JP5997296B2 - 免疫細胞含有組成物の製造方法及び癌治療用組成物 - Google Patents
免疫細胞含有組成物の製造方法及び癌治療用組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5997296B2 JP5997296B2 JP2014557465A JP2014557465A JP5997296B2 JP 5997296 B2 JP5997296 B2 JP 5997296B2 JP 2014557465 A JP2014557465 A JP 2014557465A JP 2014557465 A JP2014557465 A JP 2014557465A JP 5997296 B2 JP5997296 B2 JP 5997296B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- immune cell
- containing composition
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 title claims description 81
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 52
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 9
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 39
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 21
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 18
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 49
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 39
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 38
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 27
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 19
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 8
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 6
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 4
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 4
- 101001055157 Homo sapiens Interleukin-15 Proteins 0.000 description 4
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 102000056003 human IL15 Human genes 0.000 description 4
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 3
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/599—Cell markers; Cell surface determinants with CD designations not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/11—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from blood or immune system cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
上記第1の工程後に、単核球を優先的に細胞傷害性T細胞に分化させる条件下で培養を行う第2の工程と、を含む免疫細胞含有組成物の製造方法。
本発明における第1の工程は、後述する培地中で単核球を培養し、単核球をNK細胞及びNKT細胞等に分化させ、かつNK細胞及びNKT細胞等を増殖させる工程である。この工程においては、単核球を、NK細胞及びNKT細胞のみならず、γδT細胞等に選択的に分化させて、増幅させ得る。NK細胞(ナチュラルキラー細胞)、NKT細胞(ナチュラルキラーT細胞)、γδT細胞とは、それぞれリンパ球の一種であり、癌細胞を攻撃する作用を有することが知られる。なお、本発明において「NK細胞等」とは、少なくともNK細胞及びNKT細胞を指す。
単核球とは、リンパ球及び単球の総称である。単核球は、体液(末梢血、骨髄、臍帯血等の血液等)から、遠心分離、磁気ビーズ、フローサイトメトリー等の公知の方法を使用して得られる。単核球としては、iPS細胞、ES細胞及び体細胞幹細胞等の幹細胞から誘導されたものであってもよい。本発明においては、末梢血単核球(PBMC)等を単核球として好ましく使用できる。
第1の工程における培地はIL−2(インターロイキン−2)及び/又はIL−15(インターロイキン−15)と、抗CD16モノクローナル抗体とを含む。IL−2、IL−15及び抗CD16モノクローナル抗体を含む培地は、単核球を特に選択的にNK細胞、NKT細胞、γδT細胞等に分化させることができる点で好ましい。該培地により、単核球をNK細胞、NKT細胞、γδT細胞等に分化させ、これらの免疫細胞を増殖させることができる。
本発明における第2の工程は、上記の第1の工程の後に行われる。第2の工程においては、単核球を優先的に細胞傷害性T細胞に分化させる条件下で培養が行われ、第1の工程において刺激されにくかった(又は刺激されなかった)単核球が選択的にT細胞に分化し、さらには増殖する。また、第2の工程においては、第1の工程において分化し、さらには活性化及び増殖したNK細胞、NKT細胞、γδT細胞等が、第2の工程において活性化されたT細胞によって、直接又は間接的に刺激される。その結果、第2の工程は、T細胞を選択的に刺激する培養条件下で行われるものの、NK細胞、NKT細胞、γδT細胞も増幅され得る。なお、本発明において「単核球を優先的にT細胞に分化させる条件」とは、単核球からT細胞に分化させるために一般的に使用される培養条件(例えば、抗CD3抗体の存在下での培養、抗CD3抗体及びIL−2の存在下での培養、抗CD3抗体、IL−2及びIL−15の存在下での培養、抗TCR抗体の存在下での培養等)を指す。
本発明の製造方法から得られる免疫細胞含有組成物には、従来の方法のように、特定の細胞の割合が過度とならずに、複数の免疫細胞がバランス良く含まれる。本発明において「複数の免疫細胞のバランスが良い」とは、免疫細胞含有組成物中の各免疫細胞の割合が生体内における割合に近いことを指す。ただし、免疫力を効率的に強化できるという観点から、免疫細胞含有組成物中のNK細胞の割合が生体内における通常の割合よりも高くても、「複数の免疫細胞のバランスが良い」状態であると言える。複数の免疫細胞のバランスが良い状態としては、例えば、全細胞中、NK細胞40〜60%、NKT細胞15〜25%、γδT細胞2〜5%、T細胞20〜30%、Treg細胞0.01〜0.2%である状態が挙げられる。免疫細胞含有組成物中の各免疫細胞の割合はフローサイトメトリーによって特定できる。しかし、上記に例示した細胞のバランスは、患者の治療方針に応じて、培養条件の調整等によって適宜変更され得る。培養条件の調整の内容としては、例えば、培地中のNK細胞刺激剤の量よりもNKT細胞刺激剤の量を増やすこと等が挙げられる。
採血器具(商品名「BD Vacutainer CPT cell preparation tube」、ベクトン・ディッキンソン社製)によって、6人の健常人の腕から血液を24mL採血した。各血液からヒト末梢血単核球(PBMC)を回収し、得られたPBMCから、ヒトNK細胞を得た。
(PBMCの回収)
24mLの血液を4人の健常人から採取し(この時点を「Day 0」とする)、PBMCを回収した。
抗CD3抗体及び抗CD19抗体
抗CD3抗体及び抗CD56抗体
抗CD3抗体及び抗γδTCR抗体
CD56抗体及びγδTCR抗体
CD4抗体及びCD25抗体
次いで、得られたPBMCを、175IU/mLのヒトIL−2及び25ng/mLのヒトIL−15を添加した50mLの培地(KBM550、コージンバイオ株式会社製)中で懸濁させ、抗CD16モノクローナル抗体でプレコートされた75cm2フラスコ中で5日間培養した(この工程は「第1の工程」に相当し、最終培養日を「Day5」とする)。なお、以下、175IU/mLのヒトIL−2及び25ng/mLのヒトIL−15を添加し、プレコートされた抗CD16モノクローナル抗体に接触させた培地を、「NK細胞増殖培地」と言う。該NK細胞増殖培地には、IL−2、IL−15及び抗CD16モノクローナル抗体が含まれる。
Day5において、細胞をフラスコから回収し、NK細胞増殖培地中で懸濁させ、NK細胞増殖培地(150mL)を入れ、抗CD3εモノクローナル抗体でプレコートされた、滅菌済みのガス透過性の細胞培養バッグ(250mL、コージンバイオ株式会社製)中で2日間培養した(この工程は「第2の工程」に相当し、最終培養日を「Day7」とする)。この培養物は、本発明の製造方法から得られる免疫細胞含有組成物に相当する。
Day7において、培養後の細胞培養バッグを、NK細胞増殖培地(1000mL)を入れた滅菌済みガス透過性の細胞培養バッグ(1L、コージンバイオ株式会社製)に連結し、さらに37℃、5% CO2での湿度環境下で7日間培養して(この工程は「第3の工程」に相当する)培養物を得た。この培養物は、本発明の製造方法から得られる免疫細胞含有組成物に相当する。
実施例1と同様に「第1の工程」及び「第2の工程」を行い、培養前(「第1の工程」の前)及び培養後(「第1の工程」及び「第2の工程」の後)の各免疫細胞の割合を検討した。その結果を表3〜5に示す。
実施例1と同様に得た免疫細胞含有組成物を、1Lの培養培地(KBM550、コージンバイオ株式会社製)で回収し、0.2%ヒト血清アルブミン(日本製薬株式会社製)を添加した100mLの医薬品グレードの生理食塩水(テルモ株式会社製)、又は、医薬品グレードの生理食塩水のみの中で再懸濁した。次いで、細胞を4℃で24時間維持し、FACSで分析した。その代表的な結果を図4に示す。
