JP5871798B2 - 肝再生を刺激する方法 - Google Patents

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Description

関連出願への相互参照
この出願は、２００９年７月２日に出願された米国仮出願第６１／２２２，８６７号（この開示は、その全体が参考として本明細書に援用される）に対する優先権を主張する。
技術分野
この出願は、部分肝切除術、肝広範囲切除および中毒性障害の後または肝移植術（例えば、サイズ不足肝移植術）後に、肝再生を刺激するための方法および組成物（例えば、医薬組成物）に関する。
政府の資金援助を受けた研究の下でなされた発明に対する権利についての声明
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈからの助成金第Ｒ０１ ＨＬ８６５７６号および助成金第Ｃ０６ ＲＲ０１５４５５号によって支援された研究の間に一部なされた。政府は、本発明に一定の権利を有し得る。
背景
肝切除は、徐々に安全な処置となってきているが、肝広範囲切除（すなわち、７０％以上）およびサイズ不足（ｓｍａｌｌ−ｆｏｒ−ｓｉｚｅ）（ＳＦＳ）肝移植術などの一部の処置は依然としてハイリスクである（１〜３（非特許文献１〜３））。肝広範囲切除は、原発性または続発性肝臓腫瘍を有する一部の患者に対する唯一の選択肢である。ＳＦＳ移植術に関して、部分肝グラフトの使用は、ドナー臓器を２つのレシピエント臓器に分割することが可能になることにより、ドナー不足が有意に低減される可能性を有する。また、肝切除およびドナーにおける再生とレシピエントにおける再生が必要とされる処置である生体ドナー肝移植術が、一部の患者に対する選択肢として出現してきている。
部分肝が再生されないことは、主に、術後の肝機能不全および肝不全における重要な寄与因子と考えられており、肝広範囲切除またはＳＦＳ移植術のいずれかの後に、再生に必要な最小限の生存可能な肝体積は重要な概念である（１〜３（非特許文献１〜３））。肝再生障害および肝機能不全は、肝虚血再灌流障害（ＩＲＩ）（外科処置の不可避な帰結）の程度と強く関連しており、齧歯類モデルでの試験により、肝臓の小断片およびＳＦＳグラフトはＩＲＩに対してより易罹患性であることが示されている（３（非特許文献３）〜７）。小肝臓レムナント（ｒｅｍｎａｎｔ）およびＳＦＳグラフトにおける肝機能不全および肝不全を担う厳密な機構は充分に理解されていないが、補体が、ＩＲＩと肝再生のどちらにも重要な役割を果たしているようである。
補体は、免疫の重要な成分であるが、補体系の不適切で過剰な活性化は、ＩＲＩなどの数多くの病的状態に関与している。補体の活性化生成物は組織の損傷を媒介し、補体経路の種々の段階で生成される。細胞表面上での補体の活性化により、血清Ｃ３の切断、および免疫エフェクター細胞のオプソニンとしての機能を果たすＣ３断片の共有結合がもたらされる。また、Ｃ３切断により、強力なアナフィラトキシンである可溶性ペプチドＣ３ａの生成ももたらされる。経路の後の方では、血清Ｃ５が切断され、別の強力なアナフィラトキシンであり、かつ広範な生体活性特性を有する化学誘引物質である可溶性Ｃ５ａが放出される。また、Ｃ５の切断により、細胞膜内で組織化されて最終的に細胞溶解をもたらす細胞溶解性タンパク質複合体である細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成が起こる。
本明細書に挙げた刊行物、タンパク質または核酸配列、公的配列データベース内のタンパク質または核酸配列を示す受託番号、特許出願および特許の開示はすべて、引用によりその全体が、あたかも個々の各刊行物または特許が具体的に個々に示されて引用により組み込まれているかのごとく、本明細書に組み込まれる。特に、本明細書に挙げた刊行物はすべて、本発明との関連において使用されるかもしれない組成物および方法論を説明および開示する目的で、引用により明示的に本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の発明を、明瞭な理解の目的のための実例ならびに一例としてある程度詳細に記載したが、当業者には、本発明の教示に鑑みると、添付の特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱することなく一定の変更および修正が行なわれ得ることがすぐにわかるであろう。
Ｈｅｌｌｉｎｇ， Ｔ．Ｓ．、Ｌｉｖｅｒ ｆａｉｌｕｒｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ． ＨＰＢ （Ｏｘｆｏｒｄ）（２００６）８：１６５〜１７４ Ｈｅｌｌｉｎｇ， Ｔ．Ｓ．， Ｄｈａｒ， Ａ．， Ｈｅｌｌｉｎｇ， Ｔ．Ｓ．， Ｊｒ．， Ｍｏｏｒｅ， Ｂ．Ｔ．， ａｎｄ ＶａｎＷａｙ， Ｃ．Ｗ．、Ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｒｏｍｏｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ． Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ（２００４）１１６：１〜１０ Ｃｌａｖｉｅｎ， Ｐ．Ａ．， Ｐｅｔｒｏｗｓｋｙ， Ｈ．， ＤｅＯｌｉｖｅｉｒａ， Ｍ．Ｌ．， ａｎｄ Ｇｒａｆ， Ｒ．、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｓａｆｅｒ ｌｉｖｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ（２００７）３５６：１５４５〜１５５９
発明の簡単な概要
一部の特定の実施形態では、本発明は、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法であって、個体において終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成が低減されるのに有効な量の組成物を個体に投与することを含む方法を提供する。一部の特定の実施形態では、個体は哺乳動物である。一部の特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。一部の特定の実施形態では、個体は、部分肝切除術を受けたことがある個体である。一部の特定の実施形態では、個体は、肝移植を受けたことがある個体である。一部の特定の実施形態では、肝移植片はサイズ不足肝移植片である。一部の特定の実施形態では、個体は肝臓の生体ドナーである。
一部の特定の実施形態では、組成物は補体インヒビターである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビターは、ターゲット型（ｔａｒｇｅｔｅｄ）補体インヒビターまたは非ターゲット型補体インヒビターからなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２（配列番号：１）またはその生物学的に活性な断片を含む補体受容体２（ＣＲ２）部分；および補体インヒビター部分を含み、該補体インヒビター部分が、ヒトＣＤ５９（配列番号：３）、マウスＣＤ５９アイソフォームＡ（配列番号：８）、マウスＣＤ５９アイソフォームＢ（配列番号：９）およびその生物学的に活性な断片からなる群より選択される融合タンパク質である。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン（配列番号：１のアミノ酸２３〜２７１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全長ヒトＣＤ５９（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９アイソフォームＢ（配列番号：９）を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片、クラスタリンおよびビトロネクチンからなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは抗Ｃ５抗体であるか、またはその抗原結合断片は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、またはヒト化型である。一部の特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はヒト化型である。一部の特定の実施形態では、ヒト化抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はエクリズマブ（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）またはパキセリズマブ（ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）である。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトクラスタリンタンパク質（配列番号：１５）またはマウスクラスタリンタンパク質（配列番号：１６）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのクラスタリンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターはヒトビトロネクチンタンパク質（配列番号：１７）またはマウスビトロネクチンタンパク質（配列番号：１８）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法であって、該方法は、該個体において終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成が低減されるのに有効な量の組成物を該個体に投与することを含む、方法。
（項目２）
上記個体が哺乳動物である、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記哺乳動物がヒトである、項目２に記載の方法。
（項目４）
上記個体が部分肝切除術を受けたことがある個体である、項目１に記載の方法。
（項目５）
上記個体が肝移植片を受けたことがある個体である、項目１に記載の方法。
（項目６）
上記肝移植片がサイズ不足肝移植片である、項目５に記載の方法。
（項目７）
上記個体が肝臓の生体ドナーである、項目１に記載の方法。
（項目８）
上記組成物が補体インヒビターである、項目１〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
上記補体インヒビターが、ターゲット型補体インヒビターまたは非ターゲット型補体インヒビターからなる群より選択される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
上記ターゲット型補体インヒビターが、
ａ．ＣＲ２（配列番号：１）またはその生物学的に活性な断片を含む補体受容体２（ＣＲ２）部分；および
ｂ．補体インヒビター部分
を含む融合タンパク質であって、ここで、
該補体インヒビター部分が、ヒトＣＤ５９（配列番号：３）、マウスＣＤ５９アイソフォームＡ（配列番号：８）、マウスＣＤ５９アイソフォームＢ（配列番号：９）およびその生物学的に活性な断片からなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
上記ＣＲ２部分が、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン（配列番号：２）を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
上記ＣＲ２部分が、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン（配列番号：１のアミノ酸２３〜２７１）を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
上記補体インヒビター部分が、完全長ヒトＣＤ５９（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９アイソフォームＢ（配列番号：９）を含む、項目１１または項目１２に記載の方法。
（項目１４）
上記補体インヒビター部分が、ヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含む、項目１１または項目１２に記載の方法。
（項目１５）
上記補体インヒビター部分が、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含む、項目１１または項目１２に記載の方法。
（項目１６）
上記ターゲット型補体インヒビターが、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１７）
上記ターゲット型補体インヒビターが、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１８）
上記ターゲット型補体インヒビターが、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１９）
上記ターゲット型補体インヒビターが、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２０）
上記非ターゲット型補体インヒビターが、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片、クラスタリンおよびビトロネクチンからなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目２１）
上記非ターゲット型補体インヒビターが抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片であり、該抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片が、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、またはヒト化型である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
上記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’） ２ 断片からなる群より選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片がヒト化されている、項目２１または２２に記載の方法。
（項目２４）
上記ヒト化抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片がエクリズマブまたはパキセリズマブである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
上記非ターゲット型補体インヒビターが、ヒトクラスタリンタンパク質（配列番号：１５）またはマウスクラスタリンタンパク質（配列番号：１６）である、項目２０に記載の方法。
（項目２６）
上記非ターゲット型補体インヒビターが、ヒトもしくはマウスのクラスタリンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
上記非ターゲット型補体インヒビターがヒトビトロネクチンタンパク質（配列番号：１７）またはマウスビトロネクチンタンパク質（配列番号：１８）である、項目２０に記載の方法。
（項目２８）
上記非ターゲット型補体インヒビターが、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含む、項目２７に記載の方法。
図１は、補体の欠損および阻害により、虚血および再灌流後の肝臓の損傷および炎症が防御されることを示す。測定は、Ｃ３−／−マウスまたは通常生理食塩水（ＮＳ）あるいはＣＲ２−Ｃｒｒｙ（０．２５ｍｇ用量もしくは０．０８ｍｇ用量のいずれか）で処置した野生型マウスにおいて虚血の３０分後および再灌流の６時間後または２４時間後に調製した肝臓試料または血清試料を用いて行なった。（Ａ）血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル。（Ｂ）再灌流の６時間後に０〜４の段階で測定した肝臓の壊死および損傷の組織学的定量。（Ｃ）再灌流の６時間後代表的なヘマトキシリン−およびエオシン−染色（Ｈ＆Ｅ染色）切片，矢印で示した領域は野生型マウスにおける広範な肝壊死を示す。（Ｄ）総タンパク質含有量によって標準化した肝臓試料中のミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）含有量。（Ｅ）腫瘍壊死因子α（ＴＮＦａ）の血清濃度。（Ｆ）インターロイキン−６（ＩＬ−６）の血清濃度。血清ＡＬＴレベル、組織学的スコア、肝臓ＭＰＯレベルおよび血清ＴＮＦａおよびＩＬ−６レベルはすべて、Ｉ／Ｒが起こったすべての群で、偽手術マウスと比べて有意に上昇した。すべての群の結果を平均±ＳＤで示す（ｎ＝４）（他のＩＲＩ群に対して、それぞれ、＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１；ＣＲ２−Ｃｒｒｙ ０．２５ｍｇ群に対して＊Ｐ＜０．０５；ＣＲ２−Ｃｒｒｙ ０．０８ｍｇ群に対して＠Ｐ＜０．０５，＠＠Ｐ＜０．０１）。 図２は、部分肝切除術（ＰＨｘ）後のＣ３−／−およびＣ５Ｌ２−／−マウスにおける肝脂肪症を示す。解析はすべて、ＰＨｘ後４８時間目に単離した肝臓試料によるものである。（Ａ）Ｃ３およびＣ５Ｌ２欠損は、小滴性（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ）−および大滴性（ｍａｃｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ）肝脂肪症での壊死の有意な増大と関連しているが、１５μｇのアシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ）で処置した野生型マウスおよびＣ３−／−マウスで示される明白な脂肪症は、ずっと少ないことを示す代表的なＨ＆Ｅ染色切片。（Ｂ）代表的なオイルレッドＯ染色切片。Ｃ３−／−およびＣ５Ｌ２−／−マウスでは、１５μｇのＡＳＰで処置した野生型およびＣ３−／−マウスと比べて、小滴性−および大滴性脂肪症が増大していた。（Ｃ）肝臓トリグリセリド蓄積の定量（野生型群に対して＃＃Ｐ＜０．０１；Ｃ３−／−群に対して＊＊Ｐ＜０．０１）。結果を平均±ＳＤで示す（ｎ＝４〜６）。 図３は、ＰＨｘ後、ＡＳＰでＣ３−／−マウスに再構築させると、用量に応じて再生または損傷のいずれかが増強され、Ｃ５Ｌ２欠損（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体）により損傷が増大し、再生が障害されることを示す。１５μｇまたは５０μｇ用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇを、手術直後にＣ３−／−マウスに投与し、すべての測定をＰＨｘ後４８時間目に行なった。（Ａ）血清ＡＬＴレベル、（Ｂ）組織病理学的スコア、（Ｃ）ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）取込みによる再生の評価、（Ｄ）肝臓重量の回復、（Ｅ）４８時間生存率、（Ｆ）ＰＨｘ後３時間目のＳＴＡＴ３のリン酸化形態のウエスタンブロットアッセイ。低用量ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇでＣ３−／−マウスに再構築させると２日生存率が有意に増大するが、高用量ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇでは増大しない。ｐ−ＳＴＡＴ３レベルは、Ｃ５Ｌ２−／−マウスとＣ３−／−マウスの両方において、野生型マウスと比べて、大きく低下していることに注目のこと。低用量ＡＳＰでの再構築によりＳＴＡＴ３の活性化が回復した。Ｃ３−／− ＮＳ群に対して＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１；Ｃ５Ｌ２−／−およびＣ３−／− ＮＳ（Ｃ３−／−と類似）群のそれぞれに対して＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。生存率の試験では、各群ｎ＝１０；他のすべての試験はｎ＝４〜６。 図４は、高用量ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇでＣ３−／−マウスに再構築させると、ＰＨｘ後に炎症および損傷が増強されることを示す。１５μｇまたは５０μｇいずれかの用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇを、Ｃ３−／−マウスに手術直後に投与し、サイトカインおよびＭＰＯの測定値をＰＨｘ後６時間目に測定した。（Ａ）血清ＴＮＦａレベル。（Ｂ）血清ＩＬ−６レベル。（Ｃ）肝臓試料中のＭＰＯ含有量。ＮＳ群に対して＃＃Ｐ＜０．０１；５０μｇのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ群に対して＊＊Ｐ＜０．０１。結果を平均±ＳＤで示す（すべての群でｎ＝４〜６）。 図５は、ＰＨｘ後の肝臓の損傷および再生に対する高用量および低用量での補体阻害の反対の効果を示す。野生型マウスを、通常生理食塩水または０．２５ｍｇもしくは０．０８ｍｇいずれかの用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで手術直後に処置した。測定はすべて、ＰＨｘ後４８時間目に行なった。（Ａ）血清ＡＬＴレベル。（Ｂ）肝臓の壊死および損傷の組織学的定量（０〜４の段階で判定）。（Ｃ）ＢｒｄＵ取込みによる再生の評価。（Ｄ）Ｈ＆Ｅ染色切片中の有糸分裂を行なっている肝細胞の割合を計算することにより評価した有糸分裂指数。（Ｅ）肝臓重量の回復（肝臓総重量に対する再生肝質量の割合で表示）。（Ｆ）７０％ＰＨｘの７日後の累積生存率。Ａ〜Ｅのすべての測定で、通常生理食塩水群に対して＃＃Ｐ＜０．０１；他のすべてのＰＨｘ群に対して＊＊Ｐ＜０．０１。結果を平均±ＳＤで示す（すべての群で、ｎ＝６）。Ｆでは、ＮＳおよびＣＲ２−Ｃｒｒｙ ０．０８ｍｇ処置群（ｎ＝２０）と比べてＰ＜０．０１。 図６は、ＰＨｘ後、ＣＲ２−Ｃｒｒｙでのマウスの処置により、肝臓内Ｃ３ｄ沈着の用量依存性の低減がもたらされることを示す。野生型マウスを、通常生理食塩水（Ａ）または０．２５ｍｇ（Ｂ）もしくは０．０８ｍｇ（Ｃ）の用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで手術直後に処置した。Ｃ３−／−マウス（Ｄ）には処置を施さなかった。ＰＨｘ後４８時間目、肝臓を取り出し、切片をＣ３ｄ沈着について免疫蛍光顕微鏡検査によって解析した。野生型マウスでは、補体沈着は中心小葉領域に局在しており、肝細胞および洞様毛細血管内皮細胞と関連していた。Ｃ３沈着は、０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは低減され、０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスおよびＣ３−／−マウスでは存在しなかった。代表的な画像，ｎ＝３。 図７は、ＩＲＩとＰＨｘの両方を受けたモデルにおける、肝臓の損傷および再生に対する高用量および低用量での補体阻害の反対の効果を示す。マウスは、通常生理食塩水または０．２５ｍｇもしくは０．０８ｍｇいずれかの用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで手術直後に処置した。Ｃ３−／−マウスには処置を施さなかった。測定はすべて、Ｉ／ＲおよびＰＨｘ後４８時間目に行なった。（Ａ）マウス生存率。（Ｂ）血清ＡＬＴレベル。（Ｃ）肝臓の壊死および損傷の組織学的定量（０〜４の段階で判定）。（Ｄ）ＢｒｄＵ取込みによる再生の評価。（Ｅ）肝臓重量の回復。（Ｆ）肝臓試料中のＭＰＯ含有量。野生型群に対して＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１；野生型群（野生型ＮＳ群に類似）に対して＊＊Ｐ＜０．０１；他のすべての群に対して＠＠Ｐ＜０．０１。結果を平均±ＳＤで示す（ｎ＝６〜１０）。 図８は、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後のＴＮＦａおよびＩＬ−６の肝臓レベルおよび血清レベルに対するＣ３欠損および補体阻害の効果を示す。マウスは、通常生理食塩水または０．２５ｍｇもしくは０．０８ｍｇいずれかの用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで手術直後に処置した。Ｃ３−／−マウスには処置を施さなかった。（Ａ）ＰＨｘ後６時間目の血清ＴＮＦａレベル。（Ｂ）ＰＨｘ後６時間目の血清ＩＬ−６レベル。（Ｃ）ＰＨｘ後４８時間目の血清ＴＮＦａレベル。（Ｄ）ＰＨｘ後４８時間目の血清ＩＬ−６レベル。（Ｅ）ＰＨｘ後３時間目の肝臓ＴＮＦａレベル。（Ｆ）ＰＨｘ後３時間目の肝臓ＩＬ−６レベル。低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置は、他の群と比べて、ＰＨｘ後、早期の高レベルの肝臓ＩＬ−６およびＴＮＦａならびにＰＨｘ後４８時間までの低い相対血清サイトカインレベルと関連していた。野生型群に対して＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１；野生型群（野生型ＮＳ群と類似）に対して＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１；ＣＲ２−Ｃｒｒｙ ０．２５ｍｇおよびＣ３−／−群に対して＠＠Ｐ＜０．０１。結果を平均±ＳＤで示す（すべての群で、ｎ＝６）。 図９は、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後の、ＳＴＡＴ３およびＡｋｔの活性化ならびに肝臓ＡＴＰレベルに対する高用量および低用量での補体阻害の反対の効果を示す。マウスは、通常生理食塩水または０．２５ｍｇもしくは０．０８ｍｇいずれかの用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで手術直後に処置した。Ｃ３−／−マウスには処置を施さなかった。（Ａ）ＩＲＩ＋ＰＨｘ後３時間目および６時間目に採取した肝臓試料を用いたＳＴＡＴ３およびＡｋｔのリン酸化のウエスタンブロット解析。ＣＲ２−Ｃｒｒｙの低用量での補体阻害は、ＳＴＡＴ３およびＡｋｔの活性化の増大と関連していた。対照的に、ｐ−ＳＴＡＴ３およびｐ−Ａｋｔの発現は、高用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスおよびＣ３−／−マウスにおいて有意に低減された。（Ｂ）ＩＲＩ＋ＰＨｘ後、異なる時点で採取した肝臓組織試料中のＡＴＰ含有量。ＣＲ２−Ｃｒｒｙの低用量での補体阻害は、他のすべての群と比べて少ないＡＴＰ枯渇および高い全体ＡＴＰレベルと関連していた。他のすべてのＩＲＩ＋ＰＨｘ群に対して＊＊Ｐ＜０．０１；ＣＲ２−Ｃｒｒｙ ０．２５ｍｇ群およびＣ３−／−群に対して＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１。すべての群でＮ＝４〜６。 図１０は、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置により、酸化的ストレスのマーカーレベルが低下することを示す。（Ａ）ＩＲＩ＋ＰＨｘの６時間後のグルタチオン（ＧＳＨ）および（Ｂ）マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の含有量（分光測光により測定、ｎｍｏｌ／ｍｇ肝臓試料中のタンパク質で表示）。（Ｃ）グルタチオンペルオキシダーゼ１（ＧＰＸ１）のウエスタンブロット解析（低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置により、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後、ＧＰＸ１レベルの相対減少が抑制されることを示す）。ウエスタンブロットデータは、オートラジオグラムの画像解析によって定量。データはすべて平均±ＳＤ。ＮＳ群に対して＊＊Ｐ＜０．０１（ｎ＝４）。 図１１は、ＩＬ−６遮断により、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後の低用量での補体阻害の保護効果が逆転されることを示す。マウスは、０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙおよび抗マウスＩＬ−６抗体または対照ＩｇＧのいずれかでＩＲＩ＋ＰＨｘ直後に処置した。（Ａ）ＰＨｘ後６時間目の血清ＩＬ−６レベル（Ｂ）ＰＨｘ後３時間目の肝臓ＩＬ−６レベル。（Ｃ）ＰＨｘ後３時間目のＳＴＡＴ３のリン酸化形態（ｐ−ＳＴＡＴ３）のウエスタンブロット解析ならびにデンシトメトリーによる定量。ｐ−ＳＴＡＴ３レベルは、抗ＩＬ−６ 抗体で処置したマウスで大きく低下した。（Ｄ）ＰＨｘ後４８時間目の血清ＡＬＴレベル。（Ｅ）ＰＨｘ後４８時間目のＢｒｄＵ取込み。データを平均±ＳＤで示す（ｎ＝４）。ＩｇＧ対照ＩＲＩ＋ＰＨｘ群に対して＃＃Ｐ＜０．０１。 図１２は、部分流入閉塞モデルにおいて、補体の欠損および阻害により虚血および再灌流後の肝臓の損傷および炎症が防御されることを示す。測定は、通常生理食塩水（ＮＳ）またはＣＲ２−Ｃｒｒｙ（０．２５ｍｇもしくは０．０８ｍｇいずれかの用量）で処置したＣ３−／−マウスまたは野生型マウスにおいて虚血の９０分後および再灌流の表示した時間後に調製した肝臓試料または血清試料を用いて行なった。（Ａ）再灌流後６時間目の代表的なＨ＆Ｅ染色切片。（Ｂ）血清ＡＬＴレベル。（Ｃ）血清ＴＮＦａレベル。（Ｄ）血清ＩＬ−６レベル。（Ｅ）総タンパク質含有量によって標準化した肝臓試料中のＭＰＯ含有量。結果を平均±ＳＤで示す（ｎ＝４〜６）。他のすべてのＩＲＩ群に対して＃＃Ｐ＜０．０１；ＣＲ２−Ｃｒｒｙ ０．２５ｍｇ群およびＣ３−／−群に対して＊＊Ｐ＜０．０１。 図１３は、７０％ＰＨｘ後、補体欠損により肝臓の損傷が増大し、再生が阻害されることを示す。測定はすべて、ＰＨｘ後４８時間目に行なった。（Ａ）血清ＡＬＴレベル。（Ｂ）肝臓の壊死および損傷の組織学的定量（０〜４の段階で判定）。（Ｃ）ＢｒｄＵ取込み、（Ｄ）有糸分裂指数、および（Ｅ）肝臓重量の回復による肝再生の評価。Ａ〜Ｅは、すべての群でｎ＝６。結果を平均±ＳＤで示す，偽手術群に対して＃＃Ｐ＜０．０１；野生型ＰＨｘ群に対して＊＊Ｐ＜０．０１。（Ｆ）７０％ＰＨｘの７日後の累積生存率。ｎ＝３６／群，Ｐ＜０．０１。 図１４は、肝臓Ｃ３ｄ染色の分布および強度は、ＰＨｘ後、野生型とＣ５Ｌ２欠損マウスで有意に異ならないことを示す。野生型（Ａ）またはＣ５Ｌ２欠損マウス（Ｂ）を７０％ＰＨｘに供し、４８後、抗Ｃ３ｄの免疫蛍光顕微鏡検査のために肝臓を単離した。肝細胞内および肝細胞膜周囲のＣ３ｄの存在（緑）に注目のこと。画像は、ｎ＝３の代表的なものである。 図１５は、ＰＨｘ後、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置により肝臓の損傷が低減され、肝再生が改善されることを示す。野生型マウスを、通常生理食塩水（ＮＳ）または０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで手術直後に処置した。（Ａ）ＰＨｘ後、種々の時点での肝臓重量の増加は、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、ＮＳ対照群と比べて質量回復が改善されたことを示す。（Ｂ）有糸分裂指数は、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、ＮＳ処置マウスと比べて増大した。（Ｃ）０〜９段階（実施例１、材料および方法を参照のこと）での４８時間の病的状態。（Ｄ）血清ＡＬＴレベル。結果を平均±ＳＤで示す，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。Ａ、Ｂ、Ｄの各時点ではｎ＝４〜６匹のマウス、Ｃではｎ＝１２。 図１６は、３０分間の虚血および６時間の再灌流に供した肝臓の組織学的検査の結果を示す。Ａ：偽手術；Ｂ：ＷＴ；Ｃ：ＣＤ５９−／−；Ｄ：ＣＤ５９−／−＋ＣＲ２−ＣＤ５９。肝臓の損傷の組織学的徴候の定量により、ＣＤ５９−／−動物におけるＩＲＩが、ＷＷマウスと比べて肝臓のダメージの有意な増大と関連していることが示された（＃＃Ｐ＜０．０１）。０．４ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９での再構築により、肝臓の損傷は有意に低減された（＊＊Ｐ＜０．０１）。偽手術動物は、すべての場合で組織学スコア０を有した（ｎ＝６）。 図１７は、ＩＲＩにより、ＣＤ５９−／−マウスでは、野生型マウスと比べて血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の有意な増大が誘導されることを示す（＃＃Ｐ＜０．０１）。０．４ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９での再構築により、ＩＲＩ後、ＣＤ５９−／−マウスにおいてＡＬＴレベルが有意に低下した（＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝６）。 図１８は、７０％ＰＨｘを受けた４８時間後、血清ＡＬＴレベルがＣＤ５９−／−マウスの肝臓で、同じ処置を受けた野生型マウスの肝臓での血清ＡＬＴレベルと比べて有意に増大したことを示す（＃＃Ｐ＜０．０１）。０．２ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９でＣＤ５９−／−動物に再構築させると、血清ＡＬＴレベルは有意に低下した（＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝６）。 図１９は、７０％ＰＨｘを受けた４８時間後、ＣＤ５９−／−マウスの肝臓で広範な壊死が検出されたことを示す。（Ａ：偽手術、Ｂ：ＷＴ、Ｃ：ＣＤ５９−／−、Ｄ：ＣＲ２−ＣＤ５９で再構築；Ｈ＆Ｅ染色、倍率１００倍）。肝臓の損傷の組織学的徴候の定量により、ＣＤ５９−／−動物における７０％ＰＨｘが肝臓のダメージの有意な増大と関連していることが示された（＃＃Ｐ＜０．０１）。この場合も、０．２ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９での再構築により、実質のダメージが有意に低減された（＊＊Ｐ＜０．０１）。偽手術動物は、すべての場合で組織学スコア０を有した（ｎ＝６）。 図２０は、ＢｒｄＵ＋細胞の数の著しい増加（＊＊Ｐ＜０．０１）によって示されるように、７０％ＰＨｘの４８時間後のＣＤ５９−／−マウスでは、野生型動物または０．２ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９で再構築させたＣＤ５９−／−動物と比べて、７０％ＰＨｘにより肝再生（ＢｒｄＵ取込みによって測定）がほぼ完全になくなることを示す（＃＃Ｐ＜０．０１）。 図２１は、７０％ＰＨｘ後のＣＤ５９−／−マウスの７日生存率がわずか３０％（３／１０）であったの比べて、野生型マウスでは１００％（１０／１０）であったことを示す（Ｐ＜０．０１）。ＣＲ２−ＣＤ５９処置により、ＣＤ５９−／−動物の生存率は３０％（３／１０）から９０％（９／１０）に有意に改善された（Ｐ＜０．０１）。 図２２は、肝臓ＩＲＩ後の野生型マウスでは、偽手術群と比べて血清ＡＬＴレベルが有意に増大していることを示す（＃＃Ｐ＜０．０１）。ＩＲＩ後、ターゲット型補体インヒビター（０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙまたは０．２０ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９のいずれか）での処置により、通常生理食塩水（ＮＳ）群と比べて血清ＡＬＴレベルが低下した（＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝４）。 図２３は、０．４５ｍｇ用量のＣＲ２−ＣＤ５９または０．１５ｍｇ用量のＣＲ２−ＣＤ５９での処置により、７０％ＰＨｘの４８時間後、野生型マウスでは、ＮＳ対照と比べてＡＬＴレベルが有意に低下したことを示す（＃＃，＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝４）。 図２４は、肝臓の壊死および損傷の組織学的定量を示す（０〜４の段階で判定）。動物は、ＮＳ、０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙ、０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙ、０．４５ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９、または０．１５ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９で７０％ＰＨｘ直後に処置した（ＮＳ群と比べて＃＃Ｐ＜０．０１；ＮＳ群と比べて＊Ｐ＜０．０５。結果を平均±ＳＤで示す（ｎ＝４〜６）。 図２５は、ＢｒｄＵ＋細胞の数の著しい増加によって示されるように、７０％ＰＨｘ直後の０．４５ｍｇまたは０．１５ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９での処置により肝再生が改善されることを示す（ＮＳ群と比べて＃＃Ｐ＜０．０１；ＮＳ群と比べて＊＊Ｐ＜０．０１（ｎ＝４〜６）。 図２６は、９０％ＰＨｘを受けた６時間後、野生型マウスにおいて血清ＡＬＴレベルが有意に増大していることを示す（偽手術群と比べて＃＃Ｐ＜０．０１）。手術直後の０．１ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９での処置により血清ＡＬＴレベルが有意に低下した（＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝４）。 図２７は、９０％ＰＨｘの２４時間後、ＣＲ２−Ｃｒｒｙ処置群および対照群のレムナント肝臓において肝細胞の重度の小滴性脂肪症を特徴とする広範な組織学的変化が示されたが、０．１ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９で処置した９０％肝切除マウスで観察された組織学的変化は有意に広範性が低かった肝臓組織のヘマトキシリン＆エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色切片を示す。 図２８は、野生型マウスにおけるＢｒｄＵ取込みが、９０％ＰＨｘの２４時間後にほぼなくなったことを示す。ＢｒｄＵ＋細胞の数の著しい増加によって示されるように、０．１ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９での処置により肝再生が改善された（他の群と比べて＊＊Ｐ＜０．０１）。 図２９は、９０％ＰＨｘ直後の０．１ｍｇ用量のＣＲ２−ＣＤ５９での野生型マウスの処置により、他の群と比べて７日生存率が有意に増大したことを示す（Ｐ＜０．０１）。 図３０は、本実施例に記載のエタノール給餌および７０％ＰＨｘ後の、野生型ならびにＢ因子−／−、Ｃ３−／−、およびＣＤ５９−／−ノックアウトマウスにおける肝臓トリグリセリドレベルを示す（偽手術動物と比べて＃＃Ｐ＜０．０１；野生型動物と比べて＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝６）。 図３１は、エタノール給餌および７０％ＰＨｘ後の野生型ならびにＢ因子−／−、Ｃ３−／−、およびＣＤ５９−／−ノックアウトマウスにおける血清ＡＬＴレベルを示す（偽手術動物と比べて＃＃Ｐ＜０．０１；野生型動物と比べて＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝６）。 図３２は、ＮＳ対照群の７０％肝切除術の４８時間後のレムナント肝臓における肝細胞の広範な壊死および重度の脂肪症を特徴とする広範な組織学的変化を示す、７０％ＰＨｘを受けたエタノール給餌動物の肝臓組織のＨ＆Ｅ染色切片を示す。ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したエタノール給餌７０％ＰＨｘ動物で観察された組織学的変化は、有意に広範性が低かった。
配列表の簡単な説明
配列番号：１は、ヒト補体受容体２（ＣＲ２）の完全アミノ酸配列である。
配列番号：２は、ヒトＣＲ２のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン１および２の完全アミノ酸配列である。
配列番号：３は、ヒトＣＤ５９タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：４は、マウス補体受容体１関連遺伝子／タンパク質ｙ（Ｃｒｒｙ）の完全アミノ酸配列である。
配列番号：５は、ヒトＨ因子のアミノ酸配列である。
配列番号：６は、ヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇのアミノ酸配列である。
配列番号：７は、ヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）のアミノ酸配列である。
配列番号：８は、マウスＣＤ５９Ａタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：９は、マウスＣＤ５９Ｂタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：１０は、マウスＨ因子のアミノ酸配列である。
配列番号：１１は、ヒト補体受容体１（ＣＲ１）のアミノ酸配列である。
配列番号：１２は、ヒト膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）のアミノ酸配列である。
配列番号：１３は、ヒト崩壊促進因子（ＤＡＦ／ＣＤ５５）のアミノ酸配列である。
配列番号：１４は、マウス崩壊促進因子（ＤＡＦ／ＣＤ５５）のアミノ酸配列である。
配列番号：１５は、ヒトクラスタリンタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：１６は、マウスクラスタリンタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：１７は、ヒトビトロネクチンタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：１８は、マウスビトロネクチンタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：１９は、ヒトＣ１インヒビタータンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号：２０は、マウスＣ１インヒビタータンパク質のアミノ酸配列である。
発明の詳細な説明
補体阻害は、肝臓ＩＲＩに対する防御のための潜在的治療ストラテジーであるが、肝再生における補体の重要な役割は、ＩＲＩが再生障害と関連しているにもかかわらず、補体阻害が肝切除およびＳＦＳ肝移植術の状況において実行可能な治療ストラテジーでない可能性があることを示唆する。本明細書に提示した本実施例のデータにより、補体依存性機構および肝再生と対比したＩＲＩにおける補体の相対的寄与、ならびに肝臓のＩＲＩと再生の関係のより良好な理解が得られよう。また、このデータは、肝広範囲切除またはＳＦＳ肝移植術後の転帰を改善するための補体調節アプローチを示す。
肝広範囲切除またはサイズ不足肝移植術後に肝臓が再生されないと、多くの場合、肝機能不全および臓器不全または移植片不全がもたらされる。肝臓を損傷させ、再生を障害する肝虚血およびその後の再灌流（Ｉ／Ｒ）は、かかる複雑な外科処置の際には不可避である。ＩＲＩに関与する病原性の機構は複雑で多面的であるが、補体の活性化が枢要な起始め事象であることは明白である。Ｃ３欠損と補体阻害の両方により、Ｉ／Ｒ後の肝臓の損傷および炎症が防御される。
Ｃ３とＣ５の欠損により、中毒性障害または部分肝切除術（ＰＨｘ、肝切除と類似）のいずれかの後で肝再生障害がもたらされることが示されている。再生における補体の活性化生成物Ｃ３ａおよびＣ５ａの役割が、Ｃ３ａ受容体（Ｃ３ａＲ）欠損マウスの使用、Ｃ３ａＲおよびＣ５ａＲのアンタゴニストでのマウスの処置、ならびに再構築実験によって示されている（１３〜１５）。データは、Ｃ３ａおよびＣ５ａが、ＴＮＦａとＩＬ−６の発現ならびにその後の転写因子ＮＦ−κＢとＳＴＡＴ３の活性化に対する効果により、増殖応答の早期プライミング事象に寄与していることを示す（１４）。
肝脂肪症の有意な増大はＣ３欠損と関連している（実施例参照）。Ｃ３切断生成物であるＣ３ａは肝再生に役割を果たしているため、およびＣ３ａの分解形態であるアシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ、またはＣ３ａｄｅｓＡｒｇ）は脂質の代謝に役割を果たしているため、本発明者らは、ＰＨｘ後のＣ３−／−マウスにおけるＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ再構築の効果を調べた。先の研究により、肝臓の増殖応答は、反復用量のＣ３ａで再構築させたＣ３−／−マウスにおいて回復されること（１４）、および肝再生はＣ３ａＲ−／−マウスでは障害されることが示されている（１３）。しかしながら、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇはＣ３ａＲに結合しない。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの唯一の既知受容体であるＣ５Ｌ２（２３〜２６，３４，３５）もＣ３ａ（およびＣ５ａ／Ｃ５ａｄｅｓＡｒｇ）に結合し、トリグリセリドの合成とクリアランスに重要な役割を果たす（２５，２６）。１５μｇのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇをＰＨｘ後のＣ３−／−マウスに投与すると、肝脂肪症が有意に低減され、損傷が防御され、ＢｒｄＵ取込み（細胞増殖の尺度）が野生型マウスで見られるレベルまで回復し、Ｃ３−／−マウスで見られたＳＴＡＴ３リン酸化の減少が逆転された。したがって、増殖応答における補体の関与はＣ３ａＲシグナル伝達に非依存性であるかもしれず、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇがＰＨｘ後の肝臓保護と肝再生に枢要な役割を果たしていることが示される。
予期に反して、ＰＨｘ後に高用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ（５０μｇ）でＣ３−／−マウスに再構築させると、肝再生は回復せず、重度の損傷が誘導された。さらに、低用量または高用量いずれかのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇで処置した野生型マウスでは、未処置野生型動物と比べて、再生障害を伴う肝臓損傷の有意な増大が示された。Ｃ３ａおよびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇはどちらも肝再生に役割を果たしているとともに、どちらのペプチドも炎症促進特性を有しているが、Ｃ末端ＡｒｇをＣ３ａから除去すると一部のものは不活化される（２６，３８）。肝臓ＭＰＯ活性およびＴＮＦａとＩＬ−６の血清レベルで見られたＣ３−／−マウスにおける高用量ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ処置と関連する有意な増大は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの炎症促進特性を証明しており、ＰＨｘ後の最適な肝再生には補体の活性化、Ｃ３ａ、およびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ生成に閾値が存在することを示す。実際、ＴＮＦａとＩＬ−６は肝再生に重要な役割を果たしているが、これらのサイトカインは、明らかに損傷と肝臓保護および再生とに二元的役割を果たしている（２７，３９）。ＩＬ−６依存性のプロセスは、主に保護的応答と関連しているが、ＴＮＦａの発現は、炎症および損傷と明白に関連しており、これらのサイトカインが互いの発現を調節しているのかもしれない。
したがって、本発明者らは、ＩＲＩと肝再生障害の関連における補体依存性の均衡を確認し、ＰＨｘ後の最適な肝再生には補体の活性化、Ｃ３ａ、およびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ生成に閾値が存在し、該閾値より上にＣ３ａ、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇおよび他の補体活性化生成物のレベルが増大すると、均衡が損傷および再生障害に傾くことを示す。この所見により、肝広範囲切除またはサイズ不足肝移植術を受けた患者が、補体阻害のモジュレーションの恩恵を受けられるかもしれないことが示唆される。
補体調節タンパク質
補体を調節するいくつかの内因性の可溶性膜結合型タンパク質が同定されている。このような補体調節タンパク質としては、限定されないが、膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）、崩壊促進因子（ＤＡＦ／ＣＤ５５）、ＣＤ５９、マウス補体受容体１関連遺伝子／タンパク質ｙ（Ｃｒｒｙ）、ヒト補体受容体１（ＣＲ１）およびＨ因子が挙げられる。
膜補因子タンパク質は、ＣＤ４６（ＭＣＰ／ＣＤ４６）（配列番号：１２）としても知られた、広く分布しているＣ３ｂ／Ｃ４ｂ結合性細胞表面糖タンパク質であり、宿主細胞上で補体の活性化を阻害する。いくつかの他の補体調節タンパク質と同様、ＭＣＰは、ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）と称されるおよそ６０個のアミノ酸のいくつかの反復モチーフを含む。ＭＣＰは、アミノ末端から始めて、４つのＳＣＲドメイン、セリン／トレオニン／プロリンリッチ領域、機能が不明の領域、膜貫通疎水性ドメイン、細胞質アンカーおよび細胞質テールで構成されている。
崩壊促進因子は、ＣＤ５５（ＤＡＦ／ＣＤ５５）（配列番号：１３および配列番号：１４）としても知られた、約７０キロダルトン（ｋＤａ）の膜結合型糖タンパク質であり、宿主細胞上で補体の活性化を阻害する。いくつかの他の補体調節タンパク質と同様、ＤＡＦは、ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）と称されるおよそ６０個のアミノ酸のいくつかの反復モチーフを含む。アミノ末端から始めて、ＤＡＦは、４つのＳＣＲドメイン、重度Ｏ−グリコシル化セリン／トレオニンリッチドメイン、およびグリコシルホスファチジルイノシトールアンカーを含む。ＤＡＦは、補体の第二経路および古典的経路のＣ３変換酵素とＣ５変換酵素の両方の組織化を抑制し、崩壊を促進させる。
ＣＤ５９（配列番号：３、配列番号：８および配列番号：９）は、Ｃ８とＣ９に結合することによりＭＡＣの組織化をブロックするが、補体オプソニンまたはＣ３ａおよびＣ５ａの生成には影響を及ぼさない補体の膜結合型インヒビターである。ＣＤ５９の可溶性形態（ｓＣＤ５９）が生成されているが、これは、一般的に、特に血清の存在下ではインビトロでの機能活性が低く、非修飾型ｓＣＤ５９には治療有効性がほとんどまたは全くないことを示す。例えば、Ｓ．Ｍｅｒｉら、“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ＣＤ５９：ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｄ ｇｌｙｏｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｏｌ（ＧＰＩ）ａｎｃｈｏｒ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｌａｓｅｒ−ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，” Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．：９２３−９３５（１９９６）を参照のこと。
マウスタンパク質補体受容体１関連遺伝子／タンパク質ｙ（Ｃｒｒｙ）（配列番号：４）は、宿主組織上に沈着したＣ３ｂおよびＣ４ｂを切断するセリンプロテアーゼである補体因子Ｉの補因子としての機能を果たすことにより補体の活性化を調節する補体の膜結合型インヒビターである。また、Ｃｒｒｙは、崩壊促進因子としての機能も果たし、補体カスケードの増幅変換酵素のＣ４ｂＣ２ａとＣ３ｂＢｂの形成を妨げる。
補体受容体１（ＣＲ１）（配列番号：１１）タンパク質は、補体オプソニン作用性免疫複合体のプロセッシングとクリアランスのための主要な系である。ＣＲ１は、補体カスケードを負に調節し、免疫付着とファゴサイトーシスを媒介し、補体の古典的経路と第二経路の両方を阻害する。ＣＲ１タンパク質は、４７個のアミノ酸のシグナルペプチド、１９３０個のアミノ酸の細胞外ドメイン、２５個のアミノ酸の膜貫通ドメイン、および４３個のアミノ酸のＣ末端細胞質領域を有する。ＣＲ１の大きな細胞外ドメイン（２５個の潜在的Ｎ−グリコシル化部位を有する）は、各々が６０〜７０個のアミノ酸を有する３０個のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン（補体制御タンパク質 リピートまたはスシドメインとしても知られている）に分けられ得る。この３０個のＳＣＲドメインは、さらに、長鎖相同リピート（ＬＨＲ）と称される４つの長鎖領域に分類され、該領域は、各々がおよそ４５ｋＤのタンパク質をコードしており、ＬＨＲ−Ａ、−Ｂ、−Ｃ、および−Ｄで指定される。
Ｈ因子（配列番号：５および配列番号：１０）は、一連のビーズのような連続様式で配列され、かつ短いリンカー配列（各々、２〜６個のアミノ酸）で分断されたおよそ６０個のアミノ酸の２０個のＳＣＲドメインで構成された血漿糖タンパク質である。Ｈ因子はＣ３ｂに結合し、第二経路のＣ３変換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）の崩壊を促進させ、Ｃ３ｂのタンパク質分解性不活化の補因子としての機能を果たす。Ｈ因子の存在下では、Ｃ３ｂのタンパク質分解 によりＣ３ｂの切断がもたらされる。Ｈ因子は、ＳＣＲ１〜４、ＳＣＲ５〜８およびＳＣＲ１９〜２０に存在する少なくとも３つの相違するＣ３ｂに対する結合ドメインを有する。Ｈ因子の各部位は、Ｃ３ｂタンパク質内の相違する領域に結合する：Ｎ末端部位は天然Ｃ３ｂに結合し；Ｈ因子の中央領域に存在する第２部位はＣ３ｃ断片に結合し、ＳＣＲ１９〜２０内に存在する部位はＣ３ｄ領域に結合する。また、Ｈ因子はヘパリンに対する結合部位も含み、該部位は、ＳＣＲ７、ＳＣＲ５〜１２およびＳＣＲ２０内に存在し、一部はＣ３ｂ結合部位と重複している。Ｈ因子の補体阻害活性のためのドメインは、最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインＳＣＲ１〜４に存在している。
補体インヒビターを補体活性化部位および疾患部位にターゲット送達することにより、その有効性が改善され得る。補体は、宿主の防御と免疫の形成、ならびに免疫恒常性の機構（免疫複合体の異化およびアポトーシス細胞のクリアランスなど）に重要な役割を果たしているため、補体インヒビターのターゲット送達により、全身性補体阻害、特に、長期補体阻害に起因する潜在的に重篤な副作用が低減される。
補体タンパク質Ｃ３はチモーゲンである。インタクトなＣ３は高濃度（１〜２ｍｇ／ｍｌ）で循環している。Ｍ．Ｊａｎｚｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００５）４（１２）：１９４２−１９４７。補体の活性化中、完全体のＣ３が切断されてＣ３ｂが形成され、これが標的表面に共有結合される。内因性の補体調節タンパク質よって組織結合型Ｃ３ｂが不活性化されてｉＣ３ｂが形成され、最終的に３５キロダルトン（「ｋＤ」）のＣ３ｄ断片になる。Ｃ３ｄ断片は、組織に固定されたままであり、補体媒介性炎症の耐久性マーカーとしての機能を果たす。Ｉ．Ｌｅｉｖｏら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ。（１９８６）１０３：１０９１−１１００。
ヒト補体受容体２は、ＣＤ２１（ＣＲ２／ＣＤ２１）（配列番号：１および配列番号：２）としても知られた、Ｃ３結合タンパク質ファミリーの約１４５ｋＤの膜貫通タンパク質であり、かかるタンパク質に特徴的な構造的単位ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメインを１５個または１６個含む。ＣＲ２は、成熟Ｂ細胞および濾胞樹状細胞上で発現され、体液性免疫に重要な役割を果たしている。Ｊ．Ｈａｎｎａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．（２００２）３０：９８３−９８９；Ｋ．Ａ．Ｙｏｕｎｇら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００７）２８２（５０）：３６６１４−３６６２５。ＣＲ２タンパク質は、インタクトなＣ３タンパク質には結合しないが、その分解生成物、例えば、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄ切断断片には、ＣＲ２タンパク質の最初の２つのアミノ末端ショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ１〜２」）内に存在する結合部位によって結合する。そのため、ＣＲ２のＳＣＲ１〜２ドメインにより、Ｃ３の切断（すなわち、活性化）形態とインタクトな循環Ｃ３が識別される。したがって、標的化基として、ＣＲ２のＳＣＲ１〜２は、循環Ｃ３と補体の活性化中に生成されたＣ３断片を識別することができるものである。Ｃ３ｄに対するＣＲ２の親和性は、わずか６２０〜６５８ｎＭである（Ｊ．Ｈａｎｎａｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．（２００２）３０：９８３−９８９；Ｊ．Ｍ．Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．（２００１）４０：５９３１−５９４１）が、クラスター化Ｃ３ｄに対するＣＲ２のアビディティにより、補体活性化部位に分子を標的化させる有効な方法となる。
Ｃ３の切断により、まず、活性化されている細胞表面上でのＣ３ｂの生成と沈着がもたらされる。Ｃ３ｂ断片は、補体カスケードを増幅させる酵素性複合体の生成に関与している。細胞表面上では、Ｃ３ｂは、特に、補体活性化の調節因子を含む宿主表面上に沈着している場合（すなわち、ほとんどの宿主組織）、不活性なｉＣ３ｂに速やかに変換される。膜結合型補体調節因子の非存在下であっても、血清Ｈ因子の作用のため、相当なレベルのｉＣ３ｂが形成される。続いて、ｉＣ３ｂは膜結合型断片Ｃ３ｄｇに消化され、次いで、Ｉ因子および他のプロテアーゼによってＣ３ｄに消化されるが、このプロセスは比較的遅い。このため、ＣＲ２のＣ３リガンドは、生成されたら比較的長寿命であり、補体活性化部位に高濃度で存在する。
定義
「組成物（“ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”または“ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ”）」に対する一般的な言及は、本発明の組成物を包含し、本発明の組成物に適用され得る。
本明細書で用いる場合、単数形の冠詞「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、特に記載のない限り、複数の指示対象物を包含する。例えば、語句「生物学的に活性なＣＲ２断片（ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ＣＲ２ ｆｒａｇｍｅｎｔ）」は、１つ以上の生物学的に活性なＣＲ２断片を包含する。
本明細書における「約」の値またはパラメータに対する言及は、該値またはパラメータ自体に関する実施形態を含む（を示す）。例えば、「約Ｘ」に言及した記載は「Ｘ」の記載を含む。
本明細書に記載の発明の態様および実施形態には、該態様および該実施形態からなるもの、および／または本質的に該態様および該実施形態からなるものが含まれることは理解されよう。
本明細書で用いる場合、用語「個体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトをいう。哺乳動物としては、限定されないが、研究用動物、飼養動物、家畜、競技用動物、愛玩動物、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。一部の特定の実施形態では、個体はヒトである。一部の特定の実施形態では、個体はヒト以外の個体である。一部の特定の実施形態では、個体は、補体第二経路が関与している疾患の研究のための動物モデルである。
組成物
本明細書において、肝再生の刺激方法における使用のための組成物を提供する。一部の特定の実施形態では、組成物は、ターゲット型補体インヒビターを含むものである。一部の特定の実施形態では、組成物は、非ターゲット型補体インヒビターを含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターおよび非ターゲット型補体インヒビターは、補体の古典的経路および補体第二経路を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターおよび非ターゲット型補体インヒビターは、補体第二経路を特異的に阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターおよび非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。
一部の特定の実施形態では、組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含むものである。一部の特定の実施形態では、組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含むものである。
ターゲット型補体インヒビター
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２部分と補体インヒビター部分を含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、標的化部分と補体インヒビター部分を含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全長のヒト（配列番号：３）もしくはマウス（配列番号：８もしくは配列番号：９）ＣＤ５９タンパク質またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全長マウスＣｒｒｙタンパク質（配列番号：４）またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全長のヒト（配列番号：５）もしくはマウス（配列番号：１０）Ｈ因子（配列番号：５）またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒト補体受容体１（ＣＲ１）（配列番号：１１）またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒト膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）（配列番号：１２）またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全長のヒト（配列番号：１３）もしくはマウス（配列番号：１４）崩壊促進因子（ＤＡＦ）またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログを含むものである。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）またはその生物学的に活性な断片を含むものである。ＣＲ２は、主に成熟Ｂ細胞上および濾胞樹状細胞上で発現される膜貫通タンパク質である。ＣＲ２は、Ｃ３結合タンパク質ファミリーの構成員である。ＣＲ２の天然リガンドとしては、例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ、ならびにＣＲ２（配列番号：２）の２つのＮ末端ＳＣＲドメインに結合するＣ３ｂの細胞結合型分解断片が挙げられる。Ｃ３の切断により、まず、Ｃ３ｂの生成と、活性化されている細胞表面へのこのＣ３ｂの共有結合がもたらされる。Ｃ３ｂ断片は、補体カスケードを増幅させる酵素性複合体の生成に関与している。細胞表面上では、Ｃ３ｂは、特に、補体活性化の調節因子を含む宿主表面上に沈着している場合（すなわち、ほとんどの宿主組織）、不活性なｉＣ３ｂに速やかに変換される。膜結合型補体調節因子の非存在下であっても、相当なレベルのｉＣ３ｂが形成される。続いて、ｉＣ３ｂは膜結合型断片Ｃ３ｄｇに消化され、次いで、血清プロテアーゼによってＣ３ｄに消化されるが、このプロセスは比較的遅い。このため、ＣＲ２のＣ３リガンドは、生成されたら比較的長寿命であり、補体活性化部位に高濃度で存在する。したがって、ＣＲ２は、分子を補体活性化部位に結合させるための強力な標的化媒体としての機能を果たし得る。
ＣＲ２は、ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲドメイン）として知られる１５または１６個の反復単位を有する細胞外部分を含む。ＳＣＲドメインは、典型的には、高度に保存された残基（例えば、４つのシステイン、２つのプロリン、１つのトリプトファンおよびいくつかの他の一部保存グリシン）と疎水性残基のフレームワークを有する。配列番号：１は、１５個のＳＣＲドメインを有する完全長ヒトＣＲ２タンパク質配列を表す。配列番号：１のアミノ酸１〜２０はリーダーペプチドを含み、配列番号：１のアミノ酸２３〜８２はＳＣＲ１を含み、配列番号：１のアミノ酸９１〜１４６はＳＣＲ２を含み、配列番号：１のアミノ酸１５４〜２１０はＳＣＲ３を含み、配列番号：１のアミノ酸２１５〜２７１はＳＣＲ４を含む。活性部位（Ｃ３ｄ結合部位）は、ＳＣＲ１〜２（最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメイン）（配列番号：２）に存在している。これらのＳＣＲドメインは、スペーサーとしての機能を果たす種々の長さの短い配列によって分断されている。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびに本明細書に記載のＣＲ２またはその断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２タンパク質のリガンド結合部位の一部または全部を含むポリペプチドを含むものであり、限定されないが、完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１に示すヒトＣＲ２など）、可溶性ＣＲ２タンパク質（ＣＲ２の細胞外ドメインを含むＣＲ２断片など）、ＣＲ２の他の生物学的に活性な断片、ＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２断片、または天然に存在するＣＲ２の任意のホモログもしくはその断片（以下に詳細に記載する）が挙げられる。一部の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の（ｏｒ）以下の特性：（１）Ｃ３ｄに結合する能力、（２）ｉＣ３ｂに結合する能力、（３）Ｃ３ｄｇに結合する能力、（４）Ｃ３ｄに結合する能力、および（５）ＣＲ２の２つのＮ末端ＳＣＲドメインに結合するＣ３ｂの１種類以上の細胞結合型断片に結合する能力の少なくとも１つを有する。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２（配列番号：２）の最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の最初の３つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメイン（例えば、ＣＲ２の少なくとも最初の３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個などのいずれかの個数のＳＣＲドメイン）を含む（一部の実施形態では、該ドメインからなる、または本質的に該ドメインからなる）ものである。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ＣＲ２タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するＣＲ２（またはＣＲ２断片）と、少なくとも１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化（ｐａｌｍｉｔａｔｉｏｎ）、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、１種類以上の天然に存在するＣＲ２リガンドに結合する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２ホモログは、天然に存在するＣＲ２（例えば、配列番号：１）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するＣＲ２（例えば、配列番号：１）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有する。ＣＲ２ホモログまたはその断片は、好ましくは、天然に存在するＣＲ２のリガンド（例えば、Ｃ３ｄまたはＣＲ２結合能を有する他のＣ３断片）に結合する能力を保持している。例えば、ＣＲ２ホモログ（またはその断片）は、Ｃ３ｄに対して、ＣＲ２（またはその断片）の結合親和性の少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である結合親和性を有するものであり得る。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ヒトＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメイン（ヒトＣＲ２（配列番号：１）の少なくともアミノ酸２３〜１４６を含むアミノ酸配列を有するＣＲ２部分など）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ヒトＣＲ２（配列番号：１）のアミノ酸２３〜１４６と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するヒトＣＲ２の少なくとも最初の２つのＳＣＲドメインを含むものである。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ヒトＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン、ヒトＣＲ２（配列番号：１）の少なくともアミノ酸２３〜２７１を含むアミノ酸配列を有するＣＲ２部分など）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ヒトＣＲ２（配列番号：１）のアミノ酸２３〜２７１と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するヒトＣＲ２の少なくとも最初の４つのＳＣＲドメインを含むものである。
例えば、参照配列（配列番号：１など）と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列は、該アミノ酸配列に、参照配列のアミノ酸１００個ごとに５箇所までの改変が含まれ得ること以外は、参照配列と同一である。このような５箇所までの改変は欠失、置換（例えば、保存的置換）、付加であり得、配列内のどの箇所に存在していてもよく、参照配列のアミノ酸において個々に、または参照配列内の１箇所以上の連続した群のいずれかで散在したものであり得る。
一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２タンパク質のリガンド結合部位の一部または全部を含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、さらに、結合部位の３次元構造を維持するのに必要とされる配列を含むものであり得る。ＣＲ２のリガンド結合部位は、ＣＲ２の結晶構造（米国特許出願公開番号２００４／０００５５３８に開示されたヒトおよびマウスのＣＲ２の結晶構造など）に基づいて容易に決定され得る。例えば、一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２のＳＣＲ２のＢ鎖とＢ−Ｃループを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、配列番号：１と比較して、セグメントＧ９８−Ｇ９９−Ｙ１００−Ｋ１０１−Ｉ１０２−Ｒ１０３−Ｇ１０４−Ｓ１０５−Ｔ１０６−Ｐ１０７−Ｙ１０８を含むＣＲ２ ＳＣＲのＢ鎖上の一部位とＢ−Ｃループを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、配列番号：１と比較して、Ｋ１１９位を含むＣＲ２ ＳＣＲ２のＢ鎖上の一部位を含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、配列番号：１と比較して、Ｖ１４９−Ｆ１５０−Ｐ１５１−Ｌ１５２を含むセグメントを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、Ｔ１２０−Ｎ１２１−Ｆ１２２を含むＣＲ２ ＳＣＲ２のセグメントを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２−ＦＨ分子は、これらの部位の２つ以上を有するものである。例えば、一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、配列番号：１と比較して、Ｇ９８−Ｇ９９−Ｙ１００−Ｋ１０１−Ｉ１０２−Ｒ１０３−Ｇ１０４−Ｓ１０５−Ｔ１０６−Ｐ１０７−Ｙ１０８およびＫ１１９を含む部分を含むものである。これらの部位の他の組合せも想定される。
一部の特定の実施形態では、標的化部分は非ＣＲ２標的化部分を含む。一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
本明細書で用いる場合、用語「膜補因子タンパク質」、「ＭＣＰ」または「ＣＤ４６」は、広く分布しているＣ３ｂ／Ｃ４ｂ結合性細胞表面糖タンパク質をいい、これは、宿主細胞での補体の活性化を阻害し、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ（そのホモログを含む）のＩ因子媒介性切断のための補因子としての機能を果たす。Ｔ．Ｊ．Ｏｇｌｅｓｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９２）１７５：１５４７−１５５１。ＭＣＰは、補体活性化調節因子（「ＲＣＡ」）として知られているファミリーに属する。このファミリー構成員は、種々の数のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン（これは、典型的には、６０〜７０アミノ酸長である）を含む特定の構造上の特徴を共有している。ＭＣＰは、４つのＳＣＲ、セリン／トレオニン／プロリン富化領域、機能が不明の領域、膜貫通疎水性ドメイン、細胞質アンカーおよび細胞質テールを含む。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにヒトＭＣＰまたはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。
配列番号：１２は完全長ヒトＭＣＰアミノ酸配列を表す（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ１５５２９参照）。アミノ酸１〜３４はシグナルペプチドに対応し、アミノ酸３５〜３４３は細胞外ドメインに対応し、アミノ酸３４４〜３６６は膜貫通ドメインに対応し、アミノ酸３６７〜３９２は細胞質ドメインに対応する。細胞外ドメインでは、アミノ酸３５〜９６がＳＣＲ１に対応し、アミノ酸９７〜１５９がＳＣＲ２に対応し、アミノ酸１６０〜２２５がＳＣＲ３に対応し、アミノ酸２２６〜２８５がＳＣＲ４に対応し、アミノ酸３０２〜３２６がセリン／トレオニンリッチドメインに対応する。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにＭＣＰまたはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。本明細書で用いる場合、ＭＣＰの「生物学的に活性な」断片という用語は、細胞質ドメインと膜貫通ドメインの両方がなく、１、２、３もしくは４個のＳＣＲドメインを含む、本質的に該ドメインからなる、もしくは該ドメインからなる断片を含み、セリン／トレオニンリッチドメインを有するか、または有しない、かつ完全長ヒトＭＣＰタンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有する任意の可溶性断片をいう。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全長ヒトＭＣＰ（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３９２）、ヒトＭＣＰの細胞外ドメイン（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３４３）、またはヒトＭＣＰのＳＣＲ１〜４（配列番号：１２のアミノ酸３５〜２８５）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２部分とＭＣＰ部分を含むものである。該融合タンパク質のＣＲ２部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、当該ターゲット型補体インヒビターのＭＣＰ部分は補体活性を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、非ＣＲ２標的化部分とＭＣＰ部分を含むものである。該融合タンパク質の非ＣＲ２標的化部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、当該ターゲット型補体インヒビターのＭＣＰ部分は補体活性を阻害する。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＭＣＰタンパク質（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３９２）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＭＣＰの細胞外ドメイン（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３４３）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＭＣＰのＳＣＲ１〜４（配列番号：１２のアミノ酸３５〜２８５）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＭＣＰタンパク質（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３９２）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＭＣＰの細胞外ドメイン（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３４３）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＭＣＰのＳＣＲ１〜４（配列番号：１２のアミノ酸３５〜２８５）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＭＣＰタンパク質（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３９２）、ヒトＭＣＰの細胞外ドメイン（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３４３）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片、またはヒトＭＣＰのＳＣＲ１〜４（配列番号：１２のアミノ酸３５〜２８５）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒトＭＣＰタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトＭＣＰタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトＭＣＰ（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトＭＣＰホモログは、天然に存在するヒトＭＣＰ（例えば、配列番号：１２）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトＭＣＰ（例えば、配列番号：１２）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトＭＣＰのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトＭＣＰ（またはその生物学的に活性な断片）の補体第二経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトＭＣＰのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトＭＣＰ（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
本明細書で用いる場合、用語「崩壊促進因子」、「ＤＡＦ」または「ＣＤ５５」は、４つのショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン、続いて、膜表面から分子を上昇させる重度Ｏ−グリコシル化セリン／トレオニンリッチドメインをＣ末端に含む７０キロダルトン（「ｋＤ」）の膜糖タンパク質をいう（そのホモログを含む）。ＤＡＦは、グリコシルホスファチジルイノシトール（「ＧＰＩ」）アンカーによって細胞膜にアンカーリングされている。ＤＡＦは、補体タンパク質Ｃ３の切断および補体第二カスケードの増幅に必要とされる膜結合型Ｃ３変換酵素を解離させることにより、細胞表面を補体活性化から保護する。
配列番号：１３は、完全長ヒトＤＡＦアミノ酸配列を表し（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０８１７３参照）；配列番号：１４は、完全長マウスＤＡＦアミノ酸配列を表す（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｑ６１４７５参照）。ヒトＤＡＦ配列において、アミノ酸１〜３４はシグナルペプチドに対応し、アミノ酸３５〜３５３は成熟タンパク質に見られ、アミノ酸３５４〜３８１は翻訳後に当該ポリペプチドから除去される。成熟タンパク質では、アミノ酸３５〜９６がＳＣＲ１に対応し、アミノ酸９６〜１６０がＳＣＲ２に対応し、アミノ酸１６１〜２２２がＳＣＲ３に対応し、アミノ酸２２３〜２８５がＳＣＲ４に対応し、アミノ酸２８７〜３５３はＯ−グリコシル化セリン／トレオニンリッチドメインに対応する。ＧＰＩアンカーは、ヒトＤＡＦの３５３位のセリンに結合される。マウスＤＡＦ配列では、アミノ酸１〜３４がシグナルペプチドに対応し、アミノ酸３５〜３６２が成熟タンパク質に見られ、アミノ酸３６３〜３９０が翻訳後にポリペプチドから除去される。成熟タンパク質では、アミノ酸３５〜９６がＳＣＲ１に対応し、アミノ酸９７〜１６０がＳＣＲ２に対応し、アミノ酸１６１〜２２２がＳＣＲ３に対応し、アミノ酸２２３〜２８６がＳＣＲ４に対応し、アミノ酸２８８〜３６２はＯ−グリコシル化セリン／トレオニンリッチドメインに対応する。ＧＰＩアンカーは、マウスＤＡＦの３６２位のセリンに結合される。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにＤＡＦまたはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。本明細書で用いる場合、ＤＡＦの「生物学的に活性な」断片という用語は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３５３）が欠損しており、１、２、３もしくは４個のＳＣＲドメインを含む、本質的に該ドメインからなる、もしくは該ドメインからなる完全長のＤＡＦタンパク質の任意の断片を含み、Ｏ−グリコシル化セリン／トレオニンリッチドメインを有するか、または有しない、かつ完全長のＤＡＦタンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有するＤＡＦの任意の断片をいう。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２部分とＤＡＦ部分を含むものである。該融合タンパク質のＣＲ２部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＤＡＦ部分は補体活性を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、非ＣＲ２標的化部分とＤＡＦ部分を含むものである。該融合タンパク質の非ＣＲ２標的化部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＤＡＦ部分は補体活性を阻害する。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒト崩壊促進因子（ＤＡＦ）（配列番号：１３）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウス崩壊促進因子（ＤＡＦ）（配列番号：１４）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３５３）がないヒト成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１３のアミノ酸３５〜３５３）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３６２）がないマウス成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１４のアミノ酸３５〜３６２）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１３のアミノ酸３５〜２８５）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１４のアミノ酸３５〜２８６）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒト崩壊促進因子（ＤＡＦ）（配列番号：１３）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウス崩壊促進因子（ＤＡＦ）（配列番号：１４）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３５３）がないヒト成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１３のアミノ酸３５〜３５３）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３６２）がないマウス成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１４のアミノ酸３５〜３６２）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１３のアミノ酸３５〜２８５）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１４のアミノ酸３５〜２８６）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒト崩壊促進因子（ＤＡＦ）（配列番号：１３）、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３５３）がないヒト成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１３のアミノ酸３５〜３５３）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片、あるいは完全長ヒトＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１３のアミノ酸３５〜２８５）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウス崩壊促進因子（ＤＡＦ）（配列番号：１４）、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３６２）がないマウス成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１４のアミノ酸３５〜３６２）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片、あるいは完全長マウスＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１４のアミノ酸３５〜２８６）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒトもしくはマウスのＤＡＦタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトもしくはマウスのＤＡＦタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトもしくはマウスのＤＡＦ（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトまたはマウスのＤＡＦホモログは、天然に存在するヒトまたはマウスのＤＡＦ（例えば、配列番号：１３もしくは配列番号：１４）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトまたはマウスのＤＡＦ（例えば、配列番号：１３もしくは配列番号：１４）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＤＡＦのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＤＡＦ（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＤＡＦのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＤＡＦ（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
本明細書で用いる場合、用語「ＣＤ５９」は、潜在的に補体の細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）を阻害する１２８個のアミノ酸の膜結合型糖タンパク質をいう（そのホモログを含む）。ＣＤ５９は、ＭＡＣの組織化の際にＣ８成分および／またはＣ９成分に結合し、最終的に、ＭＡＣの心臓部の浸透圧調整性細孔の完全な形成に必要とされる多コピーのＣ９の取込みを妨げることにより作用する。ＣＤ５９は、Ｎ−グリコシル化型とＯ−グリコシル化型の両方がある。Ｎ−グリコシル化は、主に、ラクトサミンと外側腕部フコース残基を有する、および有しない、一部の部位に可変的シアリル化が存在するビ−またはトリ−アンテナ構造を含む。ＤＡＦと同様、ＣＤ５９は、グリコシルホスファチジルイノシトール（「ＧＰＩ」）アンカー（これは、アミノ酸１０２のアスパラギンに結合される）によって細胞膜にアンカーリングされている。
配列番号：３は、完全長ヒトＣＤ５９アミノ酸配列を表し（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ１３９８７参照）；配列番号：８は、完全長マウスＣＤ５９配列のアイソフォームＡを表し（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｏ５５１８６参照）；配列番号：９は、完全長マウスＣＤ５９配列のアイソフォームＢを表す（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ５８０１９参照）。ヒトＣＤ５９配列において、配列番号：３のアミノ酸１〜２５はリーダーペプチドに対応し、配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２は成熟タンパク質に対応し、配列番号：３のアミノ酸１０３〜１２８は翻訳後に除去される。ＧＰＩアンカーは、ＣＤ５９の配列番号：３の１０２位のアスパラギンに結合される。マウスＣＤ５９配列のアイソフォームＡでは、配列番号：８のアミノ酸１〜２３がリーダーペプチドに対応し、配列番号：８のアミノ酸２４〜９６が成熟タンパク質に対応し、配列番号：８のアミノ酸９７〜１２３が翻訳後に除去される。ＧＰＩアンカーは、ＣＤ５９の配列番号：８の９６位のセリンに結合される。マウスＣＤ５９配列のアイソフォームＢでは、配列番号：９のアミノ酸１〜２３がリーダーペプチドに対応し、配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４が成熟タンパク質に対応し、配列番号：９のアミノ酸１０５〜１２９が翻訳後に除去される。ＧＰＩアンカーは、ＣＤ５９の配列番号：９の１０４位のアスパラギンに結合される。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにＣＤ５９またはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。本明細書で用いる場合、ヒトＣＤ５９の「生物学的に活性な」断片という用語は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損しており、かつ完全長のＣＤ５９タンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有する完全長ヒトＣＤ５９タンパク質の任意の断片を含むヒトＣＤ５９の任意の断片をいい；マウスＣＤ５９の「生物学的に活性な」断片という用語は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、アイソフォームＡのＳｅｒ−９６、もしくはアイソフォームＢのＡｓｐ−１０４）が欠損しており、かつ完全長のＣＤ５９タンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有するいずれかの完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームの任意の断片を含むマウスＣＤ５９のアイソフォームＡまたはアイソフォームＢの任意の断片をいう。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターはＣＲ２部分とＣＤ５９部分を含むものである。ターゲット型補体インヒビターのＣＲ２部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＣＤ５９部分は、終末補体経路の活性と細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の組織化を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、非ＣＲ２標的化部分とＣＤ５９部分を含むものである。該融合タンパク質の非ＣＲ２標的化部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＣＤ５９部分は、終末補体とＭＡＣの組織化を阻害する。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒトもしくはマウスのＣＤ５９タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトもしくはマウスのＣＤ５９タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトもしくはマウスのＣＤ５９（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、終末補体（すなわち、ＭＡＣの形成）を阻害する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトもしくはマウスのＣＤ５９ホモログは、天然に存在するヒトまたはマウスのＣＤ５９（例えば、配列番号：３、配列番号：８または配列番号：９）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトまたはマウスのＣＤ５９（例えば、配列番号：３、配列番号：８または配列番号：９）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＣＤ５９のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＣＤ５９（またはその生物学的に活性な断片）の補体第二経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＣＤ５９のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＣＤ５９（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
本明細書で用いる場合、用語「マウス補体受容体１関連遺伝子／タンパク質ｙ」または「Ｃｒｒｙ」は、補体の活性化を調節する膜結合型マウス糖タンパク質をいう（そのホモログを含む）。Ｃｒｒｙは、宿主組織上に沈着したＣ３ｂおよびＣ４ｂを切断するセリンプロテアーゼである補体因子Ｉに対して補因子としての機能を果たすことにより、補体の活性化を調節する。また、Ｃｒｒｙは、崩壊促進因子としての機能も果たし、補体カスケードの増幅変換酵素Ｃ４ｂ２ａとＣ３ｂＢｂの形成を妨げる。
配列番号：４は、完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質のアミノ酸配列を表す。アミノ酸１〜４０はリーダーペプチドに対応し、配列番号：４のアミノ酸４１〜４８３は、細胞外ドメインに対応する配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５、膜貫通ドメインに対応する配列番号：４のアミノ酸４０６〜４２６、および細胞質ドメインに対応する配列番号：４のアミノ酸４２７〜４８３を含む成熟タンパク質に対応する。細胞外ドメインでは、配列番号：４のアミノ酸８３〜１４３がＳＣＲ１に対応し、配列番号：４のアミノ酸１４４〜２０５がＳＣＲ２に対応し、配列番号：４のアミノ酸２０６〜２７６がＳＣＲ３に対応し、配列番号：４のアミノ酸２７７〜３３８がＳＣＲ４に対応し、配列番号：４のアミノ酸３３９〜４００がＳＣＲ５に対応する。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにマウスＣｒｒｙタンパク質またはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。本明細書で用いる場合、マウスＣｒｒｙタンパク質の「生物学的に活性な」断片という用語は、膜貫通ドメインと細胞質ドメインが欠損しており、１、２、３、４または５個のＳＣＲドメインを含む、本質的に該ドメインからなる、または該ドメインからなる断片を含み、かつ完全長のＣｒｒｙタンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有する完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質の任意の断片を含む、マウスＣｒｒｙの任意の可溶性断片をいう（ｒｅｆｅｒｓ ｔｏ ｒｅｆｅｒｓ ｔｏ）。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターはＣＲ２部分とマウスＣｒｒｙ部分を含むものである。ターゲット型補体インヒビターのＣＲ２部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（例えば、ｉＣ３ｄ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのマウスＣｒｒｙ部分は補体活性を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、非ＣＲ２標的化部分とマウスＣｒｒｙ部分を含むものである。該融合タンパク質の非ＣＲ２標的化部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＣｒｒｙ部分は補体活性を阻害する。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＣｒｒｙ（配列番号：４）と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質（配列番号：４）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質（配列番号：４）、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片、またはマウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙの生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、マウスＣｒｒｙタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。マウスＣｒｒｙタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するマウスＣｒｒｙタンパク質（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、補体を阻害する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。例えば、マウスＣｒｒｙタンパク質のホモログは、天然に存在するマウスＣｒｒｙタンパク質（例えば、配列番号：４）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するマウスＣｒｒｙタンパク質（例えば、配列番号：４）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、マウスＣｒｒｙタンパク質のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、マウスＣｒｒｙタンパク質（またはその生物学的に活性な断片）の補体第二経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、マウスＣｒｒｙタンパク質のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、マウスＣｒｒｙタンパク質（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
本明細書で用いる場合、用語「補体受容体１」、「ＣＲ１」または「ＣＤ３５」は、推定分子量が２２０キロダルトン（「ｋＤ」）である２０３９個のアミノ酸のタンパク質（そのホモログを含む）をコードしているヒト遺伝子をいう。この遺伝子は、主に、赤血球、単球、好中球およびＢ細胞上で発現されるが、一部のＴリンパ球、肥満細胞および糸球体有足突起にも存在している。ＣＲ１タンパク質は、典型的には１００〜１０００コピー／細胞で発現される。完全長ＣＲ１タンパク質は、４２個のアミノ酸のシグナルペプチド、１９３０個のアミノ酸の細胞外ドメイン、２５個のアミノ酸の膜貫通ドメイン、および４３個のアミノ酸のＣ末端の 細胞質ドメインを含む。ＣＲ１の細胞外ドメインは、２５個の潜在的Ｎ−グリコシル化シグナル配列を有し、３０個のショートコンセンサス（「ＳＣＲ」）ドメイン（補体制御タンパク質（ＣＣＰ）リピートとしても知られている）またはスシ（ｓｕｓｈｉ）ドメイン（各々、６０〜７０アミノ酸長）を含む。ＳＣＲ間の配列相同性は６０〜９９パーセントの範囲である。この３０個のＳＣＲドメインは、さらに、長鎖相同リピート（ｌｏｎｇ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｐｅａｔ）（「ＬＨＲ」）と称される４つの長鎖領域に分類され、各領域は、ＬＨＲ−Ａ、−Ｂ、−Ｃ、および−Ｄで指定されるＣＲ１タンパク質のおよそ４５ｋＤのセグメントをコードしている。最初の３つは各々、７つのＳＣＲドメインを含むが、ＬＨＲ−Ｄは９つのＳＣＲドメインを含む。ＣＲ１タンパク質の細胞外ドメイン上の活性部位は、アミノ酸４２〜２９５を含むＳＣＲ１〜４内のＣ３ｂに対する親和性が低いＣ４ｂ結合部位、アミノ酸４９０〜７４５を含むＳＣＲ８〜１１内のＣ４ｂに対する親和性が低いＣ３ｂ結合部位、アミノ酸９４０〜１１９６を含むＳＣＲ１５〜１８内のＣ４ｂに対する親和性が低いＣ３ｂ結合部位、およびアミノ酸１３９４〜１８４２を含むＳＣＲ２２〜２８内のＣ１ｑ結合部位を含む。
配列番号：１１は、完全長ヒトＣＲ１アミノ酸配列を表す（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ１７９２７参照）。アミノ酸１〜４１はシグナルペプチドに対応し、アミノ酸４２〜２０３９は、細胞外ドメインに対応するアミノ酸４２〜１９７１、膜貫通ドメインに対応するアミノ酸１９７２〜１９９６、および細胞質ドメインに対応するアミノ酸１９９７〜２０３９を含む成熟タンパク質に対応する。細胞外ドメインでは、アミノ酸４２〜１０１がＳＣＲ１に対応し、１０２〜１６３がＳＣＲ２に対応し、アミノ酸１６４〜２３４がＳＣＲ３に対応し、アミノ酸２３６〜２９５がＳＣＲ４に対応し、アミノ酸２９５〜３５５がＳＣＲ５に対応し、アミノ酸３５６〜４１８がＳＣＲ６に対応し、アミノ酸４１９〜４８９がＳＣＲ７に対応し、アミノ酸４９１〜５５１がＳＣＲ８に対応し、アミノ酸５５２〜６１３がＳＣＲ９に対応し、アミノ酸６１４〜６８４がＳＣＲ１０に対応し、アミノ酸６８６〜７４５がＳＣＲ１１に対応し、アミノ酸７４５〜８０５がＳＣＲ１２に対応し、アミノ酸８０６〜８６８がＳＣＲ１３に対応し、アミノ酸８６９〜９３９がＳＣＲ１４に対応し、アミノ酸９４１〜１００１がＳＣＲ１５に対応し、アミノ酸１００２〜１０６３がＳＣＲ１６に対応し、アミノ酸１０６４〜１１３４がＳＣＲ１７に対応し、アミノ酸１１３６〜１１９５がＳＣＲ１８に対応し、アミノ酸１１９５〜１２５５がＳＣＲ１９に対応し、アミノ酸１２５６〜１３１８がＳＣＲ２０に対応し、アミノ酸１３１９〜１３８９がＳＣＲ２１に対応し、アミノ酸１３９４〜１４５４がＳＣＲ２２に対応し、アミノ酸１４５５〜１５１６がＳＣＲ２３に対応し、アミノ酸１５１７〜１５８７がＳＣＲ２４に対応し、アミノ酸１５８９〜１６４８がＳＣＲ２５に対応し、アミノ酸１６４８〜１７０８がＳＣＲ２６に対応し、アミノ酸１７０９〜１７７１がＳＣＲ２７に対応し、アミノ酸１７７２〜１８４２がＳＣＲ２８に対応し、アミノ酸１８４６〜１９０６がＳＣＲ２９に対応し、アミノ酸１９０７〜１９６７がＳＣＲ３０に対応する。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにＣＲ１タンパク質またはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。本明細書で用いる場合、ＣＲ１タンパク質の「生物学的に活性な」断片という用語は、膜貫通ドメインと細胞質ドメインが欠損しており、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個のＳＣＲドメインを含む、本質的に該ドメインからなる、または該ドメインからなる断片を含み、かつ完全長ＣＲ１タンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有する完全長ＣＲ１タンパク質の任意の断片を含むＣＲ１の任意の可溶性断片をいう。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターはＣＲ２部分とＣＲ１部分を含むものである。ターゲット型補体インヒビターのＣＲ２部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（例えば、ｉＣ３ｄ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＣＲ１部分は補体活性を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、非ＣＲ２標的化部分とＣＲ１部分を含むものである。該融合タンパク質の非ＣＲ２標的化部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのＣＲ１部分は補体活性を阻害する。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長のヒトＣＲ１（配列番号：１１）と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）またはＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＣＲ１の完全細胞外ドメイン（ＳＣＲ１〜３０）（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１９７１）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）またはＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＳＣＲ１〜４（配列番号：１１のアミノ酸４２〜２９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）またはＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＳＣＲ１〜１１（配列番号：１１のアミノ酸４２〜７４５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）またはＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＳＣＲ１〜１８（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１１９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）またはＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長のヒトＣＲ１（配列番号：１１）、ヒトＣＲ１の完全細胞外ドメイン（ＳＣＲ１〜３０）（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１９７１）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片、ＳＣＲ１〜４（配列番号：１１のアミノ酸４２〜２９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片、ＳＣＲ１〜１１（配列番号：１１のアミノ酸４２〜７４５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片、またはＳＣＲ１〜１８（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１１９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒトＣＲ１タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトＣＲ１タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトＣＲ１（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトＣＲ１ホモログは、天然に存在するヒトＣＲ１（例えば、配列番号：１１）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトＣＲ１（例えば、配列番号：１１）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトＣＲ１のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトＣＲ１（またはその生物学的に活性な断片）の補体第二経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトＣＲ１のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトＣＲ１（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
本明細書で用いる場合、用語「補体因子Ｈ」、「Ｈ因子」または「ＦＨ」は、一本鎖のポリペプチド鎖の血漿糖タンパク質（そのホモログを含む）である補体因子Ｈをいう。このタンパク質は、一連のビーズのような連続様式で配列され、かつ短いリンカー配列（各々、２〜６個のアミノ酸）で分断されたおよそ６０個のアミノ酸の２０個の保存されたショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメインで構成されている。Ｈ因子はＣ３ｂに結合し、第二経路のＣ３変換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）の崩壊を促進させ、Ｃ３ｂのタンパク質分解性不活化の補因子としての機能を果たす。Ｈ因子の存在下では、Ｃ３ｂのタンパク質分解 によりＣ３ｂの切断がもたらされる。Ｈ因子は、ＳＣＲ１〜４、ＳＣＲ５〜８およびＳＣＲ１９〜２０に存在する少なくとも３つの相違するＣ３ｂに対する結合ドメインを有する。Ｈ因子の各部位は、Ｃ３ｂタンパク質内の相違する領域に結合する：Ｎ末端部位は天然Ｃ３ｂに結合し；Ｈ因子の中央領域に存在する第２部位はＣ３ｃ断片に結合し、ＳＣＲ１９〜２０内に存在する部位はＣ３ｄ領域に結合する。さらに、Ｈ因子はまた、ヘパリンに対する結合部位も含み、該部位は、Ｈ因子のＳＣＲ７、ＳＣＲ５〜１２およびＳＣＲ２０内に存在し、Ｃ３ｂ結合部位のものと重複している。構造および機能の解析により、Ｈ因子の補体阻害活性のためのドメインは、最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン内に存在していることが示されている。
配列番号：５は、完全長ヒトＨ因子アミノ酸配列を表し（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０８６０３参照）；配列番号：１０は、完全長マウスＨ因子アミノ酸配列を表す（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０６９０９参照）。ヒトＨ因子配列において、配列番号：５のアミノ酸１〜１８はシグナルペプチドに対応し、配列番号：５のアミノ酸１９〜１２３１は成熟タンパク質に対応する。このタンパク質では、配列番号：５のアミノ酸２１〜８０がＳＣＲ１に対応し、配列番号：５のアミノ酸８５〜１４１がＳＣＲ２に対応し、配列番号：５のアミノ酸１４６〜２０５がＳＣＲ３に対応し、配列番号：５のアミノ酸２１０〜２６２がＳＣＲ４に対応し、配列番号：５のアミノ酸２６７〜３２０がＳＣＲ５に対応する。マウスＨ因子配列では、配列番号：１０のアミノ酸１〜１８がシグナルペプチドに対応し、配列番号：１０のアミノ酸１９〜１２３４が成熟タンパク質に対応する。このタンパク質では、配列番号：１０のアミノ酸１９〜８２がＳＣＲ１に対応し、配列番号：１０のアミノ酸８３〜１４３がＳＣＲ２に対応し、配列番号：１０のアミノ酸１４４〜２０７がＳＣＲ３に対応し、配列番号：１０のアミノ酸２０８〜２６４がＳＣＲ４に対応し、配列番号：１０のアミノ酸２６５〜３２２がＳＣＲ５に対応する。開示したペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質には種および系統の異形体が存在すること、ならびにＨ因子またはその生物学的に活性な断片には、あらゆる種および系統の異形体が包含されることは理解されよう。
本明細書で用いる場合、Ｈ因子の「生物学的に活性な」断片という用語は、完全長のＨ因子タンパク質の補体阻害活性の一部または全部を有するＨ因子タンパク質の任意の部分をいい、限定されないが、ＳＣＲ１〜４、ＳＣＲ１〜８、ＳＣＲ１〜１８、ＳＣＲ１９〜２０を含むＨ因子断片、または天然に存在するＨ因子の任意のホモログもしくはその断片（以下に詳細に記載する）が挙げられる。一部の特定の実施形態では、Ｈ因子の生物学的に活性な断片は、以下の特性：（１）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対する結合性、（２）Ｃ３ｂに対する結合性、（３）ヘパリンに対する結合性、（４）シアル酸に対する結合性、（５）内皮細胞表面に対する結合性、（６）細胞内インテグリン受容体に対する結合性、（７）病原体に対する結合性、（８）Ｃ３ｂ補因子活性、（９）Ｃ３ｂ崩壊促進活性、および（１０）補体第二経路の阻害性の１つ以上を有するものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターの補体インヒビター部分は、完全長のヒト（配列番号：５）またはマウス（配列番号：１０）のＨ因子を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターの補体インヒビター部分は、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片はＨ因子のＳＣＲ１〜４を含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片はＨ因子のＳＣＲ１〜５を含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片はＨ因子のＳＣＲ１〜８を含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片はＨ因子のＳＣＲ１〜１８を含むものである。一部の特定の実施形態では、ヒトまたはマウスのＨ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（Ｈ因子の例えば、少なくとも最初の５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８個などのいずれかの個数、またはそれ以上の個数のＮ末端ＳＣＲドメイン）を含む（一部の特定の実施形態では、該ドメインからなる、または本質的に該ドメインからなるものである。
一部の特定の実施形態では、Ｈ因子の生物学的に活性な断片は、野生型Ｈ因子に由来するものである。一部の特定の実施形態では、Ｈ因子の生物学的に活性な断片は、Ｈ因子の天然に存在する保護的バリアントに由来するものである。
一部の特定の実施形態では、Ｈ因子の生物学的に活性な断片はヘパリン結合部位が欠損しているものである。これは、例えば、Ｈ因子の生物学的に活性な断片上のヘパリン結合部位の変異によって、またはヘパリン結合部位を含まない生物学的に活性なＨ因子断片を選択することによって得られ得る。一部の特定の実施形態では、Ｈ因子の生物学的に活性な断片は、加齢性黄斑変性に対して保護的な多型を有するものである。Ｈａｇｅｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２（２０）：７２２７。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２部分とヒトまたはマウスのＨ因子部分を含むものである。ターゲット型補体インヒビターのＣＲ２部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのヒトまたはマウスのＨ因子部分は補体第二経路の活性を阻害する。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、非ＣＲ２標的化部分とヒトまたはマウスのＨ因子部分を含むものである。該融合タンパク質の非ＣＲ２標的化部分は、当該組成物をＩＲＩ部位および／または再生部位（例えば、肝臓部位）に、該部位に存在しているＣＲ２リガンド（すなわち、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ））に選択的に結合することにより送達し、一方、ターゲット型補体インヒビターのヒトまたはマウスのＨ因子部分は補体活性を阻害する。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＨ因子（配列番号：５）と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜２６２）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３２０）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３８６）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜５０７）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜１１０４）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＨ因子（配列番号：１０）と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜２６４）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜３２２）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜３８６）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜６２４）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜１１０９）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＨ因子（配列番号：５）、ヒトＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜２６２）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、ヒトＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３２０）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、ヒトＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３８６）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、ヒトＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜５０７）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、またはヒトＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜１１０４）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＨ因子（配列番号：１０）、マウスＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜２６４）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片、マウスＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜３２２）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片、マウスＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜３８６）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片、マウスＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜６２４）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片、またはマウスＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜１１０９）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ヒトもしくはマウスのＨ因子タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトもしくはマウス（ｈｕｍａｎ ｏｒ ｍｏｕｓｅ）のＨ因子タンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトもしくはマウスのＨ因子（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、補体第二経路を阻害する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトまたはマウスＨ因子ホモログは、天然に存在するヒトまたはマウスのＨ因子（例えば、配列番号：５または配列番号：１０）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトまたはマウスのＨ因子（例えば、配列番号：５または配列番号：１０）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＨ因子のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＨ因子（またはその生物学的に活性な断片）の補体第二経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＨ因子のホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＨ因子（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
本明細書に記載の任意の実施形態において、ＣＲ２部分またはその生物学的に活性な断片と、ヒトＣＤ５９、マウスＣＤ５９アイソフォームＡ、マウスＣＤ５９アイソフォームＢ、マウスＣｒｒｙタンパク質、ヒトＨ因子、マウスＨ因子、ヒトＣＲ１、ヒトＭＣＰ、ヒトＤＡＦもしくはマウスＤＡＦまたはその生物学的に活性な断片を含む補体インヒビター部分とを含む融合タンパク質には、ＣＲ２部分と補体インヒビター部分（例えば、ヒトＣＤ５９、マウスＣＤ５９アイソフォームＡ、マウスＣＤ５９アイソフォームＢ、マウスＣｒｒｙタンパク質、ヒトＨ因子、マウスＨ因子、ヒトＣＲ１、ヒトＭＣＰ、ヒトＤＡＦもしくはマウスＤＡＦまたはその生物学的に活性な断片）とを連結するアミノ酸リンカー配列も含まれる。リンカー配列の例は当該技術分野で知られており、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４、（ＳｅｒＧｌｙ４）、（ＳｅｒＧｌｙ４）２、（ＳｅｒＧｌｙ４）３、および（ＳｅｒＧｌｙ４）４が挙げられる。また、該連結配列は、種々の補体因子のドメイン間に見られる「天然」連結配列を含むものであってもよい。例えば、ヒトＣＲ２の最初の２つのＮ末端ショートコンセンサスリピートドメイン間の連結配列であるＶＳＶＦＰＬＥが使用され得る。一部の実施形態では、ヒトＣＲ２の４番目と５番目のＮ末端ショートコンセンサスリピートドメイン間の連結配列（ＥＥＩＦ）が使用される。
非ターゲット型補体インヒビター
一部の特定の実施形態では、組成物は非ターゲット型補体インヒビターを含むものである。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、補体の古典的経路と補体第二経路を阻害する。一部の特定の実施形態では、補体の古典的経路と補体第二経路を阻害する非ターゲット型補体インヒビターは、Ｃ１インヒビタータンパク質またはその生物学的に活性な断片もしくはホモログである。
本明細書で用いる場合、用語「Ｃ１インヒビター」または「Ｃ１エステラーゼインヒビター」は、古典的経路のＣ３変換酵素（Ｃ４ｂ２ａ）の形成を阻害するセリンプロテアーゼインヒビター（５００個アミノ酸（ヒト）または５０４個のアミノ酸（マウス）のタンパク質である「セルピンタンパク質」）をいう。Ｃ１インヒビターは、ほぼ０．２５ｇ／Ｌのレベルで血中を循環しており、炎症時は、そのレベルのほぼ２倍に上昇する。Ｃ１インヒビターは、補体の古典的経路のＣ１複合体内のＣ１ｒおよびＣ１ｓプロテイナーゼに不可逆的に結合して不活化させ、また、レクチン経路のＭＡＳＰ−１およびＭＡＳＰ−２プロテイナーゼも不活化させる。したがって、Ｃ１インヒビターは、後のＣ１およびマンノース結合性レクチンによる補体成分Ｃ４およびＣ２のタンパク質分解的切断を抑制する。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０５１５５（ヒトＣ１インヒビタータンパク質；配列番号：１９）またはＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ９７２９０（マウスＣ１インヒビタータンパク質；配列番号：２０）を参照のこと。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのＣ１インヒビタータンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトもしくはマウスのＣ１インヒビタータンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトもしくはマウスのＣ１インヒビター（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、古典的経路のＣ３変換酵素（Ｃ４ｂＣ２ａ）の形成を阻害する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトまたはマウスのＣ１インヒビターホモログは、天然に存在するヒトまたはマウスのクラスタリン（例えば、配列番号：１９または配列番号：２０）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトまたはマウスのＣ１インヒビター（例えば、配列番号：１９または配列番号：２０）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＣ１インヒビターのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＣ１インヒビター（またはその生物学的に活性な断片）の補体の古典的経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのＣ１インヒビターのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのＣ１インヒビター（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
一部の特定の実施形態では、補体の古典的経路と補体第二経路を阻害する非ターゲット型補体インヒビターは抗Ｃ３抗体である。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、補体タンパク質Ｃ３に選択的に結合し、Ｃ３ａおよびＣ３ｂへのＣ３の切断を抑制する。
本明細書で用いる場合、用語「Ｃ３」または「補体タンパク質Ｃ３」は、Ｃ３が補体系の活性化に中心的な役割を果たす３つのすべての補体経路の一成分をいう。古典的経路（Ｃ４ｂＣ２ａ）または第二経路（Ｃ３ｂＢｂ）の変換酵素によるＣ３の切断は、補体の古典的経路および第二経路の両方において中心的な反応である。Ｃ３の切断により活性断片Ｃ３ｂが生成され、これは、その反応性チオエステルを介して細胞表面の糖質または免疫凝集体に共有結合する。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０１０２４（ヒト）およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０１０２７（マウス）を参照のこと。
一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは補体第二経路を特異的に阻害する。一部の特定の実施形態では、補体第二経路を特異的に阻害する非ターゲット型補体インヒビターは抗Ｂ因子抗体を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、３番目のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン内のＢ因子に選択的に結合し、米国特許出願第１１／０５７，０４７号（引用により本明細書に組み込まれる、特に、抗Ｂ因子抗体の記載に関して）に記載のＣ３ｂＢｂ複合体の形成を抑制する。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体は、３番目のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン内のＢ因子に選択的に結合し、Ｄ因子によるＢ因子の切断を抑制または阻害する。別の態様では、該抗体または抗原結合断片は、ヒトＢ因子の３番目のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメインに結合する。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、多くの哺乳動物種（例えば、ヒトならびに非ヒト霊長類、マウス、ラット、ブタ、ウマおよびウサギからなる群より選択される動物）に由来するＢ因子に選択的に結合する。
本明細書で用いる場合、用語「Ｂ因子」または「ＦＢ」は、Ｄ因子が２つの断片：ＢａとＢｂに切断される補体第二経路の一タンパク質成分をいう。セリンプロテアーゼであるＢｂは、次いで、補体タンパク質Ｃ３の切断生成物Ｃ３ｂと結合し、Ｃ３またはＣ５変換酵素を生成させる。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ００７５１（ヒト）およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０４１８６（マウス）を参照のこと。
一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の特定の実施形態では、該抗体はモノクローナル抗体１３７９である（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−６２３０によって生成）。
一部の特定の実施形態では、補体第二経路を特異的に阻害する非ターゲット型補体インヒビターは、プロパージンに選択的に結合する抗プロパージン抗体を含むものである（
米国特許第７，４２３，１２８号（引用により本明細書に組み込まれる、特に、抗プロパージン抗体に関する記載に関して）に記載のものなど）。本明細書で用いる場合、用語「プロパージン」または「補体因子Ｐ」は、Ｃ３ｂ（補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片）と複合体を形成し、第二経路のＣ３変換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）を安定化させ、さらに多くのＣ３が生成されるのを可能にし、それにより補体第二カスケードを増幅させる補体第二経路の一成分をいう。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ２７９１８（ヒトプロパージン）および受託番号Ｐ１１６８０（マウスプロパージン）を参照のこと。
一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体は、Ｂｂ、Ｃ３ａおよびＣ５ａの１種類以上の生成を阻害するものである。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、補体第二経路を特異的に阻害する非ターゲット型補体インヒビターは、Ｄ因子に選択的に結合する抗Ｄ因子抗体を含むものである。本明細書で用いる場合、用語「Ｄ因子」は、Ｂ因子がＣ３ｂ因子に結合されるとＢ因子を切断し、第二経路の変換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）を活性化させる血清プロテアーゼをいう。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ００７４６（ヒトＤ因子）および受託番号Ｐ０３９５３（マウスＤ因子）を参照のこと。Ｄ因子は、補体第二経路において、補体の古典的経路におけるＣ１ｓと同じ機能を果たす。
一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体は、Ｂｂ、Ｃ３ａ、Ｃ５ａおよびｓＣ５ｂ−９の１種類以上の生成を阻害するものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の特定の実施形態では、該抗体は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）１６６−３２（ＡＴＣＣ寄託受託番号ＨＢ−１２４７６によって生成）。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、補体タンパク質Ｃ５（Ｃ５）の切断を阻害する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の組織化を阻害する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、またはヒト化型である。一部の特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はポリクローナルである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はモノクローナルである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はキメラである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はヒト化型である。一部の特定の実施形態では、ヒト化抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はエクリズマブまたはパキセリズマブである。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヘテロ二量体アポリポタンパク質であるクラスタリンである。一部の特定の実施形態では、クラスタリンは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の組織化を阻害する。一部の特定の実施形態では、クラスタリンは、Ｃ５ｂ−８およびＣ５ｂ−９上での補体タンパク質Ｃ９の組織化を阻害するか、またはＣ５ｂ−７に結合して膜結合を抑制する。
本明細書で用いる場合、用語「クラスタリン」は、８０キロダルトン（ｋＤ）のヘテロ二量体アポリポタンパク質をいう（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１０９０９（配列番号：１５）またはＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ 受託番号Ｑ０６８９０）（配列番号：１６）。ヒトクラスタリンは、４４９個のアミノ酸のタンパク質として生成され、そのうち、アミノ酸１〜２２はシグナルペプチドを構成し、アミノ酸２３〜４４９は成熟ペプチドを構成し、これは、アミノ酸２２７と２２８の間のタンパク質分解的切断によってさらなるプロセッシングを受け、クラスタリンα鎖（配列番号：１５のアミノ酸２２８〜４４９）とクラスタリンβ鎖（配列番号：１５のアミノ酸２３〜２２７）が生成される。マウスクラスタリンは、４４８個のアミノ酸のタンパク質として生成され、そのうち、アミノ酸１〜２１はシグナルペプチドを構成し、アミノ酸２２〜４４８は成熟ペプチドを構成し、これは、アミノ酸２２６と２２７の間のタンパク質分解的切断によってさらなるプロセッシングを受け、クラスタリンα鎖（配列番号：１６のアミノ酸２２７〜４４７）とクラスタリンβ鎖（配列番号：１６のアミノ酸２２〜２２６）が生成される。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのクラスタリンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトもしくはマウスのクラスタリンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトもしくはマウスのクラスタリン（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、終末補体経路およびＭＡＣの組織化を阻害する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトまたはマウスのクラスタリンホモログは、天然に存在するヒトまたはマウスのクラスタリン（例えば、配列番号：１５もしくは配列番号：１６）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトまたはマウスのクラスタリン（例えば、配列番号：１５もしくは配列番号：１６）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのクラスタリンのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのクラスタリン（またはその生物学的に活性な断片）の終末補体経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのクラスタリンのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのクラスタリン（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、タンパク質ビトロネクチンまたはその生物学的に活性な断片もしくはホモログである。一部の特定の実施形態では、ビトロネクチンは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の組織化を阻害する。一部の特定の実施形態では、ビトロネクチンＣ５ｂ−７の膜結合をブロックし、Ｃ９の重合を抑制する。
本明細書で用いる場合、用語「ビトロネクチン」は、７５ｋＤａのタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ０４００４（配列番号：１７）；またはＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｐ２９７８８（配列番号：１８）をいう。ヒトビトロネクチンは、４７８個のアミノ酸のタンパク質として生成され、そのうち、アミノ酸１〜１９はシグナルペプチドを含み、アミノ酸２０〜４７８は成熟タンパク質を含む。該成熟ヒトタンパク質は、７５ｋＤａのタンパク質として単量体形態で、およびアミノ酸３９８と３９９の間のタンパク質分解性プロセッシングにより生成した６５ｋＤａサブユニット（配列番号：１７のアミノ酸２０〜３９８）と１０ｋＤａサブユニット（配列番号：１７のアミノ酸３９９〜４７８）が互いにジスルフィド結合によって保持されたヘテロ二量体形態として存在する。また、マウスビトロネクチンも４７８個のアミノ酸のタンパク質として生成され、そのうち、アミノ酸１〜１９はシグナルペプチドを含み、アミノ酸２０〜４７８は成熟タンパク質を含む。しかしながら、ヒトビトロネクチンとは異なり、マウス成熟タンパク質は、一般的に、配列番号：１８のアミノ酸２０〜４７８を含む７５ｋＤａのタンパク質として単量体形態で存在する。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。ヒトもしくはマウスのビトロネクチンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片としては、天然に存在するヒトもしくはマウスのクラスタリン（またはその生物学的に活性な断片）と、少なくとも１個または数個、限定されないが、１個または数個のアミノ酸が欠失（例えば、ペプチドもしくは断片などの該タンパク質の切断型）、挿入、逆転、置換および／または誘導体化されている点（例えば、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミテート化、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）で異なるが、終末補体経路およびＭＡＣの組織化を阻害する能力を保持しているタンパク質が挙げられる。例えば、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンホモログは、天然に存在するヒトもしくはマウスのビトロネクチン（例えば、配列番号：１７もしくは配列番号：１８）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、例えば、天然に存在するヒトもしくはマウスのビトロネクチン（例えば、配列番号：１７もしくは配列番号：１８）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかの割合で同一であるアミノ酸配列を有するものであり得る。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのビトロネクチン（またはその生物学的に活性な断片）の終末補体経路の阻害活性の全部を保持している。一部の特定の実施形態では、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンのホモログ（またはその生物学的に活性な断片）は、ヒトもしくはマウスのビトロネクチン（またはその生物学的に活性な断片）の補体阻害活性の少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％のいずれかの割合を保持している。
アシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ）およびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニスト
本明細書で用いる場合、用語「アシル化刺激タンパク質」、「ＡＳＰ」、「Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ」または「ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ」は、脂肪細胞でのトリグリセリド（ＴＧ）合成とグルコース輸送を刺激する脂肪組織由来ホルモンをいう。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、Ｇタンパク質共役型受容体である受容体Ｃ５Ｌ２を介して、ＴＧ合成経路の律速酵素ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼの活性（ＤＧＡＴ）、およびグルコース輸送を刺激する機能を果たす。配列番号：６はヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇのアミノ酸配列を表し、補体タンパク質Ｃ３の切断生成物であるヒトＣ３ａには存在しているＣＯＯＨ末端アスパラギンが欠損している。Ｃ３ａの強力なアナフィラトキシン活性は、ＣＯＯＨ末端アスパラギンに大きく依存しており；カルボキシペプチダーゼＡによる該アスパラギンの除去により該活性が解消される。
ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、脂肪組織内のアジプシン（Ｄ因子）、補体タンパク質Ｃ３およびＢ因子（ＦＢ）の分化依存性発現に基づいて補体の活性化の第二経路によって生成される。Ｂａｌｄｏ，Ａ．Ｄ．ら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：１５４３−５７。Ｃ３ｂ、ＦＢおよびＤ因子（アジプシン）の相互作用によって形成されるタンパク質分解性複合体である第二経路のＣ３変換酵素は、補体タンパク質Ｃ３を２つの断片Ｃ３ａとＣ３ｂに切断する。Ｃ３ａは、その受容体Ｃ３ａＲと相互作用する強力なアナフィラトキシンである。しかしながら、循環系内では、Ｃ３ａの末端アルギニンがカルボキシペプチダーゼＢによって速やかに切断され、アナフィラトキシン機能が不活化され、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇが生成する。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇおよびＣ３ａはともに、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）と相互作用して培養脂肪細胞内でＴＧ合成を有効に刺激する。
一部の特定の実施形態では、組成物はＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる抗体またはその抗原結合断片、およびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラまたはヒト化型である。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。
ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）であるＣ５Ｌ２を介して作用する。本明細書で用いる場合、用語「Ｃ５Ｌ２」、「ＡＳＰ受容体」またはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）」は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合するＧタンパク質共役型受容体をいい、ヒト脂肪組織、肝臓、脳、脾臓、腸、ヒト皮膚線維芽細胞および３Ｔ３−Ｌ１細胞において発現される。ヒトＣ５Ｌ２で安定的にトランスフェクトさせたヒトＨＥＫ−２９３細胞での機能獲得試験では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇが刺激されると、非トランスフェクト細胞と比べてＴＧ合成およびグルコース輸送が有意に増大されることが示された。機能喪失試験では、Ｃ５Ｌ２を内因的に発現する細胞をアンチセンス核酸またはＣ５Ｌ２に特異的な低分子干渉ＲＮＡで処理すると、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ応答が低減することが示された。また、原形質膜へのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ誘導性β−アレスチンのトランスロケーションによるＣ５Ｌ２の活性化およびＣ５Ｌ２のリン酸化。Ｃ５Ｌ２のシグナル伝達に関与していることが示されている分子としては、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ、Ａｋｔ、およびプロテインキナーゼＣが挙げられる。
配列番号：７は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）のアミノ酸配列を表す（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ．受託番号Ｑ９Ｐ２９６参照）。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）は、いくつかの細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインまたは細胞質ドメインを含む複雑な構造を有する。配列番号：７のアミノ酸１〜３８は最初の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）を含み； 配列番号：７のアミノ酸３９〜６１は最初の膜貫通ドメイン（ＴＭ１）を含み；配列番号：７のアミノ酸６２〜７２は最初の細胞質ドメイン（ＣＰＤ１）を含み；配列番号：７のアミノ酸７３〜９５は２番目の膜貫通ドメイン（ＴＭ２）を含み；配列番号：７のアミノ酸９６〜１１４は２番目の細胞外ドメイン（ＥＣＤ２）を含み；配列番号：７のアミノ酸１１５〜１３７は３番目の膜貫通ドメイン（ＴＭ３）を含み；配列番号：７のアミノ酸１３８〜１４９は２番目の細胞質ドメイン（ＣＰＤ２）を含み；配列番号：７のアミノ酸１５０〜１７２は４番目の膜貫通ドメイン（ＴＭ４）を含み；配列番号：７のアミノ酸１７３〜２０２は３番目の細胞外ドメイン（ＥＣＤ３）を含み；配列番号：７のアミノ酸２０３〜２２５は５番目の膜貫通ドメイン（ＴＭ５）を含み；配列番号：７のアミノ酸２２６〜２３７は３番目の細胞質ドメイン（ＣＰＤ３）を含み；配列番号：７のアミノ酸２３８〜２６０は６番目の膜貫通ドメイン（ＴＭ６）を含み；配列番号：７のアミノ酸２６１〜２７４は４番目の細胞外ドメイン（ＥＣＤ４）を含み；配列番号：７のアミノ酸２７５〜２９４は７番目の膜貫通ドメイン（ＴＭ７）を含み；配列番号：７のアミノ酸２９５〜３３７は４番目の細胞質ドメイン（ＣＰＤ４）を含む。
