KR20080020602A

KR20080020602A - 단백질 키나아제 저해제

Info

Publication number: KR20080020602A
Application number: KR1020077026368A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 제이. 베어스; 하리프라사드 반카야라파티; 코리 엘. 그랜드
Original assignee: 수퍼젠, 인크.
Priority date: 2005-04-28
Filing date: 2006-04-28
Publication date: 2008-03-05
Also published as: JP2008539277A; ZA200709269B; IL186744A0; AU2006239236A1; EP1888588A2; CA2604284A1; WO2006116733A2; US20090029982A1; BRPI0609956A2; NO20075113L; WO2006116733A3; CN101189239A; MX2007013624A

Abstract

단백질 키나아제-매개 질환 및 상태, 예컨대 암의 치료에서 유용성을 가진 단백질 키나아제 저해제가 개시되었다. 본 발명의 화합물은, 그의 입체이성질체, 프로드러그 및 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, R₁, R₂, R₃, X, Z, L₂ 및 w 이 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I 을 갖는다. 본 발명의 화합물을 함유하는 조성물 뿐만 아니라 그의 사용과 관련된 방법이 또한 개시된다.

Description

단백질 키나아제 저해제{PROTEIN KINASE INHIBITORS}

본 발명은 일반적으로 단백질 키나아제 활성을 저해하는 화합물, 및 그와 관련된 조성물 및 방법에 관한 것이다.

암 (및 기타 과증식성 질환)은 비제어적 세포 증식을 특징으로 한다. 세포 증식의 정상적인 제어 상실은 종종 세포 사이클을 통한 진행을 제어하는 세포 경로에 대한 유전적 결함의 결과로서 발생하는 것으로 나타난다. 세포 사이클은 DNA 합성 (S 상), 세포 분열 또는 유사분열 (M 상), 및 갭 I (G1) 및 갭 2 (G2) 로 일컬어지는 비합성적 기간으로 이루어진다. M-상은 유사분열 및 세포질분열 (2 개의 세포로 나누어짐) 을 포함하여 이루어진다. 세포 사이클의 모든 단계들은 단백질 인산화의 작동적인 캐스캐이드에 의해 제어되며, 단백질 키나아제의 몇가지 패밀리가 상기 인산화 단계 수행에 수반된다. 추가로, 다수의 단백질 키나아제의 활성은 정상적인 조직에 비해 인간 종양에서 증가하며, 상기 증가된 활성은 키나아제의 증가된 수준 및 보조 활성화제 또는 저해제 단백질 발현에서의 변화를 포함하는 수많은 인자들에 기인한 것일 수 있다.

세포는 세포 사이클의 한 상에서 또다른 상으로의 이전을 지배하는 단백질을 갖는다. 예를 들어, 사이클린은 그의 농도가 세포 사이클을 통해 증가 및 감소하 는 단백질의 한 패밀리이다. 사이클린은 적당한 시기에 세포 사이클 진행에 필수적인 기질을 인산화시키는 사이클린-의존성 단백질 키나아제 (CDK) 를 발동시킨다. 특정 시기의 특정 CDK 의 활성은 세포 사이클을 통틀어 개시 및 공동작용적 진행에 모두 필수적이다. 예를 들어, CDK1 은 M-상 활성을 조정하는 가장 중요한 세포 사이클 조절자이다. 그러나, M-상에 참여하는 다수의 기타 유사분열 단백질 키나아제가 동정되었고, 여기에는 폴로 (polo), 오로라 (aurora), 및 NIMA (Never-In-Mitosis-A) 패밀리의 구성원들 및 유사분열 체크포인트, 유사분열 탈출 및 세포질분열에 관여하는 키나아제가 포함된다.

오로라 키나아제는 유사분열 기구 (중심체, 양극성 방추사의 극들, 또는 중간체) 에 위치하며 중심체 분리, 양극성 방추사 어셈블리 및 염색체 분리의 완결을 조절하는 암유발성 세린/트레오닌 키나아제의 패밀리이다. 오로라 키나아제의 3 가지 인간 동족체 (homolog) 가 동정되었다 (오로라-1, 오로라-2 및 오로라-3). 이들은 전부 카르복실 말단에 위치하는 매우 보존적인 촉매성 도메인을 공유하나, 그의 아미노 말단 신장은 아무런 서열 유사성없이 다양한 길이의 것이다. 인간 오로라 키나아제는 증식하는 세포에서 발현되며, 또한 유방, 난소, 전립선, 췌장 및 대장을 포함하는 다수의 종양 세포주에서 과발현된다. 오로라-2 키나아제는 암유발유전자로서 작용하며, 시험관내에서는 Rat1 섬유모세포 및 마우스 NIH3T3 세포 모두를 형질전환시키며, 오로라-2 는 누드 마우스에서 종양으로서 자라나는 NIH 3T3 세포를 형질전환시킨다. 과량의 오로라-2 는, 세포 형질전환을 제공하는 것으로 공지된 현상인, 종양 억제자 유전자 소실을 가속화하고/하거나 암유발유전자를 증폭시켜 세포를 염색체 불안정화 (aneuploidy; 염색체 갯수 비정상) 로 구동시킬 수 있다. 과량의 오로라-2 가 있는 세포는 유사분열 체크포인트를 탈출할 수 있는데, 그에 이어서 원종양유전자 (proto-oncogene) 를 부적절하게 활성화시킬 수 있다. 오로라-2 의 상향조절은 많은 췌장암 세포주에서 증명되었다. 추가로, 오로라-2 키나아제 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리는 세포 사이클 정지를 유발하고 아폽토시스 (apoptosis) 증가를 유발하는 것으로 나타났다. 따라서, 오로라-2 키나아제는 암 및 기타 상태 치료를 위한 신규한 소형 분자 저해제의 합리적인 고안을 위한 유망한 표적이다.

퀴나졸린 유도체는 단백질 키나아제 활성 저해를 위해 제안되었다. 예를 들어, WO 96/09294, WO 96/33981 및 EP 0837 063 는 수용체 타이로신 키나아제 저해제로서의 특정 퀴나졸린 화합물의 용도를 기재한다. 추가로, WO 01/21596 는 오로라-2 키나아제 저해를 위한 퀴나졸린 유도체의 용도를 제안한다.

그러나, 오로라-2 키나아제 활성의 저해제와 같은 단백질 키나아제 활성의 추가적인 개선된 저해제는 여전히 필요하다. 본 발명은 그러한 필요성을 충족시키며, 기타 관련된 장점들을 제공한다.

발명의 개요

본 발명은 일반적으로는 그의 입체이성질체, 프로드러그 및 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 화학식 I 을 가진 화합물에 관한 것이다:

[화학식 I]

[식 중, R₁, R₂, R₃, X, Z, L₂ 및 w 는 본원에 정의된 바와 같다].

본 발명의 화합물은 광범위한 치료 적용에 걸쳐 유용성을 갖고, 단백질 키나아제 활성에 의해 적어도 부분적으로는 매개되는, 암과 같은 질환의 치료에 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 한 국면에서, 본원에 기재된 화합물은 그를 필요로 하는 대상에 대한 투여를 위한 약제학적으로 허용되는 조성물로서 제형화된다.

또다른 국면에서, 본 발명은 단백질 키나아제-매개 질환, 예컨대 암의 치료 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 그를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 단백질 키나아제-매개 질환은 오로라-2 키나아제-매개 질환이다.

본 발명의 또다른 국면은 생물학적 시료에서의 단백질 키나아제 활성 저해 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 그 생물학적 시료를 본원에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 단백질 키나아제는 오로라-2 키나아제이다.

본 발명의 또다른 국면은 환자에서 단백질 키나아제 활성을 저해하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 환자에게 본원에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 단백질 키나아제는 오로라-2 키나아제이다.

본 발명의 상기 및 다른 국면들은 후속되는 상세한 설명 및 첨부된 도면을 참고로 하여 자명해질 것이다. 끝으로, 본 발명의 각종 국면들을 더욱더 구체적으로 설정하기 위해 특정 특허 및 기타 문헌들이 본원에 인용되었다. 각각의 상기 문헌들은 본원에 전체가 참고문헌으로 포함된다.

도면의 간단한 설명

도 1 은 본 발명의 예시 화합물의 생체내 항-종양 활성을 나타낸다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 일반적으로는 단백질 키나아제 저해제로서 유용한 화합물 및 그와 관련된 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 상기 화합물은, 그의 입체이성질체, 프로드러그 및 약제학적으로 허용되는 염을 포함하여, 하기의 구조를 갖는다:

[화학식 I]

[식 중:

X 는 NH, S 또는 O 이며;

Z 는 CH 또는 N 이며;

R₁ 및 R₂ 는 상동이거나 또는 상이하며, 독립적으로 수소, 히드록실, 할로, -CN, -NO₂, -NH₂, -R, -OR, -SCH₃, -CF₃, -C(=O)OR, -OC(=O)R (식 중, R 은 알킬 또는 치환 알킬이다); 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 이며,

R₃ 은 수소, -NH₂, 알킬, -CN 또는 -NO₂ 이거나, 또는 R₃ 은 -L₃-Cycl₃ (식 중, L₃ 은 직접 결합, -S- 또는 -NH- 이며, Cycl₃ 은 탄소환, 치환 탄소환, 복소환 또는 치환 복소환이다) 이며;

L₂ 은 -C(=S)NH-, -NHC(=S)-, -NHC(=S)NH-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)-, -NHC(=O)NH-, -(CH₂)_n-, -NH(CH₂)_n-, -(CH₂)_nNH-, -NH(CH₂)_nNH-, -C(=S)NH(CH₂)_n-, -N HC(=S)(CH₂)_n-, -(CH₂)_nC(=S)NH(CH₂)_n-, -(CH₂)_nNHC(=S)(CH₂)_n-, -NHC(=O)-, -S(=O)₂-, -S(=O)₂NH-, -NHS(=O)₂-이며, 여기서 n 은, 각각의 경우, 상동이거나 또는 상이하며, 독립적으로 1, 2, 3 또는 4 이며;

w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -NHC(=O)R_y, -NHS(=O)₂R_y 이며, 여기서 R_y 은 알킬 또는 시클로알킬, -NH₂, -NH₂·HCl, 및 -S(=O)₂-R_z (식 중, R_z 은 알킬, 치환 알킬, 아민, N-메틸피페라진, 모르폴린 및 2-메틸피롤리딘으로부터 선택된다) 이다].

달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 청구의 범위에서 사용되는 하기의 용어들은 하기 논의되는 의미를 갖는다:

"알킬" 은 탄소수 1 내지 6, 바람직하게는 탄소수 1 내지 4 의 포화 선형 및 분지형 탄화수소 라디칼, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 2-프로필, n-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 등, 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필 또는 2-프로필을 지칭한다. 대표적인 포화 선형 사슬 알킬에는 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실, 등이 포함되며; 포화 분지형 알킬에는 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 등이 포함된다. 대표적인 포화 환형 알킬에는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, -CH₂-시클로헥실 등이 포함되며; 불포화 환형 알킬에는 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, -CH₂-시클로헥세닐 등이 포함된다. 환형 알킬이 또한 본원에서 "시클로알킬" 로 언급된다. 불포화 알킬은 근접하는 탄소 원자들 사이에 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 포함한다 (각각 "알케닐" 또는 "알키닐" 로 언급됨). 대표적인 선형사슬 및 분지형 알케닐에는, 에틸레닐, 프로필레닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 이소부틸레닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-메틸-1-부테닐, 2-메틸-2-부테닐, 2,3-디메틸-2-부테닐 등이 포함되며; 대표적인 선형사슬 및 분지형 알키닐에는 아세틸레닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-메틸-1-부티닐 등이 포함된다.

"알킬렌" 은 탄소수 1 내지 6 의 선형 포화 2 가 탄화수소 라디칼 또는 탄소수 3 내지 6 의 분지형 포화 2 가 탄화수소 라디칼, 예를 들어, 메틸렌, 에틸렌, 2,2-디메틸에틸렌, 프로필렌, 2-메틸프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌, 등, 바람직하게는 메틸렌, 에틸렌 또는 프로필렌을 의미한다.