実施例2と同様の試験を、培地を「KBM550」の代わりに表6〜8に記載のものを使用して行った。なお、「KBM570」はコージンバイオ株式会社製、「AIM−V」はインビトロジェン社製、「Milteni」はミルテニーバイオテク株式会社製である。表6〜8に、得られた免疫細胞含有組成物中の各免疫細胞の割合等を示す。なお、表6中、「培養開始時」とは「第1の工程」を行う前を指し、「培養後」とは「第1の工程」及び「第2の工程」を行った後を指す。
培地を「KBM550」の代わりに表9〜11に記載のものを使用して行い、かつ、ヒトIL−2又はヒトIL−15のいずれかを添加した培地を使用する以外は、実施例2と同様の試験を行った。表9〜11に、得られた免疫細胞含有組成物中の各免疫細胞の割合等を示す。なお、表中、「培養開始時」又は「培養前」とは「第1の工程」を行う前を指し、「培養後」とは「第1の工程」及び「第2の工程」を行った後を指す。
実施例2と同様に免疫細胞含有組成物を得た。得られた免疫細胞含有組成物を、15mL遠心管に入れ、遠心分離(1400rpm、5分)を行い、上清を除去して細胞を得た。得られた細胞について、ヒト赤芽球様白血病細胞(K562)を使用して、51Crリリース法(エフェクター細胞(免疫細胞含有組成物中の細胞数)及びターゲット細胞(K562の細胞数)の比(E:T)=20:1)を行い、細胞傷害活性を算出した。その結果を図5に示す。
((mean cpm experimental release − mean cpm spontaneous release)/(mean cpm maximal release − mean cpm spontaneous release)) × 100
実施例1と同様にしてPBMCを得た。次いで、10μg/mLの抗CD3モノクローナル抗体をプレコートした75cm2フラスコに、50mLの培地(KBM550、コージンバイオ株式会社製)を添加し、該培地中で7日間培養した後(この工程は「第2の工程」に相当する)、抗CD16モノクローナル抗体をプレコートした75cm2フラスコに、IL−2及びIL−15を含む50mLの培地(KBM550、コージンバイオ株式会社製)を添加し、該培地中で7日間培養した(この工程は「第1の工程」に相当する)。表12〜14は、培養前(「第2の工程」の前)及び培養後(「第2の工程」及び「第1の工程」の後)細胞についてのFACS分析の結果を示す。
Claims (3)
- IL−2及び/又はIL−15と、抗CD16モノクローナル抗体とを含む培地中で単核球を培養する第1の工程と、
前記第1の工程後に、単核球を優先的に細胞傷害性T細胞に分化させる条件下で培養を行う第2の工程と、を含む免疫細胞含有組成物の製造方法。 - 前記第2の工程後に、IL−2及び/又はIL−15と、抗CD16モノクローナル抗体とを含む培地中で培養を行う第3の工程を含む請求項1に記載の免疫細胞含有組成物の製造方法。
- 請求項1又は2に記載の製造方法で製造された免疫細胞含有組成物を含む癌治療用組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013004495 | 2013-01-15 | ||
JP2013004495 | 2013-01-15 | ||
PCT/JP2014/050484 WO2014112491A1 (ja) | 2013-01-15 | 2014-01-14 | 免疫細胞含有組成物の製造方法及び癌治療用組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP5997296B2 true JP5997296B2 (ja) | 2016-09-28 |
JPWO2014112491A1 JPWO2014112491A1 (ja) | 2017-01-19 |
Family
ID=51209581
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014557465A Active JP5997296B2 (ja) | 2013-01-15 | 2014-01-14 | 免疫細胞含有組成物の製造方法及び癌治療用組成物 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10160952B2 (ja) |
EP (1) | EP2947144B1 (ja) |
JP (1) | JP5997296B2 (ja) |
KR (2) | KR101923848B1 (ja) |
CN (1) | CN104919042A (ja) |
DE (1) | DE14740451T1 (ja) |
HK (1) | HK1210806A1 (ja) |
TW (1) | TWI612137B (ja) |
WO (1) | WO2014112491A1 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104357390B (zh) * | 2014-10-15 | 2017-07-07 | 恒瑞源正(深圳)生物科技有限公司 | 同时扩增cd3+cd56+cik细胞和cd3‑cd56+nk细胞的方法 |
JP6073417B2 (ja) * | 2015-06-26 | 2017-02-01 | チャ バイオテック カンパニー リミテッド | 自然殺害細胞増殖方法、及び自然殺害細胞増殖用の組成物 |
JP2019122261A (ja) * | 2016-05-19 | 2019-07-25 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞調製方法、及び細胞培養容器 |
CN108220235A (zh) * | 2016-12-22 | 2018-06-29 | 细胞邦(北京)生物技术有限公司 | 一种体外活化扩增人自然杀伤(nk)细胞的方法及其专用培养体系 |
CN107488630B (zh) * | 2017-10-09 | 2018-05-29 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤性t细胞培养基质及自然杀伤性t细胞的扩增培养方法 |
CN115710576A (zh) | 2018-02-01 | 2023-02-24 | Nkmax有限公司 | 产生天然杀伤细胞的方法和用于治疗癌症的组合物 |
WO2020152661A1 (ja) * | 2019-01-21 | 2020-07-30 | 株式会社ガイアバイオメディシン | Nk細胞を含む細胞集団の製造方法 |
JP6838750B2 (ja) * | 2019-01-21 | 2021-03-03 | 株式会社ガイアバイオメディシン | Nk細胞を含む細胞集団の製造方法 |
KR102138101B1 (ko) | 2019-02-01 | 2020-07-27 | 우양정공주식회사 | 바스켓 리프트장치 |
CN111718901B (zh) * | 2020-06-19 | 2022-11-25 | 珠海贝索细胞科学技术有限公司 | 一种高活性t细胞体外培养试剂盒及培养方法 |
JP2021035400A (ja) * | 2020-12-07 | 2021-03-04 | 株式会社ガイアバイオメディシン | Nk細胞を含む細胞集団の製造方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007297291A (ja) * | 2006-04-28 | 2007-11-15 | Yutaka Terunuma | リンパ球の活性・増殖に係る培養方法 |
WO2011030851A1 (ja) * | 2009-09-11 | 2011-03-17 | タカラバイオ株式会社 | ナチュラルキラー細胞の製造方法 |
JP2013071915A (ja) * | 2011-09-28 | 2013-04-22 | Biotherapy Institute Of Japan | Nk細胞強化型血液製剤の製造方法 |
JP2013081428A (ja) * | 2011-10-11 | 2013-05-09 | Biotherapy Institute Of Japan | Cd56陽性t細胞増強方法 |
JP2014030375A (ja) * | 2012-08-02 | 2014-02-20 | Hiroyuki Abe | 単球またはnk細胞を入手する方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006514024A (ja) | 2002-12-23 | 2006-04-27 | イネイト・ファーマ | Nk細胞の増殖に対する効果を有する医薬組成物及びそれを使用する方法 |
WO2007142300A1 (ja) * | 2006-06-09 | 2007-12-13 | Takara Bio Inc. | リンパ球の製造方法 |
KR101133185B1 (ko) | 2008-07-29 | 2012-04-06 | 서울대학교병원 | 자연살해세포의 증식방법 |
KR20130033354A (ko) | 2010-02-08 | 2013-04-03 | 가부시키가이샤 니혼 바이오세라피 켄큐쇼 | Nk세포 강화형 혈액제제의 제조 방법 |
KR101039843B1 (ko) | 2010-08-30 | 2011-06-09 | 주식회사 엔케이바이오 | 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물 및 이를 이용한 자기활성화 림프구 배양방법 |
EP2537923A1 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-26 | Oncotyrol Center for Personalized Cancer Medicine GmbH | Method for activation of specific peripheral blood mononuclear cells |
-
2014
- 2014-01-14 KR KR1020177033402A patent/KR101923848B1/ko active IP Right Grant
- 2014-01-14 JP JP2014557465A patent/JP5997296B2/ja active Active
- 2014-01-14 EP EP14740451.1A patent/EP2947144B1/en active Active
- 2014-01-14 CN CN201480004918.1A patent/CN104919042A/zh active Pending
- 2014-01-14 KR KR1020157021474A patent/KR20150104200A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-01-14 DE DE14740451.1T patent/DE14740451T1/de active Pending
- 2014-01-14 WO PCT/JP2014/050484 patent/WO2014112491A1/ja active Application Filing
- 2014-01-14 US US14/760,906 patent/US10160952B2/en active Active
- 2014-01-15 TW TW103101475A patent/TWI612137B/zh not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-11-20 HK HK15111454.9A patent/HK1210806A1/xx unknown
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007297291A (ja) * | 2006-04-28 | 2007-11-15 | Yutaka Terunuma | リンパ球の活性・増殖に係る培養方法 |
WO2011030851A1 (ja) * | 2009-09-11 | 2011-03-17 | タカラバイオ株式会社 | ナチュラルキラー細胞の製造方法 |
JP2013071915A (ja) * | 2011-09-28 | 2013-04-22 | Biotherapy Institute Of Japan | Nk細胞強化型血液製剤の製造方法 |
JP2013081428A (ja) * | 2011-10-11 | 2013-05-09 | Biotherapy Institute Of Japan | Cd56陽性t細胞増強方法 |
JP2014030375A (ja) * | 2012-08-02 | 2014-02-20 | Hiroyuki Abe | 単球またはnk細胞を入手する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
TW201435087A (zh) | 2014-09-16 |
EP2947144A4 (en) | 2016-06-08 |
DE14740451T1 (de) | 2016-03-31 |
WO2014112491A1 (ja) | 2014-07-24 |
CN104919042A (zh) | 2015-09-16 |
US10160952B2 (en) | 2018-12-25 |
KR101923848B1 (ko) | 2018-11-29 |
JPWO2014112491A1 (ja) | 2017-01-19 |
TWI612137B (zh) | 2018-01-21 |
HK1210806A1 (en) | 2016-05-06 |
EP2947144A1 (en) | 2015-11-25 |
US20160024471A1 (en) | 2016-01-28 |
KR20170139095A (ko) | 2017-12-18 |
KR20150104200A (ko) | 2015-09-14 |
EP2947144B1 (en) | 2020-09-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5997296B2 (ja) | 免疫細胞含有組成物の製造方法及び癌治療用組成物 | |
JP5577472B2 (ja) | 単球増殖剤、単球増殖用培地、単球の製造方法、樹状細胞の製造方法、及び樹状細胞ワクチンの製造方法 | |
KR101520534B1 (ko) | 말초혈액단핵구 유래 자연 살해세포의 유도 및 증식 방법 | |
CN107002039B (zh) | 使用t细胞用于培养自然杀伤细胞的方法 | |
JP5766619B2 (ja) | Nk細胞強化型血液製剤の製造方法 | |
WO2012099093A1 (ja) | Nk細胞強化型血液製剤の製造方法 | |
KR20140051263A (ko) | Nk 세포의 증폭 방법 | |
EP3000876B1 (en) | Method for preparing nk cells | |
JP2022000060A (ja) | がん治療のためのナチュラルキラー細胞および組成物の製造方法 | |
WO2006097743A2 (en) | Method for actvating natural killer cells by tumor cell preparation in vitro | |
WO2018207900A1 (ja) | 高活性nk細胞、およびその利用 | |
JPWO2007105797A1 (ja) | 新規なヒトt細胞集団 | |
JP5989016B2 (ja) | Nk細胞の増幅方法 | |
JP2014227418A (ja) | Nk細胞の調製方法 | |
CN113613723A (zh) | 包含nk细胞的细胞群体的制造方法 | |
JP5825966B2 (ja) | Cd56陽性t細胞増強方法 | |
JP2012205581A (ja) | Mhc非拘束性細胞傷害性細胞の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160802 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160825 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5997296 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |