JP6039321B2

JP6039321B2 - メタロチオネイン産生促進剤及び抗酸化剤

Info

Publication number: JP6039321B2
Application number: JP2012195315A
Authority: JP
Inventors: 雅則濱口; 服部　文弘; 文弘服部; 和則阪井田
Original assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-09-05
Filing date: 2012-09-05
Publication date: 2016-12-07
Anticipated expiration: 2032-09-05
Also published as: JP2014051440A

Description

本発明は、メタロチオネインの産生を促進することによって、抗酸化に有効な製剤に関する。

メタロチオネイン (metallothionein) は、1957年にMargoshesとValleeによってウマの腎臓からカドミウムを結合するタンパク質として発見された金属結合性のタンパク質であり、六十数個のアミノ酸残基で構成され、そのうちの約１／３がシステイン残基である分子量６０００〜７０００の蛋白質でできることから、必須微量元素の恒常性維持あるいは重金属元素の解毒の役割を果たしている。
メタロチオネインは上記の作用のほかに活性酸素のスカベンジャーの働きがあると報告されている。（非特許文献１参照）
皮膚への太陽紫外線の照射等によって活性酸素が生じ、活性酸素は皮膚に対してＤＮＡ損傷等の種々のダメージを加えることはよく知られている。
また、メタロチオネイン以外の多くの活性酸素のスカベンジャーは不安定なものが多い。
メタロチオネインの産生を促進する物質としては、高級脂肪酸亜鉛、金属錯体、ヒノキチオール又はその塩等が知られている。

真珠或いは真珠層を含む貝殻は、粉末化して中国では珍珠として、鎮静、眼疾患等にも用いられるが、皮膚外用剤にも古くから用いられている。さらには、浴用剤、紫外線吸収紛体としても用いられているが、真珠層由来のミネラルが皮膚角化促進剤として有効なことも本発明者らによって見出されている。

ＨａｎａｄａＫ．ｅｔａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，ｖｏｌ．１７９（ｓｕｐｐｌ．１），ｐ．１４３，１９８９特開平０７−０９７３０９号公報特開２００１−２７０８１５号公報特開２００５−２８１１６０号公報特開平０５−０９７６９０号公報特開平０８−０９２０６６号公報特開平０８−１１９８４５号公報特開２０１０−１０５９２４号公報

本発明の目的はメタロチオネインの産生を促進することによって、抗酸化に有効な製剤を得ることにある。

本発明者らが鋭意検討した結果、真珠又は真珠層粉末可溶化物が上記目的を達することがわかった。
ここでいう真珠とは，生きた真珠貝の中で球状または半球状(多少の変形を含む)に形成される代謝生産物であって，かつ、この外見しうる部分の主たる構成物質が、真珠貝の真珠層と等質であるものをいう。
真珠貝は貝殻に真珠層を有する貝類をいうが、二枚貝綱、腹足綱、頭足綱などのうち特定の古い系統の貝類を指し、例示すれば、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベガイ、イガイ、ムラサキイガイ、ヤコウガイ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カサガイ等が挙げられる。
このうち、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイが養殖も実施されており原料の確保の点から好ましい。

これらの真珠層を有する貝殻を利用する場合は貝殻に付着した、触手動物、軟体動物、節足動物、環形動物、脊索動物、海藻類等々多種多様の生物や海泥等の無機物を、水、ブラシ、ヘラ等で取り除く。（勿論貝肉等もなるべく取り除いておく）
また、貝殻の内、殻皮層、稜柱層もブラシ、ヘラ、グラインダーを用いて取り除く。また、特開昭６２−１２０３１９号公報、特開２００３−２５０４８９号公報、特開２０１１−７２２０７号公報等にも種々の方法が記載されているので任意の方法を選択すればよい。なお、貝殻付着物はある程度取り除いた方がよいが、殻皮層、稜柱層は場合によっては取り除く必要はない。
真珠は、有核の場合は必要により核を取り除いて用いる。
以上、真珠或いは真珠層を有する貝殻の一方又は両方を用いて、以下の可溶化を行うが可溶化をスムーズに行うために破砕・粉砕工程を必要に応じて加える。
破砕・粉砕は、金槌、棒等で破砕してもよいし、ジャイレトリクラッシャー、コーンクラッシャー、シングルロールクラッシャー、ダブルロールクラッシャー、インパクトクラッシャー、ボールミル、ハンマーミル、ロッドミル等のクラッシャーや粉砕機を用いて破砕・粉砕を行ってもよい。

破砕・粉砕工程の前後に、必要に応じて加熱・焼成工程を入れる。破砕・粉砕工程の前に行えば、破砕・粉砕が容易になるが、必要な加熱・焼成時間が長くなり、破砕・粉砕工程の後に行えば、その逆となり、真珠や貝殻の種類や目的によって加熱・焼成工程を行う手順を選択する。また、加熱・焼成工程は特に必要ではなく、真珠や貝殻の種類や目的によって実施すればよい。また、貝殻の場合、加熱温度を調整することによって、真珠層以外を除去する目的でも利用できる。
加熱・焼成の条件は通常２００〜２０００℃で３０分〜５時間実施する。
これに、酸を加えて水に可溶化する。
用いる酸は、カルシウムと反応して水に溶解するものであれば用いることができる。例示すれば、塩酸、硝酸、乳酸、酢酸、グリコール酸等の無機酸、有機酸を挙げることができる。

なかでもコストの面から塩酸が選択されるが、特許登録第４８１２１５０号公報に記載されているようにグリコール酸を用いると角質除去、美白等の効果も付与できる。
酸は真珠或いは真珠層を有する貝殻が、全て或いは一部が溶解する量を加える。この場合塩酸等の場合、発泡するので、必要に応じて、水を加えて、撹拌する。撹拌は加えた水の量、貝殻の粉砕程度、反応温度、発砲の程度等によって撹拌の強度を選択する。
また、反応時間、反応温度も諸条件によって変化するが、１mm以下に粉砕した場合は、１０時間〜１週間程度が好ましい。
これを必要に応じて、濾過、遠心分離等の工程を加えて利用する。

本発明の製剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現するが、皮膚外用剤として用いるのが好ましい。皮膚外用剤には、皮膚化粧料、外用医薬部外品、医療用皮膚外用剤が含まれる。

また、本発明の製剤には、上記成分の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。

上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。

油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が；ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が；炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が；高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が；高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等が；エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル等が；精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が；シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。

本発明の製剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類；黄色４号、青色１号、黄色２０２号等の厚生省令に定められたタール色素別表Ｉ及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等。
その他；殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。

本発明の製剤は、前記必須成分に必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って製造することができ、クリーム、乳液、化粧水等の形態とすることができる。

次に実施例（製造例）を挙げて本発明を詳細に説明する。

製造例
真珠より核を取り除き、乳鉢ですり潰した。これを１０５０℃で、３時間焼成した後、放冷した。
これを０．８９ｇに精製水５００ｇを加え、室温で１時間撹拌したのち、ガラスろ紙 GA-55(ADVANTEC)で濾過後、８．５％塩酸でｐＨ６．０に調整した。これを濾過滅菌した。

確認試験
試験はヒト表皮角化細胞ＮＨＥＫを用いて実施した。
細胞を24 ウェルプレートに２×１０⁴ cells/well になるように播種した。２４時間培養後、培養液を排除し、試験培地１ml に交換し、３日間培養した。３日後に培養液を回収し、回収した培地はメタロチオネイン測定キット（製品名Broad Check Metallotionein Kit 製造会社フロンティアサイエンス研究所）の付属プロトコールに従い、メタロチオネイン１の測定を行った。
生細胞数はMTTアッセイにて計測した。詳細にはＭＴＴ溶液０．３ml を添加し、４時間培養後、０．０４Ｎ−ＨＣｌを含む２-プロパノール0．３mlを加え、プレートシェーカーで５分間振とうし、プレートリーダーにて５４０nmおよび６３０nmの吸光度を測定した。解析は、統計解析ソフトにて分散の検定を行い、分散が等しければ、ｔ検定を行い、不等分散であれば、Welchのt検定を行った。

結果を図１に示す。
ＭＴＴアッセイより算出したＭＴＴ活性あたりのメタロチオネイン産生量について未添加と比較したところ、メタロチオネイン量の濃度依存性のある有意な増加が認められた。
以上のことから、ピュアパールミネラルを添加することで、メタロチオネインの産生促進作用があることが確認され、抗酸化に有効な製剤が得られることがわかった。

製造例の各種濃度で角化細胞を培養した後に産生した細胞数（ＭＴＴ活性）当たりのメタロチオネインした量を示す。

Claims

真珠及び／又は真珠層を有する貝殻の可溶化物を有効成分とするメタロチオネイン産生促進剤。（但し、抗酸化及び美白用途を除く）
焼成した真珠及び／又は真珠層を有する貝殻の可溶化物を有効成分とする請求項１のメ
タロチオネイン産生促進剤。（但し、抗酸化及び美白用途を除く）