CN108884070B - 作为溴结构域抑制剂的吡啶基衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)化合物及其盐，含有此类化合物的药物组合物以及它们在治疗中的用途。

Description

作为溴结构域抑制剂的吡啶基衍生物
发明领域
本发明涉及为溴结构域抑制剂的吡啶基衍生物，其制备方法，包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物或组合物在治疗各种疾病或病况（例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病况、病毒感染和癌症）中的用途。
发明背景
真核生物的基因组在细胞核内高度组织化。双链DNA的长链包裹在组蛋白的八聚体（最通常包含组蛋白H2A、H2B、H3和H4的两个拷贝）周围以形成核小体。然后通过核小体的聚集和折叠进一步压缩该基本单元，以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同的凝聚状态是可能的，并且该结构的紧密度在细胞周期期间变化，在细胞分裂过程中最紧密。染色质结构在调节基因转录中起关键作用，基因转录不能从高度凝聚的染色质中有效发生。染色质结构由对组蛋白（特别是组蛋白H3和H4）的一系列翻译后修饰控制，并且最常见于延伸超出核心核小体结构的组蛋白尾部内。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、SUMO化。这些表观遗传标记由特定酶编写和擦除，所述酶将标记置于组蛋白尾部内的特定残基上，从而形成表观遗传密码，该密码然后由细胞解译以允许染色质结构的基因特异性调节和由此转录。
组蛋白乙酰化最通常与基因转录的激活有关，因为该修饰通过改变静电学来放松DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除了这种物理变化，特定的蛋白质识别并结合组蛋白内的乙酰化赖氨酸残基，以读取表观遗传密码。溴结构域是蛋白质中的小（~110个氨基酸）而独特的结构域，其通常但不仅仅在组蛋白的情况下与乙酰化赖氨酸残基结合。已知具有大约50种蛋白质的家族含有溴结构域，它们在细胞内具有一系列功能。
含有溴结构域的蛋白质的BET家族包含4种蛋白质（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT），它们含有能够与紧密接近的两个乙酰化赖氨酸残基结合的串联溴结构域，增加了相互作用的特异性。从每个BET蛋白的N-末端编号，串联溴结构域通常标记为结合域1（BD1）和结合域2（BD2）(Chung et al, J Med. Chem,. 2011, 54, 3827-3838)。
Chan等人报道BET溴结构域的抑制抑制了人单核细胞中以基因特异性方式对细胞因子-Jak-STAT信号传导的转录应答，这表明BET的抑制通过抑制细胞因子活性部分地减少了炎症(Chan et al., Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297)。
Klein等人报道溴结构域蛋白抑制剂I-BET151抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞中炎症基因和基质降解酶的表达，这表明在类风湿性关节炎中靶向表观遗传阅读蛋白具有治疗潜力(Klein et al.,Ann. Rheum. Dis., 2014, 0:1-8)。
Park-Min等人报道靶向通过与乙酰化组蛋白结合“读取”染色质状态的溴和外末端（BET）蛋白质的I-BET151强烈抑制破骨细胞生成(Park-Min et al. Nature Communications, 2014, 5, 5418)。
PCT专利申请PCT/EP2016/070519、PCT/EP2016/072216和PCT/EP2016/073532各自描述了一系列作为溴结构域抑制剂的吡啶酮衍生物。
发明概述
本发明涉及式(I)化合物
Figure 224224DEST_PATH_IMAGE001
或其盐
其中：
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-4烷基-杂环基、-CH2CH(OH)-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被一个、两个或三个可相同或不同的R5基团取代；
R3是-H、-C1-4烷基、环丙基、氟、氯、-CH2F、-C0-3烷基OR10或C0-3烷基CN；
R4是苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代；
各R5独立地是卤素、-C1-4烷基、C3-4环烷基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3烷基OR8、-C0-3烷基NR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、氧代、-CO2R8、-C(O)R8或-C(O)NR11R12；
各R6独立地是卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR7、氧代、-CO2R8、-C0-3烷基NR16R17、-C0-3烷基-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3烷基或-SO2NR16R17；
R7是-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR16R17或-C2-3烷基OH；
R8是–H或-C1-4烷基；
R10是-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR14R15或-C2-3烷基OH；
R11和R12各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；
R14和R15各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R14和R15可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；
R16和R17各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R16和R17可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；且
p是选自2、3或4的整数。
已显示本发明化合物是溴结构域抑制剂，特别是BD2选择性的，并且可用于治疗各种疾病或病况，例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病况，例如类风湿性关节炎和癌症。因此，本发明还涉及包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本发明还涉及使用式（I）化合物或其药学上可接受的盐、或包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物治疗与溴结构域相关的疾病或病况的方法。本发明还涉及制备式（I）化合物的方法。
发明详述
式（I）化合物及其盐在本文中称为“本发明化合物”。
“BD2”是指BET家族的蛋白质BRD2、BRD3、BRD4或BRDT的任何一个的结合域2。
“烷基”是指具有指定碳原子数的饱和烃链。例如，如本文所用的术语“C1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。例如，术语“C0-3烷基”是指具有0（即，键）至3个碳原子的直链或支链烷基。代表性的支链烷基具有一个、两个或三个支链。烷基可以形成链的一部分，例如，-C0-4烷基-杂环基是指具有与杂环基连接的0（即，键）至4个碳原子的直链或支链烷基链。“烷基”包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。
“环烷基”是指饱和的烃单环或双环或饱和的螺接的双环烃环，其在环中具有指定数目的成员原子。例如，本文所用的术语“C3-7环烷基”是指具有3至7个成员原子的环烷基。C3-7环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和螺[3.3]庚烷。
“对映体过量”（ee）是一种对映体相对于另一种对映体的过量，以百分比表示。在外消旋修饰中，由于两种对映体以相等的量存在，因此对映体过量为零（0％ee）。然而，如果富集一种对映体使其占产物的95％，那么对映体过量将是90％ee（富集的对映体的量95％减去另一种对映体的量5％）。
“对映体富集的”是指其中对映体过量（ee）大于零的产物。例如，“对映体富集”是指其中对映体过量大于50％ee、大于75％ee和大于90％ee的产物。
如本文所用，“对映体纯的”是指其中对映体过量为99％或更高的产物。
“半衰期”（或“半寿期”）是指一半量的物质在体外或体内转化为另一种化学上不同的物质所需的时间。
“卤素”是指卤素基团，例如氟、氯、溴或碘。
“杂芳基”是指具有5、6、8、9、10或11个成员原子，包括1、2或3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子的单环或双环基团，其中该基团的至少一部分是芳族的。与分子其余部分的连接点可以是通过任何合适的碳或氮原子。“杂芳基”的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、二氢苯并二氧杂芑基（dihydrobenzodioxinyl）、苯并噻吩基、苯并氮杂䓬基、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂䓬基、吲嗪基、吲哚基、二氢吲哚基（indolinyl）、异吲哚基、二氢吲哚基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑基、苯并噁唑基、二氢苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、二氢苯并异噻唑基、吲唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并三唑基、三唑并吡啶基、嘌呤基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、1,5-萘啶基、1,6-萘啶基、1,7-萘啶基、1,8-萘啶基和蝶啶基。
“杂原子”是指氮、硫或氧原子。
“杂环基”是指含有4、5、6、7、8、9或10个环成员原子，包括一个杂原子并任选地含有选自氮、氧或硫的其它杂原子的非芳族杂环单环或双环系统。“杂环基”的实例包括但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、1,3-二氧杂环戊基、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、1,3-二氧杂环己基、1,4-二氧杂环己基、1,3-氧硫杂环戊基、1,3-氧硫杂环戊烷基（1,3-oxathianyl）、1,3-二噻烷基、1,4-氧硫杂环戊基、1,4-氧硫杂环己基、1,4-二噻烷基、吗啉基、硫代吗啉基、六氢-1H-1,4-二氮杂䓬基、氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂双环[4.3.0]壬基、氧杂双环[2.2.1]庚基、1,1-二氧化四氢-2H-噻喃基、1,5,9-三氮杂环十二烷基、3-氧杂双环[3.1.0]己基和3-氮杂双环[3.1.0]己基。“4至7元杂环基”是指含有4、5、6或7个环成员原子，包括一个杂原子并任选地含有选自氮、氧或硫的其它杂原子的非芳族杂环单环或双环系统。
“成员原子”是指形成链或环的一个或多个原子。当链中和环内存在多于一个成员原子时，每个成员原子与链或环中的相邻成员原子共价键合。构成与链或环连接的取代基的原子不是链或环中的成员原子。
关于基团的“(被)取代”表示连接在基团内的成员原子上的氢原子被替代。应当理解，术语“(被)取代”包括隐含的条款，即这种取代与被取代的原子和取代基的允许的价态一致，并且该取代产生稳定的化合物（即不会自发地进行诸如重排、环化或消除之类的转化的化合物）。在某些实施方案中，单个原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合原子的允许价态即可。对于每个被取代或任选被取代的基团，本文定义了合适的取代基。
“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过多毒性、刺激或其它问题或并发症，并且与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和剂型。
“药学上可接受的赋形剂”是指涉及赋予药物组合物形式或稠度的药学上可接受的材料、组合物或媒介物。当混合时，每种赋形剂必须与药物组合物的其它成分相容，以避免当给予患者时显著降低式（I）化合物或其药学上可接受的盐的功效的相互作用。此外，每种赋形剂当然必须是药学上可接受的，例如，纯度足够高的。
“rac”是指式（I）化合物的外消旋混合物。
本发明的化合物可以以固体或液体形式存在。在固态下，本发明的化合物可以以结晶或非结晶形式存在，或以其混合物存在。对于结晶形式的本发明化合物，技术人员将理解可以形成药学上可接受的溶剂化物，其中溶剂分子在结晶期间结合到晶格中。溶剂化物可以包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、N,N-二甲基亚砜（DMSO）、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或者它们可以包含水作为结合到晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量水的组合物。本发明包括所有这些溶剂化物。
还应理解，以结晶形式存在的某些本发明化合物，包括其各种溶剂化物，可表现出多晶型（即以不同结晶结构存在的能力）。这些不同的结晶形式通常称为“多晶型物”。本发明包括这些多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在堆积、几何排列和结晶固态的其它描述性质方面不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出不同的熔点、IR光谱和X射线粉末衍射图，这些可用于鉴定。应当理解，可以产生不同的多晶型物，例如，通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂。例如，温度、压力或溶剂的变化可能导致多晶型物。另外，一种多晶型物可在某些条件下自发地转化为另一种多晶型物。可以使用许多常规分析技术表征和区分式（I）化合物的多晶型，包括但不限于X射线粉末衍射（XRPD）图、红外（IR）光谱、拉曼光谱、差示扫描量热法（DSC）、热重分析（TGA）和固态核磁共振（SSNMR）。
根据式（I）的化合物可含有一个或多个不对称中心（也称为手性中心），因此可以以单独的对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式或其混合物形式存在。手性中心，例如手性碳原子，也可以存在于取代基如烷基中。当未指定式（I）中或本文所示的任何化学结构中存在的手性中心的立体化学时，该结构旨在涵盖任何立体异构体及其所有混合物。因此，含有一个或多个手性中心的根据式（I）的化合物可以以外消旋混合物、对映体富集的混合物的形式使用，或以对映体纯的单独的立体异构体的形式使用。因此，本发明包括式（I）化合物的所有异构体，无论是作为经分离以例如基本上不含其它异构体（即纯的）的单独的异构体，还是作为混合物（即外消旋混合物）。可以分离经分离以使得基本上不含其它异构体（即纯的）的单独的异构体，使得存在少于10％，特别是少于约1％，例如少于约0.1％的另一种异构体。
具有单个立体中心的外消旋化合物通过无立体化学（单键）或具有注释（+/-）或rac表示。已知相对立体化学中具有两个或更多个立体中心的外消旋化合物如在结构中绘制的表示为顺式（顺式）或反式（反式）。具有未知绝对立体化学但已知相对立体化学的已拆分的单一对映体用（R*或S*）表示，其具有所描绘的适当的相对立体化学。
在表示非对映异构体且仅涉及相对立体化学的情况下，使用粗体或散列的实键符号
Figure 203682DEST_PATH_IMAGE002
。在已知绝对立体化学且化合物为单一对映体的情况下，适当使用粗体或散列的楔形符号
Figure 983419DEST_PATH_IMAGE003
。
含有一个或多个不对称中心的根据式（I）的化合物的单个立体异构体可以通过本领域技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以通过以下方式进行：（1）形成非对映异构体盐、络合物或其它衍生物；（2）与立体异构体特异性试剂选择性反应，例如通过酶促氧化或还原；或（3）在手性环境中通过气-液或液相色谱法，例如在手性载体如带有结合的手性配体的二氧化硅上或在手性溶剂存在下。应当理解，当通过上述分离方法之一将所需的立体异构体转化为另一种化学实体时，需要进一步的步骤来释放所需的形式。或者，可以通过使用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种，来合成特定的立体异构体。
应理解，对于式（I）化合物，可能观察到互变异构体。任何与互变异构体的生物活性有关的评论都应该认为包括两种互变异构体。
应理解，本文提及的式（I）化合物及其盐包括作为游离碱或作为其盐例如作为其药学上可接受的盐的式（I）化合物。因此，在一个实施方案中，本发明涉及作为游离碱的式（I）化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及式（I）化合物及其盐。在进一步的实施方案中，本发明涉及式（I）的化合物及其药学上可接受的盐。
由于它们在医药中的潜在用途，式（I）化合物的盐合意地是药学上可接受的。合适的药学上可接受的盐可包括酸加成盐或碱加成盐。关于合适的药学上可接受的盐的综述，参见Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)。通常，通过适当使用所需的酸或碱，可以容易地制备药学上可接受的盐。所得盐可以从溶液中沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。
药学上可接受的酸加成盐可以通过式（I）化合物与合适的无机或有机酸（例如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸（如2-萘磺酸）或己酸）的反应来形成，任选在合适的溶剂如有机溶剂中，以得到盐，所述盐通常例如通过结晶和过滤或通过蒸发然后研磨来分离。式（I）化合物的药学上可接受的酸加成盐可包含或是例如氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐（如2-萘磺酸盐）或己酸盐。
其它非药学上可接受的盐，例如甲酸盐或三氟乙酸盐，可以用于例如分离式（I）化合物，并包括在本发明的范围内。
本发明在其范围内包括式（I）化合物的所有可能的化学计量和非化学计量形式的盐。
从上述内容可以理解，式（I）化合物及其盐的溶剂化物、异构体和多晶型包括在本发明范围内。
发明内容
在第一方面，提供了式（I）的化合物：
Figure 378628DEST_PATH_IMAGE004
或其盐
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-4烷基-杂环基、-CH2CH(OH)-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被一个、两个或三个可相同或不同的R5基团取代；
R3是-H、-C1-4烷基、环丙基、氟、氯、-CH2F、-C0-3烷基OR10或C0-3烷基CN；
R4是苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代；
各R5独立地是卤素、-C1-4烷基、C3-4环烷基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3烷基OR8、-C0-3烷基NR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、氧代、-CO2R8、-C(O)R8或-C(O)NR11R12；
各R6独立地是卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR7、氧代、-CO2R8、-C0-3烷基NR16R17、-C0-3烷基-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3烷基或-SO2NR16R17；
R7是-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR16R17或-C2-3烷基OH；
R8是-H或-C1-4烷基；
R10是-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR14R15或-C2-3烷基OH；
R11和R12各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；
R14和R15各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R14和R15可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；
R16和R17各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R16和R17可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；且
p是选自2、3或4的整数。
在一个实施方案中，提供了式（I）的化合物或其盐，其中：
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-4烷基-杂环基、-CH2CH(OH)-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被一个、两个或三个可相同或不同的R5基团取代；
R3是-H、-C1-4烷基、环丙基、氟或-C0-3烷基OR10；
R4是苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代；
各R5独立地是卤素、-C1-4烷基、C3-4环烷基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3烷基OR8、-C0-3烷基NR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、氧代、-CO2R8、-C(O)R8或-C(O)NR11R12；
各R6独立地是卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR7、-C0-3烷基NR16R17、-C0-3烷基-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3烷基或-SO2NR16R17；
R7是-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR16R17或-C2-3烷基OH；
R8是-H或-C1-4烷基；
R10是-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR14R15或-C2-3烷基OH；
R11和R12各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；
R14和R15各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R14和R15可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；
R16和R17各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R16和R17可与它们所连接的氮连接在一起以形成4至7-元杂环基，所述杂环基任选被一个或两个独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F的取代基取代；且
p是选自2、3或4的整数。
在一个实施方案中，R1是甲基。在另一个实施方案中，R1是乙基。
在一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基任选被一个、两个或三个可相同或不同的R5基团取代。在另一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁基、氮杂环丁基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，任选被一个或两个可相同或不同的R5基团取代。在进一步的实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基是(1R,5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己基，任选被一个或两个可相同或不同的R5基团取代。在进一步的实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基是1,3-二氧杂环己-2-基，任选被一个或两个可相同或不同的R5基团取代。
在一个实施方案中，R3是-H、-C1-4烷基、环丙基、氟或-C0-3烷基OR10。在一个实施方案中，R3是-H、甲基、乙基、氟、-OCH3、-OH、-CH2F、-CH2OMe或-CH2CN。在一个实施方案中，R3是-H、甲基、氟、-OCH3或-OH。
在一个实施方案中，R4是任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代的苯基，所述R6基团选自-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR7和CN。在一个实施方案中，R4是任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代的苯基，所述R6基团选自卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR7和CN。在一个实施方案中，R4是任选被一个或两个可相同或不同的R6基团取代的苯基，所述R6基团选自氯、甲基和-OCH3。
在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其是任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代的二氢吲哚基。在一个实施方案中，R4是杂芳基，其是任选被氧代取代的二氢吲哚基。
在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其是任选被一个、两个或三个可相同或不同的R6基团取代的吲哚基。在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其是任选被一个或两个可相同或不同的R6基团取代的吲哚基，所述R6基团选自氟、甲基、-CN或-CH2CH2OH。在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其是1H-吲哚-4-基。
在一个实施方案中，各R6独立地是卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR7、-C0-3烷基NR16R17、-C0-3烷基-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3烷基或-SO2NR16R17。在一个实施方案中，各R5选自卤素、C1-4烷基、-CH2CHF2、氧代、-C0-3烷基NR11R12、-CO2C(CH3)3和-C(O)R8。在一个实施方案中，R5选自卤素、C1-4烷基、-CH2CHF2、氧代、-CO2C(CH3)3和-C(O)R8。在另一个实施方案中，R5选自氟、-CO2C(CH3)3、-CH2CHF2、-CH(CH3)2、-C(O)CH3、氧代和甲基。在另一个实施方案中，各R5选自氟、-CO2C(CH3)3、-CH2CHF2、-CH(CH3)2、-NH2、-N(Me)2、-C(O)CH3、氧代和甲基。
应理解，本发明涵盖上文所述的取代基的所有组合。
本发明化合物包括实施例1至172的化合物及其盐。
本发明化合物包括实施例1-87的化合物及其盐。
在一个实施方案中，式（I）化合物选自：
N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺;
N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺;
6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2 -甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;和
N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S)-羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物选自：
N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;
N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-苄基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;
N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(二氢吲哚-4-基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;和
N4-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 193000DEST_PATH_IMAGE005
或其盐。
在另一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
Figure 828512DEST_PATH_IMAGE006
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是
Figure 95545DEST_PATH_IMAGE007
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 294446DEST_PATH_IMAGE008
或其盐。
在另一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
Figure 963324DEST_PATH_IMAGE009
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是
Figure 956688DEST_PATH_IMAGE010
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 773334DEST_PATH_IMAGE011
或其盐。
在另一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
Figure 510346DEST_PATH_IMAGE012
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是
Figure 33731DEST_PATH_IMAGE013
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 463576DEST_PATH_IMAGE014
或其盐。
在另一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
Figure 705201DEST_PATH_IMAGE015
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是
Figure 980325DEST_PATH_IMAGE016
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 433915DEST_PATH_IMAGE017
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 769082DEST_PATH_IMAGE018
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 498003DEST_PATH_IMAGE019
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物是：
Figure 576818DEST_PATH_IMAGE020
或其盐。
在本发明的第二方面，提供了药物组合物，其包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在本发明的第三方面，提供了式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，特别是用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况。
在本发明的第四方面，提供在需要其的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的第五方面，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况的药物中的用途。
用途说明
式（I）化合物及其盐是溴结构域抑制剂，并因此被认为在治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况中具有潜在用途。
据信，溴结构域抑制剂可用于治疗与全身或组织炎症、对感染或缺氧的炎症反应、细胞活化和增殖、脂质代谢、纤维化有关的各种疾病或病况以及预防和治疗病毒感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种各样的急性或慢性自身免疫和/或炎性病况，如类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、哮喘、慢性阻塞性气道疾病、肺炎、心肌炎、心包炎、肌炎、湿疹、皮炎（包括特应性皮炎）、脱发、白癜风、大疱性皮肤病、肾炎、血管炎、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、Sjögren综合征、唾液腺炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、Irvine-Gass综合征（后发性白内障和术后）、视网膜色素变性、睫状体扁平部炎、鸟枪弹样视网膜脉络膜病变、视网膜前膜、囊性黄斑水肿、旁中心凹毛细管扩张(parafoveal telengiectasis)、牵张性黄斑病、玻璃体黄斑牵引综合征、视网膜脱离、神经视网膜炎、特发性黄斑水肿、视网膜炎、干眼症（干燥性角膜结膜炎）、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、葡萄膜炎（如前葡萄膜炎、全葡萄膜炎、后葡萄膜炎、葡萄膜炎相关性黄斑水肿）、巩膜炎、糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、年龄相关性黄斑营养不良、肝炎、胰腺炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、阿狄森氏病、垂体炎、甲状腺炎、I型糖尿病、II型糖尿病、巨细胞动脉炎、肾炎(包括狼疮性肾炎)、器官受累的血管炎(如肾小球肾炎)、血管炎(包括巨细胞动脉炎)、韦格纳肉芽肿病、结节性多发性动脉炎、白塞氏（Behcet）病、川崎（Kawasaki）病、高安氏（Takayasu）动脉炎、坏疽性脓皮病、器官受累的血管炎、移植器官的急性排斥和系统性硬化。
在一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是通过APO-A1的调节介导的脂质代谢病症，例如高胆固醇血症、动脉粥样硬化或阿尔茨海默病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是呼吸系统病症，例如哮喘或慢性阻塞性气道疾病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是全身性炎性病症，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症或炎性肠病（克罗恩病或溃疡性结肠炎）。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是多发性硬化症。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是I型糖尿病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是类风湿性关节炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗抑郁症。
溴结构域抑制剂可用于治疗涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病况，如败血症、急性败血症、败血症综合征、感染性休克、内毒素血症、全身炎症反应综合征（SIRS）、多器官功能障碍综合征、中毒性休克综合征、急性肺损伤、ARDS（成人呼吸窘迫综合征）、急性肾衰竭、暴发性肝炎、烧伤、急性胰腺炎、术后综合征、结节病、Herxheimer反应、脑炎、脊髓炎、脑膜炎、疟疾和与例如流感、带状疱疹、单纯疱疹和冠状病毒等病毒感染有关的SIRS。在一个实施方案中，涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病况是急性败血症。
溴结构域抑制剂可用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病况，如心肌梗塞、脑血管缺血（中风）、急性冠状动脉综合征、肾再灌注损伤、器官移植、冠状动脉旁路移植术、心肺旁路手术，肺、肾、肝、胃肠或外周肢体栓塞。
溴结构域抑制剂可用于治疗心血管疾病，如冠状动脉疾病（如心绞痛或心肌梗塞）、肺动脉高压、脑血管缺血（中风）、高血压性心脏病、风湿性心脏病、心肌病、心房颤动、先天性心脏病、心内膜炎、主动脉瘤或外周动脉疾病。
溴结构域抑制剂可用于治疗纤维化病况，如特发性肺纤维化、肺纤维化、囊性纤维化、进行性大块纤维化、肾纤维化、肝纤维化、肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）、术后狭窄、瘢痕疙瘩形成、硬皮病（包括硬斑病和系统性硬化症）、心肌纤维化、心房纤维化、心内膜纤维化、陈旧性心肌梗死、关节纤维化、Dupuytren挛缩、纵隔、骨髓纤维化、Peyronie's病、肾源性系统性纤维化、腹膜后纤维化和粘连性囊炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗病毒感染，如单纯疱疹感染和再激活、唇疱疹、带状疱疹感染和再激活、水痘、带状疱疹、人乳头瘤病毒（HPV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、宫颈肿瘤、腺病毒感染(包括急性呼吸道疾病)、痘病毒感染(如牛痘或天花)、或非洲猪瘟病毒。在一个实施方案中，病毒感染是皮肤或宫颈上皮细胞的HPV感染。在另一个实施方案中，病毒感染是潜伏的HIV感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种各样的骨病症，如骨质疏松症、骨质减少、骨关节炎和强直性脊柱炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗癌症，包括血液癌症（例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤）、上皮癌（包括肺癌、乳腺癌或结肠癌）、中线癌或间充质、肝、肾或神经肿瘤。
溴结构域抑制剂可用于治疗选自以下的一种或多种癌症：脑癌（胶质瘤）、胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、Cowden病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、结肠直肠癌、肾母细胞瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、混合谱系白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST（胃肠道间质瘤）、NUT-中线癌和睾丸癌。
在一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病和混合谱系白血病（MLL）的白血病。在另一个实施方案中，癌症是NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌（SCLC）。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特氏淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食道癌。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是去势抗性前列腺癌。
溴结构域抑制剂可用于治疗与全身性炎症反应综合征相关的疾病，例如败血症、烧伤、胰腺炎、严重创伤、出血和局部缺血。在该实施方案中，将在诊断时给予溴结构域抑制剂以降低SIRS、休克发作、多器官功能障碍综合征（其包括急性肺损伤的发作，ARDS，急性肾、肝、心脏或胃肠损伤和死亡）的发生率。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂可在外科手术或与败血症、出血、广泛组织损伤、SIRS或MODS（多器官功能障碍综合征）的高风险相关的其它手术之前给予。在一个具体实施方案中，适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况是败血症、败血症综合征、败血性休克和内毒素血症。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗急性或慢性胰腺炎。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗烧伤。
因此，本发明提供了用于治疗的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。式（I）化合物或其药学上的盐可用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况。
因此，本发明提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况。在一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病况。在一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病况。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病况。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗心血管疾病。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗纤维化病况。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗病毒感染。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗骨病症。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。在进一步的实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与全身性炎症反应综合征相关的疾病。
还提供了式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况的药物中的用途。在一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病况的药物中的用途。在一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病况的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病况的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗纤维化病况的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗病毒感染的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与全身性炎症反应综合征相关的疾病的药物中的用途。
还提供治疗有需要的对象的适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况的方法，包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的急性或慢性自身免疫和/或炎性病况的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的类风湿性关节炎的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象中涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病况的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象中与缺血-再灌注损伤相关的病况的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的心血管疾病的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的纤维化病况的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的病毒感染的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的癌症的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供治疗有需要的对象的与全身性炎症反应综合征相关的疾病的方法，其包括给予治疗有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。
适当地，有需要的对象是哺乳动物，特别是人。
本发明还提供抑制含溴结构域蛋白质的方法，该方法包括使含溴结构域的蛋白质与式（I）化合物或其药学上可接受的盐接触。
如本文所用，对特定疾病或病况的“治疗”的提及包括预防（prevention或prophylaxis）这种疾病或病况。
药物组合物/给药途径/剂量
组合物
虽然为了用于治疗，可以将式（I）化合物及其药学上可接受的盐作为原料化学品给药，但通常将活性成分以药物组合物的形式呈现。式（I）化合物及其药学上可接受的盐将通常，但不是必须，在给药于患者之前配制成药物组合物。因此，在另一方面，提供了药物组合物，其包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的赋形剂。式（I）化合物和药学上可接受的盐如上所述。一种或多种赋形剂在与组合物的其它成分相容并且对其接受者无害的意义上必须是可接受的。根据本发明的另一个方面，还提供了制备药物组合物的方法，包括将式（I）化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以通过例如在环境温度和大气压下混合来制备。药物组合物可用于治疗本文所述的任何病况。
在另一方面，本发明涉及用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况的药物组合物，其包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐。
由于式（I）化合物旨在用于药物组合物，因此很容易理解它们各自优选以基本上纯的形式提供，例如，至少85％纯，特别是至少98％纯（％，以重量/重量计）。
药物组合物可以以每单位剂量含有预定量活性成分的单位剂型存在。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的日剂量或亚剂量或其适当部分的那些。因此，这种单位剂量可以每天给药超过一次。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的如上所述的日剂量或亚剂量（每天给药超过一次），或其适当部分的那些。
药物组合物可以适于通过任何适当的途径给药，例如通过口服（包括口腔或舌下）、直肠、吸入、鼻内、局部（包括口腔，舌下或透皮）、眼部（包括局部、眼内、结膜下、巩膜外、眼球筋膜囊下）、阴道或肠胃外（包括皮下、肌内、静脉内或皮内）途径。此类组合物可通过药学领域中已知的任何方法制备，例如通过使活性成分与一种或多种载体或赋形剂结合。
本发明的药物组合物可以以散装形式制备和包装，其中可以提取安全和有效量的式（I）化合物或其药学上可接受的盐，然后例如用粉末或糖浆给予患者。或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型制备和包装，其中每个物理上离散的单元含有式（I）化合物或其药学上可接受的盐。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物通常可含有例如0.25mg至1g，或0.5mg至500mg，或1mg至100mg的式（I）化合物或其药学上可接受的盐。
通常将式（I）化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂配制成适于通过期望的给药途径给予患者的剂型。例如，剂型包括适于以下给药途径的那些：（1）口服给药，例如片剂、胶囊、囊片、丸剂、锭剂、粉末、糖浆、酏剂、混悬液、溶液、乳剂、小药囊和扁囊剂；（2）肠胃外给药，如无菌溶液、混悬液和用于复溶的粉末；（3）透皮给药如透皮贴剂；（4）直肠给药如栓剂；（5）吸入，如气溶胶、溶液和干粉；（6）局部给药，如乳膏、软膏、洗液、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选的具体剂型而变化。另外，可以出于它们可在组合物中起作用的特定功能而选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可以出于它们有助于产生均匀剂型的能力而选择某些药学上可接受的赋形剂。可以出于它们有助于产生稳定剂型的能力而选择某些药学上可接受的赋形剂。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们一旦给予对象便能够有助于将一种或多种式（I）化合物或其药学上可接受的盐从一个器官或身体的一部分携带或运输至另一个器官或身体的一部分。可以出于它们增强对象顺应性的能力而选择某些药学上可接受的赋形剂。
合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：载体、稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、悬浮剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、掩味剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以起到多于一种的功能，并且可以起到替代功能，这取决于制剂中存在多少赋形剂以及制剂中存在哪些其它赋形剂。
技术人员具有本领域的知识和技能，使他们能够选择适当量的合适的药学上可接受的赋形剂用于本发明。此外，技术人员可获得许多资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂并且可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited), 和The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。
使用本领域技术人员已知的技术和方法制备本发明的药物组合物。Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)中描述了本领域常用的一些方法。
在一个实施方案中，药物组合物适于肠胃外给药，特别是静脉内给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于口服给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于局部给药。
适于肠胃外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液（其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得组合物与预期接受者的血液等渗的溶质）和水性和非水性无菌混悬液（其可包括悬浮剂和增稠剂）。组合物可以以单位剂量或多剂量容器存在，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以以冷冻干燥（冻干）状态储存，仅需要在马上使用前添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适于口服给药的药物组合物可以作为离散单位存在，例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫或起泡制剂（whips）；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。
例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可与口服、无毒的药学上可接受的惰性载体（如乙醇、甘油、水等）合并。适于掺入片剂或胶囊中的粉末可以通过将化合物减至合适的细小尺寸（例如通过微粉化）并与类似制备的药物载体（如可食用的碳水化合物（例如淀粉或甘露醇））混合来制备。还可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊可以通过制备如上所述的粉末混合物并填充成形的明胶壳来制备。可以在填充操作之前将助流剂和润滑剂（如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇）加入到粉末混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善胶囊摄入时药物的有效性。
此外，当期望或必要时，也可将合适的粘合剂、助流剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、崩解剂（分解剂）和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖（如葡萄糖或β-乳糖）、玉米甜味剂、天然和合成树胶（如阿拉伯树胶、黄蓍胶或海藻酸钠）、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂例如通过制备粉末混合物、制粒或腾涌（slugging）、添加润滑剂和崩解剂并压制成片剂来配制。通过将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质、以及任选地与粘合剂（如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮）、溶出阻滞剂（如石蜡）、再吸收促进剂（如季盐）和/或吸收剂（如膨润土、高岭土或磷酸二钙）混合，来制备粉末混合物。粉末混合物可以通过用粘合剂（如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚粘液（acadia mucilage）或纤维素或聚合物材料的溶液）润湿并强制通过筛网来制粒。作为制粒的替代方案，粉末混合物可以通过压片机，结果是不完全形成的块状物破碎成颗粒。可以通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油来润滑颗粒以防止粘附到片剂成形模具上。然后将润滑的混合物压制成片剂。式（Ⅰ）化合物及其药学上可接受的盐也可与自由流动的惰性载体混合，直接压制成片剂，无需经过制粒或腾涌步骤。可提供透明或不透明的保护包衣，其由虫胶密封包衣、糖或聚合物材料包衣和蜡的抛光包衣组成。可以将染料添加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服液（如溶液、糖浆和酏剂）可以以剂量单位形式制备，使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的酒精媒介物制备。混悬液可以通过将化合物分散在无毒媒介物中来配制。还可以加入增溶剂和乳化剂（如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚）、防腐剂、调味添加剂（如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂）等。
可以设计用于口服给药的组合物以提供改变的释放曲线，从而维持或以其它方式控制治疗活性剂的释放。
适当时，可以将用于口服给药的剂量单位组合物微囊化。可以制备组合物以延长或维持释放，例如通过将颗粒材料涂覆或包埋在聚合物、蜡等中。
对于适合和/或适于口服给药的组合物，式（I）化合物或其药学上可接受的盐可以是粒度减小的形式，例如，通过微粉化获得。尺寸减小的（例如微粉化的）化合物或盐的优选粒度由约0.5至约10微米（例如使用激光衍射测量）的D50值限定。
式（I）化合物及其药学上可接受的盐也可以以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。脂质体可以由多种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
适于局部给药的药物组合物可以配制成软膏、乳膏、混悬液、乳剂、洗液、粉末、溶液、糊剂、凝胶、泡沫、喷雾剂、气溶胶或油。此类药物组合物可包括常规添加剂，其包括但不限于，防腐剂、有助于药物渗透的溶剂、共溶剂、润肤剂、推进剂、粘度调节剂（胶凝剂）、表面活性剂和载体。在一个实施方案中，提供适于局部给药的药物组合物，其包含0.01-10％或0.01-1％的式（I）化合物或其药学上可接受的盐，以组合物的重量计。
对于眼睛或其它外部组织（例如口腔和皮肤）的治疗，组合物优选作为局部软膏、乳膏、凝胶、喷雾剂或泡沫施用。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，可以将活性成分与水包油乳膏基质或油包水基质一起配制成乳膏。
适于局部给药于眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是含水溶剂中。给药于眼睛的组合物具有眼科相容的pH和渗透压。一种或多种眼科上可接受的pH调节剂和/或缓冲剂可包括在本发明的组合物中，包括酸，例如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠和乳酸钠；和缓冲剂，如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。这些酸、碱和缓冲剂可以以将组合物的pH维持在眼科可接受范围内所需的量包括在内。一种或多种眼科上可接受的盐可以以足以使组合物的渗透压达到眼科可接受的范围的量包含在组合物中。这些盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐。
眼部递送装置可以设计用于控制释放一种或多种具有多种确定的释放速率和持续剂量动力学以及渗透性的治疗剂。通过设计聚合物基质、聚合物分子量、聚合物结晶度、共聚物比率、加工条件、表面光洁度、几何形状、赋形剂添加和增强药物扩散、侵蚀、溶解和渗透的聚合物包衣可以获得控制释放，所述聚合物基质包含不同选择和性质的可生物降解/可生物蚀解聚合物（例如聚乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、超水解PVA）、羟烷基纤维素（HPC）、甲基纤维素（MC）、羟丙基甲基纤维素（HPMC）、聚己内酯、聚乙醇酸、聚乳酸、聚酸酐。
用于眼部递送的药物组合物还包括原位可胶凝化的含水组合物。这种组合物包含胶凝剂，其浓度在与眼睛或泪液接触时有效地促进胶凝化。合适的胶凝剂包括但不限于热固性聚合物。本文所用的术语“原位可凝胶化”不仅包括与眼睛或泪液接触时形成凝胶的低粘度液体，还包括更粘稠的液体，如半流体和触变凝胶，其在给予眼睛后显示出显著增加的粘度或凝胶硬度。参见，例如，Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595-639，在此引入作为参考，目的在于其教导了用于眼部药物递送的聚合物的实例。
用于鼻或吸入给药的剂型可以方便地配制成气溶胶、溶液、混悬液、凝胶或干粉。
对于适合和/或适于吸入给药的组合物，优选式（I）化合物或其药学上可接受的盐为粒度减小的形式，例如，通过微粉化获得。尺寸减小的（例如微粉化的）化合物或盐的优选粒度限定为约0.5至约10微米（例如使用激光衍射测量）的D50值。
气溶胶制剂，例如用于吸入给药，可包括活性物质在药学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细混悬液。气溶胶制剂可以以单剂量或多剂量以无菌形式存在于密封容器中，其可以采用药筒或再填充的形式与雾化装置或吸入器一起使用。或者，密封容器可以是整体分配装置，例如单剂量鼻吸入器或装配有计量阀（计量剂量吸入器）的气溶胶分配器，一旦容器内容物已经用尽，该装置即被弃置。
在剂型包含气溶胶分配器的情况下，其优选在压力下包含合适的推进剂，例如压缩空气、二氧化碳或有机推进剂，例如氢氟烃（HFC）。合适的HFC推进剂包括1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷和1,1,1,2-四氟乙烷。气溶胶剂型也可以采用泵式雾化器的形式。加压气溶胶可含有活性化合物的溶液或混悬液。这可能需要掺入另外的赋形剂，例如共溶剂和/或表面活性剂，以改善混悬液制剂的分散特性和均匀性。溶液制剂还可能需要添加共溶剂，例如乙醇。
对于适合和/或适于吸入给药的药物组合物，药物组合物可以是干粉可吸入组合物。这种组合物可包含粉末基质，例如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇或淀粉，式（I）化合物或其药学上可接受的盐（优选粒度减小的形式，例如微粉化形式），和任选地，性能改性剂（如L-亮氨酸或另一种氨基酸）和/或硬脂酸的金属盐（如硬脂酸镁或硬脂酸钙）。优选地，干粉可吸入组合物包含乳糖（例如乳糖一水合物）和式（I）化合物或其盐的干粉混合物。这样的组合物可以使用合适的装置给予患者，例如由GlaxoSmithKline销售的DISKUS®装置，其例如在GB 2242134 A中有描述。
式（I）化合物及其药学上可接受的盐可以配制成用于从流体分配器递送的流体制剂，例如具有分配喷嘴或分配孔的流体分配器，用户施加的力施加到该流体分配器的泵机构时，通过所述分配喷嘴或分配孔分配计量剂量的流体制剂。这种流体分配器通常配备有多个计量剂量的流体制剂的储存器，这些剂量在连续泵驱动时是可分配的。分配喷嘴或孔可构造成用于插入使用者的鼻孔中，以将流体制剂喷雾分配到鼻腔中。在国际专利申请公开No.WO 2005/044354 A1中描述和说明了上述类型的流体分配器。
式（I）化合物或其药学上可接受的盐的治疗有效量将取决于许多因素，包括例如患者的年龄和体重、需要治疗的确切病症及其严重程度、制剂性质和给药途径，并且最终由主治医生或兽医决定。在药物组合物中，用于口服或肠胃外给药的每个剂量单位优选含有0.01mg至3000mg，更优选0.5mg至1000mg的式（I）化合物或其药学上可接受的盐，以游离碱计算。用于鼻或吸入给药的每个剂量单位优选含有0.001mg至50mg，更优选0.01mg至5mg的式（I）化合物或其药学上可接受的盐，以游离碱计算。
药学上可接受的式（I）化合物及其药学上可接受的盐可以以，例如，每天0.01mg至3000mg、每天0.5mg至1000mg或每天100mg至2500mg式（I）化合物或其药学上可接受的盐（以游离碱计算）的口服或肠胃外剂量，或每天0.001mg至50mg或每天0.01mg至5mg式（I）化合物或其药学上可接受的盐（以游离碱计算）的鼻或吸入剂量的日剂量（对于成年患者）给药。该量可以每天以单次剂量给予或更通常以每天多个（例如两个，三个，四个，五个或六个）亚剂量给予，使得每日总剂量相同。其盐的有效量可以根据式（I）化合物本身的有效量的比例确定。
式（I）化合物及其药学上可接受的盐可以单独使用或与其它治疗剂组合使用。因此，根据本发明的组合疗法包括给予至少一种式（I）化合物或其药学上可接受的盐，和使用至少一种其它治疗活性剂。一种或多种式（I）化合物及其药学上可接受的盐和一种或多种其它治疗活性剂可以在单一药物组合物中一起给药或分开给药，并且当分开给药时，给药可以同时或以任何顺序依次发生。选择一种或多种式（I）化合物及其药学上可接受的盐和一种或多种其它治疗活性剂的量和相对的给药时间，以达到期望的组合治疗效果。因此，在另一方面，提供了包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其它治疗活性剂的组合。
因此，在一个方面，根据本发明的式（I）化合物或其药学上可接受的盐和包含式（I）化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以与一种或多种其它治疗剂组合使用或包括一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂例如选自抗生素、抗病毒药、糖皮质激素、毒蕈碱拮抗剂、β-2激动剂和维生素D3类似物。在进一步的实施方案中，式（I）化合物或其药学上可接受的盐可以与适用于治疗癌症的其它治疗剂组合使用。这些其它治疗剂的实例描述于V.T. Devita和S. Hellman (编辑)的Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版（2001年），Lippincott Williams & Wilkins Publishers。基于药物的特定特征和所涉及的癌症，本领域普通技术人员将能够辨别哪些药剂组合是有用的。与式（I）化合物或其药学上可接受的盐组合使用的其它治疗剂包括但不限于抗微管剂（如二萜化合物和长春花生物碱）；铂配合物；烷化剂（如氮芥、氧氮磷杂环系统（oxazaphosphorines）、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯）；抗生素（如蒽环类、放线菌素和博来霉素）；拓扑异构酶II抑制剂（如表鬼臼毒素）；抗代谢物（如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物）；拓扑异构酶I抑制剂（如喜树碱；激素和激素类似物）；信号转导通路抑制剂（如酪氨酸受体抑制剂）；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂（如PD-1抑制剂，包括纳武单抗（nivolumab）和派姆单抗（pembrolizumab），以及CTLA-4抑制剂，包括伊匹单抗）；促凋亡剂；表观遗传或转录调节剂（如组蛋白去乙酰化酶抑制剂）和细胞周期信号转导抑制剂。