"시클로알킬" 은 탄소수 3 내지 8 의 포화 환형 탄화수소 라디칼, 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실을 지칭한다.

"알콕시" 는 라디칼-OR_a (식 중, R_a 는 상기 정의된 바와 같은 알킬, 예를 들어 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시 등이다) 를 의미한다.

"할로" 는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 바람직하게는 플루오로 또는 클로로를 의미한다.

"할로알킬" 은 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3 개의, 상동이거나 또는 상이한 할로겐 원자로 치환된 알킬, 예를 들어, -CH₂Cl, -CF₃, -CH₂CF₃, -CH₂CCl₃, 등을 의미한다.

"할로알콕시" 는 라디칼-OR_b (식 중, R_b 는 상기 정의된 바와 같은 할로알킬이다), 예를 들어, 트리플루오로메톡시, 트리클로로에톡시, 2,2-디클로로프로폭시 등을 의미한다.

"아실" 은 라디칼-C(O)R_c (식 중, R_c 은 수소, 알킬 또는 상기 정의된 바와 같은 할로알킬이다), 예를 들어, 포르밀, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 부타노일, 등을 의미한다.

"아릴" 은 완전히 콘쥬게이션된 pi-전자계를 가진 탄소수 6 내지 12 의 전부 탄소인 단환형 또는 융합-고리 다환형 (즉, 인접한 탄소 원자쌍을 공유하는 고리) 기를 지칭한다. 아릴기의 예시는, 이에 제한되지 않지만, 페닐, 나프틸 및 안트라세닐이다. 아릴기는 치환 또는 비치환일 수 있다. 치환된 경우, 아릴기는 알킬, 할로알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 메르캅토, 알킬티오, 시아노, 아실, 니트로, 페녹시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 할로알킬, 할로알콕시, 카르복시, 알콕시카르보닐, 아미노, 알킬아미노 또는 디알킬아미노로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1, 2 또는 3 개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2 개의 치환기로 치환될 수 있다.

"헤테로아릴" 은 N, 0 또는 S 로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4 개의 고리 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 원자는 C 이고, 추가로 완전히 콘쥬게이션된 pi-전자계를 가진, 5 내지 12 개의 고리 원자의 단환 또는 융합환 (즉, 인접하는 원자쌍을 공유하는 고리) 기를 지칭한다. 비치환 헤테로아릴기의 예시는, 이에 제한되지 않고, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퓨린, 트리아졸, 테트라졸, 트리아진 및 카르바졸이다. 헤테로아릴기는 치환 또는 비치환일 수 있다. 치환된 경우, 헤테로아릴기는 알킬, 할로알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 메르캅토, 알킬티오, 시아노, 아실, 니트로, 할로알킬, 할로알콕시, 카르복시, 알콕시카르보닐, 아미노, 알킬아미노 또는 디알킬아미노로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1, 2 또는 3 개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2 개의 치환기로 치환된다.

"탄소환" 은 탄소수 3 내지 14 의 지방족 고리를 지칭한다. 또한, 용어 "탄소환" 은, 포화든 또는 부분적으로 불포화든, 임의로 치환된 고리를 지칭한다. 또한, 용어 "탄소환" 에는, 라디칼 또는 결합 지점이 지방족 고리 상에 있는 데칸히드로나프틸 또는 테트라히드로나프틸에서와 같이 하나 이상의 방향족 또는 비방향족 고리에 융합된 지방족 고리가 포함된다.

"복소환" 은 1, 2 또는 3 개의 고리 원자가 N, 0 또는 S(O)_m (식 중, m 은 0 내지 2 의 정수이다) 로부터 선택되는 헤테로원자이며, 나머지 고리 원자가 C 이고, 1 또는 2 개의 C 원자가 카르보닐기로 임의로 교체될 수 있는, 3 내지 14 개의 고리 원자를 가진 포화 환형 고리계를 지칭한다. 헤테로시클릴 고리는 독립적으로 알킬 (여기서, 알킬은 카르복시 또는 에스테르기로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다), 할로알킬, 시클로알킬아미노, 시클로알킬알킬, 시클로알킬아미노알킬, 시클로알킬알킬아미노알킬, 시아노알킬, 할로, 니트로, 시아노, 히드록시, 알콕시, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 히드록시알킬, 카르복시알킬, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 디알킬아미노알킬, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 포화 또는 불포화 헤테로시클로아미노, 포화 또는 불포화 헤테로시클로아미노알킬, 및 -COR_d (여기서, R_d 는 알킬이다) 로부터 선택되는 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3 개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다. 더 구체적으로는, 용어 헤테로시클릴에는, 이에 제한되지 않으나, 테트라히드로피라닐, 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란, 피페리디노, N-메틸피페리딘-3-일, 피페라지노, N-메틸피롤리딘-3-일, 피롤리디노, 모르폴리노, 4-시클로프로필메틸피페라지노, 티오모르폴리노, 티오모르폴리노-1-옥시드, 티오모르폴리노-1,1-디옥시드, 4-에틸옥시카르보닐피페라지노, 3-옥소피페라지노, 2-이미다졸리돈, 2-피롤리디논, 2-옥소호모피페라지노, 테트라히드로피리미딘-2-온 및 이들의 유도체가 포함된다. 특정 구현예에서, 복소환기는 할로, 알킬, 카르복시로 치환된 알킬, 에스테르, 히드록시, 알킬아미노, 포화 또는 불포화 헤테로시클로아미노, 포화 또는 불포화 헤테로시클로아미노알킬, 또는 디알킬아미노로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 개의 치환기로 임의로 치환된다.

"임의" 또는 "임의로" 는 후속하여 기재되는 사건 또는 상황이 반드시 발생하는 것은 아니나 발생할 수도 있으며, 해당 기재사항이 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 발생하지 않는 경우를 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, "알킬기로 임의로 치환된 헤테로환기" 는 알킬이 반드시 있어야 하는 것은 아니지만 존재할 수도 있으며, 해당 기재사항은 복소환기가 알킬기로 치환된 경우 및 복소환기가 알킬기로 치환되지 않은 경우를 포함한다는 것을 의미한다.

마지막으로, 본원에 사용된 용어 "치환" 은 하나 이상의 수소 원자가 치환기로 대체된 임의의 상기 언급된 기들 (예를 들어, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 탄소환, 복소환 등) 을 의미한다. 옥소 치환기 ("=0") 의 경우, 2 개의 수소 원자가 대체된다. 본 발명의 문맥에서 "치환기" 에는 할로겐, 히드록시, 옥소, 시아노, 니트로, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬, 알콕시, 티오알킬, 할로알킬, 히드록시알킬, 아릴, 치환 아릴, 아릴알킬, 치환 아릴알킬, 헤테로아릴, 치환 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환 헤테로아릴알킬, 복소환, 치환 복소환, 복소환알킬, 치환 복소환알킬, -NR_eR_f, -NR_eC(=O)R_f, -NR_eC(=0)NR_eR_f, -NR_eC(=O)OR_f, -NR_eSO₂R_f, -OR_e, -C(=0)R_e-C(=0)OR_e, -C(=0)NR_eR_f, -0C(=0)NR_eR_f, -SH, -SR_e, -SOR_e, -S(=0)₂R_e, -OS(=O)₂R_e, -S(=0)₂OR_e (식 중, R_e 및 R_f 는 상동이거나 또는 상이하며, 독립적으로 수소, 알킬, 할로알킬, 치환 알킬, 아릴, 치환 아릴, 아릴알킬, 치환 아릴알킬, 헤테로아릴, 치환 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환 헤테로아릴알킬, 복소환, 치환 복소환, 복소환알킬 또는 치환 복소환알킬이다) 가 포함된다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, X 은 NH 이며, Z 은 CH 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁, R₂ 및 R₃ 은 수소, -NH₂, -OCH₃, -OH, -CF₃, 할로 또는 -0(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 로부터 선택된다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, L₂ 는 -C(=S)NH- 또는 -C(=S) NHCH₂- 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, w 는 -S(=0)₂NHC(=O)CH₃ 또는 -S(=O)₂-R_z (식 중, R_z 은 C₁-C₃ 알킬, C₁-C₃ 치환알킬 또는 아민으로부터 선택된다) 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, w 는 -S(=0)₂NHC(=O)CH₃, -S(=0) ₂NH₂ 또는 -S(=0)₂CH₃ 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃ 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁, R₂ 및 R₃ 은 수소, -NH₂, -OCH₃, -OH, -CF₃, 할로 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 로부터 선택되며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 및 R₂ 는 수소, 할로, -CF₃ 또는 -OH 로부터 선택되며, R₃ 은 수소이며, w 는 -S(=O)₂NHC(=0)CH₃, -S(=0)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 이다.

상기 화학식 I 의 더욱 구체적인 국면에서, X 는 NH 이며, Z 는 CH 이며, L₂ 는 -C(=S)NH- 인, 화학식 II 을 갖는다:

[화학식 II]

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 및 R₂ 는 -OCH₃, -OH, -CF₃, 할로 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 로부터 선택되며, R₃ 은 수소 또는 -NH₂ 에서 선택된다.

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 및 R₂ 는 -OCH₃, -OH, -CF₃ 또는 할로로부터 선택되며, R₃ 은 수소이다.

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, w 은 -S(=O)₂NHC(=0)CH₃ 또는 -S(=O)₂-R_z (식 중, R_z 은 C₁-C₃ 알킬, C₁-C₃ 치환 알킬 또는 아민으로부터 선택된다) 이다.

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=0)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 이다.

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 및 R₂ 은 -OCH₃, -OH, -CF₃ 또는 할로로부터 선택되며, R₃ 은 수소이며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 이다.

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 및 R₂ 는 -OCH₃, -OH, -CF₃ 또는 할로로부터 선택되며, R₃ 은 수소이며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 이다.

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 및 R₂ 는 메톡시이며, R₃ 은수소이며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃ 인, 하기 화학식 III 을 갖는다:

[화학식 III]

상기 화학식 II 의 더욱 구체적인 국면에서, R₁ 은 -Cl 이며, R₂ 은 -CF₃ 이며, R₃ 은 수소이며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃ 인, 하기 화학식 IV 의 구조를 갖는다:

[화학식 IV]

상기 화학식 I의 더욱 구체적인 국면에서, 하기 표 I 에 제시된 구조를 갖는 화합물들이 제공된다.

동일한 분자식을 갖지만, 그의 원자 결합의 특성 또는 배열 또는 그의 원자들의 공간 상에서의 배열이 상이한 화합물들을 "이성질체" 로 지칭한다. 그의 원자들의 공간 상에서의 배열이 상이한 이성질체는 "입체이성질체" 로 지칭한다. 서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 "부분입체이성질체" 로 지칭하며, 서로 포개질 수 없는 거울상인 것을 "거울상이성질체" 로 지칭한다. 화합물이 대칭 중심을 갖는 경우, 예를 들어 4 개의 상이한 기에 결합된 경우, 한 쌍의 거울상이성질체가 가능하다. 거울상이성질체는 그의 대칭 중심의 절대적인 배치를 특징으로 하며, Cahn 및 Prelog 의 R- 및 S- 배열 규칙에 의하여(Cahn, R., Ingold, C., 및 Prelog, V. Angew. Chem. 78:413-47, 1966; Angew. Chem. Internat. Ed. Eng. 5:385-415, 511, 1966), 또는 분자가 편광 평면을 회전하여 우회전성 (dextrorotatory) 또는 좌회전성 (levorotatory) (즉, 각각 (+) 또는 (-)-이성질체로서) 으로 지정되는 방식에 의하여 기재된다. 키랄 화합물은 개별적인 거울상이성질체로 또는 그의 혼합물로서 존재할 수 있다. 동등한 비율의 거울상이성질체를 포함하는 혼합물을 "라세미 혼합물" 로 지칭한다.

본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있다: 따라서, 상기 화합물은 개별적인 (R)- 또는 (S)-입체이성질체로 또는 그의 혼합물로 제조될 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 청구의 범위에서 특정 화합물의 기재 또는 명시는 두 거울상 이성질체 및 그의 라세미 또는 그밖의 혼합물을 포함하는 것으로 의도한다. 입체이성질체의 입체화학의 결정 방법 및 분리 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다 (ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 제 4 판, March, J., John Wiley and Sons, New York City, 1992 의 제 4 장에서 논의된 것을 참조).

