JP6233812B2 - 選択的ヒストンデアセチラーゼ６阻害剤 - Google Patents

選択的ヒストンデアセチラーゼ６阻害剤 Download PDF

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Description

政府支援の確認 本発明は、政府による支援により許可番号ＣＡ １３４８０７の下で、米国衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）からなされた。政府は、本発明に所定の権利を有する。
関連出願の相互参照 本願は、全てその全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１２年３月７日出願の米国仮特許出願第６１／６０７，０８３号明細書；２０１２年３月３０日出願の米国仮特許出願第６１／６１８，１５０号明細書；２０１２年５月１８日出願の米国仮特許出願第６１／６４８，９４６号明細書；２０１２年５月２５日出願の米国仮特許出願第６１／６５１，５９５号明細書；２０１２年５月２５日出願の米国仮特許出願第６１／６５１，８９６号明細書；２０１２年７月２４日出願の米国仮特許出願第６１／６７４，９４２号明細書；及び２０１２年１０月１８日出願の米国仮特許出願第６１／７１５，３７９号明細書による優先権の利益を主張する。
エピジェネティック調節及び続く遺伝子発現又はサイレンシングは、その周囲を核ＤＮＡが巻き付くヒストンの尾を修飾する役割を果たす酵素間の相互作用を堅く調整する。ヒストンの様々な修飾因子の中でも、細胞は、これらのヒストンの円筒のリシン尾から、各々、アセチル基を結合し又は除去するヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）及びヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の両方の活性を均衡させることが可能である。この特定のエピジェネティックマーカーは、正のリシン残基がＤＮＡのホスフェート−バックボーンと密に相互作用することを遮蔽し、より「開放した」クロマチン状態をもたらす一方、デアセチラーゼはこれらのアセチル基を除去して、より「閉鎖した」又は圧縮されたＤＮＡ−ヒストン状態をもたらす。
現在、腫瘍学的目的のために認可された選択的ＨＤＡＣ６阻害剤（ＨＤＡＣ６ｉ）は存在しない。これらの分子は、比較的選択性が低いＨＤＡＣＩｓに関連した明らかな問題である副作用の低下をもたらし得るため、治療的手法として有利であろう（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ６ ｈａｖｅ ｈｙｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｔｕｂｕｌｉｎ ｂｕｔ ａｒｅ ｖｉａｂｌｅ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐ ｎｏｒｍａｌｌｙ」，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００８，２８（５）：１６８８−１７０１）。最近の前臨床努力は、ＨＤＡＣ６ｉを、特に既知の薬物との組み合わせで、所定の癌に使用することに向けられている（Ｓａｎｔｏ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ，ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＨＤＡＣ６ｉ，ＡＣＹ−１２１５，ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ」，Ｂｌｏｏｄ ２０１２，１１９（１１）：２５７９−２５８９）。ＨＤＡＣＩｓは、黒色腫の可能な治療薬として有用であり得る；しかしながら、今日までの研究は、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）等のパン−ＨＤＡＣＩの使用に焦点を当ててきた（Ｐｅｌｔｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｒｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＴＳＡ ｐｒｏｖｏｋｅｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ」，Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２００５，１８（３）：１９６−２０２；Ｆａｃｃｈｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ− ａｎｄ ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ２００４，（５）：５７３−５８２）。ＳＡＨＡは、全てのＺｎ−依存性ＨＤＡＣイソ酵素に対する活性を示すが、専ら皮膚Ｔ細胞リンパ腫の処置に認可されている（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ（ＨＤＡＣ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ ２０１０，１（３−４）：１１７−１３６）。ＨＤＡＣ６はＨＤＡＣ１１と会合を形成することが以前に報告されている（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＤＡＣ１１，ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｆａｍｉｌｙ」，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００２、２７７（２８）：２５７４８−２５７５５）。最近の努力は、免疫性応答の活性化における参加者としてのＨＤＡＣ１１の生物学的有意性を明らかにし始めており、これらの酵素の一方又は両方を標的とすることは治療的価値がある（Ｖｉｌｌａｇｒａ ｅｔ ａｌ．，「Ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ＨＤＡＣｌ １ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ」，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００９，１０（１）：９２−１００；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，「Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＬＡＱ８２４ Ａｕｇｍｅｎｔｓ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ−１０」，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１，１８６（７）：３９８６−３９９６）。それ故、ＨＤＡＣ６は、黒色腫及び他の癌の処置における標的として出現した。そのような手法は、パン−ＨＤＡＣｉの細胞毒性を欠いている可能性があるため、より安全な癌治療薬との関連で価値がある（Ｐａｒｍｉｇｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「ＨＤＡＣ６ ｉｓ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｒｅｄｏｘｉｎｓ ａｎｄ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｒｅｄｏｘ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ」，Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００８，７０５（２８）：９６３３−９６３８）。新しい、かつ選択的なＨＤＡＣ６阻害剤と、様々な癌を処置し、また様々な腫瘍免疫性応答を増強するためのそれらの作製及び使用方法とが必要とされている。本明細書に開示した組成物及び方法は、これら及び他の必要性に対処する。
本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する添付の図面は、下記に記載する数個の態様を図示する。
ＨＤＡＣの分類を示す画像である。 ＨＤＡＣがヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）の標的であることを示す画像である。 ＨＤＡＣ６がＡＰＣ内でＩＬ−１０遺伝子発現に影響を与えることが見出されたことを示す画像である。 ＨＤＡＣ６の遺伝子又は薬理的破壊がＩＬ−１０を阻害することを示す画像である。 ＨＤＡＣ６の遺伝子破壊がＡＰＣ機能を向上させることを示す画像である。 マクロファージ内のＩＬ−１Ｏ遺伝子プロモーターのＣＨＩＰ分析により示された機構が、ＬＰＳ刺激後のいくつかの時点での、Ｈ３及びＨ４アセチル化；ＨＤＡＣ６動員；並びにＳＴＡＴ３及び他の転写因子の結合を含むことを示す画像である。 ＨＤＡＣ６のノックダウンが、ＩＬ−１０遺伝子プロモーターへの転写活性化因子ＳＴＡＴ３の動員の低減をもたらすことを示す画像である。 遺伝子プロモーターに対するＳＴＡＴ３結合の破壊が、ＨＤＡＣ６の動員の低減と、ＩＬ−１０産生の減少とをもたらしたことを示す画像である。 ＨＤＡＣ６の破壊がＳＴＡＴ３リン酸化を阻害することを示す画像である。 ヒト黒色腫におけるＨＤＡＣ６及びＩＬ−１０ｍＲＮＡの発現の増大を示す一連の画像である。 マウス及びヒト黒色腫細胞株におけるＨＤＡＣ６発現を示す一連の画像である。 黒色腫におけるＨＤＡＣタンパク質発現を示す一連の画像である。 ＨＤＡＣ６を欠いた黒色腫細胞における増殖の低下及び細胞周期停止を示す一連の画像である。 ＨＤＡＣ６を欠いた黒色腫細胞が、より免疫原性であることを示す一連の画像である。 黒色腫細胞におけるＨＤＡＣ６の薬理的阻害が、細胞周期停止及びＭＨＣ分子の発現の増大をもたらしたことを示す一連の画像である。 ツバスタチンＡが、インビボにてＢ１６マウス黒色腫細胞内でＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３リン酸化を阻害することを示す画像である。 ツバスタチンＡが、黒色腫支持マウス内でワクチン接種に対する抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を増強することを示す一連の画像である。 ツバスタチンＡ、選択的ＨＤＡＣ６阻害剤が、ＡＰＣにおいてＳＴＡＴ３リン酸化及びＩＬ−１０遺伝子プロモーターへの動員を低下させたことを示す画像である。 ツバスタチンＡで処理したＡＰＣ内での表現型及び機能的変化を示す画像である。 ツバスタチンＡ処理ＡＰＣがナイーブＴ細胞のより良好な活性化因子であり、反応不顕性Ｔ細胞の応答性を回復することを示す画像である。 インビボでのツバスタチンＡの抗腫瘍効果を示すグラフである。 ツバスタチンＡがＰＥＭに影響しないことを示す一連の画像である。 マクロファージに対するツバスタチンＡの免疫学的効果を示す一連の画像である。 ツバスタチンＡがマクロファージにおけるＪＡＫＩＳＴＡＴ３経路を破壊することによりＩＬ−１０転写を阻害することを示す一連の画像である。 ＩＬ−１０産生に対するツバスタチンＡの阻害効果が、ＨＤＡＣ６の不在下で損失することを示すグラフである。 インビトロでの抗原提示試験の実験設計を示すフローチャートである。 ツバスタチンＡ処理マクロファージが、ナイーブＴ細胞のより良好な活性化因子であり、反応不顕性Ｔ細胞の機能を回復することを示す一連の画像である。 インビボでのツバスタチンＡを用いた処理が、ワクチン接種に対する抗原特異的Ｔ細胞の応答を増強することを示す一連の画像である。 ヒトＭＣＬ内でのＨＤＡＣ６発現を示す画像である。 ヒトＭＣＬ細胞株内でのＨＤＡＣ６の破壊を示す一連の画像である。 マウスＦＣ−ｍｕＭＣＬＩ細胞内でのＨＤＡＣ６の破壊示す画像である。 ＭＣＬ内でのＨＤＡＣ６阻害の免疫学的効果を示す画像である。ＬＰＳ又はＣｐＧ＋／−ＳＴ−３−０６又はツバスタチンＡに応答した、ＭＨＣ、同時刺激分子及び／又はサイトカイン産生における変化を示す。 ＳＴ−３−０６で処理されたＦＣｍｕＭＣＬＩ細胞の抗原提示機能を示す一連の画像である。 ツバスタチンＡで処理されたＦＣｍｕＭＣＬＩ細胞の抗原提示機能を示す一連の画像である。 インビボでのツバスタチンＡの抗腫瘍効果を示す画像である。 ＨＤＡＣ６の破壊が、ＡＰＣ内でＳＴＡＴ３リン酸化を阻害することを示す一連の画像である。 ＳＴ−３−０６が、ＡＰＣにおけるＳＴＡＴ３リン酸化及びＩＬ−１０遺伝子プロモーターへの動員を低下させたことを示す一連の画像である。 ５ｇの基質特異性を示すウェスタンブロットである。
本明細書に具体化され及び広く記載される、開示した材料、化合物、組成物、物品、装置及び方法の目的によれば、開示した主題は、組成物、並びに該組成物の作製及び使用方法に関する。別の態様において、開示した主題は、選択的ＨＤＡＣ６阻害剤としての活性を有する化合物、該化合物の作製及び使用方法、並びに該化合物を含む組成物に関する。所定の態様において、開示した主題は、本明細書に定義した式Ｉ又はＩＩ、特に式Ｉ−Ａ、Ｉ−Ｂ及びＩ−Ｃに示す化学構造を有する化合物に関する。尚更なる態様において、開示した主題は、患者における腫瘍学的疾患の処置のための方法に関する。例えば、本明細書には、有効量の本明細書に開示した化合物又は組成物を、腫瘍学的疾患を有する、例えば黒色腫を有する、及びその処置を必要とする患者に投与する方法が開示される。腫瘍細胞を阻害又は殺滅、ＨＤＡＣ６を阻害、及び腫瘍炎症性応答を増強するための、開示した化合物の使用方法も開示する。
開示した主題の更なる利点は、以下の記載及び図面に部分的に示され、また該記載から部分的に明らかとなり、又は下記に記載される態様の実践により学習され得る。下記に記載する利点は、特に添付の特許請求の範囲に特に指摘される要素及び組み合わせにより実現及び達成されるであろう。前述の一般的な記載と、以下の詳細な説明は、単に例示的及び説明的であり、制限的ではないことを理解するべきである。
本明細書に記載した材料、化合物、組成物、物品及び方法は、開示した主題の特定の態様の以下の詳細な記載、及びそこに含まれる実施例及び図面を参照することによりより容易に理解することができる。
本材料、化合物、組成物及び方法を開示及び記載する前に、以下に記載する態様は、特定の合成方法又は特定の試薬が勿論変動し得るため、その特定の合成方法又は特定の試薬に限定されないことを理解するべきである。本明細書で使用される専門用語は、特定の態様を記載することのみを目的とし、限定を意図するものではないことも理解するべきである。
また、本明細書全体を通して様々な刊行物が参照される。これらの刊行物の開示全体は、参照により本明細書に組み込まれて、開示した問題が関連する技術水準をより完全に記載する。開示した参考文献はまた、該参考文献が依存する、文章中に述べられるそれらに含まれる材料に関して、個々に及び特に、参照により本明細書に組み込まれる。
一般的な定義 本明細書及び続く特許請求の範囲において、多数の用語を参照するが、これらの用語は以下の意味を有するように定義される。
本明細書の記載及び特許請求の範囲の全体を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」並びにこの単語の他の形態、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、含むがそれらに限定されないことを意味し、例えば、他の付加物、構成要素、整数又は工程を排除することを意図するものではない。
明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別に指示しない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「組成物」に対する参照は、２つ以上のそのような組成物の混合物を含み、「化合物」に対する参照は、２つ以上のそのような化合物の混合物を含み、「薬剤」に対する参照は、２つ以上のそのような薬剤の混合物を含み、他の場合も同様である。
「随意の」又は「随意に」は、続いて記載する事象又は状況が起こり得る又は起こり得ないことを意味し、その記載は、事象又は状況が起こる場合と、起こらない場合を含む。
範囲は、本明細書で、「約」１つの特定の値から、及び／又は、他の「約」１つの特定の値までとして表され得る。そのような範囲が表現される場合、別の態様は、１つの特定の値から、及び／又は、他の特定の値までを含む。同様に、値が先行詞「約」を使用することによって近似値として表される場合、この特定の値は、他の態様を形成すると理解されるであろう。各範囲の端点は、他方の端点に関連して、及び、他方の端点とは独立して、の両方で有意であることを更に理解するであろう。本明細書に開示した多数の値が存在し、その各値は、その値自体に加えて、「約」その特定の値としても開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」も開示される。値が開示された際、当業者により適切に理解されるように、該値「以下」、「該値以上」、及び値の間の可能な範囲も開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示された場合、「１０以下」及び「１０以上」も開示される。明細書全体を通して、データが多数の異なる形式で提供され、このデータは終点及び始点、並びにデータ点の任意の組み合わせの範囲を表すことも理解される。例えば、特定のデータ点「１０」と特定のデータ点「１５」とが開示された場合、１０及び１５を超える、１０及び１５以上の、１０及び１５未満の、１０及び１５以下の、１０及び１５と等しい、並びに１０〜１５の間が開示されていると理解される。また２つの特定の単数の間の各単数も開示されていると理解される。例えば、１０及び１５が開示される場合、１１、１２、１３及び１４も開示されている。
本明細書で使用するように、「対象」は、個人を意味する。それ故、「対象」は、飼い慣らされた動物（例えば、猫、犬等）、家畜（例えば、畜牛、馬、豚、羊、山羊等）、研究室動物（例えば、マウス、兎、ラット、モルモット等）、及び鳥を含んでもよい。「対象」はまた、霊長類又はヒト等の哺乳動物も含み得る。
「低減する」、又は「低減している」若しくは「低減」等の該単語の他の形態は、事象又は特徴（例えば、腫瘍成長）の低下を意味する。これは典型的には、ある基準又は予想値との関連であることが理解され、換言すれば、これは相対的であるが、常に基準又は相対値を参照する必要はない。例えば、「腫瘍成長を低減する」は、基準又は対照に対して成長速度を低減することを意味する。
「予防する」、又は「予防している」若しくは「予防」等の該単語の他の形態は、特定の事象若しくは特徴を停止し、特定の事象若しくは特徴の発達若しくは進行を安定化若しくは遅延させ、又は特定の事象若しくは特徴が発生する機会を最小限にすることを意味する。予防するは、典型的には、例えば、低減するよりも絶対的であるため、対照との比較を必要としない。本明細書で使用されるように、ある事柄は、低減されるが予防されない場合があるが、低減される事柄はまた、予防される場合がある。同様に、ある事柄は、予防されるが低減されない場合があるが、予防される事柄はまた、低減される場合がある。低減する又は予防するが使用される場合、特に別に示されない限り、他方の単語の使用も明白に開示されることが理解される。
「処置する」、又は「処置した」若しくは「処置」等の該単語の他の形態は、組成物を投与し又は方法を実行して特定の特徴又は事象（例えば、腫瘍成長又は生存）を低減、予防、阻害又は排除することを意味する。用語「制御する」は、用語「処置する」と同義に使用される。
用語「抗癌」は、任意の濃度で細胞増殖及び／又は腫瘍成長を処置又は制御する能力を指す。
本明細書全体を通して、識別子「第１」及び「第２」は、開示した主題の様々な構成要素及び工程を単に区別することを補助するよう使用されることが理解される。識別子「第１」及び「第２」は、これらの用語で修飾された構成要素又は工程に、任意の特定の順番、量、優先度又は重要度を暗示することを意図するものではない。
化学的定義 本明細書で使用する用語「置換された」は、有機化合物の許容される置換基の全部を含むことが想定される。広い態様において、許容される置換基としては、有機化合物の非環式及び環式、分枝及び非分枝、炭素環式及び複素環式、並びに芳香族及び非芳香族置換基が挙げられる。例示的な置換基としては、例えば下記に記載するものが挙げられる。許容される置換基は、適切な有機化合物に関して１つ以上であってもよく、また同一又は異なってもよい。本発明の目的のために、窒素等のヘテロ原子は、水素置換基、及び／又は、ヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載した有機化合物の任意の許容される置換基を有してもよい。この開示は、有機化合物の許容される置換基に限定することを如何様にも意図するものではない。また、用語「置換」又は「で置換された」は、そのような置換が、置換原子及び置換基の許容された原子価に従い、また、その置換が、安定な化合物、例えば再配置、環化、排除等の転換を自発的に受けない化合物をもたらす、暗黙の条件を含む。