应当理解，当式（I）化合物或其药学上可接受的盐与通常通过吸入、静脉内、口服或鼻内途径给药的其它治疗剂组合给药时，所得药物组合物可以通过相同途径给药。或者，组合物的各个组分可以通过不同途径给药。
对于本领域技术人员显而易见的是，在适当的情况下，一种或多种其它治疗剂可以以盐的形式（例如作为碱金属盐或胺盐或作为酸加成盐），或前药，或者作为酯（例如低级烷基酯），或作为溶剂化物（例如水合物）使用，以优化治疗剂的活性和/或稳定性和/或物理特性，例如溶解度。还将清楚的是，在适当的情况下，治疗剂可以以光学纯的形式使用。
上述组合可以方便地以药物组合物的形式使用，并因此包含如上定义的组合和药学上可接受的赋形剂的药物组合物代表本发明的另一方面。
一般合成路线
本发明化合物可通过各种方法制备。除非另有说明，否则任何先前定义的变量将继续具有先前定义的含义。说明性的一般合成方法在以下方案中列出，并且可以容易地适应于制备本发明的其它化合物。在实施例部分中制备本发明的具体化合物。
式（I）化合物可如以下任何方案中所述制备：
方案1：
Figure 74795DEST_PATH_IMAGE021
其中R1、R2、R3和R4如上定义，Hal是氯或溴且X是H或连接在一起以形成环状硼酸酯，如-C(Me)2C(Me)2-。
关于以上方案1中所示的步骤，可以使用以下反应条件：
步骤1: 是Negishi交叉偶联，可以在合适的温度（例如70℃）下在合适的溶剂（例如THF）中，在钯催化剂（例如PdCl2(PPh3)2）存在下，任选在另一种膦配体存在下，使用式R4CH(R3)ZnHal的苄基卤化锌进行。
步骤2: 是酸或碱介导的酯裂解，可以使用任何合适的酸（例如TFA）或任何合适的碱（例如NaOH），任选地在合适的溶剂（例如DCM或MeOH）中，在合适的温度（例如室温）下进行。
步骤3: 是酰胺偶联反应，可以在合适的温度（例如室温）下在合适的溶剂（例如DCM或DMF）中，在合适的叔胺（例如三乙胺或DIPEA）存在下，在合适的酰胺偶联反应物（例如HATU）存在下，使用胺试剂R2-NH2进行。
步骤4: 是任选的脱保护步骤以除去保护基团（例如BOC），可以在合适的温度（例如室温）下在合适的溶剂（例如DCM或1,4-二氧杂环己烷）存在下，使用酸（例如TFA或HCl）进行。
步骤5: 是任选的手性分离，使用合适的手性HPLC柱和合适的溶剂系统。
步骤6: 是羰基化反应，可以在合适的温度（例如70℃）下在合适的溶剂（例如DMF）中，在叔胺（例如三乙胺）存在下，在钯催化剂（例如[(R)-(+)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘]氯化钯(II)）存在下，任选在另一种膦配体存在下，在一氧化碳存在下，使用醇试剂（例如EtOH）进行。
步骤7: 是还原反应，可以使用还原剂或试剂组合（例如硼氢化钠和氯化钙）在合适的溶剂或溶剂混合物（例如乙醇和2-MeTHF）中，在合适的温度（例如在0℃至室温）下进行。
步骤8: 是氯化反应，可以在合适的溶剂（例如DCM）存在下，在合适的温度（例如室温）下使用氯化试剂（例如亚硫酰氯）进行。
步骤9: 是交叉偶联反应（例如Suzuki偶联），可以使用芳基金属物质（例如芳基硼酸或芳基硼酸酯R4-B(OX)2）在合适的钯催化剂（例如PdCl2(PPh3)2）存在下，任选地在另一种膦配体存在下，在合适的碱（例如碳酸钾）存在下，在合适的溶剂或溶剂混合物（例如1,4-二氧杂环己烷和水）中，在合适的温度（例如120℃）下进行。
步骤10: 是氧化反应，可以使用合适的氧化剂（例如戴斯-马丁氧化剂）在合适的溶剂（例如DCM）中在合适的温度（例如室温）下进行。
步骤11: 是醛的Grignard加成，使用合适的格氏试剂（例如苯基溴化镁）在合适的溶剂（例如THF）中在合适的温度（例如0℃）下进行。
步骤12: 是烷基化反应（例如甲基化），使用合适的烷基化试剂（例如Meerwein’s盐）在合适的碱（例如Proton Sponge®）存在下，在合适的溶剂（例如二氯甲烷）中在合适的温度（例如室温）下进行。
方案2:
Figure 908759DEST_PATH_IMAGE022
关于以上方案2中所示的步骤，可以使用以下反应条件：
步骤13: 是交叉偶联反应（例如Suzuki偶联），可以使用芳基金属物质（例如三乙烯基环三硼氧烷吡啶络合物）在合适的钯催化剂（例如PdCl2(dppf)）存在下，任选地在另一种膦配体存在下，在合适的碱（例如碳酸钾）存在下，在合适的溶剂或溶剂混合物（例如乙醇和甲苯）存在下，在合适的温度（例如120℃）下，任选使用微波照射进行。
步骤14: 是两步的溴化/消除反应，第一步可以使用合适的溴化试剂（例如溴）在合适的溶剂或溶剂混合物（例如二氯甲烷）存在下，在合适的温度下（例如室温）下进行；第二步可以使用合适的碱（例如氢氧化钾）在合适的溶剂（例如EtOH）中在合适的温度（例如50℃）下进行。
步骤15: 是交叉偶联反应（例如Suzuki偶联），可以使用芳基金属物质（例如芳基硼酸或芳基硼酸酯R4-B(OX)2）在合适的钯催化剂（例如PEPPSI-iPr）存在下，任选地在另一种膦配体存在下，在合适的碱（例如磷酸三钾）存在下，在合适的溶剂或溶剂混合物（例如1,4-二氧杂环己烷和水）存在下，在合适的温度（例如室温）下进行。
步骤16: 是氢化反应，可以在氢气氛下在合适的金属催化剂（例如10% Pd/C）存在下，在合适的溶剂（例如EtOH）存在下，在合适的温度（例如室温）下进行。
步骤17: 是硼氢化反应，可以使用合适的硼氢化试剂（例如(2,3-二甲基丁-2-基)硼烷），在合适的溶剂（例如THF）存在下，在合适的温度（例如0℃）下进行，在合适的温度（例如0℃至室温）下进行适当的氧化后处理（例如加入水、过氧化氢和氢氧化钠）。
步骤18: 是酸或碱介导的酯裂解，可以使用任何合适的酸（例如TFA）或任何合适的碱（例如NaOH）任选地在合适的溶剂（例如DCM或MeOH）中在合适的温度（例如室温）下进行。
步骤19: 是酰胺偶联反应，可以使用胺试剂R2-NH2在合适的叔胺（例如三乙胺或DIPEA）存在下，在合适的酰胺偶联反应物（例如HATU）存在下，在合适的溶剂（例如DCM或DMF）中，在合适的温度（例如室温）下进行。
本领域技术人员将理解，保护上述化合物的一个或多个官能团可能是有利的。保护基团的实例及其除去方法可参见T. W. Greene ‘Protective Groups in OrganicSynthesis’ (第4版, J. Wiley and Sons, 2006)，其通过引用并入本文，因为它涉及此类方法。
合适的胺保护基包括酰基（例如乙酰基，氨基甲酸酯（例如2’,2’,2’-三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基或叔丁氧基羰基）和芳基烷基（例如苄基），其视情况可以通过酸介导的裂解除去（例如使用1,4-二氧杂环己烷中的酸（例如盐酸）或二氯甲烷中的三氟乙酸）或还原性地除去（例如苄基或苄氧基羰基的氢解或使用锌/乙酸还原除去2’,2’,2’-三氯乙氧基羰基）。其它合适的胺保护基团包括三氟乙酰基（-C(O)CF3），其可通过碱催化水解除去。
应当理解，在上述任何路线中，可以改变将各种基团和部分引入分子中的合成步骤的精确顺序。确保在该方法的一个阶段引入的基团或部分不会受到后续转化和反应的影响并相应地选择合成步骤的顺序在本领域技术人员的技能范围内。
上述某些中间体化合物构成了本发明的又一方面。
一般方法
一般实验细节
如本文所用，这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例与当代科学文献（例如，Journal of the American Chemical Society）中使用的符号和惯例一致。除非另有说明，否则所有原料均得自商业供应商并且无需进一步纯化即可使用。具体地，以下缩写可以在实施例和整个说明书中使用：
缩写
AcOH 乙酸
BBr3 三溴化硼
BH3•THF 硼烷四氢呋喃络合物
BOC/Boc 叔丁氧基羰基
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
BuLi 丁基锂
Cs2CO3 碳酸铯
CHCl3 氯仿
Cobalt carbonyl 八羰基二钴
CV 柱体积
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIBAL-H 二异丁基氢化铝
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DMSO-d6 氘代二甲基亚砜
DPPA 二苯基磷酰基叠氮化物
dppb 1,4-双(二苯基膦)丁烷
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Et3N 三乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCl 盐酸
HCO2H 甲酸
IPA 异丙醇
Isolera Biotage® Flash纯化系统
KCN 氰化钾
K2CO3 碳酸钾
KI 碘化钾
KOH 氢氧化钾
LCMS 液相色谱–质谱
LiBH4 硼氢化锂
LiCl 氯化锂
LiHMDS 六甲基二硅基氨基锂
LiOH 氢氧化锂
M 摩尔(浓度)
MDAP 质谱检测的（mass directed）自动制备色谱
MeCN 乙腈
Meerwein's盐 三甲基氧鎓四氟硼酸盐
MeI 碘甲烷
MeOH 甲醇
2-MeTHF 2-甲基四氢呋喃
MgSO4 硫酸镁
min 分钟
Ms-Cl 甲磺酰氯
MTBE 甲基叔丁基醚
N 当量(浓度)
N2 氮气
NaBH4 硼氢化钠
NaCN 氰化钠
NaCNBH3 氰基硼氢化钠
Na2CO3 碳酸钠
NaI 碘化钠
NaH 氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaOH 氢氧化钠
Na(OAc)3BH 三乙酰氧基硼氢化钠
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
NH3 氨
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NUT 睾丸核蛋白
obs 被掩盖的
Pd/C 碳载钯
PdCl2(dppf) (二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)
PdCl2(PPh3)2 双(三苯基膦)二氯化钯(II)
PEPPSI iPr [1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)
PPh3 三苯基膦
Proton Sponge® N 1,N 1,N 8,N 8-四甲基萘-1,8-二胺
RBF 圆底烧瓶
Rt 保留时间
rt 室温
sat 饱和
SCX Isolute强阳离子交换吸附剂SPE
SiO2 二氧化硅
SNAP/SNAP Ultra Biotage® (二氧化硅)快速色谱柱
SP4 Biotage® Flash纯化系统
SPE 固相萃取
Tf2O 三氟甲磺酸酐
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
UPLC 超高效液相色谱
XantPhos 1,1'-(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双[1,1-二苯基膦]。
使用化合物命名程序“ACD Name Pro 6.02”或使用ChemDraw Ultra 12.0的命名功能获得以下化合物的名称。
LCMS方法
甲酸法
LC条件
UPLC分析在40℃下在Acquity UPLC CSH C18柱（50 mm x 2.1 mm内径，1.7 µm填充直径）上进行。
所用溶剂是：
A = 0.1% v/v甲酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v甲酸于乙腈中的溶液
所用梯度是：
时间(min) 流速(mL/min) %A %B
0 1 97 3
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 97 3
UV检测是210 nm至350 nm波长的总计信号。
MS条件
MS : Waters ZQ
电离模式 : 交替扫描正和负电喷雾
扫描范围 : 100至1000 AMU
扫描时间 : 0.27 sec
帧间扫描延迟 : 0.10 sec。
高pH方法
LC条件
UPLC分析在40℃下在Acquity UPLC CSH C18柱（50mm×2.1mm内径，1.7µm填充直径）上进行。
所用溶剂是：
A = 10 mM碳酸氢铵/水，用氨水溶液调节至pH10
B = 乙腈
所用梯度是：
时间(min) 流速 (mL/min) %A %B
0 1 97 3
0.05 1 97 3
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 97 3
UV检测是210 nm至350 nm波长的总计信号。
MS条件
MS : Waters ZQ
电离模式 : 交替扫描正和负电喷雾
扫描范围 : 100至1000 AMU
扫描时间 : 0.27 sec
帧间扫描延迟 : 0.10 sec。
TFA法
LC条件
UPLC分析在40℃下在Acquity UPLC CSH C18柱（50mm×2.1mm内径，1.7µm填充直径）上进行。
所用溶剂是：
A = 0.1% v/v三氟乙酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v三氟乙酸于乙腈中的溶液
所用梯度是：
时间(min) 流速 (mL/min) %A %B
0 1 95 5
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 95 5
UV检测是210 nm至350 nm波长的总计信号。
MS条件
MS : Waters ZQ
电离模式 : 交替扫描正和负电喷雾
扫描范围 : 100至1000 AMU
扫描时间 : 0.27 sec
帧间扫描延迟 : 0.10 sec。
一般MDAP纯化方法
下面列出的是已经用于或可以用于化合物纯化的质谱检测的自动制备色谱（MDAP）方法的实例。
MDAP (高pH法)。 在环境温度下在Xselect CSH C18柱（150mm×30mm内径，5μm填充直径）上进行HPLC分析，用使用氨水溶液调节至pH 10的10mM碳酸氢铵/水（溶剂A）和乙腈（溶剂B）洗脱，经15或25分钟使用0至100％溶剂B的洗脱梯度。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。使用交替扫描正和负电喷雾在WatersZQ质谱仪上记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (甲酸法)。在环境温度下在Xselect CSH C18柱（150mm×30mm内径，5μm填充直径）上进行HPLC分析，用0.1％甲酸/水（溶剂A）和0.1％甲酸/乙腈（溶剂B）洗脱，经15或25分钟使用0至100％溶剂B的洗脱梯度。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。使用交替扫描正和负电喷雾在WatersZQ质谱仪上记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (TFA法)。 在环境温度下在Xselect CSH C18柱（150mm×30mm内径，5μm填充直径）上进行HPLC分析，用0.1％ v/v三氟乙酸于水中的溶液（溶剂A）和0.1％v/v三氟乙酸于乙腈中的溶液（溶剂B）洗脱，经15或25分钟使用0至100％溶剂B的洗脱梯度。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。使用交替扫描正和负电喷雾在WatersZQ质谱仪上记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
NMR
光谱在400MHz或600MHz NMR机器上在302K下运行。
中间体:
中间体1: (1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸
Figure 859397DEST_PATH_IMAGE023
在室温下，将LiOH(751mg，31.4mmol)加入到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(1000 mg，6.27 mmol，可商购自例如Pharmablock)于水(10 mL)、THF (10mL)和MeOH (10 mL) 中的溶液中。将所得悬浮液搅拌3小时。为了后处理，将混合物蒸发，将剩余的粗固体溶于最少量的水中，用HCl(5mL，25％m/m)淬灭，并用MeOH/DCM溶剂萃取4次，合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，真空蒸发，得到目标化合物(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸 (750 mg, 5.85 mmol, 93%收率)。
Figure 741903DEST_PATH_IMAGE024
中间体2: (1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸苄酯
Figure 94387DEST_PATH_IMAGE025
将(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸 (340 mg, 2.65 mmol)溶于甲苯(12 mL)，然后加入Et3N (1.110 mL, 7.96 mmol)、叠氮磷酸二苯酯 (0.686 mL, 3.18mmol)和苄醇(0.552 mL, 5.31 mmol)，将混合物加热回流2小时。溶液用EtOAc(10 mL)稀释，用水(10 mL)和NaHCO3溶液(10 mL)洗涤，将有机层干燥并蒸发，残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸苄酯 (460 mg, 1.972 mmol, 74.3%收率)，为白色固体。
Figure 36935DEST_PATH_IMAGE026
中间体3: (1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺, 盐酸盐
Figure 287919DEST_PATH_IMAGE027
将(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸苄酯 (460 mg, 1.972mmol)溶解在EtOH(20 mL)中并使用H-Cube(设置：室温，1巴，1mL/min流速)和10％Pd/CCatCart 30作为催化剂使反应氢化。使反应循环通过H-Cube 1.5小时，然后用HCl(7M水溶液，1.332 mL，9.86 mmol)酸化混合物并真空蒸发，得到油状固体。将固体经2天真空干燥，得到目标产物(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺, 盐酸盐 (262 mg, 1.836 mmol,93%收率)，为灰白色固体。
Figure 708536DEST_PATH_IMAGE028
中间体4: (+/-)-2-(4-苄基吗啉-2-基)乙酸乙酯
Figure 181106DEST_PATH_IMAGE029
将2-(苄基氨基)乙醇 (6.57 mL, 46.3 mmol, 可商购自例如Sigma-Aldrich)和Et3N (6.45 mL, 46.3 mmol)于水(40 mL)中的混合物加热至回流。逐滴加入(E)-4-溴丁-3-烯酸乙酯(8.5 mL，49.4 mmol，可商购自例如Fluorochem)并将反应混合物加热回流2小时。将反应混合物冷却至室温并加入NaOH(2M溶液，10 mL，20.00 mmol)。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离有机层，水层进一步用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并浓缩得到~11 g棕色油状物。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP 340 g柱，用5-50％EtOAc/环己烷洗脱)。合并合适的级分并浓缩，得到目标产物(4.17 g)，为浅黄色油状物。
Figure 294555DEST_PATH_IMAGE030
中间体5: (+/-)-2-(吗啉-2-基)乙酸乙酯
Figure 219786DEST_PATH_IMAGE031
向2-(4-苄基吗啉-2-基)乙酸乙酯 (3.15 g, 11.96 mmol)于EtOH (70 mL)中的溶液中加入甲酸铵(3.77 g，59.8 mmol)和10％Pd/C(3.82 g, 35.9 mmol)。将反应混合物在室温下在 N2下搅拌过夜。
另外，向2-(4-苄基吗啉-2-基)乙酸乙酯 (375 mg, 1.424 mmol)于EtOH (10 mL)中的溶液中加入甲酸铵(449 mg，7.12 mmol)和10％Pd/C(555 mg, 5.21 mmol)。将反应混合物在室温下在N2下搅拌过夜。
合并两种反应混合物并通过Celite®过滤。将滤液真空浓缩，得到2-(吗啉-2-基)乙酸乙酯 (2.45 g, 12.02 mmol)，为灰白色胶状固体，将其原样用于后续反应。
Figure 506411DEST_PATH_IMAGE032
中间体6: (+/-)-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 567908DEST_PATH_IMAGE033
向2-(吗啉-2-基)乙酸乙酯 (2.45 g, 14.14 mmol)于DCM (30 mL)中的溶液中加入Et3N (3.94 mL, 28.3 mmol)、Boc2O (4.93 mL, 21.22 mmol)和DMAP (0.086 g, 0.707mmol)，并在室温下在N2下将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在DCM和1M HCl之间分配。分离有机层，用饱和NaHCO3溶液洗涤，干燥（Na2SO4），然后浓缩，得到3.03 g橙色油状物。
Figure 852258DEST_PATH_IMAGE034
中间体7: (+/-)-2-(2-羟乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 264785DEST_PATH_IMAGE035
将2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (2.8 g, 10.24 mmol)溶于THF(50 mL)中，加入LiBH4(0.893 g，41.0 mmol)，然后将混合物搅拌过周末。将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和氯化铵溶液(50 mL)淬灭，然后搅拌1小时，并用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机物经Na2SO4干燥并真空蒸发，得到2-(2-羟乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (2.2g, 9.51 mmol, 93%收率) ，为无色胶状物。
Figure 292784DEST_PATH_IMAGE036
中间体8: (+/-)-2-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 474367DEST_PATH_IMAGE037
在0℃下，将Ms-Cl(0.815 mL，10.46 mmol)加入到2-(2-羟乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (2.2 g, 9.51 mmol)和Et3N (1.458 mL, 10.46 mmol)于DCM (50 mL)中的溶液中。将得到的混合物在0℃下搅拌1小时，然后用水(50 mL)洗涤。将有机层干燥并真空蒸发，得到2-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (3.0 g, 9.70 mmol, 102%收率)，为淡黄色胶状物。
Figure 477089DEST_PATH_IMAGE038
中间体9: (+/-)-2-(2-氰基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 376912DEST_PATH_IMAGE039
将2-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(3.0 g, 9.70 mmol)溶于DMSO(30 mL)中，然后加入KI(1.610 g，9.70 mmol)和KCN(0.947 g，14.55 mmol)并将混合物在80℃加热1小时。将得到的棕色悬浮液用水(100mL)稀释，并用EtOAc(2×50mL)萃取。合并的有机物用水(2×100mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到的油状物在50g二氧化硅柱上纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱。合并含产物的级分（用茚三酮显色），真空蒸发，得到2-(2-氰基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (1.42 g, 5.91 mmol, 60.9%收率)，为无色油状物。
Figure 943022DEST_PATH_IMAGE040
中间体10: (+/-)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 244691DEST_PATH_IMAGE041
将2-(2-氰基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.4 g，5.83 mmol)溶于THF(20 mL)中，并加入BH3•THF (1M于THF中, 23.30 mL, 23.30 mmol)。然后将混合物在70℃加热2小时。然后将溶液在冰浴中冷却，并通过小心加入MeOH(20 mL)(冒泡)淬灭，然后真空蒸发。将残余物溶于MeOH(20 mL)中，加入AcOH(2 mL)，将溶液搅拌2小时，然后真空蒸发，残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-15％的含2M NH3的MeOH/DCM洗脱，得到两种主要的茚三酮活性组分。收集极性较大的组分，得到2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(180 mg，0.737 mmol，12.64％收率)，为无色油状物。较早流出的组分被怀疑是硼烷复合物。将其收集并真空蒸发，得到无色油状物(0.20 g)。将该物质溶于MeOH(10 mL)中，加入2M NaOH(10mL)，然后将混合物在回流下搅拌6小时，然后真空蒸发，将残余物在水(10 mL)和DCM(10mL)之间分配。将有机层干燥并真空蒸发，得到无色油状物，将其通过10g SNAP ultra柱上的色谱法纯化，用0-20％含2M 的MeOHNH3中NH3的MeOH/DCM洗脱，得到另外的目标产物 (100mg)。
Figure 605265DEST_PATH_IMAGE042
中间体11: (S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯, E/Z异 构体的77:23混合物
Figure 54701DEST_PATH_IMAGE043
将(R)-2-(羟甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.5 g，2.301 mmol，可商购自例如Activate Scientific)溶于DCM(10 mL)并加入戴斯-马丁氧化剂(1.171 g，2.76 mmol)，然后将溶液在室温下搅拌2小时。混合物用NaHCO3溶液(20 mL)洗涤，将有机层干燥并蒸发，得到无色固体 - NMR显示存在目标醛。将粗制中间体溶于甲苯(20 mL)中，加入2-(三苯基亚正膦亚基)乙酸乙酯(1.042 g，2.99 mmol)，然后将混合物在90℃加热过夜。过滤所得悬浮液，滤液用水洗涤，然后干燥有机层并真空蒸发。残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.45 g，1.577 mmol，68.5％收率)，为无色胶状物和Z和E异构体的混合物，其用于下一步骤。
Figure 424502DEST_PATH_IMAGE044
中间体12: (S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 315098DEST_PATH_IMAGE045
将(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.45 g，1.577mmol)溶于EtOH(50 mL)中并在H-Cube中使用Pd/C cat cart以1 mL/min的流速在完全模式下进行氢化。将洗脱液真空蒸发，得到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.40 g，1.392 mmol，88％收率)，为无色胶状物。
Figure 112152DEST_PATH_IMAGE046
中间体13: (S)-2-(3-羟丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 720988DEST_PATH_IMAGE047
在0℃下将LiBH4 (0.121 g，5.57 mmol)加入到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.40 g，1.392 mmol)于THF(10 ml)中的溶液中，然后将混合物搅拌过夜，使其温热至室温。通过非常小心地加入氯化铵溶液(20 mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到(S)-2-(3-羟丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.30 g，1.223 mmol，88％收率)。
Figure 707530DEST_PATH_IMAGE048
中间体14: (S)-2-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 718211DEST_PATH_IMAGE049
将(S)-2-(3-羟丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (0.30 g, 1.223 mmol)溶于DCM(10mL)并加入Et3N (0.256 mL, 1.834 mmol)和Ms-Cl(0.124 mL，1.590 mmol)中。将溶液搅拌2小时，然后用水洗涤，干燥有机层并真空蒸发，得到(S)-2-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.39 g，1.206 mmol，99％收率)，其立即用于下一步骤。
Figure 686167DEST_PATH_IMAGE050
中间体15: (S)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 782299DEST_PATH_IMAGE051
将(S)-2-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (0.39 g, 1.206mmol) 溶于DMF(5 mL)中，并加入叠氮化钠(0.235 g，3.62 mmol)，然后将混合物在80℃下加热2小时。混合物用水(20 mL)稀释，用EtOAc(20 mL)萃取，有机层用水(2×10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到(S)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(300 mg，1.110 mmol，92％收率)，为无色胶状物。粗产物无需纯化即可进行下一步。
Figure 493903DEST_PATH_IMAGE052
中间体16: (S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 421408DEST_PATH_IMAGE053
将(S)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (300 mg, 1.110 mmol)溶解在EtOH(30 mL)中并在H-Cube中以完全模式在1 mL/min流速下经Pd/C cat cart氢化。将洗脱液真空蒸发，得到(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(190 mg，0.778 mmol，70.1％收率)，将其用于后续化学反应。
Figure 560265DEST_PATH_IMAGE054
中间体17: (R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 143694DEST_PATH_IMAGE055
将(S)-2-(羟甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(5 g，23.01 mmol，可商购自例如AOKChem)溶于DCM(10 mL)并加入戴斯-马丁氧化剂(11.71 g, 27.6 mmol)，然后将溶液在室温下搅拌2小时。混合物用NaHCO3溶液(20 mL)洗涤，将有机层干燥并蒸发，得到无色固体。NMR显示存在目标醛。将粗制中间体溶于甲苯(20 mL)中，加入2-(三苯基亚正膦亚基)乙酸乙酯(10.42 g，29.9 mmol)，然后将混合物在90℃加热过夜。过滤所得悬浮液，滤液用水洗涤，然后干燥有机层并真空蒸发。残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，并将含有产物的级分真空蒸发，得到(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (1.9 g, 6.66 mmol, 28.9%收率) ，为无色胶状物。
Figure 393409DEST_PATH_IMAGE056
中间体18: (R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 188802DEST_PATH_IMAGE057
将(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (1.8 g, 6.31mmol)溶于EtOH(60 mL)中并在H-Cube中以完全模式在1 mL/min流速下经Pd/C cat cart氢化。将洗脱液真空蒸发，得到(R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (1.7 g,5.92 mmol, 94%收率)，为无色胶状物。
Figure 498561DEST_PATH_IMAGE058
中间体19: (R)-2-(3-羟丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 569285DEST_PATH_IMAGE059
在0℃下将LiBH4 (0.121 g, 5.57 mmol)加入到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.40 g，1.392 mmol)于THF(10 mL)中的溶液中，然后将混合物搅拌过夜，使其温热至室温。通过非常小心地加入氯化铵溶液(20 mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×20 mL)萃取。将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到(S)-2-(3-羟丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (0.30 g, 1.223 mmol, 88%收率)。
Figure 622692DEST_PATH_IMAGE060
中间体20: (R)-2-(3-(甲基磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 462472DEST_PATH_IMAGE061
将(R)-2-(3-羟丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (1.34 g, 5.46 mmol) 溶于DCM(10mL)并加入Et3N (1.142 mL，8.19 mmol)和Ms-Cl (0.553 mL，7.10 mmol)。将溶液搅拌2小时，然后用水洗涤，干燥有机层并真空蒸发，得到浅黄色油状物。将其通过50g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到(R)-2-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (1.22 g, 3.77 mmol, 69.1%收率)。
Figure 943132DEST_PATH_IMAGE062
中间体21: (R)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 297890DEST_PATH_IMAGE063
将(R)-2-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.2 g, 3.71 mmol)溶于DMF(5 mL)并加入叠氮化钠(0.724 g，11.13 mmol)，然后将混合物在80℃加热2小时。混合物用水(20 mL)稀释，并用EtOAc (20 mL)萃取。有机层用水(2×10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到(R)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.96 g，3.55 mmol，96％收率)，为无色胶状物。
Figure 154987DEST_PATH_IMAGE064
中间体22: (R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 849274DEST_PATH_IMAGE065
将(R)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (0.96 g, 3.55 mmol)溶于EtOH(30 mL)中并在H-Cube中以完全模式在1 mL/min流速下经Pd/C cat cart氢化。将洗脱液真空蒸发，得到(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (0.81 g, 3.32 mmol, 93%收率)。
Figure 500835DEST_PATH_IMAGE066
中间体23: (S)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 546151DEST_PATH_IMAGE067
在0℃下将(S)-2-(羟甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(可商购自例如ActivateScientific)(3 g，13.81 mmol)和Et3N (3.85 mL, 27.6 mmol)在DCM(30 mL)中搅拌。经5分钟分批加入Ms-Cl (1.614 mL，20.71 mmol)并将反应物在室温下搅拌4小时。将反应物用另外的DCM稀释，并用1N HCl(水溶液)、NaHCO3(水溶液)和水洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并浓缩，得到(S)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(4.242 g，14.36mmol，104％收率)，为黄色油状物，其在下一步骤中以粗品使用。
Figure 551148DEST_PATH_IMAGE068
中间体24: (R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 99941DEST_PATH_IMAGE069
将(S)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(4.2 g，14.22 mmol)、KCN (0.972 g，14.93 mmol)和KI (3.54 g，21.33 mmol)在100℃下在DMSO (30 mL)中搅拌4小时。将反应物用水稀释并用EtOAc萃取，有机层用水和盐水洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并浓缩成黄色油状物。使用SP4快速色谱法纯化该油状物，使用SNAP 50g Si柱，用0-50％EtOAc:环己烷洗脱，得到(R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.393 g，10.58 mmol,74.4%收率)，为白色固体。
Figure 187982DEST_PATH_IMAGE070
中间体25: (R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 455016DEST_PATH_IMAGE071
将(R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.39 g，10.56 mmol)溶于THF(20 mL)中并在室温下搅拌，经10分钟加入BH3•THF (1M于THF中, 15.84 mL, 15.84 mmol)，并将反应物在室温下搅拌2小时。通过小心加入MeOH淬灭反应直至所有的冒泡停止。浓缩反应物，用MeOH稀释，用1M NaOH(50 mL)处理并在室温下搅拌2小时，得到沉淀物。浓缩反应物以除去MeOH，用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机物用水洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并浓缩，得到粗产物，为无色油状物。将其使用SP4快速色谱法进一步纯化，使用SNAP 50g Si柱，用0-8％含2M NH3的MeOH:DCM洗脱，得到(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(965 mg，4.19 mmol，39.7％产率)，为无色油状物。
Figure 653916DEST_PATH_IMAGE072
中间体26: (S)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 322795DEST_PATH_IMAGE073
将(R)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(4 g，13.54 mmol，可商购自例如Matrix Scientific)、KCN (0.926 g，14.22 mmol)和KI (3.37 g，20.31 mmol)在80℃下在DMSO(30 mL)中搅拌4小时，然后在100℃下搅拌3小时。将反应物用水稀释并用EtOAc萃取，有机层用水和盐水洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并浓缩成黄色油状物。使用SP4SNAP 50g Si柱纯化该油状物，用0-50％EtOAc:环己烷洗脱。收集合适的级分并真空浓缩，得到(S)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.693 g，11.90 mmol，88％产率)，为白色固体。
Figure 581738DEST_PATH_IMAGE074
中间体27: (S)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 336067DEST_PATH_IMAGE075
将(S)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (2.6 g, 11.49 mmol)加入THF(20mL)中并在室温下搅拌，经10分钟加入硼烷四氢呋喃络合物(1M于THF中，17.24 mL，17.24mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。通过小心加入MeOH淬灭反应直至所有冒泡停止。浓缩反应物并用MeOH稀释，用1M NaOH(50 mL)处理，在室温下搅拌2小时，得到沉淀物。浓缩反应物以除去MeOH，用水稀释，用EtOAc萃取，合并的有机物用水洗涤，用疏水性玻璃料干燥，浓缩，得到无色油状物。NMR表明仅回收SM。将该油状物再次加入THF(20 mL)中，用硼烷四氢呋喃络合物(1M于THF中，17.24mL，17.24mmol)处理，并在70℃回流条件下搅拌4小时。通过小心加入MeOH淬灭反应直至所有冒泡停止。浓缩反应物并用MeOH稀释，用1M NaOH(50 mL)处理，在室温下搅拌1小时，得到沉淀物。浓缩反应物以除去MeOH，用水稀释，用EtOAc萃取，合并的有机物用水洗涤，用疏水性玻璃料干燥，浓缩，得到目标产物(S)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (763 mg, 3.31 mmol, 28.8%收率)，为无色粘性油状物。
Figure 73079DEST_PATH_IMAGE076
中间体28: (+/-)-3-氟哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
Figure 596464DEST_PATH_IMAGE077
在-78℃在氮气下将在THF(20 mL)中的哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯 (5 g,19.43 mmol, 可商购自例如Sigma Aldrich) 滴加到双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(38.9mL，38.9 mmol)于THF(20mL)中的溶液中，然后使溶液经1小时温热至-20℃，然后再冷却至-78℃。逐滴加入N-氟-N-(苯基磺酰基)苯磺酰胺(12.25 g，38.9 mmol)于THF(30mL)中的溶液，然后将混合物搅拌2小时，使其逐渐温热至室温。反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，并用EtOAc(100 mL)萃取。用1M NaOH溶液(100 mL)和盐水洗涤有机层，然后干燥并蒸发，得到黄色油状物。将粗产物溶解在DCM中并加载到50g二氧化硅柱上，然后用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，得到3-氟哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯 (3.5 g, 12.71 mmol,65.4%收率)，为无色油状物。
Figure 26308DEST_PATH_IMAGE078
中间体29: (+/-)-3-氟-3-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 815404DEST_PATH_IMAGE079
将3-氟哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(3.5 g，12.71 mmol)溶于THF(50 mL)中，加入LiBH4(0.831 g，38.1 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌4小时。最初非常小心地滴加氯化铵(50 mL)，然后将混合物搅拌20分钟，然后用EtOAc(2×100 mL)萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥并真空蒸发，得到3-氟-3-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2 g，9.43mmol，74.2％收率)，为无色油状物。
Figure 356107DEST_PATH_IMAGE080
中间体30: (+/-)-(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔 丁酯
Figure 999578DEST_PATH_IMAGE081
将3-氟-3-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2 g，9.43 mmol)溶于DCM(60 mL)中，加入戴斯-马丁氧化剂(4.80 g，11.32 mmol)，将混合物在室温下搅拌18小时，然后用水洗涤，有机层经硫酸钠干燥，并倾倒入干净的干燥烧瓶中。加入2-(三苯基亚正膦亚基)乙酸乙酯(4.93 g，14.15 mmol)，将混合物搅拌过夜，然后用水洗涤，干燥有机层并真空蒸发。将残余物在50g二氧化硅柱上纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2 g，7.30 mmol，77％收率)，为无色油状物。
Figure 334744DEST_PATH_IMAGE082
中间体31: (+/-)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 63666DEST_PATH_IMAGE083
将(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (2 g,6.64 mmol)溶于EtOH(50 mL)并在大气压下用5％Pd/C氢化过夜。然后在N2下通过Celite®过滤混合物，真空蒸发滤液，得到3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0g，6.59 mmol，99％收率)，为无色油状物。NMR显示大量剩余的原料，因此将粗产物溶解在EtOH(50 mL)中并在H-Cube中在完全模式下经Pd/C柱氢化。将洗脱液真空蒸发，得到无色油状物。NMR显示一些剩余的原料，将溶液再次在H-Cube中氢化，然后将洗脱液真空蒸发，得到3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (2.0 g, 6.59 mmol, 99%收率)。
Figure 204797DEST_PATH_IMAGE084
中间体32: (+/-)-3-氟-3-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 702774DEST_PATH_IMAGE085
在室温下在氮气下将LiBH4 (0.431 g, 19.78 mmol)加入到3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2 g，6.59 mmol)于THF(30 mL)中的溶液中并将混合物搅拌过夜，然后通过非常小心地、最初逐滴添加的氯化铵溶液(50 mL)淬灭。将混合物剧烈搅拌30分钟，然后用EtOAc(2×50 mL)萃取，将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到无色油状物。将其溶解在DCM中并加载到50g二氧化硅柱上，然后用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，然后将含有产物的级分真空蒸发，得到3-氟-3-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6 g，6.12mmol，93％收率)，为无色油状物。
Figure 208842DEST_PATH_IMAGE086
中间体33: (+/-)-3-氟-3-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 425060DEST_PATH_IMAGE087
将3-氟-3-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6 g，6.12 mmol)溶于DCM(50 mL)中，加入Et3N (1.280 mL，9.18 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。用水(20 mL)洗涤溶剂，干燥并真空蒸发，得到黄色油状物(2.5 g)，将其直接使用。
Figure 307565DEST_PATH_IMAGE088
中间体34: (+/-)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 473098DEST_PATH_IMAGE089
将3-氟-3-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5 g，7.37 mmol)溶于DMF(30 mL)中，然后加入叠氮化钠(0.958 g，14.73 mmol)并将混合物在80℃加热2小时。将得到的悬浮液用水(100 mL)稀释，并用EtOAc(2×50 mL)萃取。合并的有机物用水(2×50 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.8 g，9.78 mmol)，为淡黄色油状物，其无需纯化即可用于下一步骤。
Figure 415647DEST_PATH_IMAGE090
中间体35: (+/-)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 853581DEST_PATH_IMAGE091
将3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.8 g，5.87 mmol)溶解在EtOH(60 mL)中，并在H-Cube中以完全模式经Pd/C cat. cart氢化。将洗脱液真空蒸发，得到浅黄色油状物。将该粗物质溶解在DCM中并加载到25g二氧化硅柱上，然后用0-20％含2M NH3的MeOH/DCM洗脱，将合适的级分真空浓缩，得到3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2 g，4.61 mmol，79％收率)，为无色油状物。
Figure 274198DEST_PATH_IMAGE092
中间体36: (R)-3-(1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-基)丙酸
Figure 746768DEST_PATH_IMAGE093
将(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.6 g，31.6 mmol)溶于EtOH(50 mL)并加入NaOH(2M 水溶液，47.5mL, 95mmol)，然后将溶液在室温下搅拌4小时。真空蒸发溶剂，将残余物在水(100 mL)和乙醚(100 mL)之间分配。水层用2M HCl酸化至pH~2，然后用EtOAc(2×100 mL)萃取。用水(100 mL)洗涤有机层，然后干燥并真空蒸发，得到(R)-3-(1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-基)丙酸 (8.6 g, 31.2 mmol, 99%收率)，为无色固体。
Figure 453693DEST_PATH_IMAGE094
中间体37: (R)-3-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 378923DEST_PATH_IMAGE095
将叠氮磷酸二苯酯(8.08 mL，37.5 mmol)加入到(R)-3-(1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-基)丙酸(8.6 g，31.2 mmol)和Et3N (13.06 mL, 94 mmol)于甲苯(50 mL)中的混合物中，然后将溶液在室温下搅拌30分钟。加入苄醇(6.50 mL，62.5 mmol)，将混合物加热回流3小时。反应混合物用EtOAc(100 mL)稀释并用水(100 mL)洗涤，将有机层干燥并真空蒸发，并将残余物通过340g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱。合并含产物的级分，真空蒸发，得到(R)-3-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(8.9 g，23.39 mmol，74.9％收率)，为无色胶状物。
Figure 603231DEST_PATH_IMAGE096
中间体38: (R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 930308DEST_PATH_IMAGE097
将(R)-3-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(8.9 g，23.39 mmol)溶于EtOH(100 mL)中并在真空下添加到5％Pd/C (2 g)中，然后在大气压下氢化过周末。在N2下通过Celite®过滤混合物，真空蒸发滤液，得到(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (6.0 g, 24.36 mmol, 104%收率)，为无色油状物。
Figure 214658DEST_PATH_IMAGE099
中间体39: (R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 640567DEST_PATH_IMAGE100
将(S)-3-氟-3-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (10 g, 42.9 mmol, 制备描述在文献：Org. Process Res. Dev. 2015, 19, 7, 865-871中)溶于DCM(60 mL)中，加入戴斯-马丁氧化剂(23.64 g，55.7 mmol)，将混合物在室温下搅拌18小时，然后用水洗涤，有机层经Na2SO4干燥并倒入干净的干燥烧瓶中。加入2-(三苯基亚正膦亚基)乙酸乙酯(19.41 g，55.7mmol)，将混合物搅拌过夜，然后用水洗涤，干燥有机层并真空蒸发。将残余物在50g二氧化硅柱上纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.5 g，34.8 mmol，81％收率)，为无色油状物。
Figure 402987DEST_PATH_IMAGE101
中间体40: (R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 584569DEST_PATH_IMAGE102
将(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(10 g，33.2 mmol)溶于EtOH (100 mL)并在N2下添加到5％Pd-C (2 g，18.79 mmol)中，然后将混合物在大气压下氢化6小时，得到预期的氢吸收。在N2下通过Celite®过滤混合物，真空蒸发滤液，得到(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.5 g，31.3 mmol，94％收率)，为浅黄色油状物。
Figure 39822DEST_PATH_IMAGE103
中间体41: (R)-3-氟-3-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 939644DEST_PATH_IMAGE104
将LiBH4 (2.046 g, 94 mmol)加入到(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.5 g，31.3 mmol)于THF(100 mL)中的溶液中，并将混合物在室温下在N2下搅拌48小时，然后在冰浴中冷却并通过非常小心地、最初逐滴添加的氯化铵溶液(100mL)淬灭(加入时强烈冒泡！)，然后将混合物搅拌20分钟，用EtOAc(100 mL)稀释，分离合并的有机物，用Na2SO4干燥，真空蒸发，得到浅黄色油状物。将该粗物质溶解在DCM中并加载到100g二氧化硅柱上，然后用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到(R)-3-氟-3-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.0 g，22.96 mmol，73.3％收率)，用其立即进行下一步骤。
Figure 505755DEST_PATH_IMAGE105
中间体42: (R)-3-氟-3-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 604161DEST_PATH_IMAGE106
将(R)-3-氟-3-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6 g，22.96 mmol)溶于DCM(100mL)中，加入Et3N(4.80 mL，34.4 mmol)并将混合物在冰浴中冷却，然后逐滴加入Ms-Cl(2.326 mL，29.8 mmol)(放热！)并将混合物搅拌2小时，使其温热至室温。该溶液用水(100mL)和盐水(100 mL)洗涤。将有机层干燥并真空蒸发，得到(R)-3-氟-3-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.2 g，21.21 mmol，92％收率)，为无色油状物，其用于下一步骤。
Figure 230314DEST_PATH_IMAGE107
中间体43: (R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 617433DEST_PATH_IMAGE108
将叠氮化钠(2.68 g，41.2 mmol)加入到(R)-3-氟-3-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(7 g，20.62 mmol)于DMF(50mL)中的溶液中，将混合物在70℃加热2小时，然后用水(200 mL)稀释，用 EtOAc(2× 100 mL)萃取。合并的有机物用水(2×100mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到粗产物，为无色油状物。将粗产物溶于DCM(10 mL)中并加载到100g二氧化硅柱上，然后用0-50％EtOAc /环己烷洗脱，将含产物的级分(用茚三酮显色)真空蒸发，得到(R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.2 g，18.16 mmol，88％收率)，为无色油状物，其不经进一步纯化即可进行下一步。
Figure 721656DEST_PATH_IMAGE109
中间体44: (S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 877830DEST_PATH_IMAGE110
将(R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.0 g，17.46 mmol)溶解在THF(50 mL)中，加入PPh3 (5.50 g，20.95 mmol)，然后在室温下将混合物搅拌过周末。加入水(50 mL)，将混合物剧烈搅拌2小时，然后用EtOAc(100 mL)和盐水(50 mL)稀释，分离有机层，干燥并真空蒸发，得到浅黄色油状物。将该粗产物溶解在DCM(20 mL)中并加载到100g二氧化硅柱上，然后用0-20％2M甲醇氨/DCM洗脱，并将含产物的级分(用茚三酮显色)真空蒸发，得到(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.0 g，15.36 mmol，88％收率)，为无色油状物。
Figure 284672DEST_PATH_IMAGE111
中间体45: (S)-2-((((三氟甲基)磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 893508DEST_PATH_IMAGE112
在N2气氛下将(S)-2-(羟甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(200 g，921 mmol)(可商购自例如AOK chem)在DCM(1800 mL)中的搅拌溶液冷却至-20℃。加入吡啶(82 mL，1013 mmol)，然后经30分钟加入溶解在DCM(200 mL)中的Tf2O溶液(171 mL，1013 mmol)。将反应温度保持在-25℃下1小时。将反应混合物温热至0℃并用1N HCl水溶液(466 mL)稀释，分离有机层，用水(3×800 mL)、盐水溶液(800 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗化合物。该粗产物用己烷(120 mL)研磨。通过布氏漏斗过滤所得固体，用己烷(60 mL)洗涤，在真空下干燥，得到(S)-2-((((三氟甲基)磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(203 g，562 mmol，61.0％收率)，为浅黄色固体。
Figure 67000DEST_PATH_IMAGE113
LCMS 5 min甲酸法: Acq. 方法条件: RND-FA-4.5-MIN; 柱: Acquity BEH C18(50 mm x 2.1 mm, 1.7 µm); 流动相: A: 0.1%甲酸/水; B: 0.1%甲酸/ACN; 时间(min)/%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3; 柱温: 35℃, 流速: 0.6 mL/min。
中间体46: (S)-2-(氰基(羟基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯, 未限定立体中心的非 对映异构体的混合物
Figure 77682DEST_PATH_IMAGE114
将KCN (5.59 g, 86 mmol)添加到(S)-2-((((三氟甲基)磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (20 g, 57.3 mmol)于DMSO (50 mL)中的溶液中，同时在冰浴中冷却，然后将混合物搅拌30分钟，然后温热至室温过夜。混合物用水(500 mL)稀释，并用EtOAc(2×200 mL)萃取。合并的有机物用水(2×200 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到深棕色油状物。将其通过340g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-60％EtOAc/环己烷洗脱，通过过滤收集含有产物的级分(通过茚三酮显色)，得到无色油状物 - (S)-2-(氰基(羟基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (10.2 g, 42.1 mmol, 73.5%收率)。
Figure 45638DEST_PATH_IMAGE115
中间体47: (S)-2-(2-氨基-1-羟乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯, 未限定立体中心的 非对映异构体的混合物
Figure 407349DEST_PATH_IMAGE116
将(S)-2-(氰基(羟基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(8 g，33.0 mmol)溶于THF(10mL)中并加入BH3.THF (1M于THF中, 99 mL, 99 mmol)，然后将混合物在N2下在60℃加热2小时。将混合物在冰浴中冷却，然后通过最初滴加MeOH(1000 mL)淬灭。将得到的溶液加热回流1小时，然后真空蒸发，残留物通过100g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-20％含NH3的MeOH/DCM洗脱，得到标题化合物(6.2 g)，为无色油状物。
Figure 853374DEST_PATH_IMAGE117
中间体48: (±)-3,3-二氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 984141DEST_PATH_IMAGE118
在室温下向(±)-2-(1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙酸(1.99 g，7.13mmol，可商购自Activate Scientific)于THF(50 mL)中的搅拌溶液中分批(5mL等分试样)加入BH3•THF (1.0 M于THF中, 29.0 mL, 29.0 mmol)。将混合物在室温下在N2下搅拌15.5小时，然后小心地加入MeOH(50 mL)。再搅拌20分钟后，将混合物真空蒸发，并将残余物在EtOAc(50 mL)和水(50 mL)之间分配。加入饱和盐水溶液(10 mL)以帮助相分离并分离各相。水相用另外的EtOAc(3×40 mL)萃取，合并的有机萃取物通过装有疏水性玻璃料的柱筒干燥，在N2气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到浅黄色粘性油状物; (±)-3,3-二氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (1.942 g, 7.32 mmol, 103%收率)。
Figure 122998DEST_PATH_IMAGE119
中间体49 : (±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁 酯
Figure 706426DEST_PATH_IMAGE120
将(±)-3,3-二氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.884 g，7.10 mmol)溶于DCM(60 mL)并加入Et3N(1.48 mL，10.62 mmol)中)和Ms-ClMs-Cl(0.719 mL，9.23 mmol)。将溶液在室温下搅拌2.75小时，然后用水(100 mL)洗涤，水相用DCM(2×100 mL)萃取。合并的有机相通过使其通过装有疏水性玻璃料的柱筒而干燥，真空蒸发溶剂，得到澄清油状物，将其结晶得到白色固体; (±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (2.467 g, 7.18 mmol, 101%收率)。
Figure 956142DEST_PATH_IMAGE121
中间体50 : (±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 551202DEST_PATH_IMAGE122
将(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.332g，3.88 mmol)溶于DMF(10 mL)并加入叠氮化钠(301.5 mg，4.64 mmol)。将混合物在N2下在80℃下搅拌4小时。冷却后，混合物用1M Na2CO3水溶液(50 mL)稀释，并用EtOAc(3×30 mL)萃取[注意，在分离中观察到3个相，EtOAc萃取物密度最小；在第二次和第三次萃取时，在下层相出现了一些盐析固体，加入水(约10 mL)以有助于该问题]。合并的有机物用水(2×40mL)洗涤[注意，第二次水洗导致层的乳化，加入饱和盐水溶液(约10 mL)以帮助相分离]，然后干燥并真空蒸发，得到淡黄色油状物; (±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.23 g，4.24 mmol，109％收率)，含有约0.33当量的DMF。
Figure 860961DEST_PATH_IMAGE123
中间体51: (±)-4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 931685DEST_PATH_IMAGE124
在20℃下(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.22 g，4.20mmol)于EtOAc(50 mL)中的溶液经10％ Pd/C催化剂柱筒使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化。从收集的溶液中真空蒸发溶剂，得到无色油状物，通过NMR分析确定其为起始叠氮化物与产物胺的6:5混合物。将残余物重新溶解在EtOH(50 mL)中，并再次经10％Pd/C催化剂柱筒使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化，但这次是在40℃下。从收集的溶液中真空蒸发溶剂，得到无色油状物(982.1 mg)。
Figure 985092DEST_PATH_IMAGE125
中间体52 : (±)-4,4-二氟-3-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 824872DEST_PATH_IMAGE126
在室温下向(±)-2-(1-(叔丁氧基羰基)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙酸(197.0 mg，0.705 mmol，可商购自Activate Scientific)于THF (5 mL)中的搅拌溶液中加入BH3•THF(1.0 M于THF中, 2.8 mL, 2.80 mmol)。将混合物在室温下在N2下搅拌2.5小时，然后小心地加入MeOH(5 mL)。再搅拌10分钟后，将混合物真空蒸发，并将残余物在EtOAc(5 mL)和水(5 mL)之间分配。用另外的EtOAc(3×4 mL)萃取水相，合并的有机萃取物通过装有疏水性玻璃料的柱筒干燥，在N2气流下蒸发溶剂，得到无色胶状物; (±)-4,4-二氟-3-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (162.0 mg, 0.611 mmol, 87%收率)。
Figure 571111DEST_PATH_IMAGE127
中间体53 : (±)-4,4-二氟-3-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁 酯
Figure 863552DEST_PATH_IMAGE128
将(±)-4,4-二氟-3-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (883 mg, 3.33 mmol)溶于DCM (30 mL)并加入Et3N (0.70 mL, 5.02 mmol)和Ms-Cl (0.337 mL, 4.33 mmol)。将溶液在室温下搅拌2.75 h，然后用水(50 mL)洗涤，水相用DCM (2 x 50 mL)萃取。合并的有机相通过使其通过装有疏水性玻璃料的柱筒而干燥，真空蒸发溶剂，得到白色固体; (±)-4,4-二氟-3-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (1.141 g, 3.32 mmol,100%收率)。
Figure 720650DEST_PATH_IMAGE129
中间体54: (±)-3-(2-氰基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 414936DEST_PATH_IMAGE130
将(±)-4,4-二氟-3-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(207 mg，0.602 mmol)溶于DMSO(5 mL)中并加入NaCN(31.5 mg，0.643 mmol)。将混合物在N2下在55℃下搅拌17小时。将混合物冷却至室温并在水(10 mL)和乙醚(10 mL)之间分配。分离各相，水相用另外的乙醚(3×10 mL)萃取。合并的有机相通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤干燥，真空蒸发溶剂，得到黄色油状物; 粗(±)-3-(2-氰基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (150.6 mg, 0.549 mmol, 91%收率)。
中间体55: (±)-3-(3-氨基丙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 66497DEST_PATH_IMAGE131
在室温下向粗(±)-3-(2-氰基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(71.7 mg，0.261 mmol)于THF(2 mL)中的搅拌溶液中加入BH3•THF (1.0 M于THF中, 1.0 mL, 1.000mmol)。将混合物在70℃在N2下搅拌18.75小时。将混合物冷却至室温，然后小心地加入MeOH(3 mL)。再搅拌70分钟后，将混合物真空蒸发，将残余物在EtOAc(5 mL)和水(5 mL)之间分配。水相用另外的EtOAc(3×4 mL)萃取，合并的有机萃取物通过装有疏水性玻璃料的柱筒干燥，并在N2气流下蒸发溶剂，得到无色胶状物。将胶状物再溶解于MeCN(约2 mL)中并施加到已用MeCN预润湿的1g SCX-2离子交换柱上。将该柱用MeCN(2×5 mL)和MeOH(2×5 mL)洗脱，然后用2M氨在MeOH中的溶液(3×5 mL)洗脱。将来自SCX-2纯化的前10mL氨溶液洗脱液级分在N2气流下蒸发，得到无色胶状物; 粗(±)-3-(3-氨基丙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (6.8 mg, 0.024 mmol, 9.35%收率)。
中间体56 : (±)-3-(2-叠氮基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 924863DEST_PATH_IMAGE132
将(±)-4,4-二氟-3-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (1.138g, 3.31 mmol) 溶于DMF(20 mL)中，并加入叠氮化钠(263.3 mg，4.05 mmol)。将混合物在N2下在80℃下搅拌4小时。冷却后，混合物用1M Na2CO3水溶液(50 mL)稀释，并用EtOAc(3×30 mL)萃取[注意，在分离中观察到3个相，EtOAc萃取物密度最低]。合并的有机物用水(2×40 mL)洗涤，然后干燥并真空蒸发，得到浅黄色油状物; (±)-3-(2-叠氮基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.980 g，3.38 mmol，102％收率)，含有约0.2当量的DMF。
Figure 320072DEST_PATH_IMAGE133
中间体57 : (±)-3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 868865DEST_PATH_IMAGE134
在20℃下将(±)-3-(2-叠氮基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(978 mg，3.37mmol)于EtOAc(50 mL)中的溶液经10% Pd/C催化剂柱筒使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化。从收集的溶液中真空蒸发溶剂，得到无色油状物，通过NMR分析确定其为起始叠氮化物与产物胺的5:4混合物。将残余物重新溶解在EtOH(50 mL)中，并再次经10% Pd/C催化剂柱筒使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化，但这次是在40℃下。从收集的溶液中真空蒸发溶剂，得到无色油状物，(±)-3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (796.3 mg, 3.01 mmol, 89%收率)。
Figure 956907DEST_PATH_IMAGE135
中间体58 : 4-(3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔 丁酯
Figure 223940DEST_PATH_IMAGE136
向氢化钠(在矿物油中的60％分散体，0.1209 g，3.02 mmol)于THF(5 mL)中的混合物中加入3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.5019 g，2.507 mmol，可商购自Alfa Aesar)于THF(10 mL)中的悬浮液。将混合物在室温下搅拌45分钟，然后加入2-(3-溴丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(0.6855 g，2.56 mmol，可商购自Sigma-Aldrich)。将混合物在室温下搅拌另外65小时。将反应混合物用饱和氯化铵(约8 mL)和水(约8 mL)淬灭，分层。水层用EtOAc(2×15 mL)萃取，合并有机层，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，得到黄色油状固体，将其重新溶解于约 3: 1的DMSO:MeCN(9 mL)中并通过MDAP(3×3mL注射，高pH法)直接纯化。将所需级分在N2气流下蒸发，再溶于MeOH(各约2 mL)中并合并。该溶液在N2气流下蒸发，将残余物真空干燥，得到无色玻璃状固体。将其重新溶解在MeOH(约5 mL)中并直接施加到10g Isolute氨基丙基离子交换柱的顶部。用4个柱体积的MeOH洗脱柱子。将第一级分真空蒸发，得到无色胶状物。4-(3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (237.4 mg, 0.613 mmol, 24.45%收率)。
Figure 16316DEST_PATH_IMAGE137
中间体59: 4-(3-氨基丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 685195DEST_PATH_IMAGE138
向4-(3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(225.6mg，0.582 mmol)于EtOH(5 mL)中的溶液中加入水合肼(0.055 mL，1.771 mmol)。将反应混合物温热至40℃并搅拌20小时30分钟。将反应混合物冷却至室温并过滤，将滤液在N2气流下蒸发，得到白色固体。将其重新溶解在MeOH(2 mL)中并通过MDAP(2×1 mL注射，高pH法)直接纯化。将所需级分在N2气流下蒸发，再溶于MeOH(各约2mL)并合并。该溶液在N2气流下蒸发，得到无色粘性油状物。4-(3-氨基丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (47.3 mg, 0.184mmol, 31.6%收率)。
Figure 944138DEST_PATH_IMAGE139
中间体60 : 2-(3-(3-氧代哌嗪-1-基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
Figure 432888DEST_PATH_IMAGE140
将3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙醛(499.4 mg，2.458 mmol，可商购自Fluorochem)、哌嗪-2-酮(376.1 mg，3.76 mmol，可商购自Sigma Aldrich)和Na(OAc)3BH(779.9 mg, 3.68 mmol)于2-MeTHF(20 mL)中的混合物在室温下搅拌21小时40分钟。3小时后，再加入Na(OAc)3BH(516.6 mg，2.437 mmol)。4小时45分钟后加入AcOH(0.014 mL，0.246mmol)。20小时40分钟后，再加入2-MeTHF(5 mL)并将反应混合物加热至60℃。在60℃下3小时20分钟后，再加入Na(OAc)3BH (279.9 mg, 1.321 mmol)。在60℃下25小时45分钟后，再加入Na(OAc)3BH (496.8 mg, 2.344 mmol)。在60℃下总共31小时后将混合物从加热和搅拌中移出并冷却至室温。向该混合物中加入饱和NaHCO3 (2 mL)和水(8 mL)。将混合物在室温下搅拌20分钟，并用EtOAc(3×10 mL)萃取。有机层通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，真空蒸发挥发物，得到油状物，将其再溶于MeOH(约5 mL)中，并施加到20g Isolute氨基丙基离子交换柱的顶部。用4个柱体积的MeOH和4个柱体积的2M HCl水溶液洗脱柱子。真空蒸发第二份MeOH级分，得到浅黄色固体; 2-(3-(3-氧代哌嗪-1-基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(595.1 mg，2.071 mmol，84％收率)。
Figure 435479DEST_PATH_IMAGE141
中间体61 : 4-(3-氨基丙基)哌嗪-2-酮
Figure 972246DEST_PATH_IMAGE142
向2-(3-(3-氧代哌嗪-1-基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(590.1 mg，2.054 mmol)于EtOH(12 mL)中的混合物中加入水合肼(0.191 mL，6.16 mmol)。将混合物在室温下搅拌24.5小时。然后将混合物施加到20g Isolute SCX-2离子交换柱的顶部。用4个柱体积的MeOH和4个柱体积的2M NH3/MeOH洗脱柱。将碱性级分真空蒸发，将残余物溶于10mM碳酸氢铵缓冲水溶液(pH 10, 6 mL)中，并通过MDAP(2×3 mL注射，高pH法)直接纯化。合并所需的级分，真空蒸发，得到浅黄色粘稠油状物; 4-(3-氨基丙基)哌嗪-2-酮(273.6 mg，1.740mmol，85％收率)。
Figure 136511DEST_PATH_IMAGE143
中间体62 : 2-(3-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
Figure 378137DEST_PATH_IMAGE144
向3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙醛(515 mg，2.53 mmol，可商购自Fluorochem)和Na(OAc)3BH(815.9 mg，3.85 mmol)于2-MeTHF(20 mL)中的混合物中加入1-甲基哌嗪-2-酮(0.420 mL，3.82 mmol，可商购自Fluorochem)。将混合物在室温下搅拌4小时45分钟。向反应混合物中加入2M Na2CO3水溶液(10 mL)并将该混合物在室温下搅拌10分钟，得到约pH 10的水相。分离各层，水层用EtOAc(2×10 mL)洗涤。将有机层通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，将滤液真空蒸发，得到浅黄色结晶固体。2-(3-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(660.5 mg，2.192 mmol，86％收率)。
Figure 918839DEST_PATH_IMAGE145
中间体63 : 4-(3-氨基丙基)-1-甲基哌嗪-2-酮
Figure 296731DEST_PATH_IMAGE146
向2-(3-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(656.7 mg，2.179 mmol)于EtOH(15 mL)中的混合物中加入水合肼(0.200 mL, 6.44 mmol)并将混合物在室温下搅拌41.5小时。将混合物加热至40℃并再搅拌7小时25分钟。将混合物从加热和搅拌中取出并冷却至室温。然后过滤混合物，将滤液施加到20g Isolute SCX-2离子交换柱的顶部。用4个柱体积的MeOH和4个柱体积的2M NH3/MeOH洗脱柱子。将碱性级分真空蒸发，得到黄色油状物。将其重新溶解在MeOH(6 mL)中并通过MDAP(2×3 mL注射，高pH法)纯化。将所需级分真空蒸发，再溶解于DCM(约10 mL)中并真空蒸发，得到浅黄色粘性油状物; 4-(3-氨基丙基)-1-甲基哌嗪-2-酮(260.9 mg，1.524 mmol，69.9％收率)。
Figure 897477DEST_PATH_IMAGE147
中间体64: 2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 219874DEST_PATH_IMAGE148
在室温下将2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(40.7 g，64.0 mmol)加入到4-(叔丁氧基羰基)-6-氯吡啶甲酸(15 g，58.2 mmol，可商购自例如Anichem)和Et3N(16.23 mL，116 mmol)于DCM(100 mL)中的溶液中，然后将混合物搅拌20分钟，然后加入甲胺(2M于THF中, 38.8 mL, 78 mmol)。将混合物搅拌2小时，然后用水(100 mL)和饱和NaHCO3溶液洗涤，然后干燥并真空蒸发，得到浅黄色胶状物。将其溶解在DCM中并加载到340 g二氧化硅柱上，然后用0-40％EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(6.9 g，25.5 mmol，43.8％收率)，为浅黄色胶状物，其静置后结晶。
Figure 564267DEST_PATH_IMAGE149
中间体65: 6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯
Figure 62245DEST_PATH_IMAGE150
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(4.2 g，15.51 mmol)溶于DMF(50 mL)和EtOH(50 mL)的混合物中，然后加入Et3N(4.71 g，46.5 mmol)和[(R)-(+)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘]氯化钯(II)(0.621 g，0.776 mmol)，用一氧化碳吹扫混合物，然后密封，装备装满一氧化碳的气球。将混合物在70℃加热过周末，然后真空蒸发，将残余物在水(100 mL)和EtOAc(100 mL)之间分配。用水(100 mL)洗涤有机层，干燥并真空蒸发。深棕色残余物通过100g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，得到6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(4.2 g, 13.62 mmol, 88%收率)，为浅黄色胶状物。
Figure 568313DEST_PATH_IMAGE151
中间体66: 2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 784530DEST_PATH_IMAGE152
在0℃下将氯化钙(4.54 g，40.9 mmol)加入到6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(4.2 g，13.62 mmol)于EtOH(50 mL)和2-MeTHF(50.0 mL)中的混合物中，然后加入NaBH4(0.773 g，20.43 mmol)。将得到的红色混合物搅拌2小时，使混合物温热至室温。将混合物放置过夜，然后在冰浴中冷却，并经20分钟缓慢加入氯化铵溶液(100mL)。混合物用EtOAc(2×150 mL)萃取，然后将有机物干燥并真空蒸发，残余物通过50g二氧化硅柱上的色谱法纯化，得到2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (2.2 g,8.26 mmol, 60.6%收率)，为米色固体。
Figure 480085DEST_PATH_IMAGE153
中间体67: 2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 832569DEST_PATH_IMAGE154
将2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g，5.63 mmol)溶解在DCM(5 mL)中，加入亚硫酰氯(1.257 mL，16.90 mmol)并在室温下将反应物搅拌4小时，然后通过加入饱和NaHCO3 溶液淬灭混合物，搅拌混合物20分钟，然后分离有机层，干燥并真空蒸发，得到2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.35 g，4.74 mmol，84％收率)，为无色固体。
Figure 509538DEST_PATH_IMAGE155
中间体68 : 2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 947472DEST_PATH_IMAGE156
将2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (543 mg, 2.039 mmol)溶于DCM(5 mL)中。加入戴斯-马丁氧化剂(1009 mg，2.380 mmol)并将混合物在室温下搅拌3小时。向反应混合物中加入硫代硫酸钠，然后再加入NaHCO3。将所得混合物搅拌15分钟。用DCM萃取水相三次，合并的有机层经MgSO4干燥并蒸发。通过SiO2色谱法纯化粗产物(Biotage®SNAP 10 g，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩所需级分，得到2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(501 mg，1.706 mmol，84％收率)，为无色油状物。
Figure 633669DEST_PATH_IMAGE157
中间体69: 2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 106238DEST_PATH_IMAGE158
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(5 g，18.47 mmol, 可商购自例如Anichem)和PdCl2(PPh3)2 (1.296 g, 1.847 mmol)溶解在THF(50 mL)中并加入苄基溴化锌(II)(0.5M于THF中，55.4 mL，27.7 mmol)，然后将混合物在70℃加热2小时。真空蒸发溶剂，残余物通过100g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，得到2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(5.7 g，17.46 mmol, 95％收率)，为深棕色油状物，其不经进一步纯化即用于下一步骤。
Figure 219688DEST_PATH_IMAGE159
中间体70: 2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 144919DEST_PATH_IMAGE160
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(2.5 g，7.66 mmol)溶于DCM(30mL)中，然后加入TFA(10 mL，130 mmol)并将混合物在室温下搅拌3小时。真空蒸发溶剂，得到淡黄色胶状物。将粗物质溶于DCM(100 mL)中并用水(100 mL)洗涤，将有机层干燥并真空蒸发，得到2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(2.0 g，7.40 mmol，97％收率)，为浅黄色固体。
Figure 369226DEST_PATH_IMAGE161
中间体71: 2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 696303DEST_PATH_IMAGE162
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g，5.54 mmol)溶于THF(20 mL)中，加入PdCl2(PPh3)2 (0.389 g，0.554 mmol)。溶液用N2鼓泡5分钟，然后加入(3-甲氧基苄基)溴化锌(II) (0.5M于THF中，20mL，10.00mmol)，将混合物在70℃加热2小时。溶液用EtOAc(100 mL)稀释，用水(100 mL)洗涤，干燥并真空蒸发。残余物通过50g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.65 g，4.63 mmol，84％收率)，为深黄色油状物。
Figure 590440DEST_PATH_IMAGE163
中间体72: 2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 737388DEST_PATH_IMAGE164
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(2.5 g，7.01 mmol)溶于DCM(30 mL)中，然后加入TFA(10 mL，130 mmol)，将混合物在室温下搅拌18小时。真空蒸发溶剂，得到淡黄色胶状物。将其溶于DCM(50 mL)中并用水(50 mL)洗涤。将有机层干燥并真空蒸发，得到2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(1.8 g，5.99 mmol，85％收率)，为浅黄色固体。
Figure 765387DEST_PATH_IMAGE165
中间体73: (+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
Figure 946969DEST_PATH_IMAGE166
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.5 g，1.847 mmol)溶于THF(20 mL)中，加入PdCl2(PPh3)2(0.130 g，0.185 mmol)。将溶液用N2鼓泡5分钟，然后加入(1-苯基乙基)溴化锌(II) (0.5M于THF中，7.39 mL，3.69 mmol，可商购自例如Sigma Aldrich)并将混合物在70℃加热2小时。
将溶液用EtOAc(100 mL)稀释，用水(100 mL)洗涤，干燥并真空蒸发。残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(0.41 g，1.204 mmol，65.2％收率)，为深黄色油状物。
Figure 402222DEST_PATH_IMAGE167
中间体74: (+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸
Figure 567624DEST_PATH_IMAGE168
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(0.41 g，1.204 mmol)溶解在TFA(6 mL)中并在室温下搅拌3小时，然后将混合物真空蒸发并将残余物在水(20 mL)和DCM(20 mL)之间分配。将有机层干燥并真空蒸发，得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(305 mg，1.073 mmol，89％收率)，为灰色泡沫。
Figure 133734DEST_PATH_IMAGE169
中间体75: (R*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
中间体76: (S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
Figure 169823DEST_PATH_IMAGE170
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(1500 mg)进行手性纯化。通过超声处理和温和加热将外消旋物溶解在EtOH(60 mL)中。通过制备型自动进样器将1250μL自动进样到柱上，该柱用庚烷:EtOH:异丙胺(2000:40:4，预混合)洗脱，流速= 42.5mL/min，检测：280nm处的UV二极管阵列 (带宽140 nm，参比400nm带宽100nm)，柱：Chiralcel OD-H (250×30mm)。通过漏斗床馏分收集器触发收集，使用UV阈值，在9分钟后开始收集。将10-12分钟的级分合并(bulked)并标记为峰1，将13.5-17分钟的级分合并(bulked)并标记为峰2。将合并(bulked)的级分真空浓缩，然后加入EtOH(3×4 mL)中，并转移到配衡的玻璃小瓶中，并在N2气流下将其吹干。
峰1提供中间体75 (497 mg)。
Figure 795977DEST_PATH_IMAGE171
峰2提供中间体76 (517 mg)。
Figure 917517DEST_PATH_IMAGE172
中间体77: (R*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸
Figure 897105DEST_PATH_IMAGE173
将(R*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(497 mg，1.460mmol，中间体75)加入DCM(5 mL)中，加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌过夜。再次加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在50℃下回流3小时。向反应中加入更多TFA(1 mL)，然后将其再搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将样品加载到MeOH中，并通过在磺酸(SCX)2 g上的SPE纯化，用MeOH洗脱。合并合适的级分，真空蒸发，得到所需产物(350mg)，为粉红色固体。
Figure 53280DEST_PATH_IMAGE174
中间体78: 2-(3-氰基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 850335DEST_PATH_IMAGE175
在2 mL微波小瓶中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg,0.351 mmol)与(3-氰基苯基)硼酸(103 mg，0.702 mmol)、K2CO3 (291 mg，2.107 mmol)和PdCl2(dppf) (55 mg，0.075 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(2 mL)和水(1 mL)中合并。将其在120℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，在EtOAc(10 mL)和水(10 mL)之间分配，用EtOAc (2×10 mL)萃取，通过疏水性玻璃料干燥并浓缩。发现羧酸存在于水层中，因此弃去有机残余物。用2M HCl将水层调节至pH 6，并进一步用EtOAc(2×30 mL)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，得到目标产物(47 mg)，为浅橙色固体。
Figure 459170DEST_PATH_IMAGE176
中间体79: 2-(2-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 367084DEST_PATH_IMAGE177
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(206.9 mg, 0.764 mmol)和PdCl2(PPh3)2(84.0 mg, 0.120 mmol)于THF(2.0 mL)中的混合物在微波小瓶中在室温下在吹扫小瓶的N2气流下搅拌5分钟。向其中加入 (2-甲氧基苄基)氯化锌(II) (0.5M于THF中, 2.2mL, 1.100 mmol, 可商购自Sigma Aldrich)，将小瓶重新密封并将混合物在微波反应器中于110℃加热30分钟。然后将反应混合物通过2.5g Celite® 柱过滤并用EtOAc (约20 mL)洗涤。向滤液中加入2M Na2CO3水溶液(20 mL)和水(5 mL)，分离各层。水层用另外的EtOAc(2 x 20 mL)萃取，合并有机层，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，得到粘性黑色油状物，将其再溶解于DCM（约5mL）中，直接施加到25g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过Biotage® SP4快速柱色谱法纯化。用10％-50％EtOAc/环己烷的梯度洗脱柱子。将所需的级分真空蒸发，得到淡黄色胶状物; 2-(2-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (232.3 mg, 0.652 mmol, 85%收率)。
Figure 440082DEST_PATH_IMAGE178
中间体80: 2-(2-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 408038DEST_PATH_IMAGE179
向2-(2-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(228.0 mg，0.640mmol)于DCM(10 mL)中的溶液中逐滴加入TFA(2.0 mL，26.0 mmol)。将得到的黄色溶液在室温下搅拌53小时，然后将其真空蒸发，得到黄色胶状物。将其用MeCN(约10 mL)研磨，除去上清液，并将剩余的白色固体真空干燥。将上清液在N2气流下蒸发，并将残余物用乙醚(约2mL)研磨。除去乙醚上清液，将残余物加入到先前的白色固体中。将合并的固体真空干燥，得到白色固体; 2-(2-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(157.7 mg，0.525 mmol，82％收率)。
Figure 504170DEST_PATH_IMAGE180
中间体81: 2-(3-羟基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 215774DEST_PATH_IMAGE181
将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(130 mg，0.457 mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(151 mg，0.685 mmol)、K2CO3(189 mg，1.370 mmol)和PdCl2(dppf)(33.4 mg，0.046 mmol)加入微波小瓶，加入2-MeTHF(2 mL)和水(1 mL)并将混合物在100℃加热1小时。混合物用EtOAc(10 mL)稀释，用饱和氯化铵溶液洗涤，将有机层干燥并真空蒸发，残余物通过10g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，得到2-(3-羟基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(95 mg，0.277 mmol，60.8％收率)，为浅黄色泡沫。
Figure 346541DEST_PATH_IMAGE182
中间体82: 2-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 522218DEST_PATH_IMAGE183
将2-(3-羟基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(90 mg，0.263 mmol)溶于DMF(2 mL)并加入K2CO3(109 mg，0.789 mmol)和1,3-二氧杂环戊烷-2-酮(69.4 mg，0.789mmol)，然后将混合物在100℃加热3小时。混合物用水(10 mL)稀释并用EtOAc萃取，有机层用水(10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，残余物通过10g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，得到2-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(55 mg，0.142 mmol，54.1％收率)，为无色胶状物。
Figure 840066DEST_PATH_IMAGE184
中间体83: 2-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 355361DEST_PATH_IMAGE185
将HCl(4M，在1,4-二氧杂环己烷中，2 mL，8.00 mmol)加入到2-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(166 mg，0.430 mmol)中，并将所得混合物搅拌过周末。除去溶剂，然后加入TFA(1 mL，12.98 mmol)并将所得混合物搅拌6小时。除去溶剂，然后加入二甲胺(2M于THF中，3 mL，6.00 mmol)，将所得混合物搅拌15分钟。然后浓缩反应混合物，得到目标产物(296 mg)，纯度为45％，其无需进一步纯化即可使用。
Figure 340635DEST_PATH_IMAGE186
中间体84: 2-(4-氰基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 509448DEST_PATH_IMAGE187
在2mL微波小瓶中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异氰酸叔丁酯(75 mg，0.263 mmol)与(4-氰基苯基)硼酸(77 mg，0.527 mmol)、K2CO3(218 mg，1.580 mmol)和PdCl2(dppf) (40 mg, 0.055 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(2 mL)和水(1 mL)中合并。将其在120℃下加热40分钟。溶液通过Celite®过滤，在EtOAc (10 mL)和水 (10 mL)之间分配，用EtOAc (2×10 mL)萃取，经疏水玻璃料干燥并浓缩，得到217 mg粗棕色残余物。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP 25g柱，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩所需的级分，得到目标产物(66 mg)，为棕色油状物。
Figure 314593DEST_PATH_IMAGE188
中间体85: 2-(4-氰基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 368000DEST_PATH_IMAGE189
向2-(4-氰基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(66 mg，0.188 mmol)于DCM(2 mL)中的溶液中加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应混合物在室温下在N2下搅拌2天。将反应混合物真空浓缩，将残余物在EtOAc和水之间分配。分离有机层，用疏水性玻璃料干燥并浓缩，得到目标产物(62 mg)，为橙色固体。
Figure 207780DEST_PATH_IMAGE190
中间体86: 2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 688440DEST_PATH_IMAGE191
在2mL微波小瓶中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg，0.351 mmol)与(1H-吲哚-4-基)硼酸(113 mg，0.702 mmol)、K2CO3(219 mg，2.107 mmol)和PdCl2(dppf) (51.4 mg, 0.070 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中合并。将其在120℃下加热40分钟。通过Celite®过滤溶液，用EtOAc(10 mL)洗脱，干燥并浓缩。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP 10g，用0-60％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩所需级分，得到2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(75.4 mg，0.165mmol，47.0％收率)，为白色固体。
Figure 59509DEST_PATH_IMAGE192
中间体87: 2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 651028DEST_PATH_IMAGE193
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(75.4 mg，0.165mmol)于DCM(3 mL)中的溶液中加入TFA(0.60 mL, 7.79 mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入另外的TFA(0.3 mL，0.165 mmol)并将所得混合物搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩，得到2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(184 mg，0.149 mmol，90％收率)。
Figure 610893DEST_PATH_IMAGE194
中间体88: 2-(4-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 262455DEST_PATH_IMAGE195
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(500 mg，1.847 mmol)和PdCl2(PPh3)2 (194 mg，0.277 mmol)加入微波小瓶中，然后密封。将容器用N2吹扫，然后加入THF(1 mL)和(4-甲基苄基)氯化锌(II)(0.5M于THF中，5.54 mL，2.77 mmol)。将反应物在Biotage® Initiator微波中在110℃下加热30分钟。加入另外的(4-甲基苄基)氯化锌(III)(0.5M的THF溶液，3mL)并将反应物在Biotage® Initiator微波中在110℃再加热30分钟。然后通过Celite®过滤反应。将粗产物于最少的DCM中施加于25g SNAP ULTRA二氧化硅柱，并通过快速色谱法纯化，用0%-50% (10% 含2M NH3的MeOH/DCM)/DCM洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到标题化合物(834 mg)。
Figure 42192DEST_PATH_IMAGE196
中间体89: 2-(4-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 499718DEST_PATH_IMAGE197
将2-(4-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (834 mg, 2.450 mmol)加入DCM(10 mL)中。加入TFA(1 mL，12.98 mmol)并将反应物在室温搅拌过夜。再次加入另外的TFA (1 mL，12.98 mmol)并将反应物再搅拌3小时。反应仍未完成。将反应物加热至50℃并再放置2小时。将反应物真空浓缩，得到标题化合物(662 mg)，将其直接用于下一步骤。
Figure 314090DEST_PATH_IMAGE198
中间体90: (+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 136553DEST_PATH_IMAGE199
在0℃下，向2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(118 mg，0.447 mmol)于THF(1.5 mL)中的溶液中滴加苯基溴化镁(2 mL，2.000 mmol)。将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物倒入氯化铵水溶液中并用EtOAc (20mL×3)萃取。有机层经MgSO4干燥并真空浓缩。通过SiO2色谱法纯化粗产物(Biotage® SNAP 10g，用0-60％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩所需级分，得到2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43 mg，0.107mmol，23.91％收率)。
Figure 403586DEST_PATH_IMAGE200
中间体91: (+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 602486DEST_PATH_IMAGE201
向2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43 mg，0.126 mmol)于DCM(0.5 mL)中的溶液中加入TFA(0.4 mL，5.19 mmol)并将反应混合物搅拌2小时，然后搅拌过夜。加入另外的TFA(0.4 mL，0.126 mmol)并将反应混合物搅拌5小时，然后除去溶剂，得到2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(47.9 mg, 0.117 mmol, 93%收率, 70%纯度)，其直接用于下一步骤。
Figure 84414DEST_PATH_IMAGE202
中间体92: 2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 77778DEST_PATH_IMAGE203
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(500 mg，1.847 mmol)和PdCl2(PPh3)2 (194 mg，0.277 mmol)加入微波小瓶中，然后密封。将系统用N2吹扫，然后加入(3-甲基苄基)氯化锌(II) (0.5M于THF中，5.54 mL，2.77 mmol)和THF (1 mL)。将反应容器密封并在Biotage® Initiator微波中加热至110℃保持30分钟。然后将反应物真空浓缩。粗产物于最少量的DCM中施加到25g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-75％(10％含2M NH3的MeOH/DCM)洗脱。合并合适的级分并真空浓缩。
Figure 832107DEST_PATH_IMAGE204
中间体93: 2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 834698DEST_PATH_IMAGE205
将2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(592 mg，1.739 mmol)加入DCM(5 mL)中。加入TFA(1 mL，12.98 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物在50℃搅拌过夜。将反应物真空浓缩，得到标题化合物(472 mg)，将其直接用于下一步骤。
Figure 623663DEST_PATH_IMAGE206
中间体94: 4-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸 叔丁酯
Figure 787928DEST_PATH_IMAGE207
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (70 mg, 0.259 mmol)、HATU (156 mg,0.410 mmol)、DIPEA (0.14 mL, 0.802 mmol)和DMF (3 mL)在室温下在N2下搅拌，然后加入4-(2-氨基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (120 mg, 0.526 mmol)并将反应物在室温下在N2下搅拌3小时。加入另外的4-(2-氨基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(120 mg，0.526 mmol)并将反应物在室温下在N2下搅拌1小时。加入另外的HATU(147 mg，0.387 mmol)、DIPEA(0.14mL，0.802 mmol)、4-(2-氨基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(118 mg，0.518 mmol)和DMF(3 mL)并将反应物搅拌18小时。浓缩溶液，得到1.2g橙色油状物。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP 25 g柱，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩合适的级分，得到44mg黄色油状物。其通过MDAP(甲酸法)进一步纯化。浓缩含有目标产物的级分，得到4-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(15 mg，0.028 mmol，10.85％收率)，为白色固体)。
Figure 29553DEST_PATH_IMAGE208
中间体95: (S)-2-(3-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺 基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 570256DEST_PATH_IMAGE209
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(184 mg，0.149 mmol)于DMF(0.85 mL)中的溶液中加入HATU(91 mg，0.239 mmol)，然后加入(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(72.7 mg，0.297 mmol)和DIPEA(0.130 mL，0.744 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。通过MDAP(甲酸法)直接纯化反应混合物。含有目标产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。用DCM(2×20 mL)萃取有机层，然后干燥并真空浓缩，得到(S)-2-(3-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(28.7 mg，0.048 mmol，32.4％收率)，为无色油状物。
Figure 948148DEST_PATH_IMAGE210
中间体96: (S)-2-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4- 甲酸叔丁酯
Figure 548894DEST_PATH_IMAGE211
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(40 mg，0.148 mmol)于DMF(0.7 mL)中的溶液中加入HATU(91 mg，0.239 mmol)，然后加入(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(68 mg，0.278 mmol)和DIPEA(0.10 mL，0.573 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。通过MDAP(甲酸法)直接纯化反应混合物。将含有目标产物的级分在饱和Na2CO3溶液和DCM之间分配。用DCM(2×20 mL)萃取有机层，然后干燥并真空浓缩，得到 (S)-2-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (56 mg, 0.101 mmol,68.6%收率) ，为无色油状物。
Figure 622023DEST_PATH_IMAGE212
中间体97: (S)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4- 甲酸叔丁酯
Figure 966417DEST_PATH_IMAGE213
向(S)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(320 mg，1.387 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中加入2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(250 mg，0.925 mmol)，然后加入HATU(528 mg，1.387 mmol)和DIPEA(0.65 mL，3.72 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。用LiCl和EtOAc萃取反应物三次，然后用2M HCl萃取。将合并的有机相干燥，然后真空浓缩。通过SiO2色谱法纯化粗产物(Biotage® SNAP 10 g，用0-60％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩所需的级分，得到粗产物。将其碱洗2次并用DCM萃取。将合并的有机相干燥，然后真空浓缩，得到(S)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(92 mg, 0.172 mmol, 18.55%收率)。
相同的柱子用25％EtOH/EtOAc快速分离（flash）。将含有另外的产物的级分真空浓缩，然后将得到的黄色油状物碱洗并用DCM萃取3次。将合并的有机层干燥，然后真空浓缩，得到另外的产物 - (S)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(77 mg，0.144 mmol，15.53％收率)，为无色油状物。
Figure 198815DEST_PATH_IMAGE214
中间体98: (R)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4- 甲酸叔丁酯
Figure 970462DEST_PATH_IMAGE215
将(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(205 mg，0.888 mmol)和2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(200 mg，0.740 mmol)在DCM(5 mL)中合并，加入HATU(366 mg,0.962 mmol)和Et3N (0.134 mL, 0.962 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌过夜，然后用水(10 mL)洗涤，干燥有机层并真空蒸发。残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到(R)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(280 mg，0.580 mmol，78％收率)。
Figure 921100DEST_PATH_IMAGE216
中间体99: (R)-3-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-3-氟哌 啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 865922DEST_PATH_IMAGE217
将(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(182 mg，0.740 mmol)和2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(200 mg，0.740 mmol)在DCM(5 mL)中合并，然后加入HATU(366 mg，0.962 mmol)和Et3N(0.206 mL，1.480 mmol)并将混合物在室温下搅拌2小时，然后用水、0.5M HCl和NaHCO3溶液洗涤，干燥并真空蒸发，得到灰色胶状物。将其通过10g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。合并含产物的级分并真空蒸发，得到(R)-3-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(220 mg, 0.441 mmol, 59.6%收率)，为无色胶状物。
Figure 218406DEST_PATH_IMAGE218
中间体100: (S)-3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟哌 啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 160955DEST_PATH_IMAGE219
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(212 mg，0.784 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中加入HATU(449 mg，1.182 mmol)，然后加入(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(204 mg，0.784 mmol)和DIPEA(0.6 mL，3.44 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。将其用饱和LiCl溶液和EtOAc萃取三次，然后用2M HCl萃取。将合并的有机相干燥，然后真空浓缩。通过SiO2色谱法纯化粗产物(Biotage® SNAP 10 g，用0-40％EtOAc/环己烷洗脱)。浓缩所需的级分，得到仍不纯的产物。通过MDAP(高pH法)纯化反应混合物。合并所需的级分，真空浓缩，得到(S)-3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(190.5 mg，0.353 mmol，45.0％收率)，为无色油状物。
Figure 598889DEST_PATH_IMAGE220
中间体101: (3S)-3-氟-3-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺 基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 未限定立体中心的非对映异构体的1:1 混合物
Figure 285085DEST_PATH_IMAGE221
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(80 mg，0.281 mmol)加入DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.147 mL，0.844 mmol)和HATU(160 mg，0.422 mmol)，将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(110 mg，0.422 mmol)，将反应物搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将残余物加入乙酸乙酯(10 mL)中并用NaHCO3 (10mL)洗涤。有机相用盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将样品溶于1:1 DMSO:MeCN(3 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到所需产物(147mg)。
Figure 302195DEST_PATH_IMAGE222
中间体102: (1R,5S,6s)-6-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)-3-氮杂 双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 415645DEST_PATH_IMAGE223
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(50 mg，0.185 mmol)加入DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.097 mL, 0.555 mmol)、HATU(106 mg, 0.277 mmol)和(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯 (50 mg, 0.252 mmol, 可商购自例如Fluorochem)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc (10 mL)中并使用NaHCO3 (10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。
Figure 340876DEST_PATH_IMAGE224
中间体103: 6-苄基-N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 565184DEST_PATH_IMAGE225
将(1R,5S,6s)-6-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(111 mg，0.246 mmol)加入DCM(5 mL)中。加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将样品加载到MeOH中，并使用MeOH、然后使用2M氨/MeOH，通过在磺酸(SCX) 1 g上的SPE纯化。合并合适的级分并真空蒸发。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-100％(10％含2M NH3的MeOH/DCM)洗脱。合并合适的级分并真空浓缩。发生了另一种产物的交叉污染。将样品溶于1:1 DMSO:MeCN(3 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(27 mg)，为黄色油状物。
Figure 892260DEST_PATH_IMAGE226
中间体104: (S)-2-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((R*)-1-苯基乙基)异烟酰胺 基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 973348DEST_PATH_IMAGE227
将(R*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(100 mg，0.352 mmol)加入DMF中。加入DIPEA(184 μL，1.055 mmol)和HATU(201 mg，0.528 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(129 mg，0.528 mmol)并将反应物再搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并使用NaHCO3溶液(10mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-75％(3:1 EtOAc:EtOH)洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到目标产物(151 mg) 。
Figure 385875DEST_PATH_IMAGE228
中间体105: (R)-2-(2-(2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙 基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 413874DEST_PATH_IMAGE229
将2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(52 mg，0.183 mmol)加入DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.096 mL，0.549 mmol)、HATU(104 mg，0.274 mmol)和(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(42.1 mg，0.183 mmol)，反应物在室温下搅拌过夜。然后将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并使用NaHCO3(10 mL)萃取。有机相用盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-100％(3:1 EtOAc:EtOH)洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到目标产物(50 mg)。
Figure 595457DEST_PATH_IMAGE230
中间体106: (1R,5S,6s)-6-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异 烟酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 50709DEST_PATH_IMAGE231
将2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(168 mg，0.543 mmol)加入DMF(5 mL)中。加入DIPEA(0.285 mL，1.629 mmol)和HATU(310 mg，0.815 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(108 mg，0.543 mmol)，将反应物再搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物溶于EtOAc(10 mL)中并用NaHCO3 溶液(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到目标产物(350 mg)，为棕色固体。
Figure 498002DEST_PATH_IMAGE232
中间体107: (R)-3-(3-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰 胺基)丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 64112DEST_PATH_IMAGE233
将2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(150 mg，0.485 mmol)加入DMF(5 mL)中。加入DIPEA(0.254 mL，1.455 mmol)和HATU(277 mg，0.727 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(1R,5S,6s)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(126 mg，0.485 mmol，可商购自例如FluoroChem)并将反应物再搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并用NaHCO3 溶液(10 mL)洗涤。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到目标产物(340 mg)，为棕色固体。
Figure 365781DEST_PATH_IMAGE234
中间体108: (2R)-2-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙 基)吗啉-4-甲酸叔丁酯, 未定义立体中心的非对映异构体的1:1混合物
Figure 991934DEST_PATH_IMAGE235
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(100 mg，0.352 mmol)加入DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.184 mL，1.055 mmol)，不久后加入HATU(201 mg，0.528 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(122 mg，0.528mmol)，将反应物再搅拌3小时。将反应物真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(20 mL)中并用NaHCO3(20 mL)洗涤。有机相用盐水(20 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用5-100％EtOAc/环己烷洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到目标产物，为黄色油状物(133mg)。
Figure 113474DEST_PATH_IMAGE236
中间体109: (2S)-2-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙 基)吗啉-4-甲酸叔丁酯, 未定义立体中心的非对映异构体的1:1混合物
Figure 545592DEST_PATH_IMAGE237
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(100 mg，0.352 mmol)加入DMF(4mL)中。加入DIPEA(0.184 mL，1.055 mmol)，不久后加入HATU(201 mg，0.528 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(S)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(122 mg，0.528mmol)，将反应物搅拌5小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(20 mL)中并用NaHCO3(20 mL)萃取。有机相用盐水(20 mL)洗涤，然后通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到25g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用5-50％(3:1 EtOAc:EtOH)洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到目标产物 (87.1 mg)。
Figure 701767DEST_PATH_IMAGE238
中间体110: (±)-3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-4,4- 二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 498822DEST_PATH_IMAGE239
向HATU(15.3 mg，0.040 mmol)、(±)-3-(3-氨基丙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.8 mg，0.024 mmol)和2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (7.6 mg, 0.028 mmol)于DMF (0.5 mL)中的溶液中加入DIPEA(12.0 μL，0.069 mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。将混合物在EtOAc(2 mL)和1M Na2CO3水溶液(2 mL)之间分配。水相用另外的EtOAc(3×2 mL)萃取，将合并的有机萃取物通过装有疏水性玻璃料的柱筒干燥，并在N2气流下蒸发溶剂，得到橙色胶状物。将胶状物再溶解于DCM(约2 mL)中并施加到已用环己烷预先润湿的2g SPE二氧化硅柱上。用洗脱梯度的溶剂（环己烷(2×7 mL)，DCM(2×7 mL)，氯仿(7 mL)，乙醚(7 mL)和EtOAc(3×7 mL)）洗脱柱体。在N2气流下蒸发各个7mL级分；将级分7(第一EtOAc级分)重新溶解在DCM和EtOAc的1:1混合物(~2mL)中，并在N2气流下蒸发，得到黄色玻璃状物质; (±)-3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.1 mg，0.013 mmol，54.8％收率)。
Figure 107657DEST_PATH_IMAGE240
中间体111: 4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氧代哌 嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 828620DEST_PATH_IMAGE241
向4-(3-氨基丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(47.3 mg，0.184 mmol)、2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(44.1 mg，0.163 mmol)和HATU (73.3 mg, 0.193 mmol)于DMF(1 mL)中的混合物中加入DIPEA(0.085 mL，0.489 mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。反应混合物用DMSO(约1 mL)稀释，并通过MDAP(2×1mL注射，高pH法)直接纯化。将所需级分在N2气流下蒸发，再溶于MeOH(各约2mL)中并合并。将该溶液在N2气流下蒸发，真空干燥，得到淡粉红色玻璃状固体; 4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(50.2 mg，0.099 mmol，60.4％收率)。
Figure 839301DEST_PATH_IMAGE242
中间体112: 3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚
Figure 807257DEST_PATH_IMAGE243
将4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷) (1008mg, 3.97 mmol)、4-溴-3-氟-1H-吲哚 (500 mg, 2.34 mmol, 可商购自例如Fluorochem)、PdCl2(dppf) (171 mg, 0.23 mmol) 和乙酸钾(688 mg, 7.01 mmol)加入微波小瓶中并吹扫系统。加入1,4-二氧杂环己烷(15 mL)，将反应容器密封，在Biotage Initiator微波中加热至100℃保持30分钟。冷却后，反应物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将反应物真空浓缩。然后使用乙酸乙酯(20 mL)和水(20 mL)和盐水(20 mL)萃取残余物。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚(490 mg，1.877 mmol，80％收率)，为棕色固体，其不经纯化用于下一步骤。
Figure 903389DEST_PATH_IMAGE244
中间体113: 2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-1- 基)乙醇
Figure 614993DEST_PATH_IMAGE245
将4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷) (1100mg, 4.33 mmol)、2-(4-溴-1H-吲哚-1-基)乙醇 (612 mg, 2.55 mmol, 可商购自例如Fluorochem)、乙酸钾(750 mg, 7.65 mmol)和PdCl2(dppf) (187 mg, 0.26 mmol)加入微波小瓶中。加入1,4-二氧杂环己烷(10 mL)，将反应容器密封，在Biotage Initiator微波中加热至100℃保持30分钟。冷却后，反应物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯 (20 mL)洗涤。滤液使用水(20 mL)和盐水(20 mL)萃取。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到产物2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-1-基)乙醇 (915 mg, 2.55 mmol, 100%收率)，为棕色油状物，其足够纯可继续用于下一步骤。
Figure 542498DEST_PATH_IMAGE246
中间体114: 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)二氢吲哚-2-酮
Figure 681355DEST_PATH_IMAGE247
将4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.903 g，7.49 mmol，可商购自例如Fluorochem)、4-溴二氢吲哚-2-酮(1.038 g，4.90 mmol，可商购自例如Fluorochem)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物[Pd(dppf)Cl2.DCM] (0.601 g, 0.73 mmol)和乙酸钾(1.480 g，15.08 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(30 mL)中的混合物在110℃下搅拌2小时。将混合物冷却至室温，然后通过10g硅藻土柱筒过滤。将柱筒用乙酸乙酯(3×30 mL)洗涤，将合并的滤液真空蒸发，得到棕色液体，将其再溶于DCM(约10mL)中，加载到100g SNAP二氧化硅柱上并通过Biotage SP4半自动快速柱色谱法纯化，用20至50％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱。合并所需的级分并真空蒸发，将其再溶于DCM(约10mL)中，转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂。残余物用乙醚(5×5mL)研磨，每次倾析出母液，将残余物在氮气流下真空干燥，得到目标产物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)二氢吲哚-2-酮(941.8 mg，3.63 mmol，74％收率)，为乳白色固体。
Figure 264783DEST_PATH_IMAGE248
中间体115: 4-溴-1H-吲哚-2-甲酰胺
Figure 780078DEST_PATH_IMAGE249
向4-溴-1H-吲哚-2-甲酸(0.276 mL，2.12 mmol，可商购自例如Ark Pharm)于二氯甲烷(15 mL)中的悬浮液中加入草酰氯(0.220 mL，2.51 mmol)。将该悬浮液在室温下总共搅拌约3天。在此期间，5.5小时后加入DMF(0.020 mL，0.26 mmol)。23.75小时后，再加入草酰氯(0.100 mL，1.14 mmol)。27.15小时后，再加入草酰氯(0.100 mL，1.142 mmol)。将反应混合物搅拌过周末，在此期间蒸发溶剂，得到粘稠的浅棕色固体。将其再溶于二氯甲烷(15mL)中，向该溶液中加入草酰氯(0.100 mL，1.14 mmol)和DMF(0.020 mL，0.26 mmol)。将所得溶液再搅拌2小时45分钟，得到棕色溶液。将该溶液滴加到氨(35％于水中)(10 mL，162mmol)和冰(约10 g)的搅拌溶液中，并将得到的混合物静置约3小时。向其中加入乙酸乙酯(10 mL)和水(10 mL)，分层。向水层中加入盐水(约5 mL)并将其用另外的乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并含有棕色沉淀的有机层，真空蒸发，得到棕色固体。将其转移到甲醇(约10mL)中，将该乳液真空蒸发，得到棕色固体。该固体用二氯甲烷(约3×20 mL)研磨，过滤上清液。将滤液浓缩至约10mL，直接施加到50g SNAP柱的顶部并通过快速柱色谱法纯化。用20％-70％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。将所需级分真空蒸发，得到4-溴-1H-吲哚-2-甲酰胺(95.0 mg，0.40 mmol，19％收率)，为灰白色固体。
Figure 499773DEST_PATH_IMAGE250
中间体116: 4-溴-1H-吲哚-2-甲腈
Figure 622581DEST_PATH_IMAGE251
在微波小瓶中，向4-溴-1H-吲哚-2-甲酰胺(207.3 mg，0.87 mmol)于乙酸乙酯(8mL)中的溶液中加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷 2,4,6-三氧化物(50％于乙酸乙酯中，0.630 mL，1.06 mmol)。将小瓶密封，并将混合物在微波反应器中在100℃下搅拌1.5小时。将小瓶重新密封，将混合物在微波反应器中在100℃下搅拌另外总共2小时。再加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷 2,4,6-三氧化物(50％于乙酸乙酯中，0.250 mL，0.42 mmol)，小瓶重新密封，并将混合物在微波反应器中在100℃下搅拌另外3.5小时。向反应混合物中加入水(10 mL)并分层。用另外的乙酸乙酯(2×10 mL)萃取水层，合并有机层并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，得到浅黄色结晶固体。将其重新溶解于DMSO(2 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，重新溶解在甲醇(各约2 mL)中并合并。将该溶液在氮气流下蒸发，并将残余物真空干燥，得到目标产物4-溴-1H-吲哚-2-甲腈(145.0 mg，0.66 mmol，76％收率)，为玻璃状白色固体。
Figure 693305DEST_PATH_IMAGE252
中间体117: 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲 腈
Figure 746711DEST_PATH_IMAGE253
将4-溴-1H-吲哚-2-甲腈(141.3 mg，0.64 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(263.8 mg，1.04 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(44.3 mg，0.06 mmol)和乙酸钾(182.7 mg，1.86 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(5 mL)中的混合物在回流下搅拌5.75小时，然后将其从加热中取出并在搅拌下冷却至室温。将混合物在氮气下放置过夜。混合物通过2.5g硅藻土柱过滤，用乙酸乙酯(约20 mL)洗涤柱。向滤液中加入盐水(25 mL)并分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×25 mL)萃取水层。合并有机相，通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，真空蒸发滤液。将残余物重新溶解在二氯甲烷(约5 mL)中，并直接施加到25g SNAP柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用0％-40％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。合并合适的级分并真空蒸发，得到4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲腈(72.4 mg, 0.27 mmol, 42%收率)，为无色胶状物，其静置后缓慢形成无色晶体。
Figure 586492DEST_PATH_IMAGE254
中间体118: 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-3-甲 腈
Figure 67151DEST_PATH_IMAGE255
将4-溴-1H-吲哚-3-甲腈(500.3 mg，2.26 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(694.3 mg，2.73 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(169.6 mg，0.23 mmol)和乙酸钾(668.8 mg，6.81 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(12 mL)中的混合物在回流下搅拌21.5小时。5.5小时后再加入4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(288.4 mg，1.14 mmol)。将混合物从加热中取出并冷却至室温，然后将其通过10g硅藻土柱筒过滤。将其用乙酸乙酯(约3×10 mL)洗涤。向滤液中加入水(10 mL)和盐水(30 mL)，分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×30 mL)萃取水层，合并有机层并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，再溶于二氯甲烷(约10 mL)中，并直接施加到100g SNAP柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用0％-40％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。合并所需的级分并真空蒸发，得到4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-3-甲腈(80wt％纯度，481.8 mg, 1.44 mmol, 64%收率)，为粘稠的黄色油状物，其静置后形成浅黄色晶体。
Figure 687489DEST_PATH_IMAGE256
中间体119: 4-溴二氢吲哚-1-甲酸苄酯
Figure 279007DEST_PATH_IMAGE257
向4-溴二氢吲哚(991.8 mg，5.01 mmol，可商购自例如Fluorochem)和碳酸氢钠(1.100 g，13.09 mmol)于水(30 mL)和四氢呋喃(12 mL)中的搅拌混合物中滴加氯甲酸苄酯(0.85 mL，5.98 mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时，然后静置20小时。混合物用乙酸乙酯(3×80 mL)萃取，合并的有机相用饱和盐水溶液(30 mL)洗涤，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤干燥。将溶剂从有机相中真空蒸发，得到浅棕色结晶固体，将其再溶于二氯甲烷(约~12 mL)中，并通过SP4快速柱色谱法(100g二氧化硅柱)纯化，用0-30％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱。合并所需的级分，真空蒸发溶剂。将残余物再溶于二氯甲烷(约~12 mL)中，转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到4-溴二氢吲哚-1-甲酸苄酯(1.602 g，4.82 mmol，96％收率)，为淡粉红色固体。
Figure 973293DEST_PATH_IMAGE258
中间体120: 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)二氢吲哚-1-甲 酸苄酯
Figure 890434DEST_PATH_IMAGE259
向4-溴二氢吲哚-1-甲酸苄酯(1.108 g，3.34 mmol)、乙酸钾(0.965 g，9.83mmol)和双(频哪醇合)二硼(1.014 g，3.99 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(15 mL)中的搅拌混合物中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(259.6 mg，0.36 mmol)。将混合物在100℃下搅拌140分钟，然后用乙酸乙酯(10 mL)稀释，并通过10gCelite柱过滤。将柱用另外的乙酸乙酯(3×20 mL)洗涤。真空蒸发溶剂，将残余物重新溶于乙酸乙酯(100 mL)中，用水(50 mL)和饱和盐水溶液(加入约30mL以帮助相分离)洗涤。用另一部分水(50 mL)和饱和盐水溶液(30 mL)洗涤有机相，分离各相，通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤干燥有机相。溶剂在真空下从有机相中蒸发，得到深棕色油状物，将其再溶于二氯甲烷(约~10 mL)中，将溶液加到50g SNAP二氧化硅柱上。通过Biotage SP4快速柱色谱法纯化样品，用0-25％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱。合并所需的级分，真空蒸发溶剂。将残余物真空干燥，得到4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(1.148 g，3.03 mmol，91％收率)，纯度约为85％，为淡黄色粘稠油状物，其静置后结晶成浅黄色固体。
Figure 670171DEST_PATH_IMAGE260
中间体121: (±)-4-(2-氰基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 875500DEST_PATH_IMAGE261
将(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.095g，3.19 mmol)溶于二甲基亚砜(23 mL)中，并加入氰化钠(165.5 mg，3.38 mmol)。将混合物在室温下搅拌3.5小时，然后在55℃下加热25小时。使混合物冷却，并在室温下静置48小时后，在水(50 mL)和乙醚(50 mL)之间分配。分离各相，水相用另外的乙醚(3×50 mL)萃取。合并的有机相通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤干燥，真空蒸发溶剂，得到浅黄色油状物。将该油状物重新溶解在二氯甲烷(~8 mL)中，并通过Biotage SP4快速柱色谱法纯化(将样品施加到已用环己烷预先润湿的SNAP 25g二氧化硅柱上)。用0-40％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。合并所需的级分，真空蒸发溶剂，将残余的无色油状物重新溶解在二氯甲烷(~10mL)中，并转移到柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，得到(±)-4-(2-氰基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(752.9 mg，2.74 mmol，86％收率)，为流动无色油状物，其经过一周的时间结晶，得到白色固体。
TLC (二氧化硅板; 1:1 乙酸乙酯/环己烷) Rf = 0.63, 用KMnO4显色(最初微弱显色，然后经数小时增强为黄色斑点)。
Figure 689872DEST_PATH_IMAGE262
中间体122: (±)-4-(3-氨基丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 512335DEST_PATH_IMAGE263
将(±)-4-(2-氰基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(108.6 mg，0.40 mmol)和硼氢化钠(34.7 mg，0.92 mmol)于THF (3 mL)中的混合物在氮气下搅拌并冷却至0℃(冰浴)，然后在50分钟内滴加碘(100 mg，0.40 mmol)于THF(2mL)中的溶液。将混合物在氮气下回流加热3.75小时，然后加入甲醇(1 mL)(剧烈反应 - 小心！ )并将混合物再回流加热30分钟。冷却至室温后，将混合物直接施加到已用甲醇预润湿的5g Isolute SCX-2离子交换柱上。将柱用甲醇(2×10 mL)洗脱，然后用2M氨的甲醇溶液(3×10 mL)洗脱。合并碱性级分，真空蒸发溶剂，得到无色油状残余物，将其再溶于2:1二氯甲烷/甲醇(约8 mL)中，转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，得到(±)-4-(3-氨基丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(51.6 mg，0.19 mmol，47％收率)，为无色粘性油状物。
Figure 779368DEST_PATH_IMAGE264
中间体123: (+/-)- 2-甲基吗啉-2,4-二甲酸4-叔丁酯 2-乙酯
Figure 978268DEST_PATH_IMAGE265
在-78℃下，将在THF(10 mL)中的吗啉-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(3 g，11.57mmol，可商购自例如Fluorochem)加入到LiHMDS(1M于THF中，11.57 ml, 11.57 mmol)于THF(20 mL)中的溶液中，并将溶液搅拌20分钟，然后加入MeI(1.447 mL，23.14 mmol)，将混合物在-78℃下搅拌1小时，然后温热至室温。混合物用水(100 mL)稀释，并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物干燥并真空蒸发。粗产物通过50g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到(+/-)-2-甲基吗啉-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(1.8 g，6.59 mmol，56.9％收率)，为无色油状物。
Figure 709464DEST_PATH_IMAGE266
中间体124: (+/-)-2-(羟甲基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 702828DEST_PATH_IMAGE267
将(+/-)-2-甲基吗啉-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(1.8 g，6.59 mmol)溶于2-甲基THF(30 mL)中并在冰浴中冷却，然后加入LiBH4(0.574 g，26.3 mmol)并将混合物在氮气下搅拌过夜。混合物用非常小心滴加的甲醇(20 mL)淬灭，然后真空蒸发，将残余物在0.5MHCl(50 mL)和EtOAc(50 mL)之间分配，将有机层干燥并真空蒸发，得到(+/-)-2-(羟甲基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.6 g，6.92 mmol，105％收率)，为无色油状物。
Figure 457157DEST_PATH_IMAGE268
中间体125: (+/-)-2-甲酰基-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 194169DEST_PATH_IMAGE269
在氮气下将(+/-)-2-(羟甲基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.8 g，3.46 mmol)溶于二氯甲烷(30 mL)中并在冰浴中冷却。加入DMP(1.614 g，3.80 mmol)并将反应物搅拌并温热过夜。用饱和NaHCO3(25 mL)淬灭反应并搅拌30分钟。分配混合物，水层用20％MeOH/DCM(25 mL)再萃取。合并的有机物用盐水(50 mL)洗涤，通过疏水性玻璃料过滤，然后真空浓缩，得到(+/-)-2-甲酰基-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％纯度，0.7 g，2.75 mmol，79％收率)，为乳白色固体。
Figure 717554DEST_PATH_IMAGE270
中间体126: (+/-)-(E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-2-甲基吗啉-4-甲 酸叔丁酯
Figure 960448DEST_PATH_IMAGE271
将(+/-)-2-甲酰基-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％，0.7 g，3.05 mmol)悬浮在甲苯(25 mL)中。加入(乙氧甲酰基亚甲基)三苯基膦(1.276 g，3.66 mmol)并将反应物在室温搅拌过夜。过滤反应混合物，滤饼用甲苯(25 mL)和水(50 mL)洗涤。分离滤液，有机层通过疏水性玻璃料洗脱，然后真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到25g SNAP柱上，用0-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱。将合适的级分真空浓缩，得到(+/-)-(E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(495 mg，1.57 mmol，57％收率)，为黄色油状物。
Figure 202073DEST_PATH_IMAGE272
中间体127: (+/-)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 477197DEST_PATH_IMAGE273
将(+/-)-(E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(495 mg，1.65 mmol)加入乙醇(10 mL)中。加入甲酸铵(521 mg，8.27 mmol)和5％Pd/C糊(50 mg，0.47 mmol)，将反应物加热至85℃保持2小时。将反应物冷却并通过硅藻土过滤。滤饼用乙醇(10 mL)洗涤，并将滤液真空浓缩。将残余物加入乙醇(10 mL)中。加入甲酸铵(521mg，8.27 mmol)和5％Pd/C糊(50 mg，0.47 mmol)，将反应物加热至85℃保持4小时。将反应物冷却并通过硅藻土过滤。将滤饼用乙醇(10 mL)洗涤，将滤液真空浓缩，得到(+/-)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(556 mg，1.66 mmol，100％收率)，为白色固体。
Figure 120668DEST_PATH_IMAGE274
中间体128: (+/-)-2-(3-羟丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 455834DEST_PATH_IMAGE275
在氮气下将(+/-)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(556mg，1.85 mmol)加入四氢呋喃(10 mL)中并在冰浴中冷却。缓慢加入LiBH4(2M于THF中，2.77mL，5.53 mmol)，将反应物搅拌并温热过夜。将反应物在冰浴中冷却并小心地用NH4Cl 溶液(20 mL)淬灭。将反应混合物在EtOAc(25 mL)和水(25 mL)之间分配，水层用EtOAc(25 mL)再萃取。合并的有机物通过疏水性玻璃料洗脱并真空浓缩。在氮气下将残余物加入四氢呋喃(10 mL)中并在冰浴中冷却。缓慢加入LiBH4(2M于THF中，2.77 mL，5.53 mmol)，将反应物搅拌并温热过夜。冷却反应混合物并用饱和NH4Cl溶液(50mL)小心地淬灭。混合物在EtOAc(50 mL)和水(50 mL)之间分配，水层用EtOAc(50 mL)再萃取。合并的有机物通过疏水性玻璃料洗脱，然后真空浓缩，得到(+/-)-2-(3-羟丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％纯度，400 mg，1.39 mmol，75％收率)，为透明油状物。
Figure 247073DEST_PATH_IMAGE276
中间体129: (+/-)-2-(3-叠氮基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 325887DEST_PATH_IMAGE277
将(+/-)-2-(3-羟基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％，400 mg，1.39mmol)溶于二氯甲烷(10 mL)中并在冰浴中冷却。加入Et3N(0.645 mL，4.63 mmol)，然后加入甲磺酰氯(0.180 mL，2.31 mmol)。将反应物搅拌并温热至室温。5小时后，反应物用DCM(10 mL)稀释，并用水(20 mL)洗涤。通过疏水性玻璃料洗脱有机层并真空浓缩。将残余物加入DMF(5 mL)中。加入叠氮化钠(175 mg，2.68 mmol)并将反应物加热至70℃保持4小时。将反应物冷却并在EtOAc(25 mL)和饱和NaHCO3溶液(25 mL)之间分配。水层用EtOAc(2×25mL)再萃取，将合并的有机物通过疏水性玻璃料洗脱，然后真空浓缩，得到(+/-)-2-(3-叠氮基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％纯度，326 mg，1.03 mmol，85％收率)，为透明油状物。
Figure 823864DEST_PATH_IMAGE278
中间体130: (+/-)-2-(3-氨基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 595511DEST_PATH_IMAGE279
将(+/-)-2-(3-叠氮基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％，353 mg，1.12mmol)加入四氢呋喃(5 mL)和水(5 mL)中。加入Ph3P(391 mg，1.49 mmol)并将反应物在室温搅拌过夜，然后静置3天。将反应物在EtOAc(25 mL)和盐水(25 mL)之间分配。通过疏水性玻璃料洗脱有机层，然后真空浓缩，得到黄色油状物。将粗产物于最少的DCM中施加到10gSNAP Ultra柱上，并用1-10％含2M NH3的甲醇/DCM洗脱。将合适的级分真空浓缩，得到(+/-)-2-(3-氨基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90wt％纯度，180.9 mg，0.63 mmol，56％收率)，为透明油状物。
Figure 546150DEST_PATH_IMAGE280
中间体131: 2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮
Figure 241704DEST_PATH_IMAGE281
向2-氨基丙烷-1,3-二醇(327.2 mg，3.59 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)于DMF(15 mL)中的搅拌溶液中分批加入邻苯二甲酸酐(533.6 mg，3.60 mmol)。将得到的无色溶液在90℃在氮气下搅拌5小时，然后将反应混合物冷却至室温并真空蒸发挥发物。将其在乙酸乙酯(25 mL)和水(25 mL)之间分配，分离各层。用另外的乙酸乙酯(4×25 mL)萃取水相，合并有机层并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发。将其重新溶于乙酸乙酯(约4 mL)和3:1乙酸乙酯:乙醇(约4 mL)中，并直接施加到25g SNAP柱的顶部，通过快速柱色谱法纯化。用0％-40％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/环己烷梯度洗脱柱子。合并合适的级分并真空蒸发，得到2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(380.0 mg，1.72 mmol，48％收率)，为白色固体。
Figure 594188DEST_PATH_IMAGE282
中间体132:2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 536737DEST_PATH_IMAGE283
向2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(5.06 g，18.69 mmol，可商购自例如Anichem)于DCM(20 mL)中的溶液中加入TFA(10 mL，130 mmol)并在室温下在N2下将反应混合物搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩一段时间以除去尽可能多的TFA残余物，得到2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(4.21 g，18.64 mmol，100％收率)，为白色固体。
Figure 974671DEST_PATH_IMAGE284
中间体133: 6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯 2-甲酯
Figure 395288DEST_PATH_IMAGE285
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(10 g，36.9 mmol，可商购自例如Anichem)、乙酸钯(II)(0.829 g，3.69 mmol)、Xantphos(2.137 g，3.69 mmol)、三乙胺(15.45 ml，111 mmol)、DMF(100 mL)和甲醇(100 mL)合并。混合物用氮气吹扫，然后用一氧化碳吹扫，然后将混合物在一氧化碳气球下加热48小时。将混合物真空蒸发，残余物在水(500 mL)和EtOAc(500 mL)之间分配。有机层用水(500 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，并将残余物通过100g二氧化硅柱的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，得到6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(5.8 g，19.71 mmol，53％收率)，为浅黄色固体。
Figure 930175DEST_PATH_IMAGE286
中间体134: 2-(甲氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 43624DEST_PATH_IMAGE287
将6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(3 g，10.19 mmol)溶于DCM(20 mL)并加入2,2,2-三氟乙酸(11.62 g，102 mmol)，然后将溶液在室温下搅拌4小时。真空蒸发溶剂，得到2-(甲氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(2.55 g，10.71 mmol，105％收率)，为浅黄色固体，将其不经纯化用于下一步骤。
Figure 968855DEST_PATH_IMAGE288
中间体135: 2-(乙氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 193163DEST_PATH_IMAGE289
向6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(55.6 mg，0.18 mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中加入三氟乙酸(0.550 mL，7.14 mmol)。将得到的橙色溶液在室温下搅拌1小时10分钟。在氮气流下蒸发挥发物。粗产物与乙醚(2×1 mL)一起研磨，并将得到的白色固体残余物在氮气流下干燥，得到2-(乙氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(34.5 mg，0.14 mmol，76％收率)，为白色固体。
Figure 254660DEST_PATH_IMAGE290
中间体136: 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6-(甲基 氨基甲酰基)吡啶甲酸乙酯
Figure 539011DEST_PATH_IMAGE291
向2-(乙氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(0.621 g，2.46 mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(0.410 g, 3.02 mmol)和HATU(1.167 g，3.07mmol)于DMF (20 mL)中的溶液中加入DIPEA(1.70 mL，9.73 mmol)。将溶液在室温下搅拌5小时。2.5小时后加入另外的(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(0.130 g，0.96 mmol)。在3小时40分钟后，加入另外的HATU(0.283 g，0.74 mmol)和DIPEA(0.250 mL，1.43 mmol)。从搅拌中取出溶液，真空蒸发挥发物。向其中加入乙酸乙酯(20 mL)、2M Na2CO3水溶液(10 mL)和水(20 mL)，分离各层。水层用另外的乙酸乙酯(2×20 mL)萃取，合并有机层，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，再溶于二氯甲烷(约10 mL)中，并直接施加到50g SNAP柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用10％-50％乙酸乙酯:乙醇(3:1)/环己烷梯度洗脱柱子。真空蒸发所需的级分，得到4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸乙酯(704.9 mg，2.12 mmol，86％收率)，为黄色固体。
Figure 764587DEST_PATH_IMAGE292
中间体137: 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6-(甲基 氨基甲酰基)吡啶甲酸甲酯
Figure 792586DEST_PATH_IMAGE293
将2-(甲氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(2.4 g，10.08 mmol)悬浮于DCM(50 mL)中，加入Et3N(4.21 mL，30.2 mmol)和HATU(5.75 g，15.11 mmol)，然后将混合物搅拌20分钟，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(2.049 g，15.11mmol)。将溶液搅拌2小时，然后用水(2×100 mL)洗涤，干燥有机层并真空蒸发。将其悬浮于EtOAc(20 mL)中并超声处理10分钟，然后通过过滤收集固体并用乙醚(20 mL)洗涤，得到4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸甲酯(1.20 g，3.76 mmol，37％收率)。
Figure 974168DEST_PATH_IMAGE294
中间体138: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟甲基)-N 2-甲基 吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 163841DEST_PATH_IMAGE295
将4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸乙酯(615.8 mg，1.85 mmol)和氯化钙(411.8 mg，3.71 mmol)于乙醇(12 mL)和2-甲基四氢呋喃(12 mL)中的悬浮液在冰浴中冷却至约0℃。向其中分批加入硼氢化钠(116.8 mg，3.09 mmol)。将得到的浅粉红色溶液温热至室温并搅拌16小时，然后加入饱和NH4Cl水溶液(5 mL)并将溶液在室温下再搅拌10分钟。向该混合物中加入水(15 mL)，将得到的混浊的白色混合物真空浓缩以除去有机溶剂。所得溶液用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取，合并有机层，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将水相浓缩至约5ml（~5ml），向其中加入盐水(15 mL)。将其用另外的乙酸乙酯(2×20 mL)萃取。将有机相通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，并与来自第一次萃取的过滤的有机相合并。将水相真空蒸发并再溶于最小体积的水(约15 mL)中。然后用另外的乙酸乙酯(4×15 mL)萃取。合并这些有机相，通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，并与先前的合并的有机相合并。将该溶液真空蒸发，得到N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟甲基) -N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(85wt％纯度，530.6 mg，1.55 mmol，84％收率)，为粘稠的浅棕色固体。
Figure 63664DEST_PATH_IMAGE296
替代性程序:
将4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸甲酯(1.94 g，6.08 mmol)溶于2-甲基THF(70 mL)和乙醇(70 mL)的混合物中，然后加入氯化钙(2.023 g，18.23 mmol)，将混合物剧烈搅拌10分钟。然后将混合物在氮气下在冰浴中冷却，并在20分钟内分小份加入四氢硼酸钠(0.345 g，9.11 mmol)。将所得混合物快速搅拌过夜，使其温热至室温，然后通过逐滴添加氯化铵溶液(100 mL)淬灭。用EtOAc(3×100 mL)萃取混合物，合并的有机物用盐水洗涤，干燥并真空蒸发，得到无色固体。将粗制物主要溶解在DCM(20 mL)和甲醇(3 mL)的混合物中，并加载到100g二氧化硅柱上。用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱柱子，真空蒸发含产物的级分，得到N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(0.80 g，2.75mmol，45.2％收率)，为无色固体 。
Figure 692091DEST_PATH_IMAGE297
中间体139: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯甲基)-N 2-甲基 吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 993760DEST_PATH_IMAGE298
向N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (85 wt%, 502.3 mg, 1.47 mmol)于二氯甲烷 (15 mL)中的悬浮液中滴加亚硫酰氯(0.400 mL，5.48 mmol)。将悬浮液在40℃下搅拌2.75小时，然后将其冷却至室温并真空蒸发挥发物。将残余物重新溶解在二氯甲烷(约 5mL)和乙酸乙酯(约5 mL)中，并直接施加到25g SNAP柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用0％-40％乙酸乙酯:乙醇(3:1)/环己烷梯度洗脱柱子。将所需的级分真空蒸发，得到N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(249.5 mg，0.81 mmol，55％收率)，为白色固体。
Figure 354334DEST_PATH_IMAGE299
中间体140: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N 2-甲基吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 741453DEST_PATH_IMAGE300
将N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (1.072 g, 3.68 mmol)加入二氯甲烷(50 mL) 。加入戴斯-马丁氧化剂 (1.717g, 4.05 mmol)并将反应物搅拌2小时。加入硫代硫酸钠溶液(50 mL)并将反应物再搅拌15分钟。分离有机相和水相。用DCM(2×50 mL)洗涤水相。合并的有机相经硫酸钠干燥，并通过疏水性玻璃料过滤，然后真空浓缩。使用DCM(2×20 mL)再萃取水相，然后使用EtOAc(2×20mL)进一步萃取。合并的有机物与先前的残余物合并，真空浓缩，得到N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(674 mg，2.33 mmol，63％收率)。
Figure 111254DEST_PATH_IMAGE301
中间体141: 2-氯-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 811970DEST_PATH_IMAGE302
将4-(叔丁氧基羰基)-6-氯吡啶甲酸(4.085 g，15.85 mmol，可商购自例如Anichem)、乙胺盐酸盐(4.528 g，55.5 mmol)和HATU(7.093 g，18.65 mmol)于DMF (41 mL)中的混合物在室温下在氮气下搅拌。加入三乙胺(10 mL，71.7 mmol)并将混合物搅拌2小时。将大部分挥发物真空蒸发，得到橙色/棕色浆液，将其在乙酸乙酯(100 mL)和2M碳酸钠水溶液(100 mL)之间分配。分离各相，水相用另外的乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。合并的有机萃取物用水(50 mL)和饱和盐水溶液(50 mL)洗涤，然后通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将溶剂真空蒸发，得到粘稠的橙色/棕色油状物，将其再溶于二氯甲烷(约10 mL)中，加载到100g SNAP二氧化硅柱上，通过快速柱色谱法纯化，用0至30％乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱。合并所需的级分并真空蒸发，将残余物重新溶于二氯甲烷(约15mL)中，真空蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到2-氯-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(2.607 g，9.15mmol，58％收率)，为浅黄色油状物，其静置后结晶成浅黄色结晶固体。
Figure 609024DEST_PATH_IMAGE303
中间体142: 6-(乙基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯 2-甲酯
Figure 217860DEST_PATH_IMAGE304
向2-氯-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1005 mg，3.53 mmol)、XantPhos(211.1 mg，0.37 mmol)和乙酸钯(II)(85.6 mg，0.38 mmol)于甲醇(15 mL)和DMF (15 mL)中的溶液中加入三乙胺(1.48 mL，10.62 mmol)。在室温下将一氧化碳气体鼓泡通过溶液约5分钟，之后装上一氧化碳气球，将溶液在70℃下搅拌2.5小时。将反应混合物冷却至室温并在一氧化碳气氛下静置过夜，然后用氮气吹扫烧瓶并真空蒸发挥发物。将残余物在乙酸乙酯(40 mL)和1:1饱和氯化锂水溶液:水(40mL)之间分配，并分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×40 mL)萃取水相，合并有机层并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，再溶于二氯甲烷(5 mL)和乙酸乙酯(3 mL)中，并直接施加到100g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用0％-40％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。合并合适的级分，真空蒸发，转移至二氯甲烷(约10 mL)中，真空蒸发该溶液，得到6-(乙基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(899.9 mg，2.92 mmol，83％收率)，为粘稠的黄色固体。
Figure 391353DEST_PATH_IMAGE305
中间体143: 2-(乙基氨基甲酰基)-6-(羟甲基)异烟酸叔丁酯
Figure 402034DEST_PATH_IMAGE306
在0℃在氮气下，向6-(乙基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(900mg，2.92 mmol)和氯化钙(656.3 mg，5.91 mmol)于乙醇(10 mL)和2-甲基四氢呋喃 (10mL)中的搅拌的悬浮液中分批加入硼氢化钠(163.2 mg，4.31 mmol)。将反应混合物温热至室温并在氮气下再搅拌43小时。19.5小时后，加入另外的硼氢化钠(81.8 mg，2.16 mmol)。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(5 mL)淬灭，所得混合物在室温下再搅拌1小时，并再静置4小时。向其中加入水(10 mL)并真空除去有机溶剂。向得到的混合物中再加入水(20 mL)和乙酸乙酯(30 mL)，分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×30 mL)萃取水相，合并有机层并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，然后重新溶解在二氯甲烷(2 mL)中，并直接施加到25g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用20％-70％乙酸乙酯的环己烷溶液梯度洗脱柱子。合并合适的级分并真空蒸发，得到2-(乙基氨基甲酰基)-6-(羟甲基)异烟酸叔丁酯(371.1 mg，1.32 mmol，45％收率)，为粘性浅黄色固体。
Figure 432307DEST_PATH_IMAGE307
中间体144: 2-(氯甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 528439DEST_PATH_IMAGE308
向2-(乙基氨基甲酰基)-6-(羟甲基)异烟酸叔丁酯(340 mg，1.213 mmol)于二氯甲烷(10 mL)中的搅拌溶液中逐滴加入亚硫酰氯(0.450 mL，6.17 mmol)。将所得混合物在室温下在氮气下搅拌总共45.5小时，在此期间，在21.75小时后加入另外的亚硫酰氯(0.400mL，5.48 mmol)。在氮气流下蒸发挥发物，然后将粗产物与乙腈(3×10 mL)共沸，真空蒸发，得到2-(氯甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(348.1 mg ，1.165 mmol，96％收率)，为粘稠的棕色油状物。
Figure 240043DEST_PATH_IMAGE309
中间体145:6-氯-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 105231DEST_PATH_IMAGE310
向2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(2 g，8.85 mmol)和HATU(3.70 g，9.74mmol)于DMF(20 mL)中的溶液中加入DIPEA(3.09 mL，17.71 mmol)，然后加入4,4-二乙氧基丁-1-胺(1.68 mL，9.74 mmol)。将所得溶液在室温下搅拌16小时。加入水(60 mL)和EtOAc(60 mL)，分层。用乙酸乙酯(2×30 mL)进一步萃取水层。合并的有机物用水(2×30 mL)和饱和LiCl水溶液(30 mL)反萃取，然后干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到深色油状物。将其重新溶解在DCM中，并直接施加到100g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过SP4快速柱色谱法纯化。用30-70％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。收集合适的级分并真空浓缩，得到产物6-氯-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(2.39 g，6.68 mmol，75％收率)，为黄色油状物。
Figure 57137DEST_PATH_IMAGE311
中间体146:6-氯-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧 杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 640565DEST_PATH_IMAGE312
向6-氯-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(2.39 g，6.68mmol)于甲苯(30 mL)的溶液中加入2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(1.477g，6.68 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(0.254 g，1.34 mmol)。将所得悬浮液在90℃在氮气下搅拌2小时，然后将反应混合物冷却至室温并在乙酸乙酯(100 mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(100 mL)之间分配并分层。水层中残留大量沉淀物。用另外的乙酸乙酯(2×100 mL)萃取水相，逐渐溶解沉淀物，将有机相与悬浮液合并，并直接真空蒸发，得到黄色固体，其仍然不纯。难溶的产物用Et2O研磨并过滤。收集残余物并真空干燥，得到所需的6-氯-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(1.666 g，3.42 mmol，51％收率)。
Figure 890281DEST_PATH_IMAGE313
中间体147: 2-(甲基氨基甲酰基)-6-乙烯基异烟酸叔丁酯
Figure 875555DEST_PATH_IMAGE314
将密封的微波小瓶中的2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.801 g，2.96mmol)、2,4,6-三乙烯基环三硼氧烷吡啶络合物(1.063 g，4.42 mmol)、PdCl2(dppf)(0.1040 g，0.142 mmol)和碳酸钾(1.2526 g，9.06 mmol)于乙醇(5 mL)和甲苯(5 mL)中的悬浮液在微波反应器中在120℃加热40分钟。将小瓶重新密封，将混合物在微波反应器中再加热20分钟。将反应混合物通过10g硅藻土柱过滤，并用乙酸乙酯(约30 mL)洗涤柱。将滤液真空蒸发，得到粘稠的深红色油状物(1.30 g)。将其重新溶解在DCM(约3 mL)中，并直接施加到50g SNAP硅胶柱的顶部，并通过SP4快速柱色谱法纯化。用0％-40％EtOAc/环己烷梯度洗脱柱子。合并合适的级分并真空蒸发，得到粘稠的深棕色油状物(816 mg)。将其重新溶解在DCM(约3 mL)中并直接施加到50g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过SP4快速柱色谱法进一步纯化。用15％-40％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。合并合适的级分，真空蒸发，得到目标产物，为粘稠的浅黄色油状物(738.1 mg) - 2-(甲基氨基甲酰基)-6-乙烯基异烟酸叔丁酯(738.1 mg，2.81 mmol，95％收率)。
Figure 185313DEST_PATH_IMAGE315
中间体148: 2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 256038DEST_PATH_IMAGE316
将溴(0.34 mL，6.64 mmol)加入到2-(甲基氨基甲酰基)-6-乙烯基异烟酸叔丁酯(910 mg，3.47 mmol)/DCM(6 mL)中。将所得溶液在室温下搅拌30分钟。真空除去溶剂，然后在50℃加入含有KOH(389 mg，6.94 mmol)的EtOH(8 mL)并将反应混合物搅拌15分钟。反应混合物在水(10 mL)和盐水(2 mL)和EtOAc(10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc(3×10 mL)萃取。合并的有机相用疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩，得到2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.31 g，3.30 mmol，95％收率)。
Figure 371761DEST_PATH_IMAGE317
中间体149: 2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 211541DEST_PATH_IMAGE318
将2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.31 g，3.84 mmol)、(1H-吲哚-4-基)硼酸(0.742 g，4.61 mmol)、磷酸三钾(2.445 g, 11.52 mmol)和PEPPSIiPr(0.262 g，0.384 mmol)在氮气下吹扫10分钟。加入1,4-二氧杂环己烷(20 mL)和水(10mL)并将反应物在室温下搅拌3小时。再次加入PEPPSI iPr(0.262 g，0.384 mmol)，将反应物搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将残余物溶于DCM(40 mL)中并用水(2x40 mL)和盐水(40mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (1.5 g, 3.18 mmol, 83%收率)。
Figure 692201DEST_PATH_IMAGE319
中间体150: 2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 984642DEST_PATH_IMAGE320
将2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.31 g，3.84 mmol)、(1H-吲哚-4-基)硼酸(0.742 g，4.61 mmol)、磷酸三钾(2.445 g，11.52 mmol)和PEPPSIiPr(0.262 g，0.384 mmol)在氮气下吹扫10分钟。加入1,4-二氧杂环己烷(20 mL)和水(10mL)并将反应物在室温下搅拌3小时。加入另外的PEPPSI iPr(0.262 g，0.384 mmol)并将反应物搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将残余物加入DCM(40 mL)中并用水(2x40 mL)和盐水(40 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g, 3.18 mmol, 83%收率)。
Figure 841740DEST_PATH_IMAGE321
中间体151: (+/-)-2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔 丁酯
Figure 349075DEST_PATH_IMAGE322
在乙醇(20 mL)中使用Pd-C(0.068 g，0.636 mmol)催化剂氢化2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g，3.18 mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将反应通过硅藻土过滤，然后真空浓缩。将粗产物于最少量的DCM中施加到SNAPULTRA二氧化硅柱(100 g)上，并通过快速色谱法纯化，用5-50％EtOAc/环己烷洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(512 mg，1.35 mmol，42％收率)。
Figure 637DEST_PATH_IMAGE323
中间体152: (+/-)-2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 45953DEST_PATH_IMAGE324
将2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(512 mg，1.35mmol)加入甲醇(7.5 mL)和THF(7.5 mL)中。加入NaOH(6.75 mL，13.49 mmol，2M)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入水中并使用2M HCl酸化至pH 2。滤出沉淀物，得到目标产物，2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(450mg，1.39 mmol)。
Figure 441162DEST_PATH_IMAGE325
中间体153: (R)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
中间体154: (S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
Figure 989955DEST_PATH_IMAGE326
通过手性HPLC纯化中间体73 (7.78 g)。将外消旋物溶解在EtOH (150 毫升)中。注射：将1.1 mL溶液通过制备型自动进样器注入到柱上(20％EtOH /庚烷+ 0.2％异丙胺，流速= 42.5 mL/min，检测波长= 280 nm，带宽140 nm，参考400 nm带宽100 nm，柱30 mm ×25 cm Chiralcel OJ-H)。将11.2-13.7分钟的级分合并并标记为峰1。将15.7-19分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的级分真空浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到中间体153 (2.84 g)。
Figure 140314DEST_PATH_IMAGE327
收集对应于峰2的级分，得到中间体154 (2.80 g)。
Figure 407347DEST_PATH_IMAGE328
中间体155: (S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸
Figure 606247DEST_PATH_IMAGE329
将(S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(2.19 g，6.43 mmol，中间体154)和三氟乙酸(10 mL，130 mmol)于DCM(15 mL)中的混合物在室温下搅拌19小时。从混合物中真空蒸发挥发物，将油状残余物重新溶解在乙腈(约10 mL)中并真空蒸发溶剂。向橙色油状残余物中加入乙醚(约10 mL)，沉淀出白色固体。过滤固体，用乙醚(2×5 mL)洗涤，真空干燥，得到目标产物，为白色固体; (S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯乙基)异烟酸(1.18 g，4.14 mmol，64％收率)。
在氮气流下蒸发来自第二次乙醚洗涤的母液的溶剂，得到第二批目标产物，为白色固体; (S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯乙基)异烟酸(95.6 mg，0.336 mmol，收率5.23％)。
将来自初始研磨和第一次乙醚洗涤的合并母液的溶剂在氮气流下蒸发，得到的橙色粘性油状物用乙醚(5 mL)研磨。将母液倾析掉，并将固体用另外的乙醚(3×5 mL)研磨，每次倾析母液。将固体真空干燥，得到第三批目标产物，为乳白色固体，收率; (S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(310.8 mg，1.09 mmol，17％收率)。
将来自上述批次分离的合并母液在氮气流下蒸发，并将得到的橙色半结晶固体用乙醚(3 mL)洗涤。将母液倾析掉，并用另外的乙醚(3×3 mL)研磨固体，每次倾析母液。将该固体真空干燥，得到第四批目标产物，为乳白色固体(100.4 mg)。
分离的总产物在四个批次中总计 = 1.68 g, 92%。
Figure 9547DEST_PATH_IMAGE330
中间体156: (R)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸
Figure 81539DEST_PATH_IMAGE331
将(R)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(497 mg，1.46 mmol，中间体10)溶于DCM(5 mL)中，加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温搅拌过夜。再次加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在50℃下回流3小时。向反应中加入更多TFA(1mL)，然后将其再搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将样品加载到甲醇中并通过在磺酸(SCX，2g)上的SPE纯化，用甲醇洗脱。合并合适的级分，真空蒸发，得到所需产物(350 mg)，为粉红色固体。
Figure 835869DEST_PATH_IMAGE332
中间体157: 2-苄基-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 572881DEST_PATH_IMAGE333
将密封的微波小瓶中的2-氯-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(228 mg，0.80mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(55.6 mg，0.08 mmol)于四氢呋喃(6 mL)中的溶液在室温下在氮气下搅拌10分钟，然后滴加苄基溴化锌(II)(0.5M于THF中，2.40 mL，1.20 mmol)。将小瓶重新密封，将混合物在微波反应器中于110℃加热30分钟。反应混合物通过2.5g硅藻土柱过滤，并将柱用乙酸乙酯(20 mL)洗涤。向滤液中加入水(20 mL)和盐水(5 mL)，分离各层。水层用另外的乙酸乙酯(2×25 mL)萃取，合并的有机层用盐水(2×20 mL)洗涤，并通过10g硅藻土柱过滤。将柱用乙酸乙酯(30 mL)洗涤，并将滤液通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将该滤液真空蒸发，然后重新溶解在二氯甲烷(3 mL)中，直接施加到25g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用0％-30％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。合并合适的级分，真空蒸发，将残余物转移至二氯甲烷(约5 mL)中，真空蒸发该溶液，得到2-苄基-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(212.7 mg，0.63 mmol，78％收率)，为粘稠的深黄色油状物。
Figure 96266DEST_PATH_IMAGE334
中间体158: 2-苄基-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 526110DEST_PATH_IMAGE335
向2-苄基-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(212 mg，0.62 mmol)于二氯甲烷(6mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(1.5 mL，19.47 mmol)。将所得溶液在室温下在氮气下搅拌17.5小时，之后将挥发物真空蒸发，与乙腈(2×5 mL)和乙醚(5 mL)共沸，得到2-苄基-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸(170.1 mg，0.60 mmol，96％收率)，为黄色固体。
Figure 502156DEST_PATH_IMAGE336
中间体159: 2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 105176DEST_PATH_IMAGE337
将2-(氯甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(345 mg，1.16 mmol)、(1H-吲哚-4-基)硼酸(273.7 mg，1.70 mmol，可商购自例如Fluorochem)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(166.2 mg，0.23 mmol)和碳酸钾(475.1 mg，3.44 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(8 mL)和水(4 mL)中的悬浮液在室温下在氮气下搅拌3.5小时。向反应混合物中加入乙酸乙酯(10 mL)和水(10 mL)，分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×10 mL)萃取水相，合并有机层并通过10g硅藻土柱过滤。将柱用乙酸乙酯(2×10 mL)洗涤，滤液通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将该滤液真空蒸发，重新溶解在二氯甲烷(约3 mL)中，直接施加到25gSNAP二氧化硅柱的顶部，并通过快速柱色谱法纯化。用0％-30％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。将合适的级分真空蒸发，得到2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(256.5 mg，0.68 mmol，59％收率)，为蓬松的乳白色固体。
Figure 748647DEST_PATH_IMAGE338
中间体160: 2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 83813DEST_PATH_IMAGE339
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(114.7 mg，0.30mmol)于甲醇(1.5 mL)和THF(1.5 mL)中的溶液中加入氢氧化钠(94.3 mg，2.36 mmol)。将得到的无色溶液在室温下搅拌100分钟，然后在氮气流下蒸发挥发物。将胶状残余物再溶于水(1 mL)中，得到淡粉红色溶液，再次在氮气流下蒸发挥发物，得到黄色固体。将残余物再溶于水(5 mL)中，得到桃色透明溶液，其pH确定为14，向该溶液中加入2M盐酸(2 mL)，得到黄色沉淀物(确定上清液的pH值是1)。过滤沉淀物，用另外的2M盐酸(4 mL)洗涤过滤的固体，然后使用乙醚(约10 mL)试着洗涤固体，但这导致固体溶解在乙醚中。在氮气流下蒸发乙醚相，并将残余物真空干燥，得到目标产物，为橙色固体，2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸(91.7 mg，0.28 mmol，94％收率)。
Figure 812735DEST_PATH_IMAGE340
中间体161: 2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟 酸叔丁酯
Figure 891549DEST_PATH_IMAGE341
在2mL微波小瓶中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(30 mg，0.105 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(50 mg，0.21 mmol)、碳酸钾(50 mg，0.36 mmol)和PdCl2(dppf) (15.42 mg，0.02 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中合并。将其在110℃下加热40分钟。将溶液通过硅藻土过滤，用EtOAc(10 mL)洗脱，然后用水洗涤。水相用EtOAc萃取3次。然后将合并的有机相干燥并真空浓缩。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP 10g柱，用0至50％乙酸乙酯/环己烷洗脱，然后30至100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱。将所需级分真空浓缩，得到2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(40 mg，0.10 mmol，93％收率)，为黄色油状物。
Figure 199646DEST_PATH_IMAGE342
中间体162: 2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟 酸
Figure 705714DEST_PATH_IMAGE343
向2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(40 mg，0.11 mmol)于DCM(0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.3 mL，3.89 mmol)并将反应混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，然后加入MeOH(5 mL)和DCM(5 mL)，真空除去溶剂，然后加入乙醚(10 mL)，真空除去溶剂，得到2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(67 mg，0.11 mmol，99％收率，50％纯度)。
Figure 921932DEST_PATH_IMAGE344
中间体163: 4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)异二 氢吲哚-1-甲酸苄酯
Figure 804437DEST_PATH_IMAGE345
在2毫升微波小瓶中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(110 mg，0.386 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)异二氢吲哚-1-甲酸苄酯(285.5 mg，0.602 mmol)、碳酸钾(183 mg，1.321 mmol)和PdCl2(dppf) (56.5 mg，0.077mmol)在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中合并。将其在120℃下加热40分钟。然后将溶液通过Celite®(洗脱剂EtOAc)过滤，干燥，然后浓缩。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP 10 g，用0-30％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。浓缩所需级分，得到4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(138.7 mg，0.249mmol，64％收率)，为无色油状物。
Figure 156921DEST_PATH_IMAGE346
中间体164: 2-((1-((苄氧基)羰基)二氢吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基) 异烟酸
Figure 161786DEST_PATH_IMAGE347
向4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(138.7 mg，0.221 mmol)于DCM(4 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.7 mL，9.09 mmol)，将反应混合物搅拌4小时。再加入2,2,2-三氟乙酸(1 mL，12.98 mmol)，将所得混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物，得到棕色固体。将EtOAc(10 mL)加入到棕色固体中，然后将所得混合物用碳酸氢钠溶液碱洗5次，然后用2M HCl溶液(10 mL)中和水相，然后将其用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(出现固体，因此过滤溶液)，然后真空浓缩，得到棕色油状物 – 2-((1 - ((苄氧基)羰基)二氢吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(109mg，0.196 mmol，88％收率)。
Figure 599721DEST_PATH_IMAGE348
中间体165: 4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)乙烯基) 二氢吲哚-1-甲酸苄酯
Figure 20338DEST_PATH_IMAGE349
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(453.8 mg，1.197 mmol)、2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(393 mg，0.979 mmol)、[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(PEPPSI-iPr)(69.0 mg，0.10 mmol)和磷酸三钾(640.9 mg，3.02 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(6 mL)和水(3 mL)中的混合物用氮气脱气5分钟，然后将其在室温下在氮气下避光(烧瓶包裹在箔中)搅拌23小时。使其冷却至室温并静置46小时后，将混合物通过2.5g 硅藻土柱过滤，随后用乙酸乙酯(3×10 mL)洗涤。合并的滤液用水(20 mL)和饱和盐水溶液(10 mL)的混合物洗涤，水相用乙酸乙酯(15 mL)反萃取。合并的有机相用另外的水(10 mL)和饱和盐水溶液(50 mL)的混合物洗涤，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤干燥有机相。真空蒸发溶剂，将残余物重新溶解在二氯甲烷(约6 mL)中，将溶液加到25g SNAP Ultra Silica柱上。通过Biotage SP4快速柱色谱法纯化样品，用0-30％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱。合并所需的级分，真空蒸发溶剂。将残余物真空干燥，得到4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)乙烯基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(230.0 mg，0.45 mmol，46％收率)，为浅黄色松脆泡沫。
Figure 492907DEST_PATH_IMAGE350
中间体166: (±)-2-(1-(二氢吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔 丁酯
Figure 340778DEST_PATH_IMAGE351
在20℃下4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)乙烯基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(227.5 mg, 0.44 mmol)于乙醇(10 mL)中的溶液经10％ Pd/C催化剂柱筒使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化。在相同条件下使混合物第二次通过H-Cube，真空蒸发溶剂，得到浅黄色松脆泡沫。将该产物再溶于二氯甲烷(约3 mL)中，并施加到已用环己烷预先润湿的10g SNAP Ultra二氧化硅柱的顶部。使用Biotage SP4快速色谱法用0-100％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱。合并所需的级分，真空蒸发溶剂，得到残余物，将其再溶于二氯甲烷(~4 mL)中，转移到柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到(±)-2-(1-(二氢吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(145.8 mg，0.38 mmol，86％收率)，为浅黄色结晶固体。
Figure 79058DEST_PATH_IMAGE352
中间体167: (±)-2-(1-(1-甲酰基二氢吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基) 异烟酸
Figure 303366DEST_PATH_IMAGE353
(±)-2-(1-(二氢吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(145.8mg，0.38 mmol)于水(2 mL)和四氢呋喃(2 mL)中的溶液中加入氢氧化钠(196.3 mg，4.91mmol)并在室温下搅拌105分钟。加入甲醇(2 mL)并在室温下继续搅拌另外90分钟。将混合物在氮气流下浓缩，并将残余物在2M盐酸水溶液(5 mL)和乙酸乙酯(5 mL)之间分配。分离各相(检查水相pH，发现约为1（~1）)，并用另外的乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。在氮气流下蒸发水相，将残余物重新溶解在甲醇(4 mL)和水(2 mL)中，并将溶液施加到已用甲醇预先润湿的“Isolute”氨基丙基离子交换柱上。将柱用甲醇(3×20 mL)洗脱，然后用水(2×20mL)洗脱，然后用2M盐酸(2×20 mL)洗脱。中性级分在氮气流下蒸发溶剂，然后将残余物悬浮在甲醇/水的3:1混合物(3 mL)中，除去上清液并通过MDAP(3×1 mL注射; 甲酸法)纯化。合并所需的级分，真空蒸发溶剂。将残余物再溶于甲醇(~6 mL)中，并转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到(±)-2-(1-(1-甲酰基二氢吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(110.8 mg，0.31 mmol，82％收率)，为无色粘性固体。
Figure 630442DEST_PATH_IMAGE354
中间体168: 2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 914793DEST_PATH_IMAGE355
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(110 mg，0.31 mmol)和乙酸钯(II)(62.4 mg，0.28 mmol)溶解在THF(1 mL)中并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴加入LiHMDS(1M于THF中，0.95 mL，0.950 mmol)并将反应混合物搅拌45分钟。加入MeI(0.03 mL，0.480 mmol)并将所得混合物搅拌2小时。加入另外的MeI(0.01 mL，0.160mmol)并将所得混合物搅拌1小时。将MeI(0.02 mL，0.320 mmol)加入到反应混合物中并将所得混合物搅拌1.5小时。然后使溶液升温并加入水(2 mL)，得到第一批反应混合物。
在另一个烧瓶中，将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(39mg，0.11 mmol)溶解在THF(0.35 mL)中并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴加入LiHMDS(1M于THF中，0.33 mL，0.330 mmol)并将反应混合物搅拌45分钟(颜色变化：无色至黄色至深绿色)。加入MeI(0.06 mL，0.320 mmol，来自0.03mL MeI于0.06mL THF中的储备溶液)(颜色变化：深绿色至黄色溶液)并将所得混合物搅拌1小时，得到第二批反应混合物。
合并反应混合物并用水(10 mL)和EtOAc(3×10 mL)萃取。将合并的有机相用疏水过滤器干燥，然后真空除去溶剂。通过SiO2色谱法(Biotage SNAP柱(10g)，洗脱剂0至40％乙酸乙酯/环己烷)纯化粗产物。将合并的所需级分真空浓缩，得到2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(57.3 mg，0.15 mmol，32％收率)，为橙色油状物。
Figure 327319DEST_PATH_IMAGE356
中间体169: 2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 152056DEST_PATH_IMAGE357
向2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(57.3 mg，0.16 mmol)于DCM(0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应混合物搅拌过周末。加入另一份2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL，6.49 mmol)，将反应混合物搅拌2小时。真空除去溶剂，得到2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(81mg，0.14 mmol，92％，55％纯度)，为黑色油状物。
Figure 333639DEST_PATH_IMAGE358
中间体170: 2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基丙基)异烟酸叔丁酯
Figure 788891DEST_PATH_IMAGE359
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg，0.29 mmol)溶解在THF(0.5 mL)中并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴加入LiHMDS(0.7 mL，0.700mmol，1M于THF中)并将反应混合物搅拌35分钟。加入碘乙烷(0.04 mL，0.50 mmol)，将所得混合物搅拌1小时，然后升温。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。加入水(0.1 mL)。反应物用水(10 mL)洗涤并用EtOAc(3×15 mL)萃取三次，然后将合并的有机相用疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩。将其通过二氧化硅柱(10 g)上的快速色谱法纯化，用0至30％乙酸乙酯/环己烷洗脱。将合并的所需级分真空浓缩，得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基丙基)异烟酸叔丁酯(75.3 mg，0.20 mmol，69％收率)，为无色油状物。
Figure 688714DEST_PATH_IMAGE360
中间体171: 2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基丙基)异烟酸
Figure 254824DEST_PATH_IMAGE361
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基丙基)异烟酸叔丁酯(75 mg，0.212 mmol)溶解在THF(2 mL)中并加入盐酸(2M，1.1 mL，2.20 mmol)。将混合物在回流下搅拌过夜。再加入1mL HCl(5M)并将所得混合物在回流下搅拌22小时。真空蒸发溶剂，得到白色固体，2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基丙基)异烟酸(80 mg，0.20 mmol，95％收率) 。
Figure 103963DEST_PATH_IMAGE362
中间体172: 2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸叔丁酯
Figure 730116DEST_PATH_IMAGE363
在室温下将(1-苯基乙烯基)硼酸(2.62 g，17.73 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)、2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(4 g，14.78 mmol，可商购自例如Anichem)、磷酸三钾(9.41 g，44.3 mmol)和PEPPSI iPr(1.004 g，1.478 mmol)溶解在1,4-二氧杂环己烷(24 mL)和水(12 mL)中并在氮气下脱气。将所得溶液在70℃下搅拌2小时。将反应物冷却至室温，用水(20 mL)稀释，用DCM(3×25 mL)萃取。将合并的有机物通过疏水性玻璃料并真空浓缩，得到黄色泡沫。将其通过SiO2上的快速色谱法纯化(Biotage SNAP100g柱，用0-60％乙酸乙酯/环己烷洗脱)，得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸叔丁酯(4.06 g，11.40 mmol，77％收率，95％纯度)，为浅黄色泡沫。
Figure 117235DEST_PATH_IMAGE364
中间体173: 2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 221457DEST_PATH_IMAGE365
在氮气下在0℃下，在圆底烧瓶中，将(2,3-二甲基丁-2-基)硼烷(0.66M于THF中，30.0 mL，19.80 mmol，其制备描述于文献中：例如H.C.Brown和E.Negishi，J. Am. Chem. Soc., 94, 3567 (1972))添加到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸叔丁酯(3.94 g，9.90 mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时，然后加入水(30 mL)。在0℃下加入过氧化氢(35％w/w，在水中，24.26 mL，277 mmol)和氢氧化钠(2M，24.74 mL，49.5mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌25分钟，然后使其升温。然后将反应混合物搅拌2小时。加入柠檬酸(10％，30 mL)和EtOAc(30 mL)。分离有机层，水层用另外份的EtOAc(3×50 mL)萃取。合并的有机相用疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩。将其通过SiO2色谱法纯化(BiotageSNAP 50g，洗脱剂0至100％EtOAc/环己烷)。将合并的所需级分真空浓缩，得到2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.15 g，3.07 mmol，31％收率，95％纯度)。
Figure 377632DEST_PATH_IMAGE366
中间体174: 2-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 237004DEST_PATH_IMAGE367
将2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(80 mg，0.22mmol)和N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺(144 mg，0.67 mmol)溶于DCM(1 mL)中。缓慢加入三甲基氧鎓四氟硼酸盐(100 mg，0.67 mmol)，将反应混合物在氮气下搅拌30小时。加入N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺(144 mg，0.67 mmol)和三甲基氧鎓四氟硼酸盐(100 mg，0.67mmol)，将反应混合物在氮气下搅拌20小时。加入碳酸氢钠溶液(10 mL)和DCM(10 mL)。分离各层，水相用另外份的DCM(2×10 mL)萃取。合并的有机相用疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP 10g，洗脱剂0至30％EtOAc/环己烷)。将合并的所需级分真空浓缩，得到粗标题产物。加入2M HCl溶液(10 mL)和DCM(10 mL)。分离各层，水相用另外份的DCM(2×10 mL)萃取。合并的有机相用疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩，得到2-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(42 mg，0.10mmol，45％收率，89％纯度)，为粉红色油状物。
Figure 845840DEST_PATH_IMAGE368
中间体175: 2-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-6 (甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 19332DEST_PATH_IMAGE369
向2-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(38 mg，0.09mmol，89％wt.)于DCM(1 mL)中的溶液中加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩，然后加入DCM(5 mL)并将反应混合物真空浓缩。加入乙醚(5mL)并将反应混合物真空浓缩(4次)，得到2-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(73 mg，0.08 mmol，89％收率，35％纯度)，为黄色油状物。
Figure 30013DEST_PATH_IMAGE370
中间体176: 2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙烯基)异烟酸 叔丁酯
Figure 997969DEST_PATH_IMAGE371
将2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(350 mg，0.72 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)二氢吲哚-2-酮(276.9 mg，1.07 mmol)、[1,3- 双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(PEPPSI-iPr)(71.0 mg，0.10 mmol)和磷酸三钾(566.8 mg，2.67 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(6 mL)和水(3 mL)中的溶液在氮气下在室温下在黑暗中搅拌19小时。将反应混合物通过2.5g硅藻土柱过滤，并用乙酸乙酯(约10 mL)洗涤柱。向滤液中加入水(5 mL)和盐水(5 mL)，分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×10 mL)萃取水层，合并有机相，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，得到粘稠的棕色固体(556.7 mg)。将其再溶解于DMSO(6 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。合并所需的级分并真空蒸发，得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙烯基)异烟酸叔丁酯(157.7 mg，0.40 mmol，56％收率)，为浅黄色固体。
Figure 94101DEST_PATH_IMAGE372
中间体177: (+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异 烟酸叔丁酯
Figure 353175DEST_PATH_IMAGE373
2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙烯基)异烟酸叔丁酯(260mg，0.66 mmol)于乙酸乙酯(20 mL)和乙醇(20 mL)中的溶液使用Thales H-Cube装置在20℃下以完全H2模式经10％钯/碳催化剂柱筒氢化1次。将溶液真空蒸发，得到(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异烟酸叔丁酯(257.1 mg，0.65 mmol，98％收率)，为黄色胶状物。
Figure 483942DEST_PATH_IMAGE374
中间体178: (+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异 烟酸
Figure 685117DEST_PATH_IMAGE375
将(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异烟酸叔丁酯(257 mg，0.65 mmol)与第二批粗(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异烟酸叔丁酯(约10 mg)在DCM(8 mL)中合并。逐滴加入三氟乙酸(1.0 mL，12.98mmol)。将得到的橙色溶液在室温在氮气下搅拌总共2天，在此期间加入另外的DCM(4.0 mL，7.5小时后)和三氟乙酸(0.5 mL，6.49 mmol，23.75小时后)。将挥发物真空蒸发，得到深红色胶状物，将其与乙腈(3×5 mL)共沸，真空蒸发挥发物，得到粘稠的粉红色固体。向其中加入水(5 mL)和DCM(5 mL)，并使用配有疏水性玻璃料的柱筒分层。水层用另外的DCM(2×5mL)洗涤并真空蒸发，得到棕色胶状物。将其与乙醚(5 mL)共沸，真空蒸发挥发物，得到(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异烟酸(158.9 mg，0.40mmol，61％收率)，为棕色固体。
Figure 268545DEST_PATH_IMAGE376
中间体179: (+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 518260DEST_PATH_IMAGE377
在0℃下，向2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(118 mg，0.447 mmol)于THF(1.5 mL)中的溶液中滴加苯基溴化镁(1M于THF中，2 mL，2 mmol)。将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液中并用EtOAc(20 mL×3)萃取。有机层经MgSO4干燥并真空浓缩。通过SiO2色谱法纯化粗产物(Biotage® SNAP 10g，用0-60％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。浓缩所需级分，得到2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43 mg，0.107 mmol，24％收率)。
Figure 503534DEST_PATH_IMAGE378
中间体180: 2-((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 813293DEST_PATH_IMAGE379
将3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚(330 mg，1.26 mmol)、2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(300 mg，1.054 mmol)、PdCl2(dppf) (77 mg，0.11 mmol)和碳酸钾(437 mg，3.16 mmol)用氮气脱气10分钟。加入1,4-二氧杂环己烷(4 mL)和水(2 mL)并将反应物在室温下搅拌2小时。再次加入另外的PdCl2(dppf) (77 mg，0.11 mmol)并将反应物再搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入DCM(15 mL)中并用水(15 mL)和盐水(15 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到SNAP ULTRA二氧化硅柱(25g)上，通过快速色谱法纯化，用0-30％EtOAc/环己烷洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到目标产物，2-((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(134 mg，0.35mmol，33％收率)，为乳白色固体。
Figure 694136DEST_PATH_IMAGE380
中间体181: 2-((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 747543DEST_PATH_IMAGE381
将2-((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(203 mg，0.53 mmol)加入甲醇(2 mL)和THF(2 mL)中。加入NaOH(2.65 mL，5.29 mmol，2M)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物溶于水中并用HCl酸化至pH 2。滤出沉淀物，得到2 -((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(154 mg，0.47mmol，89％收率)。
Figure 587323DEST_PATH_IMAGE382
中间体182: 2-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟 酸叔丁酯
Figure 67983DEST_PATH_IMAGE383
将2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-1-基)乙醇(732 mg，2.55 mmol)、2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(653 mg，2.29mmol)、PdCl2(dppf) (187 mg，0.26 mmol)和碳酸钾(1057 mg，7.65 mmol)加入到微波小瓶中。加入1,4-二氧杂环己烷(10 mL)和水(5 mL)，将反应容器密封并在Biotage Initiator微波中加热至110℃保持30分钟。冷却后，将反应物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯(15 mL)洗涤。将滤液真空浓缩。将残余物加入乙酸乙酯(20 mL)中并用水(20 mL)和盐水(20 mL)洗涤。将有机相通过硅藻土过滤，然后通过疏水性玻璃料进一步过滤并真空浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO(3mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物，2-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(149 mg, 0.36mmol, 14%收率)，为棕色油状物。
Figure 360424DEST_PATH_IMAGE384
中间体183: 2-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟 酸
Figure 279839DEST_PATH_IMAGE385
将2-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(149 mg，0.36 mmol)加入DCM(2 mL)中。加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌3小时。将反应物真空浓缩，产物2-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(129 mg，0.364 mmol，100％收率)直接用于下一步。
Figure 974125DEST_PATH_IMAGE386
中间体184: 2-(甲基氨基甲酰基)-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰基)-1H-吲哚-4-基) 甲基)异烟酸
Figure 625686DEST_PATH_IMAGE387
将TFA(5 mL，64.9 mmol)加入到2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.32 g，3.61 mmol)于DCM(10 mL)中的溶液中并将溶液搅拌过夜，然后真空蒸发，得到深红色胶状物。将粗产物溶于甲醇(20 mL)中并静置，得到致密的米色固体沉淀物，将其干燥，得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰基)-1H-吲哚-4-基)甲基)异烟酸(550 mg，1.36 mmol，38％收率)。该化合物用于进行下一步。
Figure 671003DEST_PATH_IMAGE388
中间体185: (+/-)-2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 66212DEST_PATH_IMAGE389
在室温下，将三甲基氧鎓四氟硼酸盐(1.426 g，9.64 mmol)加入到2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.1 g，3.21 mmol)和N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺 (2.066 g, 9.64 mmol)于DCM (10 mL)中的混合物中并将混合物搅拌4小时，然后用EtOAc(50 mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(50 mL)和0.5M HCl(50 mL)洗涤。将有机层干燥并真空蒸发，残余物通过二氧化硅柱(25 g)上的色谱法纯化，用0-60％EtOAc/环己烷洗脱。将含产物的级分真空蒸发，得到(+/-)-2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(440 mg，1.23 mmol，38％收率)，为无色胶状物。
Figure 428054DEST_PATH_IMAGE390
中间体186: (+/-)-2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 516096DEST_PATH_IMAGE391
将2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(400 mg，1.12mmol)溶于甲醇中，然后加入NaOH(2 mL，4.00 mmol，2M)，混合物在室温下搅拌3小时。将溶剂真空蒸发，将残余物溶于水(10 mL)中，用2M HCl酸化至pH4，然后用DCM(2×20 mL)萃取。将溶剂干燥并真空蒸发，得到2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(325mg，1.08 mmol，96％收率)，为无色胶状物。
Figure 783129DEST_PATH_IMAGE392
中间体187: 2-(1-(2-甲氧基苯基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 716450DEST_PATH_IMAGE393
将2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(207.9 mg，0.24 mmol)、2-(2-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(97.4 mg，0.42 mmol)、[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(20.2 mg，0.03 mmol)和磷酸三钾(189.5 mg，0.89 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(3 mL)和水(1.5 mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。将混合物在室温下在黑暗中在氮气下搅拌21小时。将反应混合物通过10g硅藻土柱过滤，并用乙酸乙酯(约20 mL)洗涤柱。向滤液中加入水(20 mL)并分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×20 mL)萃取水层，合并有机相，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。将滤液真空蒸发，再溶于DMSO(2 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。合并所需的级分并真空蒸发，得到2-(1-(2-甲氧基苯基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(36.7 mg，0.10 mmol，41％收率)，为棕色胶状物。
Figure 447646DEST_PATH_IMAGE394
中间体188: (+/-)-2-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔 丁酯
Figure 706589DEST_PATH_IMAGE395
将2-(1-(2-甲氧基苯基)乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(73 mg，0.20 mmol)于乙酸乙酯(5 mL)中的溶液使用Thales H-Cube装置在20℃下以完全H2模式经10％钯/碳催化剂柱筒氢化，在第一次通过后再循环通过该装置45分钟。将反应混合物真空蒸发，得到(+/-)-2-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(74.5mg，0.20 mmol)，为黄色胶状物。
Figure 195339DEST_PATH_IMAGE396
中间体189: (+/-)-2-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 197930DEST_PATH_IMAGE397
将2-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(74.5 mg，0.20 mmol)和氢氧化钠(70.1 mg，1.75 mmol)于甲醇(1 mL)和四氢呋喃(1 mL)中的混合物在室温下搅拌1.25h。在氮气流下蒸发挥发物。向其中加入水(5 mL)和2M HCl水溶液(约1mL)，得到浅黄色沉淀物。过滤悬浮液，滤液用乙酸乙酯(5 mL)萃取。将固体沉淀物与有机萃取物合并；将该溶液在氮气流下蒸发，将残余物真空干燥，得到(+/-)-2-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(56.1 mg，0.18 mmol，89％收率)，为粘性橙色固体。
Figure 721315DEST_PATH_IMAGE398
中间体190: (S*)-2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 885580DEST_PATH_IMAGE399
在-78℃下，将(3-氟苯基)溴化镁(10.41 mL，10.41 mmol，1M于THF中)滴加到2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.1 g，4.16 mmol)于THF中的溶液中，将混合物搅拌30分钟，然后温热至-20℃，然后将混合物用饱和氯化铵溶液(10 mL)淬灭并用EtOAc(20 mL)萃取。将有机层干燥并真空蒸发，得到橙色胶状物，将其通过二氧化硅柱(50 g)上的快速色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。将含产物的级分真空蒸发，得到2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.25 g，3.47 mmol，83％收率)，为无色胶状物。将不纯的产物溶解在甲醇中，加入NaOH(6 mL，12.00 mmol，2M水溶液)，然后将混合物在室温下放置过周末。将溶剂蒸发至其原始体积的一半，并将所得溶液用2M HCl酸化至pH 3，然后静置2小时，得到致密的沉淀物。将其通过过滤收集并用水洗涤，然后将固体在真空烘箱中干燥，得到2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(0.71g，2.33 mmol，56％收率)，为无色固体。
Figure 940255DEST_PATH_IMAGE400
中间体191: (+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁 酯
Figure 480958DEST_PATH_IMAGE401
在-78℃下，将邻甲苯基溴化镁(2M在乙醚中，4.73 mL，9.46 mmol)加入到2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1000 mg，3.78 mmol)于THF中的溶液中，将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后温热至室温。逐滴加入氯化铵溶液(5 mL)，然后混合物用水(20mL)稀释，并用EtOAc(2×20 mL)萃取。合并的有机物用盐水洗涤，干燥并真空蒸发。粗产物通过50g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，真空蒸发含产物的级分，得到(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(80wt％纯度，0.74 g，1.66 mmol，44％收率)，为无色胶状物。
Figure 858850DEST_PATH_IMAGE402
中间体192: (+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 459595DEST_PATH_IMAGE403
在室温下，将NaOH(2M，2.491 mL，4.98 mmol)加入到(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(80wt％，0.74 g，1.66 mmol)于甲醇(10 mL)中的溶液中并将溶液搅拌2小时，然后真空蒸发，将残余物在水(20 mL)和乙醚(20 mL)之间分配。水层用2M HCl酸化至pH 4，然后用EtOAc(2×20 mL)萃取。混合物在界面处包含固体，通过过滤收集固体，用EtOAc洗涤并在真空烘箱中干燥，得到(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(220 mg，0.73 mmol，44％收率)，为无色固体。将滤液转移至分液漏斗，分离有机层并与第一EtOAc萃取物(20 mL，上述)合并，然后将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到另外的2-(羟基(邻甲苯基))甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(170mg，0.566 mmol，34％收率)，为无色泡沫。
Figure 922938DEST_PATH_IMAGE404
中间体193: 2-(4-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
Figure 329648DEST_PATH_IMAGE405
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(276 mg, 1.02 mmol)、(4-氟苄基)氯化锌(II)(2100 μL，1.05 mmol，0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (185 mg，0.26 mmol)溶解在THF(600 μL)中并在100℃下在微波中加热30分钟。加入另外的(4-氟苄基)氯化锌(II)(1600 μL，0.80 mmol，0.5M于THF中)，然后在100℃下在微波中进一步加热。将反应混合物通过硅藻土过滤(洗脱剂EtOAc)。真空除去溶剂，得到1.422g粗制黑色油状物。将其用几滴甲醇溶解在DCM中，并通过SiO2 色谱法纯化(Biotage SNAP 50g，用0-40％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。将所需级分真空浓缩，得到2-(4-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(325 mg，0.85 mmol，83％收率)，为白色固体。
Figure 827626DEST_PATH_IMAGE406
中间体194: 2-(4-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 333693DEST_PATH_IMAGE407
向2-(4-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(325 mg，0.94 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(2.4 mL)中的溶液中加入LiOH(49 mg，2.05 mmol)，然后加入水(2.4mL)。反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，然后溶解在水中。向溶液中加入乙酸直至pH达到4。然后将溶液在水和EtOAc之间分配。分离各层，然后使用两份EtOAc(2×15mL)进行另外两次含水萃取。合并有机层，干燥(疏水性玻璃料)并真空浓缩，得到2-(4-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(262 mg，0.82 mmol，87％收率)，为白色固体。
Figure 549911DEST_PATH_IMAGE408
中间体195: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(苯基)甲基)- N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 432416DEST_PATH_IMAGE409
在0℃下，向N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(191 mg，0.468 mmol，90％wt.)于DCM(8 mL)中的溶液中逐滴加入亚硫酰氯(0.25 mL，3.43 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入SOCl2 (0.1 mL)，将所得混合物搅拌1小时，然后真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(300 mg，0.43 mmol，收率91％，55％纯度)。
Figure 597950DEST_PATH_IMAGE410
中间体196: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(吡啶-2- 基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 274919DEST_PATH_IMAGE411
在室温下在N2下，在干燥的圆底烧瓶中和氯化锂(101 mg，2.38 mmol)一起加入2-溴吡啶(0.289 mL，2.97 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)和THF(0.5 mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入异丙基氯化镁溶液(2M于THF中，1.48 mL，2.96mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)并将所得混合物搅拌45分钟，得到吡啶-2-基氯化镁(假定收率为100％，反应混合物以粗品直接用于下一步骤)。在0℃在氮气下，向吡啶-2-基氯化镁(410 mg，2.249 mmol)于THF(0.5 mL)中的溶液中逐滴加入于THF(2mL)中的N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(180mg，0.56 mmol，90％wt.)。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。加入氯化铵水溶液(0.5mL)。将反应混合物真空浓缩。加入MeOH(2 mL)并通过MDAP(高pH法)纯化。浓缩所需的级分，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(62 mg，0.16 mmol，29％收率).
Figure 712853DEST_PATH_IMAGE412
中间体197: (±)-4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3,3- 二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 399050DEST_PATH_IMAGE413
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(41.4 mg，0.15 mmol)、(±)-4-(3-氨基丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(45.4 mg，0.16 mmol)和HATU(95.8 mg，0.25 mmol)于DMF(1.5 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.080 mL，0.46 mmol)。将混合物在室温下搅拌50分钟。将反应混合物在氮气流下浓缩，用乙腈稀释至总体积为2mL，并通过MDAP(2×1mL注射;甲酸法)直接纯化，合并所需的级分并真空蒸发。将残余物悬浮在二氯甲烷中，转移到柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，得到(±)-4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(52.3 mg，0.10 mmol，64％收率)，为无色玻璃状物。
Figure 606040DEST_PATH_IMAGE414
中间体198: (S)-2-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S*)-1-苯基乙基)异烟酰胺 基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 781806DEST_PATH_IMAGE415
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(100 mg，0.35 mmol)加入DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.184 mL，1.06 mmol)和HATU(201 mg，0.53 mmol)，将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(129 mg，0.528 mmol)并将反应物搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将残余物加入乙酸乙酯(10 mL)中并使用碳酸氢钠溶液(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-75％(3:1 EtOAc:EtOH)/环己烷洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到标题化合物(108 mg) 。
Figure 707037DEST_PATH_IMAGE416
中间体199: (1R,5S,6s)-6-(2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺 基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 931345DEST_PATH_IMAGE417
将2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(160 mg，0.56 mmol)加入DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.295 mL，1.69 mmol)、HATU(321 mg，0.84 mmol)和(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(167 mg，0.84 mmol)，将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(10 mL)中并用碳酸氢钠水溶液(10 mL)萃取。有机相用盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到标题化合物(295 mg)，将其不经纯化用于下一步骤。
Figure 258421DEST_PATH_IMAGE418
中间体200: 4-((4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酰基)-6- (甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯
Figure 542772DEST_PATH_IMAGE419
向2-((1-((苄氧基)羰基)二氢吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(122.1 mg，0.27 mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺,盐酸盐(55.4 mg，0.41mmol)和HATU(161.3 mg，0.42 mmol)的混合物中加入DIPEA(0.168 mL，0.96 mmol)和DMF(2mL)，将混合物在室温下搅拌70分钟。将混合物在氮气流下浓缩，用乙腈补足至3mL，然后通过MDAP直接纯化(1×3mL注射; 高pH法)。在氮气流下蒸发所需的级分，将残余物重新溶解在二氯甲烷(约4 mL)中，合并并转移到柏油小瓶中。在氮气流下蒸发溶剂并真空干燥，得到4-((4-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酰基) -6- (甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯(101.3 mg，0.19 mmol，70％收率)，为黄色松脆泡沫。
Figure 689719DEST_PATH_IMAGE420
中间体201: (S*)-3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基) 异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，非对映异构体1
中间体202: (R*)-3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基) 异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，非对映异构体 2
Figure 527838DEST_PATH_IMAGE421
通过手性HPLC纯化实施例117 (84.4 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将2 x 1 mL该溶液注入到柱中[20％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100，柱30 mm × 25 cm Chiralpak IC(5 μm)，批号IC10028-01]。总注射次数= 2。将23.5-27分钟的级分合并并标记为峰1。将29-35分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分真空浓缩，然后转移到柏油小瓶中并真空干燥。
收集对应于峰1的级分，得到(S*)-3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，非对映异构体1(35.0 mg，0.06mmol)，为无色玻璃状物。
Figure 709421DEST_PATH_IMAGE422
收集对应于峰2的级分，得到(R*)-3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯,非对映异构体2(39.4 mg, 0.07mmol)，为无色玻璃状物。
Figure 164673DEST_PATH_IMAGE423
中间体203: (R*)-3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基) 异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体1
中间体204: (S*)-3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基) 异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体2
Figure 64496DEST_PATH_IMAGE424
通过手性HPLC纯化实施例 118 (74.6 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将2 mL该溶液注入到柱中[40％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速=30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100，柱30 mm × 25 cm Chiralpak IC (5 μm)，批号IC10028-01]。总注射次数= 1。将12.5-14.5分钟的级分合并并标记为峰1。将18-23分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分真空浓缩，然后转移到柏油小瓶中并真空干燥。
收集对应于峰1的级分，得到(R*)-3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，非对映异构体1 (31.8 mg,0.06 mmol)，为无色玻璃状物。
Figure 630606DEST_PATH_IMAGE425
收集对应于峰2的级分，得到(S*)-3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，非对映异构体2 (32.8 mg,0.06 mmol)，为无色玻璃状物。
Figure 729012DEST_PATH_IMAGE426
中间体205: (S*)-4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基) 异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体1
中间体206: (R*)-4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基) 异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体2
Figure 355166DEST_PATH_IMAGE427
通过手性HPLC纯化实施例 119 (59.2 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将2 x 1 mL该溶液注入到柱中[20％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100，柱30 mm × 25 cm Chiralpak IC(5 μm)，批号IC10028-01]。总注射次数= 2。将23-26分钟的级分合并并标记为峰1。将28.5-33分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分真空浓缩，然后转移到柏油小瓶中并真空干燥。
收集对应于峰1的级分，得到(S*)-4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体1 (24.9 mg,0.05 mmol)，为无色玻璃状物。
Figure 476705DEST_PATH_IMAGE428
收集对应于峰2的级分，得到(R*)-4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体2 (25.7 mg,0.05 mmol)，为无色玻璃状物。
Figure 846507DEST_PATH_IMAGE429
中间体207: (+/-)-2-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-2-甲 基吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 2682DEST_PATH_IMAGE430
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(55 mg，0.20 mmol)加入DMF(2 mL)中。加入DIPEA(0.071 mL，0.41 mmol)，然后加入HATU(116 mg，0.31 mmol)并将反应物在室温下搅拌5分钟。加入二氯甲烷(2 mL)中的(+/-)-2-(3-氨基丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(90 wt％，60 mg，0.21 mmol)，将反应物在室温搅拌45分钟。将反应物放置过夜，然后真空浓缩。将残余物在EtOAc(25 mL)和饱和NaHCO3(25 mL)之间分配。有机层用Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP Ultra柱上，并用5-40％(3:1 EtOAc:EtOH)/环己烷洗脱。将合适的级分真空浓缩，得到2-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯(70wt％纯度，91.6 mg，0.13mmol，62％收率)，为黄色固体。
Figure 612786DEST_PATH_IMAGE431
中间体208: 6-苄基-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 221622DEST_PATH_IMAGE432
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(522.1 mg，1.93 mmol)和HATU(1.071 g，2.82 mmol)于DMF(7 mL)中的混合物中加入4,4-二乙氧基丁-1-胺( 0.467 mL，2.70 mmol，可商购自例如Fluorochem)，然后加入DIPEA(1.0 mL，5.73 mmol)。将混合物在室温下在氮气下搅拌17.25小时，然后真空浓缩。混合物用乙腈(7 mL)稀释，并通过MDAP(3×3 ml注射;高pH法)直接纯化。合并所需的级分，真空蒸发溶剂。将残余物重新溶解在二氯甲烷(约10mL)中，并转移到柏油小瓶中，然后在氮气流下蒸发溶剂，真空干燥，得到6-苄基-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(0.651 g，1.58 mmol，82％收率)，为浅黄色胶状物。
Figure 129535DEST_PATH_IMAGE433
中间体209: 6-苄基-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二 氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 140216DEST_PATH_IMAGE434
将6-苄基-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(0.648 g，1.57mmol)、2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(0.362 g，1.64 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(62.7 mg，0.33 mmol)于甲苯(13.5 mL)中的混合物在70℃在氮气下搅拌125分钟，之后冷却到室温。混合物在乙酸乙酯(30 mL)和1M碳酸钠溶液(30 mL)之间分配。分离各相，水相用另外的乙酸乙酯(2×20 mL)萃取，合并的有机相用饱和盐水溶液(20 mL)反洗。通过装有疏水性玻璃料的柱筒干燥有机相，真空蒸发溶剂。将残余物溶于DCM(约 5mL)中，加载到50g二氧化硅柱上，并通过Biotage SP4快速柱色谱法纯化，用20-60％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱。合并所需的级分，真空蒸发溶剂。将残余物重新溶解在二氯甲烷(约15 mL)中，并转移到柏油小瓶中，然后在氮气流下蒸发溶剂，然后真空干燥，得到6-苄基-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(0.510 g，0.94 mmol，60％收率)，为白色固体。
Figure 108172DEST_PATH_IMAGE435
中间体210: 6-苄基-N 4-(3,3-二乙氧基丙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 266621DEST_PATH_IMAGE436
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(77.8 mg，0.29 mmol)和HATU(142.9 mg，0.38 mmol)于DMF(1.5 mL)中的混合物中加入3,3-二乙氧基丙-1-胺(0.061 mL，0.37mmol)和DIPEA(0.151 mL，0.86 mmol)。将混合物在室温下搅拌4.5小时，然后在氮气流下蒸发挥发物。将其再溶解于DMSO(3 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。合并所需的级分并真空蒸发，得到6-苄基-N 4-(3,3-二乙氧基丙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(91.3 mg，0.23 mmol，79％收率)，为浅棕色胶状物。
Figure 978225DEST_PATH_IMAGE437
中间体211: 6-苄基-N 4-(2-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二 氧杂环己-2-基)乙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 108992DEST_PATH_IMAGE438
将6-苄基-N 4-(3,3-二乙氧基丙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (87.6 mg, 0.22mmol)、2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(48.8 mg，0.22 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(8.5 mg，0.05 mmol)于甲苯(3 mL)中的混合物在110℃在氮气下搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温并真空蒸发挥发物，得到黄色固体。将其在乙酸乙酯(5 mL)、水(3mL)和饱和Na2CO3水溶液(2 mL)之间分配并分离各层。用二氯甲烷(3×5 mL)和乙酸乙酯(5mL)萃取水相，合并有机层，通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。在氮气流下蒸发滤液。将其重新溶解于DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。合并所需的级分并真空蒸发，得到6-苄基-N 4-(2-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)乙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(71.0 mg，0.13 mmol，61％收率)，为白色固体。
Figure 247849DEST_PATH_IMAGE439
中间体212:6-(3-氯苄基)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)- 1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 378748DEST_PATH_IMAGE440
将6-氯-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (152 mg, 0.312 mmol)、(3-氯苄基)氯化锌(II)(1300 µL, 0.650 mmol, 0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (36 mg, 0.05 mmol)溶于THF(210 µL)中并在100℃在微波中加热30 min。将另外的(3-氯苄基)氯化锌(II) (620 µL,0.310 mmol, 0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (32.9 mg, 0.05 mmol)加入到反应混合物中，然后在100℃加热30分钟。将反应混合物通过硅藻土过滤(洗脱剂EtOAc)。真空除去溶剂，得到637mg粗棕色固体。将其用几滴甲醇溶解在DCM中，并通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP10g，用0-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。将所需级分真空浓缩，得到6-(3-氯苄基)-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(50 mg，0.07 mmol，24％收率，85％纯度)，为非常浅的棕色(几乎白色)固体。
Figure 894042DEST_PATH_IMAGE441
中间体213: 6-(2-氯苄基)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)- 1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 879316DEST_PATH_IMAGE442
将6-氯-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (155 mg, 0.32 mmol)、(2-氯苄基)氯化锌(II)(1300 μL，0.650 mmol，0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (35 mg，0.05 mmol)溶于THF(210 μL)中并在100℃在微波中加热30分钟。加入另外量的(2-氯苄基)氯化锌(II)(640 μL，0.320mmol，0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (15.64 mg，0.02 mmol)，然后在微波中将反应混合物在100°C下加热30分钟。将反应混合物通过硅藻土过滤(洗脱剂EtOAc)。真空除去溶剂，得到587 mg粗棕色/黑色固体。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP 10g，用0-40％(25％乙醇:乙酸乙酯)/环己烷洗脱)。将所需级分真空浓缩，得到6-(2-氯苄基)-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(117 mg，0.18 mmol，57％收率)，为白色固体。
Figure 189075DEST_PATH_IMAGE443
中间体214: N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环 己-2-基)丙基)-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 994220DEST_PATH_IMAGE444
将6-氯-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (154 mg, 0.32 mmol)、(3-甲基苄基)氯化锌(II)(1300 μL，0.650 mmol，0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (42 mg, 0.060 mmol)溶于THF(211μL)中并在100℃在微波中加热30分钟。加入更多的(3-甲基苄基)氯化锌(II)(630 µL,0.315 mmol，0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (19 mg, 0.03 mmol)，然后在微波中在100°C下加热30分钟。将反应混合物通过硅藻土过滤(洗脱剂EtOAc)。真空除去溶剂，得到602 mg粗棕色固体。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP 10g，用0-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。将所需级分真空浓缩，得到N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (67 mg, 0.12mmol, 38%收率)，为无色油状物。
Figure 47626DEST_PATH_IMAGE445
中间体215: N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环 己-2-基)丙基)-6-(2-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 949723DEST_PATH_IMAGE446
将6-氯-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (153 mg, 0.314 mmol)、(2-甲氧基苄基)氯化锌(II)(1300 μL，0.650 mmol，0.5M于THF中)和PdCl2(PPh3)2 (47 mg, 0.07mmol)溶于THF(210 μL)中并在100℃在微波中加热30分钟。加入另外的PdCl2(PPh3)2 (37 mg, 0.05mmol)和(2-甲氧基苄基)氯化锌(II)(628 μL，0.31 mmol，0.5M于THF中)，然后在微波中在100°C下再加热30分钟。将反应混合物通过硅藻土过滤(洗脱剂EtOAc)。真空除去溶剂，得到589 mg粗棕色固体。将其用几滴甲醇溶于DCM并通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP 10g，用0-60％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。将所需级分真空浓缩，得到题述化合物，为带有黑色固体的仍然不纯的黄色油状物。将仍然不纯的产物用几滴甲醇重新溶解在DCM中，并通过SiO2色谱法纯化(Biotage SNAP 10g，用0-60％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。将所需级分真空浓缩，得到N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(2-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (51 mg, 0.08 mmol, 24%收率)。
Figure 430383DEST_PATH_IMAGE447
中间体216: (S)-N 4-(4,4-二乙氧基丁基)-N 2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺
Figure 988403DEST_PATH_IMAGE448
向(S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (120.1 mg, 0.42 mmol)和HATU (243.8 mg, 0.64 mmol)于DMF (2 mL)中的溶液中加入4,4-二乙氧基丁-1-胺(0.110mL，0.63 mmol)和DIPEA(0.221 mL，1.27 mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1.5小时，然后将其用DMSO(4 mL)稀释，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，再溶解在甲醇中并合并。将该溶液在氮气流下蒸发，并将残余物真空干燥，得到(S)-N 4-(4,4-二乙氧基丁基)-N 2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(152.2 mg，0.36 mmol，84％收率)，为黄色胶状物。
Figure 579922DEST_PATH_IMAGE449
中间体217: N 4-(3-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环 己-2-基)丙基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 539787DEST_PATH_IMAGE450
向(S)-N 4-(4,4-二乙氧基丁基)-N 2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(150 mg, 0.35 mmol)于甲苯(3 mL)的溶液中添加2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮 (79.3 mg, 0.36 mmol)和对甲苯磺酸一水合物 (14.2 mg, 0.08 mmol)。将所得悬浮液在70℃在氮气下搅拌2小时，然后将反应混合物冷却至室温并真空蒸发挥发物。将其在乙酸乙酯(5 mL)和1M碳酸钠水溶液(5 mL)之间分配，分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×5mL)萃取水相，合并有机相，并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。在氮气流下蒸发滤液。将其再溶于DMSO(1 mL)和乙腈(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。合并所需的级分并真空蒸发，得到N 4-(3-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (113.0 mg, 0.20 mmol,58%收率)，为白色固体。
Figure 4398DEST_PATH_IMAGE451
中间体218: (+/-)-N4-(4,4-二乙氧基丁基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 784135DEST_PATH_IMAGE452
向2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(150 mg，0.50 mmol)和HATU(209 mg，0.55 mmol)于DMF(1.5 mL)中的溶液中加入DIPEA(0.174 mL，1.00 mmol)，然后加入4,4-二乙氧基丁-1-胺(0.095 mL，0.55 mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。依次加入另外的HATU(50 mg)、DIPEA(43 μL)和4,4-二乙氧基丁-1-胺(24 μL)，并将反应物再搅拌2小时，然后淬灭。加入水(20 mL)和EtOAc(20 mL)，分离各层。用乙酸乙酯(2×10 mL)进一步萃取水层。合并的有机物用水(2×10 mL)和饱和LiCl水溶液(10 mL)反萃取，然后干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到深色油状物。将其重新溶解在DCM中并直接施加到SNAP二氧化硅柱(10g)的顶部并通过SP4快速柱色谱法纯化。用30-100％乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱柱子。收集合适的级分并真空浓缩，得到产物，为黄色油状物 - N4-(4,4-二乙氧基丁基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (183 mg, 0.41 mmol, 83%收率)。
Figure 179344DEST_PATH_IMAGE453
中间体219: (+/-)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二 氧杂环己-2-基)丙基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 993717DEST_PATH_IMAGE454
向N4-(4,4-二乙氧基丁基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(183 mg，0.41 mmol)于甲苯(2 mL)的溶液中加入2-(1,3-二羟基丙-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(91 mg，0.41 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(15.7 mg，0.08 mmol)。将所得悬浮液在90℃在氮气下搅拌2小时，然后将反应混合物冷却至室温并在乙酸乙酯(20 mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(20 mL)之间分配并分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×20 mL)萃取水相，合并有机相，干燥(MgSO4))，过滤，将滤液真空浓缩，得到黄色油状物。将残余物加入DCM中，加入到SNAP二氧化硅(10g)柱中，并通过快速SP4色谱法纯化，用30→100％EtOAc/环己烷洗脱。收集合适的级分并真空干燥，得到目标产物 - N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(162 mg, 0.283 mmol, 69%收率)。
Figure 816179DEST_PATH_IMAGE455
中间体220: (+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(2-((甲基磺酰基)氧基)-1-苯基乙 基)异烟酸叔丁酯
Figure 145529DEST_PATH_IMAGE456
在氮气下，将(+/-)-2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(200 mg，0.561 mmol)加入DCM(5 mL)中。加入Et3N (0.235 mL，1.683 mmol)，然后加入Ms-Cl (0.066 mL，0.842 mmol)并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物在DCM和水(10 mL)之间分配，水层用DCM(2×10 mL)再萃取。合并的有机物通过疏水性玻璃料洗脱，然后真空浓缩，得到(+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(2-((甲基磺酰基)氧基)-1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(313 mg，0.540 mmol，96％收率，75％wt.)，为黄色油状物。
Figure 344429DEST_PATH_IMAGE457
中间体221: (+/-)-2-(2-氰基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
Figure 13308DEST_PATH_IMAGE458
在微波小瓶中将(+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(2-((甲基磺酰基)氧基)-1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(313 mg，0.54 mmol，75％wt.)、Et3N (0.226 mL，1.621mmol)和NaCN(61 mg，1.245 mmol)于DMSO(5 mL)中合并，并在Biotage initiator微波中加热至160℃保持30分钟。反应混合物在EtOAc和水(各15 mL)之间分配。水层用EtOAc(2×15 mL)再萃取，将合并的有机物干燥(Na2SO4)，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到橙色油状物。将粗产物于最少的DCM中施加到25g ULTRA二氧化硅SNAP柱上，并用5-40％EtOAc/环己烷洗脱。将合适的级分真空浓缩，得到(+/-)-2-(2-氰基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(78 mg，0.203 mmol，38％收率)，为黄色固体。水层的LCMS显示存在酸，因此将其用2N HCl小心酸化并用EtOAc(2×15 mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到(+/-)-2-(2-氰基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(182 mg，0.294 mmol，55％收率)，为棕色油状物。
Figure 6672DEST_PATH_IMAGE459
实施例
实施例1: 4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔 丁酯
Figure 761001DEST_PATH_IMAGE460
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (50 mg, 0.185 mmol)、HATU (112 mg,0.295 mmol)、DIPEA (0.097 mL, 0.555 mmol)和DMF (3 mL)在室温下在N2下搅拌，然后加入4-(3-氨基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100 mg，0.413 mmol)并将反应物在室温下在N2下搅拌2小时。浓缩溶液，得到300 mg橙色油状物。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP25 g柱，用0-100％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。浓缩合适的级分，得到25mg黄色油状物。通过MDAP(甲酸法)纯化反应物。浓缩含有目标产物的级分，得到4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(18 mg，0.033 mmol，17.70％收率)，为灰白色固体。
Figure 573712DEST_PATH_IMAGE461
实施例2: 6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(哌啶-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 97097DEST_PATH_IMAGE462
在室温下将4-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10 mg，0.021 mmol)和TFA(0.5 mL，6.49 mmol)于DCM(2 mL)中搅拌1小时。浓缩反应混合物并加载到1g SCX柱(用MeOH预处理)上，用MeOH(20 mL)洗脱，然后用2M NH3/MeOH(20 mL)洗脱。合并含有产物的氨级分并浓缩，得到6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(哌啶-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(7 mg，0.017 mmol，80％收率)，为无色油状物。
Figure 261362DEST_PATH_IMAGE463
实施例3: 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(哌啶-4-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 502988DEST_PATH_IMAGE464
在室温下将4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (15 mg, 0.030 mmol)和TFA(0.5 mL，6.49 mmol)于DCM(2 mL)中搅拌1小时。浓缩反应混合物并加载到1g SCX柱(用MeOH预处理)上，用MeOH(20 mL)洗脱，然后用2M NH3/MeOH(20 mL)洗脱。合并含有产物的氨级分并浓缩，得到19 mg灰白色固体。其通过MDAP (甲酸法)纯化。浓缩含有目标产物的级分，得到6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(哌啶-4-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (5 mg, 0.011 mmol, 37.6%收率)，为无色油状物。
Figure 43691DEST_PATH_IMAGE465
实施例4: 6-苄基-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶- 2,4-二甲酰胺
Figure 483899DEST_PATH_IMAGE466
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸的三氟乙酸盐 (100 mg, 0.260 mmol) 和HATU (198 mg, 0.520 mmol)在DMF (2400 µL)中的溶液中加入DIPEA (227 µL, 1.301mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(53 mg, 0.391 mmol)。将反应混合物倒入水:饱和NaHCO3 (1:1)中并用EtOAc(3×10 mL)萃取。合并的有机物用盐水(2×5mL)洗涤，通过疏水性玻璃料干燥并真空蒸发。将残余物(102 mg)于DCM中加载到10g SNAP柱上，通过Biotage® SP4快速色谱法纯化，用12-62％(3:1 EtOAc:EtOH)/环己烷洗脱。合并相关级分并真空蒸发，得到目标产物，为无色玻璃状物。将该玻璃状物用乙醚超声处理并再蒸发一次，得到6-苄基-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(51 mg，0.138 mmol，53.0％收率)，为白色固体。
Figure 84645DEST_PATH_IMAGE467
实施例5: 6-苄基-N2-甲基-N4-(氧杂环丁-3-基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 547987DEST_PATH_IMAGE468
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(58 mg，0.215 mmol)悬浮在闪烁瓶中的DCM(10 mL)中，并加入Et3N(0.060 mL，0.429 mmol)和HATU(106 mg，0.279 mmol)，然后将混合物搅拌20分钟，然后加入氧杂环丁-3-胺(31.4 mg，0.429 mmol)。将所得黄色溶液搅拌2小时，然后用水(10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，残余物通过10g二氧化硅柱上的色谱法纯化，得到6-苄基-N2-甲基-N4-(氧杂环丁-3-基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (15 mg, 0.046 mmol,21.48%收率)，为无色固体。
Figure 892381DEST_PATH_IMAGE469
实施例6: (+/-)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺
Figure 124779DEST_PATH_IMAGE470
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (40 mg, 0.133 mmol)悬浮在闪烁瓶中的DCM(10 mL)中，并加入Et3N(0.037 mL, 0.266 mmol)和HATU(65.8 mg, 0.173mmol)，然后将混合物搅拌20分钟，然后加入2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (40 mg,0.174 mmol, 其制备已在国际专利申请公开No. WO 2003/097618中报道)。将所得黄色溶液搅拌2小时，然后用水(10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到浅黄色胶状物。将不纯的物质溶于DCM(2 mL)中并用TFA(1 mL)处理。将溶液在室温下搅拌1小时，然后真空蒸发，将残余物溶解在MeOH中，并加载到5g SCX柱上。将其用MeOH(20 mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH洗脱，将洗脱液真空蒸发，得到6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (20 mg, 0.048 mmol, 36.4%收率)。
Figure 709475DEST_PATH_IMAGE471
实施例7: (+/-)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(2-(4-甲基吗啉-2-基)乙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 660114DEST_PATH_IMAGE472
向2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(70 mg，0.233 mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(133 mg，0.350 mmol)，然后加入2-(4-甲基吗啉-2-基)乙胺的双盐酸盐(76 mg，0.350 mmol，可商购自例如Azepine产品列表)和DIPEA(0.204 mL，1.165mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌4小时(形成黄色溶液)。通过MDAP(甲酸法)直接纯化反应混合物。含有目标产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。用DCM(2×20 mL)萃取有机层，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(2-(4-甲基吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(35 mg，0.074 mmol，31.7％收率)，为黄色油状物。
Figure 542619DEST_PATH_IMAGE473
实施例8: (+/-)-2-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 895103DEST_PATH_IMAGE474
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (50 mg, 0.176 mmol)加入DMF(2 mL)中，加入HATU(100 mg，0.264 mmol)，然后立即加入DIPEA(0.092 mL，0.528 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入溶解在DMF(1 mL)中的2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(60.8 mg，0.264 mmol，其制备已在专利WO2003097618中报道)并将反应物搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(10 mL)中并用NaHCO3 (10 mL)洗涤。用EtOAc(10 mL)洗涤水层。合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥并通过疏水性玻璃料过滤。将混合物真空浓缩。通过MDAP(高pH法)纯化粗产物。将合适的级分真空浓缩，得到2-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(11.9 mg，0.024 mmol，13.63％收率)。
Figure 837651DEST_PATH_IMAGE475
实施例9-11和15: 2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸单体的酰胺系列
Figure 337903DEST_PATH_IMAGE476
。
制备含有一起溶解在DMF(3 mL)中的2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(162mg)和HATU(228 mg)的储备溶液。加入DIPEA(330 μL)，盖上小瓶并摇动以帮助溶解。将等份的该反应混合物(0.5 mL，0.1 mmol)加入到基质小瓶(1.2 mL)中的一组预称重的具有如上所示结构的胺中。将小瓶加盖并摇动以分散内容物，在室温下放置18小时。将样品原样注入(0.6 mL)并通过MDAP(高pH法)纯化。在N2气流下干燥溶剂，得到所需产物。
实施例11的BOC脱保护: 将Boc-保护的中间体重新溶解在4 N HCl/1,4-二氧杂环己烷 (0.5 mL)中并加入DCM (0.5 mL)。将小瓶加盖并在室温下放置1小时。除去溶剂至干，得到实施例11，为其HCl盐。
实施例
Figure 24099DEST_PATH_IMAGE477
* 所有LCMS均使用2分钟的甲酸法进行。
实施例12: (+/-)-N 2 -甲基-N 4 -(2-(吗啉-2-基)乙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 231090DEST_PATH_IMAGE478
将2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(8.1 mg，0.017 mmol)溶解在DCM(2 mL)中，加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌30分钟。将混合物真空浓缩。将样品于MeOH中加载，通过磺酸 (SCX) 500 mg上的SPE纯化，用MeOH洗脱，然后用2M氨/ MeOH洗脱。合并合适的级分并真空蒸发，得到目标产物(4.3 mg)。
Figure 344539DEST_PATH_IMAGE479
实施例13: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)- N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 269770DEST_PATH_IMAGE480
向2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(48 mg，0.160 mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(91 mg，0.240 mmol)，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(31.7 mg，0.234 mmol)和DIPEA(0.140 mL，0.799 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌1小时(形成黄色溶液)。将反应混合物在室温下搅拌另外2小时。加入另一部分HATU(70 mg，0.184 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(30mg，0.221 mmol)并将反应物在室温下再搅拌1小时。通过MDAP(甲酸法)直接纯化反应混合物。含有目标产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。用DCM(2×20 mL)萃取有机层，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到N4-(3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(44 mg，0.115 mmol，72.2％收率)，为白色油状物。
Figure 494078DEST_PATH_IMAGE481
实施例14: (+/-)-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 634203DEST_PATH_IMAGE482
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(50 mg，0.176 mmol)加入DMF(2mL)中。加入DIPEA(0.092 mL，0.528 mmol)，不久后接着加入HATU(100 mg，0.264 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。将溶解在DMF(1 mL)中的4-(2-氨基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.01061 mL，0.176 mmol)加入到反应中，并将其再搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物溶于EtOAc(10 mL)中，然后用NaHCO3(10 mL)洗涤。用EtOAc(10 mL)洗涤水层以除去任何残留的有机化合物。合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并通过疏水性玻璃料过滤。将样品溶解在1:1 MeOH:DMSO(0.8 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到所需产物(42.7 mg)。
Figure 652975DEST_PATH_IMAGE483
实施例16: (+/-)-N 2 -甲基-6-(1-苯基乙基)-N4-(2-(哌啶-4-基)乙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 65502DEST_PATH_IMAGE484
将4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(39.7 mg，0.080 mmol)加入DCM(2 mL)中。加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌30分钟。将反应物再搅拌1.5小时。然后将反应物搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将样品于MeOH中加载并通过磺酸(SCX，500 mg)上的SPE纯化。合并合适的级分，真空蒸发，得到所需产物(3.7 mg)，为黄色固体。
Figure 93500DEST_PATH_IMAGE485
实施例17: N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)- N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 337400DEST_PATH_IMAGE486
向(1R,5S,6s)-6-(2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(342 mg，0.712 mmol)于DCM(5 mL)中的溶液中加入TFA(1mL，12.98 mmol)并将反应混合物在N2下在室温搅拌2小时。浓缩反应混合物，得到983 mg黄色油状物，加载到5g SCX柱上(用MeOH预处理)，用MeOH(30 mL)洗脱，然后用2M NH3/MeOH(30 mL)洗脱。合并含有产物的氨级分并浓缩，得到N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (229 mg, 0.602 mmol, 84.6%收率)，为白色固体。
Figure 792652DEST_PATH_IMAGE487
实施例18: (1R,5S,6s)-6-(2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺 基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 426896DEST_PATH_IMAGE488
向2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(250 mg，0.832 mmol)于DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(475 mg，1.249 mmol)，然后加入(1R,5S,6r)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(248 mg，1.249 mmol，可商购自例如Fluorochem)和DIPEA(0.582 mL，3.33 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌1小时(形成黄色溶液)。然后将其用LiCl(20 mL)洗涤，在EtOAc(40 mL)和水(40 mL)之间分配，水相用EtOAc(2×40 mL)萃取，经疏水玻璃料干燥并浓缩，得到930 mg橙色油。将其加载到KP-Sil 50g SNAP Biotage®柱上，并通过快速色谱法纯化(梯度10％-80％乙酸乙酯/环己烷)。合并含有产物的级分并浓缩，得到标题化合物(350 mg)，为白色固体。
Figure 993006DEST_PATH_IMAGE489
实施例19: 6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-((1R,5S,6s)-3-甲基-3-氮杂双环 [3.1.0]己-6-基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 294675DEST_PATH_IMAGE490
将N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(56 mg，0.147 mmol)、甲酸(0.011 mL，0.294 mmol)、37％甲醛水溶液(0.022 mL，0.294 mmol)和MeOH(2 mL)在45℃下在N2下加热2小时。加入NaHCO3溶液(10mL)。用DCM(3×30 mL)萃取反应混合物，用疏水性玻璃料干燥并浓缩，得到190 mg粗制浅黄色残余物。将其通过SiO2色谱法纯化(Biotage® SNAP 10g柱，用10-60％含2M NH3的MeOH/DCM洗脱)。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-((1R,5S,6s)-3-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (60 mg, 0.137 mmol, 93%收率)，为白色固体。
Figure 733877DEST_PATH_IMAGE491
实施例20: N4-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧 基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 855417DEST_PATH_IMAGE492
将N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(57.8 mg, 0.152 mmol)溶解在DMF(1 mL)中，然后加入Et3N(0.025 mL，0.182 mmol)和乙酰氯(0.013 mL，0.182 mmol)并将混合物在室温下搅拌1.5小时。将另外部分的Et3N (0.025 mL，0.182 mmol)和乙酰氯(0.013 mL，0.182 mmol)加入到反应混合物中并将反应物搅拌2小时。将另外部分的Et3N(0.025 mL，0.182 mmol)和乙酰氯(0.013 mL，0.182 mmol)加入到反应混合物中并将反应混合物搅拌过夜。将另外部分的Et3N(0.025mL，0.182 mmol)和乙酰氯(0.013 mL，0.182 mmol)加入到反应混合物中(含有在1mL DMF中的数滴DCM以帮助溶解不溶性化合物)并将反应混合物搅拌过夜。通过MDAP(甲酸法)纯化该溶液，得到无色固体N4-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (27.1 mg, 0.058 mmol, 38.0%收率)。
Figure 225219DEST_PATH_IMAGE493
实施例21-22: 2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸单体的酰胺系列
Figure 381393DEST_PATH_IMAGE494
。
制备含有一起溶解在DMF(4.5 mL)中的2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(0.243 g)和HATU(0.342 g)的储备溶液。加入DIPEA(480 μL)，盖上小瓶并摇动以帮助溶解。将等份的该反应混合物(0.75 mL，0.15 mmol)加入到基质小瓶(1.2 mL)中的一组预称重的如上表中所示的胺（0.180mmol）中。将这些小瓶加盖并摇动以分散内容物，在室温下放置2小时。将样品原样注入并通过MDAP(高pH法)纯化。在N2气流下干燥溶剂，得到所需产物酰胺。
实施例22的化合物的BOC脱保护：将Boc-保护的中间体再溶解于4M HCl/1,4-二氧杂环己烷(0.75 mL)中并加入DCM(0.75 mL)。将小瓶加盖并在室温下放置1小时。除去溶剂至干，得到目标产物，为其HCl盐。
实施例
Figure 178448DEST_PATH_IMAGE495
* 所有LCMS均使用2分钟的甲酸法进行。
实施例23: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-(2-羟基乙氧 基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 849601DEST_PATH_IMAGE496
向2-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(98 mg，0.297 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中加入HATU(169 mg，0.445 mmol)，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺(58.8 mg，0.593 mmol)和DIPEA(0.259 mL，1.483 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。通过MDAP(TFA)直接纯化反应混合物。含有目标产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。用DCM(2×20 mL)萃取有机层，然后干燥并真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (7 mg, 0.015 mmol, 5.16%收率)，为无色油状物。
Figure 757514DEST_PATH_IMAGE497
实施例24-25: 2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸单体的酰胺系列
Figure 768195DEST_PATH_IMAGE498
。
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸加入到HATU(0.038 g，0.100 mmol)和DIPEA(0.052 mL，0.300 mmol)中并溶解在DMF(0.5 mL)中并放置5分钟。将该溶液分配到表中所示的胺单体(0.100 mmol)中，并在22℃下放置24小时。通过MDAP(高pH法)直接纯化样品。在N2气流下干燥溶剂，得到所需产物。对于实施例24，将Boc保护的中间体溶解在DCM(300 μL)中，向该溶液中加入4M HCl/1,4-二氧杂环己烷(500 μL)。将溶液在20℃下放置2小时。在排料装置中除去溶剂，得到实施例25，为其HCl盐。
实施例
Figure 736151DEST_PATH_IMAGE499
* 所有LCMS均使用2分钟的甲酸法进行。
实施例26: (+/-)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺
Figure 832283DEST_PATH_IMAGE500
将2-(3-(2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(60 mg，0.114 mmol)溶于DCM(2 mL)和TFA(1 mL)的混合物中，并将溶液在室温下搅拌2小时，然后真空蒸发，将残余物溶解在MeOH中并加载到5g SCX柱上。将其用MeOH(20mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH(20 mL)洗脱，将洗脱液真空蒸发，得到6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (40 mg, 0.094 mmol, 82%收率) 。
Figure 377445DEST_PATH_IMAGE501
实施例27: N2-甲基-N4-(3-((S)-吗啉-2-基)丙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺, 未定义立体中心的非对映异构体的1:1混合物
Figure 242632DEST_PATH_IMAGE502
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(40 mg，0.141 mmol)、HATU(80mg，0.211 mmol)、Et3N(39.2 μl，0.281 mmol)和(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(44.7 mg，0.183 mmol)溶解在DMF(1 mL)中并搅拌1小时，然后将混合物在室温下搅拌1小时。通过MDAP(高pH法)纯化混合物，得到中间体Boc-保护的化合物(2S)-2-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (35 mg, 0.069 mmol,48.7%收率)。
将Boc-保护的化合物溶于DCM(1 mL)中并用TFA(0.5 mL)处理，将混合物在室温下搅拌1小时，然后真空蒸发，将残余物溶于MeOH中，并加载到5g SCX柱上。将其用MeOH(10mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH洗脱，将洗脱液真空蒸发，得到N2-甲基-N4-(3-((S)-吗啉-2-基)丙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (18 mg, 0.044 mmol, 31.2%收率)，为浅黄色胶状物。
Figure 381490DEST_PATH_IMAGE503
实施例28: (R)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 964918DEST_PATH_IMAGE504
在20mL小瓶中，将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(80 mg，0.266mmol)溶于DMF(2 mL)中，然后加入HATU(152 mg，0.400 mmol)和Et3N(0.074 mL，0.533mmol)并将混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(85 mg，0.346 mmol)并且将溶液搅拌2小时。得到的混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc(10 mL)萃取。将溶剂真空蒸发，然后将残余物溶于DCM中并用TFA(1 mL)处理。将溶液静置1小时，然后真空蒸发，残余物通过MDAP(高pH法)纯化，得到(R)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (40 mg, 0.094 mmol, 35.2%收率)，为浅黄色玻璃状物。
Figure 480213DEST_PATH_IMAGE505
实施例29: (S)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 262224DEST_PATH_IMAGE506
在20mL小瓶中，将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(80 mg，0.266mmol)溶于DMF(2 mL)中，然后加入HATU(152 mg，0.400 mmol)和Et3N(0.074 mL，0.533mmol)并将混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(85 mg，0.346 mmol)并且将溶液搅拌2小时。得到的混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc(10 mL)萃取。将溶剂真空蒸发，然后将残余物溶于DCM中并用TFA(1 mL)处理。将溶液静置1小时，然后真空蒸发，残余物通过MDAP(高pH法)纯化，得到(S)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (40 mg, 0.094 mmol, 35.2%收率)。
Figure 571983DEST_PATH_IMAGE507
实施例30: N 2 -甲基-N 4 -(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺, 未定义立体中心的非对映异构体的1:1混合物
Figure 642707DEST_PATH_IMAGE508
将(2S)-2-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(87.1 mg，0.175 mmol)加入DCM(2 mL)中，加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将样品于MeOH中加载并通过在磺酸 (SCX，1g)上的SPE纯化，用MeOH洗脱柱子，然后用2M NH3/MeOH洗脱。合并合适的级分并真空蒸发，得到粗产物。将其溶于1:1 MeOH:DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到目标产物(25.1 mg)。
Figure 696113DEST_PATH_IMAGE509
实施例31: N 2 -甲基-N 4 -(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺, 未定义立体中心的非对映异构体的1:1混合物
Figure 535893DEST_PATH_IMAGE510
将(2R)-2-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(133 mg，0.268 mmol)加入DCM(2 mL)中，加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将样品于MeOH中加载并通过在磺酸 (SCX，1g)上的SPE纯化，用MeOH洗脱柱子，然后用2M NH3/MeOH洗脱。合并合适的级分，真空蒸发，得到粗产物。将其溶于1:1 MeOH:DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(32.3 mg)，为黄色油状物。
Figure 16553DEST_PATH_IMAGE511
实施例32: (+/-)-N 4 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2 -甲基-6-(1- 苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 387623DEST_PATH_IMAGE512
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (140 mg, 0.492 mmol)加入DMF(4 mL)中，加入DIPEA (0.258 mL, 1.477 mmol)、HATU (281 mg, 0.739 mmol) 和3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐 (100 mg, 0.739 mmol)，将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(20 mL)中并用NaHCO3溶液(20 mL)洗涤，有机相用盐水(20 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP ULTRA二氧化硅柱上，通过快速色谱法纯化，用0-50％(3:1乙酸乙酯/乙醇)洗脱。合并合适的级分并真空浓缩。将20mg样品溶解在DCM(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到所需产物(14 mg)，为白色固体。将未施用于MDAP的剩余产物进行手性分离(参见实施例38和39)。
Figure 979141DEST_PATH_IMAGE513
实施例33: (+/-)-6-苄基-N4-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲 酰胺
Figure 673428DEST_PATH_IMAGE514
将3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(140 mg，0.273 mmol)溶于DCM(3 mL)和TFA(1 mL)中，然后将混合物在室温下搅拌2小时。将溶剂真空蒸发，将残余物溶于MeOH中，并加载到5g SCX柱上。将其用MeOH(20 mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH(20 mL)洗脱。将洗脱液真空蒸发，得到6-苄基-N4-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (90 mg, 0.218 mmol, 80%收率)，为无色胶状物。
Figure 590568DEST_PATH_IMAGE515
实施例34: (+/-)-3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟 哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 370305DEST_PATH_IMAGE516
将3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(173 mg，0.666 mmol)和2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(150 mg，0.555 mmol)于DCM (5 mL)中合并，加入HATU(274 mg，0.721 mmol)和Et3N(0.101 mL，0.721 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌过夜。真空蒸发溶剂，残余物通过MDAP(高pH法)两次注射纯化，得到3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (160 mg, 0.312 mmol, 56.2%收率)，为无色固体。
Figure 827832DEST_PATH_IMAGE517
实施例35: (S)-6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 642204DEST_PATH_IMAGE518
向(S)-2-(3-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(28.7 mg, 0.048 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中加入TFA(0.05 mL，0.649 mmol)，将反应混合物搅拌过夜。加入另外的TFA(0.05 mL，0.048 mmol)并将溶液搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩。将反应混合物加入MeOH中，并加入SCX柱(1g)中。首先用MeOH洗脱柱子，然后用2M NH3/MeOH洗脱产物。合并所需的级分并浓缩，得到(S)-6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (23.0 mg, 0.048mmol, 99%收率)。
Figure 464666DEST_PATH_IMAGE519
实施例36: (R)-6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 731700DEST_PATH_IMAGE520
将(R)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(280 mg，0.580 mmol)溶于DCM(5 mL)中，然后加入TFA(2 mL，26.0 mmol)并将混合物在室温下搅拌2小时。将溶剂真空蒸发，将残余物溶解在MeOH中，并加载到5g SCX2柱上。将其用MeOH(20 mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH(20 mL)洗脱，将洗脱液真空蒸发，得到(R)-6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (180 mg, 0.471 mmol, 81%收率) ，为无色泡沫。
Figure 930600DEST_PATH_IMAGE521
实施例37: (S)-6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 599478DEST_PATH_IMAGE522
向2-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(56mg，0.113 mmol)于DCM(1 mL)中的溶液中加入TFA(0.17 mL，2.207 mmol)并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩。将反应混合物加入MeOH中，并加入SCX柱(1 g)中。首先用MeOH洗脱柱，然后用2M NH3/MeOH洗脱产物。合并所需的级分并真空浓缩，得到(S)-6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (40.1 mg, 0.096 mmol, 85%收率)。
Figure 405892DEST_PATH_IMAGE523
实施例38: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((S*)-1- 苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例39: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((R*)-1- 苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 160221DEST_PATH_IMAGE524
将(+/-)-N 4 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2 -甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(75 mg)用于手性纯化。将外消旋物(75 mg)溶解在EtOH(3 mL)中。注射：将1 mL溶液注入柱中(25％EtOH/庚烷，流速= 30 mL/min，波长= 215 nm，柱：30 mm×25 cm Chiralpak AD-H (5 μm)，总注射次数= 3 )。将14.5-16.5分钟的级分合并并标记为峰1，将18-21分钟的级分合并并标记为峰2(为了提高纯度，需要进一步制备峰2，这需要使用上述方法进行1次注射) 。将合并的级分真空浓缩，然后转移到称重的烧瓶中 - 从DCM和庚烷中回收最终的化合物，以获得固体。
峰1提供实施例39 (11.2 mg)。
Figure 897233DEST_PATH_IMAGE525
峰2提供实施例38 (24 mg)。
Figure 420618DEST_PATH_IMAGE526
实施例40: N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((R*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
实施例41: N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
Figure 912779DEST_PATH_IMAGE527
将(+/-)-(N 2 -甲基-N 4 -(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺) (23 mg)进行手性纯化。将外消旋物(23 mg)溶解在EtOH(1 mL)中。注射：将1 mL溶液注入柱中(30% EtOH (+0.2% 异丙胺)/庚烷 (+0.2% 异丙胺)，流速= 30 mL/min，波长=215 nm，柱：30 mm×25 cm Chiralpak AD-H (5 μm)，总注射次数= 1 )。将30-40分钟的级分合并并标记为峰1，将46-66分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的级分真空浓缩，然后转移到称重的烧瓶中 - 从DCM和庚烷中回收最终的化合物，以获得固体。
峰1提供实施例41 (6.9 mg)。
Figure 154405DEST_PATH_IMAGE528
峰2 提供实施例40 (6.3 mg)。
Figure 429528DEST_PATH_IMAGE529
实施例41b: N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺盐酸盐
Figure 72999DEST_PATH_IMAGE530
在超声辅助下将haystack小瓶中的胶状物N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (122 mg, 0.308 mmol)加入DCM (1 mL)中。加入HCl(1M于Et2O中，0.308 mL，0.308 mmol)，将小瓶超声处理5分钟，然后在N2下吹扫。将得到的棕色胶状物用Et2O(1 mL)研磨并在N2下再次吹扫，得到产物，为乳白色固体 - N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐(102 mg, 0.236 mmol, 77%收率)。
Figure 408166DEST_PATH_IMAGE531
实施例42: (S)-6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 137087DEST_PATH_IMAGE532
向(S)-2-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(92 mg，0.191 mmol)于DCM(2 mL)中的溶液中加入TFA(0.8 mL，10.38 mmol)并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩。将反应混合物溶于MeOH中，并加入SCX柱(1 g)中。首先用MeOH洗脱柱子，然后用2M NH3/MeOH洗脱产物。合并所需的级分并真空浓缩，得到(S)-6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (65.6 mg, 0.154mmol, 81%收率)。
Figure 28951DEST_PATH_IMAGE533
实施例43: (S)-6-苄基-N4-(3-(4-异丙基吗啉-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二 甲酰胺
Figure 526928DEST_PATH_IMAGE534
向(S)-6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(47 mg，0.119 mmol)于MeOH(0.5 mL)中的溶液中加入NaCNBH3 (15 mg，0.239 mmol)、丙-2-酮(35 μL，0.476 mmol)和AcOH(2.71 μL，0.047 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。加入AcOH(2.71 μL，0.119 mmol)、NaCNBH3(7.45 mg，0.119 mmol)和丙-2-酮(20 μL，0.119mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌45分钟。通过MDAP(高pH法)纯化反应混合物。合并所需的级分并真空浓缩，得到目标产物，为无色油状物 (S)-6-苄基-N4-(3-(4-异丙基吗啉-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (21.7 mg, 0.047 mmol, 39.7%收率)。
Figure 298575DEST_PATH_IMAGE535
实施例44: 6-苄基-N4-((R*)-2-羟基-2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2, 4-二甲酰胺
实施例45: 6-苄基-N4-((S*)-2-羟基-2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2, 4-二甲酰胺
Figure 249214DEST_PATH_IMAGE536
将(S)-2-(2-氨基-1-羟乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(416 mg，1.687 mmol)和2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(380 mg，1.406 mmol)于DCM(5 mL)中合并，加入HATU(695mg，1.828 mmol)和Et3N(0.255 mL，1.828 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌过夜。通过MDAP(高pH法)纯化1mL反应混合物，得到两个单独的级分，将其真空蒸发。将两者溶解在DCM(各5 mL)中并加入TFA(1 mL)，然后将溶液静置3小时，然后真空蒸发，将残余物溶解在MeOH中并加载到5g SCX柱上，其用MeOH(10 mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH洗脱，真空蒸发洗脱液，得到：
实施例44: 6-苄基-N4-((R * )-2-羟基-2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (20 mg, 0.050 mmol, 3.57%收率)。
Figure 131719DEST_PATH_IMAGE537
实施例45: 6-苄基-N4-((S * )-2-羟基-2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (18 mg, 0.045 mmol, 3.21%收率)。
Figure 546520DEST_PATH_IMAGE538
实施例46: (S)-6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-(3-(4-异丙基吗啉-2-基)丙基)- N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 489068DEST_PATH_IMAGE539
向((S)-6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-(3-(吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(19 mg，0.044 mmol)于MeOH(0.5 mL)中的溶液中加入NaCNBH3(10.97 mg，0.175mmol)、丙-2-酮(0.01 mL，0.136 mmol)和AcOH(1.048 mg，0.017 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌5小时。加入另外的丙-2-酮(7.60 mg，0.131 mmol)、AcOH(1.048 mg，0.017 mmol)和NaCNBH3 (10.97 mg，0.175 mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌1小时。通过MDAP(高pH法)纯化反应混合物。合并所需的级分并真空浓缩，得到(S)-6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-(3-(4-异丙基吗啉-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (16.2 mg, 0.031 mmol,70.0%收率)，为无色油状物。
Figure 927003DEST_PATH_IMAGE540
实施例47: (R)-6-苄基-N4-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰 胺
Figure 347620DEST_PATH_IMAGE541
向(S)-3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(190.5 mg，0.372 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液中加入2,2,2-TFA(0.40 mL，5.19mmol)并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩。将反应混合物加入MeOH中，并加入SCX柱(5 g)中。首先用MeOH洗脱柱子，然后用2M NH3/MeOH洗脱产物。合并所需的级分并真空浓缩，得到(R)-6-苄基-N4-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(153.6 mg, 0.354 mmol, 95%收率)。
Figure 820189DEST_PATH_IMAGE542
实施例48: (S)-6-苄基-N4-(3-(3-氟-1-异丙基哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶- 2,4-二甲酰胺
Figure 743759DEST_PATH_IMAGE543
向((R)-6-苄基-N4-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(30mg，0.073 mmol)于MeOH (0.5 mL)中的溶液中加入NaCNBH3 (22.85 mg，0.364 mmol)，丙-2-酮(0.02 mL，0.273 mmol)和AcOH(4.37 mg，0.073 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的丙-2-酮(0.02 mL，0.273 mmol)、AcOH(4.37 mg，0.073 mmol)和NaCNBH3 (22.85 mg，0.364 mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌3小时。通过MDAP(高pH法)纯化反应混合物。合并所需的级分并真空浓缩，得到(S)-6-苄基-N4-(3-(3-氟-1-异丙基哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (22 mg, 0.044 mmol, 59.9%收率)，为无色油状物。
Figure 668989DEST_PATH_IMAGE544
实施例49: (R)-6-苄基-N4-(2-(4-异丙基吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二 甲酰胺
Figure 893297DEST_PATH_IMAGE545
将(R)-6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (180 mg,0.471 mmol)溶于DCM (10 mL)中并加入丙酮(0.173 mL，2.353 mmol)和Na(OAc)3BH (499mg，2.353 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌过周末。将混合物用NaHCO3溶液(50 mL)淬灭并用DCM(30 mL)萃取，将有机层干燥并真空蒸发，得到无色胶状物。通过色谱法在25g SNAP柱上纯化粗产物，用0-10％含2M NH3的MeOH/DCM洗脱。将含产物的级分真空蒸发，得到(R)-6-苄基-N4-(2-(4-异丙基吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (110 mg, 0.259mmol, 55.1%收率)，为无色泡沫。
Figure 954794DEST_PATH_IMAGE546
实施例50: (±)-6-苄基-N4-(3-(4,4-二氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 239145DEST_PATH_IMAGE547
向3-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.1 mg，0.013 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(0.1 mL)中的溶液中加入HCl(在1,4-二氧杂环己烷中的4.0M溶液，200 μL，0.800 mmol)。将混合物在室温下搅拌3.5小时。将混合物在N2气流下蒸发至干，将残余物重新溶解在MeOH(约0.5 mL)中，然后施加到已经用MeOH预润湿的1g SCX2离子交换柱上。将柱用MeOH(2×5 mL)洗脱，然后用2M氨的MeOH溶液(3×5mL)洗脱。合并来自SCX纯化的碱性级分，在N2气流下蒸发，得到黄色玻璃状物; (±)-6-苄基-N4-(3-(4,4-二氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (4.0 mg, 9.29 µmol,69.4%收率)。
Figure 651672DEST_PATH_IMAGE548
实施例51: 6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N 2 -甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 741987DEST_PATH_IMAGE549
将2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(150 mg，0.485 mmol)加入DMF(5 mL)中。加入DIPEA(0.254 mL，1.455 mmol)和HATU(277 mg，0.727 mmol)并将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(1R,5S,6s)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(132 mg，0.970 mmol)并将反应物再搅拌3小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并用NaHCO3溶液(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将样品溶解在1:1 DMSO:MeCN(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(28.5 mg)，为棕色油状物。
Figure 923570DEST_PATH_IMAGE550
实施例52: (S)-6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4 -(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲 基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 113243DEST_PATH_IMAGE551
将(R)-3-(3-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(340 mg，0.616 mmol)加入DCM(5 mL)中，加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将样品于MeOH中加载，并通过在磺酸(SCX，2 g)上的SPE纯化，用MeOH洗脱，然后用2M氨/MeOH洗脱。合并合适的级分并真空蒸发。将粗产物溶于1:1 DMSO:MeCN(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(112 mg)，为棕色油状物。
Figure 13066DEST_PATH_IMAGE552
实施例53: N2-甲基-N4-(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
实施例54: N2-甲基-N4-(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-6-((R*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
Figure 579176DEST_PATH_IMAGE553
将N 2 -甲基-N 4 -(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(30 mg) 进行手性分离。在柱上进行0.5 mL注射，用10％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+0.2％异丙胺)洗脱，流速= 42.5 mL/min，检测：280nm处UV二极管阵列(带宽140 nm ，参考400 nm带宽100 nm)，柱：Chiralcel OD-H (250×30 mm)。将18-20.5分钟的级分合并并标记为峰1，将22-25分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的级分真空浓缩，然后加入EtOH(3×4 mL)中，并转移到配衡的玻璃小瓶中，并在 N2气流下将其吹干。
峰1提供实施例53 (8.7 mg).
Figure 693894DEST_PATH_IMAGE554
峰2提供实施例54 (9.9 mg).
Figure 54468DEST_PATH_IMAGE555
实施例55: 6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4 -((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N 2 -甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 441587DEST_PATH_IMAGE556
将(1R,5S,6s)-6-(2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯 (340 mg, 0.694 mmol)加入DCM (5 mL)，加入TFA(0.5 mL, 6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。再次加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物再搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将样品于MeOH中加载，并通过在磺酸(SCX，2g)上的SPE纯化，用MeOH洗脱，然后用2M氨/ MeOH洗脱。合并合适的级分并真空蒸发，得到粗产物。将粗产物溶于1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，但仍然不纯。将粗产物溶于1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到所需产物(24 mg)，为黄色固体。
Figure 811389DEST_PATH_IMAGE557
实施例56: (R)-6-苄基-N4-(2-(3-氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰 胺
Figure 701984DEST_PATH_IMAGE558
将(R)-3-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (200 mg, 0.401 mmol)溶于DCM (3 mL)中并加入TFA (1 mL)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。真空蒸发溶剂，将残余物溶解在MeOH中，并加载到5g SCX柱上，用MeOH(20mL)洗涤，然后用2M NH3/MeOH洗脱，真空蒸发洗脱液，得到(R)-6-苄基-N4- (2-(3-氟哌啶-3-基)乙基)-N2- 甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(135 mg，0.339 mmol，84％收率)，为无色泡沫。
Figure 561356DEST_PATH_IMAGE559
实施例57: N2-甲基-N4-(3-((S)-吗啉-2-基)丙基)-6-((R*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
Figure 170192DEST_PATH_IMAGE560
将(S)-2-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((R*)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (151 mg, 0.296 mmol) 加入DCM (5 mL)。加入TFA (0.5 mL, 6.49mmol)并将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将样品于MeOH中加载，并通过在磺酸(SCX，1 g)上的SPE纯化，用MeOH洗脱，然后用2M氨/MeOH洗脱。合并合适的级分并真空蒸发。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(36.6 mg)，为黄色凝胶。
Figure 343684DEST_PATH_IMAGE561
实施例58: N4-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-苄基-N2- 甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 354366DEST_PATH_IMAGE562
将6-苄基-N4-((1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (120 mg, 0.342 mmol) 加入DMF (5 mL)。加入乙酰氯 (0.146 mL, 2.055 mmol)和Et3N (0.095 mL, 0.685 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并用水(10 mL)洗涤。有机相经Na2SO4干燥并通过疏水性玻璃料过滤。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并用NaHCO3(10 mL)洗涤。将有机相真空浓缩，得到所需产物 (53 mg)，为棕色油状物。
Figure 322322DEST_PATH_IMAGE563
实施例59: (R)-6-苄基-N4-(2-(4-(2,2-二氟乙基)吗啉-2-基)乙基)-N2-甲基吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 231503DEST_PATH_IMAGE564
将MeCN (1 mL)中的(R)-6-苄基-N2-甲基-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (22 mg, 0.058 mmol)、2-溴-1,1-二氟乙烷 (25.01 mg, 0.173 mmol)、K2CO3(15.90 mg, 0.115 mmol) 密封在微波小瓶中，并在Biotage® Initiator微波中加热至140℃保持2小时。再加入2-溴-1,1-二氟乙烷(25.01 mg，0.173 mmol)，将反应密封并在微波中加热至140℃再保持1小时。将反应物真空浓缩，将残余物加入EtOAc(10 mL)中，用NaHCO3(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(9.3 mg)，为棕色油状物。
Figure 943107DEST_PATH_IMAGE565
实施例60: 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)丙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 808295DEST_PATH_IMAGE566
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(51.9 mg，0.192 mmol)、4-(3-氨基丙基)-1-甲基哌嗪-2-酮(35.0 mg，0.204 mmol)和HATU(96 mg, 0.252 mmol)于DMF(1 mL)中的混合物中加入DIPEA(0.100 mL，0.573 mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时20分钟。再加入DMF(0.20 mL)中的4-(3-氨基丙基)-1-甲基哌嗪-2-酮(11.5 mg，0.067 mmol)，将混合物再搅拌1小时。再加入HATU(28.0 mg，0.074 mmol)。继续搅拌另外30分钟。将混合物静置约65小时，然后将其在室温下再搅拌2.5小时。溶液用DMSO(1 mL)稀释，并通过MDAP(2×1 mL注射，高pH法)直接纯化。将所需级分在N2气流下蒸发，再溶于MeOH(各约2 mL)中并合并。将该溶液在N2气流下蒸发，将残余物真空干燥，得到黄色胶状物; 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(53.2 mg，0.126 mmol，65.4％收率)。
Figure 947152DEST_PATH_IMAGE567
实施例61: 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(3-氧代哌嗪-1-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 530580DEST_PATH_IMAGE568
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(53.2 mg，0.197 mmol)、4-(3-氨基丙基)哌嗪-2-酮(35.3 mg，0.225 mmol)和HATU(89 mg，0.234 mmol)于DMF(1 mL)中的混合物中加入DIPEA(0.100 mL，0.573 mmol)。将混合物在室温下搅拌9小时。在3小时10分钟后，再加入DMF(0.20 mL)中的4-(3-氨基丙基)哌嗪-2-酮(8.9 mg，0.057 mmol)。4小时20分钟后再加入HATU(26.7 mg，0.070 mmol)。将溶液用DMSO稀释(直至总共2 mL)并通过MDAP(2×1 mL注射，高pH法)直接纯化。将所需级分在N2气流下蒸发，再溶于MeOH(各约2 mL)中并合并。将该溶液在N2气流下蒸发，将残余物真空干燥，得到浅黄色玻璃状固体; 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(3-氧代哌嗪-1-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (57.9 mg, 0.141 mmol, 71.8%收率)。
Figure 842613DEST_PATH_IMAGE569
实施例62: (±)-4-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-3,3-二 氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 827886DEST_PATH_IMAGE570
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(97.4 mg，0.360 mmol)、(±)-4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(99.6 mg，0.377 mmol)和HATU(203.6 mg，0.535mmol)于DMF(1.8 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.189 mL，1.081 mmol)。将混合物在室温下搅拌45分钟。反应混合物用MeCN稀释至总体积为3mL，并通过MDAP(3×1 mL注射;甲酸法)直接纯化，合并所需的级分并真空蒸发。将残余物悬浮在DCM中，转移到柏油小瓶中，在N2气流下蒸发溶剂，得到白色松脆的泡沫; (±)-4-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (114.3 mg, 0.221 mmol, 61.4%收率)。
Figure 137645DEST_PATH_IMAGE571
实施例63: N4-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺, 未定义立体中心的非对映异构体的1:1混合物
Figure 208369DEST_PATH_IMAGE572
将(3S)-3-氟-3-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯 (147 mg, 0.28 mmol)加入DCM (5 mL)，加入TFA (0.5 mL, 6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩，得到目标产物(83 mg)，为棕色油状物。
Figure 261776DEST_PATH_IMAGE573
实施例64: 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(2-氧代哌嗪-1-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰 胺, 盐酸盐
Figure 914605DEST_PATH_IMAGE574
向4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (50.2 mg, 0.099 mmol)于1,4-二氧杂环己烷 (1 mL)中的溶液中逐滴加入HCl(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中, 1.0 mL, 4.00 mmol)。将混合物在室温搅拌5小时10分钟。在3小时20分钟后，再加入HCl (4.0M于1,4-二氧杂环己烷中, 0.2 mL, 0.800 mmol)。将混合物在N2气流下蒸发，并将残余物真空干燥，得到黄色固体(48.6 mg)。将其用乙醚(2×1mL)研磨，将残余物在空气中干燥，然后真空干燥，得到黄色固体; 6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(2-氧代哌嗪-1-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺, 盐酸盐 (39.3 mg, 0.088 mmol, 89%收率)。
Figure 395265DEST_PATH_IMAGE575
实施例65: 6-苄基-N4-((1R,5S,6s)-3-(2,2-二氟乙基)-3-氮杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 687706DEST_PATH_IMAGE576
将6-苄基-N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (27 mg, 0.077 mmol)、K2CO3 (21.30 mg，0.154 mmol)、DMF(1 mL)和2-溴-1,1-二氟乙烷(33.5 mg，0.231 mmol)加入微波小瓶中。将反应容器密封并在Biotage® Initiator微波中加热至140℃保持1小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入乙酸乙酯(10 mL)中并使用NaHCO3 (10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(12 mg)，为棕色油状物。
Figure 544804DEST_PATH_IMAGE577
实施例66: (±)-6-苄基-N4-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4- 二甲酰胺, 盐酸盐
Figure 239090DEST_PATH_IMAGE578
向(±)3-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(119.6 mg，0.232 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(2 mL)中的溶液中加入HCl(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，2.3 mL，9.20 mmol)。将混合物在室温下搅拌2.25小时。将混合物在N2气流下蒸发至干，并将残余物用乙醚(2×4 mL)研磨。将固体物质真空干燥，得到乳白色固体; (±)-6-苄基-N4-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，盐酸盐(110.6 mg, 0.244 mmol)。
Figure 952968DEST_PATH_IMAGE579
实施例67: (±)-6-苄基-N4-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4- 二甲酰胺, 盐酸盐
Figure 998285DEST_PATH_IMAGE580
向(±)-4-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(103.5 mg，0.200 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(2 mL)中的溶液中加入HCl(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，2.0 mL，8.00 mmol)。将混合物在室温下搅拌2.25小时。将混合物在N2气流下蒸发至干，并将残余物用乙醚(2×4 mL)研磨。将固体物质真空干燥，得到乳白色固体; (±)-6-苄基-N4-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，盐酸盐(93.4 mg, 0.206 mmol)。
Figure 393494DEST_PATH_IMAGE581
实施例68: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(4-氰基苄基)-N2- 甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 942287DEST_PATH_IMAGE582
向2-(4-氰基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(57 mg，0.193 mmol)于DMF(0.8mL)中的溶液中加入HATU(110 mg，0.290 mmol)，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(40 mg，0.295 mmol)和DIPEA(0.169 mL，0.965 mmol)。将得到的反应混合物在室温下在空气中搅拌1小时。通过MDAP(甲酸法)纯化反应混合物，并将含有目标产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。用DCM(2×20 mL)萃取有机层，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(4-氰基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (33 mg, 0.079 mmol, 40.9%收率)，为浅粉红色固体。
Figure 30329DEST_PATH_IMAGE583
实施例69: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-(4-甲基苄 基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 107482DEST_PATH_IMAGE584
将2-(4-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(50 mg，0.176 mmol)加入DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.092 mL，0.528 mmol)和HATU(100 mg，0.264 mmol)，将反应物在室温下搅拌10分钟。加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(35.8 mg，0.264mmol)，将反应物再搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并使用NaHCO3(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将样品溶解在1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(9.8 mg)，为棕色玻璃状物。
Figure 306382DEST_PATH_IMAGE585
实施例70: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S)-羟基(苯基) 甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例71: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R)-羟基(苯基) 甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 709681DEST_PATH_IMAGE586
通过手性HPLC纯化(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(15 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(1.5 mL)中。注射：将1.5 mL溶液注射到柱上(30％EtOH/庚烷，流速= 20 mL/min，检测波长= 215 nm，柱2 cm×25 cm (R：R) Whelk-Ol，序列号49788)。将17-19.5分钟的级分合并并标记为峰1。将20.5-24分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的级分真空浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例70 (7 mg)。
Figure 968624DEST_PATH_IMAGE587
收集对应于峰2的级分，得到 实施例71 (7 mg)。
Figure 722954DEST_PATH_IMAGE588
实施例72: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-(3-甲基苄 基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 522282DEST_PATH_IMAGE589
将2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (50 mg, 0.176 mmol)加入DMF(5 mL)中。加入DIPEA(0.092 mL，0.528 mmol)、HATU(100 mg，0.264 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(35.8 mg，0.264 mmol)，并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入EtOAc(10 mL)中并使用NaHCO3(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将样品溶解在1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(23 mg)，为白色粉末。
Figure 45668DEST_PATH_IMAGE590
实施例73: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-氰基苄基)-N2- 甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 475512DEST_PATH_IMAGE591
向2-(3-氰基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (47 mg, 0.159 mmol) 于DMF(0.8 mL) 中的溶液中加入HATU (91 mg, 0.239 mmol)，接着加入 (1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(40 mg, 0.295 mmol)和DIPEA (0.139 mL, 0.796 mmol)。将得到的反应混合物在室温下在空气中搅拌1小时。通过MDAP(甲酸法)纯化反应混合物。含有目标产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。萃取有机层(2×20 mL)，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(3-氰基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (37 mg, 0.088 mmol, 55.6%收率)，为白色固体。
Figure 451558DEST_PATH_IMAGE592
实施例74: (R)-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)-N4-(2-(吗啉-2-基)乙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺
Figure 992261DEST_PATH_IMAGE593
将(R)-2-(2-(2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(50 mg，0.101 mmol)加入DCM(5 mL)中。加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。然后将反应物真空浓缩。将粗产物于MeOH中加载，并使用MeOH通过在磺酸(SCX, 1g)上的SPE纯化，然后使用2M氨/MeOH。合并合适的级分并真空蒸发。将粗产物于最少的DCM中施加到10g SNAP二氧化硅柱上，通过快速色谱法纯化，用0-100％(3:1EtOAc:EtOH)洗脱。使用0-100％(10％2M NH3/MeOH)/DCM洗脱（extended）柱子。合并合适的级分并真空浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到所需产物(15 mg)，为黄色玻璃状物。
Figure 635732DEST_PATH_IMAGE594
实施例75: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(2-甲氧基苄基)- N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 783948DEST_PATH_IMAGE595
向2-(2-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(47.8 mg，0.159 mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(23.40 mg，0.173 mmol，可商购自ManchesterOrganics)和HATU(75 mg，0.197 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.111 mL，0.637 mmol)。将溶液在室温下搅拌30分钟，之后在N2气流下蒸发挥发物，得到粘稠的深橙色固体。将其重新溶解于约1:1的DMSO:DMF(2 mL)中，并通过MDAP(2×1 mL注射，高pH法)直接纯化。将所需级分在N2气流下蒸发，再溶于MeOH(各约2 mL)中并合并。将该溶液在N2气流下蒸发，将残余物真空干燥，得到白色固体; N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(2-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (49.1 mg, 0.129mmol, 81%收率)。
Figure 512869DEST_PATH_IMAGE596
实施例76: (+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯 基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 591684DEST_PATH_IMAGE597
向2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(47.9 mg，0.167 mmol)于DMF(0.7 mL)中的溶液中加入HATU(95 mg，0.251 mmol)，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺(25 mg，0.252 mmol)和DIPEA(0.10 mL，0.573 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。通过MDAP(高pH法)直接纯化反应混合物。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (18.4 mg, 0.048 mmol, 28.4%收率)，为无色油状物。
Figure 89661DEST_PATH_IMAGE598
实施例77: (+/-)-2-(3-(2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基) 丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 595729DEST_PATH_IMAGE599
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(80 mg，0.266 mmol)溶于DMF(2 mL)中，然后加入HATU(152 mg，0.400 mmol)和Et3N(0.074 mL，0.533 mmol)，将混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(65.1 mg，0.266mmol)并将溶液搅拌2小时。通过MDAP(高pH法)直接纯化得到的混合物，得到2-(3-(2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (85 mg, 0.161mmol, 60.6%收率)，为浅黄色玻璃状物。
Figure 874263DEST_PATH_IMAGE600
实施例78: (±)-3-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-4,4-二 氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 756769DEST_PATH_IMAGE601
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(99.0 mg，0.366 mmol)、(±)-3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(99.7 mg，0.377 mmol)和HATU(202.9 mg，0.534mmol)于DMF(1.8 mL)中的溶液中加入DIPEA(0.192 mL，1.099 mmol)。将混合物在室温下搅拌45分钟。反应混合物用MeCN稀释至总体积为3mL，并通过MDAP(3×1 mL注射;甲酸法)直接纯化，合并所需的级分并真空蒸发。将残余物悬浮在DCM中，转移到柏油小瓶中，在N2气流下蒸发溶剂，得到白色松脆的泡沫; (±)-(3-(2-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(131.5 mg，0.255 mmol，69.5％收率)。
Figure 109253DEST_PATH_IMAGE602
实施例79– 87:
以与前述实施例类似的方式制备实施例79 – 87。
Figure 51801DEST_PATH_IMAGE603
Figure 489735DEST_PATH_IMAGE604
实施例88: N2-甲基-N4-(3-((S)-吗啉-2-基)丙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
Figure 723402DEST_PATH_IMAGE605
将(2S)-2-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯 (108 mg, 0.21 mmol)加入DCM (5 mL)中。加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将样品于甲醇中加载，通过在磺酸(SCX，1g)上的SPE纯化，用甲醇洗脱，然后用2M氨/甲醇洗脱。合并合适的级分并真空蒸发。将样品溶解在1:1 MeCN:DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物(32 mg)，为透明油状物。
Figure 195971DEST_PATH_IMAGE606
实施例89: 6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双 环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 43842DEST_PATH_IMAGE607
向2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (67mg, 0.11 mmol, 50% wt.) 于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.06 mL, 0.344mmol)，接着加入HATU (61.6 mg, 0.16 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐 (21.96 mg, 0.162 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌2小时。通过MDAP(高pH法)直接纯化反应混合物。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (15 mg, 0.036 mmol, 34%收率)，为无色油状物。
Figure 969072DEST_PATH_IMAGE608
实施例90: N4-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-(3-甲基苄 基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 193380DEST_PATH_IMAGE609
将(1R,5S,6s)-6-(2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯 (295 mg, 0.635 mmol)加入DCM (5 mL)。加入TFA (0.5mL, 6.49 mmol)并将反应物在室温下搅拌3小时。将反应物真空浓缩。将样品于甲醇中加载，通过在磺酸(SCX，1 g)上的SPE纯化，用甲醇洗脱，然后用2M氨/甲醇洗脱。合并合适的级分并真空蒸发。将样品溶解在1:1 MeCN:DMSO(3 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。将溶剂真空蒸发，得到所需产物(68 mg)，为白色固体。
Figure 520456DEST_PATH_IMAGE610
实施例91: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((3-氟-1H-吲哚- 4-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 867124DEST_PATH_IMAGE611
将2-((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (154 mg, 0.471mmol)加入DMF (5 mL)。加入DIPEA (0.247 mL, 1.41 mmol)、HATU (268 mg, 0.71 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐 (96 mg, 0.706 mmol)并将反应物搅拌2小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入乙酸乙酯(15 mL)中并用碳酸氢钠水溶液(15mL)和盐水(2×15 mL)萃取。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到SNAP ULTRA二氧化硅柱(25 g)上，通过快速色谱法纯化，用5-50％(3:1 EtOAc:EtOH)/环己烷洗脱。合并合适的级分并真空浓缩，得到 N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((3-氟-1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (96 mg, 0.235 mmol, 50%收率)。
Figure 279651DEST_PATH_IMAGE612
实施例92: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(3-甲氧基苯 基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 42071DEST_PATH_IMAGE613
向2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (81 mg, 0.142mmol, 55% wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.06 mL, 0.344 mmol)，接着加入HATU (85 mg, 0.224 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐 (30mg, 0.22 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌2小时。通过MDAP(高pH法)直接纯化反应混合物。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (34 mg, 0.08 mmol,58%收率)，为无色油状物。
Figure 223653DEST_PATH_IMAGE614
实施例93: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((2-氰基-1H-吲 哚-4-基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 491955DEST_PATH_IMAGE615
在密封的微波小瓶中，将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲腈(27.0 mg, 0.10 mmol)、N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.1]己-6-基)-6-(氯甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(30.9 mg，0.10 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II) (11.0 mg，0.02 mmol)和碳酸钾(29.0 mg，0.21 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(0.80 mL)和水(0.40 mL)中的混合物在微波反应器中在80℃下加热30分钟。将反应混合物通过2.5 g硅藻土柱过滤，并用乙酸乙酯(约10 mL)洗涤柱。向滤液中加入水(10 mL)并分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×10 mL)萃取水层。有机相通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，将滤液真空蒸发，得到棕色胶状物。将其重新溶解于DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。在氮气流下蒸发合适的级分，并再溶于甲醇(约2 mL)和二氯甲烷(约2 mL)中。在氮气流下蒸发该溶液，将残余物真空干燥，得到N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((2-氰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (8.7 mg, 0.02mmol, 21%收率)，为白色固体。
Figure 391778DEST_PATH_IMAGE616
实施例94: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((3-氰基-1H-吲 哚-4-基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 957888DEST_PATH_IMAGE617
在密封的微波小瓶中，将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-3-甲腈(80 wt％，23.8 mg，0.07 mmol)、N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (20.6 mg, 0.07 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II) (8.9 mg，0.01 mmol)和碳酸钾(18.2 mg，0.13 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(0.50 mL)和水(0.25 mL)中的混合物在微波反应器中在80℃下加热30分钟。将反应混合物通过2.5g硅藻土柱过滤，并用乙酸乙酯(约10 mL)洗涤柱。向滤液中加入盐水(10 mL)并分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×10 mL)萃取水层。合并有机层并用水(2×10mL)洗涤。有机相通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤，将滤液真空蒸发，得到棕色固体。将其重新溶解于DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。将所需级分在氮气流下蒸发，并再溶于甲醇(约2 mL)和二氯甲烷(约2 mL)中。将该溶液在氮气流下蒸发，并将残余物真空干燥，得到N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((3-氰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (14.0 mg, 0.03 mmol, 51%收率)，为白色固体。
Figure 993977DEST_PATH_IMAGE618
实施例95: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-(1-苯基丙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 620131DEST_PATH_IMAGE619
向2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基丙基)异烟酸 (80 mg, 0.20 mmol)于DMF(0.7 mL) 中的溶液中加入DIPEA (0.10 mL, 0.573 mmol)，接着加入HATU (115 mg,0.302 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐 (40.9 mg, 0.30 mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌2小时。通过MDAP(高pH法)直接纯化反应混合物。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-(1-苯基丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (26 mg, 0.07 mmol, 32%收率)，为无色油状物。
Figure 69567DEST_PATH_IMAGE620
实施例96: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((R*)-1- 苯基丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例97: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((S*)-1- 苯基丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 173789DEST_PATH_IMAGE621
通过手性HPLC纯化实施例95 (24 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(1 mL)中。注射：将1 mL溶液注入柱中(10％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100, 柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号＃ADH13231)。总注射次数= 1。将25-28.5分钟的级分合并并标记为峰1。将31-36分钟的级分合并并标记为峰2。来自峰2的级分需要如上所述进一步纯化以提高纯度。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例96 (10 mg)。
Figure 329964DEST_PATH_IMAGE622
收集对应于峰2的级分，得到实施例97 (11 mg)。
Figure 127018DEST_PATH_IMAGE623
实施例98: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((1-(2-羟乙基)- 1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 735854DEST_PATH_IMAGE624
将2-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (129mg, 0.37 mmol)加入DMF (5 mL)。加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(74.2 mg, 0.548 mmol)、HATU (208 mg, 0.548 mmol)和DIPEA (0.191 mL, 1.10 mmol)并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将样品溶解在1:1 MeCN:DMSO(3 mL)中并通过MDAP(高pH法)纯化。真空蒸发溶剂，得到所需产物, N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(43 mg, 0.099 mmol, 27%收率)。
Figure 909347DEST_PATH_IMAGE625
实施例99: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((3-(2,2, 2-三氟乙酰基)-1H-吲哚-4-基)甲基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 730148DEST_PATH_IMAGE626
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰基)-1H-吲哚-4-基)甲基)异烟酸(550 mg，1.36 mmol)悬浮于DCM(20 mL)中并加入Et3N (0.473 mL，3.39 mmol)，得到澄清溶液。加入HATU(1032 mg，2.71 mmol)，将所得悬浮液搅拌20分钟，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(368 mg，2.71 mmol)并将混合物搅拌3小时，得到浓稠的悬浮液。将其真空蒸发，将残余物与水(20 mL)一起搅拌2小时，然后过滤所得悬浮液，用水(10 mL)和乙醚(10 mL)洗涤，得到浅黄色不纯固体。通过MDAP(甲酸法)纯化100 mg所述固体，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰基)-1H-吲哚-4-基)甲基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (45 mg, 0.093 mmol, 7%收率)，为无色固体。
Figure 698104DEST_PATH_IMAGE627
实施例100 : (±)-6-苄基-N4-(3-(3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2, 4-二甲酰胺盐酸盐
Figure 794236DEST_PATH_IMAGE628
向4-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(46.5 mg，0.09 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(15 mL)中的溶液中加入盐酸(4.0M的于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，0.90 mL，3.60 mmol)。将混合物在室温下搅拌5.75小时。5小时后，加入另外的盐酸(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，1.0 mL，4.00 mmol)并继续搅拌另外50分钟。将混合物在氮气流下蒸发至干，将粘稠的黄色残余物在乙醚(3×5 mL)中研磨，每次滗去上清液。将固体残余物以乙醚(3 mL)中的悬浮液转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到(±)-6-苄基-N4-(3-(3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐 (39.4 mg, 0.08 mmol, 96%收率)，为浅黄色固体。
Figure 240260DEST_PATH_IMAGE629
实施例101: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲 基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 371027DEST_PATH_IMAGE630
将甲醇(3 mL)中的N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (300 mg, 0.43 mmol, 55% wt.)加入微波小瓶中。将其在60℃下加热45分钟。反应混合物在75℃下重新经受微波40分钟。反应混合物在85℃下重新经受微波3小时45分钟。将反应混合物真空浓缩。通过SiO2上的快速色谱法进行纯化(Biotage SNAP 10g，用40至100％乙酸乙酯/环己烷洗脱)。合并所需的级分并真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (52 mg, 0.12 mmol, 29%收率)，为无色油状物。
Figure 572202DEST_PATH_IMAGE631
实施例102: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-1-(3-甲氧 基苯基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例103: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-1-(3-甲氧 基苯基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 155630DEST_PATH_IMAGE632
通过手性HPLC纯化实施例92 (30 mg)。将外消旋物溶解在EtOH (2 mL)中，然后用一体积的流动相稀释。注射：经rheodyne进样阀进行0.4 mL手动注射。柱：Chiralcel OJ-H(250 x 30 mm)。流速：42.5 mL/min (54巴)。检测：280 nm处的UV二极管阵列(带宽140 nm，参考400 nm带宽100 nm)。流动相A：含有0.2％v/v异丙胺的庚烷。流动相B：含有0.2％v/v异丙胺的乙醇。等度方法 - 95:5 流动相A：流动相B。运行时间-55分钟。将39-43分钟的级分合并并标记为峰1。将45-51分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例102 (10 mg)。
Figure 405345DEST_PATH_IMAGE633
收集对应于峰2的级分，得到实施例103 (20 mg)。
Figure 390619DEST_PATH_IMAGE634
实施例104: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-甲氧基(苯 基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例105: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯 基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 700378DEST_PATH_IMAGE635
将2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.42 g，1.23 mmol)溶于二氯甲烷(10 mL)，加入N 1,N 1,N 8,N 8-四甲基萘-1,8-二胺 (0.789 g, 3.68 mmol)，然后加入三甲基氧鎓四氟硼酸盐(0.544 g，3.68 mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。加入另外的三甲基氧鎓四氟硼酸盐(0.544 g，3.68 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌24小时。将溶液在0.5M HCl(50 mL)和EtOAc(50 mL)之间分配。将有机层干燥并真空蒸发。然后将残余物在EtOAc(20 mL)和0.5M NaOH溶液之间分配，弃去有机层并用2M HCl酸化水层。然后将其用EtOAc(2×20 mL)萃取，将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到米色固体。将粗物质悬浮在DCM(10 mL)中并加入Et3N(0.513 mL，3.68 mmol)、HATU(0.700 g，1.84 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(0.249 g，1.84 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌1小时。将溶液用水(2×10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，残余物通过25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-25％EtOH/EtOAc洗脱。将含产物的级分真空蒸发，得到浅黄色胶状物(70mg)。
将其通过手性HPLC纯化。将该物质溶于EtOH(2 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上(50％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测波长= 215nm，4. Ref 550, 100，柱30 mm x 25 cm Chiralpak IC (5 µm)，批号 IC10028-01)。总注射次数= 2。将10.5-12分钟的级分合并并标记为峰1。将13-15分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例104 (18 mg)。
Figure 771102DEST_PATH_IMAGE636
收集对应于峰2的级分，得到实施例105 (22 mg)。
Figure 637558DEST_PATH_IMAGE637
实施例106: (+/-)-6-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环 [3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 477338DEST_PATH_IMAGE638
将2-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(450 mg，1.39 mmol)加入DMF(15 mL)中。加入DIPEA(0.73 mL，4.18 mmol)、HATU(794 mg，2.09 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(283 mg，2.09 mmol)，将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入乙酸乙酯(20 mL)中并使用碳酸氢钠水溶液(2×20mL)和盐水(20 mL)萃取。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩。将粗产物于最少的DCM中施加到SNAP ULTRA二氧化硅柱(25 g)上，通过快速色谱法纯化，用5-40％(3:1 EtOAc:EtOH)/环己烷洗脱。合并合适的级分，真空浓缩，得到6-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (530mg, 1.310 mmol, 94%收率)。
Figure 957998DEST_PATH_IMAGE639
实施例107: (+/-)-6-苄基- N 2-甲基-N 4-(3-(2-甲基吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
Figure 250439DEST_PATH_IMAGE640
将(+/-)-2-(3-(2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酰胺基)丙基)-2-甲基吗啉-4-甲酸叔丁酯 (70 wt%, 91.6 mg, 0.13 mmol) 加入二氯甲烷(4 mL)并加入TFA (0.5 mL,6.49 mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物真空浓缩。将残余物加入二氯甲烷(4mL)中，并加入TFA(0.5 mL，6.49 mmol)，并将反应物在室温下搅拌90分钟。将反应物真空浓缩，并通过MDAP(高pH法)纯化。将合适的级分真空浓缩，得到(+/-)-6-苄基-N 2-甲基-N 4-(3-(2-甲基吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (37.3 mg, 0.09 mmol, 48%收率)，为乳白色固体。
Figure 107536DEST_PATH_IMAGE641
实施例108: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(吡啶-2-基) 甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 864140DEST_PATH_IMAGE642
向N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (68 mg, 0.18 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中逐滴添加亚硫酰氯 (0.05 mL, 0.69 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入亚硫酰氯(0.4mL)，将所得混合物搅拌1小时，然后真空浓缩，得到粗制的N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(97 mg，0.13mmol，76％收率，53％纯度)，其以粗品获得。
将甲醇(1.5 mL)中的N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(97 mg，0.14 mmol，55％wt.)置于微波小瓶中。将其在90℃下加热1小时。反应混合物在100℃下重新经受微波30分钟。反应混合物在110℃下重新经受微波20分钟。加入DMAP(3.4 mg，0.03 mmol)，反应混合物在110℃下重新经受微波20分钟。反应混合物在110℃下重新经受微波20分钟。通过MDAP(高pH法)进行纯化以回收未反应的氯化物。合并所需的级分并真空浓缩，得到 N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(氯(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (15 mg, 0.04mmol, 25%收率, 90% 纯度)，为无色油状物。
Figure 515701DEST_PATH_IMAGE643
实施例109: N 4-(2-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)乙基)-6-苄基-N 2- 甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 561017DEST_PATH_IMAGE644
向6-苄基-N 4-(2-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)乙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (65 mg, 0.12 mmol)于乙醇(3 mL)中的悬浮液中加入水合肼(20.0 μL，0.41 mmol)。将该悬浮液在室温下搅拌22.5小时并在40℃下再搅拌26小时。在总共41小时后，加入另外的水合肼(20.0 μL，0.41 mmol)。48.5小时后，再加入乙醇(3 mL)，将混合物在室温下再搅拌2天。过滤反应混合物，并用乙醇(约20 mL)洗涤柱。将滤液真空蒸发。将其重新溶解于DMSO(1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，并将残余物真空干燥，得到N 4-(2-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)乙基)-6-苄基-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (24.0 mg, 0.06 mmol, 49%收率)，为无色胶状物。
Figure 956227DEST_PATH_IMAGE645
实施例110: 6-((S*)-1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环 [3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例111: 6-((R*)-1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环 [3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 505020DEST_PATH_IMAGE646
通过手性HPLC纯化实施例106 (486 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(50 mL)中。注射：通过自动进样器将1.5 mL溶液注射到柱上(35％EtOH/庚烷，流速= 20 mL/min，检测：280 nm处的UV二极管阵列(带宽140 nm，参考400 nm带宽100 nm)，柱20 mm x 25 cm RegisWhelk O1 [R,R] (5 µm))。将22-26分钟的级分合并并标记为峰1。将28-33分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后使用EtOH转移至称重的烧瓶中，并在氮气流下将样品吹至干燥。
收集对应于峰1的级分，得到实施例110 (158 mg)。
Figure 406111DEST_PATH_IMAGE647
收集对应于峰2的级分，得到实施例111 (173 mg)。
Figure 673144DEST_PATH_IMAGE648
实施例112: (+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(2-甲 氧基苯基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 606465DEST_PATH_IMAGE649
向(+/-)-2-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (52.3 mg,0.17 mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐 (29.5 mg, 0.22 mmol)和HATU (82.2 mg, 0.22 mmol) 于DMF (1.5 mL)中的混合物中加入DIPEA (0.120 mL, 0.69mmol)。将混合物在室温下搅拌2.5小时，然后将其用DMSO稀释并直接通过MDAP(甲酸法)纯化。合并所需的级分并真空蒸发，得到(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(2-甲氧基苯基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (53.5 mg, 0.14 mmol,81%收率)，为浅黄色胶状物。
Figure 275344DEST_PATH_IMAGE650
实施例113: N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-苄基-N2- 甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 534287DEST_PATH_IMAGE651
向乙醇(6 mL)中的6-苄基-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (0.508 g, 0.94 mmol)中加入水合肼(0.184 mL，3.75 mmol)。将混合物在室温下搅拌21.5小时，然后用另外的乙醇(20mL)稀释，并在室温下再搅拌67.5小时。将混合物在55℃加热4.5小时，然后冷却，然后过滤。真空蒸发溶剂，残余物用甲醇(约20 mL)稀释，然后在氮气流下蒸发。将残余物溶于DMSO(约6 mL)中并通过MDAP直接纯化(2×3 mL注射;高pH法)。所需级分的溶剂在氮气流下蒸发。将残余物溶解在甲醇中并合并，然后在氮气流下蒸发溶剂，得到黄色油状物，将其真空干燥。残余物用乙醚(2×5 mL)研磨，每次倾析掉母液。将固体在氮气流和真空下干燥，得到N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-苄基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(0.244 g, 0.59 mmol, 63%收率)，为乳白色固体。
Figure 85354DEST_PATH_IMAGE652
实施例114: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(2-甲氧基-1-苯 基乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 87945DEST_PATH_IMAGE653
向2-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(73 mg，0.12 mmol)于DMF(0.8mL)中的溶液中加入HATU(66.2 mg，0.174 mmol)，然后加入DIPEA (0.05 mL，0.29mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(23.6 mg，0.17 mmol)。将所得反应混合物搅拌过周末。将反应混合物在饱和LiCl溶液(10 mL)和EtOAc(10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外份的EtOAc(3×10 ml)萃取。合并的有机相用疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩。将其通过SiO2上的快速色谱法纯化(Biotage SNAP 10 g柱，洗脱液1至100％EtOAc/环己烷，0至100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷)。将合并的所需级分真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(2-甲氧基-1-苯基乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (40.9 mg, 0.10 mmol, 85%收率)。
Figure 611330DEST_PATH_IMAGE654
实施例115: (+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6- (1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 775595DEST_PATH_IMAGE655
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)异烟酸(74 mg，0.22mmol)溶解在DMF(0.8 mL)中。加入DIPEA(0.190 mL, 1.09 mmol)，然后加入HATU(120 mg,0.32 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(48 mg, 0.35 mmol)并将反应混合物在氮气下搅拌2.5小时。通过MDAP(高pH法)纯化反应混合物。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-(1-(2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (48 mg, 0.10 mmol, 47%收率)。
Figure 17221DEST_PATH_IMAGE656
实施例116: (+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(2- 甲氧基苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 370973DEST_PATH_IMAGE657
在约0℃在氮气下向(2-甲氧基苯基)溴化镁(1.0M于THF中，1.4 mL，1.40 mmol)的搅拌溶液中逐滴加入N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (99.3 mg, 0.34 mmol)于无水四氢呋喃(3 mL)中的悬浮液。将得到的棕色悬浮液在0℃在氮气下搅拌3.5小时。2.5小时后，滴加另外的(2-甲氧基苯基)溴化镁(1.0M于THF中，0.50 mL，0.50 mmol)。向反应混合物中逐滴加入饱和氯化铵水溶液(2 mL)和水(2 mL)，将混合物在0℃下再搅拌5分钟。分离各层，水相用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取。合并有机层并通过装有疏水性玻璃料的柱筒过滤。在氮气流下蒸发滤液。将其重新溶解于DMSO(2 mL)中，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。合并所需的级分并真空蒸发，然后转移到甲醇(约5 mL)中，在氮气流下蒸发该溶液，将残余物真空干燥，得到(+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(2-甲氧基苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(56.4 mg, 0.14 mmol, 41%收率)，为橙色固体。
Figure 748864DEST_PATH_IMAGE658
实施例117: 3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰 胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体的混合物
Figure 349610DEST_PATH_IMAGE659
向(S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (64.5 mg, 0.23 mmol)和HATU (104.4 mg, 0.28 mmol)的混合物中加入(±)-4-(3-氨基丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (67.8 mg, 0.24 mmol)于DMF (1.8 mL)中的溶液。加入DIPEA(0.119 mL，0.68mmol)并将混合物在室温下搅拌2.5小时。将混合物在氮气流下浓缩，并用乙腈稀释至总体积为2mL，通过MDAP(2×1 mL注射;甲酸法)直接纯化，合并所需的级分并真空蒸发。将残余物再溶解于二氯甲烷/甲醇的2:1混合物(~10 mL)中，转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到3,3 - 二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(88.7 mg，0.16 mmol，72％收率)，为无色玻璃状物。
Figure 875269DEST_PATH_IMAGE660
实施例118: 3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰 胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体的混合物
Figure 219663DEST_PATH_IMAGE661
向(S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (66.0 mg, 0.23 mmol)和HATU (105.0 mg, 0.28 mmol)的混合物中加入(±)-4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (74.7 mg, 0.28 mmol)于DMF (1.8 mL)中的溶液。加入DIPEA(0.122 mL，0.70mmol)并将混合物在室温下搅拌2.5小时。将混合物在氮气流下浓缩，并用乙腈稀释至总体积为2mL，通过MDAP(2×1 mL注射;甲酸法)直接纯化，合并所需的级分并真空蒸发。将残余物再溶解于二氯甲烷/甲醇的2:1混合物(~10 mL)中，转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(79.6 mg, 0.15 mmol, 65%收率)，为无色玻璃状物。
Figure 717640DEST_PATH_IMAGE662
实施例119: 4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰 胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体的混合物
Figure 223708DEST_PATH_IMAGE663
向(S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (66.4 mg, 0.234 mmol)和HATU (108.0 mg, 0.28 mmol)的混合物中加入(±)-3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯 (52.4 mg, 0.20 mmol)于DMF (1.8 mL)中的溶液。加入DIPEA(0.122 mL，0.70mmol)并将混合物在室温下搅拌2.5小时。将混合物在氮气流下浓缩，并用乙腈稀释至总体积为2mL，通过MDAP(2×1 mL注射;甲酸法)直接纯化，合并所需的级分并真空蒸发。将残余物再溶解于二氯甲烷/甲醇的2:1混合物(~10 mL)中，转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(63.7 mg, 0.12 mmol, 51%收率)，为无色玻璃状物。
Figure 312362DEST_PATH_IMAGE664
实施例167: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-2-甲氧基- 1-苯基乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例120: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-2-甲氧基- 1-苯基乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 194868DEST_PATH_IMAGE665
通过手性HPLC纯化实施例114 (35 mg)。将外消旋物溶于EtOH(2 mL)和庚烷(1mL)中。注射：将1 mL溶液注入柱中(10％EtOH/庚烷，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100，柱30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm)，批号#ODH 11158-01)。总注射次数= 4。将18-20.6分钟的级分合并并标记为峰1。将20.6-21.2分钟的级分合并并标记为混合物，将21.2-24.6分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的混合级分真空浓缩，并使用上述方法再处理。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例167 (10 mg)。
Figure 547352DEST_PATH_IMAGE666
收集对应于峰2的级分，得到实施例120 (8 mg)。
Figure 37370DEST_PATH_IMAGE667
实施例121: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-羟基(2-甲 氧基苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例122: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-羟基(2-甲 氧基苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 350671DEST_PATH_IMAGE668
通过手性HPLC纯化实施例116 (48 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(1 mL)中。注射：将1 mL溶液注射到柱上(20％EtOH/庚烷，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref550, 100，柱30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm)，批号ODH11158-01)。总注射次数=1。将10.5-13分钟的级分合并并标记为峰1。将15.5-20分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例121 (17.1 mg)。
Figure 36867DEST_PATH_IMAGE669
收集对应于峰2的级分，得到实施例122 (14.4 mg)。
Figure 243857DEST_PATH_IMAGE670
实施例123: N4-(2-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺, 盐酸盐, 非对映异构体1
Figure 419624DEST_PATH_IMAGE671
向3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体1 (31.8 mg, 0.06 mmol, 中间体203)于1,4-二氧杂环己烷 (0.5 mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，1.0 mL，4.00 mmol)。将混合物在室温下搅拌5小时。将混合物在氮气流下蒸发至干，残余物用乙醚(2×3 mL)研磨，每次滗去上清液。将固体残余物在氮气流下干燥，然后真空干燥，得到N4-(2-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体1 (27.8 mg, 0.06 mmol, 99%收率)，为乳白色固体。
Figure 157904DEST_PATH_IMAGE672
实施例124: N4-(2-((R*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺, 盐酸盐, 非对映异构体2
Figure 382212DEST_PATH_IMAGE673
向(R*)-3,3-二氟-4-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体2 (32.8 mg, 0.06 mmol, 中间体204)于1,4-二氧杂环己烷 (0.5 mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，1.0 mL，4.00 mmol)。将混合物在室温下搅拌5小时。将混合物在氮气流下蒸发至干，残余物用乙醚(2×3 mL)研磨，每次滗去上清液。将固体残余物在氮气流下干燥，然后真空干燥，得到N4-(2-((R*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体2 (29.1 mg, 0.06 mmol)，为乳白色固体。
Figure 709288DEST_PATH_IMAGE674
实施例125: (±)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(1-甲酰 基二氢吲哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 993639DEST_PATH_IMAGE675
向(±)-2-(1-(1-甲酰基吲哚-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(59.4mg，0.168 mmol)和HATU(99.8 mg，0.26 mmol)的混合物中加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(26.2 mg，0.19 mmol)和DMF(0.8 mL)。加入DIPEA(0.088 mL，0.50mmol)并将混合物在室温下搅拌90分钟。再加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(17.2 mg，0.13 mmol)，继续搅拌30分钟，然后再加入HATU(69.5 mg，0.18 mmol)和DIPEA(0.060 mL，0.34 mmol)并继续搅拌另外45分钟。静置15小时后，将混合物在氮气流下浓缩，用乙腈稀释至总体积为2mL，并通过MDAP(2×1 mL注射;甲酸法)直接纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，将残余物各自再溶于1:1 甲醇/二氯甲烷(~6mL)中，合并并转移至柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，并将残余物真空干燥，得到(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(1-甲酰基二氢吲哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(64.0 mg, 0.15 mmol, 88%收率)，为乳白色固体。
Figure 202903DEST_PATH_IMAGE676
实施例126: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-1-(2-甲氧 基苯基)乙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例127: N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-1-(2-甲氧 基苯基)乙基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 230902DEST_PATH_IMAGE677
通过手性HPLC纯化实施例112 (43 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(5 mL)中。注射：将0.25 mL溶液注射到柱上(25％EtOH/庚烷，流速= 20 mL/min，检测波长= 280 nm，4. Ref400, 100，21.1 mm x 25 cm (R-R) Whelk O-1 (5 µm))。注射总数= 20。将24-27分钟的级分合并并标记为峰1。将29-34分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例126 (16.9 mg)。
Figure 412485DEST_PATH_IMAGE678
收集对应于峰2的级分，得到实施例127 (18.0 mg)。
Figure 867737DEST_PATH_IMAGE679
实施例128: (±)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(二氢吲 哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 515362DEST_PATH_IMAGE680
向(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(1-甲酰基二氢吲哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (52.7 mg, 0.12 mmol)于水(1 mL)和甲醇(2mL)中的溶液中加入氢氧化钠(106.8 mg，2.67 mmol)并在室温下搅拌30小时。在氮气流下从混合物中蒸发甲醇，加入水(3 mL)，用乙酸乙酯(4×5 mL)萃取含水混合物。将合并的有机萃取物通过装有疏水性玻璃料的柱筒干燥，并在氮气流下蒸发溶剂。将残余物重新溶解在甲醇(1 mL)中并通过MDAP(1mL注射;高pH法)纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，将残余物重新溶解在二氯甲烷(~6mL)中，转移到柏油小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残余物真空干燥，得到(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(1-(二氢吲哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (27.0 mg, 0.07 mmol, 55%收率)，为浅黄色固体。
LCMS (2 min甲酸法) 峰Rt = 0.51min, m/z=[MH]+的407
实施例129: (+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(间 甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 81473DEST_PATH_IMAGE681
将N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (90 mg, 0.31 mmol)悬浮在THF (10 mL)中并在氮气下在冰浴中冷却，然后逐滴加入间甲苯基溴化镁(0.5M于THF中，2.178 mL，1.09 mmol)并将混合物搅拌2小时。加入饱和氯化铵水溶液(5 mL)，然后将混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc(2×10 mL)萃取。将有机物干燥并真空蒸发，并将残余物在10g硅胶柱上通过色谱法纯化，得到(+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(间甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(92 mg, 0.24 mmol, 78%收率)，为无色固体。
Figure 117562DEST_PATH_IMAGE682
实施例130: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(二氢吲哚-4-基 甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 556765DEST_PATH_IMAGE683
4-((4-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)二氢吲哚-1-甲酸苄酯 (99.3 mg, 0.19 mmol)于乙醇(10 mL)中的溶液在Thales H-Cube装置上使用10％钯/碳柱筒使用乙醇作为载体溶剂进行氢化。真空蒸发溶剂，得到黄色油状物，将其溶解在甲醇中并在氮气流下浓缩。将残余物重新溶解在DMSO(~2mL)中并通过MDAP(2x1mL注射;高pH法)直接纯化。未收集目标产物，因此将合并的废物真空蒸发，将剩余的浅棕色油状物溶于DMSO中，并转移至小瓶中，然后在氮气流下浓缩。将残余物溶于温乙醇中，冷却后沉淀出固体。过滤固体，用乙醚洗涤，然后真空干燥，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(二氢吲哚-4-基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (36.5 mg, 0.09 mmol, 49%收率)，为浅棕色固体。
LCMS (2 min高pH法) 峰Rt = 0.79 mins, m/z=[MH]+的 393
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.94 (br. d, J=3.2 Hz, 1 H) 8.65 (br.d, J=4.4 Hz, 1 H) 8.25 (s, 1 H) 7.67 (s, 1 H) 6.87 (t, J=7.6 Hz, 1 H) 6.33 -6.46 (m, 2 H) 5.47 (br. s., 1 H) 4.11 (s, 2 H) 3.86 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.64(d, J=8.1 Hz, 2 H) 3.40 (t, J=8.3 Hz, 2 H) 2.78 - 2.95 (m, 5 H) 2.61 (br. s.,1 H) 1.93 (br. s., 2 H)
实施例131: (+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(邻 甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 740621DEST_PATH_IMAGE684
将(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (200 mg, 0.67mmol) 溶于DMF (3 mL)并加入HATU (329 mg, 0.87 mmol)、Et3N (0.278 mL, 2.00 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(135 mg, 1.00 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。将溶液静置过夜，然后通过MDAP(高pH法)直接纯化，得到(+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (12 mg, 0.03 mmol, 5%收率，为无色胶状物。
Figure 110423DEST_PATH_IMAGE685
实施例132: N 4-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N 2-甲基-6- ((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 266598DEST_PATH_IMAGE686
向N 4-(3-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (113 mg, 0.20 mmol)于乙醇(3mL) 中的悬浮液中加入水合肼 (0.030 mL, 0.61 mmol)。将该悬浮液在氮气下在室温下搅拌28小时，之后过滤反应混合物并用乙醇(3×5 mL)洗涤固体。将滤液真空蒸发，然后再溶解于DMSO(1 mL)中并通过MDAP(高pH法)直接纯化。将所需级分真空蒸发，得到 N 4-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (44.4 mg, 0.10 mmol, 51%收率)，为无色胶状物。
Figure 63652DEST_PATH_IMAGE687
实施例133 : N4-(3-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基 乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体1
Figure 485538DEST_PATH_IMAGE688
向3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体1 (35.0 mg, 0.06 mmol, 中间体201)于1,4-二氧杂环己烷(0.5 mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，0.80 mL，3.20 mmol)。将混合物在室温下搅拌4.75小时。将混合物在氮气流下蒸发至干，残余物用乙醚(2×3 mL)研磨，每次滗去上清液。将固体残余物在氮气流下干燥，然后真空干燥，得到N4-(3-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺, 盐酸盐, 非对映异构体2 (29.3 mg, 0.06 mmol, 95%收率)，为浅黄色固体。
Figure 393451DEST_PATH_IMAGE689
实施例134: N4-(3-((R*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体2
Figure 404132DEST_PATH_IMAGE690
向3,3-二氟-4-(3-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体2 (39.4 mg, 0.07 mmol, 中间体202)于1,4-二氧杂环己烷(0.5 mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，0.80 mL，3.20 mmol)。将混合物在室温下搅拌4.75小时。将混合物在氮气流下蒸发至干，残余物用乙醚(2×3 mL)研磨，每次滗去上清液。将固体残余物在氮气流下干燥，然后真空干燥，得到N4-(3-((R*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体2 (34.5 mg, 0.072 mmol, 99%收率)，为浅黄色固体。
LCMS (2 min甲酸法) 峰Rt = 0.66 min, m/z = [MH]+的445
实施例135: N4-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体1
Figure 372088DEST_PATH_IMAGE691
向4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体1 (24.9 mg, 0.05 mmol, 中间体205)于1,4-二氧杂环己烷(0.5 mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，0.60 mL，2.40 mmol)。将混合物在室温下搅拌4.75小时。将混合物在氮气流下蒸发至干，残余物用乙醚(2×3 mL)研磨，每次滗去上清液。将固体残余物在氮气流下干燥，然后真空干燥，得到N4-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体1 (20.1 mg, 0.04 mmol, 92%收率)，为浅黄色固体。
LCMS (2 min甲酸法) 峰Rt = 0.67 min, m/z =[MH]+的 431
实施例136: N4-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体2
Figure 468220DEST_PATH_IMAGE692
向4,4-二氟-3-(2-(2-(甲基氨基甲酰基)-6-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯, 非对映异构体2 (25.7 mg, 0.05 mmol, 中间体206)于1,4-二氧杂环己烷(0.5 mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M于1,4-二氧杂环己烷中的溶液，0.60 mL，2.40 mmol)。将混合物在室温下搅拌4.75小时。将混合物在氮气流下蒸发至干，残余物用乙醚(2×3 mL)研磨，每次滗去上清液。将固体残余物在氮气流下干燥，然后真空干燥，得到N4-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺盐酸盐, 非对映异构体2 (19.8 mg, 0.04 mmol, 88%收率)，为浅黄色固体。
LCMS (2 min甲酸法) 峰Rt = 0.66 min, m/z =[MH]+的 431
实施例137: (+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(对 甲苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 242141DEST_PATH_IMAGE693
将N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (200 mg, 0.691 mmol)悬浮在THF (10 mL)中并在氮气下在冰浴中冷却，然后逐滴加入对甲苯基溴化镁(2.074 mL，2.074 mmol，1M于THF中，可商购自例如Sigma-Aldrich)并将混合物搅拌2小时。加入氯化铵溶液(饱和水溶液，5 mL)，然后将混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc(2×10 mL)萃取。将有机物干燥并真空蒸发，残余物通过二氧化硅柱(10 g)上的色谱法纯化，用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(对甲苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (23 mg,0.060 mmol, 9%收率)，为无色固体。
Figure 372908DEST_PATH_IMAGE694
实施例138: (+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((2-氯苯 基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 511765DEST_PATH_IMAGE695
经20分钟向含有镁(0.279 g，11.49 mmol)和THF(20 mL)的烧瓶中逐滴加入1-溴-2-氯苯(1.221 mL，10.45 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)。加入碘(20 mg，0.079mmol)并将混合物在室温下在氮气下搅拌2小时，导致镁屑完全消耗。该溶液直接使用而无需表征。
将N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-甲酰基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (200 mg, 0.691 mmol) 悬浮在THF (10 mL)中并在氮气下在冰浴中冷却，然后逐滴加入(2-氯苯基)溴化镁(4.15 mL，2.074 mmol，0.5M于THF中)并将混合物搅拌2小时，得到橙色悬浮液。加入氯化铵溶液(饱和水溶液，5 mL)，然后将混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc(2×10 mL)萃取。将有机物干燥并真空蒸发，残余物通过二氧化硅柱(10 g)上的色谱法纯化，用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱，得到淡黄色胶状物。将粗产物溶解在DCM中并加载到二氧化硅柱(25 g)上，然后用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱，将含产物的级分真空蒸发，得到无色泡沫(85 mg)。将其通过MDAP(高pH法)纯化，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((2-氯苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (58 mg, 0.144 mmol, 21%收率)，为无色固体。
Figure 829614DEST_PATH_IMAGE696
实施例139: (R*)-6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(2-甲基吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺
实施例140: (S*)-6-苄基-N2-甲基-N4-(3-(2-甲基吗啉-2-基)丙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺
Figure 155029DEST_PATH_IMAGE697
通过手性HPLC纯化实施例107 (35 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(1 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上(20％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测：波长，215 nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak IC (5 µm)，批号IC10028-01)。将30-32.5分钟的级分合并并标记为峰1。将35-39分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例139 (6 mg)。
Figure 140302DEST_PATH_IMAGE698
收集对应于峰2的级分，得到实施例140 (6 mg)。
Figure 450061DEST_PATH_IMAGE699
实施例141: 6-苄基-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-乙基吡 啶-2,4-二甲酰胺
Figure 255206DEST_PATH_IMAGE700
向2-苄基-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸 (52.2 mg, 0.18 mmol), (1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐 (36.3 mg, 0.27 mmol)和HATU (100.0 mg, 0.26 mmol)于DMF (1 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.128 mL, 0.73 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2.5小时，之后将其用DMSO(2 mL)稀释，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，转移至乙腈(约2 mL)中，在氮气流下蒸发挥发物，并将残余物真空干燥，得到6-苄基-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-乙基吡啶-2,4-二甲酰胺 (56.7mg, 0.16 mmol, 85%收率)，为玻璃状白色固体。
Figure 308613DEST_PATH_IMAGE701
实施例168: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-羟基(对甲 苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例142: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-羟基(对甲 苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 210710DEST_PATH_IMAGE702
通过手性HPLC纯化实施例137 (24 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(1 mL)中。注射：将1 mL溶液注射到柱上(20％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测：波长，215nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak IC (5 µm)，批号IC10028-01)。将27-29分钟的级分合并并标记为峰1。将31-34分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰2的级分，得到实施例168 (9 mg)。
Figure 691369DEST_PATH_IMAGE703
收集对应于峰2的级分，得到实施例142 (10 mg)。
Figure 249390DEST_PATH_IMAGE704
实施例169: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-羟基(邻甲 苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例143: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-羟基(邻甲 苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 840908DEST_PATH_IMAGE705
将2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (220 mg, 0.73 mmol)溶于DCM (10 mL)并加入HATU (362 mg, 0.952 mmol)、Et3N (0.306 mL, 2.20 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐 (149 mg, 1.099 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。将溶液用水(2×20 mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (275 mg, 0.721 mmol, 98%收率)，为无色胶状物。
通过手性HPLC纯化外消旋物(200 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(5 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上(20％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测：波长，215 nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak IC (5 µm)，批号IC10028-01)。总注射次数= 7。将29.5-31分钟的级分合并并标记为峰1。将31-34分钟的级分合并并标记为混合物。将34-39分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的混合物级分空出并使用上述制备方法再处理。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。注意：异构体2需要进一步纯化以提高纯度。这需要2次注射。
收集对应于峰2的级分，得到实施例169 (104 mg)。
Figure 800774DEST_PATH_IMAGE706
收集对应于峰2的级分，得到实施例143 (104 mg)。
Figure 265384DEST_PATH_IMAGE707
实施例144: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-1-(二氢吲 哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例145: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-1-(二氢吲 哚-4-基)乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 45121DEST_PATH_IMAGE708
通过HPLC纯化实施例128 (22.3 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(1 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上[20％EtOH/庚烷，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550,100，柱30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm)，批号 ODH11158-01]。总注射次数= 1。将22-26分钟的级分合并并标记为峰1。将31-38分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分真空浓缩，然后转移到柏油小瓶中并真空干燥。
收集对应于峰1的级分，得到实施例144 (9.1 mg, 0.02 mmol)，为茶色固体。
Figure 440331DEST_PATH_IMAGE709
收集对应于峰2的级分，得到实施例145 (9.1 mg, 0.02 mmol)，为茶色固体。
Figure 254703DEST_PATH_IMAGE710
实施例146: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-(2-氯苯 基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例147: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-(2-氯苯 基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 77165DEST_PATH_IMAGE711
通过手性HPLC纯化实施例138 (50 mg)。将外消旋物在加热下溶解在EtOH(1.5mL)中。注射：将1.5mL溶液注射到柱上(20％EtOH/庚烷，流速= 30 mL/min，检测：波长，215nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH 13231)。总注射次数= 2。将20-22.5分钟的级分合并并标记为峰1。将22.5-26分钟的级分合并并标记为混合物。将26-32分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的混合物级分真空浓缩并使用相同的方法再处理。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。将最终的异构体重新溶解在DCM和庚烷中以成功产生固体。
收集对应于峰1的级分，得到实施例146 (23 mg).
Figure 344199DEST_PATH_IMAGE712
收集对应于峰2的级分，得到实施例147 (22 mg)。
Figure 605416DEST_PATH_IMAGE713
实施例148: 6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N 2-乙基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 274295DEST_PATH_IMAGE714
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸 (49.3 mg, 0.15mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐 (31.7 mg, 0.23 mmol)和HATU(84.0 mg, 0.22 mmol)于DMF (1 mL)中的悬浮液中加入DIPEA (0.107 mL, 0.61 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时，之后将其用DMSO(约2 mL)稀释，并通过MDAP(高pH法)直接纯化。在氮气流下蒸发所需的级分，重新溶解在乙腈(各2 mL)中并合并。将该溶液在氮气流下蒸发，残余物用乙醚(约1 mL)研磨，在氮气流下蒸发挥发物，得到6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-乙基吡啶-2,4-二甲酰胺 (51.5mg, 0.13 mmol, 84%收率)，为白色固体。
Figure 267658DEST_PATH_IMAGE715
实施例149: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((R*)-1- (2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例150: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((S*)-1- (2-氧代二氢吲哚-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 21988DEST_PATH_IMAGE716
通过手性HPLC纯化实施例115 (45 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上(20％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100，柱30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm)，批号#ODH 11158-01)。总注射次数= 2。将15.5-20分钟的级分合并并标记为峰1。将23-30分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例149 (17 mg)。
Figure 24579DEST_PATH_IMAGE717
收集对应于峰2的级分，得到实施例150 (14 mg)。
Figure 361013DEST_PATH_IMAGE718
实施例151: N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(3-氯苄 基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 525278DEST_PATH_IMAGE719
向6-(3-氯苄基)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (50 mg, 0.09 mmol)于乙醇(7 mL)中的悬浮液中加入水合肼 (90 µl, 1.84 mmol)。将反应物在40℃下搅拌过夜。将粗产物溶于DMSO:甲醇中，通过棉绒过滤并通过MDAP(高pH法)纯化。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(3-氯苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (25 mg, 0.05 mmol, 58%收率)。
Figure 766904DEST_PATH_IMAGE720
实施例152: N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(2-氯苄 基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 307607DEST_PATH_IMAGE721
向6-(2-氯苄基)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (111 mg, 0.192 mmol)于乙醇(7 mL)中的悬浮液中加入水合肼(210 µL, 4.28 mmol)。将反应物在40℃下搅拌过夜。将粗产物溶于DMSO:甲醇中，通过硅藻土过滤并通过MDAP(高pH法)纯化。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(2-氯苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (56 mg, 0.11 mmol, 59%收率)。
Figure 685498DEST_PATH_IMAGE722
实施例153: N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基-6- (3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 348561DEST_PATH_IMAGE723
向N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (64 mg, 0.12 mmol) 于乙醇(5 mL)中的悬浮液中加入水合肼 (150 µL, 3.06 mmol)。将反应物在40℃下搅拌过夜。将粗产物溶于DMSO:甲醇中，通过棉绒过滤并通过MDAP(高pH法)纯化。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (33 mg, 0.07 mmol, 61%收率)。
Figure 811903DEST_PATH_IMAGE724
实施例154: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-羟基(间甲 苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例170: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-羟基(间甲 苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 156297DEST_PATH_IMAGE725
通过手性HPLC纯化实施例129 (78 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将2 mL该溶液注入柱上(30％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测：波长，215 nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH13231)。总注射次数= 1。将11-14分钟的级分合并并标记为峰1。将19-23分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例154 (36 mg)。
Figure 388695DEST_PATH_IMAGE726
收集对应于峰1的级分，得到实施例170 (34 mg)。
Figure 160342DEST_PATH_IMAGE727
实施例155: (+/-)-N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6- (甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 924030DEST_PATH_IMAGE728
向N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (162 mg, 0.28 mmol) 于乙醇(2 mL)中的悬浮液中加入水合肼 (0.100 mL, 2.06 mmol)；得到的悬浮液在40℃下搅拌过夜。在氮气正压下除去溶剂，然后将粗产物再溶于DMSO(2.7 mL)中，过滤并通过MDAP(3x高pH法)纯化。收集合适的级分并真空浓缩，得到所需的游离碱N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (75 mg,0.17 mmol, 60%收率)。
Figure 806535DEST_PATH_IMAGE729
实施例156: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-(3-氟苯 基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例157: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-(3-氟苯 基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 159019DEST_PATH_IMAGE730
将2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(100 mg，0.33 mmol)悬浮于DCM(5 mL)中并加入Et3N (0.137 ml，0.99 mmol)和HATU(187 mg，0.49 mmol)，然后将混合物搅拌20分钟，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(66.8mg，0.49 mmol)。将所得溶液搅拌2小时，然后用水(10 mL)洗涤，将有机层干燥并真空蒸发，残余物通过二氧化硅柱(25 g)上的色谱法纯化，用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱。将含有产物的级分真空蒸发，得到N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (124 mg, 0.32 mmol, 98%收率)。
通过手性HPLC纯化外消旋物(100 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上(25％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测：波长，215 nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH13231)。总注射次数= 2。将14.5-17.5分钟的级分合并并标记为峰1。将21-25分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例156 (50 mg)。
Figure 101567DEST_PATH_IMAGE731
收集对应于峰2的级分，得到实施例157 (50 mg)。
Figure 539502DEST_PATH_IMAGE732
实施例158: N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(2-甲氧 基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 225698DEST_PATH_IMAGE733
向N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(2-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 ( 51 mg, 0.089 mmol)于乙醇(3mL)中的悬浮液中加入水合肼 (90 µL, 1.84 mmol)。将反应物在40℃下搅拌过夜。将粗产物溶于DMSO:甲醇中，通过棉绒过滤并通过MDAP(高pH法)纯化。将含有目标产物的级分真空浓缩，得到N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-(2-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (23 mg, 0.05 mmol, 53%收率)。
Figure 495006DEST_PATH_IMAGE734
实施例159: N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(4-氟苄基)-N2-甲 基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 608455DEST_PATH_IMAGE735
将2-(4-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(127 mg，0.441 mmol)溶于DMF(1mL)中。加入HATU(251 mg，0.661 mmol)，然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(106 mg，0.782 mmol)，然后加入DIPEA(0.385 mL，2.20 mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌16小时。通过MDAP(甲酸法)纯化反应混合物。将含有目标产物的级分在DCM和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。分离各层(通过疏水性玻璃料)，然后用DCM(2×15 mL)从水溶液中进一步萃取两次。合并有机层并真空浓缩，得到 N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(4-氟苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (157 mg, 0.38 mmol, 87%收率)。
Figure 533686DEST_PATH_IMAGE736
实施例160: N4-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-((S*)-甲 氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例161: N4-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-((R*)-甲 氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 757994DEST_PATH_IMAGE737
通过手性HPLC纯化实施例155 (55 mg)。将外消旋物溶解在EtOH(2 mL)中。注射：将1mL溶液注射到柱上(30％EtOH(+ 0.2％异丙胺)/庚烷(+ 0.2％异丙胺)，流速= 30 mL/min，检测：波长，215 nm，4. Ref. 550, 100; 柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH13231)。总注射次数= 3。将20-23分钟的级分合并并标记为峰1。将23-26分钟的级分合并并标记为混合物。将26-31分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的混合物级分真空浓缩并使用上述程序再处理。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分，得到实施例160 (26 mg)。
Figure 895189DEST_PATH_IMAGE738
收集对应于峰2的级分，得到实施例161 (26 mg)。
Figure 913961DEST_PATH_IMAGE739
实施例162: 6-苄基-N4-(3-((2r,5r)-5-(二甲基氨基)-1,3-二氧杂环己-2-基) 丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 326488DEST_PATH_IMAGE740
在微波小瓶中，向N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-苄基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (33.6 mg, 0.081 mmol)于甲醛(37%水溶液, 0.334 mL,4.48 mmol)和水(0.5 mL)中的混合物中加入甲酸 (0.172 mL, 4.48 mmol)。将小瓶密封，将混合物在微波反应器中于110℃加热30分钟。将混合物在氮气流下浓缩，剩余的残余物用DMSO稀释至总体积为1mL，并通过MDAP(1×1mL注射;高pH法)纯化。将所需级分在氮气流下浓缩。将残余物溶于DCM(5 mL)中，并转移至柏油小瓶中，然后在氮气流下浓缩，真空干燥，得到6-苄基-N4-(3-((2r,5r)-5-(二甲基氨基)-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (3.9 mg, 8.85 µmol, 11%收率)，为无色玻璃状物。
LCMS (2 min甲酸法) 峰Rt = 0.60 min, m/z =[MH]+的 441
实施例172: (+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(2-氰基- 1-苯基乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
Figure 354487DEST_PATH_IMAGE741
将2-(2-氰基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (180 mg, 0.291 mmol)加入DMF (2 mL)。加入DIPEA (0.152 mL, 0.873 mmol)，然后加入HATU (166 mg, 0.436mmol)，将溶液在室温下搅拌10分钟。加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(59.2 mg，0.436 mmol)并在室温下继续搅拌1小时。加入另外部分的(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺，盐酸盐(59.2 mg，0.436 mmol)、DIPEA(0.152 mL，0.873 mmol)和HATU(166 mg，0.436 mmol)并在室温下继续搅拌1小时，然后搅拌过夜。将反应物真空浓缩。将残余物在EtOAc和饱和NaHCO3溶液(各10 mL)之间分配。水层用EtOAc(10 mL)再萃取，合并的有机物用盐水(25 mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)，通过疏水性玻璃料过滤并真空浓缩，得到棕色油状物。通过MDAP(高pH法)纯化粗产物。将合适的级分真空浓缩，得到(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(2-氰基-1-苯基乙基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (20.5 mg, 0.050 mmol, 17%收率)，为橙色固体。
Figure 536069DEST_PATH_IMAGE742
实施例163-166和171:
以与前述实施例类似的方式制备实施例163-166和171：
Figure 53638DEST_PATH_IMAGE743
。
生物学数据
式(I)化合物可以在以下一种或多种测定中测试；
时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)测定
利用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)竞争测定评估溴结构域结合。为了实现这种方法，用Alexa Fluor® 647（一种远红外荧光染料）标记一种已知的、高亲和力的泛-BET相互作用小分子(参考化合物X)。参考化合物X充当溴结构域结合的报告物，并且是TR-FRET对的受体荧光团组分。与抗-6*His抗体缀和的铕螯合物被用作TR-FRET对中的供体荧光团。抗-6*His抗体选择性结合到添加至本研究中使用的每个BET串联溴结构域蛋白构建体的氨基末端的六组氨酸纯化表位。当供体和受体荧光团紧密接近（在20-80Å之间）时，产生TR-FRET信号，这在该测定中通过参考化合物X与溴结构域蛋白的结合而实现。
参考化合物X: 4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺基)戊基)氨基)-6-氧代己基)-2-((2E,4E)-5-(3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-2-基)戊-2,4-二烯-1-亚基)-3-甲基-5-磺基二氢吲哚-1-基)丁烷-1-磺酸盐)
Figure 687882DEST_PATH_IMAGE744
向N-(5-氨基戊基)-2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺 (关于制备，参见参考化合物J, WO2011/054848A1, 1.7 mg, 3.53 µmol)于DMF (40 μL)中的溶液中加入AlexaFluor647-ONSu(2.16 mg, 1.966 µmol) 也于DMF (100 μL)中的溶液。混合物用DIPEA(1 μl，5.73 μmol)碱化，并在涡旋混合器上搅拌过夜。
将反应混合物蒸发至干。将固体溶于MeCN/水/AcOH (5/4/1, <1 mL)中，过滤并施加到Phenomenex Jupiter C18制备柱上，用下列梯度 (A = 0.1%三氟乙酸/水, B= 0.1%TFA/90% MeCN/10%水)洗脱：流速 = 10 mL/min., AU = 20/10 (214nm):
5-35%, t=0min: B = 5%; t=10min: B = 5%; t=100min: B = 35%; t=115min:B = 100% (Sep. grad: 0.33%/min)
主要组分在26-28％B的范围内洗脱，但似乎由两个峰组成。通过分析型HPLC(Spherisorb ODS2, 1％至35％，经60 min)分析应含有“两种”组分的中间级分(F1.26)：单一组分在28％B洗脱。
合并级分F1.25/26&27并蒸发至干。用DMF转移，蒸发至干，用无水乙醚研磨，蓝色固体在<0.2毫巴下干燥过夜：1.54 mg。
分析型HPLC (Sphersisorb ODS2, 1至35%B，经60 min): MSM10520-1: [M+H]+(obs): 661.8/- 对应于M-29。对于计算质量1320.984(为M-29)，这相当于[(M+2H)/2]+。这是与Alexa Fluor 647染料的标准发生（standard occurance），并表示在质谱仪条件下理论上损失了两个亚甲基。
测定原理: 为了产生TR-FRET信号，供体荧光团被在λ337nm处的激光激发，这随后导致在λ618nm处的发射。如果受体荧光团非常接近，则可能发生能量转移，这导致在λ665nm处Alexa Fluor® 647的发射。在竞争性化合物存在下，参考化合物X可被从与溴结构域的结合中置换。如果发生置换，则受体荧光团不再接近供体荧光团，这阻止了荧光能量转移，以及随后在λ665 nm处的Alexa Fluor® 647发射损失。
使用跨越溴结构域1(BD1)和溴结构域2(BD2)的蛋白质截短物评估式(I)化合物与参考化合物X对与BET家族(BRD2，BRD3，BRD4和BRDT)结合的竞争。为了监测与BD1或BD2的差异结合，在乙酰赖氨酸结合口袋中产生关键酪氨酸至丙氨酸的单个残基突变。为了验证该方法，为每个BET家族成员产生双残基突变串联结构域蛋白。利用荧光偏振方法，测定每个单突变体和双突变体对参考化合物X的结合亲和力。与未突变的野生型串联BET蛋白相比，参考化合物X的双突变串联蛋白的亲和力大大降低(Kd降低> 1000倍)。参考化合物X的单突变溴结构域串联蛋白的亲和力与相应的未突变的BET蛋白是等效的。这些数据证明酪氨酸向丙氨酸的单突变使突变的溴结构域和参考化合物X之间的相互作用的Kd降低> 1000倍。在TR-FRET竞争测定中，参考化合物X的使用浓度等于未突变的溴结构域的Kd，这确保突变的溴结构域的结合检测不到。
蛋白生成: 重组人溴结构域[(BRD2(1-473)(Y113A)和(Y386A)，BRD3(1-435)(Y73A)和(Y348A)BRD4(1-477)(Y97A)和(Y390A)以及BRDT (1-397)(Y66A)和(Y309A)]在大肠杆菌细胞中(BRD2/3/4在pET15b载体中，和BRDT在pET28a载体中)表达，在N-末端具有6-His标签。将His-标记的溴结构域粒状沉淀重悬于50mM HEPES (pH7.5)、300mM NaCl、10mM咪唑和1μL/ml蛋白酶抑制剂混合物中，利用超声处理从大肠杆菌细胞中提取并使用镍琼脂糖凝胶高效柱纯化，洗涤蛋白质，然后用含有缓冲液50mM HEPES (pH7.5)、150mM NaCl、500mM咪唑的0-500mM咪唑的线性梯度洗脱，经20个柱体积。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成最终纯化。将纯化的蛋白质在-80℃下储存在20mM HEPES pH 7.5和100mM NaCl中。通过肽质量指纹图谱确认蛋白质身份，并通过质谱法确认预测的分子量 。
溴结构域BRD2、3、4 和T，BD1 + BD2突变TR-FRET竞争测定的方案: 将所有测定组分溶解在由50mM HEPES pH7.4、50mM NaCl、5％甘油、1mM DTT和1mM CHAPS组成的测定缓冲液中。将参考化合物X在含有20nM单突变串联溴结构域蛋白的测定缓冲液中稀释至相当于该溴结构域2*Kd的浓度。将含有溴结构域和参考化合物X的溶液加入到Greiner 384孔黑色低体积微量滴定板中的受试化合物或DMSO媒介物(在该测定中使用最多的0.5％DMSO)的剂量响应稀释液中，随后在室温下孵育30分钟。向所有孔中加入等体积的3nM的抗-6*His铕螯合物，然后在室温下再孵育30分钟。使用Perkin Elmer多模读板器，通过在λ337 nm处激发供体荧光团，随后在50μs的延迟后，分别测量在λ615 nm和λ665 nm处的供体和受体荧光团的发射，来检测TR-FRET。为了控制这些测定，在每个微量滴定板上包括每个未抑制的(DMSO媒介物)和抑制的(WO 2011/054846A1的实施例11的10*IC50浓度)TR-FRET测定的16个重复。
然后应用以下形式的接近（cA）四参数曲线拟合：
y = a + (( b – a)/( 1 + ( 10 ^ x/10 ^ c ) ^ d )
其中‘a’是最小值, ‘b’是曲线最大斜率的绝对值(Hill slope), ‘c’是pIC50且‘d’是最大值。
基本上如上所述在BRD4 BD1和BRD4 BD2 TR-FRET测定中测试所有化合物(实施例)中的每一个。本领域技术人员将认识到，体外结合测定和基于细胞的功能活性测定受到实验可变性的影响。因此，应理解，下面给出的pIC50值仅是示例性的。pIC50值表示为log10单位。
发现所有受试化合物在至少一种上述测定中的pIC50 ≥ 5.0。
发现实施例84、85、87、164、165和166在BRD4 BD2测定中的pIC50 ≥ 5.0且< 6.0 。
发现所有其它受试化合物在BRD4 BD2测定中的pIC50在 ≥ 6.0且≤8.2的范围内。特别是，发现实施例38在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.9 (n = 3)；发现实施例41在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.4 (n = 2)；发现实施例51在BRD4 BD2测定中的pIC50为8.1 (n = 3)；发现实施例70在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.8 (n = 3)；发现实施例105在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.5 (n = 8)；发现实施例113在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.5 (n = 7)；发现实施例130在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.3 (n = 5)；发现实施例161在BRD4 BD2测定中的pIC50为7.6 (n = 3)。
相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性的计算
相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性如下计算：
选择性 = BRD4 BD2 pIC50 – BRD4 BD1 pIC50。
发现所有实施例在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性均为≥1个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少10倍。
发现实施例1-75和88-162及172 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性均为≥2个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少100倍。
发现实施例38 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为 3.1个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例41 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为 3.0个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例51 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.5个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例70 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.1个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例113 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为 3.1个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例161 在上述至少一种TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.2个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。

Claims (12)

1.式(I)化合物
Figure DEST_PATH_IMAGE002
或其药学上可接受的盐
其中：
R1是-C1-3烷基；
R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁基、氮杂环丁基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，并且所述杂环基任选被一个或两个可相同或不同的R5基团取代；
R3是-H、甲基、乙基、氟、-OCH3、-OH、-CH2F、-CH2OMe或-CH2CN；
R4是任选被一个、两个或三个可相同或不同的选自-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR7和CN的基团取代的苯基；或
R4是1H-吲哚-4-基；
R5是氟、-CO2C(CH3)3、-CH2CHF2、-CH(CH3)2、-C(O)CH3、氧代或甲基；
R7是-H或-C1-3烷基。
2.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是甲基。
3.化合物或其药学上的盐，所述化合物选自
N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺;
N2-甲基-N4-(2-((S)-吗啉-2-基)乙基)-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺;
6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 2 -甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;
N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S)-羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;
N 4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;
N4-(3-((2r,5r)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-苄基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;
N4-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-(二氢吲哚-4-基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺;和
N4-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二氧杂环己-2-基)丙基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺。
4.药物组合物，其包含如权利要求1中所定义的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
5.组合产品，其包含如权利要求1中所定义的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其它治疗活性剂。
6.如权利要求1中定义的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在需要其的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病况的药物中的用途。
7.根据权利要求6的用途，其中所述疾病或病况是急性或慢性自身免疫和/或炎性病况。
8.根据权利要求6的用途，其中所述疾病或病况涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
9.根据权利要求6的用途，其中所述疾病或病况是病毒感染。
10.根据权利要求6的用途，其中所述疾病或病况是癌症。
11.根据权利要求6的用途，其中所述疾病或病况是类风湿性关节炎。
12.根据权利要求6-11任一项的用途，其中所述对象是人。
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