JP5804378B2 - クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター - Google Patents
クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター Download PDFInfo
- Publication number
- JP5804378B2 JP5804378B2 JP2011553749A JP2011553749A JP5804378B2 JP 5804378 B2 JP5804378 B2 JP 5804378B2 JP 2011553749 A JP2011553749 A JP 2011553749A JP 2011553749 A JP2011553749 A JP 2011553749A JP 5804378 B2 JP5804378 B2 JP 5804378B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- promoter
- yeast
- transformant
- kmgal1
- polynucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
- C12Y207/01006—Galactokinase (2.7.1.6)
Description
本発明の高発現プロモーターは、(A)配列番号1、2若しくは3に示されるポリヌクレオチドからなるか、又は、(B)これらのポリヌクレオチドの変異体であって、かつ、クルイベロマイセス・マルシアヌス及びそれ以外の少なくとも1種以上の酵母においてプロモーター活性を有するポリヌクレオチドからなることを特徴とする。配列番号1に示されるポリヌクレオチドは、クルイベロマイセス・マルシアヌス由来のGAL1プロモーターであり、配列番号2に示されるポリヌクレオチドは、クルイベロマイセス・マルシアヌス由来のGAL10プロモーターであり、配列番号3に示されるポリヌクレオチドは、クルイベロマイセス・マルシアヌス由来のGAL7プロモーターである。かかる本発明の高発現プロモーターは、クルイベロマイセス・マルシアヌスだけでなく、他の酵母においても、目的遺伝子を高発現させることができる。
(b)配列番号1、2又は3に示されるポリヌクレオチドにおいて、1若しくは2個以上のヌクレオチドが欠失、置換若しくは付加されたポリヌクレオチドからなり、かつ、クルイベロマイセス・マルシアヌス及びそれ以外の少なくとも1種以上の酵母においてプロモーター活性を有するポリヌクレオチド:
(c)配列番号1、2又は3に示されるポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、クルイベロマイセス・マルシアヌス及びそれ以外の少なくとも1種以上の酵母においてプロモーター活性を有するポリヌクレオチド:
本発明の組換えポリヌクレオチドは、本発明の高発現プロモーターと、その制御下に作動可能に配置された目的遺伝子とを含むことを特徴とする。本発明の組換えポリヌクレオチドは、本発明の高発現プロモーターの活性化を通じて、その目的遺伝子がコードする目的遺伝子産物(タンパク質やペプチド)をガラクトース誘導的に高発現させることができる。
本発明の組換えポリヌクレオチドを含むベクターは、上記の本発明の組換えポリヌクレオチドを含むことを特徴とする。本発明のベクターは、宿主酵母において、本発明の組換えポリヌクレオチドを保持したり、目的遺伝子を発現させるために酵母を形質転換したりすることができる。本発明におけるベクターは、直鎖状であってもよいし、環状であってもよい。宿主酵母がクルイベロマイセス・マルシアヌスである場合は、直鎖状のベクターであっても染色体上において高頻度で組換えを生じさせることができ、その結果、形質転換することができる。また、環状のベクターの場合、さらに自己複製配列を含んでいれば、該ベクターは酵母細胞内にて自律複製し、酵母細胞内で保持され、その結果、形質転換することができる。
本発明の形質転換体は、本発明の組換えポリヌクレオチド、又は、本発明のベクターを、酵母に導入して得られることを特徴とする。本発明の形質転換体は、その細胞内で目的遺伝子をガラクトース誘導的に高発現することができ、本発明の形質転換体を培養することによって、目的遺伝子産物を効率的に生成させることができる。
本発明の目的遺伝子の高発現方法は、本発明の形質転換体を培養する工程を含むことを特徴とする。「本発明の形質転換体を培養する方法」としては、その形質転換体が増殖し得る限り特に制限されないが、例えばその形質転換体が増殖可能な温度条件下(例えば25〜33℃、好ましくは28〜30℃)、YPD培地(1質量%酵母エキス、2質量%ポリペプトン、2質量%グルコース)にて、適当な時間(例えば1〜10日間、好ましくは1〜5日間、より好ましくは1〜3日間)、振盪培養する方法を好適に例示することができる。
本発明の目的遺伝子産物の製造方法は、本発明の形質転換体を培養する工程と、培養して得られた形質転換体から目的遺伝子産物を回収する工程とを含むことを特徴とする。かかる製造方法によれば、目的遺伝子産物を高効率で製造することができる。「培養して得られた形質転換体から目的遺伝子産物を回収する」方法としては、目的遺伝子産物を回収し得る限り特に制限されず、クロマトグラフィーを利用した方法、タグを利用した方法などの公知の方法を例示することができる。
本発明者らは、クルイベロマイセス・マルシアヌス DMKU3-1042株のゲノム配列をGenome Sequencer FLX System(ロシュ・ダイアグノスティクス社)でドラフトゲノム配列を取得した。しかし、1回目のシーケンスでは、GALの部分配列しか得られなかった。そこで、さらに高性能なGenome Sequencer FLX Titanium(ロシュ・ダイアグノスティクス社)を用いることによって、ようやくドラフトゲノム配列を取得することができた。本発明者らは、クルイベロマイセス・マルシアヌスからガラクトース誘導性プロモーターを取得するために、サッカロマイセス・セレビシエ由来の公知のGAL1、GAL10、GAL7などの配列情報に基づいて、クルイベロマイセス・マルシアヌスのドラフトゲノム配列の検索を行った。その結果、クルイベロマイセス・マルシアヌスのドラフトゲノム配列中に、サッカロマイセス・セレビシエ由来のGALプロモーターと比較的高い同一性を有する配列を見い出し、その配列を単離した。単離したこの配列のプロモーター構造を図1に示す。図1に示されるように、GAL1プロモーターとは逆向きに、GAL10プロモーター、GAL7プロモーターが配置されており、GAL1プロモーターとGAL10プロモーターの間にGAL4結合部位が見い出された。なお、クルイベロマイセス・マルシアヌスにおけるこれらのGAL1プロモーター(KmGAL1プロモーター)、GAL10プロモーター(KmGAL10プロモーター)、GAL7プロモーター(KmGAL1プロモーター)の配置は、サッカロマイセス・セレビシエのこれらのプロモーターの既知の配置と同様であった。なお、今回単離した配列中のGAL1様プロモーターを用いた後述の実施例2や実施例3の実験により、今回単離したクルイベロマイセス・マルシアヌス由来のGALプロモーター群は、GALプロモーターであることが示された。
