JP6480133B2 - クローディン産生促進剤、タイトジャンクション機能強化剤 - Google Patents
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Description
しかし、研究が進み、皮膚のバリア機能は角層のみが担っていると考えられていたのが、表皮顆粒層に存在するタイトジャンクションの構成タンパク質を遺伝子レベルで欠損させると皮膚のバリア機能が崩壊することから、近年、タイトジャンクションも皮膚のバリア機能に重要な役割を担うと考えられてきている(非特許文献1参照)。
クローディンやオクルディンの産生を促進することにより、タイトジャンクション機能強化し、皮膚のバリア機能及び水分保持機能を高め、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状を予防する。
これらの用途でいくつかの物質が知られている。(特許文献1〜4参照)
ここでいう真珠とは,生きた真珠貝の中で球状または半球状(多少の変形を含む)に形成される代謝生産物であって,かつ、この外見しうる部分の主たる構成物質が、真珠貝の真珠層と等質であるものをいう。
真珠貝は貝殻に真珠層を有する貝類をいうが、二枚貝綱、腹足綱、頭足綱などのうち特定の古い系統の貝類を指し、例示すれば、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベガイ、イガイ、ムラサキイガイ、ヤコウガイ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カサガイ等が挙げられる。
このうち、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイが養殖も実施されており原料の確保の点から好ましい。
また、貝殻の内、殻皮層、稜柱層もブラシ、ヘラ、グラインダーを用いて取り除く。また、特開昭62−120319号公報、特開2003−250489号公報、特開2011−72207号公報等にも種々の方法が記載されているので任意の方法を選択すればよい。なお、貝殻付着物はある程度取り除いた方がよいが、殻皮層、稜柱層は場合によっては取り除く必要はない。
真珠は、有核の場合は必要により核を取り除いて用いる。
以上、真珠或いは真珠層を有する貝殻の一方又は両方を用いて、以下の可溶化を行うが可溶化をスムーズに行うために破砕・粉砕工程を必要に応じて加える。
破砕・粉砕は、金槌、棒等で破砕してもよいし、ジャイレトリクラッシャー 、コーンクラッシャー、シングルロールクラッシャー、ダブルロールクラッシャー 、インパクトクラッシャー、ボールミル、ハンマーミル、ロッドミル等のクラッシャーや粉砕機を用いて破砕・粉砕を行ってもよい。
加熱・焼成の条件は通常200〜2000℃で30分〜5時間実施する。
これに、酸を加えて水に可溶化する。
用いる酸は、カルシウムと反応して水に溶解するものであれば用いることができる。例示すれば、塩酸、硝酸、乳酸、酢酸、グリコール酸等の無機酸、有機酸を挙げることができる。
酸は真珠或いは真珠層を有する貝殻が、全て或いは一部が溶解する量を加える。この場合塩酸等の場合、発泡するので、必要に応じて、水を加えて、撹拌する。撹拌は加えた水の量、貝殻の粉砕程度、反応温度、発砲の程度等によって撹拌の強度を選択する。
また、反応時間、反応温度も諸条件によって変化するが、1mm以下に粉砕した場合は、10時間〜1週間程度が好ましい。
これを必要に応じて、濾過、遠心分離等の工程を加えて利用する。
色素類;黄色4号、青色1号、黄色202号等の厚生省令に定められたタール色素別表I及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類;ビタミンA、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンE等。
その他;殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。
なお、製剤への配合量は特に限定はないが0.0001重量%以上、好ましくは0.001重量%以上である。
真珠より核を取り除き、乳鉢ですり潰した。これを1050℃で、3時間焼成した後、放冷した。
これを0.89gに精製水500gを加え、室温で1時間撹拌したのち、ガラスろ紙 GA-55(ADVANTEC)で濾過後、8.5%塩酸でpH6.0に調整した。これを濾過滅菌した。
2継代目のヒト包皮由来ケラチノサイト(クラボウ)を70−80%コンフルエントとなるようHuMedia−KG2培地で培養後、試験品を加えた培地に交換し、37℃、5%CO2インキュベータ中で培養した。培養時間は1,3,6時間とした。
細胞からの Total RNAの抽出は、RNeasy mini kit(QIAGEN)を用い、添付マニュアルに従い調製した。RNA濃度は、NanoDrop1000(Thermo SCIENTIFIC)を用い算出した。
1.0μgのTotal RNAを使い、ReverTra Ace qPCR RT Kit(東洋紡社)を用い、添付マニュアルに従いRT反応を行った。
リアルタイムPCRは、StepOneplus リアルタイムPCR System(AppliedBiosystems)を用い、以下のように実施した。Taqman Fast Advanced Master Mix(AppliedBiosystems)およびクローディン1のTaqmanプライマー(AppliedBiosystems)を用い、Comparative CT(△△CT)法(n=8)により遺伝子発現比較を実施した。内部標準としてβ−Actin(AppliedBiosystems)を使用した。
結果を見ると、製造例はクローディン1の遺伝子発現量を、培養時間とともに遺伝子発現量を増加させることが分かった。
Claims (2)
- 真珠及び/又は真珠層を有する貝殻を、破砕・粉砕及び200〜2000℃で加熱・焼成した後、酸を加えて水に可溶化した可溶化物を有効成分とするクローディン産生促進剤。
- 真珠及び/又は真珠層を有する貝殻を、破砕・粉砕及び200〜2000℃で加熱・焼成した後、酸を加えて水に可溶化した可溶化物を有効成分とするタイトジャンクション機能強化剤。
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