれば、所望のエナンチオマーが分離技術によって別の化学物質に変換された場合、所望のエナンチオマー形を形成するために追加の工程が必要となることはわかるであろう。あるいは、特定のエナンチオマーは、光学活性試薬、基質、触媒、又は溶媒を用いる不斉合成によって、又は一つのエナンチオマーを不斉転換により別のに変換することによって合成することもできる。
[0068]本発明による一定の化合物はエピマーの混合物として存在することもある。エピマーは、各化合物に存在する２つ以上の立体中心のうちのただ１ヶ所で反対の配置を有するジアステレオ異性体を意味する。
[0069]本発明による化合物は双性イオン形で存在することもあり、本発明はこれらの化合物の双性イオン形及びそれらの混合物を含む。
[0070]さらに、本発明による化合物は、水和物形及び無水物形でも存在しうる。本明細書中に記載のいずれの式の化合物の水和物も含まれる。さらなる実施態様において、本明細書中に記載のいずれかの式による化合物は一水和物である。本発明の実施態様において、本明細書中に記載の化合物は、約１０％以下、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下、約０．１％以下（重量による）の水を含む。他の実施態様において、本明細書中に記載の化合物は、約０．１％以上、約０．５％以上、約１％以上、約２％以上、約３％以上、約４％以上、約５％以上、又は約６％以上（重量による）の水を含む。
[0071]プロドラッグの形態の化合物を製造、精製、及び／又は扱うのが便利又は望ましいであろう。そこで、本明細書において“プロドラッグ”という用語は、代謝された場合（例えばインビボで）、所望の活性化合物をもたらす化合物に関係する。典型的には、プロドラッグは不活性であるか又は所望の活性化合物よりも低活性であるが、有利な取扱い、投与、又は代謝特性を提供できる。特に明記しない限り、特定の化合物への言及はそのプロドラッグも含む。
[0072]本明細書において、“ＥＣ５０”という用語は、ビヒクル培養（ＤＭＳＯ）に比べてＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−の細胞数に５０％の増加をもたらす濃度を意味するものとする。
[0073]本明細書において“造血幹細胞”又は“ＨＳＣ”という用語は、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板生成巨核球、血小板）、及び単球（例えば、単球、マクロファージ）のような機能性成熟細胞への分化を可能にする多能性と、多能性を維持しながら再生する能力（自己複製能）とを備えた細胞を意味するものとする。
[0074]ＨＳＣは出発細胞集団の一部である。これらの細胞は、造血起源の細胞を含有する身体又は身体の器官から任意に得られる。そのような供給源は、未分画骨髄、臍帯、末梢血、肝臓、胸腺、リンパ及び脾臓などである。前述の粗又は未分画血液産物はいずれも、当業者に公知の方法で、造血幹細胞の特徴を有する細胞を富化することができる。
[0075]本明細書において“出発細胞集団”という用語は、当該技術分野で知られているように、上記の様々な供給源の一つから採取されたＨＳＣを含む細胞集団を識別することを意味する。出発細胞集団をＣＤ３４＋細胞で富化できるということは、細胞集団を細胞
表面マーカーＣＤ３４＋の存在に基づいて選択することを意味する。ＣＤ３４＋細胞は、例えばフローサイトメトリー及び蛍光標識抗ＣＤ３４抗体を用いて検出及び計数できる。さらに、出発細胞集団は、増殖に直接使用することも、又は後の時点で使用するために凍結及び貯蔵することもできる。
[0076]造血時、ＨＳＣは、まず骨髄細胞系列及びリンパ系列への前駆細胞段階に分岐した後、それぞれ骨髄幹細胞（混合コロニー形成細胞、ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）及びリンパ幹細胞に分化する。さらに、骨髄幹細胞は、赤芽球バースト形成細胞（ＢＦＵ−Ｅ）及び赤芽球コロニー形成細胞（ＣＦＵ−Ｅ）を経て赤血球へ、巨核球コロニー形成細胞（ＣＦＵ−ＭＥＧ）を経て血小板へ、顆粒球−マクロファージコロニー形成細胞（ＣＦＵ−ＧＭ）を経て単球、好中球及び好塩基球へ、好酸球コロニー形成細胞（ＣＦＵ−Ｅｏ）を経て好酸球へと分化する。一方、リンパ幹細胞は、Ｔリンパ前駆細胞を経てＴ細胞へ、及びＢリンパ前駆細胞を経てＢ細胞へと分化する。これらの骨髄幹細胞及びそれらから誘導された様々な造血前駆細胞は、様々なサイトカインの存在下で、軟寒天、半固体メチルセルロース培地などの上にそれらが形成するコロニーの性質によって識別される。
[0077]本発明は、以下の非制限的リストに掲載の疾患を患う対象（又は患者）の治療のための医薬の製造における、本発明による、そして本明細書中に定義された、化合物又はその塩の使用、上記疾患又は自己免疫疾患を患う対象（又は患者）の自家もしくは同種移植又は治療も含む。悪性血液疾患／障害及び先天性疾患の例は、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常（とりわけゴーシェ病）などであるが、これらに限定されない。移植の利益を享受しうる免疫学的疾患の例は多数あるが、多発性硬化症、狼瘡、ある種の関節炎、重症複合免疫不全などである。
[0078]従って、本発明は、本発明による化合物を用いて増殖させたＨＳＣを、上記障害／悪性疾患のいずれか一つを患う患者に投与することを包含する。
[0079]さらに、記載の化合物及び組成物は、以下の非制限的状況：上記障害又は自己免疫疾患を患う対象（又は患者）の自家もしくは同種移植又は治療に使用できる。悪性血液疾患／障害及び先天性疾患の例は、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常（とりわけゴーシェ病）などであるが、これらに限定されない。移植の利益を享受しうる免疫学的疾患の例は多数あるが、多発性硬化症、狼瘡、ある種の関節炎、重症複合免疫不全などである。
[0080]従って、本発明は、本発明による化合物を用いて増殖させたＨＳＣを、上記障害／悪性疾患のいずれか一つを患う患者に投与することを包含する。
[0081]また、本発明の中には、本発明による、そして本明細書中に記載の方法を用いて増殖後に得られた細胞集団も包含される。造血幹細胞及び前駆細胞とも、成人、臍帯血、胎児又は胚といった供給源から採取できる。本発明の方法を用いる細胞増殖は、例えば好中球又は血小板生着までの時間の迅速化に有用な前駆細胞の数の増加をもたらすことができる。そのような方法は、ＨＳＣを含む出発集団を、ＨＳＣの数を増加できる薬剤と共に培養することを含む。出発集団は、目的とする細胞表面マーカー又はその組合せ（例えばＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋/−）を富化できる。
[0082]ＨＳＣの増殖法
[0083]従って、本発明は造血幹細胞の増殖法に関し、該方法は、（ａ）造血幹細胞を含む出発細胞集団を用意し、そして（ｂ）前記出発細胞集団をエクスビボで造血幹細胞の増殖に適切な条件下で培養することを含む。
[0084]従って、本発明は造血幹細胞の増殖法に関し、該方法は、（ａ）造血幹細胞を含む出発細胞集団を用意し、そして（ｂ）前記出発細胞集団をエクスビボで造血幹細胞の増
殖に適切な条件下で培養することを含む。
[0085]一つの特別な実施態様において、造血幹細胞を増殖させるための前記方法は、（ａ）造血幹細胞を含む出発細胞集団を用意し、そして（ｂ）前記出発細胞集団をエクスビボで本発明の化合物又は組成物の存在下で培養することを含む。
[0086]出発細胞集団を用意するために、細胞集団はまず、特定の細胞マーカーに基づく細胞の負及び／又は正の選択を含む富化又は純化工程に付されうる。特定の細胞マーカーに基づいて前記出発細胞集団を単離するための方法は、フローサイトメトリーとも呼ばれる蛍光活性化セルソーティング（fluorescent activated cell sorting，ＦＡＣＳ）技術か又は特定の細胞表面マーカーと相互作用する抗体又はリガンドが結合されている固体又は不溶性の基材を使用すればよい。例えば、細胞を、抗体を含有する固体基材（例えば、ビーズのカラム、フラスコ、磁気粒子）と接触させ、非結合細胞があれば除去する。磁気ビーズ又は常磁性ビーズを含む固体基材が使用される場合、ビーズに結合された細胞は、磁気分離器によって容易に単離できる。
[0087]一実施態様において、前記出発細胞集団はＣＤ３４＋細胞が富化されている。血液細胞集団をＣＤ３４＋細胞に富ませるための方法は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社（ＣＤ３４＋直接単離キット、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ，Ｇｌａｄｂａｃｈ，ドイツ）又はＢａｘｔｅｒ社（Ｉｓｏｌｅｘ ３０００）によって市販されているキットなどである。
[0088]単胎出産からの臍帯血の量は成人又は年長児を治療するには不適切であることが多い。本発明の化合物又は組成物を用いる増殖法の一つの利点は、一つの臍帯血単位のみから十分な量の造血幹細胞の生成が可能になることである。
[0089]従って、一実施態様において、出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞が富化された新生児の臍帯血細胞から誘導される。一つの関連の実施態様において、前記出発細胞集団は一つ又は二つの臍帯血単位から誘導される。
[0090]別の実施態様において、出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞が富化されたヒト動員末梢血細胞から誘導される。一つの関連の実施態様において、前記出発細胞集団はただ一人の患者から単離されたヒト動員末梢血細胞から誘導される。
[0091]前記出発細胞集団は、好ましくは少なくとも５０％のＣＤ３４＋細胞、一部の実施態様においては９０％を超えるＣＤ３４＋細胞を含有しうる。
[0092]造血幹細胞増殖のための出発細胞集団の培養条件は、出発細胞集団、所望の最終細胞数、及び所望の最終ＨＳＣの割合に応じて変動するであろう。
[0093]特に、ＣＤ３４＋細胞が富化された臍帯血細胞由来の出発細胞集団を使用する一つの特別な実施態様において、培養条件は、ＨＳＣ増殖の技術分野で一般的に知られているサイトカイン及び増殖因子のような他の細胞増殖因子の使用を含む。そのようなサイトカイン及び増殖因子は生物分子又は小分子であり得、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＦｌＴ３−Ｌ、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、エリスロポエチン、及びそれらの類似体などを含むが、これらに限定されない。本明細書において“類似体”とは、天然型のような生物活性を有するサイトカイン及び増殖因子のあらゆる構造的変異形を含む。例えば、天然型と比較した場合に増強された又は低減した生物活性を有する変異形又はＴＰＯ受容体に対するアゴニスト抗体のようなサイトカイン受容体アゴニスト（例えば、特許公開第ＷＯ ２００７／１４５２２７号に詳述されているようなＶＢ２２Ｂ ｓｃ（Ｆｖ）２など）を含むが、これらに限定されない。サイトカイン及び増殖因子の組合せは、最終分化細胞の産生を制限しながらＨＳＣ及び前駆細胞を増殖させるように選ばれる。一つの特別な実施態様において、一つ又は複数のサイトカイン及び増殖因子は、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３−Ｌ及びＴＰＯからなる群から選ばれる。
[0094]ヒトＩＬ６又はインターロイキン−６（Ｂ細胞刺激因子２としても知られる）は報告され（Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ａｎｎ．ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ １ ｍｍ．２３：１ ２００５）、市販されている。ヒトＳＣＦ又は幹細胞因子（ｃ−ｋｉｔリガンド、マスト細胞増殖因子又はＳｔｅｅｌ因子としても知られる）は報告され（Ｓｍｉｔｈ，Ｍ Ａ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＴＡ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，１０５，３：１４３，２００１）
、市販されている。Ｆｌｔ３−Ｌ又はＦＬＴ−３リガンド（ＦＬとも呼ばれる）は、ｆｌｔ３−受容体に結合する因子である。これも報告され（Ｈａｎｎｕｍ Ｃ，Ｎａｔｕｒｅ
３６８（６４７２）：６４３−８）、市販されている。ＴＰＯ又はトロンボポエチン（巨核球増殖因子（ＭＧＤＦ）又はｃ−Ｍｐｌリガンドとしても知られる）は報告され（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ Ｋ（２００６）．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５４（１９）：２０３４−４５）も報告され、市販されている。
[0095]前述の化学的成分及び生物的成分は、それらを培地に添加することによってだけでなく、それらを培養に使用される基材又は支持体(support)の表面に固定することによって、具体的に言えば、使用される成分を適当な溶媒中に溶解し、得られた溶液で基材又は支持体をコーティングし、次いで過剰の成分を洗い流すことによって使用することもできる。使用されるそのような成分は、該成分に結合する基質で予めコーティングされた基材又は支持体に添加すればよい。
[0096]ＨＳＣの増殖は、組成に関しては天然培地、半合成培地、又は合成培地中で実施でき、形状に関しては固体培地、半固体培地、又は液体培地、そして上記の細胞増殖因子の混合物を補充された、造血幹細胞及び／又は造血前駆体細胞の培養に使用される任意の栄養培地でありうる。そのような培地は、典型的には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン、塩素、アミノ酸、ビタミン、サイトカイン、ホルモン、抗生物質、血清、脂肪酸、サッカリドなどを含む。培養には、必要であれば、他の化学的成分又は生物的成分を単独で又は組み合わせて配合してもよい。培地に配合されるそのような成分は、ウシ胎仔血清、ヒト血清、ウマ血清、インスリン、トランスフェリン、ラクトフェリン、コレステロール、エタノールアミン、亜セレン酸ナトリウム、モノチオグリセロール、２−メルカプトエタノール、ウシ血清アルブミン、ピルビン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、各種ビタミン、各種アミノ酸、寒天、アガロース、コラーゲン、メチルセルロース、各種サイトカイン、各種増殖因子などであろう。ＨＳＣの増殖法に適切なそのような基本培地の例は、ＳｔｅｍＳｐａｎＴＭ Ｓｅｒｕｍ−Ｆｒｅｅ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（ＳＦＥＭ）（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カナダ・バンクーバー）、ＳｔｅｍＳｐａｎＴＭ Ｈ３０００−Ｄｅｆｉｎｅｄ Ｍｅｄｉｕｍ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カナダ・バンクーバー）、ＣｅｌｌＧｒｏＴＭ，ＳＣＧＭ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ ドイツ）、ＳｔｅｍＰｒｏＴＭ−３４ ＳＦＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｈａｍ’ｓ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｈ１２ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ１２、ＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ培地、イーグルの最少必須培地（ＥＭＥＭ）、αＭＥＭ培地（アルファ変法イーグル最少必須培地）、ＲＰＭＩ１６４０培地、Ｉｓｏｃｏｖｅ’ｓ
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）、ＳｔｅｍＰｒｏ３４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｘ−ＶＩＶＯ １０（Ｃａｍｂｒｅｘ）、Ｘ−ＶＩＶＯ １５（Ｃａｍｂｒｅｘ）及びＳｔｅｍｌｉｎｅ ＩＩ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）などであるが、これらに限定されない。
[0097]一実施態様において、本発明の化合物又は組成物は、ＨＳＣ増殖に適切な濃度下での前記出発細胞集団の増殖法の最中に投与される。一つの特別な実施態様において、前記化合物又は組成物は、１〜３０００ｎｍｏｌ又は例えば１〜１００ｎｍｏｌを含む濃度で投与される。
[0098]出発細胞集団が本質的に、一又は二臍帯血単位由来の、又は動員ＰＢ細胞由来の、又は採取骨髄由来のＣＤ３４＋富化細胞からなる一つの特別な実施態様において、細胞は、ＨＳＣ増殖のための条件下で、例えば２〜２１日間、及び／又は指示された倍数増殖(fold expansion)及び特徴的細胞集団が得られるまで増殖される。一つの特別な実施態様において、細胞はエクスビボでＨＳＣ増殖のための条件下で２１日以下、１２日間、１０日間、又は７日間増殖される。
[0099]次に、細胞集団は、本発明の化合物又は組成物及び／又は細胞培養のいずれかその他の成分を除去するために洗浄され、短期使用のための適切な細胞懸濁培地、又は長期貯蔵培地、例えば低温保存に適切な培地中に再懸濁される。
[0100]ＨＳＣ及び／又は造血前駆細胞は、動物細胞培養に一般的に使用されている培養容器、例えばペトリ皿、フラスコ、プラスチックバッグ、ＴｅｆｌｏｎＴＭバッグ中で培養できる。これらは細胞外マトリックス又は細胞接着分子で事前コーティングされていてもよい。そのようなコーティング用の材料は、コラーゲンＩ〜XIX、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニン１〜１２、窒素、テネイシン、トロンボスポンジン、フォンビルブラント因子、オステオポニン(osteoponin)、フィブリノゲン、各種エラスチン、各種プロテオグリカン、各種カドヘリン、デスモコリン、デスモグレイン、各種インテグリン、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、免疫グロブリンスーパーファミリー、マトリゲル、ポリ−Ｄ−リシン、ポリ−Ｌ−リシン、キチン、キトサン、セファロース、アルギン酸ゲル、ヒドロゲル、又はそれらのフラグメントでありうる。そのようなコーティング材料は人工改変アミノ酸配列を有する組換え材料でもよい。造血幹細胞及び／又は造血前駆細胞は、培地組成、ｐＨなどを機械的に制御でき、高密度培養を得ることができるバイオリアクターを用いることによって培養できる（Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｒ Ｍ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８８：６７６０，１９９１；Ｋｏｌｌｅｒ Ｍ Ｒ，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２１：６５３，１９９８；Ｋｏｌｌｅｒ，Ｍ Ｒ，Ｂｌｏｏｄ，８２：３７８，１９９３；Ａｓｔｏｒｉ
Ｇ，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，３５：１１０１，２００５）。
[0101]本発明はさらに、上記増殖法によって得ることが可能な又は得られた増殖ＨＳＣを有する細胞集団も提供する。一つの特別な実施態様において、そのような細胞集団は、哺乳動物宿主への投与に適切な薬学的に許容可能な媒体中に再懸濁され、それによって、治療組成物を提供する。
[0102]本発明はさらに、哺乳動物対象における同種又は自家幹細胞移植に使用するための増殖ＨＳＣを有する細胞集団又はその組成物も提供する。
[0103]ここで言う対象とは、例えば、骨髄ドナーか又は血液細胞レベルが枯渇もしくは限られている個人又はそのリスクのある個人である。任意に、対象は、骨髄採取前の骨髄ドナーか又は骨髄採取後の骨髄ドナーである。対象は骨髄移植のレシピエントでもよい。本明細書中に記載の方法は、骨髄予備能(bone marrow reserve)が制限された対象、例えば高齢対象又は例えば白血病やリンパ腫の治療のために化学療法のような免疫枯渇治療又は骨髄破壊的治療を事前に受けた対象に特に有用である。対象は、任意に、対照血液細胞レベルと比べて、減少した血液細胞レベルを有しているか又は血液細胞レベルの減少を発症するリスクがある。本明細書において、対照血液細胞レベルという用語は、対象の血液細胞レベルを変更する事象の前又はその事象が実質的にない対象における平均の血液細胞レベルのことを言う。対象の血液細胞レベルを変更する事象は、例えば、貧血、外傷、化学療法、骨髄移植及び放射線療法などである。例えば、対象は、貧血又は例えば外傷による失血を有する。
[0104]移植物は、本発明の方法によって増殖された造血幹細胞及び／又は造血前駆細胞に加えて、緩衝液、抗生物質、薬剤を含有する組成物でありうる。
[0105]増殖ＨＳＣ集団又は増殖ＨＳＣを有する細胞集団を含む組成物を、対象に、例えば化学療法、放射線療法又は骨髄移植の前に、同時に、又は後に投与する。対象は、任意に、例えば、骨髄喪失又は枯渇骨髄を特徴とする先天性、遺伝性又は後天性の症候群に関連する枯渇骨髄を有している。従って、対象は、任意に、造血の必要がある対象である。任意に、対象は、骨髄ドナーか又は枯渇骨髄を有する対象もしくはそのリスクのある対象である。
[0106]造血幹細胞操作は、化学療法又は放射線療法の補充療法として有用である。例えば、ＨＳＣは末梢血に局在化しているので、化学療法を受ける対象から単離し、療法後に細胞を戻す。従って、対象は、化学療法、放射線療法のような免疫細胞枯渇治療を受ける又は受ける予定の対象であるか、又は骨髄移植のドナーとしての役割を果たす対象である。骨髄は体内で最も増殖性の組織の一つであるがゆえに、しばしば化学療法薬及び放射線によって最初に損傷を受ける器官である。その結果、血液細胞の産生が化学療法又は放射線治療中に急速に破壊されるので、化学療法又は放射線を打ち切り、造血系に血液細胞供
給を補充させてから、患者を化学療法で再治療せねばならない。そこで、本明細書中に記載のように、本明細書中に記載の方法によって製造されたＨＳＣ又は血液細胞を追加の血液細胞を必要としているそのような患者に投与すればよい。
[0107]上記のように本発明の化合物又は組成物によって増殖されたＨＳＣを、インビボ、インビトロ、又はエクスビボでＨＳＣの増殖を増強できる治療薬(例えば、小分子、抗体など）及び任意に少なくとも一つの薬学的に許容可能な賦形剤又は担体と組み合わせて提供する。ＨＳＣの増殖を増強できる治療薬とは、ＴＰＯ受容体に対するアゴニスト抗体（例えば、特許公開第ＷＯ ２００７／１４５２２７号に詳述されているようなＶＢ２２Ｂ ｓｃ（Ｆｖ）２など）；サイトカイン、例えば、ＳＣＦ、ＩＬ−６、Ｆｌｔ−３リガンド、ＴＰＯ又はＴＰＯ模倣体（例えば、ＷＯ／２００７／０２２２６９；ＷＯ／２００７／００９１２０；ＷＯ／２００４／０５４５１５；ＷＯ／２００３／１０３６８６；ＷＯ／２００２／０８５３４３；ＷＯ／２００２／０４９４１３；ＷＯ／２００１／０８９４５７；ＷＯ／２００１／０３９７７３；ＷＯ／２００１／０３４５８５；ＷＯ／２００１／０２１１８０；ＷＯ／２００１／０２１１８０；ＷＯ／２００１／０１７３４９；ＷＯ／２０００／０６６１１２；ＷＯ／２０００／０３５４４６；ＷＯ／２０００／０２８９８７；ＷＯ／２００８／０２８６４５；など）；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；プロスタグランジン又はプロスタグランジン受容体アゴニスト（例えば、プロスタグランジンＥ２受容体−１（ＥＰ−１）アゴニスト、プロスタグランジンＥ２受容体−２（ＥＰ−２）アゴニスト、プロスタグランジンＥ２受容体−３（ＥＰ−３）アゴニスト及びプロスタグランジンＥ２受容体−４（ＥＰ−４）アゴニスト、特許公開第ＷＯ／２００８／０７３７４８号に詳述の通り）；テトラエチレンペンタミン（ＴＥＰＡ）；Ｎｏｔｃｈ−リガンド（Ｄｅｌｔａ−１）；及び／又はＷＮＴアゴニストを意味する。さらに、幹細胞を間充織幹細胞（ＭＳＣ）と培養すると、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を防止するので、幹細胞増殖に役立ちうる。
[0108]薬学的に許容可能とは、生物学的に又はその他の点で有害ではない材料を意味する。すなわち、その材料は、対象又は細胞に、望ましくない生物学的作用を起こすことなく又はそれが含有されている医薬組成物の他の成分と有害な様式で相互作用することなく投与できる。担体又は賦形剤は、活性成分の分解(劣化）を最小限にし、対象又は細胞における有害副作用を最小限にするように選ばれる。
[0109]組成物は、本明細書中に記載の方法で使用するために任意の慣用方式で製剤化される。投与は当業者によって有効であることが知られている任意の経路経由で行われる。例えば、組成物は、経口、非経口(例えば静脈内)、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮、体外、鼻腔内又は局所投与される。
[0110]投与の好適な方法は静脈内注入である。輸注される細胞の数は、性別、年齢、体重、疾患又は障害の種類、疾患のステージ、細胞集団における所望細胞のパーセンテージ及び治療効果を生み出すために必要とされる細胞の量といった因子を考慮に入れる。一つの特別な実施態様において、組成物は静脈内注入によって投与され、臍帯血の場合、少なくとも≧０．３ ×１０５ ＣＤ３４＋／ｋｇ又は＞２×１０６ ＣＤ３４＋、骨髄又は動員末梢血細胞の場合、２．５×１０５ ＣＤ３４＋／ｋｇ以上を含む。一つの特別な実施態様において、注入細胞はすべて単胎出産由来の増殖臍帯血細胞から誘導される。
[0111]増殖された造血幹細胞及び／又は造血前駆細胞は、例えば白血病の治療の場合、がん細胞撲滅のため又はドナー細胞生着促進のために、抗がん剤、全身照射又は免疫抑制剤で前処置された患者に、点滴によって注入できる。治療される疾患、前処置及び細胞移植法は、担当者によって適切に選択される。このようにして移植された造血幹細胞及び／又は造血前駆細胞のレシピエントにおける生着、造血の回復、移植の副作用の存在及び移植の治療効果は、移植療法で使用される通常のアッセイによって判断できる。
[0112]上記のように、本発明は、造血幹細胞及び／又は造血前駆細胞の増殖と、増殖されたＨＳＣを使用することによって移植療法を安全及び容易に短期間で実施することを可能にする。
[0113]また、ここでは、本明細書中に記載の成分の一つ又は複数を充填した一つ又は複
数の容器を含むキットも提供する。そのようなキットは、必要とされる又は所望の溶液及び緩衝液を含んでいてもよい。キットは、任意に、上記方法によって製造された増殖幹細胞集団を含むか、又はＨＳＣの増殖集団を製造するための容器又は組成物を含有することもできる。特に、本発明は、エクスビボで造血幹細胞を増殖させるためのキットを提供し、該キットは、発明の概要に定義された化合物及びそのような化合物をＨＳＣ増殖法に使用するための説明書と、任意に、一つ又は複数の細胞増殖因子、又は細胞増殖用の培地、特に上記のようなＨＳＣ増殖用の培地を含む。キットはさらに、細胞の産生をモニターするための抗体、例えば、抗ＣＤ３４、抗ＣＤ３８及び／又は抗ＣＤ４５ＲＡ抗体を含んでいてもよい。一つの特別な実施態様において、そのようなキットはさらに、ＩＬ６、ＦＬＴ３−Ｌ、ＳＣＦ及びＴＰＯからなる群から選ばれる一つ又は複数の細胞増殖因子を含む。任意に、そのようなパック又はキットは使用説明書を伴う。
[0114]インビボ応用：また、対象においてＨＳＣを増加させるための有効量の本発明の化合物を提供するためのキットも提供し、該キットはある期間にわたって使用するための化合物の一つ又は複数の用量を含む。ここで、キット中の本発明の化合物の用量の総数は、対象においてＨＳＣを増加させるのに足る有効量に等しい。期間は、約１日〜数日間又は数週間又は数ヶ月である。従って、期間は、少なくとも約５、６、７、８、１０、１２、１４、２０、２１、３０又は６０日以上又は１〜１８０日の間の任意の日数である。
生物学的アッセイ
スクリーニングアッセイ
[0115]ＨＳＣ自己複製の新規な推定アゴニストを同定するために、我々は、高スループット方式のスクリーニングアッセイを適応し、小分子化合物のライブラリー(５，２８０の低分子量化合物）を初代ヒト動員ＣＤ３４＋細胞に対して試験した。同じ手法が、当業者に公知の、ＣＤ３４＋細胞を単離するための様々な供給源由来のＣＤ３４＋細胞にも適用されることは理解されるはずである。単核細胞をマウス抗ヒトＣＤ３４＋ＡＰＣ（ＢＤ
Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色し、その後、Ａｎｔｉ−ＡＰＣ磁気マイクロビーズ（ＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で磁気標識した。磁気標識細胞をＡｕｔｏＭＡＣＳカラムを用いて保持した。我々の研究は、インターロイキン−６、トロンボポエチン、Ｆｌｔ−３リガンド、及び幹細胞因子を補充された培地中で培養された動員末梢血由来のＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞は、単核細胞（ＭＮＣ）の増殖を促進すると同時にＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−集団の減少及びＨＳＣ枯渇を招くだろうという事実に基づくものであった。従って、この喪失を防止する低分子量化合物は、ＨＳＣ増殖のアゴニストとして作用できることになる。
[0116]３８４ウェルプレートにて、２０００個のＣＤ３４＋細胞／ウェルを、１μＭの試験化合物又は０．１％ＤＭＳＯ（ビヒクル）を含有する５０μｌの培地中で培養した。ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の割合は、実験開始時及び７日間のインキュベーション後に測定した。最初に試験した異なる化学的背景の５，２８０の化合物のうち６つがＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の増殖を促進し、１７個が、対照（ＤＭＳＯ）と比較してＣＤ３４−ＣＤ４５ＲＡ＋細胞の割合の増加による判定で、分化を増強した。ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞集団の増殖を促進する６個の化合物を二次的スクリーニングで再分析した。これら６つの化合物のうち４つは、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）アンタゴニストとして作用する。すなわち、ｈｕＣＤ３４＋細胞のエクスビボ増殖を促進することが示されている作用機序である（ＳＲ１と同じ）。アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）アンタゴニストではないと決定された残り２つの化合物は、７日間のインキュベーション中、ＣＤ３４＋細胞を含むＭＮＣの増殖を促進したことが示された。同定されたこれら２つの残りの化合物の一つは化合物１である（表１）。
[0117]以下の生物学的アッセイを使用して、造血幹細胞増殖に及ぼす本発明の化合物の効果を評価した。培地：使用された培地は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、陽性対照（ＳＲ１）、又は本発明の化合物もしくは化合物の組合せの存在下、下記の組換えサイトカイン、すなわちインターロイキン−６、トロンボポエチン、Ｆｌｔ−３リガンド、及び幹細胞因子（それぞれ最終濃度１００ｎｇ／ｍｌ）を補充された無血清培地からなるものであった。
細胞培養：初期採取ＣＤ３４＋細胞の純度は、フローサイトメトリーによる測定で９０％より高かった。ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−亜集団は７０％より高い純度レベルに達していた。細胞を４０，０００細胞／ｍｌで播種し、７〜１２日間、５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートした。長期培養の場合、動員ＰＢ由来の２００，０００個のＣＤ３４＋細胞／ｍｌを、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、陽性対照、又は５００ｎＭの本発明の化合物の存在下、インターロイキン−６、トロンボポエチン、Ｆｌｔ３リガンド、及び幹細胞因子（それぞれ最終濃度１００ｎｇ／ｍｌ）を補充された無血清培地を用いて培養した。１０日間のエクスビボ培養後、化合物１（表１）は、ＭＮＣの７倍を超える増殖、ＣＤ３４＋細胞の入力値（０日）の５倍を超える増加、及びビヒクルについて決定された値のほぼ４倍の増加を促進した。１０日間のエクスビボ培養後、化合物１処理細胞は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）と培養された細胞（２２．８±０．９％）と比べて、高レベルのＣＤ３４発現（６５．８±５．５％）を保持していた。さらに、化合物１処理細胞のみが、ビヒクル（４．７±０．４％）と比べて、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−集団の最高発現（２４．８±０．９％）を保持していた。化合物１と培養されたＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−の数は、ビヒクルと比べて約３倍増加、入力値よりも７倍増加していた。最後に、本発明の化合物を用量反応形式でアッセイし（濃度範囲１ｎＭ〜５０００ｎＭ）、ビヒクル条件と比べてＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の数の５０％増加を生じる有効濃度を決定した。結果を表１に示す。
化合物１はアリール炭化水素（ＡｈＲ）経路を通じて作用しているのではない（図１）
[0118]我々は次に、化合物１の未分化ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−未分化造血細胞に及ぼす影響は培養では迅速に可逆的であることを実証した。この作用は図２に最もよく示されている。図２は、ＣＤ３４＋動員末梢血細胞を化合物１の存在下で７日まで培養し、その時点で細胞を洗浄して化合物１を除去したことを示す。緑色の点線は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の割合の低下は急速に対照培養物（ＤＭＳＯ：青色の実線と点線）のそれに準じることを示しているが、化合物１の存在下で維持された細胞は２週間の培養を通してより未分化表現型を保持している（緑色の実線）。これらの結果は明らかに、化合物なしの暴露の２日以内に、細胞は対照培養物に見られるような分化マーカーを獲得ずみであることを示している。従って、化合物１の影響は未分化ヒト細胞に対して速やかに可逆的である。
化合物１はマイトジェンではない（図３）
[0119]我々は、化合物１は、増殖因子の不在下では独自に細胞増殖を引き起こさないことも示した。これらの結果は、図３に示されているが、アリール炭化水素受容体のアンタゴニスト（ＳＲ１）で観察されたのと同様、化合物１は、３個の列記された増殖因子、すなわちＦｌｔ３、ＴＰＯ及びＳＣＦののいずれかの不在下では細胞増殖を誘導できなかったことを示している。このことは、ＳＲ１に似て、エクスビボにおける未分化ＨＳＣ表現型の維持に対する化合物１の作用は、この集団へのマイトジェン効果によるものではなく、細胞分化の防止に対するものであることを示している。
化合物１及び化合物４０はどちらも細胞分化を防止し、ＡｈＲアンタゴニストと相乗作用をする（図４）
[0120]我々はまた、化合物１及びその有力誘導体の一つである化合物４０が細胞分化に及ぼす影響についても細胞学的分析及びフローサイトメトリーの両方を用いて評価した。両タイプの研究とも、化合物１及びその誘導体の化合物４０は細胞分化を防止することを示した。ＦＡＣＳの結果を図４に示す。図４Ａは、化合物１が動員末梢血細胞分化に及ぼす影響を示す。７日間の増殖後、比較的純粋な（＞８５％ ＣＤ３４＋）動員末梢血集団を、対照（ＤＭＳＯ）又は化合物１又はＳＲ１又は化合物１＋ＳＲ１に暴露した。結果は、対照培養物では細胞が急速にＣＤ３４細胞表面発現を失っている(loose)が、この効果は最適レベルのＳＲ１及び化合物１を導入することによって部分的に無効化されることを強く示している。興味深いことに、ＳＲ１と化合物１の両者は、細胞表面上でのＣＤ３４発現の維持に相乗効果がある。これらの観察は、図４Ｂの臍帯血標本でも、図４Ｃの化合物４０を用いた場合でも再現された。
[0121]これに加えて、我々は、化合物１又は化合物４０の影響は、より未分化表現型を
有する細胞に対して最も印象的であることも示した。例えば、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞（図４Ａ〜４Ｃの下部パネルの左上象限）は、化合物１又は４０を補充した培養物中の方が、ＳＲ１又は対照培養物中よりも数が多い。化合物１又は化合物４０＋ＳＲ１の相加効果はこれらの培養物中でも観察されている。
[0122]図４Ｄに用量反応曲線を提供するが、化合物４０が未分化ヒトＨＳＣ富化集団の表面上のＣＤ３４マーカーの消失防止に効力があることを示している。ＣＤ３４の発現は化合物の異なる用量と共に変動していることに注意する。
化合物１及び４０はエクスビボでヒトＨＳＣ表現型を増殖させる（図５）
[0123]図５は、化合物１だけでなく化合物４０も、短期及び長期培養でエクスビボにてヒトＨＳＣ表現型を増殖させることを示している。図５Ａは、全細胞数は、ＣＤ３４＋動員末梢血（ｍＰＢ）を用いて開始し、１２日間維持した培養において、入力数よりも約２０倍増加していることを示している。増殖のレベルは、培養が、化合物１、ＳＲ１、化合物１＋ＳＲ１、又は対照ＤＭＳＯを用いて開始されようとも同じである。最も顕著なことには、化合物１の影響は、より未分化なＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞亜集団に対して観察され、化合物１の存在下で約１０倍、化合物１＋ＳＲ１の存在下で約１５倍増殖している。この観察は、図４に示された結果と共に、化合物１は細胞増殖に対して影響を及ぼすのではなく、むしろＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の分化防止に対して影響し、より成熟した細胞を代償にして（成熟細胞に分化しないで）それらの正味増殖をもたらしていることを強く示唆している。図５Ｂの結果から、化合物１は、７日間にわたりＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−臍帯血細胞の３０〜４０倍の増殖をもたらすが、これらの細胞はＤＭＳＯ（対照）の存在下では約１５倍の増殖であることがわかる。図５Ｃも同様の結果を示しているが、今度は培養を１２日間に延長し、化合物１を化合物４０に置き換えた。ここでも、左のパネルに示されているように、全細胞増殖は、細胞がＤＭＳＯ（対照）、ＳＲ１、化合物４０又は化合物４０＋ＳＲ１に暴露されようとも同じである。最も印象的なことには、より未分化なＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞は化合物４０を補充された培養物中で１２日間にわたり８０倍増殖したが、これらの細胞はＳＲ１を用いて開始された培養では２０倍未満しか増殖せず、この化合物のアリール炭化水素リプレッサーアンタゴニストに優る優位性を示している。
[0124]要するに、これらの結果は、化合物１及び化合物４０が、動員末梢血又は臍帯血細胞から誘導されたＣＤ３４＋を用いた場合とも、ＣＤ３４＋及びより未分化なＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−集団の増殖に大きな効果を有していることを示している。
[0125]増殖細胞のエクスビボ機能性を慣用の培養コロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｃ）アッセイを用いて試験した。未処理細胞、又はＤＭＳＯ、陽性対照もしくは本発明の化合物とインキュベートされた細胞を従来条件下でメチルセルロース培地中に播種した。一例として、化合物１（表１、実施例１）は、多能性造血前駆細胞の数を増殖する。化合物１で１０日間処理された１０００個のＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞のメチルセルロース培養物は、多分化系列の顆粒球赤血球、マクロファージ及び巨核球（ＧＥＭＭコロニー）に、入力細胞より５倍の増加及び対照細胞と比べて１０倍の増加をもたらした。このことは、本明細書中に記載の化合物１も、多能性前駆細胞の増殖を促進することを示唆している。
[0126]ＮＳＧマウスモデルを用いて評価された、化合物１の培養ｍＰＢ ＨＳＣに及ぼす影響（図６）
[0127]我々は次に、インビトロで１０〜１２日間増殖され、ＮＳＧマウスモデルのインビボに導入された臍帯血及び動員末梢血ヒトＨＳＣに及ぼす化合物１及び化合物４０の影響を評価した。これらの実験の目標は、図４及び５で示された未分化ＨＳＣ表現型に対する我々の化合物の影響が、長期再増殖骨髄幹細胞／前駆細胞に対しても観察されることを確認することである。図６は、移植１３週間後に評価された、ヒト細胞によるマウス骨髄の再構成を示す。動員血に関し、５０，０００及び５００，０００細胞の成果を６Ａに示す。そこに示されているように、ＨＳＣアゴニストのＳＲ１は、ＮＳＧマウスモデルでの評価で、ヒト幹細胞の増殖においてＤＭＳＯ（対照）より一貫して良好であった。これらの実験でも化合物１はＳＲ１に優るようである。インビトロ培養物で見られたように、化
合物１及びＳＲ１はこれらの実験でも相乗効果を示した（図６）。
ＮＳＧマウスモデルを用いて評価された、化合物１及び４０の培養臍帯血（ＣＢ）ＨＳＣに及ぼす影響（図７）
[0128]図７に、ＮＳＧマウスモデルのインビボで評価された培養臍帯血ヒトＨＳＣに及ぼす化合物１及び化合物４０の影響を示す。図７Ａの結果は、化合物１は、対照培養物と比較した場合、ヒト細胞の再構成活性に対して明らかな効果を有していることを示している。これらの実験は短期培養すなわち７日間で実施された。最も重要なことは、図７Ｂから、化合物４０は、１５００個のＣＤ３４＋細胞を用いた場合、再構成の平均レベルがＤＭＳＯ対照の２％と比べて１０％という、極めて重要な効果を有していることがわかる。この実験での化合物４０の化合物１（図７Ａ）よりも大きい影響は、可能性として図７Ｂに記載の実験で使用された長い培養期間のためである。より決定的なインビボ実験はさらに長期の培養期間（１２〜１６日）を用いた次項に提供する。
ＮＳＧマウスモデルを用いて評価された、化合物１及び４０の培養臍帯血（ＣＢ）ＨＳＣに及ぼす影響（図８）
[0129]Ｚａｎｄｓｔｒａらは最近、流加培養(fed-batch)と呼ばれる新規方法がヒトＨＳＣ増殖をもたらすインビトロ条件を最適化することを文書にした（米国特許第７，７９５，０２４号）。我々は、本発明の化合物がこれらの事前最適化された流加培養条件で活性かどうかを確認したいと思った。これらの研究のために、我々は、流加培養＋化合物４０を用いた１２又は１６日間のインビトロ培養の後、臍帯血由来造血幹細胞（ＨＳＣ）の増殖を評価した。ＨＳＣ数は、ヒト細胞の免疫不全マウスへの生着に基づいて評価した。
[0130]図８に示されているように、化合物４０（Ｃｐｄ４０）の添加は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞を含む試験した全集団の増殖に少なくとも１６日間まで大きな効果を提供した。この効果は、１２〜１６日の時点で最も印象的で、流加培養（図８でＦＢ）と化合物４０間の相乗効果を明らかに示している。
[0131]さらに、富化させたばかりのＣＤ３４＋細胞及び１２又は１６日間増殖させた細胞を雌のＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ−２Ｒγｃ−ｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに移植した。マウスは移植２４時間前に亜致死（２５０ラド）照射を受けていた。細胞は尾静脈から静脈内注射された。規定の時点で（３週、９週、及び１６週）動物を屠殺し、骨髄を２本の脛骨及び２本の大腿骨から採取した。骨髄は赤血球が枯渇しており、ヒト細胞の生着を定量するためにフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、≧０．５％の細胞がヒトＣＤ４５及びヒトＨＬＡ−ＡＢＣについて陽性であれば、生着に関して陽性と採点された。評価の各時点で、一部の動物は独立した組織学的分析に回された。
[0132]以下の表２に示されているように、１６週時点後期において、各条件に関する生着の用量反応がある。限界希釈分析によれば、最も高いＨＳＣ増殖は、流加培養＋化合物４０の１２日間培養によって生じたことが明らかになった（１８．４倍）。これは、流加培養対照１２日間培養によって生じた増殖（８．１倍）よりも著しく高かった。より高い増殖は、１６日間培養と比べて１２日間培養を用いた二つの条件によって生じた。これらの結果は、化合物４０の存在下でのインビトロにおける正味ヒトＨＳＣ増殖及び流加培養条件でのその活性を明確に示している（図８＋表２）。
[0133]＊正味ＨＳＣ増殖＝（＃ＨＳＣ ０日）／（＃ＨＳＣ １２日又は１６日）；１６週にＮＳＧマウスで限界希釈分析（ＬＤＡ）を用いて測定
合成法
[0134]以下に概要を示す合成法は、置換基Ｚがピリミドインドール核の７位にある本発明の実施態様に関する。当業者には分かる通り、置換基Ｚが異なる位置、例えば５、８又は６位、特に６位にある本発明の実施態様の場合、当業者には明白な変更を用い、類似の合成法を実施することができる。
[0135]スキーム１に、本発明の化合物への一般的な前駆体（１−VI）の合成について記載する。第一段階で、アリールフルオリド１−Ｉを、水素化ナトリウム（これに限定されない）のような塩基の存在下で、アルキルシアノアセテート１−IIで処理する。次に、得られた生成物１−IIIを、酢酸中亜鉛末（これに限定されない）のような還元剤で処理してアミノインドール１−IVを得、これをホルムアミド及びギ酸アンモニウムで処理してピリミジン１−Ｖに変換する。化合物１−Ｖを塩化ホスホリル又は臭化ホスホリルのような試薬で処理して反応性中間体１−VIを得、これをアミン１−VIIで処理して本発明の化合物１−VIIIを得る。
[0136]スキーム２に化合物２−Ｖの製造を記載する。４，６−ジクロロ−５−ヨードピリミジン２−IIと対応するフェノール、アニリン又はチオフェノール２−Ｉと、塩基（Ｍｏｒｓｉｎ Ｍ．ら Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００９，ｖｏｌ．１５，＃６，ｐｐ．１４６８−１４７７）又はパラジウム触媒を用いて又は用いずに中間体２−IIIを得る。得られた中間体２−IIIを、Ｐｄ（ＯＡｃ）２を用いて三環系付加物２−IVに変換する（Ｚｈａｎｇ Ｍ．ら Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００２，ｖｏｌ．４３，ｐ．８２３５）。最後に、以下に概要を示す実施例１に従って、本発明の化合物２−Ｖを得る。
[0137]スキーム３：化合物４−IIをヒドロキシルアミン、次いでジメチルアセトアミドジメチルアセタールで処理する（Ｔｕｌｌｙ Ｗ．Ｒ．ら Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９１，ｖｏｌ．３４，ｐ．２０６０）。これにより化合物５−Ｉを得る。
[0138]スキーム４：中間体１Ｂ（以下の実施例１）をＨＣｌ／ジオキサン中プロピオニトリルで処理し、次いで塩基性処理をして、メチル２−エチル−４−ヒドロキシ−９Ｈピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（６−Ｉ）を提供する。次に、実施例１に記載の手順に従って、化合物６−IIを得る。
[0139]スキーム５：メチル３−フルオロ−４−ニトロベンゾエート７−Ｉから出発し、実施例１の手順に従って、化合物７−IIを得る。
一般
[0140]報告されているＨＰＬＣリテンションタイムは、下記条件を用いた逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ，１２００シリーズ）のものである。溶媒Ａ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＴＦＡ（５：９５：０．０５）；溶媒Ｂ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＴＦＡ（９５：５：０．０５）；流量：３．０ｍＬ／分；グラジエント２．０分で０〜１００％ Ｂ；カラム：ＺｏｒｂａｘＣ１８，３．５ミクロン，４．６×３０ｍｍ：波長２２０ｎｍ。
[0141]質量スペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製６２１０ Ｇ１９６９Ａ ＬＣ／ＭＳＤ ＴＯＦスペクトロメーター又はＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ ＬＣ／ＭＳ Ｍｏｄｅｌ Ｇ６１２０Ｂにて下記ＬＣ条件を用いて記録した。溶媒Ａ：ＡｃＣＮ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：９５：０．０５）；溶媒Ｂ：ＡｃＣＮ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（９５：５：０．０５）；グラジエント２．０分で０〜１００％ Ｂ；流量：０．３ ｍＬ／分；カラム：ＺｏｒｂａｘＣ１８，３．５ミクロン，２．１×３０ｍｍ；波長２２０ｎｍ。
[0142]実験手順
実施例１
中間体１Ａ
[0143]エチル２−シアノアセテート（１０．９ｍＬ、１０２ｍｍｏｌ）を、水素化ナトリウム（４．１０ｇ、１０２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２５ｍＬ）中６０％懸濁液（０℃）にゆっくり加え、灰色懸濁液を得た。混合物を０℃で１５分間撹拌し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２５ｍＬ）中メチル４−フルオロ−３−ニトロベンゾエート（１０．２ｇ、５１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた深紅色混合物を０℃で３０分間、室温で３時間撹拌した。反応混合物を１Ｎ ＨＣｌ（４０ｍＬ）及び酢酸エチル（４０ｍＬ）で希釈した。分離した水性層を酢酸エチルで抽出した（３×５０ｍＬ）。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過及び濃縮して残渣（２６ｇ）を得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（１００％ヘキサンで開始し、徐々に酢酸エチルの増分を加え、１００％酢酸エチルで完了）、１４．９ｇの標記化合物を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ２９１．０（Ｍ−Ｈ）−、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１．７６分。
中間体１Ｂ
[0144]５００ｍＬの丸底フラスコに、メチル４−（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチル）−３−ニトロベンゾエート（１４．９ｇ、５１．０ｍｍｏｌ）及び酢酸（２５５ｍＬ）中亜鉛末（１６．７ｇ、２５５ｍｍｏｌ）を加え、灰色懸濁液を得た。亜鉛の添加は、窒素雰囲気下、室温で３５分かけて実施し、かなり発熱した。混合物を１００℃で１５時間加熱した。混合物を冷却させ、セライト(Celite)を通してろ過し、酢酸エチルで濯いだ。蒸発により残渣を得、これをジクロロメタン−ヘキサン中で粉砕し、ろ過後、６．３ｇの標記化合物を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ２６３．２（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１．９０分。
中間体１Ｃ
[0145]１００ｍＬの丸底フラスコに、３−エチル６−メチル２−アミノ−１Ｈ−インドール−３，６−ジカルボキシレート（１．１ｇ、４．１９ｍｍｏｌ）、ギ酸アンモニウム（０．５３ｇ、８．３９ｍｍｏｌ）、及びホルムアミド（１６．７ｍＬ、４１９ｍｍｏｌ）を加え、褐色懸濁液を得た。これを１６５℃に１２時間加熱した。混合物を室温に冷却させ、水を加えた。得られた沈殿物をろ過し、空気乾燥（風乾）し、高真空下で一晩乾燥させて１．１ｇの標記化合物を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ２４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１．５１分。
中間体１Ｄ
[0146]１００ｍＬの丸底フラスコ中で、メチル４−ヒドロキシ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１．１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）とオキシ塩化リン（１５ｍＬ、１６１ｍｍｏｌ）との混合物を９０℃に１６時間加熱し、室温に冷却させ、減圧下で蒸発させた。残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）中に懸濁させ、セライトを通してろ過した。蒸発により標記化合物をオレンジ色固体として得た（３６０ｍｇ）。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ２６２．０（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝２．０２分。
実施例１
[0147]２−５ｍＬのマイクロ波用バイアルに、メタノール（２ｍＬ）中のメチル４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（８６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）及び３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−アミン（０．０７８ｍＬ、０．４９ｍｍｏｌ）を加え、混合物をマイクロ波反応器内で１４０℃に１５分間加熱した。混合物を室温に冷却させ、減圧下で蒸発させた。粗材料をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解し、逆相Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ−Ｃ１８カラム ２１．２×１００ｍｍ上で精製し、ＭｅＯＨ−水−０．１％ＴＦＡで溶出した。グラジエント：４分間２０％のアイソクラチック、次いで１５分かけて１００％ＭｅＯＨへのグラジエント。標記化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た（対応する遊離塩基及びＨＣｌ塩は当業者に公知の標準的手順に従って製造した）。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ３６８．２（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１
．３８分。
実施例１４
中間体１４Ａ
[0148]４−フルオロ−３−ニトロベンゾニトリルから出発して、中間体２Ａを実施例１に記載の手順に従って製造した。
中間体１４Ｂ
[0149]２−５ｍＬのマイクロ波用バイアルに、（トリフルオロメチル）ベンゼン（２ｍＬ）中の４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリル（４７．５ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）と
アジドトリブチルスズ（４０９μｌ、１．４９１ｍｍｏｌ）を加え、褐色懸濁液を得た。バイアルをマイクロ波に入れ、１８０℃に３０分間加熱した。混合物を濃縮乾固し、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）、次いでジオキサン（１．０７ｍＬ、４．２６ｍｍｏｌ）中４ＭのＨＣｌを加え、黄色溶液を得た。得られた溶液にジエチルエーテル（３ｍＬ）を加え、２０℃で１６時間撹拌した。得られた固体をブフナー上に回収した。ケーキをジエチルエーテル（３×１ｍＬ）及びヘキサン（３×１ｍＬ）で洗浄し、固体を高真空下３０℃で恒量になるまで乾燥させ、５６ｍｇの標記化合物をＨＣｌ塩として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ３７８．２（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１．３０分。
実施例１４
[0150]２５ｍＬの丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）及びメタノール（０．５ｍｌ中のＮ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−７−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−アミン塩酸塩（４３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３６μｌ、０．２１ｍｍｏｌ）を加え、褐色懸濁液を得た。ヘキサン（２６０μｌ、０．５２ｍｍｏｌ）中２Ｍのトリメチルシリルジアゾメタンを加えた。得られた薄い(thin)黄色懸濁液を２０℃で３時間撹拌し、酢酸（５９μｌ、１．０４ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌を３０分間続け、溶媒を真空下で除去して残渣を得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（１００％ジクロロメタンから始め、徐々にジクロロメタン：メタノール：２８％ｗｔ．水酸化アンモニウム水溶液（９０：１０：１）の混合物の増分を加え、１００％のジクロロメタン：メタノール：２８％ｗｔ．水酸化アンモニウム水溶液（９０：１０：１）で完了）。得られた最初の溶出生成物は、７−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−アミン（１９ｍｇ）のものであった。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ３９２．２（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１．４４分。二番目の溶出生成物は、７−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−アミン（５ｍｇ）のものであった。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ３９２．２（Ｍ＋Ｈ）＋、リテンションタイム（分析用ＨＰＬＣ上）＝１．２７分。
実施例１５
[0151]ＮａＨ（３．４１ｇ、８５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５３ｍＬ）中２−シアノアセトアミド（７．１８ｇ、８５ｍｍｏｌ）の冷溶液に少しずつ加えた。室温で３０分後、メチル４−フルオロ−３−ニトロベンゾエート（８．５ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）の１５ｍＬ
ＤＭＦ中溶液を滴加した。３時間後、氷と水と１２ｍＬ ＨＣｌ（１０％）の混合物を加えた。得られた固体をろ過し、水で濯ぎ、高真空下で一晩乾燥させて、９．１ｇのメチル４−（２−アミノ−１−シアノ−２−オキソエチル）−３−ニトロベンゾエートを得た：１H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 3.93 (s, 3 H) 5.78 (s, 1 H) 7.77 (s, 1 H) 7.91 (d, J=7.83 Hz, 1 H) 8.04 (s, 1 H) 8.39 (dd, J=8.02, 1.76 Hz, 1H) 8.56 (d, J=1.56 Hz, 1 H)。
[0152]塩化鉄（III）六水和物（１．５４０ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）及び亜鉛（１．２４２ｇ、１９．００ｍｍｏｌ）を上で製造した粗シアノ−アミド（０．５ｇ、１．９００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．７５ｍＬ）と水（４．７５ｍＬ）中溶液に加え、黄色懸濁液を得た。発熱後、混合物を１００℃に４５分間加熱し、その後２０℃に徐冷して２２時間撹拌した。固体をろ過し、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄し、ろ液を０℃で撹拌しながら水（４０ｍＬ）で希釈した。固体をろ過し、ケーキを水（２×５ｍＬ）で洗浄した。固体はほとんど不純物を含有している。水性層をＥｔＯＡｃで抽出し（３×５０ｍＬ）、合わせた有機層を水（５０ｍＬ）、次いでブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して２８７ｍｇを褐色個体として得た。これをアセトン（６ｍＬ）で処理して固体懸濁物を得た。これをヘキサン（５ｍＬ）で希釈した。次に、固体を回収し、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、中間体１５Ｂのメチル２−アミノ−３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボキシレート（１６２ｍｇ、収率３６．６％）をオフホワイト色固体として得た：１H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 3.80 (s, 3 H) 6.62 (br. s., 2 H) 7.04 - 7.18 (m, 2 H) 7.53 - 7.63 (m, 2 H) 7.72 (s, 1 H) 10.80 (s, 1 H); MS m/z 232.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ 約９６％、ＲＴ＝１．３７分。
[0153]中間体１５Ｂ（０．１００ｇ、０．４２９ｍｍｏｌ）と、メチル２−（ピリジン−３−イル）アセテート（０．１３０ｇ、０．８５８ｍｍｏｌ）と、ＭｅＯＨ（０．１９６ｍＬ）中２５％ｗｔのナトリウムメトキシドとのメタノール（０．９５４ｍＬ）中混合物をマイクロ波オーブン（電子レンジ）に入れ、１４０℃に４５分間加熱した。冷却後、ＡｃＯＨ（０．０５０ｍＬ、０．８７９ｍｍｏｌ）を加え、得られたスラリーを２０℃で１時間撹拌した。固体をろ過し、ＭｅＯＨ（３×０．５ｍＬ）で洗浄し、高真空下２０℃で恒量になるまで乾燥させ、中間体１５Ｃ：メチル４−ヒドロキシ−２−（ピリジン−３−イルメチル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（８２ｍｇ、収率５７．２％）を褐色個体として得た: １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm
3.87 (s, 3 H) 4.09 (s, 2 H) 7.34 - 7.40 (m, 1 H) 7.79 (dt, J=8.1, 1.8 Hz, 1 H)
7.83 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=0.8 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.48 (dd, J=4.9, 1.4 Hz, 1 H) 8.60 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 12.49 (br. s., 2 H): MS m/z
335.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９５．２％ ２５４ｎｍで９２．８％、ＲＴ＝１．４２分。
[0154]メチル４−ヒドロキシ−２−（ピリジン−３−イルメチル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０５０ｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（０．９４８ｍＬ、１０．１７ｍｍｏｌ）中混合物をバイアルに入れ、マイクロ波オーブンで１５分間１７５℃に加熱した。冷却後、反応混合物を氷水（１９ｍＬ）に注ぎ、次いで５０％ＮａＯＨ水溶液（２．７ｍＬ）を徐々に添加することによってｐＨ８に塩基性化し、最後にＥｔＯＡｃ（２０ ｍＬ）で希釈した。固体をろ過し（塩化物の第一収穫）、水性層をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮乾固して、所望の塩化物誘導体の追加の収穫３５ｍｇを得た。合わせた単離収穫物のメチル４−クロロ−２−（ピリジン−３−イルメチル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（５３ｍｇ、収率１００％）は、次の工程でそのまま使用した。
[0155]メチル４−クロロ−２−（ピリジン−３−イルメチル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０５３ｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）、３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−アミン（０．０７２ｍＬ、０．４５１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０６３ｍＬ、０．４５１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）中混合物をバイアルに入れ、マイクロ波オーブンで１５分間１４０℃に加熱した。冷却及び溶媒の蒸発後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、２３ｍｇの黄色油＋固体を得た。これをＣＨ３ＣＮ（３ｍＬ）で希釈し、３０分間撹拌した。固体をろ過し、ＣＨ３ＣＮ（２×０．５ｍＬ）で洗浄した後、高真空下３０℃で恒量になるまで乾燥させ、実施例１５の化合物：メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（ピリジン−３−イルメチル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１１ｍｇ、収率１６％）を褐色個体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.31 - 1.44 (m, 2 H) 1.44 - 1.56 (m, 4 H) 1.71 - 1.86 (m, 2 H) 2.17 - 2.47 (m, 6 H) 3.56 - 3.66 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.08 (s, 2 H) 7.28 - 7.34 (m, 1 H) 7.43 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.76 (dt, J=7.8, 2.0 Hz, 1 H) 7.81 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.41
(dd, J=4.7, 1.6 Hz, 1 H) 8.59 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 12.08 (s, 1 H); MS m/z 459.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ＞９９．５％、ＲＴ＝１．４３分。
実施例２２
[0156]メチル２−（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（実施例１５に記載のようにして製造、０．２２８ｇ、０．４９８ｍｍｏｌ）、３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−アミン（０．１５８ｍＬ、０．９９６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．１７３ｍＬ、１．２４５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３．８ｍＬ）中混合物をマイクロ波オーブンに入れ、３０分間１４０℃に加熱した。室温に冷却後、混合物を濃縮乾固し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、メチル２−（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミ
ド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１７２ｍｇ、収率６１．３％）を淡黄色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.29 - 1.42 (m, 2 H) 1.42 - 1.56 (m, 4 H) 1.72 - 1.91 (m, 2 H) 2.18 - 2.47 (m, 6 H) 3.66 (tt, J=13.2, 6.6 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.54 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 4.64 (d, J=12.1 Hz, 1 H) 5.50 (s, 1 H) 7.21 - 7.43 (m, 8 H) 7.51 (t, J=5.9 Hz, 1 H) 7.57 (d, J=7.0 Hz, 2 H) 7.82 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 8.00 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.38 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.22 (s, 1 H); HRMS m/z 564.2979 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ９９．６％、ＲＴ＝２．０２分。
[0157]誘導体メチル２−（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０４２ｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）に対してベンジル基の水素化分解を、Ｐｄ−Ｃ １０％ｗｔ．（湿分５０％）（０．１５９ｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）及びギ酸アンモニウム（０．２３５ｇ、３．７３ｍｍｏｌ）の存在下、メタノール中水素下で実施した。５５℃で２６時間の撹拌後、反応混合物をセライトを通してろ過し、ＭｅＯＨで濯ぎ、回転蒸発器(rotovap)上で濃縮乾固し、１３３ｍｇの残渣を得た。これをＲＰ ＨＰＬＣにより、Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ−Ｃ１８ カラム ２１．２×１５０ｍｍを用い、ＭｅＯＨ−水−０．１％ＴＦＡで溶出して精製し、２１．９ｍｇ（収率５０％）の実施例２２：メチル２−（ヒドロキシ（フェニル）メチル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレートＴＦＡ塩を白色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm
1.30 - 1.43 (m, 1 H) 1.52 - 1.73 (m, 3 H) 1.79 (br. d, J=14.5 Hz, 2 H) 1.96 - 2.09 (m, 2 H) 2.54 (s, 1 H) 2.74 - 2.89 (m, 2 H) 3.11 (dt, J=10.4, 5.4 Hz, 2 H) 3.38 (d, J=12.1 Hz, 2 H) 3.71 - 3.77 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 5.63 (s, 1 H) 7.19 - 7.26 (m, 1 H) 7.27 - 7.35 (m, 2 H) 7.48 - 7.56 (m, 2 H) 7.62 (t, J=5.9 Hz, 1 H) 7.85 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.38 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.92 (br. s., 1 H) 12.21 (s, 1 H); HRMS m/z 474.2511 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ＞９９％、ＲＴ＝１．６８分。
[0158]デス・マーチン・ペルヨージナン試薬（２２．６７ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）を、メチル２−（ヒドロキシ（フェニル）メチル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（実施例２２の化合物）及びＴＦＡ（１５．７ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０００μＬ、１５．５４ｍｍｏｌ）中混合物に加え、薄オレンジ色溶液を得た。１時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、実施例２３：メチル２−ベンゾイル−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１０ｍｇ、収率７９％）を鮮黄色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.27 - 1.36 (m,
2 H) 1.36 - 1.48 (m, 4 H) 1.74 - 1.88 (m, 2 H) 2.14 - 2.44 (m, 6 H) 3.52 - 3.68
(m, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 7.54 (t, J=7.8 Hz, 2 H) 7.69 (t, J=7.4 Hz, 1 H) 7.76 (t,
J=5.1 Hz, 1 H) 7.90 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 7.94 (d, J=7.0 Hz, 2 H) 8.10 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.52 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.43 (s, 1 H) ; HRMS m/z 472.2342 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９７．１％、２５４ｎｍで９８．９％、ＲＴ＝１．８６分。
実施例２５
[0159]ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．０８ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（４．００ｍＬ）及びピリジン（０．６６６ｍＬ）中のメチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（実施例３３の化合物）（０．２８５ｇ、０．５１５ｍｍｏｌ）に加え、黄色溶液を得た。６０℃で５日間加熱後、混合物を濃縮乾固し、残渣をＤＣＭ（７５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中に溶解し、この溶液を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄した。水性層を２回、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）とＭｅＯＨ（１０ｍＬ）の混合物で抽出し、合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮乾固して、メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（ヒドロキシイミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（２９３ｍｇ、収率１００％）をオフホワイト色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.32 - 1.43 (m, 2 H) 1.44 - 1.56 (m, 4 H) 1.76 - 1.87 (m, 2 H) 2.23 - 2.44 (m, 6 H) 3.57 - 3.67 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.04 - 4.12 (m, 2 H) 7.25 - 7.33 (m, 1 H) 7.34 - 7.46 (m, 2 H) 7.50 (m, J=7.6, 4.1 Hz, 1 H) 7.55 (d, J=7.4 Hz, 1 H) 7.81 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.07 (d, J=3.5 Hz, 1 H); MS m/z 569.2 (M+H)+; ＨＰＬＣ ＞９５％、ＲＴ＝１．８８分。
[0160]塩化トシル（０．０４８ｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）を、メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（ヒドロキシイミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．１３０ｇ、０．２２９ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．７９ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０３８ｍＬ、０．２７４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０．００ｍＬ）中の冷混合物に少しずつ加え、白色懸濁液を得た。室温で１時間後、琥珀色溶液をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、水洗した（３×１０ｍＬ）。有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固して、メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（（トシルオキシ）イミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１８８ｍｇ、収率９９％）を褐色泡沫として得た： MS m/z 723.2 (M+H)+; ＨＰＬＣ ＞８９％、ＲＴ＝２．０９分。
[0161]−７８℃に冷却されたメチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（（トシルオキシ）イミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．１８８ｇ、０．２６０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５．００ｍＬ）中溶液に、アンモニア（１．６８９ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）を加え、試験管を密封して２０℃に温めた。反応混合物は時間と共に青色に変色し、３．５時間後、再び−７８℃に冷却し、その後また、大部分のアンモニアを蒸発させるためにセプタム＋窒素出口を用いて、徐々に２０℃に温めた。３．５時間後、反応混合物をブフナー上でろ過して、大部分のアンモニウムｐ−トルエンスルホネートを除去し、固体をＤＣＭで洗浄し（３×１．５ｍＬ）、ろ液を濃縮乾固して黄色泡沫を得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）ジアジリジン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１１５ｍｇ、収率７８％）を白色泡沫として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.31 - 1.43 (m, 2 H) 1.50 (quin, J=5.3 Hz, 4 H) 1.80 (dt, J=14.1, 7.0 Hz, 2 H) 2.32 (m, J=6.7, 6.7 Hz, 6 H) 3.58 - 3.67 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 3.93 (br. d, J=7.4 Hz, 1 H) 4.05 (br. d, J=8.6 Hz, 1 H) 4.07 (s, 2 H) 7.32 - 7.43 (m, 3 H) 7.47 (m, J=6.3 Hz, 1 H) 7.59 (s, 1 H) 7.81 (dd, J=8.4, 1.2 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.35 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 12.07 (s, 1 H); MS m/z 568.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ＞９４％、ＲＴ＝１．７２分。
[0162]ヨウ素（０．０２８ｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）を、メチル４−（（３−（ピペリ
ジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）ジアジリジン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０６０ｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０４４ｍＬ、０．３１７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中混合物に加え、黄色溶液を得た。１５分後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して９５ｍｇを黄色泡沫として得た。泡沫をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固して実施例２５の化合物：メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（５０ｍｇ、収率８４％）を淡黄色固体として得た： 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.36 (m, J=5.1 Hz, 2 H) 1.48 (quin, J=5.5 Hz, 4 H) 1.76 (quin, J=7.0 Hz, 2 H) 2.30 (br.
t, J=6.5, 6.5 Hz, 6 H) 3.54 - 3.67 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.09 (s, 2 H) 7.14 (d, J=7.8 Hz, 1 H) 7.26 (s, 1 H) 7.38 - 7.47 (m, 2 H) 7.52 (d, J=7.4 Hz, 1 H) 7.81
(d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.99 (s, 1 H) 8.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.06 (s, 1 H); HRMS m/z 566.2497 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９４．５％、２５４ｎｍで９２．９％、ＲＴ＝２．０５分。
実施例３３及び３４
[0163]メチル２−（３−ブロモベンジル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（実施例１５のようにして製造、０．０９０ｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（０．０５４ｍＬ、０．３３６ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（６．１４ｍｇ、８．３９μｍｏｌ）の溶液にＣＯを通気し、混合物を９５℃で一晩加熱した。粗混合物を分取ＨＰＬＣによって精製し、４４ｍｇのカルボニル化生成物を固体として得た： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.28 - 1.40 (m, 1 H) 1.50 - 1.72 (m, 3 H) 1.73 - 1.84 (m, 2 H) 1.95 - 2.06 (m, 2 H) 2.74 - 2.87 (m, 2 H) 3.03 - 3.12 (m, 2 H) 3.33 -
3.41 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.20 (s, 2 H) 7.46 - 7.60 (m, 2 H) 7.73 (d, J=7.83 Hz, 1 H) 7.79 (d, J=7.43 Hz, 1 H) 7.84 (dd, J=8.22, 1.57 Hz, 1 H) 7.91 (s, 1 H) 8.01 (d, J=1.17 Hz, 1 H) 8.37 (d, J=8.61 Hz, 1 H) 8.92 (br. s., 1 H) 10.00 (s, 1
H) 12.16 (s, 1 H)。
[0164]トリメチル（トリフルオロメチル）シラン（０．７ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を、０℃に冷却されたメチル２−（３−ホルミルベンジル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．２６０ｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）とフッ化セシウム（５．６９ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。室温で２日間撹拌後、２ｍＬの水中濃ＨＣｌ（０．５ｍＬ）を加え、１５分間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、固体Ｎａ２ＣＯ３で中和し、相分離させ、水性層をＥＡで２回抽出した。合わせた有機層を水洗し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、溶媒を除去して残渣を得た。これを分取ＨＰＬＣにより精製し、１２６ｍｇの対応するＴＦＡ塩を得た： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.24
- 1.43 (m, 1 H) 1.49 - 1.73 (m, 4 H) 1.73 - 1.82 (m, 2 H) 1.97 - 2.07 (m, 2 H) 2.80 (q, J=11.70 Hz, 2 H) 3.02 - 3.12 (m, 2 H) 3.36 - 3.42 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.10 (s, 2 H) 5.12 (q, J=7.17 Hz, 1 H) 6.81 (br. s., 1 H) 7.30 - 7.35 (m, 2 H)
7.36 - 7.42 (m, 1 H) 7.48 - 7.58 (m, 2 H) 7.84 (dd, J=8.41, 1.37 Hz, 1 H) 8.01
(s, 1 H) 8.37 (d, J=8.61 Hz, 1 H) 8.95 (br. s., 1 H) 12.17 (s, 1 H); MS m/z 554.2 (M+H)+; HPLC RT 2.142分。
[0165]デス・マーチン・ペルヨージナン（５６．５ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７５３μＬ）中メチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシエチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（２０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）に加え、白色懸濁液を得た。２０℃で１時間撹拌後、混合物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、実施例３３としてメチル４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１８．４ｍｇ、収率９２％）を黄色固体として得た：ＤＭＳＯ−ｄ６中の１Ｈ ＮＭＲは所望生成物と一致していたが、水和物形の存在のために複雑化していた； HRMS m/z 554.2384 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ＞９５％、ＲＴ＝１．７６及び１．８７分（ケトン＋水和物）。
実施例３５
[0166]４−フルオロベンゾニトリル（５ｇ、４１．３ｍｍｏｌ）、ジブチルスズオキシド（２．０５５ｇ、８．２６ｍｍｏｌ）、及びトリメチルシリルアジド（８．２２ｍＬ、６１．９ｍｍｏｌ）のトルエン（１６５ｍＬ）中混合物を１００℃に加熱し、１６．５時間撹拌した。室温に冷却後、有機層をＮａＯＨ １Ｍ（８３ｍＬ）で抽出し、水性層をＥｔＯＡｃ（２×８５ｍＬ）で洗浄した。水性層をＨＣｌ ２Ｍ（４１．３ｍＬ）でｐＨ ２に酸性化した。水性混合物をＥｔＯＡｃで２回抽出し（２００ｍＬ、次に１００ｍＬ）、合わせた有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固して、中間体３５Ａ（５−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール、６．６１ｇ、収率９８％）を白色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 7.42 - 7.53 (m, 2 H) 8.04 - 8.14 (m, 2 H); MS m/z 165.2 (M+H)＋;ＨＰＬＣ ＞９９．５％、ＲＴ＝１．９６分。
[0167]５−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール（６．６１ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（６．６８ｇ、４８．３ｍｍｏｌ）、及びヨードメタン（３．０２ｍＬ、４８．３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１１５ｍＬ）中混合物を１時間加熱還流した（約８２℃）。冷却後、混合物を濃縮乾固し、残渣を水（７５ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）の間で分配させた。層を分離し、水性層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で逆抽出し、合わせた有機層を水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水
ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮して、９．５ｇを無色油として得た。これは放置すると固化した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、二つの主生成物を得た：Ｎ２異性体としての中間体３５Ｂ：５−（４−フルオロフェニル）−２−メチル−２Ｈ−テトラゾール（５．０９ｇ、収率７０．９％）を白色固体として：４．４２ｐｐｍのメチル基と芳香族プロトンとの間にＮＯＥは観察されなかった； １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.42 (s, 3 H) 7.33 - 7.45 (m, 2 H) 8.03 - 8.14 (m, 2 H); MS m/z
179.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ＞９９．５％、ＲＴ＝１．７５分。
[0168] Ｎ１異性体：５−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾール（１．８７ｇ、収率２６．１％）を白色固体として：４．１６ｐｐｍのメチル基と７．８９−７．９７ｐｐｍにおける２個の芳香族プロトンとの間に観察されたＮＯＥが構造を裏付けている; １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.16 (s, 3 H) 7.43 - 7.53 (m, 2
H) 7.89 - 7.97 (m, 2 H); MS m/z 179.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ＞９９．５％、ＲＴ＝１．２９分。
中間体３５Ｃ及びＤ
[0169]中間体３５Ｂ（５−（４−フルオロフェニル）−２−メチル−２Ｈ−テトラゾール、１ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）の硫酸（１６．４５ｍＬ、３０９ｍｍｏｌ）中溶液を０℃に冷却した後、発煙硝酸（０．２８８ｍＬ、６．１７ｍｍｏｌ）を滴加した。２．５時間後、さらに発煙硝酸（０．０６５ｍＬ、１．４０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０℃に温まらせた。５時間後、混合物を２：１の氷−水混合物（１５０ｍＬ）中に注入したところ、白色懸濁液の形成がもたらされた。３０分後、固体をろ過し、水洗し（４×１０ｍＬ、洗液のｐＨが中性になるまで）、高真空下２５℃で恒量になるまで乾燥させた：５−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−メチル−２Ｈ−テトラゾール（１．１６ｇ、収率９３％）オフホワイト色固体として： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.47 (s, 3 H) 7.81 (dd, J=11.2, 8.8 Hz, 1 H) 8.44 (ddd, J=8.7, 4.2, 2.3 Hz, 1 H) 8.68 (dd, J=7.2, 2.2 Hz, 1 H); MS m/z 224.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ９８．３％、ＲＴ＝１．７２分。
[0170]２−シアノアセトアミド（０．８８８ｇ、１０．５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．２６８ｍＬ）中溶液を、ＤＭＦ（５．６７ｍＬ）中の鉱油中６０％ｗｔ．水素化ナトリウム懸濁液（０．４４３ｇ、１１．０８ｍｍｏｌ）に加え、灰色懸濁液を得た。０℃に冷却後（注：水素ガス発生）、得られた混合物を０℃で３０分間撹拌した。次に、５−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−メチル−２Ｈ−テトラゾール（１．１５ｇ、５．１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．３ｍＬ）中溶液を加え、深紫色溶液を得た。３時間後、反応混合物を氷−水混合物（３３．０ｍＬ）及び濃ＨＣｌ（０．９５２ｍＬ）中にゆっくり注ぎ入れた。得られた黄色スラリーを３０分間撹拌し、固体をろ過し、水（３×５ｍＬ）、次いでヘキサン（２×５ｍＬ）で洗浄し、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、２−シアノ−２−（４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２−ニトロフェニル）アセトアミド（１．４１ｇ、収率９５％）を黄色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.49 (s, 3 H) 5.77 (s, 1 H) 7.77 (s, 1 H) 7.95 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.03 (s, 1 H) 8.51 (dd, J=8.2, 1.8 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=1.8 Hz, 1 H); MS m/z 288.1 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９６．４％、ＲＴ＝１．３１分。
[0171]塩化鉄（III）六水和物（２．８２ｇ、１０．４４ｍｍｏｌ）及び亜鉛（２．２７６ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）を、２−シアノ−２−（４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２−ニトロフェニル）アセトアミド（１ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）のＤ
ＭＦ（８．７１ｍＬ）及び水（８．７１ｍＬ）中混合物に少しずつ加え、黄色懸濁液を得た。これを１００℃に１．２５時間加熱した。次に、混合物を２０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過し、減圧下で濃縮して、約２０ｍＬとした（大部分のＭｅＯＨを除去するため）。次に、混合物を水（５０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、激しく撹拌してろ過した。水性層をＥｔＯＡｃで抽出し（２×５０ｍＬ）、合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮して、４８９ｍｇを紫色固体として得、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２−アミノ−６−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド（３５６ｍｇ、収率３９．７％）を紫色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.38 (s, 3 H) 6.57 (s, 2 H) 7.01 (s, 2 H) 7.61 - 7.69 (m, 2 H) 7.81 (s, 1 H) 10.77 (s, 1 H); MS m/z 258.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ 約７８％、ＲＴ＝１．３４分。
[0172]マイクロ波管内の中間体３５Ｄ（２−アミノ−６−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド、０．３５ｇ、１．３６１ｍｍｏｌ）、メチル２−フェニルアセテート（０．２８８ｍＬ、２．０４１ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（０．４６７ｍＬ）中２５％ｗｔ．ナトリウムメトキシド及びメタノール（３．０３ｍＬ）の混合物をマイクロ波オーブンに入れ、１４０℃に１時間加熱した。室温に冷却し、水（１ｍＬ）及びＡｃＯＨ（４ｍＬ）で希釈後、混合物を３０分間撹拌して結晶化させた。固体をろ過し、ＭｅＯＨ（５×１ｍＬ）で洗浄し、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、２−ベンジル−７−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−オール（２２０ｍｇ、収率４５．２％）を褐色固体として得た。１H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.03 (s, 2 H) 4.43 (s, 3 H) 7.24 - 7.29 (m, 1 H) 7.34 (t, J=7.8 Hz, 2 H) 7.37 - 7.43 (m, 2 H) 7.92 (dd,
J=8.0, 1.4 Hz, 1 H) 8.04 - 8.10 (m, 2 H) 12.38 (s, 1 H) 12.47 (s, 1 H); MS m/z 358.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ８２．９％、ＲＴ＝１．８９分。
[0173]２−５ｍＬのマイクロ波用バイアルに、粗生成物２−ベンジル−７−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−オール（０．２２０ｇ、０．６１６ｍｍｏｌ）及びＰＯＣｌ３（３．９０ｍＬ、４１．９ｍｍｏｌ）を加え、褐色懸濁液を得た。バイアルをマイクロ波オーブンに入れ、１７５℃に１５分間加熱し、その後冷却させた。次に、反応混合物を水と氷の混合物（８０ｍｌ）に注ぎ入れ、５０％ｗｔのＮａＯＨ（１１ｍＬ）、次いでＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）を徐々に添加することによってｐＨ８に塩基性化した。多少の固体をろ過し、層を分離させた。水性層をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で抽出し、有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮乾固して、対応するクロロ誘導体：２−ベンジル−４−クロロ−７−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール（１８９ｍｇ、収率８２％）を褐色固体として得た。１H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.31 (s, 2 H) 4.46 (s, 3 H) 7.20 - 7.26 (m, 1 H) 7.28 - 7.39 (m, 4 H) 8.09 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 8.21 - 8.25 (m, 1 H) 8.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.93 (s, 1 H); MS
m/z 376.2 (M+H)＋; HPLC 95.6%, RT = 2.30分。
[0174]上記のようにして製造された２−ベンジル−４−クロロ−７−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール（０．０５０ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．０３７ｍＬ、０．２６６ｍｍｏｌ）及び３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−アミン（０．０３３ｍＬ、０．２００ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（０．６ｍＬ）中混合物をマイクロ波オーブンにて１４０℃で２５分間加熱した。冷却及び溶媒の蒸発後、残渣をＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し（ＭｅＯＨ−水（０．５％ ＴＦＡ）２０％〜１００％ ＭｅＯＨ）、５５ｍｇの実施例３５：２−ベンジル−７−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−アミン ２，２，２−トリフルオロアセテートを得た； １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.27 - 1.41 (m, 1 H) 1.53 - 1.72 (m, 3 H) 1.79 (d, J=13.69 Hz, 2 H) 1.98 - 2.09 (m, 2 H)
2.75 - 2.87 (m, 2 H) 3.09 (dt, J=10.27, 5.23 Hz, 2 H) 3.39 (d, J=11.35 Hz, 2 H)
3.69 (q, J=5.87 Hz, 2 H) 4.09 (s, 2 H) 4.44 (s, 3 H) 7.18 - 7.24 (m, 1 H) 7.31 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.35 - 7.42 (m, 2 H) 7.51 (br. s., 1 H) 7.93 (dd, J=8.22, 1.17 Hz, 1 H) 8.11 (d, J=1.17 Hz, 1 H) 8.43 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 9.04 (br. s., 1 H)
12.15 (s, 1 H); HPLC 254 nmで99%, Rt 2.063分; HRMS m/z 482.2817 (M+H)＋。
実施例３６（シアニドからメチルオキサジアゾール）
[0175]ヒドロキシルアミン塩酸塩（３２．７ｍｇ、０．４７１ｍｍｏｌ）を実施例３７（２−ベンジル−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリル、５０ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．５ｍＬ）中溶液に加え、次いでＤＩＰＥＡ （８４μＬ、０．４８３ｍｍｏｌ）を加えて、淡黄色懸濁液を得た。室温で２．５日間及び７５℃で６時間撹拌後、溶媒を蒸発させ、水（３ｍＬ）を加えた。そして３０分間撹拌後、固体を回収して水で洗浄し（３×１ｍＬ）、固体材料を高真空下３５℃で恒量になるまで乾燥させ、（Ｚ）−２−ベンジル−Ｎ’−ヒドロキシ−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシイミドアミド−ＨＣｌ（５３ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ、収率９１％）を褐色固体として得た； １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.58 - 1.85 (m, 6 H) 1.98 - 2.10 (m, 2 H) 2.69 - 2.90 (m, 2 H) 2.94 - 3.15 (m, 2 H) 3.34 - 3.46 (m, 2 H) 3.59 - 3.74 (m,2 H) 4.05 (s, 2 H) 5.84 (br. s., 2 H) 7.15 - 7.24 (m, 1 H) 7.29 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 7.37 (d, J=7.4 Hz, 2 H) 7.55 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.72 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.25 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 9.47 (d, J=7.4 Hz, 1 H) 9.56 (s, 1 H) 11.88 (s, 1 H); HRMS m/z 458.2662
(M+H)＋。ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９５．４％ ２５４ｎｍで９７．４％、ＲＴ＝１．４０分。
[0176]無水酢酸（０．９１７ｍＬ、９．７２ｍｍｏｌ）を（Ｚ）−２−ベンジル−Ｎ’−ヒドロキシ−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシイミドアミド，ＨＣｌ（０．０４０ｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）に加え、褐色懸濁液を得た。この混合物をマイクロ波により１４０℃に３０分間加熱した。次に、溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３６ｍｇ（収率８５％）の１−（２−ベンジル−７−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピ
ル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−９−イル）エタノンを褐色固体として得，これを直ちにメタノール（２．３ｍＬ）中に溶解し、ＤＢＵ（０．０２１ｍＬ、０．１３８ｍｍｏｌ）で処理した。得られた黄色溶液を３０分間加熱還流した後、１時間撹拌しながら０℃に冷却した。固体をろ過し、冷ＭｅＯＨで洗浄し（２×０．５ｍＬ）、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ，実施例３６：２−ベンジル−７−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−４−アミン（２０ｍｇ、収率５１．３％）を褐色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.38 (m, J=4.7 Hz, 2 H) 1.50 (quin, J=5.5 Hz, 4 H) 1.80 (quin, J=6.9 Hz, 2 H) 2.18 - 2.45 (m, 6 H) 2.67 (s, 3 H) 3.57 - 3.70 (m, 2 H) 4.04 (s, 2 H) 7.15 - 7.22 (m, 1 H) 7.27 (m, J=7.6, 7.6 Hz, 2 H) 7.34 (t, J=5.9 Hz, 1 H) 7.36 - 7.40 (m, 2 H) 7.83
(dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.02 (br. s., 1 H); HRMS m/z 482.2663 (M+H)＋。 HPLC 99.3%, RT = 1.79分。
実施例３７
[0177]２−アミノ−６−シアノ−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド（０．１７２ｇ、０．８５９ｍｍｏｌ）、メチル２−フェニルアセテート（０．３０３ｍＬ、２．１４８ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ中３０％ｗｔナトリウムメトキシド（０．４０３ｍＬ、２．１４８ｍｍｏｌ）のメタノール（２．８２ｍＬ）中オレンジ色混合物を，マイクロ波管に入れ、１４０℃で４５分間加熱した。次に、新たにメチル２−フェニルアセテート（０．１５１ｍＬ、１．０７４ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ中３０％ｗｔナトリウムメトキシド（０．２０１ｍＬ、１．０７４ｍｍｏｌ）を加え、バイアルをマイクロ波の中に入れて再度１４０℃で４５分間加熱した。次に、室温に冷却後、ＡｃＯＨ（０．１９７ｍＬ、３．４４ｍｍｏｌ）を加え、得られたスラリーを２０℃で１時間撹拌した。固体をろ過し、ＭｅＯＨで洗浄し（３×１ｍＬ）、高真空下２０℃で恒量になるまで乾燥させ、中間体３７Ｂ：２−ベンジル−４−ヒドロキシ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリル（１８２ｍｇ、収率７０．５％）を褐色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 4.03 (s, 2 H) 7.22 - 7.29 (m, 1 H) 7.30 - 7.36 (m, 2 H) 7.36 - 7.43 (m, 2 H) 7.58 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 7.82 - 7.87 (m, 1 H) 8.05 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.59 (br. s., 2 H); MS m/z 301.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９４．２％ ２５４ｎｍで９１．３％；ＲＴ＝１．９０分。
[0178]２−ベンジル−４−ヒドロキシ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリル（中間体３７Ｂ、０．１８０ｇ、０．５９９ｍｍｏｌ）及びオキシ塩化リン（３．６３ｍＬ、３９．０ｍｍｏｌ）の赤色混合物を９５℃に加熱し、１６時間撹拌した。回転蒸発器上で濃縮乾固した後、得られた暗赤色泡沫を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）中に懸濁させ、３０分間撹拌した。固体を回収し、水で洗浄し（３×１ｍＬ）、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、中間体３７Ｃ：２−ベンジル−４−クロロ−９Ｈ
−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリル（１９０ｍｇ、収率９９％）を褐色固体として得た。これをそのまま次の工程で使用した： MS m/z 319.2 (M+H)＋；
ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９５．０％、２５４ｎｍで９２．３％、ＲＴ＝２．２８分。
[0179]２−ベンジル−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリル（中間体３７Ｃ、０．１９０ｇ、０．５９６ｍｍｏｌ）、３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−アミン（０．１４２ｍＬ、０．８９４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．２０８ｍＬ、１．４９０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４．５０ｍＬ）中混合物をマイクロ波により１４０℃に３０分間加熱した。次に、これを濃縮乾固して３４６ｍｇのオレンジ色固体を得、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して１７６ｍｇの黄色固体を得た。これをエーテル（７ｍＬ）中に懸濁させて、２０℃で１時間撹拌した。固体をろ過し、エーテルで洗浄し（３×１ｍＬ）、高真空下３０℃で恒量になるまで乾燥させ、２−ベンジル−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボニトリルを実施例３７として（１７２ｍｇ、収率６８．０％）、淡黄色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.30 - 1.43 (m, 2 H) 1.43 - 1.57 (m, 4 H) 1.80 (m, J=5.5 Hz, 2 H) 2.18 - 2.47 (m, 6 H) 3.62 (q, J=6.4 Hz, 2 H) 4.04 (s, 2 H) 7.15 - 7.22 (m, 1 H) 7.27 (m, J=7.4, 7.4 Hz, 2 H) 7.33 - 7.39 (m, 2 H) 7.47 (t, J=5.7 Hz, 1 H) 7.62 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.79 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.43 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.19 (s, 1 H);
HRMS m/z 425.2448 (M+H)＋; HPLC >99%, RT = 1.68分。
実施例４３
[0180]２−５ｍＬのマイクロ波用バイアルに、メチル２−ベンジル−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．１００ｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）、（Ｅ）−１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ブタ−３−エン−１−イル）ピペリジン（０．１１３ｇ、０．４２６ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．１０６ｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）及びＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（０．０５ｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルをＮ２でパージした（３回の真空＋再充填サイクル）。ＤＭＥ（２．８４ｍＬ）及び水（０．３９８ｍＬ）を加え、バイアルをＮ２でフラッシュ洗浄（１回の真空＋再充填）した後、２４時間撹拌しながら１１０℃に加熱した。冷却後、混合物を減圧下で濃縮乾固し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（Ｅ）−メチル２−ベンジル−４−（４−（ピペリジン−１−イル）ブタ−１−エン−１−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（５５ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ、収率４２．６％）を淡黄色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.41 (s, 2 H) 1.50 - 1.61 (m, 4 H) 2.30 - 2.47 (m, 4 H) 2.53 - 2.59 (m, 2 H) 2.59 - 2.70 (m, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 4.27 (s, 2 H) 7.16 - 7.24 (m, 1 H) 7.29 (t, J=7.6 Hz, 2 H) 7.34 - 7.43 (m, 4 H) 7.88 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 8.07 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.41 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.48 (s, 1 H); HRMS m/z 455.2442 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで１００％ ２５４ｎｍで９９．４％、ＲＴ＝１．８４分。
[0181]（Ｅ）−メチル２−ベンジル−４−（４−（ピペリジン−１−イル）ブタ−１−エン−１−イル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（２０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）及びＰｄ−Ｃ １０％ｗｔ．（湿分５０％）（２３．４１ｍｇ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）中混合物を水素で１７時間処理した。反応混合物をＤＣＭ（３ｍＬ）で希釈し、ろ過し、ＭｅＯＨ（２×２ｍＬ）、次いでＤＣＭ（２×２ｍＬ）で濯ぎ、濃縮乾固して１９ｍｇを淡黄色固体として得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して白色固体（１４ｍｇ）を得、これをＣＨ３ＣＮ（２ｍＬ）で処理した。白色懸濁液を２０℃で１時間撹拌後、固体をろ過し、ＣＨ３ＣＮ（１×１ｍＬ）で洗浄し、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、実施例４３の化合物メチル２−ベンジル−４−（４−（ピペリジン−１−イル）ブチル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１４．４ｍｇ、収率７１．７％）を白色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.36 (m, J=5.5 Hz, 2 H)
1.45 (quin, J=5.5 Hz, 4 H) 1.57 (quin, J=7.3 Hz, 2 H) 1.83 (dt, J=14.9, 7.4 Hz,
2 H) 2.18 - 2.31 (m, 6 H) 3.20 - 3.28 (m, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 4.26 (s, 2 H) 7.16
- 7.22 (m, 1 H) 7.28 (t, J=7.4 Hz, 2 H) 7.32 - 7.38 (m, 2 H) 7.90 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 8.09 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.25 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.48 (br. s., 1 H);
HRMS m/z 457.2598 (M+H)＋; HPLC >99.5%, RT = 1.75分。
実施例４４
[0182]メチル２−ベンジル−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．１００ｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．０７９ｍＬ、０．５６９ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル（３−アミノプロピル）（メチル）カルバメート（０．０８０ｇ、０．４２６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）中混合物を、マイクロ波オーブン中１４０℃で４０分間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、０．０９２ｍｇの粗Ｂｏｃ誘導体を得た。これをそのまま次の工程で使用した。ＴＦＡ（１．０ｍｌ、１２．９８ｍｍｏｌ）をメチル２−ベンジル−４−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０９２ｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）の冷懸濁液に滴加し、混合物を３０分かけて室温に温まらせた。トルエンで希釈後、溶媒を減圧下で除去し、次いで残渣をＥｔＯＡｃで希釈して８５ｍｇの固体を得、これをそのまま次の工程で使用した： HRMS m/z 404.2091 (M+H)＋。
[0183]メチル２−ベンジル−４−（（３−（メチルアミノ）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート ２，２，２−トリフルオロアセテート（０．０２０ｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（８．８１ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１．４４８ｍｇ、９．６６μｍｏｌ）及び２−（２−（２−クロロエトキシ）エトキシ）エタノール（６．４６μｌ、０．０４４ｍｍｏｌ）の混合物をアセトン（０．２ｍＬ）中７０℃で加熱した。１５時間後、第二分量の２−（２−（２−クロロエトキシ）エトキシ）エタノール試薬（６．４６μｌ、０．０４４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を再度７０℃で１５時間加熱した。室温に冷却後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水洗し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して９ｍｇの実施例４４を得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.74 - 1.85 (m, 2 H) 2.25 (br. s., 3 H) 2.55 (br. s., 2 H) 3.32 - 3.36 (m, 4 H) 3.39 - 3.46 (m, 6 H) 3.51 (t, J=5.87 Hz,
2 H) 3.64 (q, J=6.52 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.04 (s, 2 H) 4.53 (br. s., 1 H) 7.18 (t, J=7.40 Hz, 1 H) 7.28 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.37 (d, J=7.04 Hz, 2 H) 7.55 (t, J=5.28 Hz, 1 H) 7.82 (dd, J=8.22, 1.17 Hz, 1 H) 7.99 (s, 1 H) 8.27 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 12.05 (s, 1 H); HRMS m/z 536.2855 (M+H)＋; HPLC RT 2.035 分。
実施例４５及び５１
[0184]２−５ｍＬのマイクロ波用バイアルに、ＭｅＯＨ（２．０００ｍＬ、４９．４ｍｍｏｌ）中のメチル２−ベンジル−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０５０ｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）及びＮ１−（３−アミノプロピル）−Ｎ１−メチルプロパン−１，３−ジアミン（０．１１５ｍＬ、０．７１１ｍｍｏｌ）を加え、褐色懸濁液を得た。バイアルをマイクロ波の中に入れ、１４０℃に３０分間加熱した。３０分後、混合物を回転蒸発器上で濃縮乾固し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ＣＨ３ＣＮから凍結乾燥させて、二つの別個の生成物を得た：実施例４５としてモノ−Ｎ−アルキル化生成物：メチル４−（（３−（（３−アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−ベンジル−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（４４ｍｇ、収率６７．２％）を白色固体として； １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.44 (dt, J=13.8, 6.6 Hz, 2 H) 1.72 (dt, J=13.7, 6.8 Hz, 2 H) 2.11 (s, 3 H) 2.24 - 2.30 (m, 2 H) 2.33 (t, J=6.7 Hz, 2 H) 2.47 (br. s., 2 H) 3.51 - 3.61 (m, 2 H) 3.76 - 3.85 (m, 3 H) 3.97 (s, 2 H) 7.08 - 7.15 (m, 1 H) 7.17 - 7.24 (m, 2 H) 7.27 - 7.34 (m, 2 H) 7.50 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 7.76 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.92 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.20 (d, J=8.2 Hz, 1 H); MS m/z 461.2 (M+H)＋; HPLC >99%, RT = 1.63分。
[0185]実施例５１としてビス−アルキル化生成物：ジメチル４，４’−（（（メチルアザネジイル）ビス（プロパン−３，１−ジイル））ビス（アザネジイル））ビス（２−ベンジル−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（３．７ｍｇ、収率６．７１％）を淡黄色固体として： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.18 -
1.29 (m, 4 H) 1.79 - 1.91 (m, 4 H) 2.25 (s, 3 H) 3.58 - 3.71 (m, 4 H) 3.84 (s, 6 H) 3.97 (s, 4 H) 7.07 - 7.16 (m, 2H) 7.22 (t, J=7.4 Hz, 4 H) 7.29 - 7.34 (m, 4
H) 7.53 (t, J=5.3 Hz, 2 H) 7.77 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 2 H) 7.96 (d, J=1.4 Hz, 2 H) 8.22 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 12.01 (s, 2H); MS m/z 776.3 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９４．６％ ２５４ｎｍで９３．８％、ＲＴ＝２．０１分。
実施例５２
[0186]２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタノエート（１２．０１ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を、メチル４−（（３−（（３−アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−ベンジル−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（実施例４５、１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６．８１μＬ、０．０４９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７５０μＬ、９．６９ｍｍｏｌ）中溶液に加え、淡黄色溶液を得た。２０℃で１時間撹拌後、混合物を濃縮乾固し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して淡黄色泡沫を得た。泡沫をＥｔ２Ｏ（１ｍＬ）中に懸濁させ、３０分間撹拌して固体を回収し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し（２×０．５ｍＬ）、高真空下２０℃で恒量になるまで乾燥させ、実施例５２の化合物：メチル２−ベンジル−４−（（３−（メチル（３−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）プロピル）アミノ）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１７ｍｇ、収率７６％）を淡黄色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.17 - 1.34 (m, 3 H) 1.36 - 1.51 (m, 2 H) 1.51 - 1.64 (m, 3 H) 1.78 (dt, J=13.5, 6.6 Hz, 2 H) 2.02 (t, J=7.4 Hz, 2 H) 2.17
(s, 3 H) 2.32 (t, J=7.0 Hz, 2 H) 2.40 (t, J=6.7 Hz, 2 H) 2.55 (d, J=12.3 Hz, 1 H) 2.77 (dd, J=12.3, 5.1 Hz, 1 H) 2.99 - 3.11 (m, 3 H) 3.58 - 3.68 (m, 2 H) 3.88
(s, 3 H) 4.04 (s, 2 H) 4.08 (m, J=4.9, 4.9, 2.3 Hz, 1 H) 4.26 (dd, J=7.6, 5.3 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.40 (s, 1 H) 7.14 - 7.22 (m, 1 H) 7.27 (t, J=7.4 Hz, 2H) 7.37 (d, J=7.0 Hz, 2 H) 7.54 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.74 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.82 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.05 (s, 1 H); MS m/z 687.3 (M+H)＋; HPLC >99.5%, RT = 1.70分。
実施例５３
[0187]中間体５３Ａを市販のエチル２（３−トリル）アセテートから製造した。次にそれを実施例１５、４５及び４７に記載のようにして中間体５３Ｂに変換した。次に、アジリン部分を実施例２５に提供された記載に従って開発した。最終工程は実施例５２に基づく。
[0188]エチル２（ｍ−トリル）アセテート（４．８ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（
５．２７ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）及び過酸化ベンゾイル（０．１１０ｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）の混合物をＣＣｌ４（２８ｍＬ）中で還流した。５時間後、反応を５℃に冷却し、ろ過し、溶媒を除去した。エチルアセテート−ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーによる精製で、３．８ｇの対応するブロモベンジル誘導体を得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.19 (t, J=6.70 Hz, 3 H) 3.67 (s, 2 H) 4.09 (q, J=6.70 Hz, 2 H) 4.69 (s, 2 H) 7.15 - 7.25 (m, 1 H) 7.27 - 7.42 (m, 3 H);この材料をそのまま次の工程で使用した。
[0189]エチル２−（３−（ブロモメチル）フェニル）アセテート（８．１１ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）及び４−メチルモルホリン４−オキシド水和物（５．５４ｇ、４７．３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１１０ｍＬ）中混合物を１００℃に１．５時間加熱した。室温に冷却後、溶媒の容積を半減させ、次いでＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１、１２０ｍＬ）で希釈し、水洗して（５０ｍＬ）、水性層をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（２×５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮して４．７２ｇの淡黄色油を得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２−（３−ホルミルフェニル）アセテート（２．９１ｇ、収率４８％）を淡黄色油として得た： １H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm
1.19 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 3.81 (s, 2 H) 4.09 (q, J=7.0 Hz, 2 H) 7.52 - 7.65 (m, 2
H) 7.79 - 7.85 (m, 2 H) 10.00 (s, 1 H); MS m/z 207.2 (M+H)＋; HPLC 99%, RT = 1.67分。
[0190]トリメチル（トリフルオロメチル）シラン（３．１３ｍＬ、２１．２０ｍｍｏｌ）を、０〜５℃に冷却されたエチル２−（３−ホルミルフェニル）アセテート（２．９１ｇ、１５．１４ｍｍｏｌ）及びフッ化セシウム（０．１６１ｇ、１．０６０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０．１９ｍＬ）中混合物に加えた。１．５時間撹拌後、ＴＨＦ（１５．１４ｍＬ）中１ＭのＴＢＡＦ溶液を加えた。得られた黄色溶液を０〜５℃で撹拌し、３０分後、混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、ＭＴＢＥ（１×１５０ｍＬ、次いで２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（１×１５０ｍＬ、次いで１×１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した後、有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮して３．８４ｇを淡オレンジ色油として得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、エチル２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシエチル）フェニル）アセテート（６６３ｍｇ、収率１６％）を無色油として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.17 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 3.68 (s, 2 H) 4.08 (q, J=7.0 Hz, 2 H) 5.13 (q, J=7.4 Hz, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 7.24 - 7.31 (m, 1 H) 7.37 (t, J=7.2 Hz, 3 H);
MS m/z 263.1 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９３．７％、ＲＴ＝１．８２分。
[0191]臭化ベンジル（０．３３０ｍＬ、２．７８ｍｍｏｌ）を、エチル２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシエチル）フェニル）アセテート（０．６４８ｇ、２．４７１ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．０５９ｇ、７．６６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１７．００ｍＬ）中混合物に加え、混合物を撹拌しながら２４時間加熱還流した（７５〜８０℃）。冷却及び濃縮乾固後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、中間体５３Ａ：エチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）フェニル）アセテート（６８６ｍｇ、収率７９％）を無色油として得た：MS m/z 353.2 (M+H)＋; HPLC 99.7%, RT = 2.19分。
[0192]中間体１５Ｂ（０．３１０ｇ、１．３２９ｍｍｏｌ）、エチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）フェニル）アセテート（０．６７９ｇ、１．９２７ｍｍｏｌ）及び中間体５３Ａ及びＭｅＯＨ（０．５２４ｍＬ）中３０％ｗｔ．ナトリウムメトキシドのメタノール（３．２３ｍＬ）中混合物は、薄い(thin)褐色懸濁液をもたらしたが、これをマイクロ波装置内で１４０℃に１時間加熱した。冷却及びＭｅＯＨ（０．７５ｍＬ）とＡｃＯＨ（０．１６７ｍＬ、２．９２ｍｍｏｌ）による希釈後、得られた懸濁液を２０℃で２時間撹拌した。次に固体を回収し、ＭｅＯＨで洗浄し（４×０．５ｍＬ）、次いで高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、メチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−４−ヒド
ロキシ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（３９９ｍｇ、収率５７．６％）を褐色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.87 (s, 3 H) 4.09 (s, 2 H) 4.45 - 4.57 (m, 2 H) 5.23 (q, J=7.2 Hz, 1 H) 7.20 - 7.29 (m, 5 H) 7.36 - 7.51 (m, 3 H) 7.52 (s, 1 H) 7.84 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.46 (br. s., 1 H) 12.56 (br. s., 1 H); MS m/z 522.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９２．７％ ２５４ｎｍで９１．７％、ＲＴ＝２．２０分。
[0193]メチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−４−ヒドロキシ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．３９５ｇ、０．７５７ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（６ｍＬ、６４．４ｍｍｏｌ）中混合物を９０℃に２時間加熱した。次に、冷却後、濃縮乾固して６５０ｍｇを褐色泡沫として得、これを飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）中に懸濁させ、１時間撹拌した。固体をろ過して水洗し（３×２ｍＬ）、高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、メチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（３７５ｍｇ、収率９２％）を褐色固体として得、これをそのまま次の工程で使用した： MS m/z 540.2 (M+H)＋; HPLC 92%, RT 2.51分。
[0194]メチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−４−クロロ−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．３７５ｇ、０．６９５ｍｍｏｌ）及びＮ１−（３−アミノプロピル）−Ｎ１−メチルプロパン−１，３−ジアミン（０．７８４ｍＬ、４．８６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（９．８３ｍＬ、２４３ｍｍｏｌ）中混合物をマイクロ波オーブンで１４０℃に３０分間加熱した。次に、減圧下で濃縮乾固後、得られた褐色油をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、メチル４−（（３−（（３−アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（２８８ｍｇ、収率６３．９％）を黄色泡沫として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm
1.48 (dt, J=14.0, 6.9 Hz, 2 H) 1.75 (quin, J=6.7 Hz, 2 H) 2.14 (s, 3 H) 2.24 - 2.42 (m, 4 H) 2.52 - 2.60 (m, 2 H) 3.61 (q, J=6.3 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.10 (s, 2 H) 4.49 (s, 2 H) 5.17 (q, J=7.0 Hz, 1 H) 7.18 - 7.30 (m, 5 H) 7.31 - 7.36 (m, 1 H) 7.39 (t, J=7.6 Hz, 1 H) 7.44 - 7.53 (m, 2 H) 7.58 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 7.84
(dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 8.00 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.28 (d, J=8.2 Hz, 1 H); MS m/z 649.3 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９７．６％ ２５４ｎｍで９５．５％、ＲＴ＝１．９６分。
[0195]ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（０．１２４ｍＬ、０．５３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液を、メチル４−（（３−（（３−アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．２８８ｇ、０．４４４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０７４ｍＬ、０．５３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物にゆっくり加え、黄色溶液を得た。２０℃で４５分間撹拌後、溶液を濃縮乾固し、３７３ｍｇを黄色泡沫として得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して中間体５３Ｂのメチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（３０６ｍｇ、収率９２％）を黄色泡沫として得た： １H NMR (400 MHz,
DMSO-d6) δ ppm 1.33 (s, 9 H) 1.52 (dt, J=14.1, 7.0 Hz, 2 H) 1.67 - 1.81 (m, 2 H) 2.12 (s, 3 H) 2.28 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 2.34 (t, J=6.8 Hz, 2 H) 2.92 (q, J=6.7 Hz, 2 H) 3.54 - 3.67 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.10 (s, 2 H) 4.49 (s, 2 H) 5.17 (q,
J=6.8 Hz, 1 H) 6.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.16 - 7.30 (m, 5 H) 7.31 - 7.36 (m, 1 H
) 7.39 (t, J=7.6 Hz, 1 H) 7.43 - 7.51 (m, 2 H) 7.53 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 7.83 (dd,
J=8.4, 1.4 Hz, 1 H) 8.00 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.06 (s, 1
H); MS m/z 749.3 (M+H)＋; HPLC 97.7%, RT = 2.06分。
[0196]メチル２−（３−（１−（ベンジルオキシ）−２，２，２−トリフルオロエチル）ベンジル）−４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．３０６ｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）及びＰｄ−Ｃ １０％ｗｔ（５０％湿分）（０．３０４ｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（９．９２ｍＬ）中混合物を２０℃で２２時間、水素により処理した。次に、反応混合物をセライトを通してろ過し、ケーキをＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）及びＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：１、２×１０ｍＬ）で濯ぎ、次いで回転蒸発器で濃縮乾固して２２６ｍｇの油を得た。これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシエチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（２０２ｍｇ、収率７５％）を白色泡沫として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.33 (s, 9 H) 1.48 - 1.62 (m, 2 H) 1.71 - 1.85 (m, 2 H) 2.16 (s, 3 H) 2.25 - 2.35 (m, 2 H) 2.39 (t, J=6.8 Hz, 2 H) 2.86 - 3.00 (m, 2 H) 3.56 - 3.70 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.06 (s, 2 H) 5.01 - 5.14 (m, 1 H) 6.77 (m, J=6.3 Hz, 2 H) 7.30 (d, J=4.7 Hz, 2 H) 7.36 - 7.42 (m, 1 H) 7.49 (s, 1 H) 7.51 - 7.57 (m, 1 H) 7.82 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.26 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.06 (br. s., 1 H); MS m/z 659.2 (M+H)＋; HPLC >97%, RT = 1.90分。
[0197]メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシエチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．２００ｇ、０．３０４ｍｍｏｌ）及びデス・マーチン・ペルヨージナン試薬（０．５６７ｇ、１．３３６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７．５０ｍＬ）中混合物を２０℃で１時間撹拌した。蒸発乾固後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１８１ｍｇ、収率９１％）を黄色泡沫として得た：ＤＭＳＯ−ｄ６中の１Ｈ ＮＭＲは所望生成物と一致していたが、水和物形の存在のために複雑化していた： MS m/z 657.3 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９６．０％ ２５４ｎｍで９５．３％、ＲＴ １．８７及び１．９６（ケトン＋水和物）分。
[0198]メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．１８０ｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．０２３ｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．３５５ｍＬ）のＭｅＯＨ（１．９ｍＬ）中混合物をマイクロ波オーブンで６５℃に４８時間加熱した。反応混合物の濃縮乾固後、残渣の溶液を飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）で洗浄し、有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮乾固して、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（ヒドロキシイミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１８４ｍｇ、収率１００％）を淡黄色泡沫として得た： MS m/z 672.3 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９６．０％ ２５４ｎｍで９１．４％、ＲＴ＝２．０１分。
[0199]Ｔｓ−Ｃｌ（０．０６０ｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）を、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピ
ル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（ヒドロキシイミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．１８４ｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．３５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０４８ｍＬ、０．３４２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２ｍＬ）中混合物に少しずつ加え、褐色溶液を得た。１時間後、反応混合物をＤＣＭ（１２ｍＬ）で希釈し、水洗し（３×１２ｍＬ）、有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮乾固して、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（（トシルオキシ）イミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（２１７ｍｇ、収率９６％）を褐色泡沫として得た：
MS m/z 826.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９３．２％ ２５４ｎｍで９１．３％、ＲＴ＝２．２０分。
[0200]メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（２，２，２−トリフルオロ−１−（（トシルオキシ）イミノ）エチル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．２１７ｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５．０７ｍＬ）中溶液を−７８℃に冷却し、アンモニア（１．７ｍＬ、７９ｍｍｏｌ）を凝縮して封管に入れた。混合物をゆっくり２０℃に温まらせ、３時間撹拌した。再度−７８℃に冷却後、封管にガス出口付きセプタムを取り付け、徐々に２０℃に温めてアンモニアを蒸発させた。３時間後、混合物を濃縮乾固し、次いでフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）ジアジリジン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（１３９ｍｇ、収率７９％）を白色泡沫として得た： １H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.34 (s, 9 H) 1.52 - 1.62 (m, 2 H) 1.72 - 1.89 (m, 2 H) 2.08 - 2.25 (m, 3 H) 2.30 - 2.44 (m, 4 H) 2.94 (q, J=6.4 Hz, 2 H) 3.64 (q, J=6.5 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 3.93 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 4.04 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 4.08 (s, 2 H) 6.78 (br. s., 1 H) 7.31 - 7.41 (m, 2 H) 7.44 - 7.50 (m, 1 H) 7.54 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.59 (s, 1 H) 7.83 (dd, J=8.4, 1.4 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 12.07 (s, 1 H); MS m/z 671.4 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９８．６％ ２５４ｎｍで９６．４％、ＲＴ＝１．９１分。
[0201]ＤＣＭ（２ｍＬ）中メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）ジアジリジン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（７０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４３．６μＬ、０．３１３ｍｍｏｌ）を予め充填された５ｍＬ遮光丸底フラスコに、ヨウ素（２７．８ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）を加え、淡黄色溶液を得た。２０℃で１５分間撹拌後、溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、メチル４−（（３−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（６５ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ、収率９３％）を淡黄色泡沫として得た： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.33 (s, 9 H) 1.53 (dt, J=13.8, 7.0 Hz, 2 H) 1.70 - 1.82 (m, 2 H) 2.15 (br. s., 3 H) 2.24 - 2.34 (m, 2 H) 2.34 - 2.42 (m, 2 H) 2.87 - 2.98 (m, 2 H) 3.55 - 3.66 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.10 (s, 2 H) 6.76 (br. s., 1 H) 7.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.27 (s, 1 H) 7.43 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 7.49 - 7.58 (m, 2 H) 7.83 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.06 (s, 1 H); MS m/z 669.2 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９７．６％ ２５４ｎｍで９７．３％、ＲＴ＝２．１８分。
[0202]トリフルオロ酢酸（０．４００ｍＬ、５．１９ｍｍｏｌ）を、メチル４−（（３
−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（０．０６４ｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液に加え、淡黄色溶液を得た。２０℃で３０分間撹拌後、反応混合物をＤＣＭ（１５ ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）で洗浄し、水性層をＤＣＭ（１０ ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過及び濃縮乾固して、中間体５３Ｃ：メチル４−（（３−（（３−アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（４５ｍｇ、収率８３％）を淡黄色泡沫として得た： HRMS m/z 569.2601 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９７．１％ ２５４ｎｍで９６．９％、ＲＴ＝１．９６分。
[0203]２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタノエート（２９．２ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を、メチル４−（（３−（（３−アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（４５ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１６．５５μＬ、０．１１９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７５０μＬ）中混合物に加え、黄色溶液を得た。２０℃で３０分間撹拌後、反応混合物を高真空下で淡オレンジ色油に濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して５６ｍｇを白色固体として得た。これをＣＨ３ＣＮから凍結乾燥して、実施例５３の化合物：メチル４−（（３−（メチル（３−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）プロピル）アミノ）プロピル）アミノ）−２−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ベンジル）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（５１ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ、収率８１％）を白色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６)
δ ppm 1.18 - 1.34 (m, 3 H) 1.35 - 1.50 (m, 3 H) 1.50 - 1.64 (m, 3 H) 1.70 - 1.82 (m, 2 H) 2.02 (t, J=7.4 Hz, 2 H) 2.15 (s, 3 H) 2.26 - 2.34 (m, 2 H) 2.37 (t, J=6.7 Hz, 2 H) 2.55 (d, J=12.5 Hz, 1 H) 2.77 (dd, J=12.1, 5.1 Hz, 1 H) 2.99 - 3.10 (m, 3 H) 3.56 - 3.66 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.03 - 4.14 (m, 1 H) 4.10 (s, 2 H) 4.26 (dd, J=7.6, 5.3 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.39 (s, 1 H) 7.14 (d, J=7.4 Hz, 1
H) 7.28 (s, 1 H) 7.44 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=7.8 Hz, 1 H) 7.56 (t, J=5.3
Hz, 1 H) 7.73 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.83 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 8.00 (d, J=1.4 Hz, 1 H) 8.28 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.07 (s, 1 H); HRMS m/z 795.3368 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで９５．４％ ２５４ｎｍで９６．２％、ＲＴ＝２．０６分。
実施例５５
[0204]メチル２−ベンジル−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキシレート（実施例２７、０．０３０ｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（１０．００ｍＬ）中２Ｍメチルアミン中溶液を封管に入れ、１１０℃に６６時間加熱し、次いで混合物を２０℃に冷却して濃縮乾固し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して２８ｍｇの無色油を得た。これをエーテル（２ｍＬ）中に懸濁させた。得られた懸濁液を２時間撹拌後、固体をブフナー上で回収し、ケーキをエーテルで洗浄し（２×０．５ｍＬ）、生成物を高真空下４０℃で恒量になるまで乾燥させ、実施例５５：２−ベンジル−Ｎ−メチル−４−（（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）アミノ）−９Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−７−カルボキサミド（２３ｍｇ、収率７７％）を白色固体として得た： １H NMR (400 MHz, DMSO-d６) δ ppm 1.38 (m, J=5.1 Hz, 2 H) 1.50 (quin, J=5.5 Hz, 4 H) 1.80 (quin, J=7.0 Hz, 2 H) 2.22 - 2.41 (m, 6 H) 2.81 (d, J=4.3 Hz, 3 H) 3.58 - 3.68 (m, 2 H) 4.03 (s, 2 H) 7.15 - 7.21 (m, 1 H) 7.27 (m, J=7.4, 7.4 Hz, 3 H) 7.34 - 7.40 (m, 2 H) 7.70 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1 H) 7.90 (d, J=1.4 Hz, 1H) 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.46 (q, J=4.3 Hz, 1 H) 11.96 (s, 1 H); HRMS m/z 457.2708 (M+H)＋; ＨＰＬＣ ２２０ｎｍで＞９９．５％ ２５４ｎｍで９８．９％、ＲＴ＝１．５３分。
[0205]報告されているＨＰＬＣリテンションタイムは、下記条件を用いた逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ，１２００シリーズ）のものである。溶媒Ａ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＴＦＡ（５：９５：０．０５）；溶媒Ｂ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＴＦＡ（９５：５：０．０５）；流量：３．０ｍＬ／分；グラジエント２．０分で０〜１００％ Ｂ；カラム：ＺｏｒｂａｘＣ１８，３．５ミクロン，４．６×３０ｍｍ：波長２２０ｎｍ。
[0206]ＥＣ５０は、ビヒクル培養（ＤＭＳＯ）と比べて、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞数に５０％の増加をもたらす濃度と定義される。＊ＥＣ５０：Ａ＞１０００ｎＭ；Ｂ＝５００−１０００ｎＭ；Ｃ＝２５０−５００ｎＭ；Ｄ＝１００−２５０；Ｅ＝＜１００ｎＭ；Ｆ＝＞１．３倍の増殖を示す化合物。
エクスビボ機能アッセイ
[0207]増殖細胞のエクスビボ機能性を慣用の培養コロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｃ）アッセイを用いて試験した。未処理細胞、又はＤＭＳＯ、陽性対照もしくは本発明の化合物とインキュベートされた細胞を従来条件下でメチルセルロース培地中に播種した。一例として、化合物１（表１、実施例１）は、多能性造血前駆細胞の数を増殖する。化合物１で１０日間処理された１０００個のＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞のメチルセルロース培養物は、多分化系列の顆粒球赤血球、マクロファージ及び巨核球（ＧＥＭＭコロニー）に入力細胞より５倍の増加及び対照細胞と比べて１０倍の増加をもたらした。このことは、化合物１は、多能性前駆細胞の増殖を促進することを示唆している。
インビボ機能アッセイ
[0208]本発明の化合物と培養されたＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞を、免疫不全種のＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに移植する。化合物１（表１、実施例１）と１０日間又はビヒクル対照条件で培養された２，０００，０００及び５００，０００個のＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞の成果をＮＳＧマウスに移植した。移植８週間後、ヒト造血細胞の再構成をヒトＣＤ４５に対する抗体を用いてＮＳＧの骨髄でチェックした。ビヒクルではなく化合物１で処理された細胞は、ＮＳＧマウスに生着できた。さらに、ヒト骨髄及びリンパ区画の再構成も、骨髄細胞がヒトＣＤ３３＋及びＣＤ１９＋にそれぞれ陽性であったため、確認された。これらの結果は、化合物１で増殖されたＣＤ３４＋ ｍＰＢは、生着に貢献するだけでなく、インビボにおける多分化系列の再増殖可能性も保持していることを示している。
化合物の組合せ
[0209]本発明の化合物と培養されたＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞を免疫不全種のＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに移植する。化合物１（表１、実施例１）と１０日間又はビヒクル対照条件で培養された２，０００，０００及び５００，０００個のＣＤ３４＋ ｍＰＢ細胞の成果をＮＳＧマウスに移植した。移植８週間後、ヒト造血細胞の再構成をヒトＣＤ４５に対する抗体を用いてＮＳＧの骨髄でチェックした。ビヒクルではなく化合物１で処理された細胞は、ＮＳＧマウスに生着できた。さらに、ヒト骨髄及びリンパ区画の再構成も、骨髄細胞がヒトＣＤ３３＋及びＣＤ１９＋にそれぞれ陽性であったため、確認された。これらの結果は、化合物１で増殖されたＣＤ３４＋ ｍＰＢは、生着に貢献するだけでなく、インビボにおける多分化系列の再増殖可能性も保持していることを示している。
[0210]本明細書中に記載された実施例及び実施態様は、説明を目的としたものに過ぎず、それを踏まえて様々な修正又は変更が当業者には示唆されるであろうこと、そしてそれらも本発見及び添付の特許請求の範囲に含まれることは理解されるはずである。
本発明の態様
態様１ 一般式Ｉ又はII：
［式中、
Ｚは、
１）−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ １ ）（ＯＲ １ ）、
２）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ １ 、
３）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
４）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
５）−Ｃ（Ｏ）Ｒ １ 、
６）−ＣＮ、
７）−ＳＲ １ 、
８）−Ｓ（Ｏ） ２ ＮＨ ２ 、
９）−Ｓ（Ｏ） ２ ＮＨＲ １ 、
１０）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
１１）−Ｓ（Ｏ）Ｒ １ 、
１２）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
１３）−Ｌ、
１４）−ベンジル（１、２又は３個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
１５）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
１６）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか一方又は両方に結合されている）、
１７）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
１８）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、又は
１９）−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）
ここで、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく；（Ｒ １ ）及びＲ １ が窒素原子に結合されている場合、それらは窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個又は複数個のＲ １ 又はＲ Ａ で置換されていてもよく；
Ｗは、
１）−Ｈ、
２）−ハロゲン、
３）−ＯＲ １ 、
４）−Ｌ−ＯＨ、
５）−Ｌ−ＯＲ １ 、
６）−ＳＲ １ 、
７）−ＣＮ、
８）−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ １ ）（ＯＲ １ ）、
９）−ＮＨＲ １ 、
１０）−Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
１１）−Ｌ−ＮＨ ２ 、
１２）−Ｌ−ＮＨＲ １ 、
１３）−Ｌ−Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
１４）−Ｌ−ＳＲ １ 、
１５）−Ｌ−Ｓ（Ｏ）Ｒ １ 、
１６）−Ｌ−Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
１７）−Ｌ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ １ ）（ＯＲ １ ）、
１８）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ １ 、
１９）−Ｃ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
２０）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
２１）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
２２）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ １ 、
２３）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）Ｒ １ 、
２４）−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ １ 、
２５）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）ＯＲ １ 、
２６）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
２７）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
２８）−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
２９）−ＯＣ（Ｏ）Ｒ １ 、
３０）−Ｃ（Ｏ）Ｒ １ 、
３１）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
３２）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
３３）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
３４）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
３５）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
３６）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
３７）−ＮＨＳ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
３８）−ＮＲ １ Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
３９）−Ｓ（Ｏ） ２ ＮＨ ２ 、
４０）−Ｓ（Ｏ） ２ ＮＨＲ １ 、
４１）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
４２）−Ｓ（Ｏ）Ｒ １ 、
４３）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
４４）−ＯＳ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
４５）−Ｓ（Ｏ） ２ ＯＲ １ 、
４６）−ベンジル（１、２又は３個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
４７）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
４８）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、
４９）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
５０）−Ｌ−ＮＲ １ （Ｒ １ ）、
５１）−Ｌ−） ２ ＮＲ １ 、
５２）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
５３）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
５４）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、
５５）−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
５６）−Ｏ−Ｌ−Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
５７）−Ｏ−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
５８）−Ｏ−Ｌ− ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、
５９）−Ｏ−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
６０）−Ｏ−Ｌ） ２ −ＮＲ １ 、
６１）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
６２）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
６３）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、
６４）−Ｏ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
６５）−Ｓ−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
６６）−Ｓ−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
６７）−Ｓ−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか又は両方に結合されている）、
６８）−Ｓ−Ｌ） ２ ＮＲ １ 、
６９）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
７０）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 置換基で置換されていてもよい）、
７１）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 置換基で置換されていてもよい）、
７２）−Ｓ−Ｌ−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 置換基で置換されていてもよい）、
７３）−ＮＲ １ （Ｒ １ ）、
７４）−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
７５）−Ｎ（Ｒ １ ）Ｌ） ２ −ＮＲ １ 、
７６）−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ Ａ 、
７７）−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
７８）−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
７９）−（Ｎ（Ｒ １ ）−Ｌ） ｎ −アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
８０）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 置換基で置換されていてもよい）、又は
８１）−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 置換基で置換されていてもよい）
ここで、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく、
そして、２個のＲ １ 置換基が同じ窒素原子上に存在する場合、各Ｒ １ 置換基は、以下に記載されるＲ １ 値のリストから独立に選ばれ、
そして、ｎは、０、１、２、３、４、又は５のいずれかに等しい整数であり、
そして、（Ｒ １ ）及びＲ １ が窒素原子に結合されている場合、それらは窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個又は複数個のＲ １ 又はＲ Ａ で置換されていてもよく；
Ｌは、
１）−Ｃ １−６ アルキル、
２）−Ｃ ２−６ アルケニル、
３）−Ｃ ２−６ アルキニル、
４）−Ｃ ３−７ シクロアルキル、
５）−Ｃ ３−７ シクロアルケニル、
６）ヘテロサイクリル、
７）−Ｃ １−６ アルキル−Ｃ ３−７ シクロアルキル
８）−Ｃ １−６ アルキル−ヘテロサイクリル、
９）アリール、又は
１０）ヘテロアリール
であり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロサイクリル、アリール及びヘテロアリール基は、それぞれ独立に、１個又は２個のＲ Ａ 置換基で置換されていてもよく；
Ｒ １ は、
１）−Ｈ、
２）−Ｃ １−６ アルキル、
３）−Ｃ ２−６ アルケニル、
４）−Ｃ ２−６ アルキニル、
５）−Ｃ ３−７ シクロアルキル、
６）−Ｃ ３−７ シクロアルケニル、
７）−Ｃ １−５ 過フッ素化物、
８）−ヘテロサイクリル、
９）−アリール、
１０）−ヘテロアリール、
１１）−ベンジル、又は
１２）５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイル
であり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリール及びベンジル基は、それぞれ独立に、１、２又は３個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく；
Ｒ ２ は、
１）−Ｈ、
２）−Ｃ １−６ アルキル、
３）−ＳＲ １ 、
４）−Ｃ（Ｏ）Ｒ １ 、
５）−Ｓ（Ｏ）Ｒ １ 、
６）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
７）−ベンジル（１、２又は３個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、
８）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか一方又は両方に結合されている）、
９）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか一方又は両方に結合されている）、
１０）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか一方又は両方に結合されている）、
１１）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）、又は
１２）−アリール（１個又は複数個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい）であり、ここで、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく；
Ｒ Ａ は、
１）−ハロゲン、
２）−ＣＦ ３ 、
３）−ＯＨ、
４）−ＯＲ １ 、
５）−Ｌ−ＯＨ、
６）−Ｌ−ＯＲ １ 、
７）−ＯＣＦ ３ 、
８）−ＳＨ、
９）−ＳＲ １ 、
１０）−ＣＮ、
１１）−ＮＯ ２ 、
１２）−ＮＨ ２ 、
１３）−ＮＨＲ １ 、
１４）−ＮＲ １ Ｒ １ 、
１５）−Ｌ−ＮＨ ２ 、
１６）−Ｌ−ＮＨＲ １ 、
１７）−Ｌ−ＮＲ ４ Ｒ １ 、
１８）−Ｌ−ＳＲ １ 、
１９）−Ｌ−Ｓ（Ｏ）Ｒ １ 、
２０）−Ｌ−Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
２１）−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、
２２）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ １ 、
２３）−Ｃ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
２４）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
２５）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
２６）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ １ 、
２７）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）Ｒ １ 、
２８）−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ １ 、
２９）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）ＯＲ １ 、
３０）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
３１）−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
３２）−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
３３）−ＯＣ（Ｏ）Ｒ １ 、
３４）−Ｃ（Ｏ）Ｒ １ 、
３５）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
３６）−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
３７）−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
３８）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）ＮＨ ２ 、
３９）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ １ 、
４０）−ＮＲ １ Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
４１）−ＮＨＳ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
４２）−ＮＲ １ Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
４３）−Ｓ（Ｏ） ２ ＮＨ ２ 、
４４）−Ｓ（Ｏ） ２ ＮＨＲ １ 、
４５）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ 、
４６）−Ｓ（Ｏ）Ｒ １ 、
４７）−Ｓ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
４８）−ＯＳ（Ｏ） ２ Ｒ １ 、
４９）−Ｓ（Ｏ） ２ ＯＲ １ 、
５０）−ベンジル、
５１）−Ｎ ３ 、又は
５２）−Ｃ（−Ｎ＝Ｎ−）（ＣＦ ３ ）
であり、ここで、ベンジル基は、１、２又は３個のＲ Ａ 又はＲ １ 置換基で置換されていてもよい］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様２ 一般式III又はIV：
［式中、Ｚ及びＲ ２ はそれぞれ態様１に定義の通りであり、ｍは１〜６の整数であり、そして、ｍが２以上の場合、Ｘ ｉ は、同じか又は異なり、それぞれ独立にＮＲ １ 、ＣＨ ２ 、Ｏ又はＳであり、ここで、Ｒ １ は態様１に定義の通りであり、Ｌ ｉ は、同じか又は異なり、それぞれ独立に態様１に定義のＬであり、
そして、Ｒ ３ 及びＲ ４ は、同じか又は異なり、それぞれ独立にＨ、態様１に定義のようなＲ １ であるか、又はＮと一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ １ 又はＲ Ａ で置換されていてもよい］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様３ 一般式Ｖ又はVI：
［式中、Ｚ、Ｌ、Ｒ １ 及びＲ ２ は、それぞれ態様１に定義の通りである］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様４ 式IIA：
［式中、Ｒ １ 、Ｗ及びＲ ２ は、それぞれ態様１に定義の通りである］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様５ 式IIB：
［式中、Ｗ及びＲ ２ は、それぞれ態様１に定義の通りであり、Ｈｅｔは、態様１に定義のような１個又は複数個のＲ １ 又はＲ Ａ で置換されていてもよい３〜７員のヘテロサイクルである］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様６ 式IIC：
［式中、Ｗ及びＲ ２ は、それぞれ態様１に定義の通りであり、
そして、Ｒ ５ 及びＲ ６ は、同じか又は異なり、それぞれ独立に態様１に定義のようなＬであるか、又はＣと一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ １ 又はＲ Ａ で置換されていてもよい］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様７ 環が５員環であり、ヘテロ原子がＮである、態様６に記載の化合物。
態様８ 環が４個のＮを含む、態様６又は７に記載の化合物。
態様９ Ｒ ２ がベンジルである、態様６〜８のいずれか１項に記載の化合物。
態様１０ 式IVA：
［式中、Ｗ、Ｌ、Ｒ １ 及びＲ ２ は、それぞれ態様１に定義の通りであり、
そして、ｍ、Ｌ ｉ 、Ｒ ３ 及びＲ ４ は、それぞれ態様２に定義の通りである］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様１１ 式VIA：
［式中、Ｚ、Ｌ、Ｒ １ 及びＲ ２ は、それぞれ態様１に定義の通りであり、
そして、Ｒ ３ 及びＲ ４ は、それぞれ態様２に定義の通りである］の化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様１２ Ｚが、ＣＯ ２ Ｍｅ又は２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イルであり；
Ｒ ２ が、ベンジル、３−チエニルメチル又は３−ピリジニルメチルであり；そして
Ｗが、ＮＨ−Ｌ−Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ １ であり、式中、ＬはＣ ２−４ アルキルであり、Ｒ １ はＣ １−４ アルキルであるか、又は（Ｒ １ ）及びＲ １ は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ １ 又はＲ Ａ で置換されていてもよい、態様１に記載の化合物。
態様１３
である化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様１４
である化合物、又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様１５ 態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物又はその塩もしくはプロドラッグと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
態様１６ 態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物の、造血幹細胞増殖のための使用。
態様１７ 造血幹細胞がヒト細胞である、態様１６に記載の使用。
態様１８ 幹細胞及び前駆細胞の増加法であって、該方法は、造血幹細胞（ＨＳＣ）を含む出発集団を、ＨＳＣの数を増大できる薬剤と共に培養することを含み、その薬剤は態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物を含む方法。
態様１９ インビボ、インビトロ又はエクスビボにおける、態様１８に記載の方法。
態様２０ 出発細胞集団が、動員末梢血（ｍＰＢ）、骨髄（ＢＭ）又は臍帯血（ＵＣＢ）から採取されたＣＤ３４＋細胞を含む、態様１８又は１９に記載の方法。
態様２１ 造血幹細胞の増殖法であって、該方法は、出発細胞集団を、態様１〜１４のいずれか１項に定義された少なくとも一つの化合物の存在下、任意に生物分子又は別の小分子である少なくとも一つの細胞増殖因子と共に培養することを含む方法。
態様２２ 態様１８〜２１のいずれか１項に定義された方法に従って増殖された細胞集団。
態様２３ 態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物を用いて増殖された細胞集団を含む医薬組成物。
態様２４ 対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患の治療法であって、そのような治療を必要とする対象に、態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物を用いて増殖された造血幹細胞、又は態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物又はその塩もしくはプロドラッグを投与することを含む方法。
態様２５ 造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患が、骨髄不全状態、世界的に関心の高い様々な先天性疾患（例えば鎌状赤血球貧血及びサラセミア）、狼瘡、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常（とりわけゴーシェ病）を含む、態様２１に記載の方法。
態様２６ 対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患を治療するための、態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物を用いて増殖された造血幹細胞、又は態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物又はその塩もしくはプロドラッグの使用。
態様２７ 対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患を治療するための医薬製造における、態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物又はそのプロドラッグの使用。
態様２８ 対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患を治療するための、態様１５に定義された医薬組成物の使用。
態様２９ 造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患が、骨髄不全状態、世界的に関心の高い様々な先天性疾患（例えば鎌状赤血球貧血及びサラセミア）、狼瘡、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常（とりわけゴーシェ病）を含む、態様２６〜２８のいずれか１項に記載の使用。
態様３０ 対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患を治療するための、態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物を用いて増殖された造血幹細胞、又は態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物又はその塩もしくはプロドラッグ。
態様３１ 造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患が、骨髄不全状態、世界的に関心の高い様々な先天性疾患（例えば鎌状赤血球貧血及びサラセミア）、狼瘡、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常（とりわけゴーシェ病）を含む、態様３０に定義された造血幹細胞又は化合物。
態様３２ 静脈内注入に適切な、態様１５又は２３に記載の医薬組成物。
態様３３ 幹細胞及び前駆細胞の増加に使用するためのキットであって、態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物及び使用説明書を含むキット。
態様３４ 幹細胞の増殖に使用するためのキットであって、態様１〜１４のいずれか１項に定義された化合物、及び使用説明書を含み、該キットは生物分子又は別の小分子である少なくとも一つの細胞増殖因子を含んでいてもよいキット。

Claims (27)

  1. 一般式：
    ［式中、
    Ｚは、
    ２）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
    ３）−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、
    ４）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
    ６）−ＣＮ、又は
    １８）−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、
    ここで、（Ｒ１）及びＲ１が窒素原子に結合されている場合、それらは窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよく；
    Ｗは、
    ３）−ＯＲ１、
    ９）−ＮＨＲ１、
    １０）−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
    １３）−Ｌ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
    ４８）−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、
    ５８）−Ｏ−Ｌ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロサイクリル基のいずれか又は両方に結合されている）、
    ７４）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、ここで、ｎは１である、
    ７８）−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−ヘテロサイクリル（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、ここで、ｎは１である、
    ここで、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく、
    そして、２個のＲ１置換基が同じ窒素原子上に存在する場合、各Ｒ１置換基は、以下に記載されるＲ１値のリストから独立に選ばれ、
    そして、（Ｒ１）及びＲ１が窒素原子に結合されている場合、それらは窒素原子と一緒になって、３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよく；
    Ｌは、
    １）−Ｃ１−６アルキル、ここで、アルキルは、１個又は２個のＲＡ置換基で置換されていてもよい、
    ４）−Ｃ３−７シクロアルキル、
    ６）ヘテロサイクリル、
    であり、ここで、アルキル、シクロアルキル、及びヘテロサイクリル基は、それぞれ独立に、１個又は２個のＲＡ置換基で置換されていてもよく；
    Ｒ１は、
    １）−Ｈ、
    ２）−Ｃ１−６アルキル、
    ４）−Ｃ２−６アルキニル、
    ７）−Ｃ１−５過フッ素化アルキル、
    ８）−ヘテロサイクリル、
    ９）−アリール、又は
    １２）５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイル
    であり、ここで、アルキル、過フッ素化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール基は、それぞれ独立に、１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく；
    Ｒ２は、
    １）−Ｈ、
    ２）−Ｃ１−６アルキル、
    ４）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
    ７）−ベンジル（１、２又は３個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよい）、
    ８）−Ｌ−ヘテロアリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びヘテロアリール基のいずれか一方又は両方に結合されている）、
    １０）−Ｌ−アリール（１個又は複数個のＲＡ又はＲ１置換基で置換されていてもよく、置換基はＬ及びアリール基のいずれか一方又は両方に結合されている）、
    ここで、各置換基は、それがまだ存在していなければ、Ｌ基に結合されてもよく；
    ＲＡは、
    １）−ハロゲン、
    ２）−ＣＦ３、
    ３）−ＯＨ、
    ４）−ＯＲ１、
    １２）−ＮＨ２、
    １３）−ＮＨＲ１、
    １４）−ＮＲ１Ｒ１、
    １５）−Ｌ−ＮＨ２、
    １６）−Ｌ−ＮＨＲ１、
    ３４）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
    又は
    ５２）−Ｃ（−Ｎ＝Ｎ−）（ＣＦ３）
    であり、ここで、ヘテロアリールは、少なくとも１つの芳香族環及びＮ、Ｓ及びＯから選ばれる１〜４個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環式又は二環式系であり、ヘテロサイクルは、Ｎ、Ｓ及びＯから選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有する３〜７員の非芳香族環である］の化合物、又はその塩、ただし、下記化合物は除く。
  2. 式IIA、式IIBまたは式IIC：
    ［式中、Ｒ１、Ｗ及びＲ２は、それぞれ請求項１に定義の通りであり、Ｈｅｔは、請求項１に定義のような１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい３〜７員のヘテロサイクルであり、Ｒ５及びＲ６は、同じか又は異なり、それぞれ独立に請求項１に定義のようなＬであるか、又はＣと一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい］の化合物、又はその塩である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ５及びＲ６が一緒になって形成される環が、４個のＮを含む５員環である、請求項２に記載の化合物。
  4. Ｒ２がベンジルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
  5. Ｒ２がＨである、請求項１に記載の化合物。
  6. Ｗが下記式：
    である、請求項１に記載の化合物。
  7. 式VIA：
    ［式中、Ｚ、Ｌ、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ請求項１に定義の通りであり、
    そして、Ｒ３及びＲ４は、同じか又は異なり、それぞれ独立に、Ｈ、Ｒ１
    、またはＲ３及びＲ４は、Ｎと一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい］の化合物、又はその塩。
  8. Ｚが、ＣＯ２Ｍｅ又は２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イルであり；
    Ｒ２が、ベンジル、３−チエニルメチル又は３−ピリジニルメチルであり；そして
    Ｗが、ＮＨ−Ｌ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ１であり、式中、ＬはＣ２−４アルキルであり、Ｒ１はＣ１−４アルキルであるか、又は（Ｒ１）及びＲ１は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個又は複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成し、その環は１個又は複数個のＲ１又はＲＡで置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
  9. である化合物、又はその塩。
  10. 該化合物が下記式：
    またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の化合物。
  11. 該化合物が下記式：
    の臭化水素酸塩である、請求項１に記載の化合物。
  12. 請求項１〜１１のいずれか１項に定義された化合物、又はその塩を含む造血幹細胞増殖のための医薬組成物。
  13. 造血幹細胞がヒト細胞である、請求項１２に記載の組成物。
  14. 幹細胞及び前駆細胞の増殖方法であって、該方法は、出発細胞集団を、請求項１〜１１のいずれか１項に定義された化合物、又はその塩を含む薬剤と共に、任意に生物分子又は別の小分子である少なくとも一つの細胞増殖因子と共にin vitro又はex vivoにおける培養することを含む方法。
  15. 出発細胞集団が、動員末梢血（ｍＰＢ）、骨髄（ＢＭ）又は臍帯血（ＵＣＢ）から採取されたＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１４に記載の方法。
  16. 該出発細胞集団が、一または二臍帯血単位から精製されたＣＤ３４＋細胞から本質的になる、請求項１４または１５に記載の方法。
  17. 該出発細胞集団が、該化合物の存在下で、２日〜２１日間培養される、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 該化合物が、該出発細胞集団に、１ｎMと３０００ｎMとの間の濃度で、投与される、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 該生物分子が、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３−Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、またはその組み合わせを含む、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 該生物分子が、ＳＣＦ、ＦＬＴ３−Ｌ、ＴＰＯ、ＩＬ−６またはその組み合わせを含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 該他の小分子が、ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ １である、請求項１４に記載の方法。
  22. 請求項１〜１１のいずれか１項に定義された化合物、またはその塩、及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
  23. 対象における造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１１のいずれか１項に定義された化合物又はその塩を含む医薬組成物。
  24. 造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患が、骨髄不全状態、世界的に関心の高い様々な先天性疾患、狼瘡、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、真性赤血球系無形成、ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、先天性代謝異常を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. 造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患が、鎌状赤血球貧血またはサラセミアを包含する、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. 造血障害／造血器悪性疾患、自己免疫疾患及び／又は遺伝性免疫不全疾患が、ゴーシェ病を包含する、請求項２４に記載の医薬組成物。
  27. 造血幹細胞の増殖に使用するためのキットであって、請求項１〜１１のいずれか１項に定義された化合物を含み、該キットは生物分子又は別の小分子である少なくとも一つの細胞増殖因子を含んでいてもよいキット。
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