「Ｚ１」「Ｚ２、」「Ｚ３」及び「Ｚ４」は、様々な特定の置換基を表す一般的記号として本明細書で使用される。これらの記号は、本明細書に開示したものに限定されない任意の置換基であってもよく、また、それらがある場合に所定の置換基であると定義される場合、それらは別の場合に、いくつかの他の置換基として定義され得る。
本明細書で使用する用語「脂肪族」は、非芳香族炭化水素基を指し、分枝及び非分枝のアルキル、アルケニル又はアルキニル基を含む。
本明細書で使用する用語「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシル等の、１〜２４個の炭素原子からなる分枝又は非分枝の飽和炭化水素基である。アルキル基はまた、置換され又は非置換であってもよい。アルキル基は、下記に記載するように、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、又はチオールを含むが、これらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
明細書全体を通して、「アルキル」は、一般に非置換アルキル基及び置換アルキル基の両方を指すように使用され；しかしながら、置換アルキル基はまた、アルキル基上の特定の置換基を特定することによって、本明細書で特に参照される。例えば、用語「ハロゲン化アルキル」は、１つ以上のハロゲン化物、例えばフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素で置換されたアルキル基を特に指す。用語「アルコキシアルキル」は、下記に記載する１つ以上のアルコキシ基で置換されたアルキル基を特に指す。用語「アルキルアミノ」は、下記に記載する１つ以上のアミノ基で置換されたアルキル基を特に指す。ある場合に「アルキル」が使用され、他の場合に「アルキルアルコール」等の特定の用語が使用されるとき、用語「アルキル」は、「アルキルアルコール」等の特定の用語を指さないと暗示することを意味しない。
この慣例は、本明細書に記載した他の基にも使用される。即ち、「シクロアルキル」等の用語は、非置換及び置換シクロアルキル部分の両方を指すが、置換部分は、本明細書で更に詳細に特定される；例えば、特定の置換シクロアルキルは、例えば「アルキルシクロアルキル」と称され得る。同様に、置換アルコキシは、特に例えば「ハロゲン化アルコキシ」と称され得、特定の置換アルケニルは、例えば「アルケニルアルコール」等と称され得る。再度、「シクロアルキル」等の一般的用語、及び「アルキルシクロアルキル」等の特定の用語の使用の慣例は、一般的用語が特定の用語を含まないと暗示することを意味しない。
本明細書で使用する用語「アルコキシ」は、単一の末端エーテル結合を介して結合したアルキル基であり；即ち「アルコキシ」基は−ＯＺ１として定義することができ、Ｚ１は上記で定義したアルキルである。
本明細書で使用する用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む構造式を有する、２〜２４個の炭素原子からなる炭化水素基である。（Ｚ１Ｚ２）Ｃ＝Ｃ（Ｚ３Ｚ４）等の非対称構造は、Ｅ及びＺ異性体の両方を含むことが意図される。構造式において非対称アルケンが存在することを仮定することができ、又は、結合記号Ｃ＝Ｃによって明白に示すことができる。アルケニル基は、下記に記載するように、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
本明細書で使用する用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む構造式を有する、２〜２４個の炭素原子からなる炭化水素基である。アルキニル基は、下記に記載するように、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
本明細書で使用する用語「アリール」は、ベンゼン、ナフタレン、フェニル、ビフェニル、フェノキシベンゼン等を含むがこれらに限定されない任意の炭素系芳香族基を含む基である。用語「ヘテロアリール」は、芳香族基の環内に組み込まれた少なくとも１つのヘテロ原子を有する芳香族基を含む基として定義される。ヘテロ原子の例としては、窒素、酸素、硫黄及びリンが挙げられるが、これらに限定されない。用語「アリール」に含まれる用語「非ヘテロアリール」は、ヘテロ原子を含まない芳香族基を含む基を定義する。アリール又はヘテロアリール基は、置換され又は非置換であってもよい。アリール又はヘテロアリール基は、本明細書に記載したように、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。用語「ビアリール」は、特定のタイプのアリール基であり、アリールの定義に含まれる。ビアリールは、ナフタレンにおけるような、縮合環構造を介して互いに結合した、又はビフェニルにおけるような、１つ以上の炭素−炭素結合を介して取り付けられた２つのアリール基を指す。
本明細書で使用する用語「シクロアルキル」は、少なくとも３つの炭素原子から構成された非芳香族炭素系環である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキル」は、環の炭素原子の少なくとも１つが、窒素、酸素、硫黄又はリン等であるがこれらに限定されないヘテロ原子で置換されている、上記に定義したシクロアルキル基である。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、置換され又は非置換であってもよい。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、本明細書に記載したように、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
本明細書で使用する用語「シクロアルケニル」は、少なくとも３つの炭素原子から構成され、かつ少なくとも１つの二重結合、即ちＣ＝Ｃを含む非芳香族炭素系環である。シクロアルケニル基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル等が挙げられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルケニル」は、上記に定義したシクロアルケニル基の一タイプであり、環の炭素原子の少なくとも１つが、窒素、酸素、硫黄又はリン等であるがこれらに限定されないヘテロ原子で置換されている用語「シクロアルケニル」の意味に含まれる。シクロアルケニル基及びヘテロシクロアルケニル基は、置換され又は非置換であってもよい。シクロアルケニル基及びヘテロシクロアルケニル基は、本明細書に記載したように、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
用語「環式基」は、アリール基、非アリール基（即ち、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル及びヘテロシクロアルケニル基）のいずれか、又は両方を指すように使用される。環式基は、置換され又は非置換であってもよい１つ以上の環系を有する。環式基は、１つ以上のアリール基、１つ以上の非アリール基、又は１つ以上のアリール基及び１つ以上の非アリール基を含んでもよい。
本明細書で使用する用語「アルデヒド」は、式−Ｃ（Ｏ）Ｈにより表される。本明細書全体を通して、「Ｃ（Ｏ）」又は「ＣＯ」は、本明細書で「カルボニル」とも称されるＣ＝Ｏに関する略語である。
本明細書で使用する用語「アミン」又は「アミノ」は、式−ＮＺ１Ｚ２により表され、Ｚ１及びＺ２は、各々、水素、上述したアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロシクロアルケニル基等の、本明細書に記載した置換基であってもよい。「アミド」は、−Ｃ（Ｏ）ＮＺ１Ｚ２である。
本明細書で使用する用語「カルボン酸」は、式−Ｃ（Ｏ）ＯＨにより表される。本明細書で使用する「カルボキシレート」又は「カルボキシル」基は、式−Ｃ（Ｏ）Ｏ−により表される。
本明細書で使用する用語「エステル」は、式−ＯＣ（Ｏ）Ｚ１又は−Ｃ（Ｏ）ＯＺ１により表され、Ｚ１は、上述したアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
本明細書で使用する用語「エーテル」は、式Ｚ１ＯＺ２により表され、Ｚ１及びＺ２は、独立して、上述したアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
本明細書で使用する用語「ケトン」は、式Ｚ１（Ｏ）Ｚ２により表され、Ｚ１及びＺ２は、独立して、上述したアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
本明細書で使用する用語「ハロゲン化物」又は「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
本明細書で使用する用語「ヒドロキシル」は、式−ＯＨにより表される。
本明細書で使用する用語「ニトロ」は、式−ＮＯ２により表される。
本明細書で使用する用語「シリル」は、式−ＳｉＺ１Ｚ２Ｚ３により表され、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は、独立して、水素、上述したアルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
用語「スルホニル」は、本明細書では、式−Ｓ（Ｏ）２Ｚ１により表されるスルホオキソ基を指し、Ｚ１は、水素、上述したアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
本明細書で使用する用語「スルホニルアミノ」又は「スルホンアミド」は、式−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−により表される。
本明細書で使用する用語「チオール」は、式−ＳＨにより表される。
本明細書で使用する用語「チオ」は、式−Ｓ−により表される。
本明細書で使用する「Ｒ１」、「Ｒ２」、「Ｒ３」、「Ｒｎ」等（ｎは、ある整数である）は独立して、上記に列挙した基の１つ以上を所有してもよい。例えば、Ｒ１が直鎖アルキル基の場合、アルキル基の水素原子の１つは、随意にヒドロキシル基、アルコキシ基、アミン基、アルキル基、ハロゲン化物等で置換されてもよい。 選択される基に応じて、第１の基は第２の基に組み込まれてもよく、又は代替的に、第１の基は第２の基に懸垂（即ち取り付け結合）されてもよい。例えば、「アミノ基を含むアルキル基」という表現により、アミノ基は、アルキル基のバックボーンに組み込まれてもよい。代替的に、アミノ基は、アルキル基のバックボーンに取り付けられてもよい。選択される基の性質は、第１の基が第２の基に埋め込まれるか又は取り付けられるかを決定するであろう。
反対に述べない限り、実線のみで示され、くさび又は破線で示されない化学結合を有する式は、各々の可能な異性体、例えば各エナンチオマー、ジアステレオマー、及びメソ化合物、並びに、ラセミ又はスカレミック混合物等の異性体の混合物を想定している。
ここで、開示した材料、化合物、組成物、物品及び方法の特定の態様を詳細に参照し、それらの例は、添付の実施例及び図面に示されている。
化合物 多様なＨＤＡＣ６阻害剤が研究されている（Ｂｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｒａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｉｍｐｌｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｙｉｅｌｄ ａ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ，Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ＨＤＡＣ６ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ Ａ」，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１０，１３２（３１）：１０８４２−１０８４６；Ｋａｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｃｏｎｄ−Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ６ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｆｏｘｐ３＋Ｔ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｃｅｌｌｓ」，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２０１２，５５（２）：６３９−６５１）。これらの薬剤の特徴は、基準の阻害剤中に構築される、「キャップ−リンカー−亜鉛結合基」系を含むベンジルリンカーの存在である。亜鉛結合基（ＺＢＧ）を有さないＨＤＡＣｉを開示している報告が存在する（Ｖｉｃｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ，「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ＨＤＡＣ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｔｈａｔ Ｌａｃｋ ａｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｉｔｅ Ｚｎ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ」，ＡＣＳ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ２０１２，３（６）：５０５−５０８）。これらの薬剤は、クラス１酵素に対して中程度の活性を所有する。
本明細書に開示した化合物は、ＺＢＧ、最も好ましくはヒドロキサム酸基を維持する。更に、開示した化合物は、ベンジルヒドロキサム酸骨格に組み込まれた所定の尿素ベースのキャップ基を含んで、インビトロでの抗黒色腫活性を有する強力かつ選択的なＨＤＡＣ６阻害剤をもたらす。従って、本明細書には、式Ｉ：

を有する化合物、又はその薬学的に許容可能な塩又は水和物を開示し、
式中、Ａは、アリール、ヘテロアリール、又はＣ１〜Ｃ８アルキルであり、これらのいずれかは、随意にアセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、又はニトロから選択される１つ以上の基で置換され；Ｒ１及びＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ１〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアリール、アリール、Ｃ１〜Ｃ３アルキルヘテロアリール、又はヘテロアリールから独立して選択され、これらのいずれかは、随意にアセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、又はニトロで置換され；又はＲ１及びＲ２は、一緒になって２個の原子を含むアルキレン架橋を形成して、−ＮＣ（Ｏ）Ｎ−部分と共に５員環が形成されるように連結され、その場合、Ａは、上記に定義した通りであり又は水素であり、またその５員環は、随意にＲ１’、Ｒ２’、Ｒ１’’、及びＲ２’’で置換され、これらは独立して、水素、又はＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアリール、アリール、Ｃ１〜Ｃ３アルキルヘテロアリール、若しくはヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にアミノ、アリール、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロ、又はヒドロキシで置換され；又はＲ１’及びＲ１’’は一緒になって若しくはＲ２’’及びＲ２’は一緒になってカルボニル（即ち、＝Ｏ）を形成し；又はＲ１’及びＲ２’は存在せず、Ｒ１’’及びＲ２’’は一緒になって縮合フェニル基を形成し；Ｒ６及びＲ７は、独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、又は一緒になって４若しくは５個の原子を含むアルキレン架橋を形成して、窒素と共に５または６員環が形成されるように連結される。
いくつかの例において、Ｒ１及びＲ２は両方とも水素の場合、Ａはヒドロキシフェニルではない。
特定の例において、Ａは、随意にＣ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、ハロ、ヒドロキシ、又はチオールで置換されたフェニル、ピリジル、オキサゾリジル、又はピリミジルであってもよい。尚別の例において、Ａは、フェニル、又はＣ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、若しくはハロで置換されたフェニルであってもよい。尚別の例において、Ａは、ピリジル、又はＣ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、若しくはハロで置換されたピリジルであってもよい。好ましい例において、Ａは、フェニル、又はメトキシル置換フェニル、又はハロ置換フェニルである。更なる例では、Ａは、フェニルであってもよい。尚更なる例では、Ａは、１つ以上のメトキシル、エトキシル、又はプロポキシル基で置換されたフェニルであってもよく、例えば、Ａは、オルト−、パラ−、又はメタ−位にて１つのメトキシル基で置換されたフェニルであってもよい。最も好ましい例では、Ａは、オルト−位にてメトキシル基で置換されたフェニルであってもよい。尚更に、Ａは、１つ以上のハロ基で置換されたフェニルであってもよく、例えば、Ａは、オルト−、パラ−、又はメタ−位に１つのハロ（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＦ）基を有するフェニルであってもよい。別の例では、Ａは、１つ以上のカルボン酸基又はアルキルエステル基（例えば、アセチル基）を有するフェニルであってもよい。Ａは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基であってもよい。尚別の例では、Ａは、１つ以上のＣ１〜Ｃ４アルキル基で置換されたフェニルであってもよい。Ａは、オルト−、パラ−、又はメタ−位にて１つのメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル基で置換されたフェニルであってもよい。Ａは、１つ以上のＮＨ２又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４）２基で置換されたフェニルであってもよい。
別の例では、Ａは、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｉ−ペンチル、又はｓ−ペンチル基であってもよい。
特定の例では、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであってもよく、これらのいずれかは、随意にＣ１〜Ｃ３アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、カルボニル、ヒドロキシ、チオール、又はシアノで置換される。特定の例では、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、例えばＣ１〜Ｃ４アルキルであってもよい。別の例では、Ｒ１は、随意にアセチル、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４）２Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、カルボニル、ハロ、又はヒドロキシで置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであってもよい。好ましい例において、Ｒ１は、水素である。
特定の例では、Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであってもよく、これらのいずれかは、随意にＣ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、カルボニル、ヒドロキシ、チオール、又はシアノで置換される。特定の例では、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、又は、メトキシ、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、アルキルヒドロキシ、カルボニル、ヒドロキシ、シアノで置換されたＣ１〜Ｃ５アルキルであってもよい。別の例では、Ｒ２は、イミダゾール又はインドール等のヘテロアリールで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであってもよい。別の例では、Ｒ２は、フェニル、ヒドロキシ置換フェニル、メトキシ置換フェニル、ハロ置換フェニル、又はアミノ置換フェニルで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであってもよい。
更なる例では、開示した化合物は、式Ｉ−Ａ
を有してもよく、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であり、
式中、Ｒ２は、本明細書に記した通りであり；各Ｗは、他とは独立してＣＨ又はＮであり；Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ１〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にアセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、又はニトロで置換される。
更なる例では、開示した化合物は、式Ｉ−Ｂ
を有してもよく、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であり、
式中、Ｒ１は本明細書に記した通りであり；各Ｗは、他とは独立してＣＨ又はＮであり；Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ１〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にアセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、又はニトロで置換される。
開示した化合物は、選択的ＨＤＡＣ６ｉであってもよい。相同性モデル（Ｂｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１０，１３２（３１）：１０８４２−１０８４６）は、結合部位への入口は、ＨＤＡＣ１と比較してＨＤＡＣ６でより広くかつ浅いことを示している。このモデルは、親油性の空洞も示す。従って、開示した化合物は、主にＡ、Ｒ１及び／又はＲ２においてアリール尿素キャップ基に組み込まれた所定の分枝要素を含んでもよく、前記分枝要素は、この側部空洞にアクセスすることによる有効性及び選択性の両方の向上と、ＨＤＡＣ６の表面とのより良好な相互作用とをもたらす。
この側部空洞へのアクセスは、一態様では、ベンジルリンカーに対して近位の、尿素リンカーの窒素原子、即ち式ＩのＲ２の置換を介して達成されてもよい。これらの分枝非環状尿素の合成は、スキーム１に概略したように達成される。一例として、多様なアミンは、メチル４−ホルミルベンゾエート２との還元的アミノ化を経て、所望の第２級アミン３ａ〜ｈを形成する。続いて、３ａ〜ｈを適切なイソシアネートと反応させることにより、分枝尿素エステル４ａ〜ｈが得られる。アリールイソシアネートが、スキーム１に示されている；しかしながら、他のイソシアネートを使用して、式Ｉの「Ａ」基を変動させてもよい（例えば、ヘテロアリール、又はアルキル）。この化学反応（ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）は、ベンジルリンカーに対して近位の窒素上に分枝置換（Ｒ２）を有する一連の尿素を生成する。塩基性条件下でヒドロキシルアミンを使用してヒドロキサム酸基を導入して、ヒドロキサム酸５ａ〜ｈを提供する。
スキーム１：近位Ｎ−置換ヒドロキサム酸の合成

試薬及び条件：（ａ）Ｒ２−ＮＨ２、ＮａＣＮＢＨ３、ｒｔ、５％ＡｃＯＨ／ＤＣＭ、１６ｈ；（ｂ）アリール−ＮＣＯ、ＤＣＭ、ｒｔ、１６ｈ；（ｃ）５０重量％ＮＨ２ＯＨ、ＮａＯＨ、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１）、０℃〜ｒｔ、３０分間。
別の態様において、この側部空洞へのアクセスは、ベンジルリンカーに対して遠位の、尿素リンカーの窒素原子、即ち式ＩのＲ１の置換を介して達成されてもよい。これらの分枝非環状尿素の合成は、スキーム２に概略したように達成される。一例として、多銅仲介によるＢｕｃｈｗａｌｄカップリング反応を用いて、ヨードベンゼンからアニリン６ａ、ｂを組み立て、これは、これらの中間体が市販されていないためである（Ｋｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｏｐｐｅｒ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ａｌｋｙｌａｍｉｎｅｓ ａｎｄ ａｒｙｌ ｉｏｄｉｄｅｓ：Ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｅｖｅｎ ｉｎ ａｎ ａｉｒ ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ」Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ２００２，４（４）：５８１−５８４）。トリホスゲン化学反応を実施して、メチル４−（アミノメチル）ベンゾエートを対応するイソシアネートに変換し、これは第２級アミン６ａ〜ｃとの反応を経て、最後から２番目のエステル７ａ〜ｃを提供する。ヒドロキサム酸への最終的な変換はスキーム１のように達成されて、８ａ〜ｃの合成を完了する。
スキーム２：遠位Ｎ−置換ヒドロキサム酸の合成
試薬及び条件：（ａ）Ｒ１−ＮＨ２、ＣｕＩ、Ｋ３ＰＯ４、エチレングリコール、ｉＰｒＯＨ、８０℃、１８ｈ；（ｂ）ｉ．トリホスゲン、ｓａｔ．ａｑ重炭酸塩／ＤＣＭ（１：１）、０℃、３０分間；ｉｉ．メチル４−（アミノメチル）ベンゾエート−ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＣＭ、ｒｔ、１６ｈ；（ｃ）５０重量％ＮＨ２ＯＨ、ＮａＯＨ、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１）、０℃〜ｒｔ、３０分間。
式Ｉによる特定の化合物は、以下の通りであり、
又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物である。
尚別の態様において、ＨＤＡＣ６の側部空洞へのアクセスはまた、アルキレン橋を介した尿素リンカーの遠位及び近位窒素原子の結合を介して、即ちＲ１及びＲ２を互いに連結して、式Ｉの−ＮＣ（Ｏ）Ｎ−部分と共に５員環とすることにより、達成されてもよい。それ故、更なる例では、開示した化合物は、式Ｉ−Ｃ

を有してもよく、
式中、Ａは、水素であり、又はＡは、アリール、ヘテロアリール、又はＣ１〜Ｃ８アルキルであり、これらのいずれかは、随意にアセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルヒドロキシ、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、又はニトロから選択される１つ以上の基で置換され、ここでＲ６及びＲ７は上記に定義した通りであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’’、及びＲ２’’は、独立して水素であり、又はＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアリール、アリール、Ｃ１〜Ｃ３アルキルヘテロアリール、若しくはヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にアミノ、アリール、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロ、又はヒドロキシで置換され；又はＲ１’及びＲ１’’は一緒になって若しくはＲ２’’及びＲ２’は一緒になってカルボニル（即ち、＝Ｏ）を形成し；又はＲ１’及びＲ２’は存在せず、Ｒ１’’及びＲ２’’は一緒になって縮合フェニル基を形成する。
所定の例では、Ｒ２’及びＲ２’’は、両方ともメチルである。別の例では、Ｒ２’は水素であり、Ｒ２’’はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ベンジル、トシル、ヒドロキシフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシフェニル、又はアミノフェニルである。別の例では、Ｒ２’及びＲ２’’は、カルボキシル（即ち、＝Ｏ）基を形成してもよく、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物である。
所定の例では、Ｒ１’及びＲ１’’は両方ともメチルである。別の例では、Ｒ１’は水素であり、Ｒ１’’は、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ベンジル、トシル、ヒドロキシフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシフェニル、又はアミノフェニルである。別の例では、Ｒ１’及びＲ１’’は、カルボキシル（即ち、＝Ｏ）基を形成する。
これらの環状尿素の合成は、スキーム３に概略したように達成される。
スキーム３：環状尿素ヒドロキサム酸の合成
試薬及び条件：（ａ）ｉ．ａｑ ＮａＯＨ、ｉｉ．Ｈ＋６０℃ １ｈ；（ｂ）ＫＯｔＢｕ、ＤＭＦ、０℃〜ＲＴ；（ｃ）ａｑＮＨ２ＯＨ、ＮａＯＨ、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ；（ｄ）トリホスゲン、Ｅｔ３Ｎ。
式Ｉ−Ｃの化合物の特定の例は、以下の通りである。

又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物。
一態様では、開示した化合物は、基準のＨＤＡＣｉプラットホーム内に導入された分枝アリール若しくはアルキル尿素キャップ基、又は環状尿素キャップ基を含む。分枝要素の導入、特に尿素モチーフの近位の窒素原子への導入は、ＨＤＡＣの完全パネルに対して、ＨＤＡＣ６に関する卓越した選択性を示し、またヒストンタンパク質と比較して、α−チューブリンの選択的超アセチル化を誘導することが可能な、強力な阻害剤の発見を誘導した。この時点までで開発されているＳＡＲは、分枝尿素骨格が、所望の生化学的活性に実質的な利益を付与することを示す。これらの化合物はまた細胞系内にてスクリーニングされ、５ｇ及び５ｈの両方がＢ１６黒色腫細胞株の成長を阻害できることが見出された。
また、尿素モチーフを欠いたヒドロキサメート化合物を開示する。そのような化合物は、式ＩＩ

を有し、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であり、
式中、Ｒ２は上記に定義した通りであり、Ｒ８は、アセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキルオキシカルボニル、カルボベンジルオキシ、メトキシベンジルカルボニル、ベンゾイル、ベンジル、メトキシベンジル、ジメトキシベンジル、メトキシフェニル、Ｃ１〜Ｃ５アルキルカルバメート、又はアリールスルホニル、即ちＲ９（ＳＯ２）であり、Ｒ９は、随意にＣ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、メトキシル、ハロ、又はヒドロキシで置換されたアリールである。好ましい例では、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ５アルキルオキシカルボニル又はアリールスルホニルであってもよい。式ＩＩの化合物の特定の例は、以下の通りである。
又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物。
開示した化合物の薬学的に許容可能な塩及び水和物も開示する。薬学的に許容可能な塩は、化合物上に見出される特定の置換基に応じて、酸又は塩基と共に調製される開示した化合物の塩を含む。本明細書に開示した化合物が、安定な無毒の酸又は塩基塩を形成するのに十分に塩基性又は酸性であるという条件下で、塩としての化合物の投与は適切であり得る。薬学的に許容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、又はマグネシウム塩が挙げられる。生理学的に許容可能な酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、炭酸、硫酸、及び、酢酸、プロピオン酸、安息香酸、コハク酸、フマル酸、マンデル酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、マロン酸、アスコルビン酸、α−ケトグルタル酸、α−グリコリン酸、マレイン酸、トシル酸、メタンスルホン酸等の有機酸が挙げられる。それ故、本明細書には、塩酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩、α−グリコリン酸塩、マレイン酸塩、トシル酸塩、及びメシル酸塩が開示される。化合物の薬学的に許容可能な塩は、当技術分野にて周知の標準的な手順を用いて得ることができ、例えば、アミン等の十分に塩基性の化合物を好適な酸と反応させることにより、生理学的に許容可能なアニオンを得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウム又はリチウム）又はアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩も作製することができる。
使用方法 更に、本明細書には、対象における癌の処置又は予防方法を提供し、該方法は、有効量の、本明細書に開示した化合物又は組成物を対象に投与することを含む。加えて、方法は更に、有効量の電離放射線を対象に投与することを含んでもよい。
腫瘍細胞の殺滅方法も本明細書に提供する。方法は、腫瘍細胞を有効量の本明細書に開示した化合物又は組成物と接触させることを含む。方法は更に、第２の化合物若しくは組成物（例えば、抗癌剤）を対象に投与し、又は有効量の電離放射線を対象に投与することを含んでもよい。
本明細書には、腫瘍の放射線療法も提供し、該方法は、腫瘍を有効量の本明細書に開示した化合物又は組成物と接触させることと、腫瘍に有効量の電離放射線を照射することを含む。本明細書には、対象における炎症の処置方法も更に提供し、該方法は、有効量の本明細書に開示した化合物又は組成物を対象に投与することを含む。随意に、方法は更に、第２の化合物又は組成物（例えば、抗炎症薬）を投与することを含んでもよい。
開示した主題は、腫瘍学的疾患又は状態を有する対象を処置するための方法にも関する。一実施形態において、有効量の本明細書に開示した１つ以上の化合物又は組成物を、腫瘍学的疾患を有し、その処置を必要とする対象に投与する。開示した方法は、随意に、腫瘍学的疾患の処置を必要とする又は必要とし得る対象を特定することを含んでもよい。対象は、ヒト若しくは霊長類（猿、チンパンジー、類人猿等）、犬、猫、雌牛、豚、若しくは馬等の他の哺乳動物、又は腫瘍学的疾患を有する他の動物であってもよい。対象に投与するための化合物の投与及び処方手段は、当技術分野にて既知であり、その例は本明細書に記載されている。腫瘍学的疾患としては、肛門、胆管、膀胱、骨、骨髄、腸（結腸及び直腸を含む）、乳房、眼、胆嚢、腎臓、口腔、喉頭、食道、胃、精巣、子宮頸部、頭部、頸部、卵巣、肺、中皮腫、神経内分泌、陰茎、皮膚、脊髄、甲状腺、腟、外陰、子宮、肝臓、筋肉、膵臓、前立腺、血液細胞（リンパ球及び他の免疫系細胞を含む）、及び脳の癌及び／又は腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。処置が想定される特定の癌としては、癌腫、カルポジ（Ｋａｒｐｏｓｉ’ｓ）肉腫、黒色腫、中皮腫、軟組織肉腫、膵臓癌、肺癌、白血病（急性白血病、急性骨髄性、慢性リンパ性、慢性骨髄性、及び他の）、及びリンパ腫（ホジキン及び非ホジキン）、並びに多発性骨髄腫が挙げられる。
本明細書に開示した方法に従って処置され得る癌の他の例は、副腎皮質癌、副腎皮質癌、脳星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系リンパ腫、頸部癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、胆嚢癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、グリア細胞種、有毛細胞白血病、頭部及び頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、下咽頭癌、視床下部及び視覚路グリア細胞種、眼球内黒色腫、網膜芽細胞腫、膵島細胞癌腫（内分泌膵臓）、喉頭癌、口唇及び口腔癌、肝癌、髄芽腫、メルケル細胞癌腫、潜在性菌状息肉腫（ｏｃｃｕｌｔ ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｅｓ）を有する扁平上皮頸部癌、骨髄形成異常症候群、骨髄性白血病、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、非小細胞肺癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腫瘍、細胞形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、ユーイング肉腫、軟組織肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、テント上原始神経外胚葉腫瘍、睾丸癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行上皮癌、絨毛性腫瘍、尿道癌、子宮癌、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及びウィルムス腫瘍である。
黒色腫及びマントル細胞リンパ腫 本明細書に開示した本明細書の好ましい実施形態は、有効量の式１又はＩＩの化合物を投与することによる、黒色腫を有する対象の処置方法である。黒色腫は、世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）によれば、現在発生率が最も急速に増加している癌である。現在、転移性黒色腫における生存期間の有意な延長を提供する治療法は殆ど存在しない。免疫療法は適応免疫の抗原特異性に起因して、潜在的に副作用が殆ど存在しない魅力的なモダリティーである。ＦＤＡにより認可された黒色腫処置のための最新の治療法は、Ｔ細胞活性の主要なレギュレーターであるＣＴＬＡ−４に対する抗体、イピリムマブであった；しかしながら、この治療法は、全生存率に中程度の改善を提供する。
腫瘍仲介による免疫抑制の機構を克服するには、複数の経路を標的とすることが必要である。注目を集めている１つの戦略は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）の使用である。実際に、ＨＤＡＣｉ処置は、ＭＨＣ及び同時刺激分子等の免疫学的に関連する遺伝子の発現を増強することが示されている。ＩＬ−１０の阻害は、ＨＤＡＣｉを用いたマクロファージの処理後の、強力な抗炎症薬サイトカインである。しかしながら；今日までの殆どの研究が、１１種の全部の亜鉛−依存性ＨＤＡＣを阻害するパン−ＨＤＡＣｉを使用していた。従って、副作用を最小限にするためには、より選択的なＨＤＡＣｉの使用が好ましい。
本明細書に示すように、ＨＤＡＣ６は、少なくとも黒色腫における分子標的である。各々、ＨＤＡＣ６−選択的阻害剤（ＨＤＡＣ６ｉ）及び標的ｓｈＲＮＡ（ＨＤＡＣ６ＫＤ）を使用した、Ｂ１６マウス黒色腫細胞におけるＨＤＡＣ６の薬理的及び遺伝子破壊の両方が、ＤＮＡ含有量に関するヨウ化プロピジウム染色により測定したＧ１停止により特徴付けられる増殖の阻害をもたらした。更に、ＨＤＡＣ６ｉを用いて、ＭＨＣ−Ｉ及びＭＨＣ−ＩＩを含む免疫学的に関連する受容体の発現の向上がもたらされた。インビボで、野生型マウス内へのＨＤＡＣ６ＫＤ Ｂ１６細胞の皮下注射により、対照細胞と比較して遅延した腫瘍成長がもたらされた。しかしながら、この効果は、Ｔ及びＢ細胞を欠いたＳＣＩＤマウスを使用した実験では抑制され、インビボで、腫瘍制御に関する重要な免疫構成成分が示唆された。
ＨＤＡＣ６が腫瘍免疫原性を調節する機構は、未だ明らかにされていない。１つの可能な機構は、タンパク質免疫沈降試験から生じ、該試験は、ＨＤＡＣ６が、黒色腫において重要な生存及び病原性因子であり、また免疫寛容にも関与するＳＴＡＴ３と相互作用し、該ＳＴＡＴ３を潜在的に調節することを示す。
発現ＨＤＡＣ６は、遺伝子マイクロアレイ分析により、正常な皮膚と比較して、大部分の黒色腫患者の腫瘍生検において上方調節されていることが見出された。この観察は、免疫組織化学的に染色された、患者の黒色腫組織のマイクロアレイにより支持された。
総じて、ＨＤＡＣ６阻害は、腫瘍成長を遅延させること、及び、より魅力的な免疫標的を与えることの両方により、黒色腫及びマントル細胞リンパ腫における魅力的な治療標的であり、選択的ＨＤＡＣ６ｉの開発及び使用のための理論的根拠を提供する。
炎症性応答 腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、黒色腫を有する患者において非応答性であることが以前に示されている（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９９，５：６７７−８５）。多発性骨髄腫を有する患者の骨髄に浸潤しているＴ細胞も、非応答性である（Ｎｏｏｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６５：２０２６−３４，２００５）。これらの研究の結論は、文献中の数個の他の報告と共に、ＣＤ４＋Ｔ細胞が腫瘍進行の早期に腫瘍抗原に対して寛容にされているということである。このことは、効果的な癌免疫療法の開発に重大な障害を提示する。