KmGAL1プロモーターの部位を特定するために、以下のような発現解析試験をおこなった。
KmGAL1プロモーターが、クルイベロマイセス・マルシアヌスにおいて目的遺伝子をどの程度発現させることができるのか、及び、クルイベロマイセス・マルシアヌス以外の酵母において目的遺伝子をどの程度発現させることができるのかを調べるために、以下のような発現解析試験をおこなった。
(1)KmGAL1pの下流に、分泌型ルシフェラーゼCLuc遺伝子を作動可能に連結したKmGAL1p−CLucをクルイベロマイセス・マルシアヌスに導入して得られた形質転換体(図4の右端のKmGAL1p)。
(2)サッカロマイセス・セレビシエ由来のGAL10プロモーターの下流に、分泌型ルシフェラーゼCLuc遺伝子を作動可能に連結したScGAL10p−CLucをクルイベロマイセス・マルシアヌスに導入して得られた形質転換体(図4の右から2番目のScGAL10p)。
(3)KmGAL1p−CLucをサッカロマイセス・セレビシエに導入して得られた形質転換体(図4の右から3番目のKmGAL1p)。
(4)ScGAL10p−CLucをサッカロマイセス・セレビシエに導入して得られた形質転換体(図4の左端のScGAL10p)。
Claims (8)
- 配列番号1におけるヌクレオチド番号816〜1590に示されるヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドからなる高発現プロモーターであって、
前記高発現プロモーターの下流に、分泌型ルシフェラーゼCLuc遺伝子を作動可能に連結した組換えポリヌクレオチドをクルイベロマイセス・マルシアヌスに導入して得られた形質転換体を、YPGal液体培地(1質量%酵母エキス、2質量%ポリペプトン、2質量%ガラクトース)にて28℃、48時間振盪培養したときの培養液中の分泌型ルシフェラーゼCLucの相対発現量(RLU/OD・μl)が、25000以上であり、かつ、
前記高発現プロモーターの下流に、分泌型ルシフェラーゼCLuc遺伝子を作動可能に連結した組換えポリヌクレオチドをサッカロマイセス・セレビシエに導入して得られた形質転換体を、YPGal液体培地(1質量%酵母エキス、2質量%ポリペプトン、2質量%ガラクトース)にて28℃、48時間振盪培養したときの培養液中の分泌型ルシフェラーゼCLucの相対発現量(RLU/OD・μl)が、1500以上である高発現プロモーター。 - 請求項1に記載の高発現プロモーターと、その制御下に作動可能に配置された目的遺伝子とを含む組換えポリヌクレオチド。
- 請求項2に記載の組換えポリヌクレオチドを含むベクター。
- 請求項2に記載の組換えポリヌクレオチド又は請求項3に記載のベクターを、酵母に導入して得られることを特徴とする形質転換体。
- 酵母が、サッカロマイセス属酵母及びクルイベロマイセス属酵母からなる群から選択されるいずれかの酵母であることを特徴とする請求項4に記載の形質転換体。
- 酵母が、サッカロマイセス・セレビシエ及びクルイベロマイセス・マルシアヌスから選択されるいずれかの酵母であることを特徴とする請求項4に記載の形質転換体。
- 請求項4〜6のいずれかに記載の形質転換体を培養する工程を含むことを特徴とする目的遺伝子の高発現方法。
- 請求項4〜6のいずれかに記載の形質転換体を培養する工程と、培養して得られた形質転換体から目的遺伝子産物を回収する工程とを含むことを特徴とする目的遺伝子産物の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011553749A JP5804378B2 (ja) | 2010-02-09 | 2011-02-07 | クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010026682 | 2010-02-09 | ||
JP2010026682 | 2010-02-09 | ||
PCT/JP2011/000663 WO2011099263A1 (ja) | 2010-02-09 | 2011-02-07 | クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター |
JP2011553749A JP5804378B2 (ja) | 2010-02-09 | 2011-02-07 | クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2011099263A1 JPWO2011099263A1 (ja) | 2013-06-13 |
JP5804378B2 true JP5804378B2 (ja) | 2015-11-04 |
Family
ID=44367551
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011553749A Expired - Fee Related JP5804378B2 (ja) | 2010-02-09 | 2011-02-07 | クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8846343B2 (ja) |
EP (1) | EP2546340B1 (ja) |
JP (1) | JP5804378B2 (ja) |
CN (1) | CN102782130B (ja) |
DK (1) | DK2546340T3 (ja) |
WO (1) | WO2011099263A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201113419D0 (en) * | 2011-08-04 | 2011-09-21 | Fujifilm Diosynth Biotechnologies Uk Ltd | Yeast vector |
JP5878396B2 (ja) * | 2012-03-02 | 2016-03-08 | トヨタ自動車株式会社 | 新規プロモーター及びその利用 |
WO2016010827A1 (en) | 2014-07-14 | 2016-01-21 | Librede Inc. | Production of cannabinoids in yeast |
CN108486105B (zh) * | 2018-02-22 | 2021-10-26 | 复旦大学 | 一种马克斯克鲁维酵母启动子及其制备方法与应用 |
CN108410870B (zh) * | 2018-02-22 | 2021-11-19 | 复旦大学 | 马克斯克鲁维酵母启动子、分泌信号肽及其制备与应用 |
CN117568349B (zh) * | 2024-01-15 | 2024-04-30 | 上海昌进生物科技有限公司 | 真菌来源启动子元件p22及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62253384A (ja) * | 1986-02-28 | 1987-11-05 | メルク エンド カムパニ− インコ−ポレ−テツド | 酵母における組換え蛋白の制御可能な発現 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19943383B4 (de) * | 1999-09-10 | 2006-03-16 | Tad Pharma Gmbh | Regulatorische Sequenzen und Expressionskassetten für Hefen |
DE10101962B4 (de) * | 2001-01-17 | 2006-07-27 | Tad Pharma Gmbh | DNA-Sequenz mit regulatorischen Bereichen zur Expression von Proteinen |
US6596513B2 (en) * | 2001-07-24 | 2003-07-22 | University Of Victoria Innovation And Development Corporation | Kluyveromyces lactis maltase/maltose permease bi-directional promoter and use thereof |
PL1626979T3 (pl) * | 2003-05-02 | 2012-09-28 | Cargill Inc | Genetycznie modyfikowane gatunki drożdży i sposoby fermentacji z użyciem genetycznie modyfikowanych drożdży |
JP4765520B2 (ja) | 2005-09-29 | 2011-09-07 | 株式会社豊田中央研究所 | ガラクトース誘導系を有する形質転換体及びその利用 |
JP2008029239A (ja) | 2006-07-27 | 2008-02-14 | Gekkeikan Sake Co Ltd | N36結合ペプチドの製造方法 |
JP2008237024A (ja) | 2007-03-23 | 2008-10-09 | Toyota Central R&D Labs Inc | ガラクトース誘導系を有する形質転換体及びその利用 |
-
2011
- 2011-02-07 JP JP2011553749A patent/JP5804378B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-02-07 CN CN201180008591.1A patent/CN102782130B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-02-07 EP EP11742013.3A patent/EP2546340B1/en not_active Not-in-force
- 2011-02-07 WO PCT/JP2011/000663 patent/WO2011099263A1/ja active Application Filing
- 2011-02-07 US US13/577,607 patent/US8846343B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-02-07 DK DK11742013.3T patent/DK2546340T3/en active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62253384A (ja) * | 1986-02-28 | 1987-11-05 | メルク エンド カムパニ− インコ−ポレ−テツド | 酵母における組換え蛋白の制御可能な発現 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
JPN6011011485; DNA Data Bank of Japan. [online]. , 2005 * |
JPN6011011499; PARK, Sun Mee et al.: 'Galactose-inducible expression systems in Candida maltosa using promoters of newly-isolated GAL1 and' Yeast. Vol. 13, 1997, p. 21-29 * |
JPN6011011501; WICKES, Brian L. and EDMAN Jeffrey C.: 'The Cryptococcus neoformans GAL7 gene and its use as an inducible promoter.' Mol. Microbiol. Vol. 16, No. 6, 1995, p. 1099-1109 * |
JPN6011011502; NONKLANG, Sanom et al.: 'High-temperature ethanol fermentation and transformation with linear DNA in the thermotolerant yeast' Appl. Environ. Microbiol. Vol. 74, No. 24, 2008, p. 7514-7521 * |
JPN6011011503; WEBSTER, Thomas D. and DICKSON, Robert C.: 'Nucleotide sequence of the galactose gene cluster of Kluyveromyces lactis.' Nucleic Acids Res. Vol. 16, No. 16, 1988, p. 8192-8194 * |
JPN6011011504; SOUCIET, Jean-Luc et al.: 'Genomic exploration of the hemiascomycetous yeasts: 1. A set of yeast species for molecular evolutio' FEBS Lett. Vol. 487, 2000, p. 3-12 * |
JPN6011011505; LLORENTE, Bertrand et al.: 'Genomic exploration of the hemiascomycetous yeasts: 12. Kluyveromyces marxianus var. marxianus.' FEBS Lett. Vol. 487, 2000, p. 71-75 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2546340A4 (en) | 2013-09-11 |
US8846343B2 (en) | 2014-09-30 |
CN102782130B (zh) | 2015-04-01 |
JPWO2011099263A1 (ja) | 2013-06-13 |
EP2546340A1 (en) | 2013-01-16 |
EP2546340B1 (en) | 2016-04-20 |
WO2011099263A1 (ja) | 2011-08-18 |
US20130210107A1 (en) | 2013-08-15 |
CN102782130A (zh) | 2012-11-14 |
DK2546340T3 (en) | 2016-06-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6429006B1 (en) | Yeast strains for the production of lactic acid transformed with a gene coding for lactic acid dehydrogenase | |
JP5804378B2 (ja) | クルイベロマイセス・マルシアヌス由来の高発現プロモーター | |
US20170088845A1 (en) | Vectors and methods for fungal genome engineering by crispr-cas9 | |
RU2711983C2 (ru) | Микроорганизм, продуцирующий молочную кислоту, и способ продуцирования молочной кислоты с его использованием | |
CN103517916B (zh) | 具有粘度改变表型的丝状真菌 | |
CN101432429B (zh) | 产生芳香分子的酵母表达系统 | |
JP2019519242A (ja) | 細菌ヘモグロビンライブラリーを生成するための方法およびその使用 | |
KR20160098324A (ko) | 정밀 화학물질의 개선된 생산을 위한 재조합 미생물 | |
JP2021520835A (ja) | 有機酸耐性酵母由来新規プロモーター及びこれを用いた目的遺伝子の発現方法 | |
JP2019519241A (ja) | グルコース透過酵素ライブラリーを生成するための方法およびその使用 | |
CN114085784B (zh) | 一种高表达细胞色素p450的重组酵母及其应用 | |
WO2011099243A1 (ja) | サッカロマイセス・セレビシエ由来の特定のプロモーターを、クルイベロマイセス・マルシアヌスにおいて用いる目的遺伝子の発現方法 | |
JP6343754B2 (ja) | 耐酸耐塩性付与方法と耐酸耐塩性酵母を用いた有用物質生産 | |
JP2022078003A (ja) | 耐酸性酵母遺伝子ベースの合成プロモーター | |
Verstrepen et al. | Controlled expression of homologous genes by genomic promoter replacement in the yeast Saccharomyces cerevisiae | |
CN112111415B (zh) | 一种pyrG筛选标记循环利用的方法及应用 | |
US20240110167A1 (en) | Enzymes with ruvc domains | |
US9404116B2 (en) | Method of construction of recombinant organisms using multiple genes co-integration | |
Yuzbashev et al. | Repetitive genomic sequences as a substrate for homologous integration in the Rhizopus oryzae genome | |
JP4315629B2 (ja) | 新規プロモーター | |
Luhe et al. | Engineering of small sized DNAs by error-prone multiply-primed rolling circle amplification for introduction of random point mutations | |
JPWO2003085111A1 (ja) | 新規プロモーター | |
CN116286743A (zh) | 一种中温核酸内切酶突变蛋白及其制备方法与应用 | |
CN112143728A (zh) | 一种圆红冬孢酵母rna启动子及其应用 | |
JP2018078883A (ja) | 新規高温耐性付与遺伝子とその利用法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131213 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150305 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150424 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150806 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150820 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5804378 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |