JP5681855B2 - プロテインキナーゼの阻害剤 - Google Patents
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Description
本発明は、サイクリン依存性キナーゼの阻害剤及びその治療的適用に関する。さらに、本発明は、サイクリン依存性キナーゼの有効量の少なくとも1つの阻害剤の投与を含む、いずれかの種類の疼痛、炎症性障害、免疫学的疾患、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患及び神経変性疾患を予防し及び/又は治療する方法に関する。
サイクリン依存性プロテインキナーゼ(「CDK」)は、細胞周期の制御及び転写調節等の、細胞内での複数の役割を担う十分に保存された酵素のファミリーを構成する(Science 1996, Vol. 274:1643‐1677;Ann. Rev. Cell Dev. Biol., 1997, 13:261‐291)。
結論として、炎症性疾患の治療及び疼痛治療、特に慢性の炎症性疼痛及び神経因性疼痛に関する安全でかつ効果的な方法について、まだ対処されていない高い需要がある。
本明細書及び本特許請求の範囲を通じて、別段の制限がない限り、「アルキル」という表現は、C1-12アルキル基、適切にはC1-6アルキル基、例えば、C1-4アルキル基を示す。アルキル基は、直鎖又は分岐鎖であり得る。適切なアルキル基には例えば、メチル、エチル、プロピル(例えば、n-プロピル及びイソプロピル)、ブチル(例えば、n-ブチル、イソ-ブチル、sec-ブチル及びtert-ブチル)、ペンチル(例えば、n-ペンチル)、ヘキシル(例えば、n-ヘキシル)、ヘプチル(例えば、n-ヘプチル)及びオクチル(例えば、n-オクチル)が含まれる。例えば「アルコキシ」、「ハロアルキル」及び「チオアルキル」という表現における「アルク(alk)」という表現は、「アルキル」という定義に従って解釈されるべきである。典型的なアルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ(例えば、n-プロポキシ)、ブトキシ(例えば、n-ブトキシ)、ペントキシ(例えば、n-ペントキシ)、ヘキソキシ(例えば、n-ヘキソキシ)、ヘプトキシ(例えば、n-ヘプトキシ)及びオクトキシ(例えば、n-オクトキシ)が含まれる。典型的なチオアルキル基にはメチルチオ-が含まれる。典型的なハロアルキル基には、フルオロアルキル、例えばCF3が含まれる。
別段の制限がない限り、「シクロアルキル」という表現は、C3-10シクロアルキル基(すなわち、3〜10の環炭素原子)、より適切にはC3-8シクロアルキル基、例えばC3-6シクロアルキル基を示す。典型的なシクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが含まれる。環炭素原子の最も適切な数は3〜6である。
別段の制限がない限り、「-アルキルヘテロシクリル」という表現は、アルキレン部分、例えばC1-4アルキレン部分を介して結合するヘテロシクリル残基を示す。
別段の制限がない限り、「-アルキルヘテロアリール」という表現は、アルキレン部分、例えばC1-4アルキレン部分を介して結合するヘテロアリール残基を示す。
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素(F)、塩素(Cl)及び臭素(Br)を含む。
「アミノ」という用語は、-NH2基を指す。
主張される化合物に関して考えられ得るすべての立体異性体は、本発明に含まれる。
本発明に従った化合物が、少なくとも1つのキラル中心を有する場合、該化合物はしたがって、鏡像異性体として存在し得る。該化合物が2つ以上のキラル中心を有する場合、該化合物は、ジアステレオマーとして追加的に存在し得る。このような異性体及びその混合物はすべて、本発明の範囲内に包含されることは理解されるべきである。
本発明に従った化合物の製造のための方法が、立体異性体の混合物を生じる場合、これらの異性体は、調製用クロマトグラフィー等の従来技術によって分離され得る。該化合物は、ラセミ形態で製造され得、又は個々の鏡像異性体は、エナンチオ特異的合成によって又は分割によってのいずれかで製造され得る。例えば、該化合物は、(−)-ジ-p-トルオイル-d-酒石酸及び/又は(+)-ジ-p-トルオイル-l-酒石酸等の光学的に活性のある酸を使用した塩形成によるジアステレオマー対の形成後の遊離塩基の画分の結晶化及び再生などの標準的な技術によって、該化合物の構成要素の鏡像異性体へと分割され得る。また、該化合物は、ジアステレオマーのエステル又はアミドの形成後のキラル補助物のクロマトグラフィーによる分離及び除去によって分割され得る。或いは、該化合物は、キラルHPLCカラムを使用して分割され得る。
前記遊離化合物と該化合物の塩又は溶媒和物の形態にある該化合物との密接な関係の点において、化合物が本脈絡において引用される場合にはいつでも、対応する塩、溶媒和物又は多形体も企図され、但し、これらは該状況下で可能であり又は適切である。
前記化合物のいくつかは、水を有する溶媒和物(すなわち水和物)又は普通の有機溶媒を有する溶媒和物を形成し得、またこのような溶媒は、本発明の範囲内に包含されるよう企図される。また、該化合物の塩を含む該化合物は、該化合物の水和物の形態で得られることができ、又は該化合物の結晶化のために使用される他の溶媒を含む。
本発明の化合物のすべての医薬として許容し得る酸付加塩形態は、本発明の範囲によって包含されるよう企図される。
さらに、前記化合物の結晶形態のいくつかは、多形体として存在し得、それ自体本発明に含まれるよう企図される。
プロドラッグ:
本発明はさらに、本発明の化合物のプロドラッグを本発明の範囲内に含む。一般に、このようなプロドラッグは、所望の治療的に活性のある化合物へとインビボで容易に変換可能な化合物の機能的誘導体であるだろう。したがって、これらの場合、本発明の治療の方法、「投与すること」という用語は、前記主張される化合物の1つ以上のプロドラッグ版を使用する記載された多様な障害の治療を包含するであろうが、該化合物は対象への投与後に先に明記された化合物へとインビボで変換する。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び製造についての従来手法は、例えばH.Bundgaardの文献「プロドラッグの設計(Design of Prodrugs)」(Elsevier,1985)に記載されている。
本発明の化合物の製造のための方法のいずれかの間、関係する分子のいずれかにおける感応(sensitive)基又は反応基を保護することは必要であり得及び/又は望ましくあり得る。このことは、引用により本明細書中に完全に組み込まれているJ.F.W.McOmieの文献「有機化学における保護基(Protective Groups in Organic Chemistry)」(Plenum Press,1973);並びにT.W.Greene及びP.G.M.Wuts「有機合成における保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)」(John Wiley & Sons,1991)に記載されているものなど、従来の保護基によって達成され得る。該保護基は、簡便なその後の段階で、当技術分野で公知の方法を使用して除去され得る。
本明細書で使用されるように、「組成物」という用語は、治療的に効果のある量の前記主張される化合物を含む製品、及び該主張される化合物の組み合わせから直接的に又は間接的に結果として生じるいずれかの製品を包含するよう企図される。
(式中:
AはNでありかつBはCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)であり、
又はAはCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)でありかつBはNであり;
RaはH又はメチルであり;
R1は、下記からなる群から選択され:
C1-8アルキル;
-NR6R7;
C1-6アルキル-NR6R7;
R20;
-C1-6アルキル-R20;
-C1-6アルキル-C(O)OR4;
C1-6アルキル-C(O)R4;
-NR10-(C1-6アルキル)-NR6R7;
-NR10-(C1-6アルキル)-R20;
-NR10-(C1-6アルキル)-C(O)OR4;
-NR10R20;
O-(C1-6アルキル)-NR6R7;
-O-(C1-6アルキル)-R20;
-O-(C1-6アルキル)-C(O)OR4;
-OR20;
C1-6アルキル-OR20;
C1-6アルキル-SR20;
C1-C6アルキル-NR10R20;
(C1-6アルキル)-O-(C1-6アルキル)-R20;
(C1-6アルキル)-S-(C1-6アルキル)-R20;
C(O)R20;
ここで、アルキル部分は直鎖又は分岐鎖であってもよく、かつハロ、メトキシ、エトキシNR6R7又は窒素含有複素環から選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R4はH又はC1-4アルキルを表し;
R6及びR7は各々独立して、H、C1-6アルキル、ヒドロキシ-C2-6アルキル-からなる群から選択され;
R10はH又はC1-4アルキルを表し;
R20は、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル及びヘテロシクリルから選択されかつ下記から選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく:
いずれかが1つ以上のハロ又はOH置換基によって置換されていてもよいC1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル;
R21、-C1-4アルキル-R21;OR21、O(C1-4アルキル)R21、SR21、SOR21、SO2R21、C(O)R21、C1-4アルキル-OR21、
いずれかが1つ以上のハロ又はOH置換基によって置換されていてもよい-O(C2-6アルケニル)、-O(C2-6アルキニル);
OR22、-SR22、-SOR22、-SO2R22、-C(O)R22、-C(O)OR22、-C1-4アルキル-O-R22、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-R22、C1-4アルキル-C(O)R22、-C1-4アルキル-C(O)R22、NR11C(O)OR22、NR11C(O)R22、-SO2-NR11R12、-C(O)-NR11R12、-C1-4アルキル-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4アルキル)-SO2R15、-(C1-4アルキル)NR11R12、NR11R12、-(C1-6アルキル)NR11R12、ニトロ、ハロゲン、シアノ及びヒドロキシル;及びR20がカルボシクリル又はヘテロシクリル又は、芳香環が非芳香環に縮合される芳香基であるとき、R20がオキソによってさらに置換されていてもよく;
R21が、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル及びヘテロシクリルから選択されかつ以下に定義される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R21がアリール基又はヘテロアリール基であるとき、R21は下記から選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく:ここでフェニルが、メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されており
R21が炭素環基又は複素環基であるとき、R21はメチル、オキソ又はハロゲンから選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R22が水素又は、ハロもしくはヒドロキシルによって任意に置換されたC1-6アルキルであり;
R11及びR12が各々独立して、H又はC1-4アルキルから選択された置換基を表し、又はR11及びR12が共に3〜8員の非芳香環を形成するよう結合し;
R15がH又はC1-4アルキルを表し;
R2がH、C1-6アルキル又はNH2を表し;
各R3が独立して、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換される。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR31R32、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR31R32、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR31R32、-NH-SO2R33、-N(C1-4アルキル)-SO2R33、-(C1-4アルキル)NR31R32、-NR31R32、-(C1-6アルキル)NR31R32、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシルからなる群から選択された置換基を表し;
R31及びR32が各々独立して、H、C1-4アルキル又はC1-4ハロアルキルから選択された置換基を表し、又はR31及びR32が共に3〜8員の非芳香環を形成するよう結合し;
R33がH又はC1-4アルキルを表し;
xが、0〜4の範囲でフェニル環における独立して選択されたR3置換基の数を表す。)。
AはNでありかつBはCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)であり、
又はAはCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)でありかつBはNであり;
R1は下記からなる群から選択され:
C1-8アルキル;
C1-8ハロアルキル;
アリール;
ヘテロアリール;
C3-12カルボシクリル;
ヘテロシクリル;
-C1-6アルキル-アリール;
-C1-6アルキル-ヘテロアリール;
-C1-6アルキル-カルボシクリル;
-C1-6アルキル-ヘテロシクリル;
-C1-6アルキル-C(O)OH;
-C1-6アルキル-C(O)OC1-4アルキル;
-NR10C1-6アルキル-アリール;
-NR10C1-6アルキル-ヘテロアリール;
-NR10C1-6アルキル-カルボシクリル;
-NR10C1-6アルキル-ヘテロシクリル;
-NR10C1-6アルキル-C(O)OH;
-NR10C1-6アルキル-C(O)OC1-4アルキル;
-NR10アリール;
-NR10ヘテロアリール;
-NR10カルボシクリル;
-NR10ヘテロシクリル;
-OC1-6アルキル-ヘテロアリール;
-OC1-6アルキル-カルボシクリル;
-OC1-6アルキル-ヘテロシクリル;
-OC1-6アルキル-C(O)OH;
-OC1-6アルキル-C(O)OC1-4アルキル;
-Oアリール;
-Oヘテロアリール;
-Oカルボシクリル;及び
-Oヘテロシクリル;
ここで、前記アリール及びヘテロアリールのいずれかは、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換される。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(ここで、フェニルは、メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR11R12、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR11R12、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4アルキル)-SO2R15、-(C1-4アルキル)NR11R12、NR11R12、-(C1-6アルキル)NR11R12、ニトロ、ハロゲン、シアノ及びヒドロキシルからなる群から独立して選択された1つ以上の基によって任意に置換されていてもよく;かつ
ここで、前記カルボシクリル及びヘテロシクリルのいずれかは、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換される。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-C1-6アルキル-OH、-C1-4 アルキルフェニル(ここで、フェニルはメチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4-アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR11R12、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR11R12、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4アルキル)-SO2R15、-(C1-4アルキル)NR11R12、-NR11R12、-(C1-6アルキル)NR11R12、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル及びオキソからなる群から独立して選択された1つ以上の基によって任意に置換されていてもよく;
R2は、H、C1-6アルキル又はNH2を表し;
R3は、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換される。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換される。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR31R32、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR31R32、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキルO-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR31R32、-NH-SO2R33、-N(C1-4アルキル)-SO2R33、-(C1-4アルキル)NR31R32、-NR31R32、-(C1-6アルキル)NR31R32、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシルからなる群から選択された置換基を表し;
R4及びR5は独立してH又はC1-4アルキルを表し;
R6及びR7は各々独立して、H、C1-6アルキル、ヒドロキシ-C2-6アルキル-からなる群から選択され;
R10はH又はC1-4アルキルを表し;
R11及びR12は各々独立して、H又はC1-4アルキルから選択された置換基を表し、又はR11及びR12は共に、3〜8員の非芳香環を形成するよう結合し;
R15はH又はC1-4アルキルを表し;
R31及びR32は各々独立して、H、C1-4アルキル又はC1-4ハロアルキルから選択された置換基を表し、又はR31及びR32は共に、3〜8員の非芳香環を形成するよう結合し;
R33はH又はC1-4アルキルを表し;
xは、0〜4の範囲でフェニル環における独立して選択されたR3置換基の数を表し;
mは、1〜4の整数を表し;かつ
nは、2〜4の整数を表す。
一般式(I)の化合物において、多くの場合、AがNでありかつBがCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)であり、このような化合物はそれら自体、本発明の個別の態様を形成する。
本願の適切な化合物において、独立して又はいずれかの組み合わせにおいて、式中:
Raは水素であり;
BはCH又はC1-4アルキルであり;
R2は水素又はC1-4アルキルであり、
R3はハロゲン、C1-6アルコキシ、-O-C1-4アルキルフェニル(例えば、-O-ベンジル)、又は-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキルであり;かつ
xは1又は2である。
R2は水素又はメチル、特に水素であり;かつ
R3はハロゲン、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、ベンジルオキシ又は-OCH2シクロプロピルである。
xが2であるとき、R3基のうちの1つは、メトキシ、エトキシ、-イソプロピルオキシ、ベンジルオキシ又は(1-シクロプロピル)メトキシ、より典型的にはメトキシ基又はエトキシ基、最も適切にはメトキシ基であり得、その他のR3基は典型的にはハロ、特にフルオロである。
R3がC1-6アルコキシ、-O-C1-4アルキルフェニル又は-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキルであるとき、R3は、好ましくはフェニル環の2位にある置換基である。R3がハロゲンを表すとき、ハロゲンは適切には、フェニル環の3、4又は5位にある置換基である。
-C1-C6アルキル;
-R20;
-C(O)R20;
-C1-C6アルキル-R20、
ここで、該アルキル基は、ハロ、メトキシ、エトキシ、-NR6R7又は窒素含有ヘテロシクリル環で任意に置換されており;
-C1-C6アルキル-OR20;
-(C1-C6アルキル)-O-(C1-C6アルキル)-R20;
-C1-C6アルキル-NR10R20;
-C1-C6アルキル-SR20;
-NR10R20;
-NR6R7;
-NR10-(C1-C6アルキル)-NR6R7又は
-NR10-(C1-6アルキル)-C(O)OH;
ここで、R6、R7、R10及びR20は上述に定義されるとおりである。
R1がR20又はNR10R20を表すとき、R20は、置換された又は非置換のカルボシクリル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基であってもよい。R1が、置換されたカルボシクリル基である場合、該置換基は、いくつかの特に適切な化合物において、該カルボシクリル基を該分子の残部に対して連結するのと同一原子上にあってもよい。
同様に、R1がC1-C6アルキル-R20を表すとき、R20も適切にはアリール基、ヘテロアリール基又はヘテロシクリル基であり、先に記載されるとおり任意に置換される。
R1がC1-C6アルキル-OR20、-(C1-C6アルキル)-O-(C1-C6アルキル)-R20、C1-C6アルキル-NR10R20又はC1-C6アルキル-SR20を表す化合物において、R20は通常、先に記載されるとおり任意に置換されるアリール基又はヘテロアリール基である。
1つ又は2つの窒素原子を含有する6員のヘテロアリール環、例えばピリジン及びピリミジン;
1〜4つのヘテロ原子を含有する5員のヘテロアリール環、例えばチオフェン、フランピロール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、イソキサゾール、オキサゾール、チアゾール及びイミダゾール。
R1が-C1-C6アルキル-NR10R20であるとき;-NR10R20であるとき;-NR10-(C1-C6アルキル)-NR6R7又は-NR10-(C1-6アルキル)-C(O)OHであるとき;R10が水素又はメチルである場合が一般的であるが、より特別には水素である。
本発明の具体的な化合物の例を表1及び2に記載する。
本発明は、先に定義される式(I)の化合物又は該化合物の保護された誘導体の製造方法を提供し、該方法は、
(a)式(I)のある化合物を式(I)の別の化合物へ変換すること
を含む。
工程(a)において、典型的な変換反応には下記が含まれる。
・N-アルキル化反応等のアルキル化反応(例えば、R1基=ピペリジンからR1基=N-メチル-ピペリジンへの変換)
・アシル化(例えば、R1がピペリジンを表すとき:ピペリジンのNH基からNC(O)CH3への変換)
・保護基の除去(例えば、一般式(I)の化合物を付与するためであり、ここで、R1は一般式(I)の化合物由来のピペリジニルであり、ここで、R1はピペリジンであり、ここでピペリジンの窒素はBocによって、例えばTFAの使用によって保護されている。)
・エステル加水分解(例えば、R1がNHC(Me)2C(O)OEtを表すことからR1がNHC(Me)2C(O)OHを表すことへの変換などの、対応する酸を付与するためのエチルエステルの変換)
・R20がフェニルを表すとき:ラネーニッケルの存在下で水素による、R20における-NH2置換基からR20における-NO2置換基への還元
・アミノ基を塩化メタンスルホニルと共役させることによること
・ここで、式(I)の化合物において、R1は-C1-4アルキル-O-R20であり、又はR1は-C1-4アルキル-NH-R20である:
R1=-C1-4アルキル-L5からR1=-C1-4アルキル-O-R20又はR1=-C1-4アルキルNH-R20への典型的な変換反応は、R1が-C1-4アルキル-L5である式(I)の化合物(ここで、L5は適切な脱離基(例えば、クロロ)を表す。)を下記式の化合物:
任意に塩基の存在下で、R20-OH又はR20-NH2
と反応させることを包含し得る。
(b)式Aの化合物
式Bの化合物
ここで、X及びYは、交差カップリング反応に適切な置換基を表し、互いに反応するよう選択される。
及び式Dの化合物
から合成され得る。
工程(b)において、典型的なL1置換基にはハロゲン(例えば、Cl)が含まれる。L1がクロロであるとき、式Cの化合物は、塩化チオニルとの反応によって、対応するカルボン酸から製造され得る。
一般式C及びDの化合物は公知であり、容易に入手可能であり又は公知の方法によって合成され得る。
(c)式Eの化合物
(式中、R1は、一般式(I)について定義されるとおりであり、かつL4は適切な脱離基を表す。)を;
式Fの化合物
又は該化合物の保護された誘導体と反応させること。
L4がクロロを表すとき、式Eの化合物と式Fの化合物との反応は適切には、有機溶媒(例えば、ジクロロメタン)において実施され得る。該反応は適切には、求核触媒(例えば、ジメチルアミノピリジン)の存在下で実施され得る。
L4がOC(O)OC1-4アルキルを表すとき、式Eの化合物と式Fの化合物との反応は適切には、有機溶媒(例えば、テトラヒドロフラン)において実施され得る。
式Eの他の化合物は、容易に入手可能であり、又は公知の方法によって合成され得る。
(d)対応するアミン又は該アミンの保護された誘導体と式Gの化合物
又は該化合物の保護された誘導体との反応を含む方法によって、R1が、窒素原子を介して式(I)の主要カルボニルに結合する部分である、式(I)の化合物を製造すること
(例えば、R1=-NR10-(C1-6アルキル)-R20又は-NR10R20又は窒素含有ヘテロシクリルであり、ここで、R1はヘテロシクリル環の窒素原子を介して式(I)の主要カルボニルに結合する。)
を含む。
該反応は適切には、非極性有機溶媒(例えば、トルエン)において実施され得る。該反応は適切には、高い温度、好ましくはマイクロ波条件下で実施され得る。
から合成され得る。
適切な反応条件には、有機溶媒(例えば、ジクロロメタン)における塩基(例えば、DIPEA)の存在下での、クロロギ酸フェニル(式Nの化合物)と式Fの化合物との反応が含まれる。
式Hの化合物は周知であり、及び容易に入手可能であり又は容易に入手可能な出発材料から公知の方法によって製造され得る。
(e)先に定義される式Fの化合物又は該化合物の保護された誘導体を式Jの化合物
と、HATU又はHBTU等の適切なカップリング剤の存在下で反応させることを含む。該反応は適切には、高い温度で実施される。該反応は適切には、(ジクロロメタン又はアセトニトリル等の)有機溶媒において実施され得、適切には(DIPEA等の)塩基の存在下で実施され得る。
式Jの化合物は周知であり、及び容易に入手可能であり又は容易に入手可能な出発材料から公知の方法によって製造され得る。
(f)式Kの化合物
を式Lの化合物
と、適切な触媒及び塩基の存在下などで(例えば、Pd(PPh3)4、キサントホス(Xantophos)及び炭酸セシウムの存在下で)、Buchwald型カップリング反応等のカップリング反応に適切な条件下で反応させることを含む。
(g)先に定義される式Fの化合物を下記式の化合物:
R20N=C=O又はR20-(C1-6アルキル)-N=C=O
(式中、R20は、一般式(I)について定義されるとおりであり、例えば、R20は、ピリジン等のヘテロアリール基を表す。)
と反応させることによって、R1が-NHR20又は-NH-(C1-6アルキル)-R20である式(I)の化合物を製造することを含む。
該反応は適切には、(トリエチルアミン等の)塩基の存在下で実施される。
ある中間体化合物は新規であり、本発明の態様として主張される。
また、該阻害剤は、先に列挙された群から選択される2つ以上のサイクリン依存性キナーゼを阻害し得る。
本発明の特定の好ましい実施態様において、式I記載の化合物はCDK9を阻害する。
好ましい実施態様において、このような阻害化合物は、特定のCDKについて高い選択性を示す。本明細書で使用される「高い選択性」は、該阻害化合物が上述に本明細書に列挙される前記CDKの群から選択される特定のCDKに対して選択性が少なくとも10〜100倍高いことを意味する。本発明の好ましい実施態様において、該阻害化合物は、特定のCDKに対して選択性が20〜90倍高い。特定の好ましい実施態様において、該阻害化合物は、特定のCDKに対して選択性が30〜80倍高い。
特定の好ましい実施態様において、式I記載の化合物は、他のCDKに対するよりもCDK9に対する高い選択性を示す。
式Iの化合物は、サイクリン依存性キナーゼの阻害剤である。したがって、該化合物は、異常に分裂する細胞における細胞周期の調節を捕捉し又は回復させる能力を有すると期待される。結果的に、式I記載の化合物は、癌等の増殖性障害を治療し及び/又は予防する上で有用であると立証されるであろうことが示唆される。CDKがアポトーシス、増殖、分化及び転写における役割を担っていることは公知であり、それゆえ、式I記載の化合物は、感染性疾患、免疫学的疾患、神経変性疾患及び心血管疾患など、増殖性疾患以外の疾患の治療においても有用であり得る。
このように、好ましい実施態様において、式Iの化合物は、慢性疼痛、神経因性疼痛及び/又は炎症性疼痛を含むいずれかの種類の疼痛の治療のための方法及び/又は医薬組成物において使用され得る。
特定の好ましい実施態様において、疼痛の治療における又は炎症性障害の治療における使用のための式Iの化合物は、他のCDKに対するよりもCDK9に対する高い選択性を示す。
実施例からわかるように、神経病変を罹患しているマウスに式I記載のCDK阻害剤を投与すると、結果的に、特に炎症性疼痛及び神経因性疼痛のマウスモデルにおいて痛覚鈍麻効果を生じる。
サイクリン依存性キナーゼの阻害が痛覚鈍麻効果を仲介する上で関与するという発見は予期せぬことであった。
さらに、CDK9が、TNFα受容体複合体の一員であるTRAF2の結合パートナーである(MacLachlanらの文献(1998))のに対し、炎症誘発性IL6受容体複合体のサブユニットであるGP130は、CDK9の別の可能な結合パートナーとして近年同定された(Falcoらの文献(2002))ことが示されている。したがって、いくつかの遺伝子(例えば、疼痛仲介因子としてのサイトカイン)に関するTNFα及びインターロイキンシグナル伝達における並びにNfκB仲介性発現における重要な担い手として、CDK9は、炎症性疼痛等のいずれかの種類の疼痛の治療のための中心的な達成目標として考慮できる(図2参照)。
それゆえ、NfκB仲介性遺伝子転写に対する関連性により、CDK9との阻害作用は、急性炎症性疼痛の治療に対するだけでなく、慢性疼痛の治療に対しても妥当なアプローチであり得る。
好ましい実施態様において、「疼痛」は、頭痛(例えば、片頭痛障害、偶発性及び慢性緊張性頭痛、緊張性様頭痛、群発頭痛、及び慢性発作性片側頭痛)、腰痛、癌性疼痛、骨関節炎及び神経因性疼痛を含む慢性疼痛の種類に関するが、これらに限定されるわけではない。本明細書で定義される炎症性疼痛(組織損傷に応答した疼痛及び結果として生じる炎症過程)は、結合組織疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症及び関節炎を含む疾患と関連したイムフラマトリー(imflammatory)疼痛に関するが、これらに限定されるわけではない。
「痛覚過敏」という用語は、有痛の刺激に対する高い感度を表す。
「痛覚鈍麻」という用語は、有痛の刺激に対する低い感度を表す。
驚くべきことに、本明細書に開示される式I記載のCDK阻害化合物が、インビトロ及びインビボでの炎症アッセイにおいて抗炎症性効果を発揮することを示すことができた。
このように、好ましい実施態様において、本発明は、式I記載のサイクリン依存性キナーゼの有効量の阻害剤を投与することを含む炎症性疾患を治療する方法に関する。特定の好ましい実施態様において、炎症性疾患の治療における使用のための式Iの化合物は、他のCDKに対するよりもCDK9に対する高い選択性を示す。
このように、本明細書に提示される式I記載の化合物は、炎症性疾患の治療及び/又は予防のために使用され得る。
また、式I記載の化合物は、例えば自己免疫疾患等の免疫学的疾患の治療及び/又は予防において有用であると考えられる。
したがって、本発明は、免疫学的疾患の治療及び/又は予防を必要とする対象への、式I記載の有効量の少なくとも1つのCDK阻害剤の投与を含む、免疫学的疾患の治療及び/又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用される「免疫学的疾患」という用語は、アレルギー、喘息、移植片対宿主病、免疫不全症及び自己免疫疾患を含むがこれらに限定されない疾患に関する。
式Iの化合物は、細胞周期の調節に関与する鍵分子を表すサイクリン依存性キナーゼの阻害剤である。細胞周期の調節障害は、腫瘍細胞の主要な特徴の1つである。このように、該化合物は、異常に分裂する細胞における細胞周期の制御を抑止し又は回復させる上で有用であることが立証されると期待される。このように、式I記載の化合物が、癌等の増殖性疾患の治療及び/又は予防において有用であることが期待される。
本明細書で使用されるように、「増殖性疾患」という用語は、良性腫瘍、形成異常、過形成及び転移性増殖又は他の形質転換を示す腫瘍を含む癌障害に関するが、これらに限定されるわけではない。
「癌」という用語には、癌腫、肉腫、癌肉腫、造血性組織の癌、脳を含む神経組織の腫瘍及び皮膚細胞の癌のような良性及び悪性の腫瘍が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
さらに、本発明は、式I記載のサイクリン依存性キナーゼの有効量の少なくとも1つの阻害剤を投与することを含む感染性疾患を治療し及び/又は予防する方法に関する。
ある宿主細胞CDK、すなわちCDK2、CDK7、CDK8及びCDK9は、ウイルス複製に関与することが知られている(J.Virol.2001;75:7266‐7279)。具体的には、HIV‐1転写伸長及びヒストンメチル化の調節におけるCDK9キナーゼ活性の役割が記載されている(J.Virol 2004,78(24):13522‐13533)。
本明細書で使用される「感染性疾患」という用語は、ウイルス、細菌、真菌及び/又は寄生虫等の病原体によって生じる感染を含む。
感染性疾患の例には、エイズ、ボレリア症、ボツリヌス中毒、下痢、BSE(ウシ海綿状脳症)、チクングンヤ、コレラ、CJD(クロイツフェルト・ヤコブ病)、結膜炎、サイトメガロウイルスクンフェクション(cnfection)、デング熱(dengue)/デング熱(dengue Fever)、脳炎、東部ウマ脳炎、西部ウマ脳炎、エプスタイン・バーウイルス感染症、大腸菌感染症、食物感染、口蹄疫、真菌性皮膚炎、胃腸炎、ヘリコバクター・ピロリ感染症、肝炎(HCV、HBV)、帯状疱疹(Herpes Zoster)(帯状疱疹(Shingles))、HIV感染症、インフルエンザ、マラリア、麻疹、髄膜炎、髄膜脳炎、伝染性軟属腫、蚊媒介疾患、パルボウイルス感染症、ペスト、PCP(ニューモシスチスカリニ肺炎)、ポリオ、原発性胃腸炎、Q熱、恐水病、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)感染症、リウマチ熱、鼻炎、リフトバレー熱、ロタウイルス感染症、サルモネラ症、サルモネラ・エンテリティデス、疥癬、細菌性赤痢、痘瘡(smallpox)、連鎖球菌感染症、破傷風、毒素性ショック症候群、結核、潰瘍(消化性潰瘍疾患)、出血熱、痘瘡(variola)、疣贅、ウェストナイル熱ウイルス感染症(ウェストナイル熱脳炎)、百日咳、黄熱が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
さらに、本発明は、式I記載のサイクリン依存性キナーゼの有効量の少なくとも1つの阻害剤を投与することを含む心血管疾患の治療及び/又は予防に関する。
心血管疾患の分野が、CDK阻害剤について起こり得る臨床的適用を構成することが報告されている(Pharmacol Ther 1999,82(2‐3):279‐284)。さらに、サイクリンT/CDK9複合体の阻害、及びより具体的には、CDK9の阻害が、心不全等の心血管疾患の治療において有益な役割を担い得ることが知られている(WO2005/027902)。
さらに、心血管疾患という用語には、先天性異常、遺伝的欠陥、環境の影響(すなわち、食事の影響、生活様式、ストレスなど)、及び他の欠陥又は影響から結果的に生じる疾患が含まれる。
CDK阻害剤は、神経保護効果を発揮することが記載されている。具体的には、CDK阻害剤が、アルツハイマー病等の神経変性疾患における神経細胞の死滅を予防することが報告されている(Biochem Biophys Res Commun 2002(297):1154‐1158;Trends Pharmacol Sci 2002(23):417‐425;Pharmacol Ther 1999,82(2‐3):279-284)。
したがって、本発明は、式I記載のサイクリン依存性キナーゼの有効量の少なくとも1つの阻害剤を投与することを含む神経変性疾患を治療し及び/又は予防する方法に関する。
同様にまた、軽度認知欠陥、加齢随伴性記憶欠陥、加齢関連性認知低下、血管性認知欠陥、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、及び学習障害を有する子供における記憶障害等の認知関連障害は、神経変性障害であると考慮される。
さらに、サイクリン依存性キナーゼ、特にCDK9の活性によって仲介される疾患及び容態の治療又は予防のための薬剤の製造における一般式(I)の化合物の使用が提供される。
これらのカテゴリーに収まる具体的な障害及び疾患は、先に詳細に論議されている。
本発明の好ましい実施態様には、活性成分として式I記載の少なくとも1つのサイクリン依存性キナーゼ阻害剤を、少なくとも1つの医薬として許容し得る(すなわち、非毒性の)担体、賦形剤及び/又は希釈剤と共に含む組成物の投与が含まれる。このような組成物は、本発明のさらなる態様を含む。
適切には、該組成物は、活性成分として式I記載の少なくとも1つのサイクリン依存性キナーゼ阻害剤を含み、ここで、該少なくとも1つのサイクリン依存性キナーゼ阻害剤は、他のCDKに対するよりもCDK9に対する高い選択性を有する。
非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)等のあるクラスの鎮痛薬は、侵害受容器によって検知される刺激の化学的メッセンジャーを下方制御し、オピオイド等の別のクラスの薬物は、CNSにおける侵害受容情報の処理を変化させる。他の鎮痛薬は、局所麻酔薬、抗痙攣薬及び三環系抗うつ薬等の抗うつ薬である。CDK阻害剤に加えて1つ以上のクラスの薬物を投与することは、疼痛のより有効な寛解を提供できる。
好ましい三環系抗うつ薬は、クロミプラミン、アモキサピン、ノルトリプチリン、アミトリプチン、イミプラミン、デシプラミン、ドキセピン、トリミプラミン、プロトリプチリン、及びパモ酸イミプラミンからなる群から選択される。
本発明の医薬組成物は、従来の固体または液体の担体又は希釈剤及び医薬として製造される従来のアジュバントにおいて、公知の方法で適切な薬用量レベルで製造できる。好ましい製造物は、経口適用に適している。これらの投与形態には、例えば、丸剤、錠剤、フィルム錠、コート錠、カプセル、粉末及び沈着物が含まれる。
さらにまた、本発明には、皮膚、真皮内、胃内、皮内、脈管内、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻内、膣内、頬内、経皮、直腸内、皮下、舌下、局所、又は経真皮適用を含む非経口適用のための医薬製造物が含まれ、ここで、該製造物は、典型的な媒体及び/又は希釈剤に加えて、本発明記載の少なくとも1つの阻害剤及び/又は該阻害剤の医薬として許容し得る塩を活性成分として含有する。
また、甘味料及び調味料並びに保存料は、適宜含まれ得る。崩壊剤、希釈剤、潤滑剤、結合剤等は、以下により詳細に論議される。
坐剤を製造するために、ココアバターのような脂肪酸グリセリドの混合物等の低融点蝋がまず融解され、次に、活性成分が、例えば撹拌によってその中に均質に分散する。次に、融解された均質な混合物が、便利な大きさの鋳型へ注入され、冷却され、それにより凝固する。
また、使用直前に経口又は非経口のいずれかの投与のための液状製造物へ変換されるよう企図された固体状製造物が含まれる。これらの液状には、溶液、懸濁液、及び乳濁液が含まれる。
構成用粉末は、活性成分と、例えば水において又はジュースにおいて懸濁できる適切な希釈剤とを含有する粉末配合物を含む。
該組成物における滑走剤の量は、最終組成物の約0.1〜約5重量%、適切には約0.5〜約2重量%の範囲とし得る。
「該投与を必要とする対象」は、近い将来いずれかの種類の疼痛、炎症性障害、免疫学的疾患、増殖性疾患、心血管疾患又は神経変性疾患を経験すると期待され、又は該容態の経験が進行中である動物、適切には哺乳動物、最も適切にはヒトを含む。例えば、このような動物又はヒトは、現に疼痛を生じている進行中の容態を有し得かつ疼痛を生じ続けるようであり、又は該動物もしくはヒトは、通常有痛の結果となる手法もしくは事象に忍耐中であり又は忍耐中であろう。糖尿病性神経障害性痛覚過敏及びコラーゲン脈管疾患等の慢性の有痛の容態は、第一の種類の例であり;特に炎症又は神経障害の一領域における歯科業務、及び毒素曝露(化学治療薬への暴露を含む。)は、後者の種類の例である。
「治療的有効量」という用語は、示される生物学的又は医学的反応を誘発する活性化合物の又は医薬の量を示すために使用される。この反応は、研究者、獣医、医師又は他の臨床家によって調べられている組織、系、動物又はヒトにおいて生じ得、治療されている最中の疾患の症状の寛解を含む。本発明の脈絡において、治療的有効量は、例えば、疼痛、特に炎症性疼痛又は神経因性疼痛を低下させる量を含む。具体的には、治療的有効量は、治療されるべき対象において痛覚鈍麻効果を発揮する量を示す。
本発明はいまや、実施例及び図に関してより詳細に説明されるであろう:
すべての試薬をACROS Organics、Aldrich、Lancaster、Maybridge及びBoron Molecularから購入した。
化合物についてのLC/MS分析を、APCIイオン化を備えたSurveyor MSQ(Thermo Finnigan,USA)で実施した。
1H NMRスペクトルを「MERCURY plus 400 MHz」分光計(Varian)で記録した。化学シフト値をテトラメチルシラン(TMS)に対するppmで付与し、残留溶媒水素イオン共鳴を内部標準とする。
Sanyo Gallenkamp装置で融点を決定した。
Bruker AM 400分光計において又はVarian 400MHz Mercury Plus分光計において、NMRスペクトルを実施した。下記の略語を使用する:s(一重線)、d(二重線)、dd(二重線の二重線)、t(三重線)、及びm(多重線)。ESI‐MS:Ionspray(商標)インターフェイスを装備したMDS Sciex API 365質量分析計(MDS Sciex;Thorn Hill,ON,Canada)を使用して、質量分析スペクトルを得た。機器の設定、データの獲得及び処理を、Windows NT(商標)用のApplied Biosystems(Foster City,CA,USA)Analyst(商標)ソフトウェアによって制御した。ピークを蓄積するために、正のイオン化Q1走査モードによって50〜100の走査を実施した。試料溶液を0.5%ギ酸における50%メタノールで希釈して、濃度約10μg/mLに到達した。注入ポンプ(Havard Apperatus 22;Havard Instruments;Holliston,MA,USA)によって各試料溶液を直接導入し、シリカ毛細管に20μL/分の速度で融合させた。Macherey Nagel Polygram(登録商標)SIL G/UV245を使用して、薄層クロマトグラフィー(TLC)を実施した。254nmでのUV光によって、その後過マンガン酸カリウム又はニンヒドリンを使用して染色することによって、可視化を達成した。使用前に溶媒を蒸留した。すべての市販の試薬は、さらに精製せずに使用した。Merck-Hitachi装置を使用して、分析用HPLCを実施した:AcN‐水(流速:1mL/分)、カラム:LiChrosphere 5um RP18e,125×4.0 mm(Merck)、ポンプ:L‐7100 Merck‐Hitachiを使用した。実施例における精製された化合物の検出のために、勾配A、B及びCを使用した。勾配Aの特徴:t=0分でAcN‐水(5:95)から出発し、15分以内でAcN‐水(50:50)に、さらに5分後、AcN‐水(95:5)に、残りはAcN‐水(95:5)でさらに3分間;勾配Bの特徴:t=0分でAcN‐水(5:95)から出発し、15分以内でアセトニトリル‐水(60:40)に、さらに5分後、AcN‐水(95:5)に、残りはAcN‐水(95:5)でさらに10分間;勾配Cの特徴:t=0分でAcN‐水(20:80)から出発し、30分以内でAcN‐水(95:5)とした。Merck-Hitachi装置を使用して、調製用HPLCを実施した:AcN‐水(流速:6mL/分)、カラム:LUNA C18(2)100A,250×21.2 mm,10μ(Merck)、インターフェイス:D‐7000、UV‐VIS検出器:L‐7420、ポンプ:L‐6250 Merck‐Hitachiを使用した。
(方法及び出発材料の製造)
6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-アミンの製造、クラスAのピリミジンの製造のための一般的な手法
方法1:(酸塩化物を介する。)
(実施例1:(3R)-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-N-メチルピペリジン-3-カルボキサミド)
前駆体3-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イルカルバモイル)ピペリジン-1-カルボン酸(R)-ベンジルの製造
60mLのDCMにおける6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-アミン(5.80g、28.8mmol)の溶液に、4-ジメチルアミノピリジン(4.16g、34.0mmol)、次いでN-Cbzニペコチン酸クロリド(8.00g、28.4mmol)(N-Cbzニペコチン酸及び塩化オキサリルから製造)を室温で滴下して添加した。反応混合物を2時間撹拌し、水で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ(Na2SO4)、濃縮した。得られた粗残渣をシリカゲルのパッドに通過させ、ヘキサンにおける25%酢酸エチルで溶出して、3-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル-カルバモイル)ピペリジン-1-カルボン酸(R)-ベンジルを提供した(8.5g、収率:67%)。
50mLのメタノールにおける3-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル-カルバモイル)ピペリジン-1-カルボン酸(R)-ベンジル(7.0g)の溶液に、窒素大気下で10%水酸化パラジウム(1.5g)を添加し、水素大気下で混合物を室温で8時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、溶媒を蒸発させた。得られた混合物をジエチルエーテルに取り、撹拌し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、実施例1を白色の固体として得た(3.5g、収率:72%)。
前駆体3-[6-(5-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステルの製造
THF及び水の混合物(6mL、1:1)における5-フルオロ-2-メトキシフェニルボロン酸(0.20g、1.1mmol)の溶液に、3-(6-クロロピリミジン-4-イルカルバモイル)ピペリジン-1-カルボン酸ベンジル(0.35g、1.0mmol)を0℃で添加した後、酢酸パラジウム(12mg、0.054mmol)、PPh3(31mg、0.12mmol)及び炭酸ナトリウム飽和溶液(2mL)を添加した。反応混合物を室温で30時間撹拌した後、セライトベッドで濾過し、該セライトベッドを酢酸エチルで洗浄した。水性層を酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせ、鹹水で洗浄し、乾燥させ、減圧下で蒸発させた。溶離剤としてヘキサン/酢酸エチル(4:1)を使用するカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、0.31g(収率:53.8%)の3-[6-(5-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステルを提供した。
3-[6-(5-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(0.25g、0.5mmol)、メタノール(7mL)及び20%水酸化パラジウム(0.12g、50%(w/w))の混合物を水素大気下で一晩撹拌した。次に、該混合物をセライトベッドで濾過し、該セライトベッドをメタノールで洗浄した。濾液を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによって精製して、0.125gの所望の生成物を、分離不可能な不純物と共に付与した。調製用HPLCによってさらに精製して、2mg(収率:0.8%)のN-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)ピペリジン-3-カルボキサミドをTFA塩として付与した。
前駆体3-[6-(2-フルオロ-6-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステルの製造
THF及び水(6mL、1:1)の混合物における2-フルオロ-6-メトキシフェニルボロン酸(0.20g、1.1mmol)の溶液に、3-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(0.35g、0.93mmol)を0℃で添加した後、酢酸パラジウム(12mg、54μmol)、PPh3(31mg、0.12mmol)及び炭酸ナトリウム飽和溶液(2mL)を添加した。反応混合物を室温で30時間撹拌した後、セライトベッドで濾過し、該セライトベッドを酢酸エチルで洗浄した。水性層を酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせ、鹹水で洗浄し、乾燥させ、減圧下で蒸発させた。溶離剤としてヘキサン/酢酸エチル(4:1)を使用するカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、0.31g(収率:66.7%)の3-[6-(2-フルオロ-6-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステルを提供した。
3-[6-(2-フルオロ-6-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(0.3g、0.6mmol)、メタノール(7mL)及び20%水酸化パラジウム(0.12g、50%(w/w))の混合物を水素大気下で一晩撹拌した。次に、該混合物をセライトベッドで濾過し、該セライトベッドをメタノールで洗浄した。濾液を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによって精製して、0.2g(93.8%収率)の所望の生成物を、分離不可能な不純物と共に付与した。調製用HPLCによってさらに精製して、2mg(収率0.9%)のN-(6-(2-フルオロ-6-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)ピペリジン-3-カルボキサミドをTFA塩として付与した。
前駆体3-[6-(2,6-ジメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステルの製造
ジメトキシエタン/水(8mL、3:1)の混合物における2,6-ジメトキシフェニルボロン酸(0.60g、3.3mmol)の溶液に、3-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(0.82g、2.2mmol)を添加した後、テトラキス(トリフェニルホスピン(triphenylphospine))パラジウム(0)(0.15g、0.13mmol)及び炭酸カリウム飽和溶液(2mL)を添加した。反応混合物を90℃で2時間加熱した後、室温に冷却し、セライトベッドで濾過し、該セライトベッドを酢酸エチルで洗浄した。水性層を酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせ、鹹水で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、減圧下で蒸発させた。溶離剤としてヘキサン/酢酸エチル(4:1)を使用するカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、0.80g(収率:53%)の3-[6-(2,6-ジメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステルを提供した。
方法:6、収率:0.2%
3-[6-(2,6-ジメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(800mg、1.68mmol)、メタノール(7mL)及び20%水酸化パラジウム(400mg、50%(w/w))の混合物を水素大気下で一晩撹拌した。次に、該混合物をセライトベッドで濾過し、該セライトベッドをメタノールで洗浄した。濾液を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによって精製して、120mgの所望の生成物を、分離不可能な不純物と共に付与した。調製用HPLCによってさらに精製して、2mgのピペリジン-3-カルボン酸[6-(2,6-ジメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミドをTFA塩として付与した。
無水DMF(10mL)における6-オキソ-ピペリジン3-カルボン酸(0.21g、1.5mmol)の溶液に、氷冷条件下でHBTU(1.13g、2.98mmol)及びDIPEA(0.30g、0.39mL、2.3mmol)を添加した後、室温で45分間撹拌しておいた。この反応混合物に、無水DMFにおけるアミンA(0.30g、1.5mmol)を氷冷条件下で滴下して添加した。次に、反応混合物を120℃で4時間加熱した。反応完了後、該反応混合物を冷却し、DMFを完全に蒸発させた後、酢酸エチル(30mL)に溶解し、水(2×15mL)を使用して、次に鹹水を使用して洗浄した後、乾燥させ(Na2SO4)、減圧下で蒸発させた。 フラッシュシリカゲルを使用するカラムクロマトグラフィー(10%メタノール/DCM)によって最終的な精製を実施して、78mg(収率:17%)の所望の生成物を提供した。
82.5mgのラセミ化合物から出発するキラルHPLCによる精製によって、実施例5及び6を鏡像異性体へ分離して、40mgの各鏡像異性体を生じ、下記の方法を利用した:
調製方法:カラム:250×50mm CHIRALPAK(登録商標)AD‐H 5μm;移動相:ヘプタン/エタノール/ジエチルアミン:70/30/0.1;流速:120 mL/分;検出:UV 325 nm;温度:25°C;
分析方法:カラム:250×4.6mm CHIRALPAK(登録商標)IB 5μm;移動相:ヘプタン/エタノール/ジエチルアミン:70/30/0.1;流速:1 mL/分;検出:DAD 280 nm;温度:30°C。
方法4にしたがって実施例7を収率41%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例8を収率51%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例9を収率56.7%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例10を合成し、Sunfire C18カラム(250×50mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(50:50)及び流速:118mL/分、λ=210 nmを使用する調製用HPLCによって精製した。
方法4にしたがって実施例11を合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法4にしたがって実施例12を収率36.2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例13を収率44.3%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例14を収率47.6%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー、次いでLUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.7 min (100%); mp: 148°C
方法2にしたがって実施例15を収率5.2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー、次いでLUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 341 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 11.2 min (99.7%); mp: 117°C
方法2にしたがって実施例16を収率4.1%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー、次いでLUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 359 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 11.3 min (95.2%); mp: 208°C
方法2にしたがって実施例17を収率5.5%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:48 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例18を収率11.7%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける5%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例19を収率3.5%で合成し、最初に、クロロホルムにおける0〜4%MeOHを使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって、さらに、Kromasil C18(250×30mm;10μ)カラムを使用する調製用HPLCによって精製した。移動相:AcNにおける0.01M NH4OAc:AcN(70:30)及び流速:42mL/分 λ=210 nm。
方法4にしたがって実施例20を収率12.4%で合成し、石油エーテルにおける0〜20%酢酸エチルを使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例21を収率7.3%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法4にしたがって実施例22を収率55.8%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法7にしたがって実施例23を収率95%で合成し、エチルエーテルによる洗浄によって精製した。
方法2にしたがって実施例24を収率1.5%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって、次いでLUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 359 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.9 min (100%); mp: 222°C
方法2にしたがって実施例25を収率2.1%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分での AcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 373 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 11.8 min (100%); mp: 105°C
方法2にしたがって実施例26を収率18.7%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 373 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 12.2 min (96.4%); mp: 236°C
(実施例27:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)シクロペンタンカルボキサミド)
方法2にしたがって実施例27を収率11.2%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1% TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 298 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 17.1 min (98.1%)
方法4にしたがって実施例28を収率70.2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法7にしたがって実施例29を収率93%で合成し、エチルエーテルを使用する洗浄によって精製した。
方法2にしたがって実施例30を収率23.1%で合成し、方法7にしたがって、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 327 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.1 min (94.1%)
方法7にしたがって、実施例32から出発して実施例31を収率81%で合成し、エチルエーテルを使用する洗浄によって精製した。
MS (m/z): 327 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.9 min (100%)
(実施例32:3-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イルカルバモイル)シクロヘキシルカルバミン酸tert-ブチル)
方法2にしたがって実施例32を収率23.1%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 427 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 19.0 min (95.3%)
方法2にしたがって実施例33を収率22%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 427 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 18.6 min (95.3%)
方法7にしたがって実施例33から出発して実施例34を収率76.7%で合成し、エチルエーテルを使用する洗浄によって精製した。
MS (m/z): 327 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.7 min (98.1%)
(実施例35:2-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イルカルバモイル)-4-フルオロピロリジン-1-カルボン酸tert-ブチル)
方法4にしたがって実施例35を収率57.7%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法7にしたがって実施例35から出発して実施例36を収率300で合成し、エチルエーテルを使用する洗浄によって精製した。
方法2にしたがって実施例37のBoc保護された前駆体を合成し、単離及び精製後、方法9によって実施例37を収率28.7%で製造した。
MS (m/z): 331 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.0 min (100%); mp: 122°C
方法2にしたがって実施例38のBoc保護された前駆体を合成し、単離及び精製(収率:60.5%)後、方法9によって実施例38を収率39.2%で製造し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.3 min (98.4%); mp: 162°C
方法2にしたがって実施例39を収率39.2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 332 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 13.9 min (100%); mp: 155°C
(実施例40:N-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-オキソピペリジン-4-カルボキサミド)
方法2にしたがって実施例40を収率12.3%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.9 min (100%); mp: 225°C
方法2にしたがって実施例41を収率6.7%で合成した。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 13.6 min (99.3%); mp: 180°C
(実施例42:テトラヒドロ-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2H-ピラン-4-カルボキサミド)
方法2にしたがって実施例42を収率21.9%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 314 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 11.9 min (100%)
方法2にしたがって実施例43を収率8.4%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 330 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 14.8 min (85.7%)
方法2にしたがって実施例44を収率19.2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例45のBoc保護された前駆体を合成し、単離及び精製(収率:42.2%)後、方法7によって実施例45を収率69.2%で製造した。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.1 min (100%)
方法2にしたがって実施例46のBoc保護された前駆体を合成し、単離及び精製(収率:16.4%)後、方法7によって実施例46を収率45.3%で製造した。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.2 min (100%); mp: 272°C
(実施例47:テトラヒドロ-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2H-ピラン-2-カルボキサミド)
方法2にしたがって実施例47を収率28.4%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 314 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 15.2 min (97.2%)
方法2にしたがって実施例48を収率29.4%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 284 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt min (92.1%)
方法2にしたがって実施例49を収率17.8%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 312 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 16.7 min (98%)
方法2にしたがって実施例50を収率13.5%で合成し、LUNA C18(2) 100A column (250 x 21.2 mm; 10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法11にしたがって実施例51を合成した。
(実施例52:3-メチルスルホン-アミノ-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-4-メチルベンズアミド)
方法11にしたがって実施例52を合成した。
(実施例53:3-メチルスルホン-アミノ-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)ベンズアミド)
方法11にしたがって実施例53を合成した。
(実施例54:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)ピコリンアミド)
方法4にしたがって実施例54を収率25.8%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例55を収率38.7%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:40 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例56を収率13.8%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける10%酢酸エチルで溶出する調製用TLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例57を収率5.7%で合成し、メタノールにおいて粗化合物を撹拌し、溶解していない固体を濾過することによって精製した。該方法をもう1回反復し、真空下で乾燥させて、純粋な生成物を付与した。
方法4にしたがって実施例58を収率14.5%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(30:70)及び流速:48 mL/分を使用する調製用HPLCによって生成した。
方法4にしたがって実施例59を収率20.4%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:48 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法4にしたがって実施例60を収率5.7%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 391 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 14.6 min (100%); mp: 276°C.
方法1にしたがって実施例61を収率2.5%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例62を収率34%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける0〜5%MeOHを使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例63を収率85%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例64を収率3.1%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 334 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt min (100%)
方法2にしたがって実施例65を収率7.9%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例66を収率5.1%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例67を収率4.3%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例68を収率4.1%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例69を収率8.2%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例70を収率7.2%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法3にしたがって実施例71を収率3.5%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 350 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 16.1 min (95.9%)
(実施例72:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(1H-ピラゾール-1-イル)アセトアミド)
方法2にしたがって実施例72を収率3.5%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 310 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.8 min (97%); mp: 138°C
方法1にしたがって実施例73を収率17.1%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法1にしたがって実施例74を収率11.3%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例75を収率2.8%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 380 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 13:6 min (100%); mp: 194°C
(実施例76:1-(4-メトキシフェニル)-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド)
方法2にしたがって実施例76を収率2.7%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 376 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [19,1]): rt 19.1 min (100%); mp: 123°C
方法2にしたがって実施例77を収率10.3%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 334 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 18.1 min (100%); mp: 109°C
(実施例78:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-4-イル)アセトアミド)
方法4にしたがって実施例78を収率25.5%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 321 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 7.2 min (98.6%); mp: 128°C
実施例79を方法4にしたがって収率55%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 326 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 13.2 min (96.2%); mp: 135°C; HRMS: cal.: 348.0777600, found: 348.0777185 NaC17H15N3O2S), cal.: 326.0958800, found: 326.0957739 (C17H16N3O2S)
(実施例80:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-3-イル)アセトアミド)
方法8にしたがって実施例80を収率37.3%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例81を収率23.8%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける0〜3%MeOHを使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例82を12.1%の収率で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける0〜3%MeOHを使用するシリカゲル(200〜400メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例83を収率16.1%で合成し、クロロホルムにおける40%酢酸エチルを使用するシリカゲル(GF254)上での調製用TLCを2回実施することによって精製した。
方法2にしたがって実施例84を収率4.8%で合成し、クロロホルムにおける5%MeOHを使用するシリカゲル(GF254)上での調製用TLCを実施することによって精製した。
方法2にしたがって実施例85を収率23.6%で合成し、クロロホルムにおける0〜10%MeOHを使用するシリカゲル(60〜120メッシュ)上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例86を収率20.7%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法1にしたがって実施例87を収率18.2%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例88を収率29.4%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例89を収率5.7%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける10%酢酸エチルを使用するシリカゲル(GF254)上での調製用TLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例90を収率4.6%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける10%酢酸エチルを使用するシリカゲル(GF254)上での調製用TLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例91を収率19.9%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:48 mL/分、λ=235 nmを使用する調製用HPLCによって精製した。
方法1にしたがって実施例92を収率8.5%で合成し、石油エーテルにおける50%酢酸エチルを使用するシリカゲル(GF254)を使用する調製用TLCによって精製した。
方法1にしたがって実施例93を収率8.7%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×46 mm;5μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(55:45)及び流速:48mL/分、λ=235 nmを使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例94を収率6.6%で合成し、Gemini C18カラム(50×30 mm;5μ)及び移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):can(60:40)、流速:1mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法3にしたがって実施例95を収率10.8%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(40:60)及び流速:4mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法3にしたがって実施例96を収率13.6%で実施例95の副産物として合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(40:60)及び流速:4mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例97を収率52.3%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(40:60)及び流速:48mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例98を収率5.1%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(40:60)及び流速:48mL/分を使用する調製用HPLCによって初期精製を実施した。石油エーテルにおける10%酢酸エチルを使用し、エーテルによって洗浄する調製用TLCによってさらに精製して、純粋な生成物を付与した。
方法2にしたがって実施例99を収率11.5%で合成し、石油エーテルにおける0〜45%酢酸エチルを使用する中性アルミナ上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例100を収率5.7%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける10%酢酸エチルを使用するシリカゲル(GF254)上での調製用TLCによって精製した。
方法1にしたがって実施例101の前駆体を合成し、単離及び精製(収率:25.6%)後、方法10によって実施例101を収率54.5%で製造し、溶離剤として石油エーテルにおける20〜25%酢酸エチルを使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例102を収率8.4%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける10%酢酸エチルで溶出する調製用TLCによって精製した。
方法3にしたがって実施例103を収率25.5%で合成し、生成物を反応混合物から沈殿させ、濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、純粋な生成物を得た。
方法2にしたがって実施例104を収率4.7%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 418 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 20.2 min (100%)
方法2にしたがって実施例105を収率1.5%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
MS (m/z): 350 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 14.3 min (95.9%)
(実施例106:2-(2,3,5-トリフルオロフェニル)-N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)アセトアミド)
方法2にしたがって実施例106を収率32.2%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 374 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [C]): rt 16.5 min (97.8%)
方法にしたがって実施例107を収率2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例108を収率63.2%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 380 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 17.4 min (91%)
方法2にしたがって実施例109を収率17.7%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 353 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.5 min (100%); mp: 175°C
(実施例110:N-(6-(5-フルオロ-2-イソプロポキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-3-イル)アセトアミド)
方法2にしたがって実施例110を収率25.7%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 367 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.4 min (100%); mp: 175°C
方法2にしたがって実施例111を収率18.6%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 353 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 16.6 min (100%); mp: 221°C
(実施例112:N-(6-(5-フルオロ-2-イソプロポキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-4-イル)アセトアミド)
方法2にしたがって実施例112を収率27%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 367.2 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.44 min (97.4%)
方法2にしたがって実施例113を収率19%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 353.4 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.32 min (100%)
(実施例114:N-(6-(2-エトキシ-4-フルオロフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-3-イル)アセトアミド*HCl)
方法2にしたがって実施例114を収率17%で合成した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 353.5 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.38 min (98.6%)
方法2にしたがって実施例115を収率25%で合成した。
MS (m/z): 367.3 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.03 min (99.6%)
(実施例116:N-(6-(2-エトキシ-4-フルオロフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-4-イル)アセトアミド*HCl)
方法2にしたがって実施例116を収率20%で合成した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 339.3 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.31 min (96.0%)
方法3にしたがって実施例117を収率8.6%で合成した。
MS (m/z): 371.3 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.35 min (96.0%)
(実施例118:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-3-イルオキシ)プロパンアミド)
方法2にしたがって実施例118を収率38.6%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例119を収率24%で合成した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 367.1 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.1 min (94%)
(実施例120:N-(6-(5-フルオロ-2-イソプロポキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-4-イル)アセトアミド*HCl)
方法2にしたがって実施例120を収率23%で合成した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 367.2 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.2 min (83%)
方法2にしたがって実施例121を収率80%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 397 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.7 min (100%)
(実施例122:N-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-3-(ピリジン-4-イル)プロパンアミド*HCl)
方法2にしたがって実施例122を収率32%で合成し、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 353 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.7 min (100%)
方法3にしたがって実施例123を収率21%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:48 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 355 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10 min (100%)
(実施例124:N-(6-(2-エトキシ-4-フルオロフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-3-イル)アセトアミド)
方法2にしたがって実施例124を収率14.7%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用し石油エーテルにおける60%酢酸エチルで溶出する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 339 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 8.9 min (98.5%)
方法2にしたがって実施例125を収率35.9%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:48 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 335 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.1 min (96.2%)
(実施例126:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(ピリジン-3-イル)プロパンアミド)
方法2にしたがって実施例126を収率53.7%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:40 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 335 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10 min (98.4%)
方法4にしたがって実施例127を収率45.2%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用する調製用TLCによって精製した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 365 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.6 min (100%); mp: 142°C
(実施例128:N-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(4-メチルピリジン-3-イル)アセトアミド)
方法4にしたがって実施例128を収率71%で合成し、シリカゲル(GF254)を使用する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 353 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.8 min (92.7%); mp: 260°C
方法2にしたがって実施例129を収率13%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:40 mL/分を使用する調製用HPLC、次いで方法7によって精製した(収率:100%)。
MS (m/z): 368 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 8.0 min (100%)
(実施例130:N-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(3-メチルピリジン-4-イル)アセトアミド*HCl)
方法2にしたがって実施例130を収率16.4%で合成し、溶離剤として石油エーテルにおける30%酢酸エチルを使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 353 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.8 min (100%)
方法2にしたがって実施例131を収率25.1%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例132を収率14%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製のための第一の工程を実施し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによってTFA塩として最終精製を実施した。
方法2にしたがって実施例133を収率45%で合成した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 367 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 11.7 min (98.1%); mp: decomp.: 110°C
(実施例134:N-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-6,7-ジヒドロ-5H-シクロペンタ[b]ピリジン-7-カルボキサミド*HCl)
方法4にしたがって実施例134を収率10%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:40 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換した。
MS (m/z): 365 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 13.7 min (83.2%); mp: decomp.: 200°C
方法2にしたがって実施例135を収率3%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製のための第一の工程を実施し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって最終精製を実施した;融点:220℃。
方法2にしたがって実施例136を収率24%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.01M NH4OAc(水溶液):AcN(35:65)及び流速:40 mL/分を使用する調製用HPLC、次いで方法7によって精製した(収率:100%)。
MS (m/z): 354 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.8 min (78.7%)
方法2及び9にしたがって、方法2については15%、方法9については95%の収率で実施例137を合成した。
MS (m/z): 423 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.4 min (98.1%)
(実施例138:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)ピペリジン-1-カルボキサミド)
方法4にしたがって実施例138を収率35%で合成した。
MS (m/z): 313 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 12.2 min (100%)
(実施例139:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)ピペリジン-1-カルボキサミド*TFA)
方法4、次いで方法9にしたがって、実施例139を収率5%で合成した。
MS (m/z): 314 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt rotameres: 7.1 + 7.4 min (94.4%)
方法4にしたがって実施例140を収率25.3%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した後、石油エーテルにおける5%アセトンで洗浄し、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換し、収率100%であった。
MS (m/z): 360 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.1 min (99%); mp: 219°C
方法12にしたがって実施例141を収率21.2%で合成し、DCMにおける5%メタノールで希釈して固体を沈殿させることによって精製した後、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換し、収率100%であった。
MS (m/z): 340 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [B]): rt 10.2 min (99.8%); mp: 224°C
(実施例142:1-(6-(5-フルオロ-2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)尿素)
方法4にしたがって実施例142を収率11.8%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 262 (M); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 12.3 min (98%); mp: 170°C
方法3にしたがって実施例143を収率11.2%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける1%メタノールを使用する調製用TLC(シリカゲルGF254)によって精製した。
方法2にしたがって実施例144を収率8.8%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける7%MeOHを使用する調製用TLCを2回実施することによって精製した。
方法2にしたがって実施例145を収率13.9%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける5%MeOHを使用するシリカゲル(GF254)上での調製用TLCによって精製した。
方法3にしたがって実施例146を収率29.2%で合成し、溶離剤としてクロロホルムにおける1%メタノールを使用する調製用TLC(シリカゲルGF254)によって精製した。
方法3にしたがって実施例147を収率25.4%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例148を収率26.3%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例149を収率14.5%で合成し、溶離剤として酢酸エチルを使用する中性アルミナ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法4にしたがって実施例150を収率88.2%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(100〜200メッシュ)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
方法2にしたがって実施例151152を収率3.4%で合成し、LUNA C18(2)100Aカラム(250×21.2 mm;10μ)、移動相:0.1%TFA(水溶液):勾配t=0分でのAcN‐水(40:60)から45分以内でのAcN‐水(95:5)、流速:6 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
方法4にしたがって実施例152を収率9.9%で合成し、Gemini C18(50×30 mm;5μ)カラムを使用する調製用HPLCによって精製した。
方法2にしたがって実施例153を収率27.4%で合成した後、方法9にしたがって脱保護し、NaHCO3水溶液に溶解することによって遊離塩基へ変換し、DCMに溶解し、1.2当量のHClエーテル溶液を添加することによって、HCl-塩へ変換し、最後の工程について収率23.3%であった。
MS (m/z): 345 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 9.4 min (95.8%)
方法2にしたがって実施例154を収率4.0%で合成し、Zodiacsil 120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用しエーテルで洗浄する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 355 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.6 min (92.5%)
方法2にしたがって実施例155を収率4.4%で合成し、クロロホルムにおけるメタノール(0〜10%)を使用するシリカゲル(40ミクロン)上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー、次いで、シリカゲル(GF254)を使用しクロロホルムにおける3%MeOHで溶出する調製用TLCによって精製した。
MS (m/z): 359 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 12.6 min (99.5%); mp: 217°C
(実施例156:N-(6-(2-メトキシフェニル)ピリミジン-4-イル)-2-(5-オキソピロリジン-3-イル)アセトアミド)
方法2にしたがって実施例156を収率3.8%で合成し、Zodiacsil(登録商標)120‐5‐C18カラム(250×32 mm;10μ)、移動相:0.1%ギ酸(水溶液):AcN(25:75)及び流速:4 mL/分を使用する調製用HPLCによって精製した。
MS (m/z): 327 (M+H); HPLC (λ = 214 nm, [A]): rt 10.4 min (100%); mp: 220°C
(方法)
(共通の中間体(VIII)の製造):
H2O(15mL)におけるピペリジン-4-カルボン酸(5.0g、38.7mmol)及びNaOH(1.86g、46.5mmol)の撹拌した溶液に、トルエンにおけるクロロギ酸ベンジルの50%溶液(13.6mL、40.6mmol)を0℃で30分間かけて滴下して添加した。反応混合物を室温で6時間撹拌した。反応の進行をTLCによってモニターした。完了後、反応混合物を希HCl(pH3)で酸性化し、酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。組み合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、30%酢酸エチル/n-ヘキサンで溶出)によって粗生成物を精製して、ピペリジン-1,4-ジカルボン酸モノベンジルエステル(VI)(6.5g、64%)を淡黄色の油として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 95%.
ESMS: m/z = 264 (M+1).
ピペリジン-1,4-ジカルボン酸モノベンジルエステル(VI)(5.0g、19mmol)を塩化チオニル(10mL)に懸濁し、室温で1時間撹拌した。過剰量の塩化チオニルを蒸留し、得られた粗4-クロロカルボニル-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VII)を次の反応に直接使用した。
ジクロロメタン(50mL)における4-クロロカルボニル-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VII)(5.70g、20.2mmol)、4-アミノ-6-クロロピリミジン(I)(2.10g、16.2mmol)及び4-(N,N-ジメチルアミノ)-ピリジン(2.90g、23.7mmol)の混合物を温度で18時間還流加熱した。反応の進行をTLCによってモニターした後、ジクロロメタンを完全に蒸留した。重炭酸ナトリウム水溶液を残渣へ添加し、混合物を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(5.9g、79%)を黄色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 82%.
ESMS: m/z = 375 (M+1).
(実施例1A:ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-エトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#1A)の合成)
飽和炭酸ナトリウム溶液(10mL)及び1,4-ジオキサン(10mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(6.15g、16.4mmol)、2-エトキシフェニルボロン酸(II)(3.00g、18.1mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.81g、3.6mmol)、次いで、トリフェニルホスフィン(0.94g、3.6mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる反応混合物を110℃で1時間加熱還流し、TLCでモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、50%酢酸エチル/n-ヘキサンによる溶出)によって精製して、4-[6-(2-エトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(IX)(3.8g、50%)を淡黄色の油として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 94%.
ESMS: m/z = 461 (M+1).
工程II:
4-[6-(2-エトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(IX)(1.47g、3.19mmol)をメタノール(20mL)に溶解し、10%Pd/C(0.81g)を窒素大気下で添加した。反応物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。触媒を反応混合物からセライトベッドで濾過し、濾液を蒸発させて乾燥させて、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-エトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#1A)を得た(0.61g、58%)。
HPLC purity λ = 220 nm: 87%.
ESMS: m/z = 327 (M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 99%.
ESMS: m/z = 341(M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 96%.
ESMS: m/z = 355 (M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 99%.
ESMS: m/z = 369 (M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 96%.
ESMS: m/z = 417 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(10mL)及び1,4-ジオキサン(10mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.730g、1.95mmol)、2-メトキシフェニルボロン酸(0.300g、1.97mmol)の撹拌した溶液に、酢酸パラジウム(II)(0.088g、0.39mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.103g、0.39mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、TLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、50%酢酸エチル/n-ヘキサンによる溶出)によって精製して、4-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XI)(0.47g、53%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 89%.
ESMS: m/z = 447 (M+1).
工程II:
4-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XI)(0.45g、1.00mmol)をメタノール:ジクロロメタン(4:1)(24mL)に溶解し、10%Pd/C(0.2g)を窒素大気下で添加した。反応物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。セライトベッドによる濾過によって反応混合物から触媒を除去し、乾燥するまで濾液を蒸発させた。次に、粗生成物を無水ジエチルエーテル(10mL)で処理し、固体を濾過して、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#6A)(0.19g、42%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 97%.
ESMS: m/z = 313 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(10mL)及び1,4-ジオキサン(10mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.830g、2.22mmol)、2-イソプロピルオキシフェニルボロン酸(0.400g、2.22mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.1g、0.44mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.11g、0.42mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、TLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、50%酢酸エチル/n-ヘキサンによる溶出)によって精製して、4-[6-(2-イソプロポキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XIII)(0.36g、37%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 448 (M+1).
工程II:
4-[6-(2-イソプロポキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XIII)(0.32g、0.67mmol)をメタノール(20mL)に溶解し、10%Pd/C(0.17g)を窒素大気下で添加した。反応物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。セライトベッドによる濾過によって触媒を反応混合物から濾過し、乾燥するまで濾液を蒸発させた。次に、粗生成物を無水ジエチルエーテル(10mL)で倍散し、結果として生じる固体を濾過して、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-イソプロポキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#7A)(0.12g、52%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 99%.
ESMS: m/z = 341 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(5mL)及び1,4-ジオキサン(5mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.59g、1.6mmol)及び2-(シクロプロピルメトキシ)フェニルボロン酸(0.34g、1.9mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.071g、0.32mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.083g、0.32mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、TLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、50%酢酸エチル/n-ヘキサンによる溶出)によって精製して、4-[6-(2-シクロプロピルメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XV)(0.4g、35%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 487 (M+1).
工程II
4-[6-(2-シクロプロピルメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XV)(0.41g、0.84mmol)をメタノール(20mL)に溶解し、10%Pd/C(0.2g)を窒素大気下で添加した。反応物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。セライトベッドによる濾過によって触媒を反応混合物から除去し、乾燥するまで濾液を蒸発させた。次に、粗生成物を無水ジエチルエーテル(10mL)で倍散し、固体を濾過して、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-シクロプロピルメトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#8A)(0.11g、37%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 97%.
ESMS: m/z = 353 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(4mL)及び1,4-ジオキサン(4mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.74g、2.0mmol)及び2-ベンジルオキシフェニルボロン酸(0.50g、2.2mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.09g、0.40mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.105g、0.400mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、TLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を調製用HPLCによって精製して、4-[6-(2-ベンジルオキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XVI)(0.65g、62%)を得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 95%.
ESMS: m/z = 523 (M+1).
工程II:
4-[6-(2-ベンジルオキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XVI)(0.5g、1mmol)を酢酸(3mL)における33%HBrに溶解し、室温で45分間撹拌した。黄色の固体を沈殿させ;反応混合物を0℃で水酸化ナトリウム水溶液を使用して急冷し、酢酸エチル(3×10mL)で抽出した。有機相を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を調製用HPLC(C‐18、AcN:H2O、0.05%TFA含有)によって精製し、凍結乾燥させて、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-ベンジルオキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#9A)(0.028g、7%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 389 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(4mL)及び1,4-ジオキサン(4mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.63g、1.7mmol)及び4-フルオロ-2-メトキシ-フェニルボロン酸(0.30g、1.8mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.076g、0.34mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.089g、0.34mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、反応をTLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、50%酢酸エチル/n-ヘキサンによる溶出)によって精製して、4-[6-(4-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XIX)(0.42g、53%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 84%.
工程II:
4-[6-(4-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XIX)(0.42g、0.9mmol)をメタノール(20mL)に溶解し、10%Pd/C(0.2g)を窒素大気下で添加した。反応物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。セライトベッドによる濾過によって触媒を反応混合物から濾過し、乾燥するまで濾液を蒸発させた。次に、粗生成物を無水ジエチルエーテル(5mL)で倍散し、固体を濾過して、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(4-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#10A)(0.22g、76%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 99%.
ESMS: m/z = 331 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(5mL)及び1,4-ジオキサン(5mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.60g、1.6mmol)及び5-フルオロ-2-メトキシ-フェニルボロン酸(0.300g、1.76mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.072g、0.32mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.084g、0.32mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、反応をTLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、50%酢酸エチル/n-ヘキサンによる溶出)によって精製して、4-[6-(5-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XXI)(0.39g、52%)を淡黄色の油として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 80%).
ESMS: m/z = 465 (M+1).
工程II:
4-[6-(5-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XXI)(0.39g、0.84mmol)をメタノール(15mL)に溶解し、10%Pd/C(0.2g)を窒素大気下で添加した。混合物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。セライトベッドによる濾過によって触媒を反応混合物から除去し、乾燥するまで濾液を蒸発させた。結果として生じる生成物を無水ジエチルエーテル(5mL)で倍散し、固体を濾過して、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(5-フルオロ-2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#11A)(0.076g、27%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 331 (M+1).
飽和炭酸ナトリウム溶液(4mL)及び1,4-ジオキサン(4mL)における4-(6-クロロ-ピリミジン-4-イルカルバモイル)-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(VIII)(0.75g、2mmol)及び6-フルオロ-2-メトキシ-フェニルボロン酸(0.37g、2.2mmol)の撹拌した混合物に、酢酸パラジウム(II)(0.09g、0.4mmol)、次いでトリフェニルホスフィン(0.105g、0.00mmol)を室温で窒素大気下で添加した。結果として生じる混合物を110℃で1時間還流加熱し、反応をTLCによってモニターした。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。有機層を分離し、組み合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。結果として生じる粗生成物を調製用HPLC(C‐18、AcN:H2O、0.05%TFA含有)によって精製して、4-[6-(2-フルオロ-6-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XXIII)(0.05g、4%)を得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 465 (M+1).
工程II:
4-[6-(2-フルオロ-6-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルエステル(XXIII)(0.05g、0.1mmol)をメタノール(5mL)に溶解し、10%Pd/C(0.03g)を窒素大気下で添加した。混合物を室温で水素バルーン圧の下で18時間撹拌した。セライトベッドによる濾過によって触媒を反応混合物から除去し、乾燥するまで濾液を蒸発させた。結果として生じる粗生成物を無水ジエチルエーテル(2mL)で倍散し、濃縮して、ピペリジン-4-カルボン酸[6-(2-フルオロ-6-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-アミド(化合物#12A)(0.029g、81%)を白色の固体として得た。
HPLC purity λ = 220 nm: 96%.
ESMS: m/z = 331 (M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 369 (M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 98%.
ESMS: m/z = 313 (M+1).
HPLC purity λ = 220 nm: 99%.
ESMS: m/z = 313 (M+1).
工程I:
MS: m/z = 312.9 (M+1).
工程I
工程III
MS: m/z = 407.1 (M+1).
MS: m/z = 312.9 (M+1).
融点:163〜165℃。
工程II
MS: m/z = 263.9 (M+1).
工程IV
MS: m/z = 407.1 (M+1).
分析純度:95.49%。キラル純度:(R)-鏡像異性体91.62%、(S)-鏡像異性体8.37%。
MS: m/z = 312.9 (M+1).
クロロギ酸フェニル(0.20g、1.3mmol)を無水ジクロロメタン(10mL)における6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルアミン(0.26g、1.3mmol)及びDIPEA(0.33g、2.6mmol)の溶液に−78℃で滴下して添加し、該混合物を室温で一晩撹拌しておいた。次に、ジクロロメタンを蒸発させ、無水1,4-ジオキサン及びプロリンメチルエステルヒドロクロリド(0.26g、1.3mmol)及びDIPEA(0.33g、2.6mmol)を添加し、該混合物を70℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。組み合わせた有機相を水(2×50mL)及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパー(rotavapour)において濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶離剤:70%酢酸エチル/ヘキサン)によって精製して、1-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピロリジン-2-カルボン酸メチルエステルを得た。
収率:500mg、〜定量的。
工程2:
THF及び水の混合物(1:1)における1-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピロリジン-2-カルボン酸メチルエステル(LX)(500mg、1.40mmol)の溶液に、水におけるLiOH(0.118g、2.80mmol)の溶液を氷槽温度で10分間かけて添加した後、室温で2時間撹拌しておいた。THFを蒸発させ、水溶液を2N HClで酸性化した。次に、この水性相を酢酸エチル(2×100mL)で抽出し、組み合わせた有機相を水及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮して、1-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルカルバモイル]-ピロリジン-2-カルボン酸を白色の固体として得た。収量:210mg、43.8%
MS: m/z = 343 (M+1).
MS: m/z = 356.1 (M+1).
MS: m/z = 391.46 (M+1).
工程I
工程II
工程V
MS: m/z = 327 (M+1).
工程I
MS: m/z = 221 (M+1).
MS: m/z = 202 (M+1).
工程IV
工程V
MS: m/z = 328 (M+1).
工程I
工程II:
MS: m/z = 328 (M+1).
得られたN-ベンゾイル-N-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ベンズアミド及び2mLの水-メタノールの混合物に、1N NaOH水溶液(2当量)を氷槽温度でゆっくりと添加した。
TLCによってモニターされるように、反応は10分以内で完了した。溶媒を除去し、残渣をジクロロメタン(50mL)に取り、水(2×20mL)、次に鹹水で洗浄した。組み合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた後、乾燥するまで濃縮して、粗生成物を付与し、20酢酸エチル/ヘキサンを使用するシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって該粗生成物をさらに精製して、N-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ベンズアミドを提供した。収量:45.5mg、50%。
MS: m/z = 379 (M+1).
クロロギ酸フェニル(0.370g、1.98mmol)をジクロロメタン(10mL)における6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルアミン(XXIV)(0.25g、1.2mmol)及びDIPEA(0.31g、2.4mmol)の溶液に−78℃で滴下して添加し、該混合物を室温で一晩撹拌しておいた。次に、ジクロロメタンを蒸発させ、無水1,4-ジオキサン及びグリシンエチルエステルヒドロクロリド(0.17g、1.2mmol)及びDIPEA(0.31g、2.4mmol)を添加し、該混合物を70℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。酢酸エチル相を水(2×50mL)及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶離剤:70%酢酸エチル/ヘキサン)によって精製して、{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-酢酸エチルエステルを付与した。収量:190mg、47.8%。
工程2:
THF及び水の混合物(1:1)における{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-酢酸エチルエステル(LII)(190mg、0.57mmol)の溶液に、水におけるLiOH(50.0mg、1.12mmol)の溶液を氷槽温度で10分間かけて添加した後、該混合物を2時間撹拌しておいた。THFを蒸発させ、該水溶液を2N HClで酸性化した。次に、この水性相を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。有機相を分離し、組み合わせ、水及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮して、{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-酢酸を白色の固体として得た。収量:184mg、〜定量的。
MS: m/z = 303 (M+1).
クロロギ酸フェニル(0.21g、1.4mmol)を無水ジクロロメタン(10mL)における6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルアミン(XXIV)(0.28g、1.4mmol)及びDIPEA(0.35g、2.8mmol)の溶液に−78℃で滴下して添加し、該混合物を室温で一晩撹拌しておいた。次に、ジクロロメタンを蒸発させ、無水1,4-ジオキサン及びアラニンエチルエステルヒドロクロリド(0.21g、1.4mmol)及びDIPEA(0.35g、2.8mmol)を添加し、該混合物を70℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。組み合わせた有機相を水(2×50mL)及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶離剤:45%酢酸エチル/ヘキサン)によって精製して、2-{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-プロピオン酸エチルエステルを得た。収量:470mg、97.2%。
工程2:
THF及び水の混合物(1:1)における2-{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-プロピオン酸エチルエステル(LIV)(470mg、1.4mmol)の溶液に、水におけるLiOH(0.11g、2.7mmol)の溶液を氷槽温度で30分間かけて添加した後、2時間撹拌しておいた。THFを蒸発させ、該水溶液を2N HClで酸性化した。次に、この水性相を酢酸エチル(2×100mL)で抽出し、分離し及び組み合わせた有機相を水及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮して、2-{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-プロピオン酸(化合物#32A)を白色の固体として得た。収量:223mg、50.4%。
MS: m/z = 317 (M+1).
クロロギ酸フェニル(0.21g、1.4mmol)を無水ジクロロメタン(10mL)における6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルアミン(XXIV)(0.28g、1.4mmol)及びDIPEA(0.36g、2.8mmol)の溶液に−78℃で滴下して添加し、該混合物を室温で一晩撹拌しておいた。次に、ジクロロメタンを蒸発させ、無水1,4-ジオキサン及び2-アミノ-2-メチル-プロピオン酸エチルエステル(0.17g、1.2mmol)及びDIPEA(0.36g、2.8mmol)を添加し、該混合物を70℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。組み合わせた有機相を水(2×50mL)及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶離剤:30%酢酸エチル/ヘキサン)によって精製して、2-{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-2-メチル-プロピオン酸エチルエステルを得た。収量:370mg、73.5%。
工程2:
THF及び水(1:1)の混合物における2-{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-2-メチル-プロピオン酸エチルエステル(LVI)(370mg、1.03mmol)の溶液に、水におけるLiOH(87.0mg、2.06mmol)の溶液を氷槽温度で10分間かけて添加した後、室温で2時間撹拌しておいた。THFを蒸発させ、水溶液を2N HClで酸性化した。次に、この水性相を酢酸エチル(2×100mL)で抽出し、組み合わせた有機相を水及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮して、2-{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-ウレイド}-2-メチル-プロピオン酸を白色の固体として得た。収量:235mg、69.1%。
MS: m/z = 331 (M+1).
クロロギ酸フェニル(0.21g、1.4mmol)を無水ジクロロメタン(10mL)における6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イルアミン(XXIV)(0.28g、1.4mmol)及びDIPEA(0.35g、2.8mmol)の溶液に−78℃で滴下して添加し、該混合物を室温で一晩撹拌しておいた。次に、ジクロロメタンを蒸発させ、無水1,4-ジオキサン、サルコシンエチルエステルヒドロクロリド(0.213g、1.4mmol)及びDIPEA(0.35g、2.8mmol)を添加し、該混合物を70℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。組み合わせた有機相を水(2×50mL)及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶離剤:70%酢酸エチル/ヘキサン)によって精製して、{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-1-メチル-ウレイド}-酢酸エチルエステルを得た。収量:217mg、44.9%。
工程2:
THF及び水の混合物(1:1)における{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-1-メチル-ウレイド}-酢酸エチルエステル(LVIII)(370mg、1.03mmol)の溶液に、水におけるLiOH(87.0mg、2.06mmol)の溶液を氷槽温度で10分間かけて添加した後、室温で2時間撹拌しておいた。THFを蒸発させ、水溶液を2N HClで酸性化した。次に、この水性相を酢酸エチル(2×100mL)で抽出し、組み合わせた有機相を水及び鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空ロタベイパーにおいて濃縮して、{3-[6-(2-メトキシ-フェニル)-ピリミジン-4-イル]-1-メチル-ウレイド}-酢酸を褐色の固体として付与した。収量:34mg、10.4%。
MS: m/z = 317 (M+1).
(生物学的実施例1)
I.炎症性及び神経因性疼痛の分析のための行動動物モデル
炎症性及び神経因性疼痛の分析のためのいくつかの動物モデルは公知である。該モデルは、例えば神経病変の誘発(例えば、坐骨神経部分損傷、SNI)後又は侵害刺激に対する実験動物の曝露(例えば、ホルマリン又はカラゲナンの注射)後、該介入によって誘発されるような疼痛の徴候は、例えばフォンフレイ毛髪を使用する機械的刺激に対する(又は、レーザー源もしくは舐行動を使用する熱刺激に対する)足引っ込め閾値等の行動の定量可能な構成要素によって測定される。これらの反応は、ヒトにおける機械的アロディニア及び熱アロディニア(機械的刺激に対する過敏症)又は痛覚過敏と等価であるものとして解釈される。
坐骨神経部分損傷モデル(SNIモデル、Decosterd及びWoolf(2000)によって開発、図1参照)は、臨床的に関連する神経病変の誘発及び外科的介入後の行動実験(例えば、フォン・フレイアッセイ)によって特徴付けられる。該モデルは、腓腹神経を無傷のままにしておき坐骨神経の2つの分岐(すなわち、脛骨神経及び総腓骨神経)の結紮及び切断からなる共通神経損傷モデルを構成する。SNIモデルは、臨床的な神経因性疼痛の特徴を密接に模倣する機械的感度及び冷却感度における早期の(24時間未満)、長期の及び実質的な変化を結果的に生じる。これらの種類の神経損傷を有する動物は、神経因性疼痛患者によって報告されるものと同様の異常な疼痛感覚及び機械的刺激に対する過敏症(アロディニア)を発生することが示されている。或いは、マウスにおけるホルマリンアッセイは、炎症性及び神経因性疼痛における侵害受容の妥当なかつ信頼性のある行動モデルである。該アッセイは、多様なクラスの鎮痛薬に対して感受性がある(Hunskaar S及びHole Kの文献(Pain.1987 Jul;30(1):103‐14))。侵害刺激は、左後足の背側面の皮膚の下(左後足への皮下又は足底間)での10μLの希釈したホルマリン(塩類溶液中で2%)の注射液からなる。反応は、注射された足を舐めること及び畏縮させることである。
カラゲナンアッセイについて、マウスの単一の後足(同側足)への(塩類溶液中の)1%カラゲナン25μLの皮下注射が適用される。その後の炎症は結果的に、足の長期に持続する発汗及び(機械的刺激及び熱刺激に対する)過敏症を生じる。カラゲナンアッセイは、検査化合物の抗炎症性活性を予測するために使用される標準的な実験室アッセイである。足の浮腫測定及びハーグリーブスアッセイ(Hargreaves Assay)(光源を介する熱刺激による足の引っ込め)は、読み出しに使用される。
本発明に関して、炎症性及び神経因性疼痛の発生に及ぼす式I記載のサイクリン依存性キナーゼ(CDK)阻害化合物の投与の効果は、SNIモデルにおいて、カラゲナンにおいて及びホルマリンアッセイにおいてアッセイされる。本実験の手法及び結果を以下に詳細に記載する。
A.坐骨神経部分損傷(SNI)−慢性神経因性疼痛のモデル
先に概略したように、坐骨神経部分損傷(SNI)モデル(図1参照)は、腓腹神経を無傷のままにしておく実験動物の坐骨神経の3つの末端分岐のうちの2つ(脛骨神経及び総腓骨神経)の病変を包含する。SNIは、損傷を受けていない腓腹神経の皮膚の縄張りにおける機械的アロディニア及び熱アロディニアを結果的に生じる(Decosterd及びWoolfの文献(Pain 2000;87:149‐158、(2)Tsujinoらの文献(Mol.Cel.Neurosci.2000;15:170‐182))。
野生型マウス(C3HeB/FeJ系)(齢、性別及び体重は対形成)を、外科的準備の前に4μL/gで1:1:2の比でHypnorm(0.315 mg/mLクエン酸フェンタニル+10 mg/mLフルアニソン;Janssen)/Hypnovel(5 mg/mLミダゾラム;Roche Applied Sciences)/水で麻酔した。
手術からの回復及び創傷治癒後、SNIマウスはCDK阻害化合物の経口注入を受容した。本実施例においては、化合物#16Aを投与した。
2%ヒドロクスプロリルセルロース(Hydroxprolylcellulose);0.25%乳酸(85%溶液)400μLに溶解したCDK阻害剤30mg/kgを、フォン・フレイ測定(機械的アロディニア)の30分前に経口適用を介して投与した。ネガティブコントロールとして、同量(400μL)の2%ヒドロクスプロリルセルロース;0.25%乳酸(85%溶液)媒体をフォンフレイ測定の30分前に単回経口適用によって投与した。阻害剤又は媒体の注入及びその後のフォン・フレイアッセイにおける機械的刺激に対する足引っ込め閾値の測定を、SNI後107日目に実施した。機械的刺激に対する反射侵害受容反応を各注入の30分後にフォン・フレイアッセイにおいて測定した。
機械的アロディニアの発生に及ぼすSNIマウスへのCDK阻害剤の投与の効果を、以下に記載の通り、フォン・フレイアッセイにおいて分析した。
SNI及びその後の本発明の化合物の投与を経験するマウスを、フォン・フレイアッセイにおける神経損傷後及び投与後の機械的アロディニアの徴候について検査した(Decosterd及びWoolfの文献(Pain 2000;87:149‐158))。本アッセイは、通常では有痛ではない刺激が不快な又は有痛のものとして動物によって認識される機械的閾値を決定する。SNI同側及びSNI反対側の基線を個々に確立した。
直径約9.5cm、高さ14cmで先に向けて4つの通気孔及びプレキシガラス蓋のついたプレキシガラスシリンダーにマウスを配置した。シリンダーを高架のメッシュ表面(7×7平方mm)の上に配置した。検査前日、マウスを検査シリンダーに1〜2時間順応させた。検査当日、マウスをシリンダーに約1時間順化させ、この中で、順化時間は、マウスの系及びマウスが以前検査された回数等の因子に依存する。一般的に、検査は、マウスが一旦落ち着いて新たな環境を探検するのを停止したら開始し得る。
上述のとおり、化合物#16AをSNIマウスへ投与した。上述のとおり、フォン・フレイ測定を実施した。化合物#16Aは、SNIマウスに及ぼす痛覚鈍麻効果を有した。術後107日目に動物の同側及び反対側の足でフォン・フレイ測定を実施した。化合物#16Aで処置された動物は、機械的刺激に対する低い感度(低いアロディニア)を示す閾値の有意な増大を示した。それと比較して、媒体単独で経口処置された動物は、高いアロディニアを示す低い閾値を示した。
これらの発見は、化合物#16Aが慢性神経因性疼痛のモデルにおける痛覚鈍麻薬物として有効であることを意味する。
ホルマリンアッセイ−炎症過程/炎症性及び慢性神経因性疼痛のモデル
マウスにおけるホルマリンアッセイは、侵害受容の妥当かつ信頼性のある行動モデルであり、多様なクラスの鎮痛薬に対して感受性がある(Hunskaar S及びHole Kの文献(Pain.1987 Jul;30(1):103‐14))。侵害受容刺激は、10μLの希釈したホルマリン(2%塩類溶液)の左後足への皮下注射又は足底内注射である。反応は、注射された足を舐めること及び畏縮させることである。反応は、炎症過程の異なる部分を反映する2つの相(Abbottら 1995)、すなわち早期/急性相である注射0〜5分後、及び後期/慢性相である注射5〜30分後を示す。下記のプロトコールは、実験を実施するための可能な1つの方法を記載する:
本アッセイにおいて、齢、性別及び体重の対形成した野生型マウス(C3HeB/FeJ)を使用する。ホルマリン注射の前に、動物を各群10匹の実験群へ無作為にさらに分ける。ホルマリン注射の30分前に、2%ヒドロクスプロリルセルロース(Hydroxprolylcellulose);0.25%乳酸(85%溶液)400μLに溶解した適量のCDK阻害剤は、腹腔内注射により投与できる。同様に、2%ヒドロクスプロリルセルロース;0.25%乳酸(85%溶液)400μLにおけるIκキナーゼ(IKK)阻害剤(30mg/kg)(ポジティブコントロール)、又は媒体単独(2%ヒドロクスプロリルセルロース;0.25%乳酸(85%溶液)400μL)(ネガティブコントロール)は、ホルマリン注射の30分前に腹腔内注射によって投与できる。
ホルマリン注射に向けて、移動による注射の妨害を回避するために、マウスをペーパータオルで保持する。注射した後足を親指と人差し指との間に保持し、ハミルトンシリンジを使用してホルマリン(2%)10μLを2つの隆起間で後足足底へと皮下(S.C.)注射する。ホルマリン及び阻害剤で処置したマウスの行動を以下に記載のとおり分析する。
ホルマリン処置したマウスの行動、すなわち舐めること及び畏縮を、規定された時間にわたって自動追跡システム(Ethovision 3.0 Color Pro,Noldus,Wageningen,Netherlands)によってモニターする:ホルマリン注射5分後に測定を開始し、ホルマリン注射30分後に終了する。この時間枠は、痛覚過敏であるホルマリン誘発性侵害受容(疼痛)の位相IIにわたる。
結果として、ホルマリン注射前に媒体処置を受容するマウス(ネガティブコントロール)は、ホルマリン処置した足での長い舐める時間及び蛍光点の大きさの有意な減少を示すことが発見された。
本観察は、CDK9阻害剤で処置したマウスにおける低い炎症性/慢性炎症性疼痛知覚を、及び検査した化合物の痛覚鈍麻効果を示す。
マウスにおけるカラゲナンアッセイ−炎症及び炎症性疼痛のモデル
カラゲナン誘発性の足の浮腫のモデルは、個々の化合物の抗炎症活性及び炎症誘発性疼痛知覚の低下を予測するために使用される標準的な実験室アッセイである。下記のプロトコールは、実験を実施するための可能な1つの方法を記載する。
炎症及び結果として生じる炎症性疼痛は、1%カラゲナン(塩類溶液)25μLのマウス後足(同側足)への皮下注射によって誘発される。各群10匹のマウスは、カラゲナン注射の30分前の腹腔内注射による式I記載の化合物(30mg/体重kg)、媒体(2%ヒドロクスプロリルセルロース;0.25%乳酸(85%溶液)400μL)及び塩類溶液(生理NaCl)の投与を受容する。反対側の足は、カラゲナン注射を受容しない。
カラゲナン注射によって誘発される足の浮腫を、注射した(同側の)足の中足領域で背面から足底まで測定した大きな足のサイズによって検出する。同側及び反対側の足の大きさは、炎症についての代理マーカーとして機能し、カラゲナン注射後のいくつかの時点:注射前(−1)、注射2時間後(2)、3時間後(3)、4時間後(4)、5時間後(5)、6時間後(6)、24時間後(24)に測定される。
ラットにおけるカラゲナンアッセイ−炎症及び炎症性疼痛のモデル
下記は、ラットにおいてカラゲナンアッセイを実施する可能な1つの方法を示す。該アッセイは、炎症性疼痛を有するラットにおける鎮痛/抗炎症活性を検出し、Winterらの文献(Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,111,544‐547,1962)によって記載されるプロトコールに従う。
各群につき10匹のラットを研究する。検査を盲検で実施する。
同一実験条件下で投与されるモルヒネ(128mg/kg経口投与)及びアセチルサリチル酸(512mg/kg経口投与)は、基準物質として使用されるであろう。
それゆえ、実験には6群が含まれるであろう。対応のないスチューデントのt検定を使用して、処置された群を媒体コントロールと比較することによって、データが分析されるであろう。
A.LPSインビボアッセイ(LPS)−インビボでのサイトカイン抑制のモデル
敗血症性ショックのLPS誘発性モデルのために、マウスは、塩類溶液おける30μgの細菌性リポ多糖(LPS;L2630 SIGMA)の腹腔内(i.p.)注射を受容する。炎症性シグナル伝達カスケードの該LPS仲介性開始は結果的に、例えばTNFα、IL‐6及びIL1β等のサイトカインの血清濃度を増大させる。血液は、規定された時点でこれらの動物から採取できる。その後、血清が分離されるであろうし、サイトカイン濃度が市販のELISAアッセイを使用して測定されるまで、−80℃で保存できる(AL Moreiraらの文献(Braz J Med Biol Res 1997;30:1199‐1207))。
LPSインビボアッセイは、薬理学的処置によるサイトカイン発現の抑制に取り組むための有力なモデルとして使用できる。
野生型マウス(C3HeB/FeJ系)(齢、性別及び体重は対形成)に30μgのLPS(SIGMA)を腹腔内注射した。LPS投与の90分後、これらの動物を0.1mL/体重10gのケタミン‐ロムプン(Rompun)(50:20mg/mL)で麻酔し、心穿刺を介して血清調製のための血液を採取した。
LPSマウスの薬理学的処置群(n=4)は、CDK阻害化合物又は媒体(ネガティブコントロール)の腹腔内(i.p.)注射をそれぞれ受容した。特に、化合物#1A及び16Aを投与した。
20%DMSO、5%トゥイーン80、10%トリス1M pH8、20%PEG400、45%PBSに溶解した10又は30mg/kg(体重当たりの化合物)のCDK阻害剤を単回薬用量としてLPS刺激の30分前に投与した。媒体コントロールを同一の方法で投与した。
LPSマウスにおけるサイトカインレベルに及ぼすCDK阻害剤による薬理学的処置の効果を、以下に記載されるとおり、市販のELISAアッセイにおいて分析した。
LPS動物からの血液試料(〜500μL/個体)を、心穿刺後30分間、湿潤された氷の上でインキュベートした。その後、試料を13.000rpmで15分間遠心分離した。血清を血餅から分離し、−80℃で保存した。
製造元の説明書に従って市販のELISAキット(Natutec)を使用することによって、試料内のTNFα及びIL6の血清濃度を測定した。
上述に記載されるように、化合物#1A及び16AをLPSマウスに投与した。サイトカイン血清濃度のELISAベースの決定を上述のとおり実施した。化合物#1A及び16Aで処置した動物と媒体で処置したコントロール動物との比較は、血清におけるTNFα及びIL6タンパク質濃度に及ぼす有意な抑制効果を示した。LPS誘発性マウスに及ぼす化合物#1A及び16Aの投与の結果を、LPS誘発性マウスを使用して実施されたサイトカイン測定(TNFα)の結果を図示する図3に示す。
これらの発見は、化合物#1A及び16Aが、サイトカイン発現のモデルにおけるサイトカインTNFα及びIL6の有効な抑制性薬物であることを示す。
A.インビトロでのTHP‐1アッセイ−サイトカイン阻害のインビトロモデル
リポ多糖(LPS)又は腫瘍壊死因子α(TNFα)によって仲介されるサイトカイン発現のインビトロモデルとして、ヒトTHP‐1細胞系が利用できる。単細胞性THP‐1細胞(ATCC;TIB‐202)は、LPSを使用する誘導又はTNFα(自己分泌誘導)自体による誘導の際に、TNFα、IL6及びIL1βのような炎症誘発性サイトカインを発現するマクロファージ様細胞へと分化できる。
それゆえ、THP‐1インビトロアッセイは、サイトカイン発現の薬理学的阻害に取り組むための有力なスクリーニングモデルとして使用できる(U Singhらの文献(Clin Chem 2005;51(12);2252‐6)、K Rutaultらの文献(J Biol Chem 2001;276(9);6666‐74))。
10%FCS及び1%ペニシリン/ストレプトマイシンを補充した変法RPMI‐1640培地(ATCC,カタログ番号30‐2001)において、THP‐1細胞を増殖する。サイトカイン阻害アッセイのために、100ng/mL PMA(Sigma,P1585)を補充した標準的な増殖培地において5×105個/mLの密度で6ウェルプレートに播種して、マクロファージ様細胞への分化を誘導する。24時間後、培地を標準的な増殖培地(PMAなし)と置換し、細胞をさらに48時間インキュベートして分化を完了させる。
分化の72時間後、培地を無血清増殖培地と置換し、DMSOに各々溶解したCDK阻害化合物並びにポジティブコントロールおよびネガティブコントロール等の基準化合物を、0.5〜5μMの範囲の濃度で添加した(ウェルにおけるDMSOの終濃度は0.1%である。)。細胞を化合物と共に60分間にキュベートした後、100ng/mLのLPS(Sigma,L2630)を使用してさらに4〜48時間刺激した。上清を回収し、市販のサンドイッチELISAアッセイ(eBioscience,カタログ番号88‐7346、88‐7066、88‐7010)を使用して、サイトカイン発現について、例えばTNFα、IL‐6及びIL‐1bについて即時アッセイし、又は評価するまで20℃で凍結保存した。
細胞培養上清内でのTNFα、IL6及びIL1βの濃度を、製造元の説明書に従って市販のELISAキット(eBioscience)を使用することによって測定する。
4.THP‐1細胞上清におけるサイトカインのタンパク質発現に及ぼすCDK阻害化合物による処置の効果
CDK阻害化合物#1A、16A、20A、及び25Aを、上述のとおり三つ組で、分化したTHP‐1細胞へ投与した(第2節参照)。検査化合物又は基準化合物(p38阻害剤であるSB203580、IKK阻害剤であるBMS345541)単独によるプレインキュベーションの60分後、細胞をLPSで刺激した。4〜48時間インキュベーション後、上清を回収し、サイトカイン上清濃度のELISAベースの決定を、上述の第3節に記載されるとおり実施した。
これらの発見は、CDK阻害化合物#1A、16A、20A、及び25Aが、サイトカインTNFα及びIL‐6の発現の有効な抑制物質であることを示す。
A.インビトロでのキナーゼ阻害アッセイ
インビトロでの酵素キナーゼ阻害アッセイにおけるサイクリン依存性キナーゼCDK2/CycA、CDK4/CycD1、CDK5/p35NCK、CDK6/CycD1及びCDK9/CycTについて、化合物1A‐30AのIC50特性を決定した。CDK9阻害に関する化合物の特異的選択性及び効力を評価するために、これらのアッセイにおいて得られるIC50値を使用した。
さらに、これらのデータを使用して、効力及び選択性に関して新たな及びさらに改良された構造/化合物の設計を支持する構造活性関係性(SAR)を確立した。
100%DMSOにおける1×10−02Mストック溶液として化合物を使用し、各100μLを3つの96ウェルV字型マイクロタイタープレートの2列目に分注した(以下、該プレートを「マスタープレート」と呼ぶ。)。
その後、100%DMSOを溶媒として使用する連続半対数希釈へマスタープレートの2列目における1×10−02Mストック溶液を供し、結果的に10個の異なる濃度を生じ、希釈終点は、12列目における3×10−07M/100%DMSOであった。1列目及び7列目にコントロールとして100%DMSOを充填した。その後、96チャネルピペッターを使用して、連続希釈したコピープレートの各ウェルの2×5μLを「化合物希釈プレート」の2つの同一セットに分注した。
阻害特性の決定のために、下記の5個のプロテインキナーゼを使用した:CDK2/CycA、CDK4/CycD1、CDK5/p35NCK、CDK6/CycD1及びCDK9/CycT。バキュロウイルス発現系によって、ヒト組換えGST融合タンパク質又はHisタグ化タンパク質として、該プロテインキナーゼをSf9昆虫細胞において発現させた。GSH‐アガロース(Sigma)又はNi‐NTH‐アガロース(Qiagen)のいずれかを使用するアフィニティクロマトグラフィーによって、キナーゼを精製した。各キナーゼの純度をSDS‐PAGE/銀染色によって決定し、キナーゼ特異的抗体を使用するウェスタンブロット分析によって又は質量分析によって、各キナーゼの同一性を確認した。
50μL反応容積におけるPerkin Elmer/NEN(Boston,MA,USA)製の96ウェルFlashPlates(商標)において、すべてのキナーゼアッセイを実施した。反応混合物を下記の順序で4工程においてピペッティングした:
・アッセイ緩衝液20μL(標準緩衝液)
・(H2Oにおける)ATP溶液5μL
・(10%DMSOにおける)検査化合物5μL
・基質10μL/酵素溶液10μL(あらかじめ混合)
すべての酵素についてのアッセイは、60 mM HEPES‐NaOH,pH 7.5、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 μM オルトバナジン酸ナトリウム、1.2 mM DTT、50 μg/mL PEG20000、1 μM [ -33P]-ATP(ウェルあたり約5×1005 cpm)を含有した。
BeckmanCoulter/Sagianロボットシステムを使用して、すべてのアッセイを実施した。
各アッセイプレートの1列目(n=8)における計数の中央値を「低コントロール」と定義した。この値は、プロテインキナーゼの不在下だが基質の存在下でのプレートに対する放射能の非特異的結合を反映する。各アッセイプレートの7列目(n=8)における計数の中央値を「高コントロール」、すなわちいずれかの阻害剤の不在下での完全な活性とみなした。高コントロールと低コントロールとの間の差異を100%活性と呼んだ。データ評価の一部として、高コントロール値から、及び対応するプレートの80個すべての「化合物値」から、特定のプレート由来の低コントロール値を減算した。下記の式を使用することによって、特定のプレートの各ウェルについての残効性(%)を算出した:
残効性(%)=100×[(化合物のcpm−低コントロール)/(高コントロール−低コントロール)]
表3は、実施例1〜157についての生物学的データを示す。
Ac 酢酸塩
AcN アセトニトリル
Boc tert-ブチルオキシカルボニル
CAIBE クロロギ酸イソブチル
Cbz ベンジルオキシカルボニル
DCM ジクロロメタン
DIPEA ジイソプロピルエチルアミン
DMF ジメチルホルムアミド
ESMS 電子スプレー質量スペクトル
HATU 2-(1H-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチル-ウロニウム-ヘキサフルオロ-ホスフェート
HBTU O-ベンゾトリアゾール-N,N,N',N'-テトラメチル-ウロニウム-ヘキサフルオロ-ホスフェート
HOBt 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC 高速液体クロマトグラフィー
NEt3 トリエチルアミン
NMM N-メチルモルフォリン
Rt 保持時間
Ph フェニル
PPh3 トリフェニルホスフィン
THF テトラヒドロフラン
TFA トリフルオロ酢酸
TLC 薄層クロマトグラフィー
Claims (33)
- 一般式(I)の化合物:
(式中:
AがNでありかつBがCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)であり、
RaがH又はメチルであり;
R1が下記からなる群から選択され:
C1-8アルキル;-NR6R7、C1-6アルキル-NR6R7、R20、-C1-6アルキル-R20、-C1-6アルキル-C(O)OR4、C1-6アルキル-C(O)R4、-NR10-(C1-6アルキル)-NR6R7、-NR10-(C1-6アルキル)-R20、-NR10-(C1-6アルキル)-C(O)OR4、-NR10R20、O-(C1-6アルキル)-NR6R7、-O-(C1-6アルキル)-R20、-O-(C1-6アルキル)-C(O)OR4、-OR20、C1-6アルキル-OR20、C1-6アルキル-SR20、C1-C6アルキル-NR10R20、(C1-6アルキル)-O-(C1-6アルキル)-R20、(C1-6アルキル)-S-(C1-6アルキル)-R20、C(O)R20;
ここで、アルキル部分が直鎖又は分岐鎖であり得、かつハロ、メトキシ、エトキシNR6R7又は窒素含有複素環から選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R4がH又はC1-4-アルキルを表し;
R6及びR7が各々独立して、H、C1-6アルキル、ヒドロキシ-C2-6アルキル-からなる群から選択され;
R10が、H又はC1-4アルキルを表し;
R20が、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル及びヘテロシクリルから選択されかつ下記から選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく:
いずれかが1つ以上のハロ又はOH置換基によって置換され得るC1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル;
R21、-C1-4アルキル-R21;OR21、O(C1-4アルキル)R21、SR21、SOR21、SO2R21、C(O)R21、C1-4アルキル-OR21、
いずれかが1つ以上のハロ又はOH置換基によって置換され得る-O(C2-6アルケニル)、-O(C2-6アルキニル);
OR22、-SR22、-SOR22、-SO2R22、-C(O)R22、-C(O)OR22、-C1-4アルキル-O-R22、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-R22、C1-4アルキル-C(O)R22、-C1-4アルキル-C(O)R22、NR11C(O)OR22、NR11C(O)R22、-SO2-NR11R12、-C(O)-NR11R12、-C1-4アルキル-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4アルキル)-SO2R15、-(C1-4アルキル)NR11R12、NR11R12、-(C1-6アルキル)NR11R12、ニトロ、ハロゲン、シアノ及びヒドロキシル;かつR20が、カルボシクリル又はヘテロシクリル又は芳香環が非芳香環に縮合した芳香族基である場合、追加としてR20がオキソによって置換されていてもよく;
R21が、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル及びヘテロシクリルから選択されかつ以下に定義された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R21がアリール基又はヘテロアリール基である場合、該R21は、メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル、フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシから選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R21が炭素環基又は複素環基である場合、該R21は、メチル、オキソ又はハロゲンから選択された1つ以上の置換基によって置換されていてもよく;
R22が水素、又はハロもしくはヒドロキシルによって任意に置換されたC1-6アルキルであり;
R11及びR12が各々独立して、HもしくはC1-4アルキルから選択された1つの置換基を表し、又はR11及びR12が共に3〜8員の非芳香環を形成するよう結合しており;
R15が、H又はC1-4アルキルを表し;
R2がHを表し;
各R3が独立して、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換されている。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR31R32、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR31R32、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR31R32、-NH-SO2R33、-N(C1-4アルキル)-SO2R33、-(C1-4アルキル)NR31R32、-NR31R32、-(C1-6アルキル)NR31R32、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシルからなる群から選択された1つの置換基を表し;
R31及びR32が各々独立して、H、C1-4アルキルもしくはC1-4ハロアルキルから選択された1つの置換基を表し、又はR31及びR32が共に3〜8員の非芳香環を形成するよう結合しており;
R33がH又はC1-4アルキルを表し;
xが1又は2であり、かつフェニル環における独立して選択されたR3置換基の数を表す。)。 - 請求項1記載の化合物:
式(I)において、
AがNでありかつBがCH、C(C1-4アルキル)又はC(NH2)であり、
R1が下記からなる群から選択され:
C1-8アルキル;
C1-8ハロアルキル;
アリール;
ヘテロアリール;
C3-12カルボシクリル;
ヘテロシクリル;
-C1-6アルキル-アリール;
-C1-6アルキル-ヘテロアリール;
-C1-6アルキル-カルボシクリル;
-C1-6アルキル-ヘテロシクリル;
-C1-6アルキル-C(O)OH;
-C1-6アルキル-C(O)OC1-4アルキル;
-NR10C1-6アルキル-アリール;
-NR10C1-6アルキル-ヘテロアリール;
-NR10C1-6アルキル-カルボシクリル;
-NR10C1-6アルキル-ヘテロシクリル;
-NR10C1-6アルキル-C(O)OH;
-NR10C1-6アルキル-C(O)OC1-4アルキル;
-NR10アリール;
-NR10ヘテロアリール;
-NR10カルボシクリル;
-NR10ヘテロシクリル;
-OC1-6アルキル-ヘテロアリール;
-OC1-6アルキル-カルボシクリル;
-OC1-6アルキル-ヘテロシクリル;
-OC1-6アルキル-C(O)OH;
-OC1-6アルキル-C(O)OC1-4アルキル;
-Oアリール;
-Oヘテロアリール;
-Oカルボシクリル;及び
-Oヘテロシクリル;
ここで、前記アリール及びヘテロアリールのいずれかが、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換されている。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(ここで、フェニルは、メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR11R12、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR11R12、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4アルキル)-SO2R15、-(C1-4アルキル)NR11R12、NR11R12、-(C1-6アルキル)NR11R12、ニトロ、ハロゲン、シアノ及びヒドロキシルからなる群から独立して選択された1つ以上の基によって任意に置換されていてもよく;かつ
ここで、前記カルボシクリル及びヘテロシクリルのいずれかは、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換されている。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(ここで、フェニルは、メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR11R12、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR11R12、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4アルキル)-SO2R15、-(C1-4アルキル)NR11R12、-NR11R12、-(C1-6アルキル)NR11R12、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル及びオキソからなる群から独立して選択された1つ以上の基によって任意に置換されていてもよく;
R2はHを表し;
R3は、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、C3-8シクロアルキル(メチル、オキソ又はハロゲンによって任意に置換されている。)、フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-C1-6アルキル-OH、-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、C1-6アルコキシ-、C1-6アルケニルオキシ、C3-6アルキニルオキシ-、C1-6ハロアルコキシ-、-O-C3-8シクロアルキル、-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキル、-O-フェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-O-C1-4アルキルフェニル(メチル、メトキシ、ハロゲン、ハロメチル フルオロメトキシ又はトリフルオロメトキシによって任意に置換されている。)、-S(C1-6アルキル)、-SO(C1-6アルキル)、-SO2C1-6アルキル、-SO2C3-8シクロアルキル、-SO2-NR31R32、-C(O)C1-6アルキル、-C(O)C3-8シクロアルキル、-C(O)OH、-C(O)OC1-6アルキル、-C(O)-NR31R32、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-OH、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C3-7シクロアルキル、-C1-4アルキル-C(O)C1-6アルキル、-C1-4アルキル-C(O)OH、-C1-4アルキル-C(O)OC1-4アルキル、-C1-4アルキル-C(O)-NR31R32、-NH-SO2R33、-N(C1-4アルキル)-SO2R33、-(C1-4アルキル)NR31R32、-NR31R32、-(C1-6アルキル)NR31R32、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシルからなる群から選択された1つの置換基を表し;
R4及びR5は独立して、H又はC1-4-アルキルを表し;
R6及びR7は各々独立して、H、C1-6アルキル、ヒドロキシ-C2-6アルキル-からなる群から選択され;
R10は、H又はC1-4アルキルを表し;
R11及びR12は各々独立して、HもしくはC1-4アルキルから選択された1つの置換基を表し、又はR11 及びR12は、それらが3〜8員の非芳香環を共に形成するよう結合し;
R15は、H又はC1-4アルキルを表し;
R31及びR32は各々独立して、H、C1-4アルキルもしくはC1-4ハロアルキルから選択された1つの置換基を表し、又はR31及びR32は、それらが3〜8員の非芳香環を共に形成するよう結合し;
R33は、H又はC1-4アルキルを表し;
xは1又は2であり、かつ該フェニル環における独立して選択されたR3置換基の数を表し;
mは、1〜4の整数を表し;かつ
nは、2〜4の整数を表す。 - 請求項1又は請求項2記載の化合物:ここで、独立して又はいずれかの組み合わせにおいて、式中、
Raは水素であり;
BはCH又はC1-4アルキルであり;
R2は水素であり、
R3はハロゲン、C1-6アルコキシ、-O-C1-4アルキルフェニル(例えば、-O-ベンジル)又は-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキルであり;かつ
xは1又は2である。 - 請求項3記載の化合物:ここで、独立して又はいずれかの組み合わせにおいて、式中、
Bは、CHであり;
R2は水素であり;かつ
R3は、ハロゲン、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、ベンジルオキシ又は-OCH2シクロプロピルである。 - xが1でありかつR3がC1-6アルコキシ、-O-C1-4アルキルフェニル又は-O-C1-4アルキル-C3-8シクロアルキルを表す、請求項3〜4のいずれか一項記載の化合物。
- xが2でありかつR3基のうちの1つがメトキシ、エトキシ、-イソプロピルオキシ、ベンジルオキシ又は(1-シクロプロピル)メトキシであり、かつその他のR3基がハロである、請求項3〜4のいずれか一項記載の化合物。
- R1が下記のものである請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物:
-C1-C6アルキル;
-R20;
-C(O)R20;
-C1-C6アルキル-R20、
(式中、該アルキル基は、ハロ、メトキシ、エトキシ、-NR6R7又は窒素含有複素環で任意に置換されている。)
-C1-C6アルキル-OR20;
-(C1-C6アルキル)-O-(C1-C6アルキル)-R20;
-C1-C6アルキル-NR10R20;
-C1-C6アルキル-SR20;
-NR10R20;
-NR6R7;
-NR10-(C1-C6アルキル)-NR6R7又は
-NR10-(C1-6アルキル)-C(O)OH;
(式中、R6、R7、R10及びR20は、請求項1に定義されるとおりである。)。 - R1が、R20又はNR10R20を表し、かつR20が置換された又は非置換のカルボシクリル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基である、請求項7記載の化合物。
- R1が、置換されたカルボシクリル基であり、ここで該置換基が、該分子の残部に対し該カルボシクリル基を連結するのと同一原子にある、請求項8記載の化合物。
- R1がC(O)R20を表し、かつR20が、請求項1記載の非置換であり得る又は置換され得るアリール基もしくはヘテロアリール基、又はヘテロシクリル基である、請求項9記載の化合物。
- R20が、フェニル基又は6員のヘテロシクリル基である、請求項10記載の化合物。
- R1がC1-C6アルキル-R20を表しかつR20がアリール基、ヘテロアリール基又はヘテロシクリル基であり、それらのいずれかが請求項1に記載されているように任意に置換されていてもよい、請求項7記載の化合物。
- R1が、C1-C6アルキル-OR20、-(C1-C6アルキル)-O-(C1-C6アルキル)-R20、C1-C6アルキル-NR10R20又はC1-C6アルキル-SR20を表し、かつR20が、請求項1に記載されているように任意に置換されたアリール基又はヘテロアリール基である、請求項7記載の化合物。
- R20が、酸素、硫黄又は窒素から独立して選択された1つ又は2つのヘテロ原子を含有する5員又は6員のヘテロシクリル環である、請求項1〜8又は10〜12のいずれか一項記載の化合物。
- R20が、ピペリジニル環、ピロリジニル環、テトラヒドロピラニル環又はテトラヒドロチオピラニル環である、請求項14記載の化合物。
- 前記ヘテロシクリル環R20が、非置換であり又は、オキソ、-C1-4アルキル、-C1-4アルキル-O-C1-4アルキル、-C(O)C1-4アルキル、-C(O)OC1-4アルキル、ハロゲン及び-C1-4アルキルR21から独立して選択された1つ以上の置換基によって置換されている、請求項14又は15記載の化合物。
- R20が、非置換であり又は、1つ以上の-C1-8アルキル、オキソ、-NH2、-NHC(O)C1-4アルキル、-NHC(O)OC1-4アルキル、-C(O)NH2、任意に置換されたアリール基又はヘテロアリール基によって置換されているシクロアルキル基を表す、請求項1〜9のいずれか一項記載の化合物。
- R20が、-NH-SO2C1-4アルキル、C1-4アルキル、-O(C1-4アルキル)、-NHR12から選択された1つ以上の置換基で任意に置換されたナフチル又はフェニルを表し、ここで、R12が、先に定義されるとおり、アリール、ヘテロアリール、ニトロ及びハロである、請求項1〜8又は10〜13のいずれか一項記載の化合物。
- R20が、単環の5員又は6員のヘテロアリール環系を表す、請求項1〜8、10、12又は13のいずれか一項記載の化合物。
- R20が、不飽和ヘテロシクリル環に縮合したフェニルを含む、又は1つ以上のさらなるヘテロ原子を任意に含有する不飽和環に縮合したヘテロアリール部分を含む二環のヘテロアリール基を表す、請求項1〜8、10、12又は13のいずれか一項記載の化合物。
- R20が、非置換であり又は、C1-4アルキル、ハロ、-(C1-C4アルキル)-O-R21又はR21から選択された1つ以上の置換基で置換されており、ここで、R21が非置換のフェニル又はヘテロアリールである、請求項19又は請求項20記載の化合物。
- R1が、-NR6R7であり;又は-NR10-(C1-C6アルキル)-NR6R7であり、かつR6及びR7が各々独立して水素又はC1-C4アルキルである、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
- R1が、-C1-C6アルキル-NR10R20;-NR10R20;-NR10-(C1-C6アルキル)-NR6R7又は-NR10-(C1-6アルキル)-C(O)OHであり;かつR10が水素又はメチルである、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
- 疼痛、炎症性障害、増殖性疾患、免疫学的疾患、感染性疾患、心血管疾患及び神経変性疾患から選択される疾患及び容態の治療又は予防のための薬剤の製造における請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 活性成分としての使用のために請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物を含む、医薬組成物。
- 請求項1〜24のいずれか一項記載の式(I)の化合物又はその保護された誘導体の製造方法であって、
(a)式(I)の1つの化合物を式(I)の別の化合物へ変換すること;
を含む、前記製造方法。 - 請求項1〜24のいずれか一項記載の式(I)の化合物又はその保護された誘導体の製造方法であって、
(g)請求項29に定義される式Fの化合物を下記式の化合物:
R20N=C=O又はR20-(C1-6アルキル)-N=C=O
(式中、R20は、一般式(I)について定義されるとおりであり、例えば、R20は、ピリジンのようなヘテロアリール基を表す。)と反応させることによって、R1が-NHR20又は-NH-(C1-6アルキル)-R20である式(I)の化合物を製造すること;
を含む、前記製造方法。
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