一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇがＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に結合するのを妨げる可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片である。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）とアミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）とアミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）とアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）とアミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）とアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）とアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）、アミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）、およびアミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）、アミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）、アミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）、およびアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸１〜３８（ＥＣＤ１）、アミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）、およびアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。一部の特定の実施形態では、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）（配列番号：７）のアミノ酸９６〜１１４（ＥＣＤ２）、アミノ酸１７３〜２０２（ＥＣＤ３）、およびアミノ酸２６１〜２７４（ＥＣＤ４）を含むものである。
本明細書に記載の任意の実施形態において、可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片は、さらに、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）部分を一緒に連結する１つ以上のアミノ酸リンカー配列を含むものである。リンカー配列の例は当該技術分野で知られており、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４、（ＳｅｒＧｌｙ４）、（ＳｅｒＧｌｙ４）２、（ＳｅｒＧｌｙ４）３、および（ＳｅｒＧｌｙ４）４が挙げられる。また、該連結配列は、種々の補体因子のドメイン間に見られる「天然」連結配列を含むものであってもよい。例えば、ヒトＣＲ２の最初の２つのＮ末端ショートコンセンサスリピートドメイン間の連結配列であるＶＳＶＦＰＬＥが使用され得る。
一部の特定の実施形態では、組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの結合を妨げる抗体またはその抗原結合断片、およびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合するが該受容体を活性化させないＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇまたはその断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの結合を妨げる抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇが該受容体に結合を妨げる抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、またはヒト化型である。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合するが該受容体を活性化させないＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇまたはその断片である。
本明細書で用いる場合、用語「〜に特異的に結合する」または「〜に選択的に結合する」は、あるタンパク質の別のタンパク質への（例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原への、あるいは受容体のリガンドへの）特異的結合であって、任意の標準的なアッセイ（例えば、イムノアッセイ）によって測定されるその結合レベルがアッセイのバックグラウンド対照よりも統計学的に有意に高いものをいう。例えば、イムノアッセイを行なう場合、対照としては、典型的には、抗体またはその抗原結合断片のみを内包している（すなわち、抗原の非存在下の）反応ウェルまたはチューブが挙げられ、この場合、抗原の非存在下における該抗体またはその抗原結合断片による反応性（例えば、該ウェルに対する非特異的結合）の量はバックグラウンドとみなされる。結合は、当該技術分野において標準的なさまざまな方法、例えば限定されないが：ウエスタンブロット、イムノブロット、酵素免疫測定法（「ＥＬＩＳＡ」）、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴、化学発光、蛍光偏光、リン光、免疫組織化学的解析、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間（「ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ」）質量分析、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、顕微鏡検査、蛍光標示式細胞分取（「ＦＡＣＳ」）、およびフローサイトメトリーを用いて測定され得る。
本明細書で用いる場合、用語「ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片」は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的または選択的に結合する抗体、またはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的もしくは選択的に結合し、好ましくは、その対応する受容体ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる能力を保持しているかかる抗体の断片をいう。同様に、本明細書で用いる場合、用語「ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片」は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的または選択的に結合する抗体、またはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的もしくは選択的に結合し、好ましくは、その対応するリガンドＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの結合を妨げる能力を保持しているかかる抗体の断片をいう。
抗体は、免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインを含み、Ｉｇタンパク質スーパーファミリーの構成員である。一般的に、抗体分子は、２つの型の鎖：重鎖あるいはＨ鎖と軽鎖あるいはＬ鎖を含む。軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ）と定常ドメイン（ＣＬ）を含み、一方、重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）と３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインはヒンジ領域によって分断されている。各アイソタイプの弁別的特徴は、免疫グロブリンの定常ドメイン内の配列によって規定される。各抗体分子は、典型的には２つのＨ鎖と２つのＬ鎖を含む。２つのＨ鎖はジスルフィド結合によって連結されて一緒になっており、各Ｈ鎖はジスルフィド結合によってＬ鎖に連結されている。Ｌ鎖には、ラムダ（λ）鎖およびカッパ（κ）鎖と称される２つの型しかない。対照的に、Ｈ鎖にはアイソタイプと称される５つの主な類型がある。この５つの類型としては、ＩｇＭ（μ）、ＩｇＤ（δ）、ＩｇＧ（λ）、ＩｇＡ（α）、およびＩｇＥ（またはε）が挙げられる。ヒト免疫グロブリン分子には、９つのアイソタイプ：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧの４つのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１（γ１）、ＩｇＧ２（γ２）、ＩｇＧ３（γ３）およびＩｇＧ４（γ４）など）、ならびにＩｇＡの２つのサブクラス（例えば、ＩｇＡ１（α１）およびＩｇＡ２（α２）など）が含まれる。
総合すると、１つのＨ鎖と１つのＬ鎖が、免疫グロブリンの可変領域を有する免疫グロブリン分子のアームを形成している。完全な免疫グロブリン分子は、ジスルフィド結合された２つのアームを含む。したがって、完全体の免疫グロブリンの各アームはＶＨ＋Ｌ領域とＣＨ＋Ｌ領域を含む。本明細書で用いる場合、可変領域あるいはＶ領域は、Ｉｇタンパク質のＶＨ＋Ｌ領域（Ｆｖ断片としても知られている）、ＶＬ領域またはＶＨ領域をいう。また、本明細書で用いる場合、定常領域あるいはＣ領域という用語はＣＨ＋Ｌ領域、ＣＬ領域またはＣＨ領域をいう。
種々の異なるプロテアーゼによるＩｇタンパク質の制限消化により、いくつかの断片が生成され、そのうちの一部のものだけが、抗原に対する結合能を保持している。抗原結合断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２断片と称される。抗原に結合する能力が欠損している断片はＦｃ断片と称される。Ｆａｂ断片は、ＶＨ領域およびＣＨ１領域と対になったＬ鎖（ＶＬ＋ＣＬドメイン）を含む免疫グロブリン分子の１つのアームを構成している。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインに結合されたヒンジ領域の部分を有するＦａｂ断片に対応する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、通常、ジスルフィド結合によって、典型的にはヒンジ領域内で互いに共有結合された２つのＦａｂ’断片に対応する。
また、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は「キメラ」抗体であってもよい。キメラ抗体では、重鎖および／または軽鎖の一部分は、特定の種（例えば、ヒトもしくはマウスなど）に由来する抗体、あるいは特定の抗体クラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１など）に属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、該鎖（１つまたは複数）の残部は、別の種に由来する抗体、あるいは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびにかかる抗体の断片（該断片が所望の生物学的活性を示す限り）の対応する配列と同一または相同である。米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−５５（１９８４）。本明細書において重要なキメラ抗体としては、例えば、対応する非キメラ抗体とは別の免疫グロブリンサブタイプ由来のＦｃドメインを含み、該非キメラ抗体よりも短い、または長い循環血漿半減期を有するものが挙げられ得る。
また、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ抗体、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）抗体、またはかかる抗体の断片はヒト化抗体であってもよい。ヒト化抗体は、非ヒト種の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を有する分子であって、該分子の残りの免疫グロブリン由来部分は、当該タンパク質の免疫原性を低下させるためにヒト免疫グロブリン由来である分子である。抗原結合部位は、ヒト定常ドメインと融合させた完全な可変領域、または可変ドメイン内の適切なヒトフレームワーク領域にグラフティングさせた相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含むものであり得る。ヒト化抗体は、例えば、抗体の可変ドメインをモデル設計し、遺伝子操作手法（ＣＤＲグラフティングなど）を用いて抗体を作製することにより作製され得る。ヒト化抗体の作製のための種々の手法の説明は、例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−５５；Ｗｈｉｔｔｌｅら、（１９８７）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１：４９９−５０５；Ｃｏら、（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４；Ｃｏら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２８６９−２８７３；Ｃａｒｔｅｒら、１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５−４２８９；Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅら、（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２７１７−２７２５ならびにＰＣＴ特許出願公開公報番号ＷＯ９１／０９９６７；ＷＯ９１／０９９６８およびＷＯ９２／１１３８３１において知得される。
本発明の完全体の抗体は、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよい。あるいはまた、完全体の抗体の機能的等価体、例えば、１つ以上の抗体ドメインが切断されているか、あるいは存在しない抗原結合断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、もしくはＦ（ａｂ）２断片）、ならびに遺伝子操作された抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、一本鎖抗体、ヒト化抗体（上記に論考）、１つより多くのエピトープに結合することができる抗体（例えば、二重特異性抗体）、または１種類以上の異なる抗原に結合することができる抗体（例えば、二重もしくは多重特異性抗体）もまた、標的化基として使用され得る。
特定の抗原（すなわち、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇまたはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２））に特異的または選択的に結合するポリクローナル抗体の作製方法は当該技術分野で知られている。一般的に、抗体の作製では、適当な実験動物（例えば、限定されないが、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、マウス、ラットまたはニワトリなど）を、抗体が所望される対象の抗原（すなわち、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇまたはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２））に曝露する。典型的には、動物は、有効量の抗原（これは、該動物に注射される）で免疫処置される。抗原の有効量は、動物による抗体の生成が誘導されるのに必要とされる量をいう。その後、動物の免疫機構が所定の期間にわたって応答することが可能になる。免疫処置プロセスは、免疫機構によって抗原に対する抗体が生成されていることがわかるまで反復され得る。抗原に特異的なポリクローナル抗体を得るため、血清を、所望の抗体を含む動物から収集する（またはニワトリの場合は、抗体は卵から収集され得る）。かかる血清は試薬として有用である。ポリクローナル抗体は血清（または卵）から、例えば、血清を硫酸アンモニウムで処理し、該抗体を沈降させることにより、さらに精製され得る。
特定の抗原（すなわち、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇまたはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２））に特異的または選択的に結合するモノクローナル抗体の作製方法は当該技術分野で知られている。例えば、モノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６：４９５−４９７）の方法論に従って作製され得る。例えば、免疫処置した動物のＢリンパ球を脾臓（または任意の適当な組織）から回収し、次いで骨髄腫細胞と融合させて、適当な培養培地での連続培養が可能なハイブリドーマ細胞の集団を得る。所望の抗体を産生するハイブリドーマは、ハイブリドーマによって産生された抗体が所望の抗原に結合する能力を、例えば、酵素免疫測定法または当該技術分野で知られた他の常套的な方法にて試験することにより選択される。
本発明の抗体を作製するための好ましい方法は、（ａ）動物に有効量のタンパク質またはペプチド（例えば、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇタンパク質もしくはペプチド、あるいはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）タンパク質もしくはペプチド）を投与し、抗体を生成させること、（ｂ）該抗体を回収することを含む。別の方法では、本発明の抗体を組換え産生させる。例えば、本発明による抗体を発現する細胞株（例えば、ハイブリドーマ）が得られたら、該細胞株でｃＤＮＡをクローニングし、所望の抗体をコードする可変領域の遺伝子（例えば、ＣＤＲをコードする配列）を同定することすることが可能である。該細胞株から、本発明による抗体および抗原結合断片は、少なくとも、該抗体の重鎖または軽鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡ配列と、任意選択で所望により、該重鎖および／または軽鎖の残りの部分をコードする他のＤＮＡ配列とを含む１種類以上の複製可能な発現ベクター調製し、該抗体の産生が行なわれる適切な宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションすることにより得られ得る。好適な発現宿主としては、細菌（例えば、大腸菌株）、真菌（特に、酵母、例えば、ピキア、サッカロミセスもしくはクルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属の構成員）および哺乳動物細胞株、例えば、非産生性骨髄腫細胞株（マウスＮＳＯ系統またはＣＨＯ細胞など）が挙げられる。効率的な転写および翻訳を得るためには、各ベクター内のＤＮＡ配列に、適切な調節配列、特に、可変ドメイン配列に作動可能に連結させたプロモーターおよびリーダー配列を含めるのがよい。このようにして抗体を作製するための具体的な方法は、一般的によく知られており、常套的に使用されている。例えば、基礎分子生物学の手順は、Ｍａｎｉａｔｉｓら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９）に記載されており；ＤＮＡの配列決定は、Ｓａｎｇｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７７）７４：５４６３）およびＡｍｅｒｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｃ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｈａｎｄｂｏｏｋに記載のようにして行なうことができ；部位特異的変異誘発は、Ｋｒａｍｅｒら（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９８４）１２：９４４１）およびＡｎｇｌｉａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｔｄ．Ｈａｎｄｂｏｏｋの方法に従って行なうことができる。さらに、ＤＮＡの操作、発現ベクターの創出および適切な細胞の形質転換による抗体の調製に適した手法が記載された数多くの刊行物（特許明細書を含む）が存在し、例えば、Ｍｏｕｎｔａｉｎ，Ａ．およびＡｄａｉｒ，Ｊ．Ｒ．，ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｖｉｅｗｓ（Ｔｏｍｂｓ，Ｍ Ｐ編，１０，第１章，１９９２，Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ，Ａｎｄｏｖｅｒ，ＵＫ）に概説されている。
医薬組成物および用量
また、本明細書において、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビター、非ターゲット型補体インヒビター、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニスト、またはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストのいずれか１種類以上、および薬学的に許容され得る担体を含む医薬組成物も提供する。
本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物は個体への投与に適したものである。一部の特定の実施形態では、個体は脊椎動物である。一部の特定の実施形態では、脊椎動物は哺乳動物である。一部の特定の実施形態では、哺乳動物は研究用動物または飼養動物である。一部の特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物は、さまざまな投与様式（例えば、全身性または局所投与など）に適したものである。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は注射用液剤の形態であって、全身投与（例えば、静脈内投与など）に適したものである。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は注射用液剤の形態であって、局所投与に適したものである。任意の実施形態において、医薬組成物液状または固形の形態であって、経口投与に適したものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物単一の投薬単位または反復投薬形態にパッケージングされ得る。
臨床用語において、本明細書に記載の任意の医薬組成物（ターゲット型補体インヒビターおよび非ターゲット型補体インヒビターを含む）の投与のための治療有効投薬量は、低用量で開始し、患者をモニタリングしながら、所望の補体依存性増殖応答の徴候（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）取込み；還元型形態のグルタチオン（ＧＳＨ）レベルの増大；グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ１）の増大；マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の減少；ＩＬ−６レベルの増大；および／またはＴＮＦａレベルの低下など）が観察されるまで投薬量を増大させる用量設定（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって決定され得る。
所望により、医師は、補体依存性増殖応答が維持されることを確実にするために患者をモニタリングしながら、さらに、望ましくない補体依存性損傷の徴候（血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの増大；ＧＳＨおよびＧＰＸ１の低減；ＭＤＡの増大；肝臓ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）含有量の増大；ＩＬ−６レベルの低下；ならびにＴＮＦａレベルの増大など）の出現について患者をモニタリングしながら、投薬量をさらに増大させてもよい。このような補体依存性損傷の徴候が観察された場合、医師は、投薬量の増大を止める選択をしてもよく、さらには投薬量を少なくしてもよい。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＭＣＰ（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３９２）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ヒトＭＣＰの細胞外ドメイン（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３４３）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ヒトＭＣＰのＳＣＲ１〜４（配列番号：１２のアミノ酸３５〜２８５）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＭＣＰ（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３９２）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ヒトＭＣＰの細胞外ドメイン（配列番号：１２のアミノ酸３５〜３４３）を含むＭＣＰタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ヒトＭＣＰのＳＣＲ１〜４（配列番号：１２のアミノ酸３５〜２８５）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＤＡＦ（配列番号：１３）または完全長マウスＤＡＦ（配列番号：１４）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＤＡＦ（配列番号：１３）または完全長マウスＤＡＦ（配列番号：１４）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＤＡＦ（配列番号：１３）または完全長マウスＤＡＦ（配列番号：１４）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＤＡＦ（配列番号：１３）または完全長マウスＤＡＦ（配列番号：１４）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３５３）がないヒト成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１３のアミノ酸３５〜３５３）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片あるいは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−３６２）がないマウス成熟ＤＡＦタンパク質（配列番号：１４のアミノ酸３５〜３６２）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１３のアミノ酸３５〜２８５）を含むヒトＤＡＦの生物学的に活性な断片、または完全長マウスＤＡＦのショートコンセンサスリピート配列１〜４（ＳＣＲ１〜４）（配列番号：１４のアミノ酸３５〜２８６）を含むマウスＤＡＦの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長マウスＣｒｒｙ（配列番号：４）と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質（配列番号：４）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＨ因子（配列番号：５）と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜２６２）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３２０）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３８６）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜５０７）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜１１０４）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長ヒトＨ因子（配列番号：５）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜２６２）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３２０）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３８６）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜５０７）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｈ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜１１０４）を含むＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長のヒトＣＲ１（配列番号：１１）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ヒトＣＲ１の完全細胞外ドメイン（ＳＣＲ１〜３０）（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１９７１）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＲ１〜４（配列番号：１１のアミノ酸４２〜２９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＲ１〜１１（配列番号：１１のアミノ酸４２〜７４５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＲ１〜１８（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１１９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、完全長のヒトＣＲ１（配列番号：１１）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ヒトＣＲ１の完全細胞外ドメイン（ＳＣＲ１〜３０）（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１９７１）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＲ１〜４（配列番号：１１のアミノ酸４２〜２９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＲ１〜１１（配列番号：１１のアミノ酸４２〜７４５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＲ１〜１８（配列番号：１１のアミノ酸４２〜１１９５）を含む完全長のヒトＣＲ１の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
本明細書に記載の任意の実施形態において、ターゲット型補体インヒビターは非ＣＲ２標的化部分を含むものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体はポリクローナル抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体はモノクローナル抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＣ１インヒビタータンパク質（配列番号：１９）またはマウスＣ１インヒビタータンパク質（配列番号：２０）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＣ１インヒビタータンパク質のホモログもしくはマウスＣ１インヒビタータンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片である。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、補体タンパク質Ｃ３に選択的に結合し、Ｃ３ａおよびＣ３ｂへのＣ３の切断を抑制する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、３番目のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン内のＢ因子に選択的に結合し、Ｃ３ｂＢｂ複合体の形成を抑制する。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の特定の実施形態では、該抗体はモノクローナル抗体１３７９である（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−６２３０によって生成）。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体は、Ｂｂ、Ｃ３ａおよびＣ５ａの１種類以上の生成を阻害するものである。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体は、Ｂｂ、Ｃ３ａ、Ｃ５ａおよびｓＣ５ｂ−９の１種類以上の生成を阻害するものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の特定の実施形態では、該抗体はモノクローナル抗体（ｍＡｂ）１６６−３２である（ＡＴＣＣ寄託受託番号ＨＢ−１２４７６によって生成）。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、補体タンパク質Ｃ５（Ｃ５）の切断を阻害する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の組織化を阻害する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、またはヒト化型である。一部の特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はポリクローナルである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はモノクローナルである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はキメラである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はヒト化型である。一部の特定の実施形態では、ヒト化抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はエクリズマブまたはパキセリズマブである。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヘテロ二量体アポリポタンパク質であるクラスタリンである。一部の特定の実施形態では、クラスタリンは、Ｃ５ｂ−８およびＣ５ｂ−９上での補体タンパク質Ｃ９の組織化を阻害するか、またはＣ５ｂ−７に結合して膜結合を抑制する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトクラスタリンタンパク質（配列番号：１５）またはマウスクラスタリンタンパク質（配列番号：１６）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのクラスタリンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、非ターゲット型補体インヒビターと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、タンパク質ビトロネクチンまたはその生物学的に活性な断片もしくはホモログである。一部の特定の実施形態では、ビトロネクチンＣ５ｂ−７の膜結合をブロックし、Ｃ９の重合を抑制する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターはヒトビトロネクチンタンパク質（配列番号：１７）またはマウスビトロネクチンタンパク質（配列番号：１８）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。
本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は脊椎動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、脊椎動物は哺乳動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物は研究用動物または飼養動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物はヒトである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物は、さまざまな投与様式（例えば、全身性または局所投与など）に適したものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物は注射用液剤の形態であって、全身投与（例えば、静脈内投与など）に適したものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物は注射用液剤の形態であって、局所投与に適したものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物液状または固形の形態であって、経口投与に適したものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物単一の投薬単位または反復投薬形態にパッケージングされ得る。
一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる抗体またはその抗原結合断片を含むＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げるＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）の１つ以上の細胞外ドメインを含む可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片を含むＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる本明細書において提供する可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片の１種類以上の任意の組合せを含むＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの結合を妨げる抗体またはその抗原結合断片を含むＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合するが、該受容体を活性化させないＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇまたはその断片を含むＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストと、個体への投与に適した薬学的に許容され得る担体を含む。
一部の特定の実施形態では、個体は脊椎動物である。一部の特定の実施形態では、脊椎動物は哺乳動物である。一部の特定の実施形態では、哺乳動物は研究用動物または飼養動物である。一部の特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物は、さまざまな投与様式（例えば、全身性または局所投与など）に適したものである。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は注射用液剤の形態であって、全身投与（例えば、静脈内投与など）に適したものである。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は注射用液剤の形態であって、局所投与に適したものである。任意の実施形態において、医薬組成物液状または固形の形態であって、経口投与に適したものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、医薬組成物単一の投薬単位または反復投薬形態にパッケージングされ得る。
一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビターを含む任意の医薬組成物は、３．２ｍｇ／ｋｇ〜およそ２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビターを含む任意の医薬組成物は、４ｍｇ／ｋｇ〜およそ１８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビターを含む任意の医薬組成物は、６ｍｇ／ｋｇ〜およそ１６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビターを含む任意の医薬組成物は、８ｍｇ／ｋｇ〜およそ１４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビターを含む任意の医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ〜およそ１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のターゲット型補体インヒビターを含む任意の医薬組成物は、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１２．０ｍｇ／ｋｇ、１３．０ｍｇ／ｋｇ、１４．０ｍｇ／ｋｇ、１５．０ｍｇ／ｋｇ、１６．０ｍｇ／ｋｇ、１７．０ｍｇ／ｋｇ、１８．０ｍｇ／ｋｇ、１９．０ｍｇ／ｋｇ、または２０．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、３．２ｍｇ／ｋｇ〜およそ２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、４ｍｇ／ｋｇ〜およそ１８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、６ｍｇ／ｋｇ〜およそ１６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、８ｍｇ／ｋｇ〜およそ１４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ〜およそ１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１２．０ｍｇ／ｋｇ、１３．０ｍｇ／ｋｇ、１４．０ｍｇ／ｋｇ、１５．０ｍｇ／ｋｇ、１６．０ｍｇ／ｋｇ、１７．０ｍｇ／ｋｇ、１８．０ｍｇ／ｋｇ、１９．０ｍｇ／ｋｇ、または２０．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、３．２ｍｇ／ｋｇ〜およそ２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、４ｍｇ／ｋｇ〜およそ１８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、６ｍｇ／ｋｇ〜およそ１６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、８ｍｇ／ｋｇ〜およそ１４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ〜およそ１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の特定の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストを含む任意の医薬組成物は、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１２．０ｍｇ／ｋｇ、１３．０ｍｇ／ｋｇ、１４．０ｍｇ／ｋｇ、１５．０ｍｇ／ｋｇ、１６．０ｍｇ／ｋｇ、１７．０ｍｇ／ｋｇ、１８．０ｍｇ／ｋｇ、１９．０ｍｇ／ｋｇ、または２０．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
液状組成物は、一般的に、米食品医薬品局の適正製造基準（ＧＭＰ）の規定のすべてが充分に遵守された実質的に等張性の滅菌液剤として製剤化される。一部の特定の実施形態では、組成物は病原体を含まない。注射用には、医薬組成物は、例えば、生理学的に適合性のあるバッファー（例えば、ハンクスの緩衝塩類溶液、リン酸緩衝整理食塩水またはリンゲル液）中の液状の液剤の形態であり得る。また、本明細書において提供する医薬組成物は、固形形態であり、使用直前に再溶解または再懸濁させるものであり得る。凍結乾燥組成物も想定される。
経口投与のためには、医薬組成物は、例えば、結合剤（例えば、アルファー化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースもしくはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクもしくはシリカ）；崩壊剤（例えば、イモデンプンもしくはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容され得る賦形剤を用いて、慣用的な手段によって調製される錠剤またはカプセル剤の形態が採用され得る。経口投与のための液状調製物には、例えば、液剤、シロップ剤もしくは懸濁剤の形態が採用され得るか、または使用前に水もしくは他の適当なビヒクルで構成するための乾燥製剤として提示され得る。かかる液状調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水添食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アチオンド（ａｔｉｏｎｄ）油、油性エステル、エチルアルコールまたは分別植物油）；および保存料（例えば、安息香酸メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシまたはソルビン酸）などの薬学的に許容され得る添加剤を用いて、慣用的な手段によって調製され得る。また、該調製物に、適宜、緩衝塩類、フレーバー剤、着色剤および甘味剤を含めてもよい。
一部の特定の実施形態では、組成物は、注射に適合された医薬組成物として常套的な手順に従って製剤化される。一部の特定の実施形態では、本明細書において提供する医薬組成物は、静脈内、腹腔内または眼内注射のために製剤化される。典型的には、注射用の組成物は、滅菌された等張性水性バッファー中の液剤である。また、必要な場合は、組成物に、可溶化剤および注射部位での痛みを緩和するための局所麻酔剤（リグノカインなど）を含めてもよい。一般的に、該成分は、別個に、または単位投薬形態で（例えば、密封されたシール容器内（活性薬剤の量を表示したアンプルもしくはサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）など）に凍結乾燥粉末もしくは無水濃縮液として）一緒に混合していずれかで供給される。組成物は、注入によって投与されることが意図される場合、滅菌された医薬等級水または生理食塩水を内包した注入ボトルにて施薬され得る。組成物が注射によって投与される場合、滅菌された注射用水または生理食塩水のアンプルが、諸成分が投与前に混合され得るように提供され得る。
医薬組成物には、さらに、さらなる成分、例えば、保存料、緩衝剤、等張化剤、酸化防止剤および安定剤、非イオン性湿潤剤または清澄化剤、粘度向上剤などが含まれ得る。
液剤における使用のための好適な保存料としては、ポリクオタニウム−１、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、二ナトリウム−ＥＤＴＡ、ソルビン酸、塩化ベンゼトニウム、などが挙げられる。典型的には（必ずしもそうでないが）、かかる保存料は０．００１％〜１．０％（重量基準）のレベルで使用される。
好適なバッファーとしては、ホウ酸、ナトリウムおよびカリウムの重炭酸塩、ナトリウムおよびカリウムのホウ酸塩、ナトリウムおよびカリウムの炭酸塩、酢酸ナトリウム、重リン酸ナトリウムなどが挙げられる（ｐＨが約ｐＨ６〜ｐＨ８、好ましくは約ｐＨ７〜ｐＨ７．５に維持されるのに充分なの量）。
好適な等張化剤としては、デキストラン４０、デキストラン７０、デキストロース、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなどが挙げられる（注射用液剤の塩化ナトリウム相当量が０．９±０．２％の範囲となるように）。
好適な酸化防止剤および安定剤としては、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ亜硫酸ナトリウム、チオ尿素などが挙げられる。好適な湿潤剤および清澄化剤としては、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー２８２およびチロキサポールが挙げられる。好適な粘度向上剤としては、デキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどが挙げられる。
医薬組成物は、本明細書に記載のさまざまな投与様式（例えば、全身性または局所投与など）に適したものであり得る。医薬組成物は、注射用液剤の形態または経口投与に適したの形態であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、単一の投薬単位または反復投薬形態にパッケージングされ得る。一部の特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の任意の投与経路（例えば、経口投与または静脈内注射）により個体、脊椎動物、哺乳動物またはヒトへの投与に適したものである。
肝再生の刺激方法
本明細書において、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法を提供する。本明細書に記載の任意の実施形態において、該方法により、肝再生の刺激および虚血／再灌流障害の低減が、それを必要とする個体において行なわれる。本明細書に記載の任意の実施形態において、該方法により、肝再生の刺激および肝脂肪症の低減が、それを必要とする個体において行なわれる。本明細書に記載の任意の実施形態において、該方法により、肝再生の刺激、虚血／再灌流障害の低減および肝脂肪症の低減が、それを必要とする個体において行なわれる。
本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は脊椎動物である。一部の特定の実施形態では、脊椎動物は哺乳動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物は研究用動物または飼養動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物はヒトである。本明細書に記載の任意の実施形態において、該個体は、部分肝切除術または肝切除を受けたことがある個体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、部分肝切除術または肝切除により、質量基準で、個体の肝臓の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％が除去されている。体積基準で、本明細書に記載の任意の実施形態において、部分肝切除術または肝切除により、個体の肝臓の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％が除去されている。本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は肝移植を受けたことがある個体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、個体はサイズ不足肝移植片を受けたことがある個体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は、中毒性障害、外傷性損傷、小滴性脂肪症または大滴性脂肪症によって引き起こされた肝臓のダメージを有する。本明細書に記載の任意の実施形態において、中毒性障害は、四塩化炭素（ＣＣｌ４）への曝露、細菌内毒素、静脈内薬物もしくは処方薬の使用もしくは誤用、化学療法、過剰なアルコール消費、またはＡ型、Ｂ型もしくはＣ型肝炎ウイルスによる感染に起因するものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、外傷性損傷は、外科的切除または鈍的外傷（ｂｌｕｎｔ ｆｏｒｃｅ ｔｒａｕｍａ）（自動車事故で起こるものなど）に起因するものである。
本明細書で用いる場合、用語「小滴性脂肪症」は、その組織学的特徴が、よりずっと一般的な大滴性脂肪症とは対照的な肝脂肪蓄積の異型形態をいう。その病状は、最初は、いくつかの生化学的および臨床的特徴：妊娠時の急性脂肪肝、ライ症候群、ジャマイカ嘔吐病、バルプロ酸ナトリウム毒性、高用量テトラサイクリン毒性および尿素回路酵素の一部の特定の先天性欠損を共有する病状と関連して報告された。該障害は、最初は、いわゆる「小滴性脂肪の疾患」を構成していると考えられていた。近年、小滴性脂肪症は、多種多様な病状、例えば、アルコール中毒症、いくつかの投薬物毒性、デルタ肝炎ウイルス感染（主に、南アメリカおよび中央アフリカ）、幼児突然死、脂肪酸β酸化の先天性欠損、コレステロールエステル蓄積症、ウォルマン病ならびにアルパーズ症候群で観察されている。小滴性脂肪症の病因に関して多くはわかっていないが、多くの場合、主な欠陥はミトコンドリア病変と思われる（が、ミトコンドリアでの脂肪酸のβ酸化の阻害が最も高頻度に関与している欠陥である）。例えば、Ｍ．Ｌ．Ｈａｕｔｅｋｅｅｔｅら、（１９９０）Ａｃｔａ Ｃｌｉｎ．Ｂｅｌｇ．４５（５）：３１１−３２６を参照のこと。
本明細書で用いる場合、用語「大滴性脂肪症」は、脂肪酸および／またはトリグリセリドの合成および排出の正常なプロセスの障害を反映する細胞内の脂質の異常な貯留をいう。過剰な脂質は、小胞状に蓄積され、これが細胞質と置き換わる。「大滴性脂肪症」では、小胞が、細胞の核を変形させるのに充分に大きくなる。その病状は、軽度の症例では細胞に対して特に有害ではないが、大量に蓄積されると細胞構成要素が破壊されることがあり得、重度の症例では、細胞が破裂することさえあり得る。多くの異なる機構により、細胞を介する正常な脂質の移動が破壊され、脂肪症が引き起こされ得る。該機構は、脂質の過剰供給または脂質分解不全がもたらされるかどうかに基づいて分類され得る。脂質の過剰供給は、数ある病状の中でも、肥満、インスリン抵抗性またはアルコール中毒症に起因し得る。一部の特定の毒素、とりわけ、アルコール、四塩化炭素、アスピリンおよびジフテリア毒素などが、脂質代謝に関与している細胞機構を障害する。また、一部の特定の代謝病は脂質代謝の欠陥を特徴とする。例えば、ゴーシェ病では、リソソームにより糖脂質が分解されず、脂肪症がもたらされる。
本明細書で用いる場合、用語「部分肝切除術」、「外科的切除」または「肝切除」は、典型的には、肝臓の癌または他の重篤な損傷のため肝臓の一部を除去する外科処置をいう。肝切除術または肝切除の程度は、癌性病変の大きさ、数および位置、または他の肝臓損傷の程度に依存する。また、肝機能が依然として充分かどうかにも依存する。外科医により、腫瘍を含む肝臓部分、葉全体、またはさらに大きな肝臓部分が除去され得る。部分肝切除術では、外科医は、典型的には、肝臓の機能が維持されるように縁部の健常な肝臓組織を残す。
本明細書で用いる場合、用語「サイズ不足」肝移植または「ＳＦＳ」肝移植は、ドナー肝臓を２つ以上の断片に分け、その各々を、その後、異なるレシピエントに移植する外科的手法をいう。充分な肝再生は、ＳＦＳ移植を受けた患者（ほとんどは慢性病状態であり、肝再生が始まるには重度に肝機能が障害されている）の回復に必須であり、再生が不充分だと、不充分な胆汁生成、難治性腹水および長期胆汁鬱滞を特徴とし、外科的および敗血性合併症と密接に関連する「サイズ不足移植片症候群」がもたらされることがあり得る。
一部の特定の実施形態では、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法は、該個体においてアシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ）の循環濃度が低減されるのに有効な量の組成物を該個体に投与することを含む。一部の特定の実施形態では、肝再生の刺激および虚血／再灌流障害の低減を、それを必要とする個体において行なう方法は、該個体においてアシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ）の循環濃度が低減されるのに有効な量の組成物を該個体に投与することを含む。一部の特定の実施形態では、肝再生の刺激および肝脂肪症の低減を、それを必要とする個体において行なう方法は、該個体においてアシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ）の循環濃度が低減されるのに有効な量の組成物を該個体に投与することを含む。一部の特定の実施形態では、肝再生の刺激、虚血／再灌流障害の低減および肝脂肪症の低減を、それを必要とする個体において行なう方法は、該個体においてアシル化刺激タンパク質（ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ）の循環濃度が低減されるのに有効な量の組成物を該個体に投与することを含む。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの循環濃度は２μｇ／ｍｌ〜８μｇ／ｍｌまで低減される。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの循環濃度は、該個体から採取された生物学的試料において測定される。一部の特定の実施形態では、生物学的試料は血液、血漿または血清である。一部の特定の実施形態では、生物学的試料は生検によって得られた肝臓試料であり、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの濃度は肝臓ホモジネートにおいて測定される。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの循環濃度は、ウエスタンブロット、イムノブロット、酵素免疫測定法（「ＥＬＩＳＡ」）、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴、化学発光、蛍光偏光、リン光、またはマトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間（「ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ」）質量分析によって測定される。
一部の特定の実施形態では、組成物は、補体インヒビター、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストおよびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストからなる群より選択される。
一部の特定の実施形態では、補体インヒビターはターゲット型補体インヒビターである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２またはその生物学的に活性な断片を含む補体受容体２（ＣＲ２）部分；および補体インヒビター部分を含む融合タンパク質である。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ＣＤ５９、マウスＣｒｒｙ、ヒトＨ因子、およびその生物学的に活性な断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、ＣＲ２部分は、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は完全長ヒトＣＤ５９を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインを含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は、完全マウスＣｒｒｙの細胞外ドメインタンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分はマウスＣｒｒｙタンパク質のＳＣＲ１〜４を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分はマウスＣｒｒｙタンパク質のＳＣＲ１〜５を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分は完全長ヒトＨ因子を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分はヒトＨ因子のＳＣＲ１〜４を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分はヒトＨ因子のＳＣＲ１〜５を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分はヒトＨ因子のＳＣＲ１〜８を含むものである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビター部分はヒトＨ因子のＳＣＲ１〜１８を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメインとを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、完全マウスＣｒｒｙの細胞外ドメインタンパク質とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、マウスＣｒｒｙタンパク質のＳＣＲ１〜４とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、マウスＣｒｒｙタンパク質のＳＣＲ１〜５とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、完全マウスＣｒｒｙの細胞外ドメインタンパク質とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、マウスＣｒｒｙタンパク質のＳＣＲ１〜４とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、マウスＣｒｒｙタンパク質のＳＣＲ１〜５とを含む融合タンパク質を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、完全長ヒトＨ因子とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜４とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜５とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜８とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の２つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜１８とを含む融合タンパク質を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、完全長ヒトＨ因子とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜４とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜５とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜８とを含む融合タンパク質を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＣＲ２の少なくとも最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメインと、ヒトＨ因子のＳＣＲ１〜１８とを含む融合タンパク質を含むものである。
本明細書に記載の任意の実施形態において、ターゲット型補体インヒビターは非ＣＲ２標的化部分を含むものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、およびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇが該受容体に結合するのを妨げる可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇが該受容体に結合するのを妨げる抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、該抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラまたはヒト化型抗体である。一部の特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。
一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇが該受容体に結合するのを妨げる可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片である。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げるＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）の１つ以上の細胞外ドメインを含む可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片である。一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇに特異的に結合してＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）への結合を妨げる本明細書において提供する可溶性ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）断片の１種類以上の任意の組合せを含むものである。
一部の特定の実施形態では、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニストは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）に特異的に結合して該受容体の活性化を抑制する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、該抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラまたはヒト化型抗体である。一部の特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。
一部の特定の実施形態では、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法は、補体の活性化が低減されるのに有効な量の組成物を投与することを含む。一部の特定の実施形態では、組成物は補体インヒビターである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビターはターゲット型補体インヒビターである。一部の特定の実施形態では、補体インヒビターは非ターゲット型補体インヒビターである。
本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は脊椎動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、脊椎動物は哺乳動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物は研究用動物または飼養動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物はヒトである。本明細書に記載の任意の実施形態において、該個体は、部分肝切除術または肝切除を受けたことがある個体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、部分肝切除術または肝切除により、質量基準で、個体の肝臓の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％が除去されている。体積基準で、本明細書に記載の任意の実施形態において、部分肝切除術または肝切除により、個体の肝臓の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％が除去されている。本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は肝移植を受けたことがある個体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、個体はサイズ不足肝移植片を受けたことがある個体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は、中毒性障害、外傷性損傷、小滴性脂肪症または大滴性脂肪症によって引き起こされた肝臓のダメージを有する。本明細書に記載の任意の実施形態において、中毒性障害は、四塩化炭素（ＣＣｌ４）への曝露、細菌内毒素、静脈内薬物もしくは処方薬の使用もしくは誤用、化学療法、過剰なアルコール消費、またはＡ型、Ｂ型もしくはＣ型肝炎ウイルスによる感染に起因するものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、外傷性損傷は、外科的切除または鈍的外傷（自動車事故で起こるものなど）に起因するものである。
一部の特定の実施形態では、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法は、該個体に、補体の古典的経路、レクチン経路または第二経路の１つ以上の活性化が低減または抑制されるのに有効な量の組成物を投与することを含む。一部の特定の実施形態では、組成物はターゲット型補体インヒビターを含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＣｒｒｙ（配列番号：４）と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２（配列番号：１）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質（配列番号：４）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２の生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長のマウスＣｒｒｙタンパク質（配列番号：４）、マウスＣｒｒｙの細胞外ドメイン（配列番号：４のアミノ酸４１〜４０５）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片、マウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜４（配列番号：４のアミノ酸８３〜３３８）を含むマウスＣｒｒｙタンパク質の生物学的に活性な断片、またはマウスＣｒｒｙのＳＣＲ１〜５（配列番号：４のアミノ酸８３〜４００）を含むマウスＣｒｒｙの生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。一部の特定の実施形態では、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、組成物は非ターゲット型補体インヒビターを含むものである。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＣ１インヒビタータンパク質（配列番号：１９）またはマウスＣ１インヒビタータンパク質（配列番号：２０）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＣ１インヒビタータンパク質のホモログもしくはマウスＣ１インヒビタータンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片である。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、補体タンパク質Ｃ３に選択的に結合し、Ｃ３ａおよびＣ３ｂへのＣ３の切断を抑制する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ３抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法は、該個体に、補体第二経路の活性化が低減または抑制されるのに有効な量の組成物を投与することを含む。一部の特定の実施形態では、組成物はターゲット型補体インヒビターを含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＨ因子（配列番号：５）と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜２６２）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３２０）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３８６）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜５０７）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ヒトＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜１１０４）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長マウスＨ因子（配列番号：１０）と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜２６４）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜３２２）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜３８６）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜６２４）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、マウスＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：１０のアミノ酸１９〜１１０９）を含むマウスＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた完全長のヒトＣＲ２（配列番号：１）またはヒトＣＲ２のＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＨ因子（配列番号：５）、ヒトＨ因子の最初の４つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜２６２）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、ヒトＨ因子の最初の５つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３２０）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、ヒトＨ因子の最初の６つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜３８６）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、ヒトＨ因子の最初の８つのＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜５０７）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片、またはヒトＨ因子の最初の１８個のＮ末端ＳＣＲドメイン（配列番号：５のアミノ酸２１〜１１０４）を含むヒトＨ因子の生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、３番目のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン内のＢ因子に選択的に結合し、Ｃ３ｂＢｂ複合体の形成を抑制する。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の特定の実施形態では、該抗体はモノクローナル抗体１３７９である（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−６２３０によって生成）。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体は、Ｂｂ、Ｃ３ａおよびＣ５ａの１種類以上の生成を阻害するものである。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗プロパージン抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体は、Ｂｂ、Ｃ３ａ、Ｃ５ａおよびｓＣ５ｂ−９の１種類以上の生成を阻害するものである。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片は、非補体活性化アイソタイプまたはサブクラスのものである。一部の特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の特定の実施形態では、該抗体はモノクローナル抗体（ｍＡｂ）１６６−３２である（ＡＴＣＣ寄託受託番号ＨＢ−１２４７６によって生成）。