ＡＰＣにおける炎症性応答のエピジェネティック調節におけるヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の役割は、本明細書に開示されている。ＨＤＡＣは、ヒストン上のリシン残基からアセチル基を除去して、クロマチン構造及び遺伝子発現を調節する酵素のグループである。ＨＤＡＣは、図１に示す４つの異なるクラスに分類される。
ＨＤＡＣは、図２に示すように、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）の標的である。ＨＤＡＣｉは、数個のＨＤＡＣを標的とすることが可能な、構造的に多様な化合物である。ＨＤＡＣｉは、癌細胞内で分化、細胞周期及び成長停止を誘導する。炎症及び抗腫瘍応答のモジュレーターとしてのＨＤＡＣｉの新たな役割が存在する。
パン−ＨＤＡＣｉ ＬＡＱ８２４は、ＩＬ−１０の転写調節を介して、マクロファージにおける炎症性応答を増強することが以前に見出されている。パン−ＨＤＡＣＩ ＬＡＱ８２４はまた、寛容性Ｔ細胞の応答性を回復することが見出された（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１，１８６：３９８６−９６）。パン−ＨＤＡＣＩの機構及び関連する標的は、それらの複数の効果を考慮すると、解明が困難である。ＡＰＣにおける特定のＨＤＡＣの発現及び機能の理解により、免疫活性化対免疫寛容に影響を与える新規な標的が明らかにされ得る。次いで、特定された標的は、イソ型−選択的ＨＤＡＣｉを用いた薬理的阻害を受けやすい。
ＨＤＡＣ６は、図３に示すように、ＡＰＣ内でＩＬ−１０遺伝子発現に影響を与えることが見出された。ＨＤＡＣ６は、Ｘ染色体上にコードされた１３１ｋＤａタンパク質であり、主に細胞質性である；しかしながら、最近のデータは、ＨＤＡＣ６が核内にも存在し得ることを示唆している。ＨＤＡＣ６は、細胞運動性及びＴ細胞／ＡＰＣシナプスに関連したチューブリンデアセチラーゼ活性を有する。利用可能なイソ型−選択的ＨＤＡＣ６阻害剤が存在する。図４は、ＨＤＡＣ６の遺伝子又は薬理的破壊がＩＬ−１０を阻害することを示す。図５は、ＨＤＡＣ６の遺伝子破壊がＡＰＣ機能を向上させることを示す。図６に示すように、マクロファージにおけるＩＬ−１０遺伝子プロモーターのＣＨＩＰ分析により示された機構は、Ｈ３及びＨ４アセチル化；ＨＤＡＣ６動員；並びにＬＰＳ刺激後のいくつかの時点でのＳＴＡＴ３及び他の転写因子の結合を含む。
図７は、ＨＤＡＣ６のノックダウンが、ＩＬ−１０遺伝子プロモーターへの転写活性化因子ＳＴＡＴ３の動員の低減をもたらすことを示す。ＨＤＡＣ６のＣ末端が、ＨＤＡＣ１１との相互作用に必要である。図８は、遺伝子プロモーターに対するＳＴＡＴ３結合の破壊が、ＨＤＡＣ６の動員の低減と、ＩＬ−１０産生の減少とをもたらしたことを示す。図９は、ＨＤＡＣ６の破壊がＳＴＡＴ３リン酸化を阻害することを示す。
図１０は、ヒト黒色腫においてＨＤＡＣ６及びＩＬ−１０ｍＲＮＡの発現の増大が存在することを示す。図１１は、マウス及びヒト黒色腫細胞株におけるＨＤＡＣ６発現を示す一連の画像である。図１２は、黒色腫におけるＨＤＡＣタンパク質発現を示す一連の画像である。図１３は、ＨＤＡＣ６を欠いた黒色腫細胞における増殖の低下及び細胞周期停止を示す一連の画像である。図１４は、ＨＤＡＣ６を欠いた黒色腫細胞が、より免疫原性であることを示す一連の画像である。
図１４Ａ及び１４Ｂに示すように、ＨＤＡＣ６ｉ ＳＴ−２−９２で処理したＢ１６細胞は、未処理Ｂ１６細胞と比較して高いＭＨＣ−Ｉ及び−ＩＩ分子の発現を示した。ＭＨＣ発現の同様の変化が、ＨＤＡＣ６がノックダウンされたＢ１６細胞で観察された。注目すべきことに、インビボでＢ１６−ＫＤＨＤＡＣ６細胞でチャレンジしたＣ５７ＢＬ１６マウスに、腫瘍成長の遅延が観察された（図１４Ｃ）。ＫＤＨＤＡＣ６黒色腫細胞におけるこの腫瘍成長の遅延は、それらの増殖の減少（図１２、１３）並びに／又は、免疫認識及びクリアランスの改善をもたらすそれらの免疫原性の増大の反映であり得る。この疑問に対処するために、Ｃ５７ＢＬ１６ ＳＣＩＤマウスをＫＤＨＤＡＣ６又はＷＴＢ１６黒色腫細胞のいずれかでチャレンジした。ＫＤＨＤＡＣ６腫瘍成長の遅延が観察された免疫コンピテントマウスとは異なり（図１４Ｃ）；そのような効果は、同一のＫＤＨＤＡＣ６細胞でチャレンジしたＳＣＩＤマウスには観察されなかった（図１４Ｄ）。これらの結果は、黒色腫細胞においてＨＤＡＣ６の破壊により誘導される免疫学的効果が、免疫系によってこれらの細胞を「より深く理解する」ようにすることを示唆する。
図１５は、黒色腫細胞におけるＨＤＡＣ６の薬理的阻害が、細胞周期停止及びＭＨＣ分子の発現の増大をもたらしたことを示す一連の画像である。ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤で処理した黒色腫細胞が、Ｔ細胞（ＣＤ４及び／又はＣＤ８）のより良好な活性化因子であることも見出された。この発見に関する手順は、ＯＶＡ−ペプチドを黒色腫細胞（ツバスタチンＡで処理した又はしていない）内に負荷し、ＯＴ−ｌｏｒ ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＴ細胞（ナイーブ又は寛容化）を加え、それらのＩＬ−２及びＩＦＮ−γの産生を決定することを含む。
図１６は、ツバスタチンＡが、インビボにてＢ１６マウス黒色腫細胞内でＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３リン酸化を阻害することを示す画像である。図１７は、黒色腫支持マウス内で、ツバスタチンＡが、ワクチン接種に対する抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を増強することを示す一連の画像である。インビボで、ツバスタチンＡの投与後に抗黒色腫効果が存在する（単独で又は抗ＣＬＴＡ４との組み合わせで）。
図１８は、ツバスタチンＡ、選択的ＨＤＡＣ６阻害剤が、ＡＰＣにおいてＳＴＡＴ３リン酸化及びＩＬ−１０遺伝子プロモーターへの動員を低下させたことを示す。図１９は、ツバスタチンＡで処理したＡＰＣ内での表現型及び機能的変化を示す。図２０は、ツバスタチンＡ処理ＡＰＣがナイーブＴ細胞のより良好な活性化因子であり、反応不顕性Ｔ細胞の応答性を回復することを示す。図２１は、インビボでのツバスタチンＡの抗腫瘍効果を示すグラフである。図２２は、ツバスタチンＡがＰＥＭに影響しないことを示す。図２３は、マクロファージに対するツバスタチンＡの免疫学的効果を示す一連の画像である。図２４は、ツバスタチンＡがマクロファージにおけるＪＡＫＩＳＴＡＴ３経路を破壊することによりＩＬ−１０転写を阻害することを示す一連の画像である。図２５は、ＩＬ−１０産生に対するツバスタチンＡの阻害効果が、ＨＤＡＣ６の不在下で損失することを示すグラフである。図２６は、インビトロでの抗原提示試験の実験設計を示すフローチャートである。図２７は、ツバスタチンＡ処理マクロファージが、ナイーブＴ細胞のより良好な活性化因子であり、反応不顕性Ｔ細胞の機能を回復することを示す一連の画像である。図２８は、インビボでのツバスタチンＡを用いた処理が、ワクチン接種に対する抗原特異的Ｔ細胞の応答を増強することを示す一連の画像である。
上記のＡＰＣにおけるツバスタチンＡを用いた実験は、マクロファージをツバスタチンＡで処理すると、同時刺激分子の発現が増大し、これらの細胞によるＩＬ−１０産生を阻害することを示す。ツバスタチンＡ処理マクロファージは、ナイーブＴ細胞のより良好な活性化因子であり、インビトロで反応不顕性Ｔ細胞の機能を回復する。インビボでのツバスタチンＡを用いた処理は、ワクチン接種に対する抗原特異的Ｔ細胞の応答を増強する。機構的に、ツバスタチンＡはＪＡＫＩＳＴＡＴ３／ＩＬ−ｉＯ経路を破壊し、免疫寛容原性ではなく免疫原性マクロファージへと均衡を傾ける。
図２９は、ヒトＭＣＬ内でのＨＤＡＣ６発現を示す画像である。図３０は、ヒトＭＣＬ細胞株内でのＨＤＡＣ６の破壊を示す一連の画像である。図３１は、マウスＦＣ−ｍｕＭＣＬＩ細胞でのＨＤＡＣ６の破壊を示す画像である。図３２は、ＭＣＬ内でのＨＤＡＣ６阻害の免疫学的効果を示す画像である。ＬＰＳ又はＣｐＧ＋／−ＳＴ−３−０６又はツバスタチンＡに応答した、ＭＨＣ、同時刺激分子及び／又はサイトカイン産生における変化を示す。図３３は、ＳＴ−３−０６で処理されたＦＣ−ｍｕＭＣＬＩ細胞の抗原提示機能を示す一連の画像である。図３４は、ツバスタチンＡで処理されたＦＣ−ｍｕＭＣＬＩ細胞の抗原提示機能を示す一連の画像である。図３５は、インビボでのツバスタチンＡの抗腫瘍効果を示す画像である。データは、ＨＤＡＣ６阻害がＭＣＬ細胞の免疫原性を増強することを示す。ＨＤＡＣ６はＡＰＣ内でＳＴＡＴ３活性化に必要であり、ＳＴＡＴ３は腫瘍細胞の免疫原性を減少させる。
図３６は、ＨＤＡＣ６の破壊がＡＰＣ内でＳＴＡＴ３リン酸化を阻害することを示す一連の画像である。ＨＤＡＣ６のＣ末端は、ＨＤＡＣ１１との相互作用に必要である。（Ａ）異なる長さのタンパク質をコードし、ＦＬＡＧエピトープを保有するＨＤＡＣ６のコンストラクト。（Ｂ）ＨＤＡＣ６コンストラクトはＨｅＬａ細胞内で過剰発現し、それらの発現は抗ＦＬＡＧ抗体を使用してウェスタンブロットにより評価され、又は（Ｃ）免疫沈降して、それらのＨＤＡＣ１１との相互作用を評価した。
図３７は、ＳＴ−３−０６が、ＡＰＣにおけるＳＴＡＴ３リン酸化及びＩＬ−１０遺伝子プロモーターへの動員を低下させたことを示す一連の画像である。ヒトＭＣＬ細胞は、ＨＤＡＣ６の発現の向上を示す。悪性Ｂ細胞内でのＨＤＡＣ６の破壊は、それらの増殖を阻害し、アポトーシスの誘導に関連している。ＭＣＬ細胞内でのＨＤＡＣ６の薬理的又は遺伝子破壊は、インビトロで、それらの抗原提示能力を増強し、より良好なＴ細胞活性化と反応不顕性Ｔ細胞の機能の回復とをもたらす。インビボでのツバスタチンＡを用いたＭＣＬ−支持マウスの処理は、強力な抗腫瘍効果に関連している。機構的に、ＨＤＡＣ６はＡＰＣ内でＳＴＡＴ３と相互作用することが見出されている。ＭＣＬ内でＨＤＡＣ６特異的阻害剤を単独で又はＳＴＡＴ３阻害剤との組み合わせで使用することの理論的根拠を本明細書に開示する。
組成物、製剤及び投与方法 開示した化合物、及びそれらを含む組成物のインビボでの適用は、当業者に現在又は将来的に既知の任意の好適な方法及び技術により達成することができる。例えば、開示した化合物は、生理学的に又は薬学的に許容可能な形態で処方され、例えば、経口、経鼻、直腸、局所、及び非経口投与経路を含む当技術分野にて既知の任意の好適な経路により投与されてもよい。本明細書で使用するように、用語、非経口は、注射による等、皮下、皮内、静脈内、筋内、腹腔内、及び胸骨内投与を含む。開示した化合物又は組成物の投与は、当業者により容易に決定され得るように、単回投与、又は連続投与若しくは個別の間隔投与であってもよい。
本明細書に開示した化合物、及びそれらを含む組成物はまた、リポソーム技術、遅延放出カプセル剤、埋め込みポンプ、及び生分解性容器を使用して投与することができる。これらの送達方法は、有利には、長期間に亘って均一投与量を提供することができる。化合物はまた、それらの塩誘導体形態又は結晶形態で投与されてもよい。
本明細書に開示した化合物は、薬学的に許容可能な組成物を調製するための既知の方法に従って処方されてもよい。処方は、当業者に周知であり、かつ容易に入手できる多数の情報源に詳細に記載されている。例えば、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（１９９５）によるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅは、開示した方法に関連して使用できる処方を記載している。一般に、本明細書に開示した化合物は、有効量の化合物を好適な担体と共に混合して、化合物の効果的な投与を促進するように処方されてもよい。また使用される組成物は、多様な形態にあってもよい。それらは、例えば錠剤、丸剤、散剤、液体溶液又は縣濁液、坐薬、注射可能な及び注入可能な溶液、並びにスプレー等の固体、半固体、及び液体剤形を含む。好ましい剤形は、意図する投与モード及び治療用途に依存する。組成物はまた、当業者に既知の薬学的に許容可能な従来の担体及び希釈剤を含むことが好ましい。化合物と共に使用される担体又は希釈剤の例としては、エタノール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、アルミナ、澱粉、生理食塩水、並びに等価な担体及び希釈剤が挙げられる。所望の治療的処置のためにそれらの投与量を投与するには、本明細書に開示した組成物は、有利には、担体又は希釈剤を含む総組成物の重量に基づいて、約０．１重量％〜９９重量％、特に、１〜１５重量％の１つ以上の全対象化合物を含んでもよい。
投与に好適な製剤としては、例えば、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び、製剤を、意図するレシピエントの血液と等張等浸透圧にする溶質を含み得る水性無菌注射用溶液；並びに懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性無菌縣濁液が挙げられる。製剤は、単位用量又は多用量容器、例えば密封アンプル及びバイアル内に存在してもよく、また、使用前に無菌液体担体の状態、例えば、注射用蒸留水のみ必要とする凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保管されてもよい。即時注射溶液及び縣濁液は、無菌粉末、顆粒、錠剤等から調製することができる。上記に特に述べた成分に加えて、本明細書に開示した組成物は、当該製剤のタイプに関連した、当技術分野にて慣習的な他の薬剤を含んでもよいことを理解するべきである。
本明細書に開示した化合物、及びそれらを含む組成物は、細胞との直接接触により、又は担体手段を介して細胞に送達され得る。化合物及び組成物を細胞に送達するための担体手段は、当技術分野にて既知であり、例えば組成物をリポソーム部分内にカプセル化することを含む。本明細書に開示した化合物及び組成物を細胞に送達するための他の手段としては、化合物を、標的細胞への送達を標的としたタンパク質又は核酸に取り付けることが挙げられる。米国特許第６，９６０，６４８号明細書、並びに米国特許出願公開第２００３００３２５９４号明細書及び同第２００２０１２０１００号明細書は、他の組成物に結合することができ、該組成物が生体膜を横切って移行することを可能にするアミノ酸配列を開示している。また米国特許出願公開第２００２００３５２４３号明細書は、細胞内送達のために、生物学的部分を細胞膜を横切って輸送するための組成物を記載している。化合物はまたポリマーに組み込まれてもよく、該ポリマーの例としては、頭蓋内腫瘍の場合、ポリ（Ｄ−Ｌラクチド−コ−グリコリド）ポリマー；２０：８０モル比でのポリ［ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン：セバシン酸］（ＧＬＩＡＤＥＬ内で使用されるような）；コンドロイチン；キチン；及びキトサンが挙げられる。
腫瘍学的疾患の処置のために、本明細書に開示した化合物は、他の抗腫瘍若しくは抗癌物質、並びに／又は、放射線及び／若しくは光線力学的療法、並びに／又は、腫瘍を除去する外科的処置との組み合わせで、処置を必要とする患者に投与することができる。これらの他の物質又は処置は、本明細書に開示した化合物と同時に又は異なる時間に与えることができる。例えば、本明細書に開示した化合物は、タキソール若しくはビンブラスチン等の有糸分裂阻害剤、シクロホスアミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓａｍｉｄｅ）若しくはイホスファミド等のアルキル化剤、５−フルオロウラシル若しくはヒドロキシ尿素等の代謝拮抗薬、アドリアマイシン若しくはブレオマイシン等のＤＮＡ介入物、エトポシド若しくはカンプトテシン等のトポイソメラーゼ阻害剤、アンジオスタチン等の抗血管新生薬、タモキシフェン等の抗エストロゲン剤、及び／又は、例えば、各々ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）等の他の抗癌薬物若しくは抗体、又はイピリムマブ及びボルテゾミブ等の免疫治療薬との組み合わせで使用することができる。別の態様では、開示した化合物は、ＡＣＹ−１２１５、ツバシン、ツバスタチンＡ、ＳＴ−３−０６、またはＳＴ−２−９２のような他のＨＤＡＣ阻害剤と共投与される。
所定の例では、本明細書に開示した化合物及び組成物は、随意に不活性希釈剤等の薬学的に許容可能な担体との組み合わせで、１つ以上の解剖学的部位に、例えば、望ましくない細胞成長の部位に局部的に投与されてもよい（腫瘍部位又は良性皮膚成長等、例えば腫瘍又は皮膚成長に注射又は局所適用する）。本明細書に開示した化合物及び組成物は、随意に不活性希釈剤、又は、経口送達の場合、吸収可能な食用担体等の薬学的に許容可能な担体との組み合わせで、静脈内又は経口等、全身投与されてもよい。化合物及び組成物は、硬又は軟シェルゼラチンカプセル剤内に封入されてもよく、錠剤に圧縮されてもよく、又は患者の食事の食物に直接組み込まれてもよい。経口的治療投与では、活性化合物は、１つ以上の賦形剤と組み合わされ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤（ｔｒｏｃｈ）、カプセル剤、エリキシル剤、縣濁液、シロップ剤、オブラート剤、エアロゾルスプレー等の形態で使用されてもよい。
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤等は、以下も含み得る：ガムトラガカント、アカシア、トウモロコシ澱粉又はゼラチン等の結合剤；リン酸二カルシウム等の賦形剤；トウモロコシ澱粉、ジャガイモ澱粉、アルギン酸等の錠剤崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；及びショ糖、果糖、乳糖、若しくはアスパルテーム等の甘味剤又はペパーミント、ウィンターグリーン油、若しくはサクランボ風味等の矯味矯臭薬を添加してもよい。単位剤形がカプセル剤の場合、カプセル剤は上記のタイプの材料に加えて、植物油又はポリエチレングリコール等の液体担体を含んでもよい。コーティング、又は固体単位剤形の物理的形態を別様に変更する様々な他の材料が存在してもよい。例えば、錠剤、丸剤、又はカプセル剤は、ゼラチン、蝋、セラック、又は糖等で被覆されてもよい。シロップ剤又はエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤としてショ糖又は果糖、保存剤としてメチル及びプロピルパラベン、色素、並びに、サクランボ又はオレンジ風味等の風味剤を含んでもよい。勿論、任意の単位剤形の調製に使用される任意の材料は、使用される量において薬学的に許容され得、かつ実質的に非毒性である必要がある。加えて、活性化合物は、徐放製剤及び装置に組み込まれてもよい。
その薬学的に許容可能な塩、又は水和物を含む、本明細書に開示した化合物及び組成物は、注入又は注射により、静脈内、筋内、又は腹腔内に投与されてもよい。活性剤又はその塩の溶液は、随意に非毒性界面活性剤と混合されて水中で調製されてもよい。分散液も、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、及びこれらの混合物、並びに油中で調製することができる。保管及び使用の通常の条件下で、これらの製剤は、保存剤を含んで微生物の成長を防止してもよい。
注射又は注入に好適な医薬剤形は、随意にリポソーム中にカプセル化された、注射可能な又は注入可能な無菌溶液又は分散液の即時製剤に適合された、活性成分を含む無菌水性溶液若しくは分散液又は無菌粉末を含んでもよい。最終的な剤形は、無菌であり、流体であり、製造及び保管の条件下で安定である必要がある。液体担体又はビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、植物油、非毒性グリセリルエステル、及びこれらの好適な混合物を含む溶媒又は液体分散媒体であってもよい。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成、又は分散液の場合、必要な粒径の維持、又は界面活性剤の使用により維持することができる。随意に、微生物の活動の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の様々な他の抗菌及び抗真菌剤によりもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば糖、緩衝液又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長期間吸収は、吸収を遅延させる、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含ませることによりもたらすことができる。
無菌注射剤は、必要な量の本明細書に開示した化合物及び／又は薬剤を、必要に応じて上記に列挙した様々な他の成分と共に、適切な溶媒に組み込んだ後、濾過滅菌することにより調製される。無菌注射剤の調製のための無菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、活性成分と、以前滅菌濾過した溶液中に存在する任意の追加の所望の成分の粉末とを提供する真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
局所投与の場合、本明細書
に開示した化合物及び薬剤は、液体又は固体として適用されてもよい。しかしながら、一般に、皮膚科学的に許容可能な担体との組み合わせで、固体又は液体であり得る組成物として皮膚に局所投与されることが望ましいであろう。本明細書に開示した化合物及び薬剤、並びに組成物は、対象の皮膚に局所適用されて、悪性若しくは良性成長のサイズを低減し（完全な除去を含み得る）、又は感染部位を処置することができる。本明細書に開示した化合物及び薬剤は、成長又は感染部位に直接適用することができる。化合物及び薬剤は、軟膏、クリーム、ローション、溶液、チンキ等の製剤にて成長又は感染部位に適用されることが好ましい。
有用な固体担体としては、タルク、粘土、微結晶セルロース、シリカ、アルミナ等の微細に分割された固体が挙げられる。有用な液体担体としては、化合物が、随意に非毒性界面活性剤の補助により、有効なレベルにて溶解又は分散され得る水、アルコール若しくはグリコール、又は水−アルコール／グリコールのブレンドが挙げられる。香料及び追加の抗菌剤等の補助剤は、所定の使用のために特性を最適化するように添加され得る。得られた液体組成物は、例えば、吸収パッドから適用されてもよく、絆創膏及び他の包帯材を含浸するのに使用されてもよく、又はポンプ型若しくはエアロゾル噴霧器を使用して、冒された範囲上に噴霧されてもよい。
液体担体と共に合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩及びエステル、脂肪アルコール、修飾セルロース、又は修飾無機材料等の増粘剤も使用されて、使用者の皮膚に直接適用するための、塗布可能なペースト、ゲル、軟膏、石鹸等を形成してもよい。
本明細書に開示した化合物及び薬剤、並びに医薬組成物の有用な投与量は、それらのインビトロでの活性、及び動物モデルにおけるインビボでの活性を比較することにより決定することができる。マウス、及び他の動物における有効投与量をヒトに外挿のための方法は、当技術分野にて既知である。
本明細書に開示した化合物を、薬学的に許容可能な担体との組み合わせで含む医薬組成物も開示する。ある量の化合物を含む、経口、局所又は非経口投与に適合された医薬組成物は、好ましい態様を構成する。患者、特にヒトに投与される用量は、理想的な時間枠に亘って、致死毒性を有することなく、患者にて治療的応答を達成するのに十分である必要があり、また許容可能なレベル以下の副作用又は病的状態を生じることが好ましい。当業者は、投与量が、対象の状態（健康）、対象の体重、存在する場合、併用処置の種類、処置の頻度、治療可能比、並びに、病態の重篤さ及び段階を含む多様な因子に依存することを認識するであろう。
キット 開示した主題は、１つ以上の容器内に、本明細書に開示した少なくとも１つの阻害剤化合物又は組成物、例えば式Ｉ〜ＩＩの任意の化合物を収容する包装された用量製剤にも関する。包装された用量製剤は、随意に、１つ以上の容器内に、薬学的に許容可能な担体又は希釈剤を収容してもよい。包装された用量製剤は、随意に、本明細書に開示した阻害剤化合物又は組成物に加えて、他のＨＤＡＣ阻害剤、又はイピリムマブ等の免疫療法薬も含み得る。
処置される疾患又は疾病状態に応じて、好適な用量は、標的細胞の増殖又は成長を低減するであろう量であってもよい。癌の状況下では、好適な用量は、悪性腫瘍等の癌組織内で所望の応答を達成することが既知である、活性薬剤の濃度をもたらすであろう用量である。好ましい投与量は、管理不能な副作用を有することなく癌細胞成長の最大阻害をもたらす量である。化合物及び／又は薬剤の投与は、当業者が容易に決定できるような、連続投与又は個別の間隔投与であってもよい。
所望の治療的処置のためにそれらの投与量を投与するには、いくつかの実施形態では、本明細書に開示した医薬組成物は、担体又は希釈剤を含む総組成物の重量に基づいて、約０．１重量％〜４５重量％、特に、１〜１５重量％の１つ以上の全対象化合物を含んでもよい。例示的には、投与される活性成分の投与レベルは：静脈内、０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ；腹腔内、０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ；皮下、０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ；筋内、０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ；経口、０．０１〜約２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１〜１００ｍｇ／ｋｇ；鼻腔内滴下、０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ；及びエアロゾル、０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ動物（体）重であってもよい。
本明細書に開示した化合物を含む組成物を１つ以上の容器内に収容するキットも開示する。開示したキットは、随意に、薬学的に許容可能な担体及び／又は希釈剤を含んでもよい。一実施形態において、キットは、本明細書に記載した、１つ以上の他の構成要素、付属物、又は補助剤を含む。別の実施形態では、キットは、本明細書に記載した１つ以上の抗癌剤等を含んでもよい。一実施形態では、キットは、キットの化合物又は組成物の投与方法を記載した説明書又は包装材料を含む。キットの容器は、任意の好適な材料、例えばガラス、プラスチック、金属等のものであってもよく、任意の好適なサイズ、形状、又は構成のものであってもよい。一実施形態では、本明細書に開示した化合物及び／又は薬剤は、錠剤、丸剤、又は粉末形態等の固体としてキット内に提供される。別の実施形態では、本明細書に開示した化合物及び／又は薬剤は、液体又は溶液としてキット内に提供される。一実施形態では、キットは、本明細書に開示した化合物及び／又は薬剤を液体又は溶液形態で収容するアンプル又は注射器を含む。
以下の実施例は、開示した主題に従った方法、組成物、及び結果を説明するために以下に示される。これらの実施例は、本明細書に開示した主題の全態様を含むことを意図するものではなく、代表的な方法、組成物、及び結果を説明するためのものである。これらの実施例は、当業者に明らかな本発明の等価物及び変更物を排除することを意図するものではない。
数（例えば、量、温度等）に関する正確性を確実にする努力がなされているが、幾分かの誤差及び偏差を考慮する必要がある。別に示さない限り、部は重量部であり、温度は℃であり又は周囲温度であり、圧力は大気圧又はほぼ大気圧にある。記載したプロセスから得られる生成物の純度及び収率を最適化するのに用いられ得る反応条件、例えば構成成分の濃度、温度、圧力、並びに他の反応範囲及び条件の多数の変更及び組み合わせが存在する。理想的かつ日常的な実験のみが、それらのプロセス条件を最適化するのに必要であろう。
内部基準としてＴＭＳを使用して、Ｂｒｕｋｅｒ分光計上で１Ｈ及び１３Ｃスペクトルを得た。多重度に関する以下の略語を使用した：ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｍ＝多重項、ｄｄ＝二重の二重項、ｂｒ＝幅広。プレコートシリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０ Ｆ２５４、厚さ２５０μｍ）を使用したＴＬＣにより反応を監視し、ＵＶ光下で可視化した。ＬＲＭＳ実験は、Ａｇｉｌｅｎｔ １９４６Ａ ＬＣ−ＭＳＤを使用して、０．１％ギ酸をスパイクしたＭｅＣＮ及びＨ２Ｏを移動相として用いて行った。ＨＲＭＳ決定は、０．１％ギ酸をスパイクしたＭｅＣＮ及びＨ２Ｏを移動相として用いてＳｈｉｍａｄｚｕ ＩＴ−ＴＯＦ機器により行った。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯ製の自動化ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆシステム、及びプレパックシリカゲルカートリッジを推奨負荷能力に従って使用して達成した。
以下の仕様を有するＳｈｉｍａｄｚｕ分取液体クロマトグラフを使用して、分取（Ｐｒｅｐａｒａｔｏｒｙ）ＨＰＬＣを全ての最終化合物の精製に使用した：カラム：５μｍの粒径を有するＡＣＥ ５ＡＱ（１５０×２１．２ｍｍ）。方法１−２５〜１００％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、３０分間；１００％ＭｅＯＨ、５分間；１００〜２５％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、４分間。方法２−８〜１００％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、３０分間；１００％ＭｅＯＨ、５分間；１００〜８％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、４分間。方法３−０％ＭｅＯＨ、５分間；０〜１００％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、２５分間；１００％ＭｅＯＨ、５分間；１００〜０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、４分間。流速−１７ｍＬ／分、２５４及び２８０ｎｍで監視。両方の溶媒を０．０５％ＴＦＡでスパイクした。以下の仕様を有するＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ機器を使用して分析ＨＰＬＣを行った：カラム：Ｌｕｎａ ５Ｃ１８（２）１００Ａ（１５０×４．６０ｍｍ）５μｍ粒径；勾配−１０〜１００％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、１８分間、１００％ＭｅＯＨ、３分間；１００〜１０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、３分間；１０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、５分間。両方の溶媒を０．０５％ＴＦＡでスパイクした。全ての試験化合物の純度は、分析ＨＰＬＣにより決定して＞９５％であった。
化合物の合成：スキーム１を参照メチル４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）メチル）ベンゾエート（３ａ）
３ａの合成は、代表的な一般的手順Ａである：メチル４−ホルミルベンゾエート（３２８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及び３−ジメチルアミノプロピルアミン（０．２５２ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を入れた丸底フラスコを、５％ＡｃＯＨのＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液中に取り上げた。５分後、ＮａＣＮＢＨ３（１２６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を一部ずつ加え、得られた混合物をＡｒ雰囲気下にて室温で一晩撹拌した。反応を１Ｎ ＮａＯＨ（１０ｍＬ）でクエンチし、水性層をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーを介して精製して、生成物を蝋様固体（３１３ｍｇ、６３％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、３．８４（ｓ、２Ｈ）、２．７９（ｂｒｓ、１Ｈ）、２．６８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．２３（ｓ、６Ｈ）、１．７０（ｑｕｉｎｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．９６、１４５．２７、１２９．７１、１２８．８７、１２７．９５、５８．０４、５３．４２、５１．９９、４７．８７、４５．３６、２７．４１。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５１．１。
メチル４−（（（３−ヒドロキシプロピル）アミノ）メチル）ベンゾエート（３ｂ）
一般的手順Ａに従って作製して、蝋様固体（８９ｍｇ、２９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．００（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．９０（ｓ、２Ｈ）、３．７８（幅広、４Ｈ）、２．９３（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．７８〜１．７３（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．７９、１４３．１６、１２９．７７、１２９．４４、１２８．２６、６３．５５、５３．１４、５２．１０、４８．８８、３０．１８。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２４．２。
メチル４−（（（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）アミノ）メチル）ベンゾエート（３ｃ）
一般的手順Ａに従って作製して、蝋様固体（４４６ｍｇ、７２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２８（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６〜７．３４（ｍ、３Ｈ）、７．２１（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｓ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．８７（ｓ、２Ｈ）、３．０２〜２．９８（ｍ、４Ｈ）、１．６８（ｂｒｓ、１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６７．０６、１４５．６６、１３６．３４、１２９．６０、１２８．６２、１２７．８５、１２７．３１、１２２．０２、１２１．８９、１１９．１３、１１８．７４、１１３．４７、１１１．１５、５３．３６、５１．９７、４９．２８、２５．６４。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０９．１。
メチル４−（（（４−ヒドロキシフェネチル）アミノ）メチル）ベンゾエート（３ｄ）
一般的手順Ａに従って作製して、蝋様固体（１３０ｍｇ、４６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．０１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．７１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、３．８６（ｓ、２Ｈ）、２．８６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．７６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６７．０７、１５４．６０、１４５．０２、１３１．０５１２９．７８、１２９．７５、１２８．９１、１２８．０４、１１５．５５、５３．２９、５２．０８、５０．３７、３５．０２。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６８．１。
メチル４−（（（３−メトキシプロピル）アミノ）メチル）ベンゾエート（３ｅ）
一般的手順Ａに従って作製して、無色油（１２７ｍｇ、５４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．８０（ｓ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．２８（ｓ、３Ｈ）、２．６７（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．７２（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８８、１４５．７８、１２９．５４、１２８．５８、１２７．７６、７１．１７、５８．４８、５３．５０、５１．８５、４６．７２、２９．８３。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３８．２。
メチル４−（（（２−メトキシエチル）アミノ）メチル）ベンゾエート（３ｆ）
一般的手順Ａに従って作製して、無色油（２９ｍｇ、１３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）、３．８４（ｓ、２Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．３３（ｓ、３Ｈ）、２．７７（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．８８（ｂｒ、１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．９８、１４５．５８、１２９．６５、１２８．７４、１２７．９０、７１．８５、５８．７４、５３．４７、５１．９４、４８．６９。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２４．２。
メチル４−（（ブチルアミノ）メチル）ベンゾエート（３ｇ）
一般的手順Ａに従って作製して、無色油（１５０ｍｇ、６８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．８４（ｓ、２Ｈ）、２．６２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．４９（ｍ、２Ｈ）、１．３４（ｍ、３Ｈ）、０．９１（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６７．００、１４５．８９、１２９．６５、１２８．７０、１２７．８７、５３．６３、５１．９５、４９．１４、３２．１４、２０．３８、１３．９３。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２２．１。
メチル４−（（フェネチルアミノ）メチル）ベンゾエート（３ｈ）
一般的手順Ａに従って作製して、無色油（２０３ｍｇ、７５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０１（ｍ、２Ｈ）、７．３５（ｍ、４Ｈ）、７．２２（ｍ、３Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、３．８８（ｓ、２Ｈ）、２．８９（ｍ、４Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．９７、１４５．６６、１３９．８１、１２９．６５、１２８．６５、１２８．４３、１２７．８２、１２６．１５、５３．３８、５１．９６、５０．４６、３６．２９。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７０．１。
メチル４−（（１−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−ベンゾエート（４ａ）
４ａの合成は、代表的な一般的手順Ｂである。３ａ（９９ｍｇ、０．３９５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液を、Ａｒ雰囲気下にて室温で適切なイソシアネート（０．０５３ｍＬ、０．３９５ｍｍｏｌ）に加え、得られた溶液を一晩撹拌した。反応を飽和重炭酸塩（１０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機物をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーを介して精製して、尿素エステルを蝋様固体（１５６ｍｇ、９８％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．６４（ｂｒｓ、１Ｈ）、８．１８（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．９７〜６．９４（ｍ、２Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６４（ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．８１（ｓ、３Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．２０（ｓ、６Ｈ）、１．７４（ｑｕｉｎｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８５、１５６．６４、１４８．８６、１４３．７５、１２９．７７、１２９．４３、１２９．０２、１２７．５３、１２２．２５、１２０．９４、１２０．３６、１０９．９２、５５．５２、５４．６０、５１．９６、４９．１９、４４．６４、４４．１８、２４．９８。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４００．２。
メチル４−（（１−（３−ヒドロキシプロピル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）ベンゾエート（４ｂ）
一般的手順Ｂに従って作製して、蝋様固体（１１３ｍｇ、７４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０７〜８．０３（ｍ、３Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２０（ｂｒｓ、１Ｈ）、６．９３〜６．９０（ｍ、２Ｈ）、６．７７〜６．４７（ｍ、１Ｈ）、４．５９（ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．６７〜３．６２（ｍ、７Ｈ）、１．８０〜１．７７（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．６５、１５６．３１、１４７．８５、１４２．２４、１３０．１４、１２９．７０、１２８．４３、１２６．７７、１２２．４４、１２１．０４、１１９．４８、１０９．８８、５８．２５、５５．５３、５２．１２、５０．４１、４４．００、３０．３２。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７３．２。
メチル４−（（１−（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−ベンゾエート（４ｃ）
一般的手順Ｂに従って作製して、固体（２００ｍｇ、９５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２３〜８．２１（ｍ、１Ｈ）、８．１５（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．６０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６〜７．３４（ｍ、３Ｈ）、７．２２〜７．１０（ｍ、３Ｈ）、７．０２（ｓ、１Ｈ）、６．９７〜６．９４（ｍ、２Ｈ）、６．８１〜６．７９（ｍ、１Ｈ）、４．５９（ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．７０〜３．６７（ｍ、５Ｈ）、３．１２（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８３、１５５．１７、１４７．６０、１４３．２８、１３６．２９、１２９．９８、１２９．３４、１２８．７９、１２７．３０、１２７．１３、１２２．１８、１２２．０８、１２１．１５、１１９．５１、１１８．９６、１１８．４６、１１２．５３、１１１．２９、１０９．２９、５５．５６、５２．１０、５０．８９、４８．９８。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４５８．２。
メチル４−（（１−（４−ヒドロキシフェネチル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−ベンゾエート（４ｄ）
一般的手順Ｂに従って作製して、固体（１７８ｍｇ、９０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．１１（ｓ、１Ｈ）、７．０２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．９５〜６．９３（ｍ、２Ｈ）、６．８０〜６．７７（ｍ、３Ｈ）、６．４３（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．５３（ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．７３（ｓ、３Ｈ）、３．５６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８９、１５５．２５、１５４．９９、１４７．６９、１４２．９３、１３０．０４、１２９．８３、１２９．７６、１２９．４０、１２８．５０、１２７．２１、１２２．３５、１２１．１８、１１９．１０、１１５．６７、１０９．７８、５５．６０、５２．１５、５０．９７、５０．３３、３３．８８。ＬＲＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３５．２。
メチル４−（（１−（３−メトキシプロピル）−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（４ｅ）
一般的手順Ｂに従って作製して、無色油（７０ｍｇ、７３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．００（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．８４（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３０（ｍ、２Ｈ）、７．０２（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．６４（ｓ、２Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．４４（ｓ、３Ｈ）、３．４１５（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．７７（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８７、１５６．３６、１４３．７６、１３９．８５、１２９．８８、１２９．１８、１２８．８１、１２７．７２、１２２．４５、１１９．１７、６８．１６、５８．６３、５２．０５、４９．４１、４３．０５、２７．５５。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５８．２。
メチル４−（（１−（２−メトキシエチル）−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（４ｆ）
一般的手順Ｂに従って作製して、無色油（４０ｍｇ、９１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．３３（ｂｒ、１Ｈ）、８．０２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３５（ｍ、６Ｈ）、７．０２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｓ、２Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、３．５０（ｓ、３Ｈ）、３．４６（ｓ、４Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８８、１５７．０７、１４３．８１、１３９．３７、１２９．９２、１２９．２８、１２８．８１、１２７．７３、１２２．３４、１１９．１５、７２．５９、５９．２８、５２．０７、５０．９０、４８．４４。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４３．２。
メチル４−（（１−ブチル−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（４ｇ）
一般的手順Ｂに従って作製して、無色油（５９ｍｇ、９８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｍ、４Ｈ）、７．０３（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．３２（ｓ、１Ｈ）、４．６５（ｓ、２Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、３．３６（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｍ、２Ｈ）、０．９６（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．７４、１５５．３０、１４３．１１、１３８．８３、１３０．１４、１２９．５０、１２８．８５、１２７．０４、１２３．１６、１１９．９０、５２．１２、５０．４９、４７．７４、３０．５２、２０．１８、１３．８１。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４１．１。
メチル４−（（１−フェネチル−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（４ｈ）
一般的手順Ｂに従って作製して、無色油（１１３ｍｇ、９２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３６（ｍ、４Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｍ、４Ｈ）、７．０８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．９９（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｓ、１Ｈ）、４．５８（ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．５９（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．９０（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．７１、１５５．６１、１４２．９９、１３８．８６、１３８．７２、１３０．０６、１２９．４３、１２９．００、１２８．８６、１２８．６５、１２７．２８、１２６．９２、１２２．９５、１１９．８３、５２．０８、５０．３８、４９．９４、３４．７４。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８９．２。
４−（（１−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（５ａ）
５ａの合成は、代表的な一般的手順Ｃである。固体ＮａＯＨ（１２５ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ）を０℃でａｑ．溶液（５０重量％、１ｍＬ）に溶解した。次いで、４ａ（１５６ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１、合計６ｍＬ）溶液を滴加し、二層溶液は、完全な添加後、均質となった。得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。反応をＡｃＯＨ（０．２２３ｍＬ、３．９０ｍｍｏｌ）でクエンチし、真空下で濃縮し、ＨＰＬＣ方法２を介して粗生成物を精製し、重炭酸塩洗浄液で中和して表題の化合物を得た（２０ｍｇ、１３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２２（ｂｒｓ、１Ｈ）、９．０２（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．８０〜７．７６（ｍ、３Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．００〜６．９４（ｍ、２Ｈ）、６．８８〜６．８４（ｍ、２Ｈ）、４．６２（ｓ、２Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、３．４３〜３．４０（ｍ、２Ｈ）、２．８２（ｂｒｓ、２Ｈ）、２．５６（ｓ、６Ｈ）、１．９１〜１．８６（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １５５．３５、１４９．６２、１４１．５６、１３１．６９、１２８．６０、１２７．２４、１２７．１５、１２７．０２、１２３．１４、１２１．４０、１２０．２３、１１０．７８、５５．６２、５４．３３、４９．３２、４４．２４、４２．７６、２３．４５。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ２１Ｈ２８Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝４０１．２１８３；実測値４０１．２１６４。
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（１−（３−ヒドロキシプロピル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−ベンズアミド（５ｂ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法３により精製して表題の化合物（９５ｍｇ、８４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１９（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．８２（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６〜７．７１（ｍ、３Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．９５（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．８８〜６．８５（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｓ、２Ｈ）、３．７４（ｓ、３Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．４０（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．７３〜１．６９（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．１０、１５５．１８、１４９．０８、１４１．９９、１３１．５６、１２８．９１、１２７．１８、１２７．１０、１２６．９３、１２２．６１、１２０．４９、１２０．２９、１１０．７６、５７．５９、５５．６９、４９．２８、４３．９７、３０．６１。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３７４．１７１０；実測値３７４．１６９３。
４−（（１−（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（５ｃ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法１により精製して表題の化合物（６２ｍｇ、５７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２１（ｂｒｓ、１Ｈ）、１０．８６（ｓ、１Ｈ）、１０．１２（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．８６（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．７５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．５６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２〜７．４０（ｍ、３Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｓ、１Ｈ）、７．０７（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０１〜６．９６（ｍ、３Ｈ）、６．９０〜６．８６（ｍ、１Ｈ）、４．６４（ｓ、２Ｈ）、３．７１（ｓ、３Ｈ）、３．６２（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．００（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６３．９７、１５８．３７、１５４．７２、１４８．８８、１４１．９０、１３６．２１、１３１．６５、１２８．７０、１２７．１２、１２２．９８、１２２．６５、１２０．９７、１２０．３５、１１８．３１、１１８．１８、１１１．４１、１１１．１１、１１０．６６、５５．６６、４９．７７、４８．４７、２３．８９。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ２６Ｈ２６Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝４５９．２０２７；実測値４５９．２０３０。
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（１−（４−ヒドロキシフェネチル）−３−（２−メトキシフェニル）ウレイド）メチル）−ベンズアミド（５ｄ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して表題の化合物（６３ｍｇ、６３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２０（ｂｒｓ、１Ｈ）、９．２０（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．８２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．７４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３７（ｓ、１Ｈ）、７．０４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．８９〜６．８５（ｍ、１Ｈ）、６．６９（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．５７（ｓ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．７５（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．００、１５５．７６、１５４．６２、１４８．９７、１４１．８８、１３１．６３、１２９．６３、１２８．８３、１２７．１２、１２２．７２、１２０．４４、１２０．３３、１１５．２２、１１０．６９、５５．６９、４９．６８、４９．４９、３３．２１。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ２４Ｈ２５Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝４３６．１８６７；実測値４３６．１８５８。
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（１−（３−メトキシプロピル）−３−フェニルウレイド）メチル）ベンズアミド（５ｅ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して表題の化合物（４８ｍｇ、７６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１９（ｂｒ、１Ｈ）、８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｍ、２Ｈ）、６．９４（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６１（ｓ、２Ｈ）、３．３４（ｍ、４Ｈ）、３．２１（ｓ、３Ｈ）、１．７４（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．０４、１５５．３０、１４２．２５、１４０．４２、１３１．４９、１２８．３１、１２７．０６、１２１．８７、１１９．８８、６９．１６、５７．８８、４９．０８、４３．５６、２７．８１。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３５８．１７６１；実測値３５８．１７８５。
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（１−（２−メトキシエチル）−３−フェニルウレイド）メチル）ベンズアミド（５ｆ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して表題の化合物（２０ｍｇ、５０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１７（ｓ、１Ｈ）、９．０１（ｂｒ、１Ｈ）、８．４４（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）Ｈ、６．９４（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６４（ｓ、２Ｈ）、３．４９（ｓ、４Ｈ）、３．２８（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．０６、１５５．４６、１４２．１７、１４０．３０、１３１．４３、１２８．３２、１２６．９７、１２１．８３、１１９．６４、７０．８８、５８．３１、４９．８２、４６．３５。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１８Ｈ２１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３４４．１６０５；実測値３４４．１６０１。
４−（（１−ブチル−３−フェニルウレイド）メチル）−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（５ｇ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して表題の化合物を得た（４０ｍｇ、６８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１７（ｂｒ、１Ｈ）、８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４６（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２２（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．９４（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６２（ｓ、２Ｈ）、３．３０（ｍ、１Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｍ、２Ｈ）、０．８６（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．０１、１５５．２２、１４２．３０、１４０．４５、１３１．４２、１２８．１９、１２７．００、１２６．９６、１２１．８０、１２０．０４、４９．０１、４６．１１、２９．６４、１９．４３、１３．７７。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３４２．１８１２；実測値３４２．１８０２。
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（１−フェネチル−３−フェニルウレイド）メチル）ベンズアミド（５ｈ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して表題の化合物（７１ｍｇ、６３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１５（ｂｒ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｍ、７Ｈ）、６．９５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６０（ｓ、２Ｈ）、３．５４（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．０４、１５５．１２、１４２．１２、１４０．３５、１３９．０４、１３１．５０、１２８．７７、１２８．３１、１２８．２０、１２７．０９、１２７．０５、１２６．１６、１２１．９１、１２０．１３、４９．２０、４８．０４、３３．９１。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ２３Ｈ２３Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３９０．１８１２；実測値３９０．１７９３。
化合物の合成：スキーム２を参照 以前報告されたものと類似した方法で（Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ，４，５８１）１１、Ｎ−ブチルアニリン（６ａ）を合成した。手短には、ＣｕＩ（１９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、及び新たに挽いたＫ３ＰＯ４（８４９ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を密封チューブ内に配置した後、イソプロパノール（２ｍＬ）、エチレングリコール（０．２２２ｍＬ、４．０ｍＬ）、ヨウ化フェニル（０．２２４ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）及びｎ−ブチルアミン（０．２３７ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を連続して加えた。次いで、チューブを密封し、８０℃で１８ｈの撹拌を開始した。室温に冷却後、反応物を水：エチルエーテル（１：１、１０ｍＬ）で希釈した。水性層をエーテル（３×５ｍＬ）で抽出し、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーを介して精製して、表題の化合物を黄色油（２３５ｍｇ、７９％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．１９（ｍ、２Ｈ）、６．７０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．６０（ｂｒ、１Ｈ）、３．１２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．６２（ｍ、２Ｈ）、１．４４（ｍ、２Ｈ）、０．９８（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。スペクトルは、Ｏｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｒｙｌａｍｉｎｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｐｐｅｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｒｙｌ ａｎｉｍａｔｉｏｎ」，Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ２００３，５（２６）：４９８７−４９９０に報告されたものと一致した。
Ｎ−（３−メトキシプロピル）アニリン（６ｂ）
６ａと同一の手順に従って作製して、薄黄色油（２８２ｍｇ、８５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．１８（ｍ、２Ｈ）、６．６９（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．９２（ｂｒ、１Ｈ）、３．５２（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、３．２３（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）。スペクトルは、Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｉｒｏｎ−Ｃａｔａｌｙｚｅｄ Ｎ−Ａｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｙｌ Ｈａｌｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ａｍｉｎｅｓ」，Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ２００８，１０（２０）：４５１３−４５１６に報告されたものと一致した。
メチル４−（（３−ブチル−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（７ａ）
メチル４−（アミノメチル）ベンゾエート塩酸塩（１０１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：ｓａｔ．重炭酸塩（１：１、４ｍＬ）の二層溶液中に取り上げ、０℃でトリホスゲン（４９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、水性層をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出し、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、真空下で濃縮した。粗イソシアネートをＤＣＭ（２ｍＬ）中に取り上げ、６ａ（７５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．２０９ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。反応をｓａｔ．重炭酸塩（５ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機物をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーを介して粗物質を精製して、表題の化合物を灰白色蝋様固体（９３ｍｇ、５５％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４２（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｍ、１Ｈ）、７．２５（ｍ、４Ｈ）、４．４５（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｍ、２Ｈ）、０．８９（ｔ、７．２Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８９、１５６．８７、１４５．１４、１４１．６１、１３０．０８、１２９．７８、１２８．８５、１２８．７３、１２７．８１、１２６．９６、５２．０１、４９．２１、４４．２５、３０．６８、１９．９２、１３．８２。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４１．１。
メチル４−（（３−（３−メトキシプロピル）−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（７ｂ）
６ｂを第２級アミンとして使用した以外は、７ａの手順に従って作製し、表題の化合物を灰白色蝋様固体（６５ｍｇ、３６％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３（ｍ、１Ｈ）、７．２７（ｍ、４Ｈ）、４．６９（ｂｒ、１Ｈ）、４．４２（６．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、３．８０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．４３（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．２７（ｓ、３Ｈ）、１．８３（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８８、１５６．９５、１４５．０５、１４１．６３、１３０．１０、１２９．８０、１２８．９０、１２７．７９、１２７．００、７０．２３、５８．５４、５２．０３、４６．８６、４４．２９、２８．８２。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５７．１。
メチル４−（（３−エチル−３−フェニルウレイド）メチル）ベンゾエート（７ｃ）
市販のＮ−エチルアニリンを第２級アミンとして使用した以外は、７ａの手順に従って作製し、表題の化合物を灰白色蝋様固体（１９７ｍｇ、６３％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．９４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、４Ｈ）、４．５７（ｂｒ、１Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）、３．７６（ｄｄ、Ｊ＝１４、７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．１２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １６６．８２、１５６．６４、１４５．０９、１４１．２２、１３０．０３、１２９．７２、１２８．７９、１２７．８２、１２６．９２、５１．９５、４４．１７、４４．０９、１３．８２。ＬＲＭＳ ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１３．１。
４−（（３−ブチル−３−フェニルウレイド）メチル）−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（８ａ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して、表題の化合物を灰白色固体（７４ｍｇ、８０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１３（ｂｒ、１Ｈ）、８．７２（ｂｒ、１Ｈ）、７．６６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｍ、５Ｈ）、６．２３（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．２０（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．５７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．３５（ｍ、２Ｈ）、１．２３（ｍ、２Ｈ）、０．８２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．１７、１５６．４８、１４４．５０、１４２．１２、１３０．１２９．５５、１２８．２２、１２６．６７、１２６．６１、４８．４４、４３．３８、３０．２１、１９．３５、１３．７２。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３４２．１８１２；実測値３４２．１８２５。
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（３−（３−メトキシプロピル）−３−フェニルウレイド）メチル）ベンズアミド（８ｂ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して灰白色固体（５９ｍｇ、９１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１４（ｂｒ、１Ｈ）、７．６６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｍ、５Ｈ）、６．２７（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．２８（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．１４（ｓ、３Ｈ）、１．６３（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．１３、１５６．５１、１４４．４４、１４２．１９、１３０．８９、１２９．５７、１２８．１８、１２６．７０、１２６．６４、６９．４９、５７．８０、４６．３５、４３．３９、２８．３２。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３５８．１７６１；実測値３５８．１７４９。
４−（（３−エチル−３−フェニルウレイド）メチル）−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（８ｃ）
一般的手順Ｃに従って作製し、方法２により精製して灰白色固体（９１ｍｇ、９６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．１３（ｂｒ、１Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．２６（ｍ、５Ｈ）、６．３０（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１（ｄｄ、Ｊ＝１４、７．２Ｈｚ、２Ｈ）、０．９９（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．２１、１５６．３４、１４４．５４、１４２．００、１３０．９２、１２９．５７、１２８．３２、１２６．７５、１２６．６７、４３．７０、４３．３９、１３．７６。ＨＲＭＳ ＥＳＩ：計算値Ｃ１７Ｈ１９Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝３１４．１４９９；実測値３１４．１４８９。
ＨＤＡＣ阻害アッセイ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）により、Ｓｆ９細胞内のバキュロウィルス発現システムからの単離されたヒト組み換え完全長ＨＤＡＣ１及び−６を使用して、ＨＤＡＣ阻害アッセイを行った。ｐ５３の残基３７９〜３８２に由来するアセチル化蛍光ペプチド、ＲＨＫＫＡＣを、基質として使用した。反応緩衝液を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８．０、１２７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣ１、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、及び１％ＤＭＳＯの最終濃度で作製した。化合物をＤＭＳＯ及び酵素混合物に供給し、５〜１０分間プレインキュベートした後、基質を加え、３０℃で２ｈインキュベートした。トリコスタチンＡ及び展開液を加えて反応をクエンチし、各々の蛍光を生成した。用量応答曲線を３０μΜ化合物から出発して３倍段階希釈を用いて生成し、１０−用量プロットを生成した。次いで、得られたプロットからＩＣ５０値を生成し、表された値は、二重試験の平均±標準偏差である。
化合物１は、マイクロモル以下のＨＤＡＣ阻害活性を所有すると特定された；しかしながら、該化合物は、Ｚｎ２＋−依存性クラス１及び２の代表的なメンバー（各々、ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ６）に対して選択的ではなかった。ＨＤＡＣ６に関する活性及び選択性は、ＨＤＡＣ６表面上の独特の空洞へのアクセスにより改善し得ることが発見された。このことは、尿素窒素上の置換により達成された。ＨＤＡＣ６上には、ＨＤＡＣ１と比較して短い基質チャネルが存在し、この特徴は、重要なイソ型選択性を付与する卓越した戦略を示した（Ｂｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１０，１３２（３１）：１０８４２−１０８４６；Ｋａｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２０１２，５５（２）：６３９−６５１）。尿素モチーフ上に置換基を組み込むことにより、更なる分枝分子表面が、ＨＤＡＣ６表面における僅かな相違により価値のある接触を形成し得る一方、ベンジルリンカーは、ＨＤＡＣ１阻害から離れることを優先する、より短いリンカーを与える。得られたＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ６阻害データの概要を、表１に示す。
１に基づく類似体は、同一の２−メトキシフェニルキャップ基を維持したが、尿素の近位結合窒素上に様々な置換を含んでいた（５ａ〜ｄ）。この位置への分枝要素の導入は、ＨＤＡＣ１の活性の低下において劇的な影響を有した。興味深いことに、ＨＤＡＣ６における阻害は、この置換の性質に依存することが見出された。５ａのようなジメチルアミノ置換、及び５ｃのような３−インドイル置換の両方は、化合物１と比較して３倍を超えて低い強度であったため、ＨＤＡＣ６阻害に有害であることが証明された。しかしながら、これらはＨＤＡＣ１にて低いマイクロモル阻害活性を維持した；しかし、ＨＤＡＣ６に対する活性は、マイクロモル以下のみの範囲であった。５ａの第３級アミンは生理学的ｐＨでプロトン化されるため、正電荷は、適切な標的結合に不都合である可能性がある。同様に、５ｃのより大きいインドール基は、活性部位により適切に収容されるには、単に過剰に大きい立体的嵩高さを呈する可能性がある。しかしながら、３−ヒドロキシプロピル誘導体、５ｂ、及び４−ヒドロキシフェニルエチル誘導体、５ｄは、ＨＤＡＣ６の阻害に有意な増大をもたらした。これらの置換は、ＨＤＡＣ１活性上に僅かな効果のみを有した。５ｂ及び５ｄのヒドロキシル基は、Ｈ結合アクセプター又はドナーとして機能することができ、ＨＤＡＣ６表面上の主要なアミノ酸残基との都合のよい相互作用を有するため、結合親和性を改善する。
１に基づいた第１シリーズの化合物は、アリール尿素キャップ内の２−メトキシ基を維持した。フェノールの酸化可能性はインビボでの効力に相当のハードルを呈するため、構造活性関連性（ＳＡＲ）の研究は同一の化学的構造を用いたフェニルキャップを有するシリーズの合成により前進した。Ｈ結合アクセプターの影響を示すために、自由ヒドロキシル部分を遮蔽した。自由ヒドロキシルをメチル基でキャッピングすることにより５ｅがもたらされ、これもまたＨＤＡＣ６に対する＞４００倍の選択性を有する低いナノモル阻害剤として見出された。５ｆのエチレン架橋の短縮により、ＨＤＡＣ６阻害は有意に制止されなかったが、ＨＤＡＣ１に対する活性を僅かに増大させ、最終的にＨＤＡＣ６に対する選択性を低下させた。確立された一般的な傾向は、Ｈ結合ドナー及び大きい芳香族基が活性を阻止する一方、Ｈ結合アクセプターを有するより小さい基が、選択的ＨＤＡＣ６活性に有利に働くことであった。興味深いことに、ｎ−ブチル５ｇ及びフェネチル５ｈは低いナノモル範囲で熟達したＨＤＡＣ６ｉであり、５ｇはＨＤＡＣ１上に卓越した選択性を有した（６００倍）。これらの結果は、特定のＨ結合相互作用が活性に必要であるという考えを否定した。
分枝要素を遠位尿素窒素に移動することにより類似体８ａ〜ｃがもたらされた。このシリーズで最も強力な８ａは、５ｅと同一のｎ−ブチル置換を所有していた。８ａはナノモルＨＤＡＣ６Ｉであるが、強さは５倍低く、より興味深いことに、近位的に置換された同族体５ｅよりも選択性が低い。メトキシ変異体８ｂは、ＨＤＡＣ６に対する有効性が劇的に低下した。近位窒素上でのアルキルからヘテロアルキルへの切替えは、遠位窒素上で等効力の阻害をもたらしたが、この修飾は、更に強力なＨＤＡＣ６Ｉの開発には有害であった。８ｃでアルキル分枝の長さを低減することもまた、ＨＤＡＣ６阻害を低下させた。これらのデータは、非環状尿素を含むキャップ基で飾られた阻害剤に関する特定の必要性と、強力かつ選択的な阻害が、殆どが分枝キャップ基を生成する近位窒素上の尿素置換に由来することとを指摘する。
開示した化合物を他者が開発した他のＨＤＡＣｉに対して評価すると、「Ｎｅｘｔｕｒａｓｔａｔ Ａ」と称される５ｇが、実際に、強力及び選択的ＨＤＡＣ６ｉであることが明らかとなる。例えば、５ｇを、別のＨＤＡＣ６ｉであるツバスタチンＡ（Ｂｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１０，１３２（３１）：１０８４２−１０８４６）と比較すると、ＨＤＡＣ１に対する卓越した選択性を維持しながら、ＨＤＡＣ６の阻害が改善されたことが明らかとなる。５ｇはまた、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）に匹敵するＨＤＡＣ６有効性を示す（表１参照）。加えて、アミノ−ベンズアミドＺＢＧがＨＤＡＣｉに組み込まれており、その導入によりクラス２阻害が低下し、クラス１選択性がもたらされる；このことは、抗増殖活性を所有し、最近臨床試験が開始されたＨＤＡＣＩであるＭＧＣＤ０１０３により象徴化される（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ Ｎ−（２−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｙｌ）４−４−ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌａｍｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌ ｂｅｎｚａｍｉｄｅ（ＭＧＣＤ０１０３），ａｎ ｏｒａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００８，５１（１４）：４０７２−４０７５）。ＭＧＣＤ０１０３と比較すると、５ｇは、ＨＤＡＣ１における活性に３０倍の低下をもたらす。
式Ｉ−Ｃの環状尿素である化合物１０ａ、１０ｂ及び１１ａを用いて同様の実験を行った（表２）。
ＨＤＡＣイソ型は互いに高く一致しているため、選択性の獲得は、標的外（ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ）効果を避けるために重要であり、開示したＨＤＡＣ６ｉの開発に最重要である。クラス１阻害は、パン−選択的ＨＤＡＣｉに関連した細胞毒性の原因となることが周知であり；従って、５ｇは、１１の全部のイソ型に対してスクリーニングされた（表３）。類似したクラス１及びクラス４イソ型において、５ｇは、ＨＤＡＣ６の低いナノモル活性と比較して低いマイクロモル活性を示した。更に、５ｇは、関連したクラス２ＨＤＡＣイソ型のメンバーに対して高いレベルの選択的阻害を示し、ある場合には＞１０００倍の選択性に達した。これらのデータは、５ｇ、及び同様の類似体が、強力であり、イソ型選択的ＨＤＡＣ６ｉであることを確立する。
チューブリン及びヒストンアセチル化ウェスタンブロットアッセイ ５ｇが、アセチル化ヒストンのレベルを上昇させることなく、α−チューブリンの超アセチル化、ＨＤＡＣ６阻害の顕著な特徴を誘導する能力について評価した。Ｂ１６黒色腫細胞を１０５細胞／ウェルで１２ウェルプレート内に蒔き、一晩接着させた。次いで、５０ｍＭのストックの化合物を、示した濃度へ段階希釈することにより完全培地内に加えた。細胞を加湿条件（３７℃、５％ＣＯ２）下で２４時間インキュベートした。次いで、ウェルを冷ＰＢＳで洗浄し、細胞を１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８．０、１０％ＳＤＳ、４ｍＭ尿素、１００ｍＭ ＤＴＴ、及び１ｘプロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）を含む緩衝液中に溶解した。細胞は氷上で３０分間溶解された後、８分間超音波処理された（３０ｓの８サイクル／３０ｓの静止）。次いで、細胞を６ｘゲル負荷緩衝液と共に１０分間沸騰させ、４〜１５％勾配ゲル上で分離し、続いてニトロセルロース膜上に移した。膜をＰＢＳ−Ｔ中５％ミルクでブロックし、アセチル−Ｈ３及びＨ３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）に、並びにアセチル−α−チューブリン及びα−チューブリン（Ｓｉｇｍａ）に対する抗体を使用して特定の抗原を検出した。ＬＩ−ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ撮像システムを用いて、７００及び８００チャネルの両方を使用して、ブロットを走査することによりバンドを検出した。
ＨＤＡＣ６は２つの触媒ドメインを含む。そのＣ末端ドメインは、合成及び生理学的基質の両方に関する機能的ドメインである一方、Ｎ末端ドメインは酵素活性を欠いている（Ｚｏｕ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ６」，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２００６，３４１（１）：４５−５０）。Ｂ１６マウス（ｍｕｒｉｎｅ）黒色腫細胞に対する５ｇの低ナノモル処理により、ヒストンＨ３アセチル化のコンカマネント（ｃｏｎｃａｍａｎｅｎｔ）な上昇を有することなく、アセチルα−チューブリンレベルの用量依存的な増大がもたらされ（図３９）、これは第２の、触媒的に活性な触媒ドメインに対する結合を示している。１及び１０μΜの濃度が使用される直前に、ヒストンＨ３アセチル化の観察可能な増大が見出された。ヒストンアセチル化の原因となる、クラス１ ＨＤＡＣに対する５ｇの生物化学的ＩＣ５０が、マイクロモル範囲内であるため、このことは予想された。選択的ＨＤＡＣ６阻害に対応する、細胞環境内での５ｇの活性に関する明らかな優先度が存在する。
Ｂ１６黒色腫細胞成長阻害アッセイ 化合物をＭＴＳアッセイにて評価して、選択的ＨＤＡＣ６ｉがＢ１６マウス黒色腫細胞上に抗増殖効果を発現する能力を決定した。Ｂ１６マウス黒色腫細胞を５×ｌ０３／ウェルで９６ウェル平底プレート内に蒔いた。翌日、培地を様々な濃度のＨＤＡＣｉを含む培地と交換し、又は、完全培地中で希釈してＤＭＳＯビヒクル濃度を一致させ、これを三重に行った。細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。生存する、代謝的に活性な細胞の密度を、標準的なＭＴＳアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ，Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、製造業者の指示に従って定量した。手短には、ウェル当たり２０μＬの試薬を加え、３７℃で３時間インキュベートした。分光測定により４９０ｎＭでの吸光度を、６９０ｎＭでの背景差分を用いて測定した。次いで、全部の値を正規化し、培地対照（１００％）の百分率として表した。
化合物を４８ｈ処理することにより、発癌性黒色腫細胞の用量依存的な成長阻害をもたらし、これを表４に纏めた。細胞成長の阻害の一般的な傾向は、ＨＤＡＣ６に関する有効性と相関する。しかしながら、強力かつ選択的な５ｂは、おそらく高い極性と効率的な細胞浸透性を有さないことから、細胞アッセイでは非常に不完全に作用した。この全細胞アッセイにて最も活性の化合物５ｄ及び５ｆ〜ｈと比較すると、最も選択的なＨＤＡＣ６ｉは、細胞成長を阻害する最大の効力を有することが明らかとなる。それらはまた、細胞浸透性の改善に寄与する可能性がある、より高いｃＬｏｇＰ値を有することに注目するべきである。５ｇ（ｃＬｏｇＰ＝２．２０）に関して例示したように、ｃＬｏｇＰがより最適なレベルに調整されるにつれて、細胞効力が回復され、生理化学的パラメーターの適切なバランスが維持される筈であることを示している。
パン−選択的ＨＤＡＣｉ ＬＢＨ５８９と比較すると、５ｇはマウスＢ１６黒色腫細胞死の誘導においておよそ１００倍、効果が低い。この効力の低下は、上記に示したように、ナノモル用量の５ｇによるＢ１６細胞の処理によりアセチル−チューブリンレベルの増大がもたらされたため、乏しい細胞浸透性に起因する可能性は低い（図３９）。加えて、両方の化合物は同様のｃＬｏｇＰ値を所有する（ＬＢＨ５８９及び５ｇに関して、各々２．６４対２．２０）。むしろ、ＬＢＨ５８９処理による非選択的ＨＤＡＣ阻害の効果は、その有効性、特にそのクラス１活性の増大に寄与する可能性がある。５ｇがツバスタチンＡと比較して、Ｂ１６細胞に対する有効性が増大していることに注目することも興味深い（表４）。細胞活性の相違に関する決定的な説明は存在しないが、５ｇのＨＤＡＣ６活性の改善によるものである可能性がある。ＨＤＡＣ６−選択的阻害剤は今日まで癌治療法に役割を有さなかったが、データはこの領域において有用性を有することを示している。それ故、この研究は、黒色腫細胞に対する抗増殖効果を所有するＨＤＡＣ６選択的阻害剤の最初の報告を構成している。
添付の特許請求の範囲の材料及び方法は、特許請求の範囲の数個の態様の例示を意図する、本明細書に記載した特定の材料及び方法によりその範囲を限定されず、機能的に等価な任意の材料及び方法は、本開示の範囲内に含まれる。本明細書に示し及び記載したものに加えて、材料及び方法の様々な変更が添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。更に、所定の代表的な材料、方法、並びにそれらの材料及び方法の態様のみが詳細に記載されているが、特に引用されなくとも、他の材料及び方法、並びに該材料及び方法の様々な特徴の組み合わせが添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。従って、工程、要素、構成要素、又は構成成分の組み合わせが本明細書に明確に言及され得るが、明確に言及されなくとも、工程、要素、構成要素、又は構成成分の他の全ての組み合わせが含まれる。

Claims (27)

  1. 式Ｉ：
    を有する化合物、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であって、
    式中、Ａは、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、あるいはハロ、から選択される１つ以上の基で随意に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル、フェニル、ピリジル、オキサゾリジル、又はピリミジルであり、および
    ；Ｒ１及びＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ１〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアリール、アリール、Ｃ１〜Ｃ３アルキルヘテロアリール、又はヘテロアリールから独立して選択され、これらのいずれかは、随意にアセチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、＝Ｏ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、又はニトロで置換され；又はＲ１及びＲ２は、一緒になって２個の原子を含むアルキレン架橋を形成して、−ＮＣ（Ｏ）Ｎ−部分と共に５員環が形成されるように連結され、その場合、Ａは、上記に定義した通りであり又は水素であり、またその５員環は、随意にＲ１’、Ｒ２’、Ｒ１’’、及びＲ２’’で置換され、これらは独立して、水素又はＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアリール、アリール、Ｃ１〜Ｃ３アルキルヘテロアリール、若しくはヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にアミノ、アリール、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロ、又はヒドロキシで置換され；又はＲ１’及びＲ１’’は一緒になって若しくはＲ２’’及びＲ２’は一緒になって＝Ｏを形成し；又はＲ１’及びＲ２’は存在せず、Ｒ１’’及びＲ２’’は一緒になって縮合フェニル基を形成し；
    Ｒ６及びＲ７は、独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、又は一緒になって４若しくは５個の原子を含むアルキレン架橋を形成して、窒素と共に５又は６員環が形成されるように連結される、化合物。
  2. Ｒ１及びＲ２が両方とも水素である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ａがフェニルである、請求項１に記載の化合物。
  4. Ａが、１つ以上のＣ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、又はハロで置換されたフェニルである、請求項１に記載の化合物。
  5. Ａがオルト−メトキシル置換フェニルである、請求項１に記載の化合物。
  6. Ａが、ピリジル、又は１以上のＣ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、若しくはハロで置換されたピリジルである、請求項１に記載の化合物。
  7. Ａが、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｉ−ペンチル、又はｓ−ペンチル基である、請求項１に記載の化合物。
  8. Ｒ１が水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にＣ１〜Ｃ３アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、＝Ｏ、ヒドロキシ、チオール、又はシアノで置換される、請求項１に記載の化合物。
  9. Ｒ１がＣ１〜Ｃ８アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  10. Ｒ１が、随意にアセチル、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４）２Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、＝Ｏ、ハロ、又はヒドロキシで置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  11. Ｒ１が水素である、請求項１に記載の化合物。
  12. Ｒ２が水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にＣ１〜Ｃ５アルキル、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、＝Ｏ、ヒドロキシ、チオール、又はシアノで置換される、請求項１に記載の化合物。
  13. Ｒ２がＣ１〜Ｃ５アルキル、又はメトキシ、アミノ、−ＮＲ６Ｒ７、ヒドロキシアルキル、＝Ｏ、ヒドロキシ、シアノで置換されたＣ１〜Ｃ５アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  14. Ｒ２が、ヘテロアリールで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  15. Ｒ２が、フェニル、ヒドロキシ置換フェニル、メトキシ置換フェニル、ハロ置換フェニル、又はアミノ置換フェニルで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  16. 式Ｉ−Ａ：

    を有し、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であって、
    式中、各Ｗは、ＣＨでありまたはＷのうち１または２がＮでありその他のＷはＣＨ；Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシまたはハロである請求項１に記載の化合物。
  17. 式Ｉ−Ｂ：

    を有し、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であって、
    式中、各Ｗは、ＣＨでありまたはＷのうち１または２がＮでありその他のＷがＣＨであり；Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシまたはハロである請求項１に記載の化合物。
  18. 式Ｉ−Ｃ：
    を有し、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは水和物であって、
    式中、Ａは、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、あるいはハロ、から選択される１つ以上の基で随意に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル、フェニル、ピリジル、オキサゾリジル、又はピリミジルであり、；Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１’’、及びＲ２’’は、独立して水素であり、又はＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ６ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアリール、アリール、Ｃ１〜Ｃ３アルキルヘテロアリール、若しくはヘテロアリールであり、これらのいずれかは、随意にアミノ、アリール、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロ、又はヒドロキシで置換され；又はＲ１’及びＲ１’’は一緒になって若しくはＲ２’’及びＲ２’は一緒になって＝Ｏを形成し；又はＲ１’及びＲ２’は存在せず、Ｒ１’’及びＲ２’’は一緒になって縮合フェニル基を形成する、請求項１に記載の化合物。
  19. Ｒ１’及びＲ１’’又はＲ２’及びＲ２’’が両方ともメチルである、請求項１８に記載の化合物。
  20. Ｒ１’が水素であり、Ｒ１’’が、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ベンジル、トシル、ヒドロキシフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシフェニル、若しくはアミノフェニルであり、又はＲ２’が水素であり、Ｒ２’’がメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ベンジル、トシル、ヒドロキシフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシフェニル、若しくはアミノフェニルである、請求項１８に記載の化合物。
  21. Ｒ１’及びＲ１’’又はＲ２’及びＲ２’’が＝Ｏ基を形成する、請求項１８に記載の化合物。



  22. から選択される、請求項１に記載の化合物。
  23. 対象における黒色腫又はマントル細胞リンパ腫の処置のための薬剤の製造における治療的有効量のヒストンデアセチラーゼ阻害剤の使用であって、
    前記阻害剤が請求項１乃至２２のいずれか一項に記載の化合物である使用。
  24. 前記阻害剤がヒストンデアセチラーゼ６阻害剤である、請求項２３に記載の使用。
  25. 前記阻害剤がツバスタチンＡである、請求項２３又は２４に記載の使用。
  26. 前記阻害剤がイピリムマブ、レブリミド、ベルケイド、ベムラフェニブ、ＳＴ−３−０６、ＳＴ−２−９２、ツバスタチンＡ、ツバシンのうちの１つ以上と共に使用される、請求項２３乃至２５のいずれか一項に記載の使用。
  27. 前記阻害剤がＳＴＡＴ３阻害剤と組み合わされる、請求項２３乃至２６のいずれか一項に記載の使用。
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