본 발명의 화합물은 호변(tautomerism) 현상 및 구조 이성질체화의 현상을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 화합물은 피롤 부분에 대해 2-인돌리논 부분을 연결하는 이중 결합에 대하여 E 또는 Z 배치를 가질 수 있거나, 또는 E 및 Z 의 혼합물일 수 있다. 본 발명은 오로라-2 키나아제 활성을 조절하는 능력을 갖는 임의의 호변체(tautomeric form) 또는 구조 이성질체 형태 및 이들의 혼합물을 포함하며, 이에 제한되지 않으며, 임의의 한 호변체 또는 구조이성질체 형태이다.

본 발명의 화합물이 유기체의 신체에서 효소에 의해 대사된다는 것이 고려되며, 예컨대 인간은 단백질 키나아제의 활성을 조절할 수 있는 대사물을 생성한다. 상기 대사물들은 본 발명의 범위에 속한다.

본 발명의 화합물은 하기의 일반적인 반응식 뿐만 아니라 실시예에 제시된 더욱 상세한 과정에 따라 당업자에 의해 제조될 수 있다.

(비)치환 6-원 방향족 부분의 염소화는 약 0℃ 에서 황 염화물의 존재 하에 수행될 수 있다. 4-클로로-(비)치환 벤젠 (2) 는, 바람직하게는 약 25℃ 를 초과하지 않는 온도에서, 발연 질산을 이용하여 질소화되어 1-클로로-(비)치환-2-니트로벤젠 (3) 을 제공할 수 있다. 에틸 2-시아노-2-(비)치환-2-니트로페닐)아세테이트 (4) 는 화합물 3 을, THF 중의 칼륨-tert-부톡시드의 존재 하에 에틸시아노아세테이트와 반응시켜 제조할 수 있다 (화합물 4 을 23% 의 수율로 제공함). 추가로, 수율은, 상기 단계에서 화합물을 3 을 K₂C0₃ 의 존재 하에 DMF 중에서 약 155℃ 의 온도로 6 시간 동안 반응시켜 최적화되어 에틸시아노 에스테르를 높은 수율로 제공할 수 있다. 에스테르 4 의 환원은, 과량의 Zn 더스트 (4 내지 6 당량) 로 공지된 조건을 이용하여 수행되어 에틸 2-아미노-5,6-디메톡시-1H-인돌-3-카르복실레이트 (5) 를 N-히드록시 부산물없이 제공할 수 있다.

에틸 2-아미노-5, 6-디메톡시-1 H-인돌-3-카르복실레이트 (5) 의 상응하는 디히드로-4H-피리미도[4,5-b]인돌로의 폐환은, 약 200 내지 220℃ 에서 포름아미드 및 촉매 나트륨 메톡시드 중에서 가열되어 수행될 수 있다. 디히드로-피리미딘은 디옥산 용매 중에서 티오닐클로라이드 및/또는 POCl₃ 를 이용하여 좋은 수율로 4-클로라이드 (6) 로 전환될 수 있다. 4-클로라이드는 반응식 1 에서 개요된 바와 같이 4-피페라진 치환 3환 동류 (analogue) 제조에 이용될 수 있다. 4-클로라이드는 피리딘의 존재 하에 디옥산 용매 중에서 피페라진과 환류 온도로 반응하여 화합물 8 을 좋은 수율로 제공할 수 있다. R₃ 위치에서의 치환기는 환형 에틸 에스테르를 시아노아세트아미드 및 무수 HCl 의 존재 하에 반응시켜 수득될 수 있으며, 구아니딘 동류 10 을 제공한다. 이들 화합물은 수성 NaOH 의 존재 하에 3-치환 3환 디히드로-피리미딘으로 폐환될 수 있다.

표적 화합물 제조에 이용될 수 있는 특정 중간체들이 반응식 2 에 개요되었으며, 반응식 3 에서는 상세하게 기재하고 있다. 다양하게 치환된 방향족 아민은 CaCO₃ 및 물의 존재 하에 디클로로메탄 중의 티오포스겐으로 처리하여 이소티오시아네이트 동류 13 을 좋은 수율로 제공할 수 있다. 4-치환 피페라진 동류를 가진 화학식 I 의 화합물은 화합물 13 을 피리딘 및 디옥산 용매의 존재 하에 반응시켜 제조될 수 있다. 아세토니트릴 중의 1-브로모-3-클로로프로판 및 세슘 카르보네이트로 처리한 화합물 14 는 1-(3-클로로프로폭시)-4-클로로-2-메톡시벤젠 15 을 제공한다. 각종 탄소환형 화합물, 예컨대 N-메틸피페라진, 모르폴린 및/또는 2-메틸피롤리딘은 아세토니트릴 중의 화합물 15 와 반응하여 화합물 17 을 높은 수율로 제공한다 (반응식 2). 후속적으로, 이는 질소화되어, 동일한 조건 하에 에틸 2-시아노-2-(비)치환-2-니트로페닐)아세테이트를 반응식 1 에서 나타내는 화합물 4 의 제조에 대해 기재된 바와 같이 제조했다.

본 발명의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 그대로 인간 환자에게 투여될 수 있거나, 또는 상기 물질이 적합한 담체 또는 부형제(들)과 혼합된 약제학적 조성물로 투여될 수 있다. 제형 및 약물의 투여에 대한 기술은 예를 들어 [REMINGTON'S PHARMACOLOGICAL SCIENCES, Mack Publishing Co., Easton, PA, 최근판] 에서 찾을 수 있을 것이다.

"약제학적 조성물" 은 본원에 기재된 하나 이상의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드러그와, 기타 화학 구성성분, 예컨대 약제학적으로 허용되는 부형제의 혼합물을 지칭한다. 약제학적 조성물의 목적은 유기체에 대한 화합물 투여를 촉진하는 것이다.

"약제학적으로 허용되는 부형제" 는 화합물의 투여를 추가로 촉진하기 위해 약제학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 지칭한다. 부형제의 예시에는, 이에 제한되지 않지만, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트, 각종 당류 및 유형의 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일 및 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다.

"약제학적으로 허용되는 염" 은 모 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 염들을 지칭한다. 상기 염에는 하기의 것이 포함된다: (1) 모 화합물의 자유 염기와 무기산, 예컨대 염산, 히드로브롬산, 질산, 인산, 황산 및 인산 등 또는 유기산, 예컨대 아세트산, 옥살산, (D)- 또는 (L)-말산, 말레산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 살리실산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산 등, 바람직하게는 염산 또는 (L)-말산의 반응으로 수득되는 산 부가염; 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어, 알칼리 금속 이온, 알 칼리 토금속 이온 또는 알루미늄 이온으로 치환되거나; 또는 유기 염기, 예컨대 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메트아민, N-메틸글루카민 등으로 배위되는 경우 형성되는 염.

본 발명의 화합물은 또한 프로드러그로 작용하거나 또는 프로드러그로 작용하도록 고안될 수 있다. "프로드러그" 는 생체내에서 모(母) 약물로 전환되는 약제를 지칭한다. 프로드러그는 종종 유용한데, 이는 일부 상황에서 이들이 모 약물보더 투여하기에 더욱 용이할 수 있기 때문이다. 이들은, 예를 들어 모 약물은 그렇지 않지만 경구 투여에 의해 생물에서 이용가능할 수 있다. 제한없이 프로드러그의 예시는, 에스테르 ("프로드러그"), 포스페이트, 아미드, 카르바메이트 또는 우레아로서 투여되는 본 발명의 프로드러그일 수 있다.

"치료 유효량" 은 치료할 장애의 하나 이상의 징후를 어느 정도 감(減)하는 투여되는 화합물의 양을 지칭한다. 암 치료의 경우에서, 치료 유효량은 하기의 유효성을 갖는 양을 지칭한다: (1) 종양 크기 감소; (2) 종양 전이 저해; (3) 종양 성장 저해; 및/또는 (4) 암과 연관된 하나 이상의 징후 감소.

본원에 사용된 용어 "단백질 키나아제-매개 상태" 또는 "질환" 은, 단백질 키나아제가 역할을 담당하는 것으로 공지된 임의의 질환 또는 기타 해로운 상태를 의미한다. 용어 "단백질 키나아제-매개 상태" 또는 "질환" 은 또한 단백질 키나아제 저해제로 처리하여 완화되는 질환 또는 상태를 의미한다. 상기 상태에는, 이에 제한되지 않지만, 암 및 기타 과증식성 장애가 포함된다. 특정 구현예에서, 암은 대장, 유방, 위장, 전립선 또는 난소 조직의 암이다.

본원에 사용된 용어 "오로라-2 키나아제-매개 상태" 또는 "질환" 은, 오로라-2 는 오로라가 역할을 하는 것으로 공지된 임의의 질환 또는 기타 해로운 상태를 의미한다. 용어 "오로라-2 키나아제-매개 상태" 또는 "질환" 은 또한 오로라-2 저해제를 처리하여 완화되는 질환 또는 상태를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, "투여하다" 또는 "투여" 는 본 발명의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 본 발명의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 본 발명의 약제학적 조성물을 단백질 키나아제-연관 장애의 예방 또는 치료를 위한 목적으로 유기체에 전달하는 것을 지칭한다.

적합한 투여 경로에는, 이에 제한되지 않으나, 경구, 직장내, 점막관통 또는 장관 투여, 또는 근육내, 피하, 골수내, 경막내, 직접적인 뇌실내, 정맥내, 유리체내, 복막내, 비강내 또는 안구내 투여가 포함될 수 있다. 특정 구현예에서, 바람직한 투여 경로는 경구 및 정맥내이다.

대안적으로, 화합물을 전신적인 방식보다는 국소적으로, 예를 들어 종종 축적부위 또는 서방형 제형물로, 직접적으로 고형 종양에 화합물의 주사를 통해 화합물을 투여할 수 있다.

더욱이, 표적하는 약물 전달계, 예를 들어 종양-특이적 항체로 코팅된 리포좀으로, 에서 약물을 투여할 수 있다. 이러한 방식으로, 리포좀은 종양에 선택적으로 취해지도록 표적화될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당업계에 널리 공지된 방법, 예를 들어 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 환제제조, 분말화, 에멀전화, 캡슐화, 포획화 또는 동결건 조 방법으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 활성 화합물을 약제학적으로 이용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 촉진시키는 부형제 및 보조제를 함유하는 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 담체를 이용하여 임의의 통상적인 방법으로 제형화될 수 있다. 적당한 제형물은 선택되는 투여 경로에 좌우된다.

주사를 위해서는, 본 발명의 화합물은 수용액, 바람직하게는 생리학적으로 상용성인 완충액, 예컨대 Hanks' 용액, Ringer's 용액, 또는 생리식염수 중에 제형화될 수 있다. 점막통과 투여를 위해서는, 투과될 장벽에 적합한 침투물이 제형물에 사용되어야 한다. 상기 침투물은 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.

경구 투여를 위해서는, 화합물은 활성 화합물을 당업계에 널리 공지된 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 제형화할 수 있다. 상기 담체는 본 발명의 화합물이 환자에게 경구적으로 투여되기 위한 정제, 필, 마름모제, 환제, 캡슐, 용액, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등과 같이 제형화될 수 있도록 해 준다. 경구용 약제학적 제제는, 고체 부형제를 이용하여, 임의로는 결과로서 수득되는 혼합물을 연마하고, 과립 혼합물을 가공한 후, 필요한 경우 기타 적합한 보조제를 첨가하여 정제 또는 환제 코어를 수득할 수 있다. 유용한 부형제는, 특히, 필러, 예컨대 락토오스, 수크로오스, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당, 예를 들어 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분과 같은 셀룰로오스 제제 및 기타 재료들, 예컨대 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸-셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 및/또는 폴리비닐-피롤리돈 (PVP)이다. 필요한 경우, 붕 해제, 예컨대 가교 폴리비닐 피롤리돈, 아가 또는 알긴산이 첨가될 수 있다. 나트륨 알기네이트와 같은 염이 또한 사용될 수 있다.

환제 코어는 적합한 코팅과 함께 제공된다. 이러한 목적으로, 임의로는 아라비아검, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티탄 디옥시드, 래커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 포함하는 농축된 당 용액이 사용될 수 있다. 활성 화합물 투여량의 상이한 조합을 식별하거나 또는 특징짓기 위해 정제 또는 환제 코팅에 염료 또는 안료가 첨가될 수 있다.

경구적으로 사용될 수 있는 약제학적 조성물에는 젤라틴으로 된 푸쉬-핏 (push-fit) 캡슐 뿐만 아니라 젤러틴 및 가소제, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 된 연질의 밀봉 캡슐이 포함된다. 푸쉬-핏 캡슐은 락토오스와 같은 필러, 전분과 같은 결합제 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제 및 임의로는 안정화제와 함께 혼합된 활성 성분을 포함할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물은 적합한 액체 예컨대 지방 오일, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁될 수 있다. 안정화제가 또한 상기 제형물에 첨가될 수 있다.사용될 수 있는 약제학적 조성물에는 경질 젤라틴 캡슐이 포함된다. 캡슐 또는 필은 활성 화합물을 빛으로부터 보호하기 위해 갈색 유리 또는 플라스틱 병에 포장될 수 있다. 활성 화합물 캡슐 제형물을 포함하는 용기는 바람직하게는 제어되는 실온(15 내지 30℃)에서 저장된다.

흡입에 의한 투여를 위해, 본 발명에 따른 사용을 위한 화합물은 압축 포장되거나 또는 분무기 및 적합한 추진체, 예를 들어 이에 제한되지 않지만 디클로로 디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라-플루오로에탄 또는 이산화탄소ㄹ를 이용한 에어로졸 스프레이의 형태로 통상적으로 전달될 수 있다. 압축 에어로졸의 경우, 투여량 단위는 정량 전달을 위한 밸브를 제공함으로써 제어될 수 있다. 예를 들어 흡입기 또는 주입기에 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 화합물 및 락토오스 또는 전분과 같은 적합한 분말 베이스의 분말 믹스를 포함하도록 제형화될 수 있다.

화합물들은 또한 예를 들어 순간 주사(bolus injection) 또는 연속주입(continuous infusion)에 의한 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 주사용 제형물은 보존제를 첨가하여 단위 투여량 형태, 예를 들어, 앰플 또는 다중-투여량 용기로 제시될 수 있다. 조성물은 오일성 또는 수성 비히클 중에 현탁액, 용액 또는 에멀전과 같은 형태를 취할 수 있고, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화 재료를 포함할 수 있다.

비경구 투여용 약제학적 조성물에는 수용성 형태의 수용액, 예컨대 이에 제한되지 않으나, 활성 화합물의 염이 포함된다. 추가적으로, 활성 화합물의 현탁액은 친지성 비히클 중에 제조될 수 있다. 적합한 친지성 비히클에는 지방 오일, 예컨대 참기름, 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레이트 및 트리글리세라이드, 또는 리포좀과 같은 재료가 포함된다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨 또는 덱스트란을 포함할 수 있다. 임의로는, 현탁액은 또한 적합한 안정화제 및/또는 고도로 농축된 용액 제조를 가능하게 하는 화합물의 안정성을 증가시키는 적합한 약제를 포함 할 수 있다.

대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어, 멸균된, 발열인자 제거수로 구성된 분말 형태일 수 있다.

화합물은 또한 예를 들어, 통상적인 좌제 베이스, 예컨대 코코아 버터 또는 기타 글리세라이드를 이용하여, 좌제 또는 정체관장(retention enema)과 같은 직장용 조성물로 제형화될 수 있다.

상기 기재된 제형물에 추가하여, 화합물은 또한 축적 제제(depot preparation)로서 제형화될 수 있다. 그러한 장기간 작용 제형물은 이식 (예를 들어, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 그러한 투여 경로를 위해 적합한 중합체성 또는 소수성 재료 (예를 들어, 약학적으로 허용되는 오일과의 에멀전) 와 함께, 또는 이온 교환 수지와 함께 제형화되거나 또는 조금씩 용해되는 유도체, 예컨대, 이에 제한되지 않지만 조금씩 용해되는 염으로 제형화된다.

본 발명의 소수성 화합물에 대한 약제학적 담체의 비제한적 예시는 벤질 알콜, 무극성 계면활성제, 수혼화성 유기 중합체 및 수상을 포함하는 공용매계, 예컨대 VPD 공용매계이다. VPD 는 3% w/v 벤질 알콜, 8% w/v 의 무극성 계면활성제 폴리소르베이트 80, 및 65% w/v 폴리에틸렌 글리콜 300 의 용액으로 무수 에탄올로 부피를 맞춘 용액이다. VPD 공용매계 (VPD:D5W) 는 수용액에 5% 덱스트로오스로 1:1 로 희석한 VPD 로 이루어진다. 상기 공용매계는 소수성 화합물이 잘 녹고, 전신 투여시 자체가 낮은 독성을 제공한다. 원래, 상기 공용매계의 비율은 그의 용 해도 및 독성 특징을 훼손하지 않고 상당히 가변적일 수 있다. 더욱이, 공용매 구성성분들의 구분되는 특징은 다양할 수 있다: 예를 들어, 기타 저독성 무극성 계면활성제가 폴리소르베이트 80 대신 사용될 수 있으며, 폴리에틸렌 글리콜의 분율 크기도 다양할 수 있고, 기타 생물상용성 중합체, 예를 들어 폴리비닐 피롤리돈이 폴리에틸렌 글리콜을 대체할 수 있고, 기타 당 또는 다당류가 덱스트로오스를 대체할 수 있다.

대안적으로, 소수성 약제학적 화합물에 대한 전달 시스템이 이용될 수 있다. 리포좀 및 에멀전이 소수성 약물을 위한 전달 비히클 또는 담체의 널리 공지된 예시이다. 추가로, 특정 유기 용매, 예컨대 디메틸술폭시드가 또한, 더 큰 독성의 댓가가 있긴 하지만, 이용될 수 있다.

추가적으로, 화합물은 서방성 시스템, 예컨대 치료제를 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투성 매트릭스를 이용하여 전달될 수 있다. 각종 서방성 매트릭스가 확립되어 있고, 당업자에게 널리 공지되어 있다. 서방성 캡슐은, 그의 화학적 특성에 따라서는, 수주 내지 100 일에 걸쳐 화합물을 방출할 수 있다. 치료제의 화학적 특성 및 생물학적 안정성에 따라서, 단백질 안정화를 위한 추가적인 전략이 이용될 수 있다.

본원에서 약제학적 조성물은 또한 적합한 고체 또는 겔상 담체 또는 부형제를 함유할 수 있다. 상기 담체 또는 부형제의 예시에는, 이에 제한되지 않으나, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트, 각종 당류, 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴 및 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다.

본 발명의 대다수의 단백질 키나아제-조절 화합물이, 청구되는 화합물이 음으로 또는 양으로 하전된 종류를 형성할 수 있는 생물학적으로 허용되는 염으로서 제공될 수 있다. 화합물이 양으로 하전된 부분을 형성하는 염의 예시에는, 이에 제한되지 않으나, 4 차 암모늄 (본원에 정의됨), 염, 예컨대 4 차 암모늄기의 질소 원자가 적당한 산과 반응하는 본 발명의 화합물로부터 선택되는 질소인 히드로클로라이드, 설페이트, 카르보네이트, 락테이트, 타르트레이트, 말레이트, 말레에이트, 숙시네이트와 같은 염이 포함된다. 본 발명의 화합물이 음으로 하전된 종들을 형성하는 염에는, 이에 제한되지 않으나, 화합물의 카르복실산기와 적당한 염기 (예를 들어, 수산화나트륨(NaOH), 수산화칼륨(KOH), 수산화칼슘(Ca(OH)₂) 등) 와의 반응으로 형성되는 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘 염이 포함된다.

본 발명에서의 용도에 적합한 약제학적 조성물에는 활성 성분이 의도하는 목적, 예를 들어 단백질 키나아제 활성의 조절 및/또는 단백질 키나아제-관련 장애의 치료 또는 예방을 달성하기에 충분한 양으로 포함되는 조성물이 포함된다.

더 구체적으로, 치료 유효량은 질환의 징후를 예방, 완화 또는 경감시키거나 또는 치료 대상의 생존을 연장시키기에 유효한 화합물의 양을 의미한다.

치료 유효량의 결정은, 특히 본원에 제공된 상세한 설명의 견지에서 당업자의 재량이다.

본 발명의 방법에서 사용되는 임의의 화합물에 대해, 초기에는 치료 유효량 또는 투여량은 세포 배양 검정으로부터 예측될 수 있다. 이어서, 세포 배양에서 결정되는 IC₅₀ (즉, 단백질 키나아제 활성의 최대값의 절반을 달성하는 시험 화합물의 농도) 을 포함하는, 순환 농도 범위 달성을 위해 동물 모델에서 사용되기 위한 투여량이 제형화될 수 있다. 상기 정보는 이어서 인간에서 유용한 투여량을 더욱 정확하게 계산하기 위해 이용될 수 있다.

본원에 기재된 화합물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서의 표준 약제학적 과정, 예를 들어 대상 화합물에 대한 IC₅₀ 및 LD₅₀ (둘 다 본원에서 논의되었다) 의 결정으로 결정될 수 있다. 상기 세포 배양 검정 및 동물 실험에서 수득되는 데이터는 인간에서의 이용을 위한 투여량 범위 계산에 이용될 수 있다. 투여량은 이용되는 투여 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 좌우되어 변경될 수 있다. 정확한 제형물, 투여 경로 및 투여량은 환자의 상태에 따라 개별 내과의에 의해 선택될 수 있다 (참고문헌은, 예를 들어, GOODMAN & GILMAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Ch., 제 9 판, Hardman, J. 편저, 및 Limbard, L., McGraw-Hill, New York City, 1996, p.46.).

투여량 및 간격은 키나아제 조절 효과를 유지하기 위해 충분한 활성 종들의 혈장 농도를 제공하기 위해 개별적으로 조정될 수 있다. 상기 혈장 농도는 최소 유효 농도 (MEC)로 지칭된다. MEC 는 각각의 화합물에 대해 가변적이나, 시험관내 데이터로부터 예측될 수 있는데, 예를 들어, 키나아제를 50 내지 90% 로 저해하기 위해 필요한 농도가 본원에 기재된 검정을 이용하여 규명될 수 있다. MEC 도달에 필요한 투여량은 개인 특성 및 투여 경로에 좌우될 것이다. HPLC 검정 또는 생물 검정이 혈장 농도 결정에 이용될 수 있다.

투여 간격도 또한 MEC 값을 이용하여 결정될 수 있다. 화합물들은 MEC 를 초과하는 혈장 수준을 기간의 10 내지 90%, 바람직하게는 30 내지 90%, 가장 바람직하게는 50 내지 90% 동안 유지하도록 하는 요법을 이용하여 투여되어야 한다.

현재, 본 발명의 화합물의 치료 유효량은 1 일 약 2.5 mg/m² 내지 1500 mg/m² 의 범위일 수 있다. 추가적인 예시 양은 0.2 내지 1000 mg/qid, 2 내지 500 mg/qid, 및 20 내지 250 mg/qid 의 범위이다.

국소 투여 또는 선택적 흡수의 경우, 약물의 유효한 국소 농도는 혈청 농도와 무관할 수 있으며, 정확한 투여량 및 간격을 결정하기 위해 당업계에 공지된 기타 과정들이 이용될 수 있다.

투여되는 조성물의 양은, 당연히 치료될 대상, 고통의 심각성, 투여 방식, 처방하는 내과의의 판단 등에 좌우된다.

원하는 경우, 조성물은 포장물 또는 디스펜서 장치, 예컨대 FDA 승인 키트로서, 활성 성분을 포함하는 하나 이상의 단위 투여량 형태를 포함할 수 있는 것에 제공될 수 있다. 포장물은 예를 들어 금속 또는 플라스틱 호일, 예컨대 블리스터 포장물을 포함할 수 있다. 포장물 또는 디스펜서 장치에는 또한 투여를 위한 지시사항이 수반될 수 있다. 포장물 또는 디스펜서에는 또한, 약제화물의 제조, 사용 또는 판매를 통제하는 정부 기관의 규정된 형식으로 용기에 제공되는 고지로서, 조성물의 제조 또는 인간 또는 동물 투여에 대한 기관의 승인을 반영하는 것이 수반 될 수 있다. 상기 고지는, 예를 들어 약물 처방 또는 승인된 물품의 반입에 대한 미국 식약청에 의해 승인된 라벨링일 수 있다. 상용성인(compatible) 약제학적 담체 중에 제형화된 본 발명의 화합물을 함유하는 조성물은 또한 제조되어, 적합한 용기에 위치시키고, 표시된 상태의 치료에 대해 라벨링될 수 있다. 라벨 상에 표시되는 적합한 상태에는, 종양의 치료, 혈관형성의 저해, 섬유증, 당뇨병의 치료 등이 포함될 수 있다.

상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 화합물 및 조성물은 오로라-2 키나아제에 의해 매개되는 질환 및 상태를 포함하는, 단백질 키나아제에 의해 매개되는 광범위한 질환 및 상태에서 이용가능성이 있다. 상기 질환에는, 예시로서 이에 제한되지 않으나, 암, 예컨대 폐암, NSCLC (비-소세포 폐암; non small cell lung cancer), 귀리 세포 암 (oat-cell cancer), 뼈암, 췌장암, 피부암, 융기성 피부 섬유육종, 두경부암, 피부 또는 안내 (intraocular) 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장결장암, 항문 영역의 암, 위암, 대장암, 유방암, 부인과 관련 종양 (예를 들어, 자궁 육종, 자궁관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁 경부의 암종, 질의 암종 또는 음문의 암종), 호지킨병 (Hodgkin's Disease), 간세포 암, 식도암, 소장암, 내분비계의 암 (예를 들어, 갑상선, 췌장 또는 부신의 암), 연조직의 육종, 요도암, 음경암, 전립선암 (특히, 호르몬-불응), 만성 또는 급성 백혈병, 소아의 고형 종양, 과호산구증가증, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 요관의 암 (예를 들어, 신장 세포 암종, 신우의 암종), 소아과의 악성종양, 중추신경계의 신생물 (예를 들어, 원발성 CNS 림프종, 척수축 종양 (spinal axis tumor), 속질모세포종, 뇌줄기신경아교종 또는 하 수체선종), 바렛 식도 (Barrett's esophagus) (조기-악성종양 증후군; pre-malignant syndrome), 신생물성 피부 질환, 건선, 균상식육종 및 전립선 비대증, 당뇨병 관련 질환, 예컨대 당뇨성 망막병증, 망막 허혈 및 신생혈관증식, 간경변, 혈관신생, 심혈관 질환, 예컨대 죽상동맥경화증, 면역학적 질환, 예컨대 자가면역 질환 및 신장 질환이 포함된다.

본 발명의 화합물은 하나 이상의 다른 화학치료제와 병용되어 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물의 투여량은 임의의 약물-약물 반응에 대해 조정될 수 있다. 한 구현예에서, 화학치료제는 유사분열 저해제, 알킬화제, 항대사제, 세포 사이클 저해제, 효소, 토포이소머라아제 저해제, 예컨대 CAMPTOSAR (irinotecan), 생물학적 응답성 개질제, 항호르몬, 혈관형성 저해제, 예컨대 MMP-2, MMP-9 및 COX-2 저해제, 항안드로겐, 백금 배위 착물 (시스플라틴 등), 치환 우레아, 예컨대 히드록시우레아; 메틸히드라진 유도체, 예를 들어, 프로카르바진; 부신피질 억제제, 예를 들어, 미토탄, 아미노글루테티마이드, 호르몬 및 호르몬 안타고니스트, 예컨대 아드레노코르티코스테로이드 (예를 들어, 프레드니손), 프로제스틴 (예를 들어, 히드록시프로게스테론 카프로에이트), 에스트로겐 (예를 들어, 디에틸스틸벤스테롤), 항에스트로겐, 예컨대 타목시펜, 안드로겐, 예를 들어, 테스토스테론 프로피오네이트, 및 아로마타아제 저해제, 예컨대 아나스트로졸 및 AROMASIN (엑제메스탄; exemestane) 로부터 선택된다.

병용하여 상기 방법이 수행될 수 있는 알킬화제의 예시에는, 이에 제한됨 없이, 단독으로 또는 류코보린과 추가로 병용되는 플루오로우라실 (5-EU); 기타 피리 미딘 유사체, 예컨대 UFT, 카페시타빈, 겜시타빈 및 시타라빈, 알킬술포네이트, 예를 들어, 부술판 (만성 과립구 백혈병의 치료에 이용됨), 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예를 들어, 벤조데파, 카르보쿠온, 메투레데파 및 우레데파; 에틸렌이민 및 메틸멜라민, 예를 들어, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸롤멜라민; 및 질소 머스타드, 예를 들어, 클로람부실 (만성 림프구 백혈병, 원발성 고분자글로빈혈증 및 비-호지킨 림프종 (non-Hodgkin's lymphoma) 의 치료에 이용됨), 시클로포스파미드 (호지킨병, 다발골수종, 신경모세포증, 유방암, 난소암, 폐암, 윌름즈 종양 (Wilm's tumor) 및 횡문근육종의 치료에 이용됨), 에스트라무스틴, 이포스파미드, 노벰브리친, 프레드니무스틴 및 우라실 머스타드 (원발성 혈소판증가증, 비-호지킨 림프종 및 난소암의 치료에 이용됨); 및 트리아진, 예를 들어, 다카르바진 (연조직 육종 치료에 이용됨) 이 포함된다.

병용하여 상기 방법이 수행될 수 있는 항대사성 화학치료제의 예시에는, 이에 제한됨없이, 엽산 유사체, 예를 들어, 메토트렉세이트 (급성 림프성 백혈병, 융모막암종, 균상식육종, 유방암, 두경부암 및 골육종의 치료에 이용됨) 및 프테로프테린; 및 퓨린 유사체, 예컨대 급성 과립구성, 급성 림프구성 및 만성 과립구성 백혈병의 치료에서 이용되는 티오구아닌 및 메르캅토퓨린이 포함된다.

병용하여 상기 방법이 수행될 수 있는 천연 생산물-기재 화학요법제의 예시에는, 이에 제한됨없이, 빈카 알카로이드, 예를 들어, 빈블라스틴 (유방 및 고환암의 치료에 이용됨), 빈크리스틴 및 빈데신; 에피포도필로톡신, 예를 들어, 에토포 사이드 및 테니포사이드 (이들 두가지 모두 고환암 및 카포시 육종 치료에 유용함); 항생물 화학요법제, 예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 미토마이신 (위장, 자궁경부, 대장, 유방, 방광 및 췌장암의 치료에 이용됨), 닥티노마이신, 테모졸로마이드, 플리카마이신, 블레오마이신 (피부, 식도 및 비뇨생식관암의 치료에 이용됨); 및 효소성 화학요법제, 예컨대 L-아사파라기나아제가 포함된다.

유용한 COX-II 저해제의 예시에는 Vioxx, CELEBREX (셀레콕시브), 발데콕시브, 파라콕시브, 로페콕시브 및 Cox 189 가 포함된다.

유용한 매트릭스 메탈로프로테나아제 저해제의 예시는, WO 96/33172 (1996년 10월 24일 공개), WO 96/27583 (1996년 3월 7일 공개), 유럽 특허 공보 97304971.1 (1997년 7월 8일 출원), 유럽 특허 출원 제 99308617.2 (1999년 10월 29일 출원), WO 98/07697 (1998년 2월 26일 공개), WO 98/03516 (1998년 1월 29일 공개), WO 98/34918 (1998년 8월 13일 공개), WO 98/34915 (1998년 8월 13일 공개), WO 98/33768 (1998년 8월 6일 공개), WO 98/30566 (1998년 7월 16일 공개), 유럽 특허 공보 606,046 (1994년 7월 13일 공개), 유럽 특허 공보 931,788 (1999년 7월 28일 공개), WO 90/05719 (1990년 5월 31일 공개), WO 99/52910 (1999년 10월 21일 공개), WO 99/52889 (1999년 10월 21일 공개), WO 99/29667 (1999년 6월 17일 공개), PCT 국제 출원 PCT/IB98/01113 (1998년 7월 21일 출원), 유럽 특허 공보 제 99302232.1 (1999년 3월 25일 출원), 영국 특허 출원 번호 9912961.1 (1999년 6월 3일 출원), U.S. 특허 제 5,863,949 (1999년 1월 26일 허여), U.S. 특허 5,861,510 (1999년 1월 19일 허여), 및 유럽 특허 공보 780,386 (1997년 6월 25일 공개)에 기 재되어 있으며, 이들 전부는 전체가 본원에 참고문헌으로 포함된다. 바람직한 MMP-2 및 MMP-9 저해제는 MMP-1 를 저해하는 활성이 아주 적거나 없는 것들이다. 더욱 바람직한 것은 다른 매트릭스-메탈로프로테아나제 (즉, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 및 MMP-13) 에 비해 MMP-2 및/또는 MMP-9 를 선택적으로 저해하는 것들이다.

본 발명에서 유용한 MMP 저해제의 일부 구체적인 예시는, AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830, 및 하기로부터 선택되는 화합물이다: 3-[4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐-(1-히드록시카르바모일-시클로펜틸)-아미노]-프로피온산; 3-엑소-3-[4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐아미노}-8-옥사비시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실산 히드록시아미드; (2R,3R) 1-[4-(2-클로로-4-플루오로-벤질옥시)-벤젠술포닐]-3-히드록시-3-메틸-피페리딘-2-카르복실산 히드록시아미드; 4-[4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐아미노]-테트라히드로-피란-4-카르복실산 히드록시아미드; 3-[4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐]-(1-히드록시카르바모일-시클로부틸)-아미노]-프로피온산; 4-[4-(4-클로로-페녹시)-벤젠술포닐아미노]-테트라히드로-피란-4-카르복실산 히드록시아미드; (R)3-[4-(4-클로로-페녹시)-벤젠술포닐아미노]-테트라히드로-피란-3-카르복실산 히드록시아미드; (2R,3R) 1-[4-(4-플루오로-2-메틸벤질옥시)-벤젠술포닐]-3-히드록시-3-메틸-피페리딘-2-카르복실산 히드록시아미드; 3-[(4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐]-(1-히드록시카르바모일-1-메틸-에틸)-아미노]-프로피온산; 3-[4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐]-(4-히드록시카르바모일-테트라히드로-피란-4-일)-아미노]-프로피온산; 3-엑소-3-[4-(4-클로로-페녹시)-벤젠술포닐아미노]-8- 옥사-비시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실산 히드록시아미드; 3-엔도-3-[4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐아미노]-8-옥사-비시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실산 히드록시아미드; 및 (R) 3-{4-(4-플루오로-페녹시)-벤젠술포닐아미노]-테트라히드로-퓨란-3-카르복실산 히드록시아미드; 및 이들 화합물의 약제학적으로 허용되는 염 및 용매화물.

기타 항-혈관형성제, 기타 COX-II 저해제 및 기타 MMP 저해제도 또한 본 발명에 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 기타 시그널 전달 저해제, 예컨대 EGFR (표피 성장 인자 수용체) 응답성을 저해할 수 있는 약제, 예컨대 EGFR 항체, EGF 항체 및, EGFR 저해제인 분자; VEGF (혈관 내피 성장 인자) 저해제; 및 erbB2 수용체 저해제, 예컨대 erbB2 수용체에 결합하는 유기 분자 또는 항체, 예컨대 HERCEPTIN (Genentech, Inc., South San Francisco, CA) 와 사용될 수 있다. EGFR 저해제는, 예를 들어 WO 95/19970 (1995년 7월 27일 공개), WO 98/14451 (1998년 4월 9일 공개), WO 98/02434 (1998년 1월 22일 공개) 및 U.S. 특허 5,747,498 (1998년 5월 5일 허여) 에 기재되어 있으며, 상기 물질들은 본원에 기재된 바와 같이 본 발명에서 이용될 수 있다.

EGFR-저해제에는, 이에 제한되지 않으나, 모노클로날 항체 C225 및 항-EGFR 22Mab (ImClone Systems, Inc., New York, NY), 화합물 ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc., Annandale, NJ), 및 OLX-103 (Merck & Co., Whitehouse Station, NJ), 및 EGF 융합 독소 (Seragen Inc., Hopkinton, MA) 가 포함된다.

상기 및 기타 EGFR-저해제가 본 발명에 사용될 수 있다. VEGF 저해제, 예를 들어 SU-5416 및 SU-6668 (Sugen Inc., South San Francisco, CA) 는 본 발명의 화합물과 배합될 수 있다. VEGF 저해제는, 예를 들어, WO 01/60814 A3 (2001년 8월 23일 공개), WO 99/24440 (1999년 5월 20일 공개), PCT 국제 출원 PCT/IB99/00797 (1999년 3월 3일 출원), WO 95/21613 (1995년 8월 17일 공개), WO 99/61422 (1999년 12월 2일 공개), U.S. 특허 5,834,504 (1998년 11월 10일 허여), WO 01/60814, WO 98/50356 (1998년 11월 12일 공개), U.S. 특허 5,883,113 (1999년 3월 16일 허여), U.S. 특허 5,886,020 (1999년 3월 23일 허여), U.S. 특허 5,792,783 (1998년 8월 11일 허여), WO 99/10349 (1999년 3월 4일 공개), WO 97/32856 (1997년 9월 12일 공개), WO 97/22596 (1997년 6월 26일 공개), WO 98/54093 (1998년 12월 3일 공개), WO 98/02438 (1998년 1월 22일 공개), WO 99/16755 (1999년 4월 8일 공개), 및 WO 98/02437 (1998년 1월 22일 공개) 에 기재되어 있으며, 이들 전부는 본원에 그 전체가 참고문헌으로 포함된다. 본 발명에 유용한 일부 특이적 VEGF 저해제의 예시는, IM862 (Cytran Inc., Kirkland, WA); 항-VEGF 모노클로날 항체 [Genentech, Inc.]; 및 안지오자임(angiozyme)인, 리보자임 유래의 합성 리보자임 (Boulder, CO) 및 Chiron (Emeryville, CA) 이다. 상기 및 기타 VEGF 저해제가 본원에 기재된 바와 같이 본 발명에 이용될 수 있다. pErbB2 수용체 저해제, 예컨대 GW-282974 (Glaxo Welicome plc), 및 모노클로날 항체 AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc., The Woodlands, TX) 및 2B-1 (Chiron) 는, 추가로 본 발명 의 화합물과 병용될 수 있고, 예를 들어 WO 98/02434 (1998년 1월 22일 공개), WO 99/35146 (1999년 7월 15일 공개), WO 99/35132 (1999년 7월 15일 공개), WO 98/02437 (1998년 1월 22일 공개), WO 97/13760 (1997년 4월 17일 공개), WO 95/19970 (1995년 7월 27일 공개), U.S. 특허 5,587,458 (1996년 12월 24일 허여), 및 U.S. 특허 5,877,305 (1999년 3월 2일 허여) 에 기재되어 있고, 이들은 전부 그 전체가 본원에 참고문헌으로 포함된다. 본 발명에 유용한 ErbB2 수용체 저해제는 또한, 본원에 전체가 참고문헌으로 포함되는 U.S. 특허 6,284,764 (2001년 9월 4일 허여) 에 기재되어 있다. 상기 언급된 PCT 공보, PCT 출원, US 특허 및 US 임시 출원에 기재된 erbB2 수용체 저해제 화합물 및 물질 뿐만 아니라 erbB2 수용체를 저해하는 기타 화합물 및 물질들도, 본 발명에 따라 본 발명의 화합물과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한, 이에 제한됨없이, 항종양 면역 응답성을 증강시킬 수 있는 약제, 예컨대 CTLA4 (세포독성 림프구 항원 4) 항체, 및 CTLA4 를 차단할 수 있는 기타 약제; 및 항증식제, 예컨대 기타 파네실 단백질 트랜스퍼라아제 저해제, 예를 들어, U.S. 특허, 6,258,824 B1 의 "Background" 부분에 인용된 참고문헌에 기재된 파네실 단백질 트랜스퍼라아제 저해제를 포함하는, 암 치료에 유용한 기타 약제와 함께 사용될 수 있다.

상기 방법은 또한 방사선요법과 병용하여 수행될 수 있는데, 여기서 방사선 요법과 병용되는 본 발명의 화합물의 양은 상기 질환의 치료에 유효하다.

방사선 요법의 적용 기술은 당업계에 공지되어 있으며, 상기 기술은 본원에 기재된 병용 요법에 이용될 수 있다. 상기 병용 요법에서 본 발명의 화합물의 투여는 본원에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다.

본 발명은 하기의 비제한적 실시예를 고려하여 추가로 이해될 것이다.

실시예 1 - 키나아제 저해제의 화학적 합성

¹H NMR 스펙트럼은 내부 표준으로서 용매를 이용하여 Varian 400 분광계 상에서 기록했다. 화학 변동은 ppm (δ) 으로 나타낸다. 양성자 자기 공명 화학 변동값은, 달리 언급되지 않는 한 중수소화 CDCl3 또는 DMSOd6 에서 측정했다. ESI 질량스펙트럼 (MS) 은 VG-Quattro II 및 PE-SEIEX (API) 질량 분광계 상에서 수득했다. 박층 크로마토그래피는 형광 표식자가 있는 250 ㎛ 층으로 코팅된 Merck Kieselgel silica 60 플레이트 상에서 수행했다. 구성성분들은 UV 광 (λ = 254 nm) 및 요오드 증발로써 가시화했다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 분리는 70 내지 230 메쉬 60 Å 실리카 겔 및, RediSep 플래쉬 컬럼을 이용하는 CombiFlash companion (Teledyne ISCO) 상에서 수행했다. 사용된 모든 용매들은 Aldrich 에서 입수한 최상 등급의 무수물이었다. 분석 HPLC 는 하기를 이용한 Waters Breeze 시스템 상에서 수행하고, 분(minute)으로 한 체류 시간 (RT) 으로서 결과를 냈다. 사용했던 컬럼은 대칭형 C18 5 ㎛, 4.6 x 150 mm 컬럼 (WAT045905) 이었다. 수분-민감성 화합물을 다룬 모든 실험들은 무수 질소 또는 아르곤 하에 수행했다. 특정하게 지정되지 않는 한, 출발 물질은 시판되어 입수가능한 것이며 (Aldrich, Fluka, Lancaster 및 TCI), 최상 등급의 것으로 추가 정제없이 사용했다. 적용가능한 유기 용액은 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 Yamamoto RE500 회전 증발기를 이용하여 15 내지 20 mmHg 로 증발시켰다.

실시예 2 - 반응식 1 에서의 4- 클로로 -1,2- 디메톡시 -벤젠 2 의 제조

열량계, CaCl₂ 가아드 관 (guard tube) 및 적하 깔때기가 있는 500 mL 의 3-구 플라스크에 0℃ 에서 25 g (23.06 mL, 1 당량) 의 베라톨 1 을 첨가한 후, 24.42 g (14.53 mL, 1 당량) 의 황 염화물을 적가했다. 적가 완료 후, 반응 혼합물을 1 시간 후 RT 가 되도록 하고, 감압 (125 내지 130℃) 하에 증류시켜, 수득된 황색 오일을 수집하고 건조시켜 화합물 2 (27.8 g, 89.6%) 를 황색 액체로서 수득했다.

실시예 3 - 1- 클로로 -4,5- 디메톡시 -2-니트로벤젠 3 의 제조

열량계 및 적하 깔때기가 있는 500 mL 의 3-구 플라스크에, 27.8 g (1 당량) 의 1,4-클로로-1,2-디메톡시벤젠 2 를 충전한 후, 온도가 25℃ 를 초과하지 않도록 하여 30.43 g (3 당량, 20.4 ml) 의 발연 질산을 적가했다. 적가 완료 후, 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 정치시키고, 수득된 고체 화합물 3 을 물로 처리하고, 황색 고체를 여과하고 물로 세척하고 건조시켜, 황색 고체를 수득했다 (31.3 g, 89.4%).

실시예 4 - 에틸 2- 시아노 -2-(4,5- 디메톡시 -2- 니트로페닐 )아세테이트 4 의 제조

칼륨 tert-부톡시드 32.28g (2 당량) 을 THF (250 mL) 중 에틸 시아노아세테이트 32.54 g (30.61 mL, 2 당량) 의 빙냉 용액에 충전시키고, 15 분 동안 교반했다. 백색 현탁액에, 화합물 3 (1-클로로-4,5-디메톡시-2-니트로벤젠) 31.30 g (1 당량) 을 첨가한 후, 반응 혼합물을 환류까지 24 시간 동안 가열했다. 냉각시킨 반응 혼합물을 물에 붓고, 디에틸 에테르에서 추출하고, 용매를 증발시켰다. 수득된 화합물, 미정제 에틸 2-시아노-2-(4,5디메톡시-2-니트로페닐)아세테이트 4 를 이후 단계에서 사용하기 전에 플래쉬 컬럼으로 진한 황색 오일로 정제했다 (9.5 g, 22.6%).

실시예 5 - 에틸 2-아미노-5,6- 디메톡시 -1 H-인돌-3- 카르복실레이트 5 의 제조

AcOH 50 mL 중 9.5 g (1 당량) 의 에틸 2-시아노-2-(4,5-디메톡시-2-니트로페닐)아세테이트 4 의 용액을 65℃ 에서 12 시간 동안 가열하면서 Zn 더스트 8.44 g (4 당량) 와 반응시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 필터 에이트를 통해 여과하고 AcOH 로 잘 세척하고 여과액을 농축시키고, 잔사를 물로 처리하고, 디클로로메탄으로 추출하고 컬럼 크로마토그래피로 갈색 고체로서 정제했다 (4.4 g, 55%).

실시예 6 - 6,7- 디메톡시 -3H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4(9H)-온 6 의 제조

에틸 2-아미노-5,6-디메톡시-1H-인돌-3-카르복실레이트 (5) 4.4 g (1 당량), NaOMe (900 mg) 및 포름아미드 (50 ml) 의 용액을 N₂ 하에 220℃ 에서 2 시간 동안 가열했다. 용액을 냉각시키고 2.5 일 동안 저장하고 여과했다. 포름아미드로부터 고체를 분리해 여과하고 물로 세척하고 건조시켜 화합물 6 (6,7-디메톡시-4-피페라진-1-일-9,9a-디히드로-4aH-피리미도[4,5-b]인돌)을 진갈색 고체로서 수득하고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 진갈색 고체로서 수득했다 (2.8 g, 70%).

실시예 7 - 4- 클로로 -6,7- 디메톡시 -9,9a- 디히드로 -4 aH - 피리미도[4,5-b]인돌 7

4-클로로-3환 및 퀴나졸린 빌딩 블록을 문헌의 방법 (Pandey, A. 등., J. Med. Chem. 2002, 45: 3772-93; Matsuno, K. 등., J. Med. Chem. 2002, 45: 3057-66; Matsuno, K. 등, J. Med. Chem. 2002, 45: 4513-23; and Venugopalan, B. 등., J. Heterocycl. Chem. 1988, 25: 1633-39) 을 이용하여 합성했다. 화합물 6 (2.8 g), POCl₃ (20 mL) 및 p-디옥산 65 mL 의 현탁액을 환류에서 6 시간 동안 가열했다. 수득한 혼합물을 냉각시키고, 용매를 증발시켰다. 미정제 생성물을 1% MeOH/DCM 을 사용하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 7 (2.2 g, 73.3 %) 을 연황색 고체로서 수득했다.

실시예 8 - 6,7- 디메톡시 -4-(피페라진-1-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 8

화합물 7 을 p-디옥산 (50 mL) 에 용해시키고, 피페라진 (3.9 g) 을 첨가한 후, 아르곤 하에 RT 에서 피리딘 (5 mL) 을 첨가했다. 반응 혼합물을 환류에서 16 시간 동안 가열하고, 이를 냉각시켰다. 용매를 진공 하에 제거하고, 수득한 미정제 생성물을 DCM 및 10% MeOH 용매계를 이용한 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제했다. 화합물 8 을 수득한 후, 정제하여 하프-화이트 고체 (3.9 g, 66.10%) 를 수 득했다.

실시예 9 - 반응식 2 에서의 N-아세틸-4- 이소티오시아나토 - 벤젠술폰아미드 13 의 제조

비(치환) 아민 및 또는 N-아세틸-4-아미노-벤젠술폰아미드를 DCM 25 mL 에 용해시키고, 15 mL 의 물에 용해시킨 0.934 g 의 CaCO₃ 및 0.534 mL 의 티오포스겐의 용액에 첨가했다. 반응 혼합물을 밤새 교반했다. 수득한 혼합물을 DCM 에서 추출하고, 건조시켜, 화합물 13 (0.462 g, 38.6%) 을 백색 고체로서 수득했다.

실시예 10 - 표 1 에서 화합물 번호 1 인 4-(6- 클로로 -7- 트리플루오로메틸 -9H-피 리미도[4,5-b]인 돌-4-일)-피페라진-1- 카르보티오산 (4- 아세틸술파모일 - 페닐 )-아미드의 제조

DCM 중 화합물; 6-클로로-4-(피페라진-l-일)-7-(트리플루오로메틸)-9H-피리미도 [4,5-b]인돌 (실시예 8 에 제공된 것과 유사한 방법으로 제조) 의 교반 용액에 화합물 13 을 첨가한 후, 피리딘을 첨가했다. 수득한 반응 혼합물을 RT 에서 12 시간 동안 교반했다. 반응 완료 후, 용매를 증발시켰다. 미정제 생성물을 DCM 및 5% MeOH 용매계를 사용하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 수득했다 (0.108g, 97%).

실시예 11 - 표 1 에서의 화합물 번호 2 인 4-(6,7- 디메톡시 -9H- 피리미 도[ 4.5-b]인돌 -4-일)-피페라진-1- 카르보티오산 (4- 아세틸술파모일 - 페닐 )-아미드의 제조

DCM 중 화합물 8 (실시예 8 에서와 같이 제조) 의 교반 용액에 화합물 13 을 첨가한 후, 피리딘을 첨가했다. 수득한 반응 혼합물을 RT 에서 12 시간 동안 교반했다. 반응 완료 후, 용매를 증발시켰다. 미정제 생성물을 DCM 및 5% MeOH 용매계를 이용하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 수득했다 (0.043 g, 59.1%).

실시예 12 - 표 1 에서의 화합물 3 인 , 4-(6- 클로로 -9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-일)-피페라진-1- 카르보티오산 (4- 아세틸술파모일 - 페닐 )-아미드의 제조

DCM 중 화합물 6-클로로-4-(피페라진-1-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌 (실시예 8 에 제공된 것과 유사한 과정을 이용하여 제조) 의 교반 용액에 화합물 13 을 첨가한 후, 피리딘을 첨가했다. 수득한 반응 혼합물을 RT 에서 12 시간 동안 교반했다. 반응 완료 후, 용매를 증발시켰다. 미정제 생성물을 DCM 및 10% MeOH 용매계를 사용하는 CombiFlash Companion 으로 정제하여 백색 고체로서 수득했다 (0.12 g, 63.3%).

실시예 13 - 반응식 2 에서의 1-(3- 클로로프로폭시 )-4- 클로로 -2- 메톡시벤젠 15 의 제조

아세토니트릴 중 화합물 4-클로로-2-메톡시페놀 14, 세슘 카르보네이트 및 1-브로모-3-클로로프로판을 환류에서 1 시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 증발시켰다. 수득한 잔사를 물 (20 mL) 에 용해시키고, DCM 에서 추출했다. DCM 층을 식염수로 세척하고 건조시켰다. 용매를 증발시키고, 수득한 고체를 에테르로 처리하고, 고체를 수집하여 화합물 15 (7.34 g, 99%) 를 연황색 오일로서 수득했다.

실시예 14 - 반응식 2 에서의 1-(3-(4- 클로로 -2- 메톡시페녹시 )프로필)-4- 메틸피페라진 17 의 제조

화합물 15 를 아세토니트릴에 용해시키고, N-메틸피페라진 (2 당량) 을 첨가하고, 수득한 반응 혼합물을 70℃ 에서 8 시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 증발시켰다. 잔사를 디에틸 에테르로 처리하고, 침전된 고체를 여과하고 건조시켜, 황갈색 고체 (5.9 g, 63.2%) 를 황갈색 고체로서 수득했다.

실시예 15 - 1-(3-(4- 클로로 -2- 메톡시 -5- 니트로페녹시 ) 프로필)-4- 메틸피페라진 18 의 제조

아세트산을 서서히 질산에 5℃ 에서 첨가했다. 분말화된 화합물 17 을 혼합물에 첨가하고, 15 분 동안 교반했다. 수득한 반응 혼합물을 RT 까지 승온시키고 밤새 교반했다. 용매를 증발시키고, 점성질의 액체를 빙수에 붓고, NaHCO₃ 용액으로 희석했다. 수득한 혼합물을 증발시키고, 디클로로메탄 중 5% MeOH 를 사용하는 실리카 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 황색 고체로서 수득했다 (1.8 g, 52.1%).

실시예 16 - 에틸 2- 시아노 -2-(4- 클로로 -2- 니트로페닐 )아세테이트의 제조

화합물 4, 5, 6 및 7 에 대해 제공된 것과 유사한 방법 (반응식 1 및 2) 을 이용하여 화합물 7-(3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시)-6-메톡시-4-(피페라진-1-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌을 제조했다.

실시예 17 - MP277 및 MP300 에 의한 오로라-2 키나아제 활성의 저해

예시 화합물 MP277 (화학식 IV) 및 MP300 (화학식 III) 을 오로라-2 키나아제 저해제 검정에서 평가했다.

[화학식 III]

[화학식 IV]

검정에서, 키나아제 활성은 키나아제 반응 후 용액에 잔류하는 ATP 의 양을 검광기 (luminometer) 를 이용해 루시퍼라아제에 의해 제공되는 광 단위 (LU) 측정으로 정량함으로써 측정했다. 백분율 저해율은 하기 등식을 이용하여, 개별 화합 물에 대해 약물이 없는 대조군 (DMSO 대조군) 및 오로라-2 효소가 없는 대조군 (ATP 대조군) 에 대한 약물 처리 반응의 검광기 검독값을 비교하여 계산했다:

50 ㎕ 반응에서, sf9 세포 (Upstate, Lake Placid, NY) 에서 제공되는 재조합 오로라-2 키나아제를 30℃ 에서 2 시간 동안 62.5 μM Kemptide (Calbiochem, San Diego, CA), 3 μM ATP (Invitrogen, Carlsbad, CA) 및 키나아제 반응 완충액 (40 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂ 및 0.1 ㎍/㎕ 우혈청 알부민 (BSA)) 과 함께 인큐베이션했다. 상기 반응은 약물 물질의 존재 하에 수행했는데, 이는 이미 원하는 농도로 DMSO 에 희석되었다. 인큐베이션 후, 50 ㎕ 의 Kinase-Glo

(Promega, Inc., Madison, WI) 용액을 각각의 반응 혼합물에 첨가하고, 10 분 동안 실온에서 평형화시켰다. Kinase-Glo 용액은 루시퍼라아제 효소 및 류시페린을 포함하는데, 이는 ATP 와 반응하여 광을 제공한다. 키나아제 활성은, 검광기 (Thermo-Electron, Vantaa, Finland) 를 이용하여 루시퍼라아제에 의해 제공된 광 단위 (LU) 를 측정함으로써 키나아제 반응 후 용액 내 잔류하는 ATP 의 양을 정량하여 측정했다.

50% 의 오로라-2 키나아제 활성이 저해되는 약물 농도 (IC₅₀) 를 예시 화합물 MP277 및 MP300 에 대해 측정했다. MP277 에 대한 IC50 는 0.049 μM 였고, MP300 에 대해서는 0.OO5 μM 미만이었다. MP277 및 MP300 에 대한 저해 활성은, 특히 예를 들어 MP277 및 MP300 와 구조적으로 연관된 화합물, 예컨대 MP277 및 MP300 상에 존재하는 하기의 구조가:

하기 중 하나로 치환된 것에 대해 관찰되는 현저히 더 낮은 수준의 활성과 대조시, 예상치않게 높았다:

따라서, 본 발명의 예시적인 화합물, 예컨대 MP277 및 MP300 은, 기타 구조적으로 연관된 화합물에서 관찰되는 것에 비해 오로라-2 키나아제에 대한 현저히 더 큰 저해 활성을 제공한다.

실시예 18 - MP277 는 암세포 세포독성을 유도한다

세포가 암 세포주를 사멸시키는 것을 평가하기 위해, 시험관내 세포독성 검정을 수행했다. 사용된 종양 세포주는 American Type Culture Collection 에서 판매하는 것이었으며, 하기와 같이 식별된다: Panc-1 (췌장), MiaPaCa-2 (췌장), MCF-7 (유방), HT-29 (대장), U2-OS (뼈육종) , OVCAR-3 (난소), HepG2 (간세포 암종) 및 TT (갑상선). 검정은 Cell-Titer-Glo Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (Promega Corp., Madison, WI) 를 이용했다. 첫번째로, 세포는 300 mg/L L-글루타민, 100 units/ml 페니실린, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신 및 10% 우태아 혈청 이 보충된 RPMI 1640 배지 (Cat# 21870-076, Invitrogen Corporation) 에서 배양했다. 모든 세포주는 37℃ 의 5% CO₂ 분위기인 습윤화된 인큐베이터에서 인큐베이션했다.

세포를 제 0 일에 96-웰 Microlite TCT 마이크로타이터 플레이트 (7418, Thermo Labsystems, Franklin, MA) 에서 그의 성장 속도에 따라 0.O9 mL 의 배지 중에 웰 당 2000 내지 10000 세포의 밀도로 플레이팅했다. 제 1 일에, 개별 화합물의 10 ㎕ 의 일련의 희석물을 플레이트에 3 벌씩 첨가했다. 습윤화된 인큐베이터에서 37℃ 에서의 4 일간의 인큐베이션 후, 세포를 Cell-Titer-Glo 시약으로 분해시켰는데, 이는 또한 루시퍼라아제 효소를 포함한다. 루시퍼라아제 반응은 분해된 세포로부터 방출되는 ATP 를 이용하여 광을 제공하며, 그의 세기는 ATP 의 양과 선형적인 상관관계가 있다. 이에, 제공된 광의 양은 약물 처리 후 웰에 남은 세포의 갯수를 반영한다. 상기 발광은 Luminoskan 검광기 (Thermo Electron Corp., Vantaa, Finland) 를 이용하여 측정했다. 데이터를 백그라운드에 대해 보정된 발광으로부터 계산된 대조군 세포의 생존 백분율로서 나타냈다. 세포의 생존 백분율은 처리된 웰의 평균 발광값을 대조군의 평균 발광값으로 나눈 후 100 을 곱하여 계산되었다.

하기 세포주에 대해 MP277 에 대해 계산된 IC₅₀ 값은: Panc-1, MiaPaCa-2, MCF-7, HT-29, U2-OS, OVCAR-3, HepG2 및 TT, 각각 하기와 같았다: 40.67 uM, 66.59 uM, 22.46 uM, 14.65 uM, 25.93 uM, 24.97 uM, 7.83 uM 및 51.67 uM. 상기 와 같이, MP277 에 대한 활성 수준은 구조적으로 연관된 화합물에 대해 관찰되는 수준에 비해 예상치않게 높았다.

실시예 19 - MP277 은 시험관내에서 종양 성장을 저해한다

살아있는 계에서의 종양 세포에 대한 MP277 의 유효성을 평가하기 위해, 마우스에서 이종이식 연구를 수행했다. 1 × 1O⁷ HT-29 인간 대장암 세포를 16 Nu/Nu 흉선 (athymic) 누드 마우스 (Charles River Laboratories, Wilmington, MA) 에 피하주사했다. 종양 체적은 공식 ((너비)² * 길이)/2 에 따라 계산했다. 종양을 부피가 약 100 mm³ 이 될 때까지 성장시키고 (제 0 일), 이때 마우스를 2 개의 군으로 무작위로 나누었다: 8 마리의 마우스에 25 mg/kg MP277 를 처리하고, 나머지 8 마리에는 동등한 부피의 약물 비히클을 제공했다. 본 연구에서, 사용했던 약물 비히클은 60% 프로필렌 글리콜, 30% 폴리에틸렌 글리콜 300, 10% 에탄올 및 15O mg/mL 2-히드록시프로필-베타-시클로덱스트린이었다. 각각의 마우스에 0.1 mL 의 약물 또는 비히클을 복강내에 q.d.x 5 의 일정으로 2 주간 투여했고, 사이클 사이에서는 2 일간 휴식했다. 본 연구 기간 동안 약물 또는 비히클로부터 눈에 띌만한 독성은 나타나지 않았다. 이러한 접근법으로, MP277 은 생체내 종양 성장 저해에 유효한 것으로 나타났고, 이 결과는 도 1 에 설명되어 있다.

실시예 20 - 오로라-2 키나아제 검정 및 암 세포-기재 세포독성 검정으로 결정되는 예시 화합물의 활성

본원에 기재된 예시 화합물은, 특히 상기 실시예 17 에 기재된 바와 같은 오 로라-2 키나아제 저해 검정에서 평가했다. 검정에서 시험한 화합물에는 상기 표 1 에 제시된 화합물 1, 2, 3, 4, 8, 26, 34, 42, 1O7 및 115 이 포함된다.

간략하게, 키나아제 활성은 검광기를 이용해 루시퍼라아제에 의해 제공되는 광 단위 (LU) 를 측정함으로써 키나아제 반응 후 용액 내 잔존하는 ATP 를 정량하여 측정했다. 백분율 저해율은 하기의 공식에 따라, 약물이 없는 것 (DMSO 대조군) 및 오로라-2 효소가 없는 것 (ATP 대조군) 에 대한 약물 처리 반응의 검광기 검독값을 비교하여 개별 화합물에 대해 결정했다:

50 ㎕ 반응에서, sf9 세포 (Upstate, Lake Placid, NY) 에서 제공되는 재조합 오로라-2 키나아제를 30℃ 에서 2 시간 동안 62.5 μM Kemptide (Calbiochem, San Diego, CA), 3 μM ATP (Invitrogen, Carlsbad, CA) 및 키나아제 반응 완충액 (40 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂ 및 0.1 ㎍/㎕ 우혈청 알부민 (BSA)) 과 함께 인큐베이션했다. 상기 반응은 약물 물질의 존재 하에 수행했는데, 이는 이미 원하는 농도로 DMSO 에 희석되어 있는 것이다. 인큐베이션 후, 50 ㎕ 의 Kinase-Glo

(Promega, Inc., Madison, WI) 용액을 각각의 반응 혼합물에 첨가하고, 10 분 동안 실온에서 평형화시켰다. Kinase-Glo 용액은 루시퍼라아제 효소 및 류시페린을 포함하는데, 이는 ATP 와 반응하여 광을 제공한다. 키나아제 활성은 검광기 (Thermo-Electron, Vantaa, Finland) 를 이용하여 루시퍼라아제에 의해 제공된 광 단위 (LU) 를 측정함으로써 키나아제 반응 후 용액 내 잔류하는 ATP 의 양을 정량하여 측정된다. 시험 화합물에 대한 IC₅₀ 값은 하기 표 2 에서 앞부분에 있는 "IC50 A2K" 로 제시된다.

추가로, 암 세포주에 대한 예시 시약의 세포독성 활성을 추가로 평가하기 위해, 구체적으로 상기 실시예 18 에 기재된 바와 같은 시험관내 세포독성 검정을 수행했다. 검정에서 시험한 화합물에는, 상기 표 1 에서 제시된 화합물 1, 2, 3, 4, 8, 26, 34, 42, 107 및 115 이 포함된다.

간략하게, 사용된 종양 세포주는 American Type Culture Collection 에서 구입했으며, 하기와 같이 식별된다: Panc-1 (췌장), MiaPaCa-2 (췌장), MCF-7 (유방), HT-29 (대장), U2-OS (뼈육종), OVCAR-3 (난소), HepG2 (간세포 암종) 및 TT (갑상선), PC-3 (전립선) 및 A549 (폐). 검정은 Cell-Titer-Glo Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (Promega Corp., Madison, WI) 를 이용했다. 첫번째로, 세포는 300 mg/L L-글루타민, 100 units/ml 페니실린, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신 및 10% 우태아 혈청이 보충된 RPMI 1640 배지 (Cat# 21870-076, Invitrogen Corporation) 에서 배양했다. 모든 세포주는 37℃ 의 5% CO₂ 분위기인 습윤화된 인큐베이터에서 인큐베이션했다.

세포를 제 0 일에 96-웰 Microlite TCT 마이크로타이터 플레이트 (7418, Thermo Labsystems, Franklin, MA) 에서 그의 성장 속도에 따라 0.O9 mL 의 배지 중에 웰 당 2000 내지 10000 세포의 밀도로 플레이팅했다. 제 1 일에, 개별 화합 물의 10 ㎕ 의 일련의 희석물을 플레이트에 3 벌씩 첨가했다. 습윤화된 인큐베이터에서의 37℃ 에서의 4 일간의 인큐베이션 후, 세포를 Cell-Titer-Glo 시약에서 분해시켰는데, 이는 또한 루시퍼라아제 효소를 포함한다. 루시퍼라아제 반응은 분해된 세포로부터 방출되는 ATP 를 이용하여 광을 제공하며, 그의 세기는 ATP 의 양과 선형적인 상관관계가 있다. 이에, 제공된 광의 양은 약물 처리 후 웰에 남은 세포의 갯수를 반영한다. 상기 발광은 Luminoskan 검광기 (Thermo Electron Corp., Vantaa, Finland) 를 이용하여 측정했다. 데이터를 백그라운드에 대해 보정된 발광으로부터 계산된 대조군 세포의 생존 백분율로서 나타냈다. 세포의 생존 백분율은 처리된 웰의 평균 발광값을 대조군의 평균 발광값으로 나눈 후 100 을 곱하여 계산되었다.

각종 암 세포주에 대해 시험된 각각의 화합물에 대해 계산된 IC₅₀ 값이 하기 표 2 에 제시되었다:

본 명세서에서 언급되고/되거나 출원 데이터지에 제시된 임의의 U.S. 특허, U.S. 특허 출원 공보, U.S. 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비-특허 출판물들은 본원에 그 전부가 참고문헌으로 포함된다.

상기에서, 본 발명의 구체적인 구현예들이 설명을 목적으로 본원에 기재되었지만, 다양한 변형들이 본 발명의 진의 및 범위를 벗어나지 않고 가능하다는 것이 감안되어야 한다. 따라서, 본 발명은, 첨부되는 청구의 범위에 의한 것이 아니고서는, 제한되지 않는다.

Claims

그의 입체이성질체, 프로드러그 및 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 하기 화학식 I 을 가진 화합물:

[화학식 I]

[식 중,

X 는 NH, S 또는 O 이며;

Z 는 CH 또는 N 이며;

R₁ 및 R₂ 는 상동이거나 또는 상이하며, 독립적으로 수소, 히드록실, 할로, -CN, -NO₂, -NH₂, -R, -OR, -SCH₃, -CF₃, -C(=O)OR, -OC(=O)R (식 중, R 은 알킬 또는 치환 알킬이다); 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 이며,

R₃ 은 수소, -NH₂, 알킬, -CN 또는 -NO₂ 이거나, 또는 R₃ 은 -L₃-Cycl₃ (식 중, L₃ 은 직접 결합, -S- 또는 -NH- 이며, Cycl₃ 은 탄소환, 치환 탄소환, 복소환 또는 치환 복소환이다) 이며;

L₂ 은 -C(=S)NH-, -NHC(=S)-, -NHC(=S)NH-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)-, -NHC(=O)NH-, -(CH₂)_n-, -NH(CH₂)_n-, -(CH₂)_nNH-, -NH(CH₂)_nNH-, -C(=S)NH(CH₂)_n-, -N HC(=S)(CH₂)_n-, -(CH₂)_nC(=S)NH(CH₂)_n-, -(CH₂)_nNHC(=S)(CH₂)_n-, -NHC(=O)-, -S(=O)₂-, -S(=O)₂NH-, -NHS(=O)₂-이며, 여기서 n 은, 각각의 경우, 상동이거나 또는 상이하며, 독립적으로 1, 2, 3 또는 4 이며;

w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -NHC(=O)R_y, -NHS(=O)₂R_y 이며, 여기서 R_y 은 알킬 또는 시클로알킬, -NH₂, -NH₂·HCl, 및 -S(=O)₂-R_z (식 중, R_z 은 알킬, 치환 알킬, 아민, N-메틸피페라진, 모르폴린 및 2-메틸피롤리딘으로부터 선택된다) 이다].
제 1 항에 있어서, X 가 NH 이며, Z 이 CH 인 화합물.
제 1 항에 있어서, R₁, R₂ 및 R₃ 이 수소, -NH₂, -OCH₃, -OH, -CF₃, 할로 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 로부터 선택되는 화합물.
제 1 항에 있어서, L₂ 이 -C(=S)NH-인 화합물.
제 1 항에 있어서, w 가 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃ 인 화합물.
제 1 항에 있어서, w 가 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 인 화합물.
제 1 항에 있어서, R₁, R₂ 및 R₃ 가 수소, -NH₂, -OCH₃, -OH, -CF₃, 할로, 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 로부터 선택되며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 인 화합물.
제 1 항에 있어서, R₁ 및 R₂ 가 수소, 할로, -CF₃ 또는 -OH 로부터 선택되며, R₃ 은 수소이며, w 는 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 인 화합물.
제 1 항에 있어서, X 가 NH 이며, Z 가 CH 이며, L₂ 가 -C(=S)NH-인, 하기 화학식 II 를 갖는 화합물:

[화학식 II]
제 9 항에 있어서, R₃ 이 수소이며, R₁ 및 R₂ 가 -OCH₃, -OH, -CF₃, 할로, 또는 -O(CH₂)_n-R_x (식 중, n 은 2 내지 4 이며, R_x 은 N-메틸피페라진, 모르폴린 또는 2-메틸피롤리딘이다) 로부터 선택되는 화합물.
제 9 항에 있어서, R₁ 및 R₂ 가 -OCH₃, -OH, -CF₃ 또는 할로로부터 선택되며, R₃ 이 수소인 화합물.
제 9 항에 있어서, w 가 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 인 화합물.
제 9 항에 있어서, R₁ 및 R₂ 가 -OCH₃, -OH, -CF₃ 또는 할로로부터 선택되며, R₃ 이 수소이며, w 이 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=0)₂CH₃ 인 화합물.
제 9 항에 있어서, R₁ 및 R₂ 가 -OCH₃, -OH, -CF₃ 또는 할로로부터 선택되며, R₃ 이 수소이며, w 이 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃, -S(=O)₂NH₂ 또는 -S(=O)₂CH₃ 인 화합물.
제 9 항에 있어서, R₁ 및 R₂ 가 메톡시이며, R₃ 가 수소이며, w 가 -S(=0)₂NHC(=O)CH₃ 인, 하기 화학식 III 을 갖는 화합물:

[화학식 III]
제 9 항에 있어서, R₁ 이 -Cl 이며, R₂ 가 -CF₃ 이며, R₃ 이 수소이며, w 가 -S(=O)₂NHC(=O)CH₃ 인, 하기 화학식 IV 를 갖는 화합물:

[화학식 IV]
약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항의 화합물을 함유하는 조성물.
치료 유효량의 제 17 항의 조성물을 그것을 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 단백질 키나아제-매개 질환의 치료 방법.
제 18 항에 있어서, 단백질-키나아제 매개 질환이 암인 방법.
제 18 항에 있어서, 암이 췌장, 유방, 난소, 대장, 간, 갑상선, 전립선, 폐 또는 뼈의 암인 방법.