一部の特定の実施形態では、肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激する方法は、該個体において終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成が低減または抑制されるのに有効な量の組成物を該個体に投与することを含む。一部の特定の実施形態では、組成物はターゲット型補体インヒビターである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの生物学的に活性な断片と融合させた完全長ＣＲ２タンパク質（配列番号：１）を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの生物学的に活性な断片、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの生物学的に活性な断片と融合させたＳＣＲ１〜２（配列番号：２）を含むＣＲ２タンパク質の生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、完全長ヒトＣＤ５９タンパク質（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡ（配列番号：８）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢ（配列番号：９）と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。一部の特定の実施形態では、ターゲット型補体インヒビターは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含むＣＤ５９タンパク質の生物学的に活性な断片、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの生物学的に活性な断片、あるいは、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損したマウスＣＤ５９アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含むマウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの生物学的に活性な断片と融合させた非ＣＲ２標的化部分を含むものである。
一部の特定の実施形態では、組成物は非ターゲット型補体インヒビターである。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片である。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、補体タンパク質Ｃ５（Ｃ５）の切断を阻害する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の組織化を阻害する。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、またはヒト化型である。一部の特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はポリクローナルである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はモノクローナルである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はキメラである。一部の特定の実施形態では、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はヒト化型である。一部の特定の実施形態では、ヒト化抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はエクリズマブまたはパキセリズマブである。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヘテロ二量体アポリポタンパク質であるクラスタリンである。一部の特定の実施形態では、クラスタリンは、Ｃ５ｂ−８およびＣ５ｂ−９上での補体タンパク質Ｃ９の組織化を阻害するか、またはＣ５ｂ−７に結合して膜結合を抑制する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトクラスタリンタンパク質（配列番号：１５）またはマウスクラスタリンタンパク質（配列番号：１６）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのクラスタリンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。
一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、終末補体および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、タンパク質ビトロネクチンまたはその生物学的に活性な断片もしくはホモログである。一部の特定の実施形態では、ビトロネクチンＣ５ｂ−７の膜結合をブロックし、Ｃ９の重合を抑制する。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターはヒトビトロネクチンタンパク質（配列番号：１７）またはマウスビトロネクチンタンパク質（配列番号：１８）である。一部の特定の実施形態では、非ターゲット型補体インヒビターは、ヒトもしくはマウスのビトロネクチンタンパク質のホモログまたはその生物学的に活性な断片を含むものである。
本明細書に記載の任意の実施形態において、個体は脊椎動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、脊椎動物は哺乳動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物は研究用動物または飼養動物である。本明細書に記載の任意の実施形態において、哺乳動物はヒトである。
本明細書に記載の任意の実施形態において、非ＣＲ２標的化部分は、補体タンパク質Ｃ３のタンパク質分解断片（例えば、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むものである。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体はポリクローナル抗体である。一部の特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体断片である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体またはその抗原結合断片はヒト化抗体である。本明細書に記載の任意の実施形態において、該抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体である。
本明細書に記載の任意の実施形態において、個体に投与される組成物は、一般的に使用されている任意の投与経路（例えば、本明細書に記載のもの）による個体への投与に適した医薬組成物である。
配列
配列番号：１［補体受容体２（ＣＲ２）の完全アミノ酸配列］：
配列番号：２［ＣＲ２のショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）ドメイン１および２のアミノ酸配列］：
配列番号：３［ヒトＣＤ５９タンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：４［マウス補体受容体１関連遺伝子／タンパク質ｙ（Ｃｒｒｙ）のアミノ酸配列］：
配列番号：５［ヒトＨ因子のアミノ酸配列］：
配列番号：６［ヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇのアミノ酸配列］：
配列番号：７［ヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）のアミノ酸配列］：
配列番号：８［マウスＣＤ５９Ａタンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：９［マウスＣＤ５９Ｂタンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：１０［マウスＨ因子のアミノ酸配列］：
配列番号：１１［ヒト補体受容体１（ＣＲ１）のアミノ酸配列］：
配列番号：１２［ヒト膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）のアミノ酸配列］：
配列番号：１３［ヒト崩壊促進因子（ＤＡＦ／ＣＤ５５）のアミノ酸配列］：
配列番号：１４［マウス崩壊促進因子（ＤＡＦ／ＣＤ５５）のアミノ酸配列］：
配列番号：１５［ヒトクラスタリンタンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：１６［マウスクラスタリンタンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：１７［ヒトビトロネクチンタンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：１８［マウスビトロネクチンタンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：１９［ヒトＣ１インヒビタータンパク質のアミノ酸配列］：
配列番号：２０［マウスＣ１インヒビタータンパク質のアミノ酸配列］：
実施例１ ターゲット型補体インヒビターＣＲ２−Ｃｒｒｙでの補体阻害により、肝温ＩＲＩ、７０％ＰＨｘおよびＰＨｘ＋ＩＲＩのマウスモデルにおいて肝再生が改善される
材料および方法
動物試験：Ｃ３−／−マウスおよび野生型対照はＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から取得した。Ｃ５Ｌ２−／＋ヘテロ接合型のマウスは、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．のＪｏｓｅｐｈ Ｓｏｒｒｅｎｔｉｎｏ（Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）博士のご厚意によりご提供頂いた。Ｃ５Ｌ２−／−および野生型の同腹子は、ＰＣＲ遺伝子型分類によって判定した。マウスはすべてＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドであり、８〜１０週齢で体重が２２．５ｇ〜２５ｇのものを使用した。マウスにはペレット型飼料を水とともに随意に摂取させ、１２時間の明／暗サイクルで維持した。すべての手順で、マウスは、０．０５ｍｌ／１０ｇ体重の「ケタミンカクテル」（ケタミン（１３ｍｇ／ｍｌ）、キシラジン（２．６ｍｇ／ｍｌ）およびアセプロマジン（０．１５ｍｇ／ｍｌ）と滅菌した通常生理食塩水からなる）の腹腔内注射で麻酔した。動物を、以下の３つの異なる処置：（ｉ）肝ＩＲＩ；（ｉｉ）７０％部分肝切除術（ＰＨｘ）；および（ｉｉｉ）ＩＲＩとＰＨｘの組合せのうちの１つに供した。
肝ＩＲＩ：マウスを、既報のとおりに全肝温虚血および再灌流（Ｉ／Ｒ）に供した（４３）。門脈および肝臓動脈を、小動脈瘤クランプにより３０分間閉塞させて肝虚血を誘導した後、６時間の再灌流を行なった。一部の実験では、本発明者らは、肝部分温ＩＲＩモデルも使用した（補足データ参照）。非侵襲的微小血管クランプを血管茎に適用することにより、マウスを肝臓の左側葉および中葉の閉塞に供した（４４）。９０分間の部分温虚血後、クランプを外し、肝臓の再灌流を開始させた。ＩＲＩ試験ではすべて、ＣＲ２−Ｃｒｒｙまたは通常生理食塩水（ＮＳ）は、虚血直後にｉ．ｐ．投与した。マウスを再灌流後の所定の時点で致死させ、血清および肝臓の試料採取を行なった。７０％部分肝切除術（ＰＨｘ）。外科処置は既報のとおりに行ない（４５、４６）、肝臓の中葉および左側葉を切除した。Ｉ／ＲとＰＨｘの組合せ．上記の肝臓Ｉ／ＲとＰＨｘ処置の両方を組み込んだモデルを開発した。門脈と肝臓動脈を３０分間閉塞させ、虚血期間中に７０％ＰＨｘを行なった。外科処置後、マウスを致死させ、肝臓を、ＩＲＩモデルでは再灌流の６時間後、ＰＨｘおよびＩＲＩ＋ＰＨｘモデルでは切除の４８時間後に回収した。また、ＰＨｘおよびＩＲＩ＋ＰＨｘモデルでは血液も大静脈から収集し、致死の時点および６時間目に血清調製を行なった。回収した肝臓は、再生の評価のために重量を測り、一部の肝臓組織を、組織学的評価のために１０％中性（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄ）ホルマリン中に固定するか、または液体窒素中でスナップ凍結して種々の生化学的アッセイのためのホモジネーションまで−８０℃で維持するかのいずれかとした。補体阻害による治療プロトコルでは、ＣＲ２−Ｃｒｒｙまたは通常生理食塩水（ＮＳ）を手術直後に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって投与した。ＣＲ２−Ｃｒｒｙは、腸および脳の既報のＩＲＩ試験での有効な保護に基づき（４７、４８）、０．２５ｍｇの用量、および３分の１の用量０．０８ｍｇで投与した。ＣＲ２−Ｃｒｒｙは既報のとおりに調製した（４７）。ラットで行なわれた既報の試験に基づき（４９）、ヤギ抗マウス−ＩＬ−６抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）（２００μｇ／ｋｇ体重でｉ．ｐ注射）を用いてＩＬ−６遮断を行なった。ＩＬ−６抗体または通常のヤギＩｇＧ（対照）は、手術直後、ＣＲ２−Ｃｒｒｙ投与の直前にｉ．ｐ．注射した。
アシル化刺激タンパク質／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの再構築：オリジナルの手順（５０）の変形法により、アミノ末端のＨｉｓ−タグを用いて組換えヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇを調製し、精製した。精製は、まずＮｉ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムにおいて、続いてＨＰＬＣによって行なった。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの不活化を回避するため、精製のいずれの段階でも変性剤は使用しなかった。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、マウス１匹あたり２００μｌの生理食塩水中、１５μｇまたは５０μｇのいずれかの用量で、ｉ．ｐ．注射によりＰＨｘ直後に投与した。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ調製物の内毒素レベルをＬｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅアッセイ（Ｅ−Ｔｏｘａｔｅキット；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によって解析し、２５μｇ／μｌのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ（使用濃度より１００倍高い濃度）は試験の結果、内毒素陰性であった。マウスＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇとヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは同一でないが、ヒトＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、マウスＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）と相互作用し、マウス細胞を活性化させ、食後のトリグリセリドクリアランスを増強することが、野生型およびＣ３−／−マウスモデルにおいて示されている（２６）。
顕微鏡検査：組織学的検査のため、組織塊を１０％緩衝ホルムアルデヒド溶液中に４８時間入れた後、パラフィンに包埋した。肝臓組織学を、ヘマトキシリン−およびエオシン−染色（Ｈ＆Ｅ染色）した４μｍ切片の光学顕微鏡検査（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＨ−２ Ｏｌｙｍｐｕｓ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）により、盲検的に評価した。各スライド上の１０個の無作為の視野を、壊死について標準的な形態学的基準（構造の欠損、空胞形成、核溶解、好酸球増加症の増大）によって評価し、壊死の程度を、既報のとおりに０〜４段階の重症度スコアをつけることによって半定量的に評価した（５１）（なし，０；軽度，１；中等度，２；重度，３；および完全な壊死性の肝臓崩壊，４）。このスコアを使用し、ＩＲＩおよび／またはＰＨｘ後の肝臓損傷を異なる試験群間で比較した。脂肪症を、既報のとおりにオイルレッドＯ染色によって評価した（５２）。肝臓試料中のＣ３沈着を、既報のとおりに、抗マウスＣ３ｄ−ＦＩＴＣ抗体（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）を用いた免疫蛍光によって調べた（１８）。
生化学的および免疫学的アッセイ：アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）および総ビリルビンの血清レベルを、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）製の解析キットを製造業者の使用説明書に従って用いて測定した。ＴＮＦａおよびＩＬ−６の血清レベルを、ＥＬＩＳＡによりｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）製のキットを用いて測定した。肝臓のＴＮＦａとＩＬ−６のレベルの測定のため、凍結肝臓試料を、抽出バッファー（５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．２，１５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ，Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００およびプロテアーゼインヒビターカクテル）中でホモジナイズした。ホモジネートを１０，０００ｇおよび４℃で８分間遠心分離し、上清み中のＴＮＦａとＩＬ−６のレベルを、ＥＬＩＳＡによりｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）製のキットを用いて測定した。肝臓実質への好中球浸潤の定量的評価のため、肝臓ミエロペルオキシダーゼ含有量を、ＨｂｔマウスＭＰＯ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｈｙｃｕｌｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｕｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）製）を製造業者の使用説明書に従って用いて評価した。肝臓試料を調製し、試料の肝臓トリグリセリド含有量を、トリグリセリド試験キットを製造業者（Ｓｔａｎｂｉｏ，Ｂｏｅｒｎｅ，ＴＸ）による説明のとおりに用いて測定した。肝臓試料中の還元形態のグルタチオン（ＧＳＨ）およびマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）レベルを、市販のキット（ＯＸＩＳＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ）により既報のとおりに分光測光的に測定した（４３）。脂質の過酸化生成物の計算値濃度をタンパク質濃度によって標準化し、ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質で示した。
肝臓再生の評価：肝再生の３種類の独立したマーカーを使用した。肝臓の再構築重量は、肝臓総重量に対する再生肝質量の割合で示し、既報のとおりに計算した（５３）。肝増殖の評価のため、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）をｉ．ｐ．注射し（５０ｍｇ／ｋｇ）、２時間後に肝臓を回収した。肝臓切片中のＢｒｄＵ取込みを、既報のとおりに免疫組織化学的染色によって測定した（５４）。陽性細胞および陰性細胞を、１０個の無作為に選択した視野において光学顕微鏡検査（４０倍の対物レンズを使用）により計数した。定常的に増殖している腸陰窩上皮をＢｒｄＵ取込みおよび染色の陽性対照として供した。Ｈ＆Ｅ染色切片において、以下のとおりの有糸分裂の既報の基準：細胞膜が完全にない、核のわずかな好酸性染色、核紡錘マトリックスの形成、核小体がない、および細胞の大きさのわずかな増大を使用し、有糸分裂指数を求めた（５５）。有糸分裂指数は、陽性細胞／１０００個の肝細胞／ＨＰＦの割合で示した。解析はすべて、実験群に対して盲検的な検査員によって行なわれた。
病的状態の評価：病的状態の臨床スコアを、ＰＨｘの４８時間後に既報のとおりにして評価した（５６）。各マウスを姿度、被覆および活性について、０〜３（０，普通；１，わずかに影響；２，中等度の影響；および３，重度の影響）で等級化した。スコアを併合し、０〜９段階の最終スコアを得た。
肝臓ＡＴＰ含有量の測定：およそ５０ｍｇの凍結肝臓組織を、プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を加えた５００μｌの氷冷組織溶解バッファー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中でホモジナイズした。ホモジネートを１０，０００×ｇで８分間、４℃にて遠心分離し、１．５％トリクロロ酢酸を用いて上清み中のＡＴＰを抽出した。次いで、上清みをＴｒｉｓ−酢酸バッファー（ｐＨ７．８５）中で１：１５０に希釈し、１００μｌの希釈試料に、１００μｌの再構成したルシフェリン−ルシフェラーゼ溶液（Ｅｎｌｉｔｅｎ（登録商標），Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を添加した。ルシフェラーゼ活性を直ちにルミノメトリーにより評価した。試料中のＡＴＰ含有量を、同時の標準曲線との比較により測定した。また、タンパク質濃度も測定し、ＡＴＰ含有量の計算値濃度をタンパク質濃度によって標準化し、ｍｍｏｌ／ｍｇタンパク質で示した。
ＧＰＸ１およびＳＴＡＴ３およびＡｋｔの活性化のウエスタンブロット解析：肝臓試料を氷上にて、プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を含有する溶解バッファー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中でホモジナイズした。ホモジネートを超音波処理し、１０，０００×ｇ、４℃で遠心分離し、細胞残屑を除去した。タンパク質濃度を測定した。等量のタンパク質を等容量の試料バッファー中に含む試料を、４％〜１５％のＴｒｉｓ−ＨＣｌポリアクリルアミド勾配のゲル中で分離させ、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜（ＢＩＯ−ＲＡＤ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に移した。非特異的結合部位を、５％の脱脂粉乳を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水を用いて室温で１時間ブロックした。次いで、膜を、ＧＰＸ１、Ａｋｔ、ホスホ−Ａｋｔ、ＳＴＡＴ３、ホスホ−ＳＴＡＴ３に対する抗体（すべて、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）製）またはＧＡＰＤＨに対する抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）とともに、０．１％のＴｗｅｅｎ ２０を含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中でインキュベートした。膜を洗浄し、ホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートさせた二次抗体ともにインキュベートした。免疫反応性タンパク質を化学発光の増強によって検出した。
統計解析：データを平均±ＳＤで示す。群間の有意差を、連続変数および多数の群に対してボンフェローニ補正を用いた分散解析（ＡＮＯＶＡ）によって求めた。２つの群間の正規分布した連続変数の比較には、スチューデントのＴ−検定を使用した。生存率の試験のため、カプラン−マイヤーのログランク解析を行なった。差はすべて、ｐ値が＜０．０５の場合、統計学的に有意とみなした。
結果
肝虚血再灌流障害：マウス肝臓ＩＲＩにおける補体の役割を、Ｃ３−／−マウスを使用し、異なる用量の補体インヒビターＣＲ２−Ｃｒｒｙ（０．０８ｍｇまたは０．２５ｍｇのいずれか）で処置した野生型マウスにおいて調べた。３０分間の肝虚血および６時間または２４時間いずれかの再灌流の後、生存率、肝臓の損傷および局所炎症を評価した。マウスはすべて、再灌流後の観察期間中、生存していた。血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを肝機能の尺度として測定した。ＡＬＴレベルは、Ｉ／Ｒを行なったすべての群で、ベースラインまたは偽手術マウスと比べて有意に上昇していた（図１Ａ）。しかしながら、ＡＬＴレベルは、再灌流後、Ｉ／Ｒ後の野生型マウスでは、Ｃ３−／−マウスまたはいずれかの用量のインヒビターで処置したマウスと比べて有意に高かった。０．０８ｍｇ用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙは、再灌流後６時間目において０．２５ｍｇ用量よりも保護性が低かったが、再灌流後２４時間目のＡＬＴレベルは有意に異ならなかった。また、損傷の組織学的評価も、Ｃ３−／−マウスおよび補体阻害マウスにおいて、Ｉ／Ｒ後６時間目と２４時間目の両方で有意に低く（図１Ｂ〜Ｃ）、どちらの解析時点でも高用量阻害の方が良好は保護がもたらされた。好中球漸増に対する補体の活性化の効果を評価するため、肝臓ホモジネートのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）レベルを測定した。ＭＰＯレベルは、再灌流後のすべての試料で、ベースラインおよび偽手術対照と比べて上昇していたが、Ｃ３欠損マウスおよび補体阻害マウスのＭＰＯレベルは、再灌流後６時間目と２４時間目の両方において、対照野生型マウスと比べて有意に低かった（図１Ｄ）。しかしながら、ＭＰＯレベルは、すべての群で、再灌流後の６時間目と比べて２４時間目の方が高く、これは、再灌流後の６時間目と比べて２４時間目にＡＬＴおよび損傷スコアが低いことと相関していなかった。また、炎症サイトカインＴＮＦａとＩＬ−６のレベルも、Ｃ３欠損マウスおよび補体阻害マウスにおいて、再灌流後の両方の時点で野生型対照と比べて有意に低下しており、再灌流後の６時間目と比べて２４時間目では有意に低いレベルであった（図１Ｅ〜Ｆ）。Ｉ／Ｒ後の６時間目と２４時間目での損傷および回復マーカーの総合比較により、Ｃ３欠損および高用量での補体阻害では、低用量での補体阻害と比べて、回復および修復が遅延されることが示された。臨床的意義のため、本発明者らは、肝臓の外科処置で多くの場合に使用される臨床処置であるプリングル法と類似した全肝虚血のモデルを使用した。それにもかかわらず、このデータは、補体の欠損および阻害により、腸静脈の鬱血（補体が活性化され得、内毒素血症が引き起こされ得る病状）のリスクがない部分肝虚血のモデルにおいても、ＩＲＩが防御されることも示す（図１２）。
部分肝切除術と肝再生：先に公表されたデータ（１４）と大きく整合して、このデータから、血清ＡＬＴ、ビリルビン、巣状肝臓壊死および死亡率の増大によって測定されるように、Ｃ３欠損により、７０％ＰＨｘ後に損傷の増大がもたらされることが示された。また、ＢｒｄＵ取込みの有意な低減、有糸分裂指数スコアの減少および肝臓重量の回復の低減により、Ｃ３−／−マウスにおける再生応答障害が示された（図１３）。また、組織学的検査およびトリグリセリド含有量によって評価されるように、ＰＨｘ後のＣ３−／−マウスでは、野生型マウスと比べて肝臓脂肪症の有意な増大も観察された。肝臓再生は、肝臓脂質の一過性蓄積、およびＰＨｘ後の野生型マウスにおいて発症する軽度の大滴性脂肪症と関連している。しかしながら、Ｃ３欠損は、中等度から重度の大滴性および小滴性脂肪症の発症と関連していた（図２）。これは、特に、Ｃ３ａが肝再生に重要な役割を果たしていることが示されており（１４）、その分解形態Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ（アシル化刺激タンパク質またはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇとしても知られている）が脂質代謝に役割を果たしていることに鑑みると、補体、脂肪症および再生の間に機構的関連性がある可能性を示唆する。ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、トリグリセリド合成の増大および細胞内脂肪分解の低減によって脂肪細胞内への脂肪蓄積を増大させる（１９）。
Ｃ３が欠損している（したがって、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇを生成することができない）マウスではトリグリセリドクリアランスが遅延されたため（２０〜２２）、本発明者らは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇをＰＨｘ後のＣ３−／−マウスに投与し、肝再生と脂肪症に対するＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの効果を評価した。１５μｇ用量の組換えＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇでＣ３−／−マウスに再構築させると、脂肪症および肝臓の損傷が有意に低減され、増殖応答（ＢｒｄＵ取込みおよび肝臓重量の回復によって測定）が完全に回復され、生存率が有意に改善された（図２および３）。ＴＮＦａおよびＩＬ−６は、ＮＦ−κＢおよびＳＴＡＴ３の活性化に対するその効果によって肝再生のプライミング事象に関与しているサイトカインである。先のデータ（１４）を確認すると、Ｃ３欠損では、ＰＨｘ後のＳＴＡＴ３活性化は有意に低かった（図３Ｆ）。しかしながら、１５μｇのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇでＣ３−／−マウスに再構築させると、ＳＴＡＴ３活性化が野生型レベルまで回復し、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇによって肝再生がモジュレートされ得る推定経路が確認された。
ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの同定されている唯一の受容体はＣ５Ｌ２であり（２３〜２６）、Ｃ５Ｌ２は、トリグリセリドの合成とクリアランスに重要な役割を果たしている（２５、２６）。肝再生におけるＣ５Ｌ２の役割および再生におけるＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇとＣ５Ｌ２間の推定される関連性を調べるため、本発明者らは、ＰＨｘ後の肝臓の損傷と再生に対するＣ５Ｌ２欠損の効果を調べた。Ｃ５Ｌ２−／−マウスは、ＰＨｘに対してＣ３−／−マウスと同様に応答し、野生型マウスと比べて有意に増大した肝臓の損傷、増大した死亡率および障害された肝再生を示した（図３）。また、Ｃ５Ｌ２−／−マウスでは、ＰＨｘ後に中等度から重度の肝脂肪症も示された（図２）。また、Ｃ３−／−マウスと同様、ＰＨｘ後のＣ５Ｌ２−／−マウスでは、野生型マウスおよびＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ再構築マウスと比べて、ＳＴＡＴ３活性化は有意に少なかった。本発明者らは、さらに、ＰＨｘ後のＣ５Ｌ２−／−マウスにＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇを投与する効果を調べた。ＰＨｘ後における１５μｇのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇでのＣ５Ｌ２−／−マウスの処置は、このマウスにおいて、損傷または再生のいずれのパラメータにも効果はなく（図３Ａ〜Ｅ）、ＳＴＡＴ３シグナル伝達にも影響はなかった（図３Ｆ）。総合すると、このデータは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇがＳＴＡＴ３活性化のＣ５Ｌ２モジュレーションを伴う機構によって再生をモジュレートするという仮説と整合する。それにもかかわらず、既報の試験では、ＳＴＡＴ３活性化と肝再生におけるＣ５ａとＣ５ａＲのシグナル伝達の枢要な役割が示されており（１４）、重要なことに、肝臓切片におけるＣ３沈着によって示されるように、補体の活性化は、ＰＨｘ後のＣ５Ｌ２−／−マウスと野生型マウスとで類似していた（図１４）。ＰＨｘ後に高用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ（５０μｇ）でＣ３−／−マウスに再構築させると、予測に反して再生応答は回復せず、損傷は防御されなかった（図３）。なぜ低用量と高用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇで、ＰＨｘ後のＣ３−／−マウスにおける肝再生と損傷に対して反対の効果がもたらされるのかは不明であった。しかしながら、補体の活性化生成物であるＣ３ａとＣ５ａは、肝再生のプライミング段階において、ＴＮＦａおよびＩＬ−６の発現に対する効果によって枢要な役割を果たしていることが示されているものの、これらのサイトカインは肝細胞の再生と損傷に二元的役割を果たしているのかもしれず、これらの炎症サイトカインの発現の増大および長期化は肝臓の損傷と関連している（２７〜２９）。
したがって、本発明者らは、ＴＮＦａおよびＩＬ−６の発現レベルならびにＰＨｘ後の肝臓の好中球浸潤（ＭＰＯ活性）に対する高用量と低用量（対比）のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの効果を調べた。ＰＨｘ後６時間目、ＴＮＦａとＩＬ−６のレベルは、高用量または低用量いずれのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇで処置したＣ３−／−マウスにおいても、生理食塩水処置Ｃ３−／−マウスと比べて有意に上昇していた（図４）。しかしながら、どちらのサイトカインのレベルも、１５μｇのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇで処置したマウスと比べて、５０μｇのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇで処置したマウスで有意に高かった。また、高用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、ＰＨｘ後の好中球浸潤（ＭＰＯ活性によって測定）の有意な増大と相関していた。したがって、高用量のＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇは、ＰＨｘ後の有意に高い炎症性負荷と関連している。また、本発明者らは、野生型マウスでは、ＰＨｘ後に低用量または高用量のいずれのＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇで処置しても損傷が有意に増大し、増殖応答が障害され、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの用量が高いほど、損傷と再生に対してより著しい効果を有すると判定した（データ表示せず）。総合すると、上記のデータは、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇはＰＨｘ後の肝再生の枢要な因子であるが、ＰＨｘ誘導性の補体活性化のためＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇのレベルが通常内因的に生成されるレベルよりも高くなると、肝臓の炎症および損傷の増大ならびに再生応答障害がもたらされることを示す。このデータにより、ＰＨｘ後の最適な肝再生には補体の活性化とＣ３ａ／ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇの生成に閾値が存在することが示唆される。
補体阻害と肝再生：上記の結果を、より臨床的に考えるため、本発明者らは、ＰＨｘ後の肝臓の損傷と再生に対する異なる用量の補体インヒビターの効果を野生型マウスにおいて調べた。この試験のため、本発明者らは、０．０８ｍｇまたは０．２５ｍｇの用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙを使用し、同用量を上記のＩＲＩ試験において使用した。Ｃ３−／−マウスでの結果と同様（図１３に表示）、ＰＨｘ後に０．２５ｍｇ用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置した野生型マウスでは、生理食塩水処置対照と比べて有意に増大した肝臓の損傷および増殖応答障害が示された（図５）。また、この補体阻害マウスでは対照処置マウスと比べて高い死亡率が認められた（それぞれ、４０％に対して０％，７日間の期間にわたってモニタリング）。肝再生における補体活性化の重要な役割を考慮すると予測され得るように、ＣＲ２−Ｃｒｒｙの用量が低いほど、高用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙ処置と比べて損傷は少なく、ＢｒｄＵ取込みは増大していた。
しかしながら、予測に反して、低用量での補体阻害では、生理食塩水処置対照と比べて有意に少ない肝臓損傷および有意に向上した増殖応答がもたらされた（図５）。さらなるデータにより、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置すると、ＰＨｘ後の多数の時点で再生の改善と加速がもたらされることが示された。ＰＨｘ後７日までに、標準重量までほぼ完全に肝臓が回復し、生理食塩水で処置したマウスと低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウス間に有意差は認められなかった（図１５Ａ〜Ｂ）。０．０８ｍｇのＣＲ２−Ｃｒｒｙまたは生理食塩水で処置したマウスでは死亡は認められなかったが、ＡＬＴ上昇および組織学スコアに基づくと、ＰＨｘ後の対照マウスでは、一部、軽微な損傷が認められた。また、対照マウスでは低用量Ｃｒｒｙ処置マウスと比べて、高い病的状態スコアが認められた（図１５Ｃ）。ＡＬＴレベルは、ＰＨｘ後７２時間までに正常まで低下した（図１５Ｄ）。ＡＬＴレベルは、ＰＨｘ後２４時間目および４８時間目において、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、生理食塩水処置対照と比べて有意に低かった。
肝臓切片の抗Ｃ３ｄ免疫蛍光顕微鏡検査を使用し、異なる用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙの効果を補体活性化レベルおよび肝臓の損傷／再生と相関させた。ＰＨｘ後４８時間目、野生型マウスから単離した肝臓において、Ｃ３ｄは、主に肝細胞膜と洞様毛細血管内皮に沈着していた。野生型マウスの試料では、０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスの試料と比べて、Ｃ３ｄが、より強い強度で沈着しており、より広く分布していた。０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスの試料では、検出可能なＣ３ｄ沈着は認められなかった（図６）。
総合すると、このデータにより、ＰＨｘ後の肝再生における補体依存性損傷と補体依存性増殖応答間のバランスの概念が裏付けられる。したがって、臨床場面では、切除またはサイズ不足移植術後の肝再生障害はＩＲＩ後の過剰な補体活性化および炎症の帰結であり得ると考えられる。
虚血再灌流障害と部分肝切除術の組合せモデルにおける補体阻害：肝臓Ｉ／Ｒによって有意なレベルの補体活性化と補体依存性損傷がもたらされるため（図１参照）、本発明者らは、ＩＲＩと７０％ＰＨｘの両方を組み込んだモデル（プリングル法での肝広範囲切除に使用される処置を模倣するモデル）における補体阻害の効果を調べた。野生型またはＣ３−／−マウスを３０分間の肝虚血に供し、この期間中に７０％ＰＨｘを行なった。野生型マウスを０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙまたは０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙのいずれかで、手術直後に処置した。Ｃ３−／−マウスでは、外科処置後４８時間生存していたのは２０％だけであったのに比べて、野生型マウスの生存率は９０％であった（図７Ａ）。野生型マウスと比べ、生存Ｃ３−／−マウスでは、肝臓の損傷および増殖応答障害が有意に増大していた（図７Ｂ〜Ｅ）。注目すべきことに、組合せ外科処置を行なった野生型マウスは、肝臓の損傷および肝細胞増殖に関して、７０％ＰＨｘ単独を行なった野生型マウスよりも不良な転帰を有した（図３参照）。また、野生型マウスを、ＩＲＩに対して高度に防御的な用量０．２５ｍｇのＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置すると、組合せモデルでは有意に不良な転帰がもたらされ、外科処置後４８時間目では、対照動物と比べて肝臓の損傷が増大し、ＢｒｄＵ取込みが減少し、肝臓重量が減った（図７）。対照的に、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置では死亡はもたらされず、他のすべての群（重要なことには、野生型対照を含む）と比べた場合、肝臓の損傷および肝再生に関して有意に改善された転帰がもたらされた。肝臓の損傷レベルは、ＭＰＯ活性によって測定される好中球浸潤と相関していた（図７Ｆ）。また、本発明者らは、ＴＮＦａとＩＬ−６のレベルに対する補体阻害の効果も調べた。再灌流後の６時間目において、この組合せモデルでは、血清ＴＮＦａレベルは肝臓の損傷と正に相関していた。他方、血清ＩＬ−６レベルは損傷と負に相関し、０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、他のすべての群と比べて有意に高いＩＬ−６レベルがみられた（図８Ａ〜Ｂ）。これは、再生応答におけるＩＬ−６の重要な役割と整合し、ＴＮＦａレベルは、０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙ処置マウスでは他の試験群と比べて低かったが、偽手術マウスと比較すると、なお有意に高かった。
興味深いことに、再灌流後の４８時間目ではＩＬ−６の状況が逆転されており、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスの血清ＩＬ−６レベルは、Ｃ３−／−マウスまたは高用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスよりも有意に低かった。血清ＴＮＦａレベルは、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、他のすべての群と比べて有意に低いままであった（図８Ｃ〜Ｄ）。ＴＮＦａおよびＩＬ−６は、再生応答のプライミング期に重要であると考えられており、これらのサイトカインの肝臓発現は、それぞれ、ＰＨｘ後、１〜２時間目頃および３〜６時間目頃にピークになる。したがって、本発明者らはまた、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後３時間目のＴＮＦａとＩＬ−６の肝臓レベルも調べた。野生型マウスと比べ、Ｃ３欠損および高用量での補体阻害では、肝臓において、ＴＮＦａおよびＩＬ−６のレベルの有意な低減がもたらされた（図８Ｅ〜Ｆ）。対照的に、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙは、野生型を含む他のすべての群と比べて、両サイトカインの有意な肝臓レベルの増大と相関していた。したがって、低用量での補体阻害および肝再生の増強は、これらのサイトカインの肝臓での生成が早期に増大すること、および他のすべての群と比べてＰＨｘ後４８時間目までに該炎症サイトカインの全身レベルが減衰することと関連している。
ＩＲＩおよびＰＨｘ後のシグナル伝達経路、ＡＴＰレベルおよび酸化的損傷に対する補体欠損および補体阻害の効果。ＣＲ２−Ｃｒｒｙ処置マウスにおける肝臓の保護および再生の潜在的機構をさらに解明するため、さらなる試験を行なった。ＳＴＡＴ３活性化の調節に加え、ＩＬ−６はまた、ＰＨｘ後の早期再生応答に重要な役割を果たしていること、および再生時のＧ１期の進行を調節していることが示されている経路であるＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ生存経路を活性化させる（３０）。したがって、本発明者らは、高レベルの早期ＩＬ−６発現が、ＳＴＡＴ３およびＡｋｔの活性化の増大と相関している低用量での補体阻害と関連しているかどうかを調べた。ＩＲＩ＋ＰＨｘ後のＳＴＡＴ３およびＡｋｔのリン酸化を、補体欠損マウスおよび補体阻害マウスから単離した肝臓において調べた。Ｃ３欠損および高用量での補体阻害では、生理食塩水処置マウスおよび低用量での補体阻害で処置したマウスと比べて、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後のＳＴＡＴ３活性化が顕著に低減された（図９Ａ）。さらに、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後３時間目および６時間目のどちらにおいても、生理食塩水対照と比べてＳＴＡＴ３活性化が認められた。また、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置は、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後６時間目のＡｋｔリン酸化の増大とも関連していた（図９Ａ）。
Ｉ／Ｒ後、また広範切除後にも肝臓でミトコンドリア機能不全および酸化的損傷が起こる。また、細胞内ＡＴＰ蓄積は、エネルギーを供給し、サイクリンＤ−１／ｃｄｋ複合体の転写後活性化を調節することにより、肝再生に重要な役割を果たしていることが示されている（３１〜３３）。肝臓保護および肝再生に対する補体阻害の効果が肝臓ＡＴＰレベルと関連しているかどうかを調べるため、すべての群の肝臓試料中のＡＴＰ濃度をＩＲＩ＋ＰＨｘ後の種々の時点で測定した。ＩＲＩ＋ＰＨｘ後６時間目、すべての群で肝臓ＡＴＰの著しい低減が認められた（図９Ｂ）。Ｃ３−／−マウスおよび高用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスではＡＴＰレベルは低いままであったが、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、ＡＴＰ蓄積は、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後４８時間までにほぼ術前レベルまで回復した。
反応性酸素種の生成および脂質の過酸化は、Ｉ／Ｒおよび極度の肝切除後の肝損傷の主要な機構と考えられている。ＩＲＩ＋ＰＨｘ後の肝臓の酸化的損傷に対する補体阻害の効果を、肝臓のグルタチオン（ＧＳＨ）、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ１）およびマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のレベルを測定することにより調べた。ＩＲＩ＋ＰＨｘ後の生理食塩水処置動物では、ＧＳＨ（酸化防止剤）のレベル低下およびＭＤＡ（脂質の過酸化の指標）のレベル増大が認められ、これは、該臓器が酸化的ストレス下にあったことを示す（図１０Ａ、Ｂ）。また、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後の生理食塩水処置動物では、フリーラジカルスカベンジャーＧＰＸ１のレベルも低下していた（図１０Ｃ）。対照的に、有意なＧＳＨとＧＰＸ１のレベル増大およびＭＤＡのレベル低下によって示されるように、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後に０．０８ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙでマウスを処置すると酸化的ストレスが防御された。
ＩＲＩ＋ＰＨｘ後のＩＬ−６遮断および補体阻害：最後に、低用量での補体阻害によりＩＲＩ＋ＰＨｘ後のＩＬ−６レベルが増大したため、およびＩＬ−６シグナル伝達は肝再生のプライミング期に必須であるため、本発明者らは、低用量での補体阻害の肝臓保護効果および再生促進（ｐｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ）効果とＩＬ−６発現との間に関連性があるかどうかを明らかにしようとした。抗ＩＬ−６抗体の投与によるＩＬ−６遮断とともにＣＲ２−Ｃｒｒｙ処置を行なうと、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後３時間目にＩＬ−６の肝臓レベルが約６５％低下し、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後６時間目にＩＬ−６の血清レベルが約５０％低下した（図１１Ａ〜Ｂ）。さらに、ＩＬ−６遮断により、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後のリン酸化ＳＴＡＴ３のレベルが有意に低下し、これは、ＩＬ−６のレベル増大とＳＴＡＴ３活性化との直接的な関係を示す（図１１Ｃ）。ＩＲＩ＋ＰＨｘに供し、低用量ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、ＩＬ−６遮断により、肝臓の損傷（血清ＡＬＴによってアッセイ）の有意な増大および再生応答（ＢｒｄＵ取込みによってアッセイ）の有意な障害がもたらされた（図１１Ｄ〜Ｅ）。また、抗ＩＬ−６抗体およびＣＲ２−Ｃｒｒｙを受けた１０匹のマウスのうち４匹だけが、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後４８時間より長く生存した（データ表示せず）。したがって、ＩＲＩ＋ＰＨｘ後の低用量での補体阻害の保護効果は、補体インヒビター処置をＩＬ−６遮断と組み合わせると失われた。総合すると、このような結果は、低用量（高用量ではない）での補体阻害の肝臓保護効果は、ＩＬ−６発現およびその後の再生応答のプライミングにおける補体の役割によるものであることを示唆する。
実施例２ ターゲット型補体インヒビターＣＲ２−ＣＤ５９での補体阻害により、肝温ＩＲＩ、７０％ＰＨｘ、９０％ＰＨｘ、エタノール誘導性肝臓損傷、およびエタノール誘導性損傷＋７０％ＰＨｘのマウスモデルにおいて肝再生が改善される
材料および方法
動物試験：８〜１０週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス、Ｃ３欠損（Ｃ３−／−）およびＣＤ５９欠損（ＣＤ５９−／−）Ｃ５７ＢＬ／６マウスをこの試験に使用した。マウスにペレット型飼料と水を随意に摂取させ、１２時間の明／暗サイクルで維持した。マウスを、０．０５ｍｌ／１０ｇ体重の「ケタミンカクテル」（ケタミン（１３ｍｇ／ｍｌ）、キシラジン（２．６ｍｇ／ｍｌ）およびアセプロマジン（０．１５ｍｇ／ｍｌ）と滅菌した通常生理食塩水からなる）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって麻酔した。動物を、以下の４つの異なる処置：（ｉ）肝臓ＩＲＩ；（ｉｉ）７０％部分肝切除術（ＰＨｘ）；（ｉｉｉ）９０％ＰＨｘ；および（ｉｖ）エタノール誘導性損傷後に７０％ＰＨｘのうちの１つに供した。
肝ＩＲＩ：マウスを、既報のとおりに全肝温虚血および再灌流（Ｉ／Ｒ）に供した。簡単には、マウスを麻酔し、小創垂直切開により側腹切開を行なった。肝臓の外科的露出後、門脈および肝臓動脈を小動脈瘤クランプにより３０分間閉塞させて肝虚血を誘導した後、６時間の再灌流を行なった。７０％部分肝切除術（ＰＨｘ）。外科処置は、既報のとおりに行なった。簡単には、正中切開により側腹切開を行ない、肝臓の中葉および左側葉を切除した。９０％ＰＨｘ。９０パーセント肝切除術は、既報のとおりに行なった。該処置は、一重結紮を用いて左側葉と中葉を除去し（７０％ＰＨ）、その後、右側葉（２０％）を切除し、尾状葉のみを残して行なった。エタノール誘導性損傷後に７０％ＰＨｘ。野生型、Ｂ因子−／−、Ｃ３−／−、およびＣＤ５９−／−マウスに、以下のような漸増エタノール濃度のエタノール含有飼料：（１）１％（ｖ／ｖ）を２日間；（２）２％（ｖ／ｖ）を２日間；（３）４％（ｖ／ｖ）エタノールを７日間；および最後に（４）５％（ｖ／ｖ）エタノールをさらに４週間を自由に摂取させた。５週間と４日後、野生型、Ｂ因子−／−、Ｃ３−／−、およびＣＤ５９−／−エタノール給餌動物を７０％ＰＨｘに供した。
外科処置後、マウスを異なる時点で致死させ、肝臓試料と血液試料を収集した。回収した肝臓は、再生の評価のために重量を測り、一部の肝臓組織を、組織学的評価のために１０％中性ホルマリン中に固定するか、または液体窒素中でスナップ凍結して種々の生化学的アッセイのためのホモジネーションまで−８０℃で維持するかのいずれかとした。補体阻害による治療プロトコルでは、ＣＲ２−Ｃｒｒｙ、ＣＲ２−ＣＤ５９または通常生理食塩水（ＮＳ）を手術直後にｉ．ｐ．投与した。
補体インヒビターでの治療プロトコル：臨床的意義のため、および限定的または一時的な補体阻害が異なる効果を有し得るという事実のため、本発明者らはまた、補体インヒビターＣＲ２−Ｃｒｒｙ（これは、補体をＣ３レベルで阻害する）、およびＣＲ２−ＣＤ５９（これは、終末補体をＭＡＣ形成レベルで阻害する）で処置した野生型マウスにおいてパラレル実験を行なった。インヒビターは既報のとおりに調製した。再生に対する補体の欠損および阻害の効果を、以下に記載するようにして解析した。インヒビター（ＣＲ２−ＣｒｒｙとＣＲ２−ＣＤ５９）または通常生理食塩水（ＮＳ）は手術直後に投与した。インヒビターの用量は以下に記載のとおりに投与した。
結果
肝臓のＩＲＩと再生における終末補体の役割：終末補体経路の活性化により補体タンパク質Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８および（Ｃ９）ｎの逐次組織化がもたらされて細胞溶解性の細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）が形成され、これが直接的な細胞溶解を引き起こし、また、溶解レベル以下で形成された場合は、炎症促進性分子を放出するように細胞を刺激する。これまでに、肝臓のＩＲＩと再生におけるＭＡＣの役割に関する報告はない。宿主細胞膜における終末補体経路とＭＡＣ形成の制御はＣＤ５９の活性によってもたらされる。ＣＤ５９は、ＭＡＣ（Ｃ５ｂ−９）の組織化の際にＣ８とＣ９に結合し、Ｃ９のアンフォールディングと膜挿入を妨げることにより機能を発揮する。
この実験では、ＩＲＩおよび肝再生におけるＭＡＣの役割を、ＣＤ５９−／−マウスを用いて調べた。ＣＤ５９が存在しないことにより、補体系の終末部分の制御不能な活性化がもたらされる。３０分間の虚血および６時間の再灌流に供したＣＤ５９−／−マウスでは、野生型動物と比べてＡＬＴレベルと肝臓損傷の有意な増大が示された。ＣＤ５９−／−動物を０．４ｍｇのＣＲ２−ＣＤ５９で処置すると、該損傷は有意に低減された（図１６〜１７）。ＣＲ２−ＣＤ５９処置野生型マウスのＡＬＴレベルは、ＮＳ対照動物と比べて有意に低かった（ｐ＜０．０１）。
さらに、７０％ＰＨｘに供したＣＤ５９−／−マウスでは、血清ＡＬＴレベルの有意な増大（図１８）、広範な壊死、炎症性の細胞浸潤の増大（図１９）、ＢｒｄＵ取込みの全廃（図２０）および有意に高い死亡率（図２１）を特徴とする重度の肝再生障害が示された。ＣＤ５９発現が再構成されるのに充分な用量である０．２ｍｇのＣＲ２−ＣＤ５９で処置すると、血清ＡＬＴレベル（図１８）、肝臓の病態（図１９）、ＢｒｄＵ取込み（図２０）および全体的な生存率（図２１）によって示されるように、有意に肝臓損傷が低減され、再生が改善された。このデータにより、終末経路、特にＭＡＣが肝再生とＩＲＩに重要な役割を果たしていること、および過剰な補体活性化は肝臓における再生プロセスを有意に障害することが示唆される。
肝再生に対する効果は、補体経路内の種々の時点で選択的に阻害された：補体欠損マウスを用いて得られたデータは、補体が一時的に阻害された試験で得られる結果と常に整合するとは限らない。本発明者らは、次に、補体の活性化の低減の効果を、補体インヒビターＣＲ２−Ｃｒｒｙ（これは、補体をＣ３レベルで阻害する）、および補体インヒビターＣＲ２−ＣＤ５９（これは、終末補体を阻害してＭＡＣの組織化をさまたげる）で処置した野生型マウスにおいて調べた。本発明者らは、まず、肝臓ＩＲＩについて、０．２５ｍｇ用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙ、および０．２ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９で処置した野生型マウスを用いてパラレル実験を行なった。動物を、３０分間の全肝温虚血および６時間の再灌流に供した後、生存率、肝臓の損傷および局所炎症を評価した。ＣＲ２−ＣｒｒｙまたはＣＲ２−ＣＤ５９での処置を用いた補体阻害野生型マウスのＡＬＴレベルは、ＮＳ対照と比べて有意に低かった（図２２）。ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置した群とＣＲ２−ＣＤ５９で処置した群間に有意差は観察されなかった。
再灌流後の先天免疫エフェクター細胞による虚血性組織の浸潤は充分報告されている。補体が肝臓における好中球漸増に、どの程度の役割を果たしているのかを評価するため、本発明者らは、肝臓ホモジネート中のＭＰＯレベルを定量した。ＭＰＯレベルは、６時間目、すべての再灌流後試料において、ベースラインおよび偽手術対照と比べて上昇していた。ＣＲ２−ＣｒｒｙおよびＣＲ２−ＣＤ５９での補体阻害はどちらも、ＮＳ対照と比べて有意なＭＰＯの減少と関連しており（それぞれ、ｐ＜０．０５）、ＮＳ対照のＭＰＯレベルが３４．８±６．５ｎｇ／ｍｇであったのに対して、それぞれ、０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置した動物では１６．８±４．０ｎｇ／ｍｇ、および０．２ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９で処置した動物では７．９±２．８ｎｇ／ｍｇであった。
再生試験では、７０％ＰＨｘ直後にｉ．ｐ．投与した０．２５ｍｇ用量で処置したマウス ＣＲ２−Ｃｒｒｙでは、重度の肝臓ダメージが発生し（図２３〜２４）、肝再生障害が示された（図２４）。しかしながら、驚いたことに、ＰＨｘ直後にｉ．ｐ．注射によって投与した０．０８ｍｇ用量のＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置したマウスでは、肝臓ダメージの発生は有意に少なく（図２３〜２４）、野生型対照と比べてＢｒｄＵ取込みの著しい増大が示された（図２５）。さらに興味深いことに、０．４５ｍｇおよび０．１５ｍｇのＣＲ２−ＣＤ５９で処置したマウスでは、ともに肝臓損傷の有意な低減および肝再生の劇的な改善が示された（図２３〜２５）。
９０％ＰＨｘ後の野生型マウスにおける急性肝不全のＣＲ２−ＣＤ５９での予防：肝広範囲切除は、多くの場合、肝不全および死に至り、肝臓腫瘍を有する患者に対する治療的肝切除の大きな制限となっている。９０％ＰＨｘのマウスモデルを使用し、本発明者らは、終末補体阻害が転帰を改善する能力を試験した。マウスを９０％ＰＨｘに供し、次いで、外科処置直後にｉ．ｐ．注射によって、０．１ｍｇ ＣＲ２−ＣＤ５９、０．０８ｍｇ ＣＲ２−ＣｒｒｙまたはＮＳで処置した。ＮＳ対照マウスでは、９０％ＰＨｘにより早期に、重度の肝臓の損傷および機能不全（高い血清ＡＬＴレベルによって示される）（図２６）、肝臓実質の広範な壊死、重度の小滴性脂肪症（図２７）、ＢｒｄＵ取込みの全廃（図２８）、ならびに３日以内の１００％の死亡率（図２９）が誘導された。ＣＲ２−ＣＤ５９処置により、肝臓損傷の生化学的および組織学的徴候の低減ならびにＢｒｄＵ取込みの増大および生存率の有意な改善がもたらされた（図２６〜２９）。驚いたことに、ＣＲ２−Ｃｒｒｙでの処置では治療的影響はなく、損傷プロフィールは、ＮＳ処置動物と有意に異ならなかった。
補体の活性化の悪化は、アルコール性肝臓疾患（ＡＬＤ）モデルにおいて肝臓の損傷に関与している：補体系はアルコール性肝臓疾患（ＡＬＤ）において活性化されることがわかっているが、アルコール性肝臓の損傷の病因におけるその役割はまだはっきりしていない。ここで、本発明者らは、アルコール性肝臓の損傷における補体の活性化の役割を調べた。野生型マウスおよびＢ因子（ＦＢ−／−）、Ｃ３（Ｃ３−／−）またはＣＤ５９（ＣＤ５９−／−）が欠損したマウスにエタノール含有飼料を摂取させた。マウスにはエタノール含有飼料を自由に摂取させ、エタノールの濃度を以下のように増大し：１％（ｖ／ｖ）エタノールを２日間、２％（ｖ／ｖ）エタノールを２日間、４％（ｖ／ｖ）エタノールを７日間、および最後に５％（ｖ／ｖ）エタノールをさらに４週間、各々は対照飼料とペアフィードとし、補体再構築およびターゲット補体阻害の効果を調べた。エタノール給餌野生型マウスは、軽度の小滴性および大滴性の脂質蓄積ならびにトリグリセリド含有量の増大、血清ＡＬＴレベルの増大を特徴とする肝脂肪症を発症した（図３０〜３１）。エタノール飼料下のＦＢ−／−およびＣ３−／−マウスは、脂肪症を発症せず、わずかなＡＬＴレベルの増大が示されたにすぎなかった。対照的に、エタノール含有飼料下のＣＤ５９−／−マウスは、野生型マウスと比べて、より重大な肝脂肪症を発症し、肝臓トリグリセリドレベルが増大し、より重度の肝臓の損傷が発生した（図３０〜３１）。
第２の組の実験では、肝再生に対するターゲット型補体インヒビターの効果を、同じエタノール含有飼料を摂取させた野生型マウス、および７０％ＰＨｘを行なった対照動物において調べた。０．０８μｇ用量のターゲット型補体インヒビターＣＲ２−Ｃｒｒｙを、手術直後にｉ．ｐ．注射によって投与し、ヘマトキシリン−およびエオシン−染色によって肝再生を評価した。肝再生は、エタノール給餌野生型マウスの脂肪症肝臓では、通常の飼料を与えたペアフィードマウスと比べて有意に抑制された。興味深いことに、ターゲット補体阻害により、対照マウスと比べて、生存率の改善および増殖応答の有意な増強がもたらされた（図３２）。
考察
中毒性障害またはＰＨｘ後の肝再生を制限する機構の特定は、サイズ不足肝移植術および肝広範囲切除に対する制限を解放する鍵と考えられる。肝広範囲切除およびサイズ不足肝移植術は、虚血再灌流障害（ＩＲＩ）および肝再生の抑制に対するレムナント／移植片の易罹患性が増大するため、臨床的課題を有する。補体は両方のプロセスに関与している。肝温ＩＲＩのマウスモデルにおいて、本発明者らは、ＣＤ５９欠損により、野生型マウスと比べて広範な損傷がもたらされることが示した。ＣＲ２−ＣＤ５９で処置すると、ＣＤ５９−／−マウスおよびＩＲＩ後の野生型マウスでは、ＡＬＴレベルおよび組織学スコアの減少によって示されるように、肝臓の損傷が有意に低減される。
野生型マウスは７０％肝切除術に耐えられ得、切除から完全に回復するのに充分な肝再生が行なわれ得る。対照的に、７０％ＰＨｘ後のＣＤ５９−／−マウスでは、血清ＡＬＴレベルの有意な増大、肝臓実質の広範な壊死、炎症性の細胞浸潤の増大、ＢｒｄＵ取込みの全廃、およびＣ９沈着の有意な増大によって示されるように、肝再生は重度に障害された。ＣＲ２−ＣＤ５９で再構築させると、７０％ＰＨｘ後のＣＤ５９−／−マウスにおいて、有意に実質のダメージが低減され、肝臓再生応答が増大し、生存率が改善された。ＣＲ２−Ｃｒｒｙ処置およびＣＲ２−ＣＤ５９処置では、ともに、野生型マウスにおいてＩＲＩ処置によって誘導された損傷が有意に低減された。Ｃ３欠損マウスと同様、７０％ＰＨｘ後にｉ．ｐ．注射によって０．２５ｍｇ ＣＲ２−Ｃｒｒｙで処置した野生型マウスでは、肝再生障害が示された。しかしながら、低い方の用量０．０８ｍｇのＣＲ２−Ｃｒｒｙでは、７０％ＰＨｘ後の野生型マウスの肝再生はＮＳ対照と比べて有意に改善された。しかしながら、驚いたことに、７０％ＰＨｘ後にｉ．ｐ．注射によって０．４５ｍｇおよび０．１５ｍｇのＣＲ２−ＣＤ５９で処置した野生型マウスでは、ともに、肝臓損傷の有意な低減および肝再生の劇的な改善が示された。
最後に、９０％ＰＨｘ後、野生型マウスは、小滴性脂質蓄積、トリグリセリドレベルの増大、血清ＡＬＴレベルの顕著な増大、および肝臓レムナントにおける重度の肝再生障害を特徴とする重度の肝脂肪症を発症した。対照的に、７０％ＰＨｘ後、野生型マウスは軽度の大滴性脂肪症を発症し、ＡＬＴレベルの増大はわずかにすぎなかった。興味深いことに、終末補体（すなわち、ＭＡＣ組織化）をＣＲ２−ＣＤ５９で遮断すると、９０％ＰＨｘ後の野生型マウスにおいて生存率が有意に増大し、肝再生が回復した。実際、ＣＲ２−ＣＤ５９処置野生型マウスから外科処置後、最初の数時間に回収した肝臓レムナントでは、再生促進サイトカインＴＮＦαおよびＩＬ−６の発現の増大、ならびにＳＴＡＴ３活性化の増大が示された。
このデータは、広範肝切除術と関連する細胞死促進機構のモジュレーションにおける終末補体およびＭＡＣ組織化の中心的な役割を強調するものであり、ターゲット型補体インヒビターＣＲ２−ＣＤ５９での終末補体およびＭＡＣ組織化の遮断は、広範に損傷された肝臓において再生を促進させるための新規なストラテジーであることが示唆される。
実施例３ 毒性学試験およびヒト等価用量の決定
本明細書において例示した医薬組成物をマウスに、およそ３．２ｍｇ／ｋｇ〜およそ２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与した。
偽手術マウスと種々の度合のＰＨｘおよび中毒性障害後のマウスの両方における無毒性量（有意な有害効果がもたらされない最高用量レベル）を決定するため、マウスにおいて、さらなる毒物学的試験を行なう。したがって、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群をＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）または他の市販の供給元から取得する。マウスにペレット型飼料を摂取させ、水を自由に摂取させ、１２時間の明／暗サイクルで維持する。マウスは、８〜１０週齢で体重が２２．５ｇ〜２５ｇのものを使用する。マウスを適切な数（すなわち、ｎ＝５〜１０匹またはそれ以上）の群に分け、上記のようにＩＲＩ、７０％ＰＨｘまたはＩＲＩ＋７０％ＰＨｘに供し、次いで、漸増用量のターゲット型補体インヒビター（例えば、ＣＲ２−ＣＤ５９、ＣＲ２−Ｃｒｒｙ、もしくはＣＲ２−ＦＨ）、ＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇアンタゴニスト、またはＡＳＰ／Ｃ３ａｄｅｓＡｒｇ受容体（Ｃ５Ｌ２）アンタゴニスト（所望の経路（例えば、腹腔内注射）によって投与）で、外科処置の直後に処置する。適切な時間後、マウスを失血させ、毒性を評価し、有意な有害効果（血清ＡＬＴ、ＭＰＯおよびＢｒｄＵ取込みを測定することにより評価される肝再生障害および肝臓損傷の増大によって規定される）がもたらされない最高用量レベルを決定する。該データから、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）をマウスについて決定する。次いで、体表面積に基づいて、マウスＮＯＡＥＬをヒト等価用量に変換する。例えば、Ｒｉｃｋ Ｎｇ，ＤＲＵＧＳ：ＦＲＯＭ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ ＴＯ ＡＰＰＲＯＶＡＬ（第２版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ）の第１５８〜１６１頁を参照のこと。計算値のヒトＮＯＡＥＬを、適切な用量を決定するための起点として、ヒトで行なう毒性試験および有効性試験に使用する。
引用した参考文献
前述の発明は、明瞭な理解の目的のための実例および一例としてある程度詳細に記載しているが、当業者には、一定の軽微な変更および修正が行なわれることが自明であろう。したがって、本記載および実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきでない。

Claims (18)

  1. 肝再生を必要とする個体において肝再生を刺激するための組成物であって、該組成物は、補体受容体２（ＣＲ２）部分および補体インヒビター部分を含む融合タンパク質を含み、ここで、該補体インヒビター部分は、ＣＤ５９、Ｃｒｒｙ、または、ＣＤ５９もしくはＣｒｒｙの細胞外ドメインを含むその生物学的に活性な断片を含み、そして、ここで、該融合タンパク質は、該個体において終末補体の活性化および細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成が低減されるのに有効な量で存在する、組成物。
  2. 前記ＣＲ２部分が、配列番号：２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ＣＲ２部分が、配列番号：１のアミノ酸２３〜２７１を含む、請求項２に記載の組成物。
  4. 前記ＣＲ２部分が、配列番号：１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記補体インヒビター部分が、ヒトＣＤ５９（配列番号：３）、マウスＣＤ５９アイソフォームＡ（配列番号：８）、マウスＣＤ５９アイソフォームＢ（配列番号：９）、マウスＣｒｒｙ（配列番号：４）、および、ＣＤ５９もしくはＣｒｒｙの細胞外ドメインを含むこれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記補体インヒビター部分が、ヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）、完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）、または完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記補体インヒビター部分が、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ｓｅｒ−９６）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＡの細胞外ドメイン（配列番号：８のアミノ酸２４〜９６）、あるいはＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０４）が欠損した完全長マウスＣＤ５９タンパク質アイソフォームＢの細胞外ドメイン（配列番号：９のアミノ酸２４〜１０４）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記補体インヒビター部分が、完全長ヒトＣＤ５９（配列番号：３）、完全長マウスＣＤ５９アイソフォームＡ（配列番号：８）、完全長マウスＣＤ５９アイソフォームＢ（配列番号：９）、または、マウスＣｒｒｙ（配列番号：４）を含む、請求項６または７に記載の組成物。
  9. 前記補体インヒビター部分が、ＧＰＩアンカーが欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含む、請求項２に記載の組成物。
  10. 前記補体インヒビター部分が、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含む、請求項２に記載の組成物。
  11. 前記補体インヒビター部分が、ＧＰＩアンカーおよび／または結合対象アミノ酸（すなわち、Ａｓｎ−１０２）が欠損したヒトＣＤ５９の細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸２６〜１０２）を含む、請求項３に記載の組成物。
  12. 前記個体が部分肝切除術を受けたことがある個体である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
  13. 前記個体が肝移植片を受けたことがある個体である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
  14. 前記肝移植片がサイズ不足肝移植片である、請求項１３に記載の組成物。
  15. 前記個体が肝臓の生体ドナーである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
  16. 前記個体が、前記組成物の投与前に、虚血再灌流障害、または、アルコール性肝臓疾患を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
  17. 前記個体が哺乳動物である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
  18. 前記哺乳動物がヒトである、請求項１７に記載の組成物。
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