CN108884083B - 作为溴结构域抑制剂的苯并[b]呋喃类化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)化合物及其盐、包含此类化合物的药物组合物，并且涉及它们在治疗中的用途。

Description

作为溴结构域抑制剂的苯并[B]呋喃类化合物
发明领域
本发明涉及为溴结构域抑制剂的某些化合物，其制备方法，包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物或组合物在治疗各种疾病或病症（例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病症、病毒感染和癌症）中的用途。
背景技术
真核生物的基因组在细胞核内高度组织化。双链DNA的长链包裹在组蛋白的八聚体（最通常包含组蛋白H2A、H2B、H3和H4的两个拷贝）的周围以形成核小体。然后通过核小体的聚集和折叠进一步压缩该基本单元，以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同的凝聚状态是可能的，并且该结构的紧密性在细胞周期期间变化，在细胞分裂过程中最紧密。染色质结构在调节基因转录中起关键作用，基因转录不能从高度凝聚的染色质中有效地发生。染色质结构由对组蛋白(尤其是组蛋白H3和H4)的一系列翻译后修饰控制，所述翻译后修饰最常发生于延伸超出核心核小体结构的组蛋白尾部内。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、SUMO化。这些表观遗传标记（epigenetic mark）由特定酶（specific enzyme）写入和擦除，所述特定酶将所述标记置于组蛋白尾部内的特定残基上，从而形成表观遗传密码，该密码然后由细胞解释以允许染色质结构的基因特异性调节并从而转录。
组蛋白乙酰化最经常与基因转录的激活有关，因为该修饰通过改变静电作用而放松DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除了这种物理变化，特定的蛋白质识别并结合至组蛋白内的乙酰化赖氨酸残基，以读取表观遗传密码。溴结构域是蛋白质内的小（~110个氨基酸）而独特的结构域，其在组蛋白的背景下通常但不仅仅与乙酰化赖氨酸残基结合。已知具有大约50种蛋白质的家族含有溴结构域，它们在细胞内具有一系列功能。
含有溴结构域的蛋白质的BET家族包含4种蛋白质（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT），它们含有能够与极为接近的两个乙酰化赖氨酸残基结合的串联溴结构域，增加了相互作用的特异性。从各个BET蛋白的N-末端开始编号，所述串联溴结构域通常标记为结合域1（BD1）和结合域2（BD2）(Chung等人, J Med. Chem,. 2011, 54, 3827-3838)。
Chan等人报道，BET溴结构域抑制在人单核细胞中以基因特异性方式抑制对细胞因子-Jak-STAT信号传导的转录应答，这表明BET抑制通过抑制细胞因子活性部分地减少了炎症。(Chan等人, Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297)。
Klein等人报道，溴结构域蛋白抑制剂I-BET151抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞中炎性基因和基质降解酶的表达，这表明在类风湿性关节炎中靶向表观遗传阅读器蛋白（epigenetic reader protein）的治疗潜力。(Klein等人,Ann. Rheum. Dis., 2014, 0:1-8)。
Park-Min等人报道，靶向溴和外末端（BET）蛋白（其通过与乙酰化组蛋白结合“读取”染色质状态）的I-BET151强烈抑制破骨细胞生成。(Park-Min等人, Nature Communications, 2014, 5, 5418)。
发明内容
本发明涉及式(I)化合物
Figure 84835DEST_PATH_IMAGE001
或其盐
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R2为-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中各个杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代；或
R2为H、-CH3、任选被至多五个氟取代的C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR11R12、-(CH2)mC(O)NR11R12、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R13、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中杂芳基任选被一个或两个可以相同或不同的R14基团取代；
R3为苯基，所述苯基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R7基团取代；
R4为-C1-3烷基、-CH2OR6或-CH2F；
各个R5独立地为卤素、-C0-6烷基-R8、-O-C2-6烷基-R8、-CN 或-SO2C1-3烷基；
R6为-H或C1-3烷基；
各个R7独立地为-卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR10、-C0-3烷基-NR15R16、-C0-3烷基-CONR15R16、CN或-SO2R17；
R8为-H、-OR10a、-NR18R19或杂芳基；
各个R9独立地为卤素、C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR13、-C0-3烷基OR13、-C0-3烷基NR11R12、-NHCH2CH2OR13、-NHCO2R13、氧代、-C(O)R13、-C(O)OR13或-C(O)NR11R12；
R10a为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR11R12或-C2-3烷基OH；
R10为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR15R16或-C2-3烷基OH；
R11和R12各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
R13为-H或C1-4烷基；
各个R14独立地为卤素、C1-4烷基、环丙基、环丁基或-OR13；
R15和R16各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R15和R16可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
R17为-C1-3烷基或-NR15R16；
R18和R19各自独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C1-6烷基、环烷基、杂环基、-C2-3烷基NR13COC1-3烷基、C2-3烷基NR15R16 和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中所述-C1-6烷基和环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R18和R19可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
m为选自2、3和4的整数；
p为选自2、3和4的整数；
n为选自0、1、2、3和4的整数。
本发明化合物已经显示为溴结构域抑制剂，特别是BD2选择性抑制剂，并且可以用于治疗各种疾病或病症，例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病症，例如类风湿性关节炎和癌症。因此，本发明还涉及包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本发明进一步还涉及使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物治疗与其相关的疾病或病症的方法。本发明还涉及制备本发明化合物的方法。
具体实施方式
式(I)化合物及其盐在本文中称为“本发明化合物”。
“BD2”指的是蛋白质BRD2、BRD3、BRD4或BRDT的BET家族的任何一个的结合域2。
“烷基”指的是具有指定碳原子数的饱和烃链。例如，本文所用的术语“C1-6烷基”指的是具有1至6个碳原子，例如1至3个碳原子的直链或支链烷基。例如术语“C0-3烷基”指的是具有0（即不存在）至3个碳原子，例如0至2个碳原子的直链或支链烷基。代表性的支链烷基具有一个、两个或三个支链。烷基可以形成链的一部分，例如，-C0-4烷基-杂环基指的是连接至杂环基的具有0（即不存在）至4个碳原子的直链或支链烷基链。“烷基”包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、异丙基、叔丁基、戊基和己基。
“环烷基”指的是在环中具有3、4、5、6或7个成员原子的饱和烃单或双环或饱和螺连接的双环烃环。环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和螺[3.3]庚基。
“对映体过量”（ee）是一种对映体相对于另一种对映体的过量，以百分比表示。在外消旋修饰中，由于两种对映体以相等的量存在，因此对映体过量为零（0％ee）。然而，如果富集一种对映体使其占产物的95％，那么对映体过量将是90％ee（富集的对映体的量95％减去另一种对映体的量5％）。
“对映体富集的”指的是其中对映体过量（ee）大于零的产物。例如，“对映体富集的”是指其中对映体过量大于50％ee、大于75％ee和大于90％ee的产物。
本文所用的“对映体纯的”指的是其中对映体过量为99％或更高的产物。
“半衰期”指的是一半量的物质在体外或体内转化为另一种化学上不同的物质所需的时间。
“卤素”指的是卤素基团，例如氟、氯、溴或碘。
“杂芳基”指的是具有5或6个成员原子的单环或双环基团，包括1、2或3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子，其中该基团的至少一部分是芳族的。与该分子的其余部分的连接点可以是任何合适的碳或氮原子。“杂芳基”的实例包括，但不限于，呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基。
“杂原子”指的是氮、硫或氧原子。
“杂环基”指的是含有4、5、6、7、8、9或10个环成员原子的非芳族杂环单环或双环系统，包括一个杂原子并任选地含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子。“杂环基”的实例包括，但不限于，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、1,3-二氧戊环基、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、1,3-二噁烷基、1,4-二噁烷基、1,3-氧硫杂环戊烷基、1,3-氧硫杂环己烷基、1,3-二噻烷基、1,4-氧硫杂环戊烷基、1,4-氧硫杂环己烷基、1,4-二噻烷基、吗啉基、硫代吗啉基、六氢-1H-1,4-二氮杂䓬基、氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂双环[4.3.0]壬基、氧杂双环[2.2.1]庚基、1,1-二氧化四氢-2H-噻喃基、1,5,9-三氮杂环十二烷基、3-氧杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基。“4至7元杂环基”指的是含有4、5、6或7个环成员原子的非芳族杂环单环或双环系统，包括一个杂原子并任选含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子。
“成员原子”指的是形成链或环的一个或多个原子。当链中和环内存在多于一个成员原子时，每个成员原子与链或环中的相邻成员原子共价键合。构成链或环上的取代基的原子不是链或环中的成员原子。
提及基团时的“取代”表示连接在该基团内的成员原子上的氢原子被置换。应当理解，术语“取代”包括如下隐含条件，即这种取代与被取代的原子和取代基的允许价态一致，并且取代产生稳定的化合物（即不会自发地进行转化（例如，重排、环化或消除）的化合物）。在某些实施方案中，单个原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合该原子的允许价态即可。对于每个取代或任选取代的基团，本文都定义了合适的取代基。
“药学上可接受的”指的是在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触而没有过多毒性、刺激或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和剂型。
“药学上可接受的赋形剂”指的是涉及赋予药物组合物形式或稠度的药学上可接受的材料、组合物或载体。当混合时，每种赋形剂必须与药物组合物的其他成分相容，以避免当给药于患者时会显著降低式(I)化合物或其药学上可接受的盐的功效的相互作用以及避免将导致非药学上可接受的药物组合物的相互作用。此外，每种赋形剂当然必须是药学上可接受的，例如，纯度足够高。
“rac” 指的是式(I)化合物的外消旋混合物。
在整个说明书和随后的权利要求中，除非上下文另有要求，否则词语“包括”和诸如“包含”和“含有”的变体将被理解为暗示包括所述整数或步骤或整数组，但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤的组。
本发明的化合物可以以固体或液体形式存在。在固态下，本发明的化合物可以以结晶或非结晶形式存在，或以其混合物存在。对于结晶形式的本发明化合物，技术人员将理解，可以形成药学上可接受的溶剂化物，其中溶剂分子在结晶期间结合到晶格中。溶剂化物可以包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、N,N-二甲基亚砜（DMSO）、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或者它们可以包含水作为结合到晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量水的组合物。本发明包括所有这些溶剂化物。
还应理解，以结晶形式存在的某些本发明化合物，包括其各种溶剂化物，可表现出多晶型（即以不同晶体结构存在的能力）。这些不同的结晶形式通常称为“多晶型物”。本发明包括这些多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在堆积、几何排列和结晶固态的其他描述性质方面不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出不同的熔点、IR光谱和X射线粉末衍射图案，这可用于鉴定。应当理解，可以产生不同的多晶型物，例如，通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂。例如，温度、压力或溶剂的变化可能导致多晶型物。另外，一种多晶型物可在某些条件下自发地转化为另一种多晶型物。可以使用许多常规分析技术表征和区分式(I)化合物的多晶型，包括，但不限于，X射线粉末衍射（XRPD）图案、红外（IR）光谱、拉曼光谱、差示扫描量热法（DSC）、热重分析（TGA）和固态核磁共振（SSNMR）。
根据式(I)的化合物含有一个或多个不对称中心（也称为手性中心），因此可以作为单独的对映异构体、非对映异构体或其他立体异构形式或它们的混合物存在。手性中心，例如手性碳原子，也可以存在于取代基如烷基中。当未指定式(I)或本文所示的任何化学结构中存在的手性中心的立体化学时，该结构旨在涵盖任何立体异构体及其所有混合物。因此，含有一个或多个手性中心的根据式(I)的化合物可以以外消旋变体（包括外消旋混合物和外消旋体）、对映体富集的混合物、或以对映体纯的单个立体异构体的形式使用。因此，本发明包括式(I)化合物的所有异构体，无论是作为经分离例如使得基本上不含其他异构体（即纯的）的单独异构体，还是作为混合物（即外消旋体和外消旋混合物）。经分离使得基本上不含其他异构体（即纯的）的单独异构体可以被分离，使得存在少于10％，特别是少于约1％，例如少于约0.1％的另一种异构体。
具有单个立体中心的外消旋化合物用无立体化学（单键）或具有标注（+/-）或rac表示。其中相对立体化学已知的具有两个或更多个立体中心的外消旋化合物表示为顺式或反式，如在结构中所绘制。具有未知的绝对立体化学但已知的相对立体化学的已拆分的单一对映异构体用具有所绘制的适当相对立体化学的(R*或S*)表示。
在表示非对映异构体且仅涉及相对立体化学的情况下，使用粗体或散列的固体键符号
Figure 1976DEST_PATH_IMAGE002
。在已知绝对立体化学且化合物为单一对映异构体的情况下，适当使用粗体或散列的楔形符号
Figure 781713DEST_PATH_IMAGE003
。
含有一个或多个不对称中心的根据式(I)的化合物的单个立体异构体可以通过本领域技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以通过如下方法进行：（1）形成非对映异构体盐、络合物或其他衍生物；（2）通过与立体异构体特异性试剂的选择性反应，例如通过酶促氧化或还原；或（3）在手性环境中通过气-液或液相色谱法，例如在手性载体如带有结合的手性配体的二氧化硅上或在手性溶剂存在下。应当理解，当通过上述分离方法之一将所需的立体异构体转化为另一种化学实体时，需要进一步的步骤来释放所需的形式。或者，可以通过使用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种，来合成特定的立体异构体。
应当理解，对于式(I)化合物，可能观察到互变异构体。任何与互变异构体的生物活性有关的评论都应该包括两种互变异构体。
应理解，本文提及的式(I)化合物及其盐包括作为游离碱或作为其盐例如作为其药学上可接受的盐的式(I)化合物。因此，在一个实施方案中，本发明涉及作为游离碱的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其盐。在进一步的实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。
由于它们在医药中的潜在用途，式(I)化合物的盐理想地是药学上可接受的。合适的药学上可接受的盐可包括酸加成盐或碱加成盐。关于合适的药学上可接受的盐的综述，参见Berge等人, J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)。通常，通过适当使用所需的酸或碱，可以容易地制备药学上可接受的盐。所得盐可以从溶液中沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。
药学上可接受的酸加成盐可以通过式(I)化合物与合适的无机或有机酸（例如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸(如2-萘磺酸)或己酸）的反应形成，任选在合适的溶剂（如有机溶剂）中，以得到通常通过例如结晶和过滤或通过蒸发然后研磨来分离的盐。式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可包含或例如是氢溴酸盐，盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐（如2-萘磺酸盐）或己酸盐。
其他非药学上可接受的盐，例如甲酸盐或三氟乙酸盐，可以用于例如分离式(I)化合物，并且包括在本发明的范围内。
本发明在其范围内包括式(I)化合物的所有可能的化学计量和非化学计量形式的盐。
从上述内容可以理解，式(I)化合物及其盐的溶剂化物、异构体和多晶型包括在本发明范围内。
本发明还包括同位素标记的化合物或其药学上可接受的盐，其与上述式(I)中所述的那些相同，除了一个或多个原子被具有不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子替换。可以结合到本发明化合物及其药学上可接受的盐中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。
发明描述
在第一方面，提供了式(I)的化合物：
Figure 849026DEST_PATH_IMAGE004
或其盐
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R2为-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中各个杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代；或
R2为H、-CH3、任选被至多五个氟取代的C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR11R12、-(CH2)mC(O)NR11R12、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R13、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中杂芳基任选被一个或两个可以相同或不同的R14基团取代；
R3为苯基，所述苯基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R7基团取代；
R4为-C1-3烷基、-CH2OR6或-CH2F；
各个R5独立地为卤素、-C0-6烷基-R8、-O-C2-6烷基-R8、-CN 或-SO2C1-3烷基；
R6为-H或C1-3烷基；
各个R7独立地为-卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR10、-C0-3烷基-NR15R16、-C0-3烷基-CONR15R16、CN或-SO2R17；
R8为-H、-OR10a、-NR18R19或杂芳基；
各个R9独立地为卤素、C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR13、-C0-3烷基OR13、-C0-3烷基NR11R12、-NHCH2CH2OR13、-NHCO2R13、氧代、-C(O)R13、-C(O)OR13或-C(O)NR11R12；
R10a为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR11R12或-C2-3烷基OH；
R10为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR15R16或-C2-3烷基OH；
R11和R12各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
R13为-H或C1-4烷基；
各个R14独立地为卤素、C1-4烷基、环丙基、环丁基或-OR13；
R15和R16各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R15和R16可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
R17为-C1-3烷基或-NR15R16；
R18和R19各自独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C1-6烷基、环烷基、杂环基、-C2-3烷基NR13COC1-3烷基、C2-3烷基NR15R16 和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中所述-C1-6烷基和环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R18和R19可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
m为选自2、3和4的整数；
p为选自2、3和4的整数；
n为选自0、1、2、3和4的整数。
在一个实施方案中，R1为甲基、乙基、正丙基、异丙基或环丙基。在另一个实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代。在另一个实施方案中，R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基为任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代的环丙基、环丁基或环己基。在另一个实施方案中，R2为任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代的环丙基、环丁基或环己基。在再一个实施方案中，R2选自：
Figure 663398DEST_PATH_IMAGE005
Figure 485861DEST_PATH_IMAGE006
。
在一个实施方案中，R5为-C0-6烷基-R8。在另一个实施方案中，R5为甲基、-CH2OH、-OH或-CH2CH2吗啉基。
在一个实施方案中，R8为OH、甲基或吗啉基。
在一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中各个杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基，其为-杂环基、-CH2CH2-杂环基或-CH2CH2CH2-杂环基。在另一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，其任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，其任选被一个或两个选自甲基 -C(O)CH3和氟的R9基团取代。在再一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基，其中任选被一个或两个R9基团取代的杂环基选自：
Figure 752894DEST_PATH_IMAGE007
Figure 951794DEST_PATH_IMAGE008
Figure 823935DEST_PATH_IMAGE009
。
在再一个实施方案中，R2为-C0-4烷基-杂环基，其中任选被一个或两个R9基团取代的杂环基为：
Figure 817299DEST_PATH_IMAGE010
。
在一个实施方案中，p为2或3。
在一个实施方案中，R2为-H、-CH3、任选被至多五个氟取代的C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR11R12、-(CH2)mC(O)NR11R12、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R13、-(CH2)mNHCO2C(CH3)3或-(CH2)n杂芳基，其中杂芳基任选被一个或两个可以相同或不同的R14基团取代。在另一个实施方案中，R2为-H、-CH3、C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12或-(CH2)n杂芳基。在再一个实施方案中，R2 为-H、甲基、乙基、丙基、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH(CH3)OH、-CH2CH2OCH3、-CH2CH2CH2OCH3、-CH2CH2N(CH3)2、-CH2CH2CH2N(CH3)2、-CH2CHF2或-CH2CH2吡啶基。
在另一个实施方案中，R2为-(CH2)n杂芳基，其中杂芳基选自呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基，所述基团任选被一个或两个可以相同或不同的R14基团取代。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物，其中R2为-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基为任选被C1-4烷基取代的吡唑基。
在一个实施方案中，n为0、2或3。在一个实施方案中，n为0。在另一个实施方案中，n为2。
在一个实施方案中，R3为任选被-OCH3或-OCH2CH2OH取代的苯基。在另一个实施方案中，R3为苯基。
在一个实施方案中，R4为甲基、-CH2F或-CH2OH。
在一个实施方案中，式(I)化合物为式(IA)的化合物
Figure 571628DEST_PATH_IMAGE011
或其盐，其中R1、R2、R3和R4根据式(I)定义。
应当理解的是，本发明包括上文中所述的取代基的所有组合。
本发明的化合物包括实施例1至204的化合物及其盐。
本发明的化合物包括实施例1至108的化合物及其盐。
在一个实施方案中，式(I)的化合物选自：
(2R*,3R*)-N5-环丁基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-N5-环丁基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-N5-环丁基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-丙基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(2-(哌啶-4-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-N5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(3-(哌嗪-1-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-乙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1S*,2S*)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-环丙基-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5,N7-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N5,N7-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-N5-乙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N5-(2-甲氧基乙基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(2-甲氧基乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(2-羟基乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(1R,5S,6s)-6-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(2-(二甲基氨基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(3-(二甲基氨基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-N5-环丙基-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(氧杂环丁烷-3-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
2-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吗啉-2-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(3-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(3-吗啉代丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(3-甲氧基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(四氢呋喃-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(2,2-二氟乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
2-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(3-(吗啉-2-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯；
(2R,3S)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(R)-2-(3-((2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-N5-(3-((R)-吗啉-2-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-N5-(3-((S)-吗啉-2-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
3-氟-3-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N5-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1S*,2R*)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S*,2S*)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(S)-3-氟-3-(3-((2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2R*,3S*)-N5-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(R)-3-氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(R)-2-(3-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(3-((R)-吗啉-2-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(R)-2-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
4,4-二氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N5-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
3,3-二氟-4-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-N5-((1R,4S)-4-羟基环己基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-N5-((1R,3S)-3-羟基环丁基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(1R,5S,6S)-6-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(四氢呋喃-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-羟基乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S*,3S*)-N5-((1R,5S,6S)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(1R,5S,6s)-6-((2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯；
(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3R)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3R)-N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3R)-N5-乙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3R)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3R)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3R)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2R,3R)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3R)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；和
(2R,3R)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺，或其盐。
在另一个实施方案中，所述化合物选自
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(反)-3,3-二氟-4-(2-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(2R,3S)-N5-(2-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(2S,3S)-N5-(2-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；
(反)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺；和
(反)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-N5-(1S,2S)-2-甲基环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺，
或其盐。
在一个实施方案中，提供了式(I)或(Ia)的化合物，其中R1为甲基，R2为3-氧杂双环[3.1.0]己基，R3为苯基且R4为-CH2F。
在一个实施方案中，式(I)的化合物为
Figure 308640DEST_PATH_IMAGE012
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)的化合物为
Figure 832025DEST_PATH_IMAGE013
。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在本发明的第三方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，特别是用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
在本发明的第四方面，提供了在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的方法，其包括给予治疗有效量的式(I)化合物或药学上其可接受的盐。
在本发明的第五方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
用途表述
式(I)化合物及其盐是溴结构域抑制剂，因此被认为在治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症中具有潜在用途。
溴结构域抑制剂被认为可用于治疗与全身性或组织炎症、对感染或缺氧的炎症反应、细胞活化和增殖、脂质代谢、纤维化有关的各种疾病或病症以及用于预防和治疗病毒感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种急性或慢性自身免疫和/或炎性病症，如类风湿性关节炎，银屑病关节炎，强直性脊柱炎，骨关节炎，急性痛风，银屑病，系统性红斑狼疮，多发性硬化症，炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎），哮喘，慢性阻塞性气道病，肺炎，心肌炎，心包炎，肌炎，湿疹，皮炎（包括特应性皮炎），脱发，白癜风，大疱性皮肤病，肾炎，血管炎，高胆固醇血症，动脉粥样硬化，阿尔茨海默病，Sjögren综合征，涎腺炎，视网膜中央静脉阻塞，视网膜分支静脉阻塞，Irvine-Gass综合征（术后白内障和术后），视网膜色素变性，睫状体扁平部炎，鸟枪弹样视网膜脉络膜病变，视网膜外膜，囊性黄斑水肿，旁中心凹毛细管扩张，牵张性黄斑病变，玻璃体黄斑牵引综合征，视网膜脱离，视神经视网膜炎，特发性黄斑水肿，视网膜炎，干眼症（干燥性角结膜炎），春季角结膜炎，特应性角结膜炎，葡萄膜炎（如前葡萄膜炎，全葡萄膜炎，后葡萄膜炎，葡萄膜炎相关性黄斑水肿），巩膜炎，糖尿病视网膜病变，糖尿病性黄斑水肿，年龄相关性黄斑营养不良，肝炎，胰腺炎，原发性胆汁性肝硬化，硬化性胆管炎，阿狄森氏病，垂体炎，甲状腺炎，I型糖尿病，II型糖尿病，巨细胞动脉炎，肾炎（包括狼疮性肾炎），器官受累的血管炎（如肾小球肾炎），血管炎（包括巨细胞动脉炎），韦格纳肉芽肿病，结节性多发性动脉炎，白塞氏病，川崎（Kawasaki）病，高安氏（Takayasu）动脉炎，坏疽性脓皮病，器官受累的血管炎，移植器官的急性排斥和系统性硬化症。
在一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是经由APO-A1的调节介导的脂质代谢病症，例如高胆固醇血症，动脉粥样硬化或阿尔茨海默氏病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是呼吸病症，例如哮喘或慢性阻塞性气道病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是全身性炎性病症，例如类风湿性关节炎，骨关节炎，急性痛风，银屑病，系统性红斑狼疮，多发性硬化症或炎性肠病（克罗恩病或溃疡性结肠炎）。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是多发性硬化症。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是I型糖尿病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是类风湿性关节炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗抑郁症。
溴结构域抑制剂可用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症，如败血症，急性败血症，败血症综合征，败血性休克，内毒素血症，全身炎症反应综合征（SIRS），多器官功能障碍综合征，中毒性休克综合征，急性肺损伤，ARDS（成人呼吸窘迫综合征），急性肾功能衰竭，暴发性肝炎，烧伤，急性胰腺炎，术后综合征，结节病，Herxheimer反应，脑炎，脊髓炎，脑膜炎，疟疾和与流感、带状疱疹、单纯疱疹和冠状病毒等病毒感染有关的SIRS。在一个实施方案中，涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症是急性败血症。
溴结构域抑制剂可用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症，如心肌梗塞，脑血管缺血（中风），急性冠状动脉综合征，肾再灌注损伤，器官移植，冠状动脉旁路移植术，心肺旁路手术，肺、肾、肝、胃肠或外周肢体栓塞。
溴结构域抑制剂可用于治疗心血管疾病，如冠状动脉疾病（如心绞痛或心肌梗塞），肺动脉高压，脑血管缺血（中风），高血压性心脏病，风湿性心脏病，心肌病，心房颤动，先天性心脏病，心内膜炎，主动脉瘤或外周动脉疾病。
溴结构域抑制剂可用于治疗纤维化病症，如特发性肺纤维化，肺纤维化，囊性纤维化，进行性大块纤维化，肾纤维化，肝纤维化，肝硬化，非酒精性脂肪性肝炎（NASH），非酒精性脂肪性肝病（NAFLD），术后狭窄，瘢痕疙瘩形成，硬皮病（包括硬斑病和系统性硬化症），心肌纤维化，心房纤维化，心内膜纤维化，陈旧性心肌梗死，关节纤维化，Dupuytren挛缩，纵隔，骨髓纤维化，Peyronie病，肾源性系统性纤维化(nephrogenic systemic fibrosis)，腹膜后纤维化和粘连性关节囊炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗病毒感染，如单纯疱疹感染和再激活，唇疱疹（coldsores），带状疱疹感染和再激活，水痘，带状疱疹，人乳头瘤病毒（HPV），人类免疫缺陷病毒（HIV），宫颈瘤，腺病毒感染（包括急性呼吸道疾病），痘病毒感染（如牛痘或天花），或非洲猪瘟病毒。在一个实施方案中，病毒感染是皮肤或宫颈上皮细胞的HPV感染。在另一个实施方案中，病毒感染是潜伏的HIV感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种骨病，例如骨质疏松症，骨质减少，骨关节炎和强直性脊柱炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗癌症，包括血液癌症（例如白血病，淋巴瘤和多发性骨髓瘤），上皮癌（包括肺癌，乳腺癌或结肠癌），中线癌，或间质瘤，肝癌，肾癌或神经肿瘤。
溴结构域抑制剂可用于治疗一种或多种癌症，所述癌症选自：脑癌（神经胶质瘤），胶质母细胞瘤，Bannayan-Zonana综合征，Cowden病，Lhermitte-Duclos病，乳腺癌，炎性乳腺癌，结肠直肠癌，Wilm肿瘤，尤因氏肉瘤，横纹肌肉瘤，室管膜瘤，髓母细胞瘤，结肠癌，头颈癌，肾癌，肺癌，肝癌，黑色素瘤，鳞状细胞瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，肉瘤，骨肉瘤，骨巨细胞瘤，甲状腺癌，成淋巴细胞性T细胞白血病，慢性髓性白血病，慢性淋巴细胞白血病，毛细胞白血病，急性成淋巴细胞性白血病，急性髓性白血病，慢性中性粒细胞白血病，急性成淋巴细胞性T细胞白血病，浆细胞瘤，免疫母细胞大细胞白血病，套细胞白血病，多发性骨髓瘤，巨核细胞白血病，急性巨核细胞白血病，早幼粒细胞白血病，混合性白血病，红白血病，恶性淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤，伯基特氏淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，神经母细胞瘤，膀胱癌，尿路上皮癌，外阴癌，宫颈癌，子宫内膜癌，肾癌，间皮瘤，食道癌，涎腺癌，肝细胞癌，胃癌，鼻咽癌，颊癌，口腔癌，GIST（胃肠道间质瘤），NUT-中线癌和睾丸癌。
在一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病，急性髓性白血病，慢性髓性白血病，慢性淋巴细胞白血病和混合性白血病（MLL）的白血病。在另一个实施方案中，癌症是NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌（SCLC）。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特氏淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食道癌。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是去势抗性前列腺癌。
溴结构域抑制剂可用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病，例如败血症，烧伤，胰腺炎，重度创伤，出血和缺血。在该实施方案中，溴结构域抑制剂将在诊断时给药以降低SIRS、休克发作、多器官功能障碍综合征（其包括急性肺损伤的发作），ARDS，急性肾、肝、心脏或胃肠损伤的发生率和死亡率。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂可在与高风险的败血症、出血、大面积组织损伤、SIRS或MODS（多器官功能障碍综合征）相关的外科手术或其他程序之前给药。在一个特定的实施方案中，适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症是败血症，败血症综合征，败血性休克和内毒素血症。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗急性或慢性胰腺炎。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗烧伤。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。式(I)化合物或其药学上的盐可用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗心血管疾病。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗纤维化病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗病毒感染。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗骨病。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。在再一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病。
还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症的药物中的用途。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗纤维化病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗病毒感染的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在再一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病的药物中的用途。
还提供了在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗心血管疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗纤维化病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗病毒感染的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在再一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
适合地，需要治疗的对象是哺乳动物，特别是人。
本发明还提供抑制含有溴结构域的蛋白质的方法，该方法包括使含有溴结构域的蛋白质与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。
如本文所用的，对特定疾病或病症的“治疗”的提及包括防止或预防这种疾病或病症。
药物组合物/给药途径/剂量
组合物
虽然为了用于治疗，可以将式(I)化合物及其药学上可接受的盐作为原料化学品给药，但是通常将活性成分呈现为药物组合物。式(I)化合物及其药学上可接受的盐在给药于患者之前通常但不是必须配制成药物组合物。因此，在另一方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的赋形剂。所述式(I)化合物和药学上可接受的盐如上所述。所述赋形剂在与所述组合物的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上必须是可接受的。根据本发明的另一个方面，还提供了制备药物组合物的方法，包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。该药物组合物可用于治疗本文所述的任何病症。
在另一方面，本发明涉及用于治疗或预防适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
由于式(I)化合物旨在用于药物组合物，因此很容易理解它们各自优选以基本上纯的形式提供，例如，至少85％纯，特别是至少98％纯（％基于重量/重量）。
药物组合物可以以每单位剂量含有预定量活性成分的单位剂型存在。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的日剂量或亚剂量或其适当分数的那些。因此，这样的单位剂量可以每天给药超过一次。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的如上所述的日剂量或亚剂量（用于每天给药超过一次），或其适当分数的那些。
药物组合物可以适于通过任何适当的途径给药，例如通过口服（包括口腔或舌下），直肠，吸入，鼻内，局部（包括口腔、舌下或透皮），眼部（包括局部、眼内、结膜下、巩膜外、眼球筋膜下），阴道或肠胃外（包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内）途径。此类组合物可通过药学领域中已知的任何方法制备，例如通过使活性成分与一种或多种载体或赋形剂结合。
本发明的药物组合物可以以散装形式制备和包装，其中可以提取安全有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，然后例如以粉末或糖浆给予患者。或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型制备和包装，其中每个物理上离散的单元含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物通常可含有，例如，0.25mg至1g，或0.5mg至500mg，或1mg至100mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的药物组合物通常含有一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
通常将式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂配制成适于通过所需给药途径给药于患者的剂型。例如，剂型包括适于下列方式给药的那些剂型：（1）口服给药，例如片剂，胶囊，囊片，丸剂，锭剂，粉末，糖浆，酏剂，混悬液，溶液，乳液，小药囊（sachet）和扁囊剂；（2）肠胃外给药，如无菌溶液，混悬液和用于复溶的粉末；（3）透皮给药，例如透皮贴剂；（4）直肠给药，例如栓剂；（5）吸入，如气溶胶，溶液和干粉；（6）局部给药，如乳膏，软膏，洗液，溶液，糊剂，喷雾剂，泡沫和凝胶。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选的具体剂型而变化。另外，可以为了其在组合物中可以提供的特定功能而选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于产生均匀剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于产生稳定剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于给药于对象后将一种或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐从一个器官或身体的一部分携带或运输至另一个器官或身体的一部分。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够增强对象顺应性。
合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：载体，稀释剂，填充剂，粘合剂，崩解剂，润滑剂，助流剂，造粒剂，包衣剂，润湿剂，溶剂，共溶剂，助悬剂，乳化剂，甜味剂，调味剂，掩味剂，着色剂，抗结块剂，保湿剂，螯合剂，增塑剂，增粘剂，抗氧化剂，防腐剂，稳定剂，表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以起到多于一种的功能，并且可以起到替代功能，这取决于制剂中存在多少赋形剂以及制剂中存在哪些其他赋形剂。
技术人员具有本领域的知识和技能，使他们能够选择适当量的合适的药学上可接受的赋形剂以用于本发明。此外，存在许多技术人员可获得的资源，其描述了药学上可接受的赋形剂，并且可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association和the Pharmaceutical Press)。
使用本领域技术人员已知的技术和方法制备本发明的药物组合物。Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)中描述了本领域常用的一些方法。
因此，在另一方面，本发明涉及制备包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的方法，其包括混合所述成分。包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以通过例如在环境温度和大气压下混合来制备。
在一个实施方案中，药物组合物适于肠胃外给药，特别是静脉内给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于口服给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于局部给药。
适于肠胃外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液（其可含有抗氧化剂，缓冲剂，抑菌剂和使组合物与预期接受者的血液等渗的溶质）和水性和非水性无菌混悬液（其可以包括助悬剂和增稠剂）。组合物可以以单位剂量或多剂量容器存在，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以以冷冻干燥（冻干）状态储存，仅需要在临用前添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适于口服给药的药物组合物可以作为离散单位存在，例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；含水或非水液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫或起泡剂（whips）；或水包油液体乳液或油包水液体乳液。
例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可与口服无毒的药学上可接受的惰性载体（如乙醇、甘油、水等）组合。适于掺入片剂或胶囊中的粉末可以通过将化合物减小到合适的细小尺寸（例如通过微粉化）并与类似制备的药物载体（如可食用的碳水化合物（例如淀粉或甘露醇））混合来制备。还可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊可以通过制备如上所述的粉末混合物并填充成形的明胶壳来制备。可以在填充操作之前将助流剂和润滑剂（如胶体二氧化硅，滑石，硬脂酸镁，硬脂酸钙或固体聚乙二醇）加入到粉末混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善胶囊被摄入时药物的可用性。
此外，当需要或必要时，也可将合适的粘合剂，助流剂，润滑剂，甜味剂，调味剂，崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉，明胶，天然糖（如葡萄糖或β-乳糖），玉米甜味剂，天然和合成树胶（如阿拉伯树胶，黄蓍胶或海藻酸钠），羧甲基纤维素，聚乙二醇，蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠，硬脂酸钠，硬脂酸镁，苯甲酸钠，乙酸钠，氯化钠等。崩解剂包括淀粉，甲基纤维素，琼脂，膨润土，黄原胶等。片剂例如通过制备粉末混合物，制粒或击压（slugging），添加润滑剂和崩解剂并压制成片剂来配制。粉末混合物通过如下方法制备：将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质，以及任选地，粘合剂（如羧甲基纤维素，海藻酸盐，明胶或聚乙烯吡咯烷酮），溶解阻滞剂（如石蜡），再吸收促进剂（如季铵盐）和/或吸收剂（如膨润土，高岭土或磷酸二钙）混合。粉末混合物可以通过用粘合剂（如糖浆，淀粉糊，阿卡迪亚（acadia）粘液或纤维素或聚合物材料的溶液）润湿并强制通过筛网来造粒。作为造粒的替代方案，可以将粉末混合物通过压片机，结果是破碎成颗粒的不完全形成的块状物。可以通过添加硬脂酸，硬脂酸盐，滑石或矿物油来润滑颗粒以防止粘附到片剂成形模具上。然后将润滑后的混合物压制成片剂。式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可与自由流动的惰性载体混合，直接压制成片剂，而无需经过制粒或击压步骤。可提供透明或不透明的保护包衣，所述包衣由虫胶密封包衣，糖或聚合物材料包衣和蜡的抛光包衣组成。可以将染料添加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服液如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制备，使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的酒精载体制备。混悬液可以通过将化合物分散在无毒载体中来配制。还可以加入增溶剂和乳化剂（如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚），防腐剂，调味添加剂（如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂）等。
可以设计用于口服给药的组合物以提供改变的释放曲线，从而维持或以其他方式控制治疗活性剂的释放。
适当时，可以将用于口服给药的剂量单位组合物微囊化。可以将组合物制备成延长或维持释放，例如通过将颗粒材料涂覆或包埋在聚合物、蜡等中。
对于适合和/或适于口服给药的组合物，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。粒径减小的（例如微粉化的）化合物或盐的优选粒径限定为约0.5至约10微米的D50值（例如使用激光衍射测量）。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可以以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层脂囊，大单层脂囊和多层脂囊。脂质体可以由多种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
适于局部给药的药物组合物可以配制成软膏，乳膏，混悬液，乳液，洗剂，粉末，溶液，糊剂，凝胶，泡沫，喷雾剂，气溶胶或油。此类药物组合物可包括常规添加剂，其包括，但不限于，防腐剂，有助于药物渗透的溶剂，共溶剂，软化剂，推进剂，粘度调节剂（胶凝剂），表面活性剂和载体。在一个实施方案中，提供了适于局部给药的药物组合物，其包含占组合物重量的0.01-10％，或0.01-1％的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
对于眼睛或其他外部组织（例如口腔和皮肤）的治疗，组合物优选作为局部软膏，乳膏，凝胶，喷雾或泡沫施用。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，可以将活性成分配制成具有水包油乳膏基质或油包水基质的乳膏。
适于局部给药于眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是含水溶剂中。给药于眼睛的组合物具有眼科相容的pH和渗透压（osmolality）。一种或多种眼科上可接受的pH调节剂和/或缓冲剂可包括在本发明的组合物中，包括酸，例如乙酸，硼酸，柠檬酸，乳酸，磷酸和盐酸；碱如氢氧化钠，磷酸钠，硼酸钠，柠檬酸钠，乙酸钠和乳酸钠；和缓冲液，如柠檬酸盐/右旋糖，碳酸氢钠和氯化铵。这些酸、碱和缓冲剂可以以将组合物的pH维持在眼科可接受范围内所需的量包括在内。一种或多种眼科上可接受的盐可以以足以使组合物的渗透压达到眼科可接受的范围的量包含在组合物中。这些盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐。
眼部递送装置可以设计用于控制释放一种或多种具有多种确定的释放速率和持续剂量动力学和渗透性的治疗剂。控制释放可以通过设计聚合物基质（结合可生物降解/可生物蚀解聚合物（例如聚(乙烯-乙酸乙烯酯)（EVA），超水解PVA），羟烷基纤维素（HPC），甲基纤维素（MC），羟丙基甲基纤维素（HPMC），聚己内酯，聚乙醇酸，聚乳酸，聚酸酐的不同选择和性质），聚合物分子量，聚合物结晶度，共聚物比例，加工条件，表面光洁度，几何学，赋形剂添加和增强药物扩散、侵蚀、溶出和渗透的聚合物包衣而获得。
用于眼部递送的药物组合物还包括原位可胶凝化的含水组合物。这种组合物包含胶凝剂，其浓度有效地在与眼睛或泪液接触时促进胶凝化。合适的胶凝剂包括，但不限于，热固性聚合物。本文所用的术语“原位可胶凝化”不仅包括与眼睛或泪液接触时形成凝胶的低粘度液体，还包括更粘稠的液体，如半流体和触变凝胶，其在给药于眼睛时显示出显着增加的粘度或凝胶硬度。参见，例如，Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595- 639，因为其教导了用于眼部药物递送的聚合物实例，在此引入作为参考。
用于鼻或吸入给药的剂型可以方便地配制成气溶胶，溶液，混悬液，凝胶或干粉。
对于适合和/或适于吸入给药的组合物，优选式(I)化合物或其药学上可接受的盐为粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。粒径减小的（例如微粉化的）化合物或盐的优选粒径限定为约0.5至约10微米（例如使用激光衍射测量）的D50值。
气溶胶制剂，例如用于吸入给药，可包括活性物质在药学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液。气雾剂制剂可以以密封容器中无菌形式的单剂量或多剂量存在，密封容器可以采用药筒或再填充的形式与雾化装置或吸入器一起使用。或者，密封容器可以是整体分配装置，例如单剂量鼻吸入器或装配有计量阀的气溶胶分配器（计量剂量吸入器），其意图为一旦容器内容物已经用尽就丢弃。
在剂型包含气雾剂分配器的情况下，其优选在压力下包含合适的推进剂，例如压缩空气，二氧化碳或有机推进剂，例如氢氟烃（HFC）。合适的HFC推进剂包括1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷和1,1,1,2-四氟乙烷。气溶胶剂型也可以采用泵式雾化器的形式。加压气溶胶可含有活性化合物的溶液或悬浮液。这可能需要掺入另外的赋形剂，例如共溶剂和/或表面活性剂，以改善悬浮制剂的分散特性和均匀性。溶液制剂还可能需要添加共溶剂，例如乙醇。
对于适合和/或适于吸入给药的药物组合物，药物组合物可以是干粉可吸入组合物。这种组合物可包含粉末基质（例如乳糖，葡萄糖，海藻糖，甘露糖醇或淀粉），式(I)化合物或其药学上可接受的盐（优选粒径减小的形式，例如微粉化形式），和任选地，性能改性剂如L-亮氨酸或另一种氨基酸和/或硬脂酸的金属盐（如硬脂酸镁或硬脂酸钙）。优选地，干粉可吸入组合物包含乳糖（例如乳糖一水合物）和式(I)化合物或其盐的干粉混合物。这样的组合物可以使用合适的装置给药于患者，例如由GlaxoSmithKline销售的DISKUS®装置，其描述在，例如，GB 2242134 A中。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以配制成用于从流体分配器递送的流体制剂，例如具有分配喷嘴或分配孔的流体分配器，当将用户施加的力施加到流体分配器的泵机构时，通过该分配喷嘴或分配孔分配计量剂量的流体制剂。这种流体分配器通常设置有流体制剂的多个计量剂量的储存器，该剂量可在顺序泵致动时分配。分配喷嘴或孔可构造成用于插入使用者的鼻孔中，以将流体制剂喷雾分配到鼻腔中。在国际专利申请WO-A-2005/044354中描述和说明了上述类型的流体分配器。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，患者的年龄和体重，需要治疗的确切病症及其严重程度，制剂的性质以及给药途径，并且最终由主治医生或兽医决定。在药物组合物中，以游离碱计算，用于口服或肠胃外给药的每个剂量单位优选含有0.01mg至3000mg，更优选0.5mg至1000mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。以游离碱计算，用于经鼻或吸入给药的每个剂量单位优选含有0.001mg至50mg，更优选0.01mg至5mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
药学上可接受的式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以以如下每日剂量（对于成年患者）给药，例如，以游离碱计算，每天0.01mg至3000mg，每天0.5mg至1000mg或每天100mg至2500mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的口服或肠胃外剂量，或每天0.001mg至50mg或每天0.01mg至5mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的经鼻或吸入剂量。该量可以以每天单次剂量给药或更通常以每天多次（例如两次，三次，四次，五次或六次）亚剂量给药，使得每日总剂量相同。其盐的有效量可以根据式(I)化合物自身的有效量的比例确定。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以单独使用或与其他治疗剂组合使用。因此，根据本发明的组合疗法包括给药至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和使用至少一种其他治疗活性剂。式(I)化合物及其药学上可接受的盐和其他一种或多种治疗活性剂可以在单一药物组合物中一起给药或分开给药，并且当分开给药时，给药可以同时或以任何顺序依次发生。选择一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐和一种或多种其他治疗活性剂的用量和给药的相对时机，以达到所需的联合治疗效果。因此，在另一方面，提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其他治疗活性剂的组合。
因此，在一个方面，根据本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以与一种或多种其他治疗剂组合使用或包括一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂例如选自抗生素，抗病毒药，糖皮质激素，毒蕈碱拮抗剂，β-2激动剂和维生素D3类似物。在进一步的实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以与适用于治疗癌症的其他治疗剂组合使用。这些其他治疗剂的实例描述于V.T.Devita和S. Hellman（编辑）的Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版（2001年），Lippincott Williams & Wilkins Publishers。基于药物的特定特征和所涉及的癌症，本领域普通技术人员将能够辨别哪些药剂组合会是有用的。与式(I)化合物或其药学上可接受的盐组合使用的其他治疗剂包括，但不限于，抗微管剂（如二萜类化合物和长春花生物碱）；铂配位配合物；烷基化剂（如氮芥，氧氮磷杂环己烯（oxazaphosphorines），烷基磺酸盐，亚硝基脲和三氮烯）；抗生素（如蒽环霉素，放线菌素和博来霉素）；拓扑异构酶II抑制剂（如表鬼臼毒素）；抗代谢物（如嘌呤和嘧啶类似物以及抗叶酸化合物）；拓扑异构酶I抑制剂（如喜树碱；激素和激素类似物）；信号传导通路抑制剂（如酪氨酸受体抑制剂）；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂（如PD-1抑制剂，包括纳武单抗（nivolumab）和派姆单抗（pembrolizumab），以及CTLA-4抑制剂，包括伊匹单抗（ipilimumab））；促凋亡剂；表观遗传或转录调节剂（如组蛋白去乙酰化酶抑制剂）和细胞周期信号传导抑制剂。
应当理解，当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与通常通过吸入、静脉内、口服或鼻内途径给药的其他治疗剂联合给药时，所得药物组合物可以通过相同途径给药。或者，组合物的各个组分可以通过不同途径给药。
本发明的一个实施方案包括包含一种或两种其他治疗剂的组合。
对于本领域技术人员显而易见的是，在适当的情况下，其他治疗剂可以以盐的形式（例如作为碱金属盐或胺盐或作为酸加成盐），或前药，或者作为酯（例如低级烷基酯），或作为溶剂化物（例如水合物）使用，以优化该治疗剂的活性和/或稳定性和/或物理特性，例如溶解度。还将清楚的是，在适当的情况下，该治疗剂可以以光学纯的形式使用。
上述组合可以方便地以药物组合物的形式使用，因此包含如上定义的组合和药学上可接受的赋形剂的药物组合物代表本发明的另一方面。
合成路线
本发明化合物可通过多种方法制备，包括标准化学方法。除非另有说明，否则任何先前定义的变量将继续具有先前定义的含义。说明性的一般合成方法在以下方案中列出，并且可以容易地适用于制备本发明的其他化合物。在实施例部分中制备了本发明的具体化合物。
式(I)化合物可如以下任一方案中所述制备：
方案1：
Figure 933974DEST_PATH_IMAGE014
关于以上方案1中所示的步骤，可以使用以下反应条件来获得其中R4是甲基的式(I)化合物：
步骤1：是烷基化反应，并且可以在合适的碱（例如碳酸钾）和合适的催化剂（例如碘化钾）存在下，在合适的溶剂（如丙酮）中，在合适的温度（例如回流温度）下使用式R3-CH=CH-CH2Hal的肉桂酰卤（例如肉桂酰氯）进行。
步骤2：是Claisen重排反应，其可以在合适的高沸点溶剂（如N,N-二甲基苯胺）中，在合适的温度（如回流温度）下进行。
步骤3：是酰胺形成反应，并且可以使用适当的伯胺R1NH2（例如甲胺），在合适的溶剂（如THF和水的混合物）中，在合适的温度（如室温）下进行。
步骤4：是环化反应，并且可以在合适的酸（如三氟乙酸）中，在合适的温度（如回流温度）下进行。在这些条件下，产物通常以顺式和反式异构体的混合物形式例如顺式和反式异构体的1:1混合物获得。
步骤5：是溴化反应，其可以使用合适的溴化剂（如NBS），在合适的溶剂（如二氯甲烷）中，在合适的温度（如室温）下进行。
步骤6：是氨基羰基化反应，可以使用适当的一氧化碳源（例如八羰基二钴），在合适的式R2NH2的伯胺存在下，使用适当的催化剂（如乙酸钯(II)）和合适的配体（如二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦），在合适的叔胺（如DMAP）存在下，在合适的溶剂（如2-甲基四氢呋喃）中，在微波辐射下在合适的温度（例如在100℃和120℃之间）进行。
步骤7：是任选的异构体分离，其可以使用适当的色谱系统（固相或液相）进行。该步骤可以作为合成式(I)化合物的最后步骤进行，但也可以在步骤4或步骤5之后进行。在这种情况下，溴化反应和/或氨基羰基化反应将分别用顺式和反式异构体进行。或者，该步骤可以手性进行。
还应该理解，步骤4至6的产物可以通过本领域技术人员已知的方法（例如手性柱色谱法纯化）分离成单一对映异构体。在这种情况下，使用与外消旋体相同的方法，获得为单一对映异构体的所有后续中间体和实施例。
方案2：
Figure 175599DEST_PATH_IMAGE015
对于以上方案2中所示的步骤，可以使用以下反应条件来获得式（1）化合物：
步骤1：是烷基化反应，并且可以在合适的碱（例如碳酸钾）和合适的催化剂（例如碘化钾）存在下，在合适的溶剂（如丙酮）中，在合适的温度（例如回流温度）下使用式R3-CH=CH-CH2Hal的肉桂酰卤（例如肉桂酰氯）进行。
步骤2：是Claisen重排反应，其可以在合适的高沸点溶剂（如N,N-二甲基苯胺）中，在合适的温度（如回流温度）下进行。
步骤3：是酰胺形成反应，并且可以使用适当的伯胺R1NH2（例如甲胺），在合适的溶剂（如THF和水的混合物）中，在合适的温度（如室温）下进行。
步骤4：是环氧化反应，并且可以使用适当的氧化剂（如m-CPBA），在合适的溶剂（如二氯甲烷）中，在合适的温度（如室温）下进行。在这些条件下，产物通常以非对映异构体的混合物形式（例如非对映异构体的1:1混合物）获得。或者，该步骤可以手性进行。
步骤5：是通过环氧化物开环、然后苄基位置的差向异构化的环化反应，得到异构体的混合物，其中热力学上更稳定的反式异构体的存在比例等于或高于顺式异构体。反式/顺式异构体的比例可以大于95/5。该反应可以使用适当的碱(例如氢氧化钾)，在合适的溶剂(如DMSO和水的混合物)中，在合适的温度(如0℃)下进行。
步骤6：是羰基化反应。该反应可以使用适当的一氧化碳源（如一氧化碳气体），在合适的催化剂（如乙酸钯(II)），合适的配体(如Xantphos)，适当的叔胺(如三乙胺)存在下，在适当的溶剂(例如DMF和醇RxOH的混合物（以合适的比例如2:1），其中Rx是C1-6烷基)中，在适当的温度(如70℃)下进行。
步骤7：是皂化反应，其可以使用适当的氢氧化物盐(如氢氧化钠)，在适当的溶剂(如醇（如乙醇）和水的混合物)中，在适当的温度(如室温)下进行。
步骤8：是用氟原子取代羟基。该反应可以使用适当的氟化剂（例如deoxofluor），在合适的溶剂（如二氯甲烷）中，在合适的温度（例如在0℃和40℃之间）进行。
步骤9：是：1）用卤素（例如碘）取代羟基，其可以使用适当的卤素源（如碘（diodine）），在三取代膦（如三苯基膦）和弱碱(例如咪唑)的存在下，在合适的溶剂(如二氯甲烷)中，在合适的温度(如室温)下进行；或2）形成磺酸酯(如甲磺酸酯)。这可以使用适当的磺酰化剂源(例如甲磺酰氯)，在叔胺(如三乙胺)存在下，在合适的溶剂(如二氯甲烷)中，在合适的温度(如室温)下进行。
步骤10：是还原反应。该反应可以使用适当的还原剂(例如硼氢化锂)，在合适的溶剂（如THF）中，在合适的温度(如0℃和室温之间)进行(其中X为RSO2O-，其中X为C1-6烷基)。其还可以使用适当的氢气源(如氢气)，在适当的催化剂(如碳载钯)和适当的碱(如三烷基胺（如三乙胺）)存在下，在适当的溶剂（例如醇（如甲醇））中，在适当的温度(如室温)下进行（其中X是卤素（如碘））。
步骤11：是酰胺形成反应，其可以使用适当的活化剂(如HATU)，在适当的碱（如三烷基胺（例如三乙胺或二异丙基乙胺）或吡啶）存在下，并使用适当的伯胺R2NH2，在适当的溶剂(如二氯甲烷或DMF)中，在适当的温度(如室温)进行。
步骤12：是氨基羰基化反应，可以使用适当的一氧化碳源（例如八羰基二钴），在合适的式R2NH2的伯胺存在下，使用适当的催化剂（如乙酸钯(II)和合适的配体（如二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦），在合适的叔胺（如DMAP）存在下，在合适的溶剂（如 2-甲基四氢呋喃中，在微波辐射下在合适的温度（例如在100℃和120℃之间）进行。
步骤13：是用氟原子取代羟基。这可以使用适当的氟化剂（如全氟-1-丁烷磺酰氟和三乙胺三氢氟酸盐），在合适的溶剂（如二氯甲烷）中，用合适的碱(如DIPEA)和在合适的温度（如室温）下进行。
步骤14：是氨基羰基化反应，并且可以使用适当的一氧化碳源（例如CO（气）），在合适的式R2NH2的伯胺存在下，使用适当的催化剂（如乙酸钯(II)）和合适的配体（如4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨），在合适的胺（如2,6-二甲基吡啶）存在下，在合适的溶剂（如1,4-二噁烷）中，在合适的温度(例如在80℃和100℃)之间和在1和2巴之间的压力下进行。
应理解，如果需要，可以进一步修饰步骤11或12获得的化合物。特别是，可能需要从存在于R2中的胺除去保护基(例如氨基甲酸叔丁酯保护基)。这可以通过在合适的溶剂（如二氯甲烷）中，在合适的温度（如室温）下使用适当的强酸（如三氟乙酸）来实现。还可能需要使R7取代基(如苄氧基衍生物)脱保护以产生相应的酚。这可以通过，例如，在适当的催化剂（如碳载钯）存在下，在适当的溶剂(如醇，例如甲醇)中，在适当的温度（如室温）下使用氢源（如氢气）来实现。
应当理解，从步骤5开始获得的所有衍生物都是外消旋的，并且可以通过本领域技术人员已知的技术（如手性柱色谱法纯化）分离成它们的两种对映异构体。
方案3：
Figure 450723DEST_PATH_IMAGE016
对于以上方案3中所示的步骤，可以使用以下反应条件来获得式(I)化合物：
步骤1：是烷基化反应，并且可以在适当的碱（例如碳酸钾）存在下，在适当的溶剂（如DMF）中，在适当的温度（例如室温）下使用适当的烷化剂（如炔丙基溴）进行。
步骤2：是环化反应，并且可以使用适当的催化剂（如(乙腈)[(2-联苯基)二叔丁基膦]金(I)六氟锑酸盐），在适当的溶剂（例如二氯甲烷）中，在合适的温度（如室温）下进行。
步骤3：是皂化反应，其可以使用适当的氢氧化物盐(如氢氧化钠)，在适当的溶剂(如THF、甲醇和和水的混合物)中，在适当的温度(如室温)下进行。
步骤4：是酰胺形成反应。该反应可以通过酰化剂（例如酰氯）与适当的胺 R1NH2的反应进行。酰氯可以使用适当的氯化物源（如草酰氯），在催化量的DMF存在下，在适当的溶剂（如二氯甲烷）中，在适当的温度（如室温）下由相应的酸制备。酰氯和胺R1NH2可以在适当的叔胺(如DIPEA)存在下，在适当的溶剂(如二氯甲烷)中，在适当的温度(如室温)下反应。
步骤5：是羰基化反应。该反应可以使用适当的一氧化碳源(如一氧化碳气体)，在适当的醇RxOH(其中Rx是C1-6烷基)、适当的催化剂（例如乙酸钯（II））、适当的配体（例如Xantphos）、适当的叔胺（如三乙胺）存在下，在适当的溶剂（如DMF）中，并在适当的温度（如70℃）下进行。
步骤6：是溴化反应。该反应可以使用适当的溴源（如溴（dibromine）），在适当的溶剂（如二氯甲烷）中，在适当的温度（如室温和回流温度之间）下进行。
步骤7：是芳基-芳基偶联反应。该反应可以使用适当的硼酸或酯R3PhB(ORy)2（Ry为H或烷基）（例如(3-(苄氧基)苯基)硼酸），在适当的催化剂（如乙酸钯(II)）、适当的配体（如二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦）和适当的碱（如碳酸钾）存在下，在适当的溶剂（如THF）中，在适当的温度（如室温）下进行。
步骤8：是氢化反应，其可以使用适当的氢气源（例如氢气），在适当的压力（例如70巴）下，在适当的催化剂（例如碳载钯）存在下，在适当的温度（例如70℃）下，在适当的溶剂（如MeOH）中进行。
步骤9：是差向异构化步骤，并且可以在适当的碱（例如DBU）存在下，在适当的溶剂（例如CH3CN）中和在适当的温度（例如100℃）下进行。
步骤10：是皂化反应，其可以使用适当的氢氧化物盐(如氢氧化钠)，在适当的溶剂(如醇（如乙醇）和水的混合物)中，在适当的温度(如室温)下进行。
步骤11：是酰胺形成反应，其可以使用适当的活化剂(如HATU)，在适当的碱(例如三烷基胺（例如三乙胺或二异丙基乙胺）或吡啶)和适当的伯胺R2NH2存在下，在适当的溶剂（如二氯甲烷或DMF）中，在适当的温度（如室温）下进行。
实施例
一般方法
一般实验细节
所有提及的温度均以℃为单位。
如本文所用的，在这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例与当代科学文献（例如，Journal of the American Chemical Society）中使用的符号和惯例一致。除非另有说明，否则所有原料均得自商业供应商并且无需进一步纯化即可使用。具体地，在实施例和整个说明书中可能使用以下缩略语：
缩略语
AcOH 乙酸
BBr3 三溴化硼
BOC/Boc 叔丁氧基羰基
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
BuLi 丁基锂
Cs2CO3 碳酸铯
CHCl3 氯仿
Cobalt carbonyl 八羰基二钴
CV 柱体积
DMSO- d6 氘代二甲基亚砜
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIBAL-H 二异丁基氢化铝
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DMSO-d6 氘代二甲基亚砜
DPPA 叠氮磷酸二苯酯
dppb 1,4-双(二苯基膦基)丁烷
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Et3N 三乙胺
Et2O 乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCl 盐酸
HCO2H 甲酸
IPA 异丙醇
Isolera Biotage快速纯化系统
KCN 氰化钾
K2CO3 碳酸钾
KI 碘化钾
KOH 氢氧化钾
LCMS 液相色谱-质谱
LiBH4 硼氢化锂
LiOH 氢氧化锂
M 摩尔(浓度)
mCPBA 间氯过氧苯甲酸
MDAP 质量导向自动制备（mass directed autoprep）
MeCN 乙腈
MeI 碘甲烷
MeOH 甲醇
2-MeTHF 2-甲基四氢呋喃
MgSO4 硫酸镁
min 分钟
MsCl 甲磺酰氯
MTBE 甲基叔丁基醚
N 当量浓度
N2 氮
Na2CO3 碳酸钠
NaI 碘化钠
NaH 氢化钠
NaOH 氢氧化钠
Na(OAc)3BH 三乙酰氧基硼氢化钠
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代丁二酰亚胺
NEt3 三乙胺
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NUT 睾丸核蛋白
Pd/C 碳载钯
PPh3 三苯基膦
Ph3PO 三苯基氧化膦
RBF 圆底烧瓶
Rt 保留时间
rt 室温
sat 饱和
SCX Isolute 强阳离子交换吸附剂SPE
SiO2 二氧化硅
SNAP Biotage (硅胶)快速色谱柱
SP4 Biotage快速纯化系统
SPE 固相萃取
TBME 叔丁基甲醚
Tf2O 三氟甲烷磺酸酐
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TMSCl/TMS-Cl 三甲基氯硅烷
TLC 薄层色谱
Ts 甲苯磺酰基
UPLC 超高效液相色谱
XantPhos 1,1'-(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双[1,1-二苯基膦。
使用化合物命名程序“ACD Name Pro 6.02”或使用ChemDraw Ultra 12.0的命名功能得到下列化合物的名称。
LCMS方法
甲酸法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v甲酸的水溶液
B = 0.1% v/v甲酸的乙腈溶液
所用梯度为：
时间 (min) 流速 (mL/min) %A %B
0 1 97 3
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 97 3
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS ： Waters ZQ
电离模式 ： 交替扫描正负电喷雾
扫描范围 ： 100至1000 AMU
扫描时间 ： 0.27 sec
扫描延迟间隔时间 ： 0.10 sec。
高pH法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 10 mM碳酸氢铵水溶液，用氨溶液调至pH10
B = 乙腈
所用梯度为：
时间(min) 流速(mL/min) %A %B
0 1 97 3
0.05 1 97 3
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 97 3
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS ： Waters ZQ
电离模式 ： 交替扫描正负电喷雾
扫描范围 ： 100至1000 AMU
扫描时间 ： 0.27 sec
扫描延迟间隔时间 ： 0.10 sec。
TFA法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v 三氟乙酸的水溶液
B = 0.1% v/v三氟乙酸的乙腈溶液
所用梯度为：
时间(min) 流速(mL/min) %A %B
0 1 95 5
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 95 5
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS ： Waters ZQ
电离模式 ： 交替扫描正负电喷雾
扫描范围 ： 100至1000 AMU
扫描时间 ： 0.27 sec
扫描延迟间隔时间 ： 0.10 sec。
通用MDAP纯化方法
下面列出的是已经使用或可以用于化合物纯化的质量导向自动制备色谱（MDAP）方法的实例。
MDAP (高pH法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用氨溶液调节至pH 10的10 mM碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和乙腈 (溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (甲酸法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用0.1% 甲酸的水溶液(溶剂A)和0.1% 甲酸的乙腈溶液(溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (TFA法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用0.1% v/v 三氟乙酸的水溶液(溶剂A)和0.1% v/v三氟乙酸的乙腈溶液(溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
NMR
在400 MHz或600 MHz NMR仪器上在302 K运行光谱。
色谱法的GLOBAL 梯度如下(溶剂B极性成分，CV = 柱体积)：10% GLOBAL：2 CV的3% B，经10 CV3至13% B，然后5 CV的13% B；20% GLOBAL：2 CV的5% B，经10 CV5至20% B，然后5 CV的20% B；30% GLOBAL：2 CV的8% B，经10 CV8至38% B，然后5 CV的38% B；40%GLOBAL：2 CV的10% B，经10 CV10至50% B，然后5 CV的50% B；50% GLOBAL：2 CV的13% B，经10 CV13至63% B，然后5 CV的63% B。100% GLOBAL：2 CV的25% B，经10 CV25至100% B，然后10 CV的100% B。
中间体1：2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯
Figure 94194DEST_PATH_IMAGE017
2-羟基苯甲酸甲酯(可商购自，例如，Aldrich, 3.8 mL，30 mmol)的丙酮(100 mL)溶液用K2CO3 (8.29 g，60.0 mmol)、KI (0.1 g，0.6 mmol)和(E)-(3-氯丙-1-烯-1-基)苯(可商购自，例如，Aldrich, 3.47 mL，36.0 mmol)处理，所得混合物回流搅拌11 h，然后冷却至室温。滤出不溶物，用EtOAc淋洗，将合并的有机相真空浓缩。残余物在Et2O和水之间分配并分离各层。水相用Et2O萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩得到2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(7.12 g，88%)，为浅黄色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.29 min，[M+H]+= 269。
中间体2：2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯
Figure 429360DEST_PATH_IMAGE018
将2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(0.8 g，3 mmol)的N,N-二甲基苯胺(7 mL)溶液回流2 h，然后冷却至室温，在Et2O和24-26% w/w HCl水溶液之间分配。分离各层，并用Et2O萃取水相。合并的有机相用2N NaOH水溶液洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(100 g 柱，10% GLOBAL梯度，EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(440 mg，55%)，为无色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.46 min，[M+H]+= 269。
中间体3：2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺
Figure 358614DEST_PATH_IMAGE019
2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(5.0 g，19 mmol)的THF (25 mL)溶液在室温用甲胺(48% w/w的水溶液，1 mL)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物在DCM和水之间分配并分离各层。水相用DCM萃取两次。合并的有机相使用相分离器干燥并真空浓缩得到2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(4.4 g，88%)，为黄色固体，其无需分离用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.20 min，[M+H]+= 268。
中间体4：N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺
Figure 437429DEST_PATH_IMAGE020
2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(4.4 g，16 mmol)的三氟乙酸(60mL)溶液在80℃搅拌5 h，然后冷却至室温并真空浓缩。残余物用DCM共蒸发。用硅胶快速色谱法(100 g 柱，50% GLOBAL梯度，AcOEt/己烷)纯化残余物 (6 g)得到N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(3 g，68%)，为1:1立体异构体混合物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.10和1.12 min，[M+H]+= 268。
中间体5：5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺
Figure 935406DEST_PATH_IMAGE021
N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(0.103 g，0.385 mmol)的DCM(3 mL)溶液在室温用NBS (0.082 g，0.46 mmol)处理，所得黄色溶液在该温度下搅拌。30min后加入NBS (0.082 g，0.46 mmol)，所得混合物在室温搅拌16 h，然后用DCM稀释，用10%w/w 硫代硫酸钠水溶液(20 mL)处理。两相混合物剧烈搅拌10 min，然后分离各层。水相用DCM萃取两次，合并的有机相使用相分离器干燥并真空浓缩得到5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(130 mg，97%)，为浅橙色泡沫，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.25和1.27 min，[M+H]+= 346和348 (1 Br)。
中间体6：5-溴-2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯
Figure 707053DEST_PATH_IMAGE022
向烧瓶中加入5-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(可商购自，例如，Aldrich, 52.3 g，226mmol)、碳酸钾(50.1 g，362 mmol)、碘化钾(1.879 g，11.32 mmol)，然后加入丙酮(500mL)。所得悬浮液用(E)-(3-氯丙-1-烯-1-基)苯(26.2 mL，272 mmol)处理，然后回流搅拌6h。此时加入碳酸钾(20.0 g，145 mmol)和(E)-(3-氯丙-1-烯-1-基)苯(12.0 mL，124mmol)，混合物回流8 h，然后冷却至室温。滤出固体残余物并用丙酮洗涤。合并的有机相真空浓缩。
滤出的固体残余物在水和EtOAc之间分配并分离各层。所得EtOAc用于从母液（丙酮）中溶解残余物。该有机相用水、然后盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到固体残余物，其在轻度真空（house vacuum）下在40℃干燥16 h得到5-溴-2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(80 g，102%)，为黄色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.42 min，[M+H]+= 346和348 (1 Br)
Figure 657692DEST_PATH_IMAGE023
Figure 540197DEST_PATH_IMAGE024
。
中间体7：5-溴-2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯
Figure 830364DEST_PATH_IMAGE025
2个烧瓶每个加入5-溴-2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(39.5 g，114 mmol)，然后加入N,N-二甲基苯胺(250 mL)。所得溶液回流搅拌3 h，然后冷却至室温并合并。所得混合物加入到Et2O (1000 mL)和24-26% w/w HCl水溶液(900 mL)的冰冷混合物中。一旦加入完成，加入EtOAc (500 mL)并分离各层。水相用EtOAc萃取两次。合并的有机相顺序用2N HCl水溶液、水和然后盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，并真空浓缩得到5-溴-2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(72 g，90%)，为黄色油状物，其无需纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.57 min，[M+H]+= 346和348 (1 Br)。
中间体8：5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺
Figure 772912DEST_PATH_IMAGE026
5-溴-2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(72.0 g，207 mmol)的THF (250 mL)溶液在室温用甲胺(40% w/w的水溶液，90 mL，1.0 mol)处理，所得混合物在该温度下搅拌16 h，然后真空浓缩。残余物在DCM和水之间分配并分离各层。水相用DCM萃取两次，合并的有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(780 g 柱，梯度(EtOAc/己烷)：5%(2CV), 5至35%(经10 CV), 35% (5 CV))纯化残余物得到5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(44.6 g，62%)，为棕色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间1.26 min，[M+H]+= 345和347 (1 Br)。
中间体9：5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺
Figure 210847DEST_PATH_IMAGE027
5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(36.6 g，106 mmol)的DCM(300 mL)溶液在室温用mCPBA (< 77% w/w，52.1 g，211 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌48 h。混合物然后在DCM 和饱和NaHCO3水溶液(200 mL)与五水合硫代硫酸钠(52.5g，211 mmol)在水(100 mL)中的混合物之间分配。两相混合物剧烈搅拌20 min，然后分离各层。水相用DCM萃取两次，合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液洗涤三次，然后用水洗涤，然后经MgSO4干燥，并真空浓缩得到5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺(非对映异构体的1:1混合物, 37.4 g，98%)，为浅黄色泡沫，其无需纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.02和1.04 min，[M+H]+= 362和364 (1 Br)。
中间体10：(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰 胺
Figure 631464DEST_PATH_IMAGE028
5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺(37.4 g，103mmol)在DMSO (150 mL)和水(40 mL)中的溶液用冰浴冷却至0℃，然后用氢氧化钾 (11.6g，207 mmol)在水(40 mL)中的冰冷溶液处理。所得黑色溶液在该温度下搅拌7 h，然后在冷冻机(-20℃)中静置16 h。混合物然后升温至0℃，再搅拌2 h，然后用乙酸(13.6 mL，237mmol)处理。混合物然后用水和EtOAc稀释并分离各层。水相用EtOAc萃取三次，合并的有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。所得残余物与Et2O一起研磨，滤出形成的沉淀，用Et2O淋洗并在40℃在轻度真空（house vacuum）下干燥2 h得到(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(25 g，67%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.04 min，[M+H]+= 362和364 (1 Br)
Figure 104033DEST_PATH_IMAGE029
Figure 889587DEST_PATH_IMAGE030
。
中间体11：(反)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5-甲酸甲酯
Figure 814817DEST_PATH_IMAGE031
(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(22.5g，62.1 mmol)溶解在DMF (200 mL)和MeOH (100 mL)的混合物中，然后加入Xantphos (3.6g，6.2 mmol)。溶液用氮气脱气，并加入Pd(OAc)2 (1.4 g，6.2 mmol)和Et3N (26.0 mL，186mmol)。混合物用一氧化碳吹扫，然后安装充满一氧化碳的气球，混合物在70℃加热16 h。混合物冷却至室温，用水(600 mL)稀释，然后用EtOAc(2 x 300 mL)萃取。合并的有机相用水(2 x 200 mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶色谱法(340 g 柱，梯度：0-25%EtOH/EtOAc)纯化残余物得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(10.4 g，49%)，为浅黄色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 342
Figure 39125DEST_PATH_IMAGE032
Figure 100622DEST_PATH_IMAGE033
。
中间体12：(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5-甲酸甲酯
Figure 384973DEST_PATH_IMAGE034
52 g的(反)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯分批溶解在EtOH中，并在Chiralpak IC 30 mm x 25 cm柱上用50% EtOH/庚烷(200 mg/1.5 mL 注射)洗脱进行纯化。收集第一洗脱异构体并合并在一起得到(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯，为浅黄色固体(21.28 g，82%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 342。
中间体13：(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5-甲酸
Figure 762DEST_PATH_IMAGE035
在室温下将氢氧化锂(191 mg，7.99 mmol) 加入到(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(682 mg，2.00 mmol)在(5 mL)、THF (5 mL)和MeOH (5 mL)中的溶液中。所得悬浮液在该温度下搅拌3 h，然后真空除去大部分溶剂。固体残余物溶解在最小量的水中，溶液用25% w/w HCl水溶液(5 mL)处理，形成浓稠白色悬浮液。固体通过Celite®过滤，用水洗涤几次并在轻度真空（house vacuum）下干燥得到(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(700 mg，107%)，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.75 min，[M+H]+= 328。
中间体14：(2S,3S)-2-(碘甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5-甲酸甲酯
Figure 28761DEST_PATH_IMAGE036
碘 (178 mg，0.703 mmol)的DCM (10 mL)溶液在氮气下用三苯基膦(200 mg，0.762 mmol)和1H-咪唑 (51.9 mg，0.762 mmol)处理。所得悬浮液在室温下搅拌10 min，然后用(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(200 mg，0.586 mmol)处理。所得悬浮液在室温下搅拌14 h，然后用水(2 x 10 mL)洗涤，用相分离器干燥并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0至100% EtOAc/己烷)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(碘甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(210 mg，79%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.23 min，[M+H]+= 452。
中间体15：(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5- 甲酸甲酯
Figure 210344DEST_PATH_IMAGE037
(2S,3S)-2-(碘甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(220 mg，0.488 mmol)的MeOH (50 mL)溶液用Et3N (0.136 mL，0.975 mmol)处理，所得混合物在H-Cube中以完全模式通过Pd/C催化小柱（catcart）以1 mL/min氢化。洗脱液然后真空浓缩。用硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0至100% EtOAc/己烷)纯化残余物得到(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(89 mg，56%)。
LCMS (高pH法)：保留时间1.15 min，[M+H]+= 326。
中间体16：(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5- 甲酸
Figure 400017DEST_PATH_IMAGE038
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(1.4 g，4.3 mmol)的EtOH (20 mL)溶液在室温用2N NaOH水溶液(10 mL，20 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌16 h。然后将溶剂蒸发至一半体积，混合物用2N HCl水溶液(11mL，22 mmol)处理，然后用DCM (2 x 30 mL)萃取。合并的有机相使用相分离器干燥并真空浓缩得到(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(1.3g，97%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.69 min，[M+H]+= 312。
中间体17：(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5-甲酸甲酯
Figure 299840DEST_PATH_IMAGE039
(2S,3S)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(3.10 g，9.08 mmol)的DCM (50 mL)溶液在氮气下用冰浴冷却，然后用deoxofluor(8.40 mL，22.7 mmol)逐滴处理。所得混合物在0℃搅拌2 h，在40℃搅拌18 h，然后冷却至室温。混合物用DCM (50 mL)稀释，然后小心加入到饱和NaHCO3水溶液(200 mL)中。两相混合物在室温搅拌30 min并分离各层。水相用DCM(50 mL)萃取，合并的有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶色谱法(50 g 柱，梯度：0至100% EtOAc/己烷)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(2.2 g，71%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.07 min，[M+H]+= 344
Figure 865950DEST_PATH_IMAGE040
Figure 839722DEST_PATH_IMAGE041
。
中间体18：(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5-甲酸
Figure 200297DEST_PATH_IMAGE042
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(2.2 g，6.4 mmol)在EtOH (20 mL)和THF (20 mL)中的溶液在室温下用2N NaOH水溶液(10 mL，20 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌18 h，然后真空浓缩。残余物溶解在水(50 mL)中，溶液然后用2N HCl水溶液酸化至pH 2。所得混合物用DCM (2 x 50 mL)萃取，合并的有机相使用相分离器干燥并真空浓缩得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(2.1 g，100%)，为无色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.91 min，[M+H]+= 330
Figure 587416DEST_PATH_IMAGE043
Figure 957217DEST_PATH_IMAGE044
未看到。
中间体19：(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯酸甲酯
Figure 847813DEST_PATH_IMAGE045
2-(三苯基亚正膦基)乙酸甲酯(36.8 g，110 mmol)的甲苯 (300 mL)悬浮液在室温下用3-甲氧基苯甲醛(可商购自，例如，Aldrich, 12.2 mL，100 mmol)处理，所得混合物在100℃搅拌3.5 h，然后冷却至室温，静置60 h。滤出所形成的晶体(Ph3PO)并真空除去大部分溶剂。残余物悬浮在Et2O中，搅拌30 min。滤出不溶物(Ph3PO)，将有机物真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(330 g 柱，20% GLOBAL 梯度(AcOEt/己烷))纯化所得残余物得到(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯酸甲酯(17.3 g，90%)，为无色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.08 min，[M+H]+= 193。
中间体20：(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙-2-烯-1-醇
Figure 582550DEST_PATH_IMAGE046
(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯酸甲酯(12.6 g，65.6 mmol)的甲苯(250 mL)溶液在-78℃在氮气下用DIBAL-H (25% w/w的甲苯溶液，97 mL，144 mmol)处理15 min。溶液在-78℃搅拌1 h，然后在-50℃搅拌1 h。溶液然后用EtOAc (20 mL)处理，10 min后，使所得混合物升温至室温。混合物然后加入到罗谢尔盐的水溶液(150 g在400 mL中)中，两相混合物剧烈搅拌2 h，然后分离各层。水相用EtOAc萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到无色油状物(残余物A，11 g)。
平行进行第二实验：(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯酸甲酯(4.8 g，25 mmol)的甲苯(100 mL)溶液在-78℃在氮气下用DIBAL-H (25% w/w的甲苯溶液，37.0 mL，55.0 mmol)处理5 min。溶液在-78℃搅拌20 min，然后在-50℃搅拌30 min。溶液然后用EtOAc (10 mL)处理，15 min后，使所得混合物升温至室温。混合物然后加入到罗谢尔盐的水溶液(50 g在150mL中)中，两相混合物剧烈搅拌2 h，然后分离各层。水相用EtOAc萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到无色油状物(残余物B, 3.96 g)。
残余物A和B合并，并用硅胶快速色谱法(100 g 柱，50% GLOBAL梯度，EtOAc/己烷)纯化得到(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙-2-烯-1-醇(13.85 g，93%)，为无色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.82 min，[M+H]+= 165。
中间体21：(E)-1-(3-氯丙-1-烯-1-基)-3-甲氧基苯
Figure 191386DEST_PATH_IMAGE047
(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙-2-烯-1-醇(7.63 g，46.5 mmol)的EtOH (30 mL)溶液在0℃用乙酰氯(4.96 mL，69.7 mmol)处理，使所得混合物升温至室温，搅拌20 h。在室温下再加入乙酰氯(4.96 mL，69.7 mmol)，所得混合物搅拌24 h，然后真空浓缩。残余物溶解在DCM中，有机相用水洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(E)-1-(3-氯丙-1-烯-1-基)-3-甲氧基苯(8.29 g，98%)，为浅黄色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.23 min，[M+H]+= 183。
中间体22：(E)-5-溴-2-((3-(3-甲氧基苯基)烯丙基)氧基)苯甲酸甲酯
Figure 364879DEST_PATH_IMAGE048
向烧瓶中加入5-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(18.6 g，80.0 mmol)、K2CO3 (16.7 g，121mmol)和KI (0.667 g，4.02 mmol)，然后加入丙酮(150 mL)，所得悬浮液用(E)-1-(3-氯丙-1-烯-1-基)-3-甲氧基苯(14.7 g，80.0 mmol)/丙酮(50 mL和20 mL淋洗)处理。所得混合物回流9 h，然后冷却至室温并真空浓缩得到残余物A。
平行进行第二实验：向烧瓶中加入5-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(10.5 g，45.4 mmol)、K2CO3 (9.41 g，68.1 mmol)和KI (0.377 g，2.27 mmol)，然后加入丙酮(120 mL)，所得悬浮液用(E)-1-(3-氯丙-1-烯-1-基)-3-甲氧基苯(8.29 g，45.4 mmol)/丙酮(50 mL和20 mL淋洗)处理。所得混合物回流9 h，然后冷却至室温并真空浓缩得到残余物B。
残余物A和B混合在一起并在EtOAc和水之间分配并分离各层。水相用EtOAc萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(750 g 柱，20% GLOBAL梯度，EtOAc/己烷)纯化所得残余物得到(E)-5-溴-2-((3-(3-甲氧基苯基)烯丙基)氧基)苯甲酸甲酯(30 g，63%)，为浅黄色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.43 min，[M+H]+= 377和379 (1 Br)。
中间体23：5-溴-2-羟基-3-(1-(3-甲氧基苯基)烯丙基)苯甲酸甲酯
Figure 375560DEST_PATH_IMAGE049
5-溴-2-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(32 g，92 mmol)的N,N-二甲基苯胺(200 mL)溶液回流2.5 h，然后冷却至室温，经2 min加入到HCl水溶液(25% w/w，400 mL)和EtOAc (500mL)的冰冷混合物中。分离各层，水相用EtOAc萃取3次。合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(330 g 柱，20% GLOBAL梯度，EtOAc/己烷)纯化所得残余物得到5-溴-2-羟基-3-(1-(3-甲氧基苯基)烯丙基)苯甲酸甲酯(26.3 g，88%)，为浅黄色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.57 min，[M+H]+= 377和379 (1 Br)。
中间体24：5-溴-2-羟基-3-(1-(3-甲氧基苯基)烯丙基)-N-甲基苯甲酰胺
Figure 343516DEST_PATH_IMAGE050
5-溴-2-羟基-3-(1-(3-甲氧基苯基)烯丙基)苯甲酸甲酯(26.3 g，69.7 mmol)的THF (120 mL)溶液在室温下用甲胺(40% w/w的水溶液，30.2 mL，349 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌16 h，然后真空浓缩。残余物在EtOAc和水之间分配并分离各层。有机层经MgSO4干燥，并真空浓缩得到5-溴-2-羟基-3-(1-(3-甲氧基苯基)烯丙基)-N-甲基苯甲酰胺(26.2 g，100%)，为浅黄色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.27 min，[M+H]+= 376和378 (1 Br)。
中间体25：5-溴-2-羟基-3-((3-甲氧基苯基)(环氧乙烷-2-基)甲基)-N-甲基苯甲 酰胺
Figure 642910DEST_PATH_IMAGE051
5-溴-2-羟基-3-(1-(3-甲氧基苯基)烯丙基)-N-甲基苯甲酰胺(26.2 g，69.7mmol)的DCM (400 mL)溶液在室温用mCPBA (< 77% w/w，30 g，122 mmol)处理，所得溶液搅拌16 h。进一步加入mCPBA (< 77% w/w，30 g，122 mmol)，所得混合物再搅拌16 h。再加入mCPBA (< 77% w/w，15 g，61 mmol)，并将混合物搅拌60 h。最后加入mCPBA (< 77%，10 g，40 mmol)，混合物在室温搅拌24 h。混合物然后用五水合硫代硫酸钠(51.9 g，209 mmol)和NaHCO3 (17.6 g，209 mmol)的水(200 mL)溶液处理，两相混合物搅拌15 min，然后分离各层。水相用饱和NaHCO3水溶液(200 mL)稀释，然后用DCM萃取两次。合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后用水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到5-溴-2-羟基-3-((3-甲氧基苯基)(环氧乙烷-2-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺(15.6 g，57%)，为橙色泡沫，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.03和1.05 min，[M+H]+= 392和394 (1 Br)。
中间体26：(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-2,3-二氢苯并 呋喃-7-甲酰胺
Figure 354514DEST_PATH_IMAGE052
5-溴-2-羟基-3-((3-甲氧基苯基)(环氧乙烷-2-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺(7.23g，18.4 mmol)在DMSO (40 mL)和水(10 mL)中的溶液用冰浴冷却，然后通过滴加KOH (2.07g，36.9 mmol)/水(10 mL)进行处理。所得暗红色混合物在该温度下搅拌7 h，然后用乙酸(2.22 mL，38.7 mmol)处理。形成沉淀，混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(50 g 柱，100% GLOBAL 梯度(AcOEt/己烷))纯化残余物得到(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(2.9 g，40%)，为白色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间1.05 min，[M+H]+= 392和394 (1 Br)。
中间体27：(反)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二 氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 219702DEST_PATH_IMAGE053
(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(0.67 g，1.7 mmol)在DMF (10 mL)和EtOH (10 mL)中的溶液在室温下用NEt3 (0.476mL，3.42 mmol)、Pd(OAc)2 (0.038 g，0.17 mmol)和Xantphos (0.099 g，0.17 mmol)处理。混合物用一氧化碳吹扫，然后在70℃在CO气氛(使用气球)下搅拌2 h，然后冷却至室温，并用EtOAc (50 mL)稀释。有机相用水(2 x 30 mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(梯度：0-25% EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到(反)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(370 mg，56%)，为浅黄色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.00 min，[M+H]+= 386。
中间体28：(反)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二 氢苯并呋喃-5-甲酸
Figure 358559DEST_PATH_IMAGE054
(反)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(360 mg，0.934 mmol)的EtOH (5 mL)溶液在室温用2N NaOH水溶液(2.33mL，4.66 mmol)处理，所得溶液在此温度下搅拌2 h，然后浓缩至约为其原始体积的一半，并用水(10 mL)稀释。该溶液用Et2O (10 mL)洗涤，然后使用2N HCl水溶液酸化至pH 2。过滤收集形成的沉淀并在轻度真空（house vacuum）下在40℃干燥16 h得到(反)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(320 mg，96%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.57 min，[M+H]+= 358。
中间体29：5-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯
Figure 941988DEST_PATH_IMAGE055
5-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(25.0 g，108 mmol)的DMF (100 mL)溶液在室温用碳酸钾(23.9 g，173 mmol)处理，然后用3-溴丙-1-炔 (80% w/w的甲苯溶液，14.0 mL，130mmol)处理，所得褐色混合物在该温度下搅拌16 h。混合物然后用水(100 mL)稀释，水相用Et2O萃取三次。合并的有机相用水洗涤两次，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到黄色油状物，其快速结晶。该残余物与Et2O一起研磨，得到5-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(13.8g，47%)，为白色固体。母液真空浓缩。所得残余物用Et2O/戊烷第二次研磨得到5-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(9.81 g，34%)，为极浅黄色固体。母液真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(50 g 柱，20% GLOBAL梯度(AcOEt/己烷))纯化所得残余物得到5-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(3.91 g，13%)，为黄色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.12 min，[M+H]+=269和271 (1 Br)。
中间体30：5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸甲酯
Figure 863807DEST_PATH_IMAGE056
5-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(17.6 g，65.4 mmol)的DCM (150 mL)溶液在室温用(乙腈)[(2-联苯基)二叔丁基膦]金(I)六氟锑酸盐(0.759 g，0.981 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌23 h。加入(乙腈)[(2-联苯基)二叔丁基膦]金(I)六氟锑酸盐(0.100 g，0.129 mmol)并将混合物在室温搅拌60 h，然后真空浓缩，得到残余物A。
5-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(9.80 g，36.4 mmol)的DCM (100 mL)溶液在室温用(乙腈)[(2-联苯基)二叔丁基膦]金(I)六氟锑酸盐(0.422 g，0.546 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌23 h。加入(乙腈)[(2-联苯基)二叔丁基膦]金(I)六氟锑酸盐(0.100 g，0.129 mmol)并将混合物在室温搅拌60 h，然后真空浓缩，得到残余物B。
残余物A和B合并，并用硅胶快速色谱法(330 g 柱，20% GLOBAL梯度，AcOEt/己烷)纯化得到5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸甲酯(17.0 g，62%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.26 min，[M+H]+=269和271 (1 Br)。
中间体31：5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸
Figure 849081DEST_PATH_IMAGE057
向烧瓶中加入5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸甲酯(17.0 g，63.2 mmol)，然后加入THF (120 mL)，随后加入MeOH (20 mL)。溶液然后在室温用氢氧化钠(2N 的水溶液，45 mL，90 mmol)处理，所得黄色混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空除去大部分溶剂。残余物溶解在水(100 mL)中，溶液用HCl (2N 的水溶液，45 mL，90 mmol)处理。5 min后，滤出形成的白色固体，用水淋洗，并在轻度真空（house vacuum）下在40℃干燥16 h得到5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸(16.92 g，105%)，为白色固体。水相用AcOEt萃取。有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸(0.443 g，3%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.61 min，[M+H]+=255和257 (1 Br)。
中间体32：5-溴-N,2-二甲基苯并呋喃-7-甲酰胺
Figure 158839DEST_PATH_IMAGE058
5-溴-2-甲基苯并呋喃-7-甲酸(16.1 g，63.2 mmol)的DCM (200 mL)悬浮液在0℃用DMF (0.400 mL，5.17 mmol)处理，然后用草酰氯 (11.1 mL，126 mmol)逐滴处理，混合物在该温度下搅拌2 h。再次加入DMF (0.400 mL，5.17 mmol)，然后加入草酰氯 (1.0 mL，11mmol)。在室温再搅拌2 h后，混合物真空浓缩。残余物与甲苯共蒸发，然后真空干燥，接着溶解在DCM (200 mL)中。所得溶液冷却至0℃，然后用DIPEA (16.6 mL，95.0 mmol)处理，然后用甲胺(2N的THF溶液，63.2 mL，126 mmol)处理。所得混合物在该温度搅拌30 min，然后用DCM溶解，并用水洗涤。分离各层，水相用DCM萃取。合并的有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩得到5-溴-N,2-二甲基苯并呋喃-7-甲酰胺(17.35 g，102%)，为褐色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.03 min，[M+H]+=268和270 (1 Br)。
中间体33：2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 229564DEST_PATH_IMAGE059
5-溴-N,2-二甲基苯并呋喃-7-甲酰胺(7.00 g，26.1 mmol)在DMF (50 mL)和EtOH(50 mL)中的溶液在室温下用Et3N (10.9 mL，78 mmol)处理，所得混合物用氮气脱气，然后用Xantphos (1.5 g，2.6 mmol)和Pd(OAc)2 (0.59 g，2.6 mmol)处理。所得混合物用一氧化碳吹扫，然后安装充满一氧化碳的气球，混合物在70℃加热16 h，然后冷却至室温。混合物然后用水(150 mL)稀释，用EtOAc (2 x 200 mL)萃取。合并的有机相用水(2 x 200 mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(100 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(5.6 g，82%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.96 min，[M+H]+= 262。
中间体34：3-溴-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 282970DEST_PATH_IMAGE060
将溴(1.50 mL，28.3 mmol)在室温下加入到2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(7.40 g，28.3 mmol)的DCM (50 mL)溶液中，所得混合物在该温度在氮气下搅拌16 h。加入溴(0.20 mL，3.8 mmol)，混合物回流加热24 h，然后冷却至室温，加入到10%w/w 硫代硫酸钠水溶液(200 mL)中。两相混合物剧烈搅拌20 min，然后用DCM (100 mL)稀释并分离各层。有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩得到3-溴-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(9.3 g，97%)，为灰白色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.11 min，[M+H]+=340和342 (1 Br)。
中间体35：3-(3-(苄氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸 乙酯
Figure 122750DEST_PATH_IMAGE061
3-溴-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(140 mg，0.412 mmol)的THF (2 mL)溶液在室温用(3-(苄氧基)苯基)硼酸(113 mg，0.494 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(14.8 mg，0.040 mmol)、Pd(OAc)2 (9.24 mg，0.0410 mmol)和K2CO3 (171 mg，1.23 mmol)的水(1 mL)溶液处理，所得混合物在该温度在氮气下搅拌2 h，然后用EtOAc (5 mL)稀释，并用水(5 mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到3-(3-(苄氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(90 mg，49%)，为暗褐色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.44 min，[M+H]+= 444。
中间体36：3-(3-羟基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 803743DEST_PATH_IMAGE062
3-(3-(苄氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(90mg，0.20 mmol)溶解在EtOH (30 mL)中，并在70巴和50℃在H-Cube中通过Pd/C小柱氢化，在回路上使用机器，以便将洗脱液加回到进料烧瓶中。4 h后，用MeOH彻底清洗该机器，合并的洗脱液真空浓缩得到浅黄色固体。该残余物在DCM和0.5N HCl水溶液之间分配并分离各层。有机相用相分离器干燥并真空浓缩得到3-(3-羟基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(0.35 g，88%)，为浅粉色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.07 min，[M+H]+= 354。
中间体37：3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃- 5-甲酸乙酯
Figure 96184DEST_PATH_IMAGE063
3-(3-羟基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(0.35 g，0.99 mmol)的DMF (5 mL)溶液在室温用1,3-二氧戊环-2-酮(0.174 g，1.98 mmol)和K2CO3(0.274 g，1.98 mmol)处理。所得混合物在80℃搅拌2 h，然后冷却至室温，用水(20 mL)稀释，用EtOAc(20 mL)萃取。分离各层，有机相用水(20 mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到浅黄色胶状物。用硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(0.32 g，81%)，为浅黄色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.05 min，[M+H]+= 398。
中间体38：(顺)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 953281DEST_PATH_IMAGE064
3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(200 mg，0.503 mmol)加热溶解在MeOH (100 mL)中，然后冷却溶液并在70巴和70℃在H-Cube中氢化，以1 mL/min洗脱6 h。洗脱液真空蒸发得到(2R*,3R*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(181 mg，90%)，为无色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间0.98 min，[M+H]+= 400。
中间体39：(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7(甲基氨基甲酰基)-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 647568DEST_PATH_IMAGE065
(2R*,3R*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(45 mg，0.11 mmol) 的DMF (2 mL)溶液在室温用DBU (0.051 mL，0.34 mmol)处理，所得混合物在90℃ 搅拌1 h，然后冷却至室温并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(19 mg，42%)，为无色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.00 min，[M+H]+= 400。
中间体39 (替代方法)：(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基 甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 299129DEST_PATH_IMAGE066
将3-(3-羟基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(90 mg，0.25 mmol)的DMF (3 mL)溶液在室温用K2CO3 (70.0 mg，0.506 mmol)和1,3-二氧戊环-2-酮(66.9 mg，0.760 mmol)处理，所得混合物在80℃ 搅拌4 h，然后冷却至室温，并静置60 h。混合物然后用水(10 mL)稀释，水相用EtOAc (2 x 10 mL)萃取。合并的有机相用盐水(10 mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(13 mg，13%)。
LCMS (高pH法)：保留时间1.02 min，[M+H]+= 400。
中间体40：(顺)-3-(3-羟基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋 喃-5-甲酸乙酯
Figure 16549DEST_PATH_IMAGE067
将3-(3-(苄氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸乙酯(90mg，0.20 mmol)的EtOH (30 mL)溶液在70巴和50℃在H-Cube中通过Pd/C小柱氢化，在回路上使用机器，以便将洗脱液加回到进料烧瓶中。4 h后，用MeOH彻底清洗该机器，合并的洗脱液真空浓缩得到(2R*,3R*)-3-(3-羟基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(75 mg，104%)，为浅黄色固体，其无需纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.01 min，[M+H]+= 356。
中间体41：(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酸
Figure 411759DEST_PATH_IMAGE068
(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(120 mg，0.150 mmol)的EtOH (1.5 mL)溶液在室温用NaOH (2N水溶液，0.075 mL，0.15 mmol)处理，所得溶液在该温度搅拌3 h，然后加入EtOH (1 mL)。混合物在室温搅拌2 h，然后用NaOH (2N水溶液，0.075 mL，0.150 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后加入EtOH (1 mL)。反应混合物然后在室温搅拌16 h，然后用NaOH (2N水溶液，0.150 mL，0.300 mmol)处理。反应混合物然后在室温搅拌3 h，然后真空浓缩。残余物溶解在水(3 mL)中，水相用2N HCl水溶液酸化至pH 3，滤出形成的沉淀。滤液用EtOAc(3 x 20mL)萃取，合并的有机相用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。将由萃取得到的残余物与沉淀合并得到(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(67 mg，60%)，为白色固体，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.81 min，[M+H]+= 372。
中间体42：甲磺酸((反)-5-(环丙基氨基甲酰基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨 基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-2-基)甲酯
Figure 960552DEST_PATH_IMAGE069
(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(80 mg，0.20 mmol)和Et3N (0.042 mL，0.30 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用MsCl (0.024 mL，0.30 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后用水(5mL)洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到甲磺酸((反)-5-(环丙基氨基甲酰基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-2-基)甲酯(90 mg，94%)，为无色胶状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间1.01 min，[M+H]+= 475。
中间体43：(2S,3S)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2, 3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 48593DEST_PATH_IMAGE070
3.9 g (反)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯用手性色谱法纯化以得到两种对映异构体：
- 分析方法：约0.5 mg物质溶解在50% EtOH/庚烷(1 mL)中。注射：20 μL溶液注射在柱上，用40% EtOH (+0.2%异丙胺)/庚烷洗脱，流速 = 1.0 mL/min，波长 215 nm。柱4.6mm id x 25 cm Chiralpak IC。
- 制备方法：约250 mg物质溶解在EtOH (2 mL，同时加热)中。注射(共18次)：2 mL溶液注射到柱上，用40% EtOH (+0.2%异丙胺)/庚烷(+0.2%异丙胺)洗脱，流速 = 30 mL/min，波长 215 nm。柱30 mm x 25 cm Chiralpak IC (5 μm)。
这样的纯化得到(2S,3S)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(1.47 g，75%)，为快速流出的（running）对映异构体，和(2R,3R)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(1.38 g，71%)，为慢速流出的对映异构体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.00 min，[M+H]+= 386。
中间体44：(2S,3S)-2-(碘甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 315627DEST_PATH_IMAGE071
碘(1.26 g，4.96 mmol)的DCM (30 mL)溶液在室温用1H-咪唑 (0.519 g，7.63mmol)和三苯基膦(1.30 g，4.96 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌30 min。然后将(2S,3S)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(1.47 g，3.81 mmol) 加入该溶液。所得混合物在室温搅拌16 h，然后用水(30mL)洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(50 g 柱，梯度：0-60%EtOAc/环己烷)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(碘甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(1.5 g，79%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.28 min，[M+H]+= 496。
中间体45：(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢 苯并呋喃-5-甲酸乙酯
Figure 452210DEST_PATH_IMAGE072
(2S,3S)-2-(碘甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(1.4 g，2.8 mmol)在EtOAc (50 mL)和MeOH (50 mL)中的溶液用Et3N(0.394 mL，2.83 mmol)处理，所得溶液在H-Cube中在大气压下以1 mL/min洗脱氢化。洗脱液真空浓缩，所得残余物用硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化得到(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(0.95 g，91%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.21 min，[M+H]+= 370。
中间体46：(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢 苯并呋喃-5-甲酸
Figure 855509DEST_PATH_IMAGE073
(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(0.90 g，2.4 mmol)的EtOH (10 mL)溶液在室温用2N NaOH水溶液(5.0 mL，10mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌16 h，然后真空浓缩。残余物溶解在水(10 mL)中，水相用2N HCl水溶液酸化(pH 2)，然后用DCM (20 mL)萃取。有机相使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(750 mg，90%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间0.69 min，[M+H]+= 342。
中间体47：(1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸
Figure 114452DEST_PATH_IMAGE074
氢氧化锂(751 mg，31.4 mmol)在室温下加入到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(1.00 g，6.27 mmol，可商购自，例如，Pharmablock)在水(10 mL)、THF(10 mL)和MeOH (10 mL)中的溶液中。所得悬浮液在该温度下搅拌3 h，然后真空浓缩。残余物溶解在最少量的水中，用盐酸(5 mL，25% w/w水溶液)处理。水相用MeOH/DCM萃取4次，合并的有机相用疏水玻璃料干燥，真空浓缩，得到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(750 mg，93%)，其无需进一步纯化用于下一步。
Figure 868782DEST_PATH_IMAGE075
中间体48：(1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯
Figure 605794DEST_PATH_IMAGE076
(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(340 mg，2.65 mmol)的甲苯(12mL)溶液在室温用NEt3 (1.11 mL，7.96 mmol)、叠氮磷酸二苯酯(0.686 mL，3.18 mmol)和苄醇(0.552 mL，5.31 mmol)处理，所得混合物回流加热2 h，然后冷却至室温。溶液用EtOAc(10 mL)稀释，用水(10 mL)和饱和NaHCO3水溶液(10 mL)洗涤。有机相干燥并蒸发，残余物用色谱法在25 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物的级分真空蒸发得到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯(460 mg，74%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.83 min，[M+H]+ = 234.3。
中间体49：(1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐
Figure 332441DEST_PATH_IMAGE077
(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯(460 mg，1.97 mmol)溶解在EtOH (20 mL)中，反应使用H-cube (设定：室温，1 巴，1mL/min流速)和10% Pd/CCatCart 30作为催化剂氢化。反应通过H-Cube循环1.5 h，然后用HCl (7M水溶液，1.33 mL，9.86 mmol)酸化混合物，真空蒸发得到油状固体。该固体真空干燥2天得到所需产物 (1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(262 mg，93%)，为灰白色固体。
Figure 762286DEST_PATH_IMAGE078
中间体50：(+/-)-2-(4-苄基吗啉-2-基)乙酸乙酯
Figure 738332DEST_PATH_IMAGE079
将2-(苄基氨基)乙醇(6.57 mL，46.3 mmol，可商购自，例如，Sigma-Aldrich)和NEt3 (6.45 mL，46.3 mmol)在水(40 mL)中的混合物加热到105℃。滴加(E)-4-溴丁-3-烯酸乙酯 (8.50 mL，49.4 mmol，可商购自，例如，Fluorochem)，反应混合物在105℃加热2 h。反应混合物冷却至室温并加入氢氧化钠(2N水溶液，10 mL，20 mmol)。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离各层，水相再用乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取。合并的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩得到~11 g的褐色油状物。该褐色油状物用色谱法在SiO2 (BiotageSNAP 340 g小柱，用5-50% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)上纯化。合并适当的级分并真空浓缩得到所需产物(4.17 g，29%)，为浅黄色油状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.43 min，[M+H]+ = 264.2。
中间体51：(+/-)-2-(吗啉-2-基)乙酸乙酯
Figure 279035DEST_PATH_IMAGE080
向2-(4-苄基吗啉-2-基)乙酸乙酯 (3.15 g，12.0 mmol)的EtOH (70 mL)溶液中加入甲酸铵(3.77 g，59.8 mmol)和10% Pd/C (3.82 g，35.9 mmol)。反应混合物在室温在N2下搅拌16 h。
单独地，向2-(4-苄基吗啉-2-基)乙酸乙酯 (375 mg，1.42 mmol)的EtOH (10 mL)溶液中加入甲酸铵(449 mg，7.12 mmol)和10% Pd/C (555 mg，5.21 mmol)。反应混合物在室温在N2下搅拌16 h。
合并这两个反应混合物并通过Celite®过滤。滤液真空浓缩得到2-(吗啉-2-基)乙酸乙酯(2.45 g)，为灰白色粘性固体，其原样用于后续反应。
Figure 922506DEST_PATH_IMAGE081
中间体52：(+/-)-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 929776DEST_PATH_IMAGE082
向2-(吗啉-2-基)乙酸乙酯 (2.45 g，14.1 mmol)的DCM (30 mL)溶液中加入Et3N(3.94 mL，28.3 mmol)、Boc-酸酐 (4.93 mL，21.2 mmol)和DMAP (0.086 g，0.71 mmol)，反应混合物在室温在N2下搅拌16 h。反应混合物在DCM和1N HCl水溶液之间分配。分离各层，有机相用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，然后真空浓缩得到(+/-)-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(3.03 g，85%)，为橙色油状物。
Figure 658697DEST_PATH_IMAGE083
中间体53：(+/-)-2-(2-羟基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 737512DEST_PATH_IMAGE084
2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.8 g，10 mmol)溶解在THF (50mL)中，加入LiBH4 (0.893 g，41.0 mmol)，然后混合物在室温搅拌65 h。反应混合物在冰浴中冷却并用饱和氯化铵水溶液(50 mL)淬灭，然后搅拌1 h，用EtOAc(2 x 100 mL)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥和真空蒸发得到2-(2-羟基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.2 g，93%)，为无色胶状物。
Figure 235489DEST_PATH_IMAGE085
中间体54：(+/-)-2-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 741557DEST_PATH_IMAGE086
在0℃下将MsCl (0.815 mL，10.5 mmol)加入到2-(2-羟基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.2 g，9.5 mmol)和Et3N (1.458 mL，10.46 mmol)的DCM (50 mL)溶液中。所得混合物在0℃搅拌1 h，然后用水(50 mL)洗涤。有机层使用疏水玻璃料干燥和真空蒸发得到2-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(3.0 g，102%)，为浅黄色胶状物，其无需进一步纯化用于下一步。
Figure 895458DEST_PATH_IMAGE087
中间体55：(+/-)-2-(2-氰基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 777963DEST_PATH_IMAGE088
2-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(3.0 g，9.7 mmol)溶解在DMSO(30 mL)中，然后加入KI (1.61 g，9.70 mmol)和KCN (0.947 g，14.5 mmol)，混合物在80℃加热1 h，然后冷却至室温。所得褐色悬浮液用水(100 mL)稀释，用EtOAc(2 x 50 mL)萃取。合并的有机相用水(2 x 100 mL)洗涤，干燥并真空蒸发，所得油状物在50 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱。含产物级分(用茚三酮显现)合并，并真空蒸发得到2-(2-氰基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.42 g，61%)，为无色油状物。
Figure 130447DEST_PATH_IMAGE089
中间体56：(+/-)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 72995DEST_PATH_IMAGE090
2-(2-氰基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.40 g，5.83 mmol)溶解在THF (20 mL)中，加入硼烷.THF(1M的THF溶液，23.30 mL，23.30 mmol)，然后混合物在70℃加热2 h。溶液然后在冰浴中冷却，通过小心加入MeOH (20 mL) (冒泡)淬灭，然后真空蒸发。残余物溶解在MeOH (20 mL)中，加入乙酸(2 mL)，将溶液搅拌2 h，然后真空蒸发，残余物用色谱法在25 g二氧化硅柱上纯化，用0-15% 2N甲醇氨/DCM洗脱，得到两种主要的茚三酮活性组分。收集极性更大的组分得到2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(180 mg，13%)，为无色油状物。较早流出的组分怀疑是硼烷络合物。将其收集并真空蒸发得到无色油状物(0.20 g)。该物质溶解在甲醇(10 mL)和2N NaOH水溶液(10 mL)中，然后混合物回流搅拌6 h，然后冷却至室温并真空蒸发，残余物在水(10 mL)和DCM (10 mL)之间分配。有机层干燥并真空蒸发得到无色油状物，其用色谱法在10 g snap超级小柱上纯化，用0-20% 2N甲醇氨/DCM洗脱，得到另外的所需产物(100 mg)。
Figure 510930DEST_PATH_IMAGE091
中间体57：(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯, 77:23 E/Z异构体的混合物
Figure 931547DEST_PATH_IMAGE092
(R)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.50 g，2.3 mmol，可商购自，例如，Activate Scientific)溶解在DCM (10 mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(1.17 g，2.76 mmol)，然后溶液在室温搅拌2 h。混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20 mL)洗涤，有机层干燥并蒸发得到无色固体– NMR显示存在所需醛。将粗制中间体溶解在甲苯(20 mL)中，并加入2-(三苯基亚正膦基)乙酸乙酯(1.04 g，2.99 mmol)，然后混合物在90℃加热16 h，然后冷却至室温。所得悬浮液过滤，滤液用水洗涤，然后将有机层干燥并真空蒸发。残余物用色谱法在25g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物级分真空蒸发得到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.45 g，69%)，为无色胶状物，并且是Z和E异构体的混合物，其用于下一步骤。
Figure 341800DEST_PATH_IMAGE093
中间体58：(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 189670DEST_PATH_IMAGE094
(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.450 g，1.58mmol)溶解在EtOH (50 mL)中，并在H-Cube中以完全模式使用Pd/C催化小柱以1 mL/min流速氢化，洗脱液真空蒸发得到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.40 g，88%)，为无色胶状物。
Figure 114901DEST_PATH_IMAGE095
中间体59：(S)-2-(3-羟基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 339209DEST_PATH_IMAGE096
在0℃下将LiBH4 (0.121 g，5.57 mmol)加入到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.40 g，1.39 mmol)的THF (10 mL)溶液中，然后混合物搅拌16 h，使其升温至室温。反应混合物通过非常小心地加入饱和氯化铵水溶液(20 mL)淬灭，用EtOAc(2x 20 mL)萃取。合并的有机相干燥并真空蒸发得到(S)-2-(3-羟基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.30 g，88%)。
Figure 666285DEST_PATH_IMAGE097
中间体60：(S)-2-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 888319DEST_PATH_IMAGE098
(S)-2-(3-羟基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.30 g，1.22 mmol)溶解在DCM (10mL)中，并加入Et3N (0.256 mL，1.83 mmol)和Ms-Cl (0.124 mL，1.59 mmol)。溶液搅拌2h，然后用水洗涤，有机层干燥并真空蒸发得到(S)-2-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.39 g，99%)，其立即用于下一步骤。
Figure 300845DEST_PATH_IMAGE099
中间体61：(S)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 63265DEST_PATH_IMAGE100
(S)-2-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.39 g，1.2 mmol)溶解在DMF (5 mL)中，加入叠氮化钠(0.235 g，3.62 mmol)，然后混合物在80℃加热2 h。混合物冷却至室温，用水(20 mL)稀释，用EtOAc(20 mL)萃取。有机层用水(2 x 10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发得到(S)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(300 mg，92%)，为无色胶状物。该粗产物无需纯化继续用于下一步骤。
Figure 244848DEST_PATH_IMAGE101
中间体62：(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 700100DEST_PATH_IMAGE102
(S)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(300 mg，1.11 mmol)溶解在EtOH (30mL)中，并在H-Cube中以完全模式以1 mL/min流速通过Pd/C催化小柱氢化。洗脱液真空蒸发得到(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(190 mg，70%)，其用于随后的化学反应。
Figure 800255DEST_PATH_IMAGE103
中间体63：(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 366366DEST_PATH_IMAGE104
(S)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(5.0 g，23 mmol，可商购自，例如，AOKChem)溶解在DCM (10 mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(11.7 g，27.6 mmol)，溶液在室温搅拌2h。混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20 mL)洗涤，有机层干燥并蒸发得到无色固体。NMR显示存在所需醛。将粗制中间体溶解在甲苯(20 mL)中，并加入2-(三苯基亚正膦基)乙酸乙酯(10.4 g，29.9 mmol)，然后混合物在90℃加热16 h，接着冷却至室温。所得悬浮液过滤，滤液用水洗涤，然后有机层干燥并真空蒸发。残余物用色谱法在25 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物级分真空蒸发得到(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.9 g，29%)，为无色胶状物。
Figure 402455DEST_PATH_IMAGE105
中间体64：(R)- 2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 28608DEST_PATH_IMAGE106
(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.8 g，6.3mmol)溶解在EtOH (60 mL)中，并在H-Cube中以完全模式以1 mL/min流速通过Pd/C催化小柱氢化。洗脱液真空蒸发得到(R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.7 g，94%)，为无色胶状物。
Figure 415727DEST_PATH_IMAGE107
中间体65：(R)-2-(3-羟基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 192054DEST_PATH_IMAGE108
在0℃下将LiBH4 (0.121 g，5.57 mmol) 加入到(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.400 g，1.39 mmol)的THF (10 mL)溶液中，然后混合物搅拌16 h，使其升温至室温。反应混合物通过非常小心地加入饱和氯化铵水溶液(20 mL)淬灭，用EtOAc(2 x 20 mL)萃取。合并的有机相干燥并真空蒸发得到(S)-2-(3-羟基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.30 g，88%)。
Figure 348228DEST_PATH_IMAGE109
中间体66：(R)-2-(3-(甲磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 145283DEST_PATH_IMAGE110
(R)-2-(3-羟基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.34 g，5.46 mmol)溶解在DCM (10mL)中，并加入Et3N (1.14 mL，8.19 mmol)和MsCl (0.553 mL，7.10 mmol)。溶液在室温搅拌2 h，然后用水洗涤，有机层干燥并真空蒸发得到浅黄色油状物。其用色谱法在50 g 二氧化硅柱上纯化，用0-100% EtOAc/环己烷洗脱，含产物的级分真空蒸发得到(R)-2-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.22 g，69%)。
Figure 754119DEST_PATH_IMAGE111
中间体67：(R)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 927611DEST_PATH_IMAGE112
(R)-2-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.2 g，3.7 mmol)溶解在DMF (5 mL)中，并加入叠氮化钠(0.724 g，11.1 mmol)，然后混合物在80℃加热2 h，然后冷却至室温。混合物用水(20 mL)稀释，用EtOAc(20 mL)萃取。有机层用水(2 x 10 mL)洗涤，干燥并真空蒸发得到(R)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.96 g，96%)，为无色胶状物。
Figure 875976DEST_PATH_IMAGE113
中间体68：(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 843932DEST_PATH_IMAGE114
(R)-2-(3-叠氮基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.96 g，3.5 mmol)溶解在EtOH (30mL)中，并在H-Cube中以完全模式以1 mL/min流速通过Pd/C催化小柱氢化。洗脱液真空蒸发得到(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.81 g，93%)。
Figure 940064DEST_PATH_IMAGE115
中间体69：3-氟哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
Figure 386089DEST_PATH_IMAGE116
在-78℃在氮气下将哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(5.0 g，19 mmol，可商购自，例如，Sigma Aldrich)/THF (20 mL)滴加到双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(1N的THF溶液，38.9 mL，38.9 mmol)的THF (20 mL)溶液中，然后使溶液经1 h升温至-20℃，然后再冷却至-78℃。滴加N-氟-N-(苯基磺酰基)苯磺酰胺(12.2 g，38.9 mmol)的THF (30 mL)溶液，然后混合物搅拌2 h，使其逐渐升温至室温。反应混合物用饱和氯化铵水溶液(100 mL)淬灭，用EtOAc(100 mL)萃取。有机层用1N NaOH水溶液(100 mL)和盐水洗涤，然后干燥并蒸发得到黄色油状物。粗产物溶解在DCM中，并装载到50 g二氧化硅柱上，然后用0-50% EtOAc/环己烷洗脱得到3-氟哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(3.5 g，65%)，为无色油状物。
Figure 516856DEST_PATH_IMAGE117
中间体70：3-氟-3-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 655713DEST_PATH_IMAGE118
3-氟哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(3.50 g，12.7 mmol)溶解在THF (50 mL)中，加入LiBH4 (0.831 g，38.1 mmol)，然后混合物在室温搅拌4h。最初非常小心地滴加饱和氯化铵水溶液(50 mL)，然后混合物搅拌20 min，接着用EtOAc (2 x 100 mL)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥并真空蒸发得到3-氟-3-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2 g，74%)，为无色油状物。
Figure 176824DEST_PATH_IMAGE119
中间体71：(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 426540DEST_PATH_IMAGE120
3-氟-3-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2 g，9.4 mmol)溶解在DCM (60 mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(4.80 g，11.3 mmol)，混合物在室温搅拌18 h，然后用水洗涤，有机层用硫酸钠干燥并倾倒入清洁干燥的烧瓶中。加入2-(三苯基亚正膦基)乙酸乙酯(4.93g，14.1 mmol)并将混合物搅拌16 h，然后用水洗涤，有机层干燥并真空蒸发。残余物在50 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物的级分真空蒸发得到(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.2 g，77%)，为无色油状物。
Figure 411813DEST_PATH_IMAGE121
中间体72：3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 721572DEST_PATH_IMAGE122
(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.00 g，6.64mmol)溶解在EtOH (50 mL)中，并通过5% Pd/C在大气压力下氢化16 h。混合物然后在氮气下过滤通过Celite，滤液真空蒸发得到3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0 g，99%)，为无色油状物。NMR显示大量剩余的起始原料，因此将粗产物溶解在EtOH(50 mL)中，并在H-Cube中以完全模式通过Pd/C小柱氢化。洗脱液真空蒸发得到无色油状物。NMR显示一些剩余的起始原料，将溶液在H-Cube中再次氢化，然后洗脱液真空蒸发得到3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0 g，99%)。
Figure 792296DEST_PATH_IMAGE123
中间体73：3-氟-3-(3-羟基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 783386DEST_PATH_IMAGE124
在室温在氮气下将LiBH4 (0.431 g，19.78 mmol)加入到3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0 g，6.6 mmol)的THF (30 mL)溶液中，混合物搅拌16 h，然后通过非常小心地最初滴加饱和氯化铵水溶液(50 mL)淬灭。混合物剧烈搅拌30 min，然后用EtOAc(2 x 50 mL)萃取，合并的有机相干燥并真空蒸发得到无色油状物。其溶解在DCM中，并装载到50 g二氧化硅柱上，然后用0-100% EtOAc/环己烷洗脱，含产物的级分然后真空蒸发得到3-氟-3-(3-羟基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6 g，93%)，为无色油状物。
Figure 623166DEST_PATH_IMAGE125
中间体74：3-氟-3-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 103826DEST_PATH_IMAGE126
3-氟-3-(3-羟基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6 g，6.1 mmol)溶解在DCM (50 mL)中，加入Et3N (1.28 mL，9.18 mmol)，然后混合物在室温搅拌2 h。溶剂用水(20 mL)洗涤，干燥并真空蒸发得到产物(2.5 g，120%)，为黄色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
Figure 396267DEST_PATH_IMAGE127
中间体75：3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 253365DEST_PATH_IMAGE128
3-氟-3-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5 g，7.4 mmol)溶解在DMF (30 mL)中，然后加入叠氮化钠(0.958 g，14.7 mmol)，混合物在80℃加热2 h，然后冷却至室温。所得悬浮液用水(100 mL)稀释，用EtOAc(2 x 50 mL)萃取。合并的有机相用水(2 x 50 mL)洗涤，干燥并真空蒸发得到3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.8g，133%)，为浅黄色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
Figure 885334DEST_PATH_IMAGE129
中间体76：3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 536895DEST_PATH_IMAGE130
3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.8 g，5.9 mmol)溶解在EtOH (60mL)中，并在H-Cube中以完全模式通过Pd/C催化小柱氢化。洗脱液真空蒸发得到浅黄色油状物。该粗制物质溶解在DCM中，并装载到25 g二氧化硅柱上，然后用0-20% 2N甲醇氨/DCM洗脱得到3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2 g，79%)，为无色油状物。
Figure 582212DEST_PATH_IMAGE131
中间体77：(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 977421DEST_PATH_IMAGE132
(S)-3-氟-3-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10 g，43 mmol，制备描述在文献：Org. Process Res. Dev. 2015, 19, 7, 865-871))溶解在DCM (60 mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(23.6 g，55.7 mmol)，混合物在室温搅拌18 h，然后用水洗涤。有机层用硫酸钠干燥并倾倒入清洁干燥的烧瓶中。加入2-(三苯基亚正膦基)乙酸乙酯(19.4 g，55.7 mmol)，混合物在室温搅拌16 h，然后用水洗涤。有机层然后干燥并真空浓缩。所得残余物在50 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物级分真空蒸发得到(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.5 g，81%)，为无色油状物。
Figure 526214DEST_PATH_IMAGE133
中间体78：(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 551939DEST_PATH_IMAGE134
(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(10 g，33mmol)溶解在EtOH (100 mL)中，并在氮气下加入到5% Pd-C (2 g，18.79 mmol)中。混合物然后在大气压力下氢化6 h，得到预期的氢吸收。混合物在氮气下过滤通过Celite®，滤液真空蒸发得到(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.5 g，94%)，为浅黄色油状物。
Figure 818972DEST_PATH_IMAGE135
中间体79：(R)-3-(1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-基)丙酸
Figure 752293DEST_PATH_IMAGE136
(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.60 g，31.6 mmol)溶解在EtOH (50 mL)中，加入NaOH (2N 的水溶液，47.5 mL，95.0 mmol)，然后溶液在室温搅拌4 h。溶剂真空蒸发，残余物在水(100 mL)和乙醚(100 mL)之间分配。水层用2M HCl水溶液酸化至pH ~2，然后用EtOAc(2 x 100 mL)萃取。有机层用水(100 mL)洗涤，然后干燥并真空蒸发得到(R)-3-(1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-基)丙酸(8.6 g，99%)，为无色固体。
Figure 421172DEST_PATH_IMAGE137
中间体80：(R)-3-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 680115DEST_PATH_IMAGE138
叠氮磷酸二苯酯(8.08 mL，37.5 mmol)加入到(R)-3-(1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-基)丙酸(8.6 g，31 mmol)和Et3N (13 mL，94 mmol)在甲苯(50 mL)中的混合物中，然后溶液在室温搅拌30 min。加入苄醇(6.50 mL，62.5 mmol)，混合物回流加热3 h，然后冷却至室温。反应混合物用EtOAc (100 mL)稀释，用水(100 mL)洗涤，有机层干燥并真空蒸发，残余物用色谱法在340 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱。含产物的级分合并，并真空蒸发得到(R)-3-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(8.9g，75%)，为无色胶状物。
Figure 168865DEST_PATH_IMAGE139
中间体81：(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 109139DEST_PATH_IMAGE140
(R)-3-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(8.9 g，23mmol)溶解在EtOH (100 mL)中，在真空下加入到5% Pd/C (2 g)中，然后在大气压力下氢化60 h。混合物在氮气下过滤通过Celite®，滤液真空蒸发得到(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.0 g，104%)，为无色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
Figure 632524DEST_PATH_IMAGE141
中间体82：(±)-3,3-二氟-4-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 796790DEST_PATH_IMAGE142
在室温下向(±)-2-(1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙酸(1.99 g，7.13mmol，可商购自Activate Scientific)在THF (50 mL)中的搅拌溶液中分批加入(5 mL等分试样)硼烷四氢呋喃络合物 (1.0 M的THF溶液，29.0 mL，29.0 mmol)。混合物在室温在氮气下搅拌15.5 h，然后小心加入MeOH (50 mL)。再搅拌20 min后，混合物真空蒸发，残余物在乙酸乙酯(50 mL)和水(50 mL)之间分配。加入饱和盐水溶液(10 mL)以帮助相分离，并且分离各相。水相再用乙酸乙酯(3 x 40 mL)萃取，合并的有机萃取液通过用疏水玻璃料装配的小柱干燥，在氮气流下蒸发溶剂，残余物真空干燥得到浅黄色粘性油；(±)-3,3-二氟-4-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.942 g，103%)。
Figure 38415DEST_PATH_IMAGE143
中间体83：(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 579118DEST_PATH_IMAGE144
(±)-3,3-二氟-4-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.88 g，7.10 mmol)溶解在DCM (60 mL)中，并加入三乙胺(1.48 mL，10.6 mmol)和甲磺酰氯 (0.719 mL，9.23 mmol)。溶液在室温搅拌2.75 h，然后用水(100 mL)洗涤，水相用DCM (2 x 100 mL)萃取。合并的有机相使它们通过用疏水玻璃料装配的小柱干燥并真空蒸发溶剂得到透明油状物，其结晶得到白色固体；(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.467 g，101%)
Figure 891763DEST_PATH_IMAGE145
中间体84：(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 492509DEST_PATH_IMAGE146
(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.33 g，3.88mmol)溶解在DMF (10 mL)中，加入叠氮化钠(301 mg，4.64 mmol)。混合物在氮气下在80℃搅拌4 h。冷却后，混合物用1M 碳酸钠水溶液(50 mL)稀释，用EtOAc(3 x 30 mL)萃取 [注意：在分离中观察到3相，乙酸乙酯萃取液密度最小；在第二次和第三次萃取时，在下面的相中发生固体的部分盐析，加入水(约~10 mL)以帮助盐析]。合并的有机相用水(2 x 40 mL)洗涤 [注意：第二次水洗导致该层的乳化，并加入饱和盐水溶液(约~10 mL)以帮助相分离]，然后干燥并真空蒸发得到浅黄色油状物；(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.23 g，109%)，包含约0.33当量的DMF。
Figure 955851DEST_PATH_IMAGE147
中间体85：(±)-4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 300245DEST_PATH_IMAGE148
(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.22 g，4.20 mmol)的乙酸乙酯(50 mL)溶液通过10% Pd/C催化剂小柱使用Thales 'H-Cube'流动装置（flowapparatus）以全氢模式在20℃氢化。从收集的溶液中真空蒸发溶剂得到无色油状物，其通过NMR分析确定为6:5的起始叠氮化合物与产物胺化合物的混合物。将该残余物再溶解在EtOH (50 mL)中，并再次通过10% Pd/C催化剂小柱使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化，但是这次在40℃。从收集的溶液中真空蒸发溶剂得到无色油状物(982.1 mg，88%)。
Figure 798222DEST_PATH_IMAGE149
中间体86：(±)-4,4-二氟-3-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 241973DEST_PATH_IMAGE150
在室温下向(±)-2-(1-(叔丁氧基羰基)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙酸(197.0 mg，0.705 mmol，可商购自Activate Scientific)在THF (5 mL)中的搅拌溶液中加入硼烷四氢呋喃络合物(1.0 M的THF溶液，2.8 mL，2.8 mmol)。混合物在室温在氮气下搅拌2.5 h，然后小心加入MeOH (5 mL)。再搅拌10 min后，混合物真空蒸发，残余物在乙酸乙酯(5 mL)和水(5 mL)之间分配。水相再用乙酸乙酯(3 x 4 mL)萃取，合并的有机萃取液通过用疏水玻璃料装配的小柱干燥，在氮气流下蒸发溶剂得到无色胶状物；(±)-4,4-二氟-3-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(162 mg，87%)。
Figure 458191DEST_PATH_IMAGE151
中间体87：(±)-4,4-二氟-3-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 340696DEST_PATH_IMAGE152
(±)-4,4-二氟-3-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(883 mg，3.33 mmol)溶解在DCM (30 mL)中，并加入三乙胺(0.70 mL，5.0 mmol)和甲磺酰氯 (0.337 mL，4.33 mmol)。溶液在室温搅拌2.75 h，然后用水(50 mL)洗涤，水相用DCM (2 x 50 mL)萃取。合并的有机相使它们通过用疏水玻璃料装配的小柱干燥并真空蒸发溶剂得到白色固体；(±)-4,4-二氟-3-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.141 g，100%)。
Figure 693180DEST_PATH_IMAGE153
中间体88：(±)-3-(2-叠氮基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 370149DEST_PATH_IMAGE154
(±)-4,4-二氟-3-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.14 g，3.31mmol)溶解在DMF (20 mL)中，加入叠氮化钠(263 mg，4.05 mmol)。混合物在氮气下在80℃搅拌4 h。冷却后，混合物用1M 碳酸钠水溶液(50 mL)稀释，用EtOAc (3 x 30 mL)萃取 [注意：在分离中观察到3相，乙酸乙酯萃取液密度最小]。合并的有机相用水(2 x 40 mL)洗涤，然后干燥并真空蒸发得到浅黄色油状物；(±)-3-(2-叠氮基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.980 g，102%)，含有约0.2当量的DMF。
Figure 745766DEST_PATH_IMAGE155
中间体89：(±)-3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 431963DEST_PATH_IMAGE156
(±)-3-(2-叠氮基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(978 mg，3.37 mmol)的乙酸乙酯(50 mL)溶液通过10% Pd/C催化剂小柱使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式在20℃氢化。从收集的溶液中真空蒸发溶剂得到无色油状物，其通过NMR分析确定为5:4的起始叠氮化合物与产物胺化合物的混合物。将该残余物再溶解在EtOH (50 mL)中，并再次通过10% Pd/C催化剂小柱使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式氢化，但是这次在40℃。从收集的溶液中真空蒸发溶剂得到无色油状物，(±)-3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(796.3 mg，89%)。
Figure 638953DEST_PATH_IMAGE157
中间体90：(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 752403DEST_PATH_IMAGE158
(S)-3-氟-3-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10 g，43 mmol，制备描述在文献：Org. Process Res. Dev. 2015, 19, 7, 865-871中))溶解在DCM (60 mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(23.6 g，55.7 mmol)，混合物在室温搅拌18 h，然后用水洗涤。有机层用硫酸钠干燥并倾倒入清洁干燥的烧瓶中。加入2-(三苯基亚正膦基)乙酸乙酯(19.4 g，55.7 mmol)，混合物在室温搅拌18 h，然后用水洗涤，有机层干燥并真空蒸发。残余物在50 g二氧化硅柱上纯化，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物的级分真空蒸发得到(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.5 g，81%)，为无色油状物。
Figure 677633DEST_PATH_IMAGE159
中间体91：(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 839624DEST_PATH_IMAGE160
(R,E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(10 g，33mmol)溶解在EtOH (100 mL)中并在氮气下加入到5% Pd-C (2.0 g，19 mmol)中，然后混合物在大气压力下氢化6 h，得到预期的氢吸收。混合物在氮气下过滤通过Celite，滤液真空蒸发得到(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.5 g，94%)，为浅黄色油状物。
Figure 166701DEST_PATH_IMAGE161
中间体92：(R)-3-氟-3-(3-羟基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 451051DEST_PATH_IMAGE162
LiBH4 (2.05 g，94.0 mmol)加入到(R)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.5 g，31 mmol)的THF (100 mL)溶液中，混合物在室温在氮气下搅拌48 h，然后在冰浴中冷却，通过非常小心的最初滴加饱和氯化铵水溶液(100 mL)淬灭(加入时强烈冒泡!)。混合物搅拌20 min，用EtOAc (100 mL)稀释，分离合并的有机相，用硫酸钠干燥并真空蒸发得到浅黄色油状物。该粗制物质溶解在DCM中，并装载到100 g二氧化硅柱上，然后用0-100% EtOAc/环己烷洗脱，含产物的级分真空蒸发得到(R)-3-氟-3-(3-羟基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.0 g，73%)，其立即用于下一步骤。
Figure 597999DEST_PATH_IMAGE163
中间体93：(R)-3-氟-3-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 625998DEST_PATH_IMAGE164
(R)-3-氟-3-(3-羟基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.0 g，23 mmol)溶解在DCM (100mL)中，加入Et3N (4.80 mL，34.4 mmol)，混合物在冰浴中冷却，然后滴加Ms-Cl (2.33 mL，29.8 mmol) (放热!)，并将混合物搅拌2 h，使其升温至室温。溶液用水(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。有机层干燥并真空蒸发得到(R)-3-氟-3-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.2 g，92%)，为无色油状物，其用于下一步骤。
Figure 745264DEST_PATH_IMAGE165
中间体94：(R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 200516DEST_PATH_IMAGE166
叠氮化钠(2.68 g，41.2 mmol) 加入到(R)-3-氟-3-(3-((甲磺酰基)氧基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.00 g，20.6 mmol)的DMF (50 mL)溶液中，混合物在70℃加热2 h，然后冷却至室温，用水(200 mL)稀释，用EtOAc (2 x 100 mL)萃取。合并的有机相用水(2 x100 mL)洗涤，干燥并真空蒸发得到(R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯，为无色油状物。粗产物溶解在DCM (10 mL)中，并装载到100 g二氧化硅柱上，用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，含产物级分(用茚三酮显现)真空蒸发得到(R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.2 g，88%)，为无色油状物，其不经进一步纯化用于下一步骤。
Figure 100339DEST_PATH_IMAGE167
中间体95：(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 666449DEST_PATH_IMAGE168
(R)-3-(3-叠氮基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.00 g，17.4 mmol)溶解在THF(50 mL)中，加入三苯基膦(5.50 g，20.9 mmol)，然后混合物在室温搅拌60 h。加入水(50mL)，混合物剧烈搅拌2 h，然后用EtOAc (100 mL)和盐水(50 mL)稀释，分离有机层，干燥并真空蒸发得到浅黄色油状物。粗产物溶解在DCM (20 mL)中，并装载到100 g二氧化硅柱上，然后用0-20% 2N 甲醇氨/DCM洗脱，含产物级分(用茚三酮显现)真空蒸发得到(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.0 g，88%)，为无色油状物。
Figure 702538DEST_PATH_IMAGE169
中间体96：(S)-2-(((甲磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 266375DEST_PATH_IMAGE170
(S)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(可商购自，例如，Activate Scientific)(3.00 g，13.8 mmol)和三乙胺(3.85 mL，27.6 mmol)在DCM (30 mL)中在0℃搅拌。经5 min逐份加入Mesyl-Cl (1.614 mL，20.71 mmol)，反应在室温搅拌4 h。反应然后用另外的DCM稀释，并用1N HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和水洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(S)-2-(((甲磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(4.242 g，104%)，为黄色油状物，其以粗产物用在下一步骤中。
Figure 387914DEST_PATH_IMAGE171
中间体97：(R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 757716DEST_PATH_IMAGE172
(S)-2-(((甲磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(4.2 g，14 mmol)、KCN(0.972 g，14.9 mmol)和KI (3.54 g，21.3 mmol)在100℃在DMSO (30 mL)中搅拌4 h。反应然后冷却至室温，用水稀释，用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥，真空浓缩得到黄色油状物。该油状物使用SP4快速色谱法纯化，使用SNAP 50 g Si柱，用0-50%EtOAc:环己烷洗脱得到(R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.393 g，74%)，为白色固体。
Figure 913891DEST_PATH_IMAGE173
中间体98：(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 710945DEST_PATH_IMAGE174
(R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.39 g，10.6 mmol)溶解在THF (20 mL)中，并在室温下搅拌，经10 min加入硼烷四氢呋喃络合物 (1M的THF溶液，15.84 mL，15.84mmol)，反应在室温搅拌2 h。反应通过小心加入MeOH淬灭，直到所有冒泡停止。将反应真空浓缩，残余物溶解在MeOH中，所得溶液用1M NaOH (50 mL)处理，在室温搅拌2 h，产生沉淀。反应真空浓缩以去除MeOH，并用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机相用水洗涤，用疏水玻璃料干燥，真空浓缩得到粗产物，为无色油状物。其进一步使用SP4快速色谱法纯化，使用SNAP50 g Si柱，用0-8% 2N NH3/MeOH:DCM洗脱，得到(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(965 mg，40%)，为无色油状物。
Figure 257464DEST_PATH_IMAGE175
中间体99：(反)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)环丙烷甲酸甲酯
Figure 165378DEST_PATH_IMAGE176
二异丙胺(6.27 mL，44.0 mmol)的THF (40 mL)溶液在-78℃在氮气下用正丁基锂(1.6 N的己烷溶液，27.5 mL，44.0 mmol)处理。5 min后，混合物使用冰浴升温并在0℃搅拌30 min，然后再次冷却至-78℃，用乙酸叔丁酯(5.90 mL，44.0 mmol)/THF (15 mL)处理。黄色混合物在该温度下搅拌30 min，然后用(E)-4-溴丁-2-烯酸甲酯(4.70 mL，40 mmol)/THF(15 mL)处理。黄色混合物在该温度下搅拌2.5 h，然后用饱和NH4Cl水溶液(50 mL)处理，并升温至室温。混合物在AcOEt和水之间分配并分离各层。水相用EtOAc萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。用硅胶快速色谱法(50 g 柱，40% GLOBAL 梯度(AcOEt/己烷))纯化残余物得到(反)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)环丙烷甲酸甲酯(6.95 g，81%)，为无色油状物。
Figure 176059DEST_PATH_IMAGE177
中间体100：2-((反)-2-(甲氧基羰基)环丙基)乙酸
Figure 144015DEST_PATH_IMAGE178
(反)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)环丙烷甲酸甲酯(6.95 g，32.4 mmol)的DCM(30 mL)溶液在0℃用TFA (30 mL)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩，残余物与甲苯共蒸发4次得到2-((反)-2-(甲氧基羰基)环丙基)乙酸(5.28 g，103%)，为无色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
Figure 240147DEST_PATH_IMAGE179
中间体101：(1S*,2R*)-2-(2-羟基乙基)环丙烷甲酸甲酯
Figure 951751DEST_PATH_IMAGE180
2-((反)-2-(甲氧基羰基)环丙基)乙酸(5.22 g，33.0 mmol)的THF (35 mL)溶液在0℃缓慢地用硼烷四氢呋喃络合物 (1N的THF溶液，72.6 mL，72.6 mmol)处理，所得溶液在此温度下搅拌2 h，然后非常慢地用MeOH (26.7 mL，660 mmol)淬灭并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(50 g 柱，40% GLOBAl 梯度(AcOEt/己烷))纯化残余物得到(反)-2-(2-羟基乙基)环丙烷甲酸甲酯(3.36 g，71%)，为无色油状物。
Figure 20201DEST_PATH_IMAGE181
中间体102：(反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙烷甲酸甲酯
Figure 159058DEST_PATH_IMAGE182
(反)-2-(2-羟基乙基)环丙烷甲酸甲酯(3.36 g，23.3 mmol)的DCM (60 mL)溶液在室温用咪唑 (2.38 g，35.0 mmol)处理，然后用TBDMS-Cl (4.22 g，28.0 mmol)处理，最后用DMAP (0.285 g，2.33 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌16 h。混合物用DCM和水稀释并分离各层。水相用DCM萃取，合并的有机相使用相分离器干燥，然后真空浓缩得到(反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙烷甲酸甲酯(6.5 g，108%)，为无色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
中间体103：(反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙烷甲酸
Figure 476907DEST_PATH_IMAGE183
(反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙烷甲酸甲酯(6.02 g，23.3mmol)的MeOH (50 mL)溶液在室温用氢氧化钠(2N 的水溶液，23.30 mL，46.60 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌16 h，然后真空除去大部分MeOH，残余物用水稀释。混合物然后用HCl (2N 的水溶液，23.30 mL，46.6 mmol)处理，形成的沉淀用AcOEt萃取三次。合并的有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩得到(反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙烷甲酸(5 g，88%)，为黄色固体。
Figure 992202DEST_PATH_IMAGE184
中间体104：((反)-2-(2-羟基乙基)环丙基)氨基甲酸苄酯
Figure 977476DEST_PATH_IMAGE185
(反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙烷甲酸(5.00 g，20.5mmol)的甲苯(80 mL)溶液在室温顺序用三乙胺(8.55 mL，61.4 mmol)、叠氮磷酸二苯酯(5.29 mL，24.5 mmol)和苄醇(4.25 mL，40.9 mmol)处理，所得混合物回流6 h，然后冷却至室温并真空浓缩得到黄色固体。
残余物溶解在AcOEt中，有机相用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(100 g 柱，50% GLOBAL 梯度(EtOAc/己烷))纯化残余物得到((反)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)环丙基)氨基甲酸苄酯(1.34 g，19%)，为极浅黄色的油状物，然后((反)-2-(2-羟基乙基)环丙基)氨基甲酸苄酯(1.69 g，35%)，为浅黄色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.85 min，[M+H]+= 236。
中间体105：2-((反)-2-氨基环丙基)乙醇
Figure 221988DEST_PATH_IMAGE186
((1S*,2R*)-2-(2-羟基乙基)环丙基)氨基甲酸苄酯(1.34 g，5.70 mmol)的MeOH(30 mL)溶液用碳载钯 (50%湿，10% w/w，300 mg)处理，所得混合物在氢气(1 atm)下搅拌3h。催化剂使用Celite®垫(2.5 g)滤出，并用MeOH淋洗。合并的有机相真空浓缩得到2-((1R*,2S*)-2-氨基环丙基)乙醇(576 mg，100%收率)，为极浅灰色固体。
Figure 27133DEST_PATH_IMAGE187
中间体106：2-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure 80539DEST_PATH_IMAGE188
(+/-)-((反)-2-氨基环丙基)甲醇(10 g，115 mmol，可商购自，例如，Enamine)溶解在甲苯(156 mL)中，加入邻苯二甲酸酐(22 g，149 mmol)，反应在氮气下在110℃加热。反应搅拌5 h。溶液然后冷却至室温，在EtOAc (50 mL)和水(50 mL)之间分配，并分离各层。水相用EtOAc (2 x 50 mL)萃取，合并的有机相用盐水(60 mL)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到34.0 g黑色油状物。其用SiO2色谱法(Biotage SNAP 750 g，用0-100%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。所需级分浓缩得到26 g无色油状物。其进一步用SiO2色谱法(BiotageSNAP 750 g，用10-60% DCM/乙醚洗脱)纯化。所需级分浓缩得到19.5 g，为无色油状物。其悬浮在乙醚(600 mL)中，并真空过滤。滤液浓缩得到(+/-)-2-((反)-2-(羟基甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(16.4 g，42%)，为无色油状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.07 min，[M+H]+= 218.2。
(+/-)-2-((反)-2-(羟基甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(16.4 g)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (100 mL)中。注射：2.5 mL溶液注射到柱上(50% EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550, 100, 柱30 mm x 25 cm ChiralpakAD-H (5 µm) 批号 ADH12143-01)。总注射次数 = 40。合并来自12-14.5 min的级分并标记为峰1。合并来自19.5-26 min的级分并标记为峰2。合并的级分真空浓缩，然后转移到已称重的烧瓶中。从DCM和庚烷回收最终的化合物以得到固体。
收集对应于峰1的级分得到2-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮，中间体106 (5.74 g)。
收集对应于峰2的级分得到对映异构体产物(7.24 g)。
中间体107：((1S,2S)-2-氨基环丙基)甲醇盐酸盐
Figure 920319DEST_PATH_IMAGE189
水合肼(0.466 mL，9.65 mmol，65% wt.)缓慢加入到2-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.0 g，9.21 mmol)的EtOH (46 mL)悬浮液中。反应混合物在氮气下加热至50℃持续16 h。所得白色沉淀真空过滤。滤液用HCl (4M的二噁烷溶液，57.5mL，230 mmol)酸化并真空蒸发得到粗产物。残余物悬浮在MeOH中，用磺酸基SPE(SCX) 20 g纯化，顺序使用溶剂：甲醇，随后2N氨/MeOH。合并适当的级分并用HCl (4N的二噁烷溶液，6mL，24 mmol)酸化，然后真空蒸发得到白色料浆。考虑到没有成功地完成盐的形成，将残余物溶解在EtOH (30 mL)中，用2N HCl水溶液(10 mL)处理，再次真空蒸发得到白色料浆(1540 mg)。
样品真空干燥3天得到白色糊状物((1S,2S)-2-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(1035mg，73%)。
Figure 400979DEST_PATH_IMAGE190
中间体108：4,4-二氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1:1 非对映异构体混合物)
Figure 896683DEST_PATH_IMAGE191
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.161 mmol)、HATU (73.3 mg，0.193 mmol)和DIPEA (0.084 mL，0.482 mmol)溶解在DMF (3 mL)中，同时在室温搅拌5 min。3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(59.4 mg，0.225 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，其然后在室温搅拌2h。加入另外的3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(20 mg，0.076 mmol)，反应混合物在室温搅拌1 h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-10% 2M NH3/MeOH:DCM的梯度洗脱得到4,4-二氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1:1 非对映异构体混合物) (79mg，0.142 mmol，88%收率)，为黄色油状物。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 1.28 min，[MH]+= 558。
中间体110：(+/-)-5-溴-2-(碘甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰 胺
Figure 488201DEST_PATH_IMAGE192
(+/-)-5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(500 mg，1.444 mmol)溶解在DCM (20ml)中，加入碳酸氢钠(243 mg，2.89 mmol)和碘 (513 mg，2.022 mmol)，然后混合物在室温下搅拌过夜。混合物用饱和硫代硫酸钠溶液（水溶液）淬灭，并用DCM萃取。有机相干燥并真空蒸发得到(+/-)-5-溴-2-(碘甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(0.67 g，1.419 mmol，98%收率)，为浅黄色泡沫。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.35 min，[M+H]+= 474。
中间体111：(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃- 7-甲酰胺
Figure 448067DEST_PATH_IMAGE193
(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(3 g，8.21 mmol)悬浮在DCM (50 mL)中，并在N2下在冰浴中冷却，然后经30 min滴加Deoxo-Fluor (7.57 mL，20.53 mmol)，混合物然后在N2下升温至40℃过夜。溶液加入到快速搅拌的饱和NaHCO3 (水溶液)中，搅拌30 min，然后分离有机层，干燥并真空蒸发。残余物用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% EtOAc/环己烷的梯度洗脱，得到(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(2.25 g，6.13 mmol，75%收率)，为无色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 1.19 min，[MH]+ = 369。
中间体112：(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-7-甲酰胺
Figure 99628DEST_PATH_IMAGE194
(反)-5-溴-2-羟基-N-三氘代甲基-3-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺(15.1 g，41.3 mmol)在DMSO (150 mL)和水(40 mL)中的溶液被冷却至0℃，用冰冷的氢氧化钾 (4.64 g，83 mmol)的水(40 mL)溶液处理。所得黑色溶液在该温度下搅拌7 h，然后混合物在冷冻机中静置16 h。所得溶液升温并在0℃搅拌1 h，然后用乙酸(5.44 mL，95 mmol)处理。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。将残余物与Et2O一起研磨得到白色固体，将其滤出并真空干燥得到(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(11.18 g，30.6 mmol，74%收率)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 1.03 min，[MH]+ = 367。
中间体113：(+/-)-(5-溴-2-羟基-N-三氘代甲基-3-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基) 苯甲酰胺
Figure 879365DEST_PATH_IMAGE195
(+/-)-5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(14.65 g，41.9 mmol)的DCM (200 mL)溶液在室温用mCPBA (18.80 g，84 mmol) (50% w/w)处理，所得混合物在室温搅拌48 h。混合物然后在DCM和饱和NaHCO3(水溶液) (100 mL)与五水合硫代硫酸钠(15.62 g，62.9 mmol)在水(100 mL)中的混合物之间分配。混合物搅拌20 min，然后分离各层。水相用DCM萃取，合并的有机相用饱和NaHCO3(水溶液)、水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到粗制(+/-)-5-溴-2-羟基-N-三氘代甲基-3-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺(15.4 g，42.2 mmol，101%收率)，为白色/浅黄色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 1.01 min，[MH]+ = 367。
中间体114：(+/-)-5-溴-2-羟基-N-三氘代-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺
Figure 212258DEST_PATH_IMAGE196
(+/-)-5-溴-2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(28 g，81 mmol)的水(100mL)溶液在室温下用C-三氘代甲胺(416 mL)处理。所得混合物在室温搅拌16 h，然后真空浓缩。残余物在水和EtOAc之间分配。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用5-35% AcOEt:己烷的梯度洗脱，得到(+/-)-5-溴-2-羟基-N-三氘代-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(14.65 g，41.9 mmol，52%收率)，为橙色泡沫。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 1.26 min，[MH]+ = 351。
中间体115：(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰 胺
Figure 26630DEST_PATH_IMAGE197
在N2下在0℃经1 h将Deoxo-Fluor (100 mL，271 mmol)滴加到(反)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(49 g，135 mmol)的DCM (400 mL)悬浮液中，混合物然后在0℃搅拌30 min，使其经1 h升温至室温，然后在N2下加热至35℃过夜。混合物分小份倒入快速搅拌的饱和NaHCO3 (水溶液) (2 L)中，然后混合物搅拌30min，接着分离各相。有机相用饱和NaHCO3 (水溶液)洗涤，然后干燥并真空蒸发得到浅黄色固体。该固体与乙醚一起研磨，过滤收集固体并用乙醚洗涤得到(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(26.5g, 72.8 mmol，54%收率)，为无色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 1.19 min，[MH]+ = 366。
中间体116：(+/-)-4,4-二氟-3-(2-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 849092DEST_PATH_IMAGE198
(+/-)-(反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.161 mmol)、HATU (73.3 mg，0.193 mmol)和DIPEA (0.084 mL，0.482 mmol)溶解在DMF (3 mL)中，同时在室温搅拌5 min。3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(59.4 mg，0.225 mmol)溶解在DMF (1.00 mL)中，并加入到反应混合物中，其然后在室温再搅拌2 h，加入3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(20 mg，0.076 mmol)。反应混合物在室温搅拌1 h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% LiCl (水溶液)洗涤，并加入盐水。有机层用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-7% MeOH:DCM的梯度洗脱，得到(+/-)-4,4-二氟-3-(2-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(79 mg，0.142mmol，88%收率)，黄色油状物。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 1.28 min，[MH]+ = 558。
中间体117：(反)-N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二甲基- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 116126DEST_PATH_IMAGE199
(1R,5S,6s)-6-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(240mg, 0.462 mmol)溶解在DCM (5mL)中，用TFA (0.107 mL，1.386 mmol)处理，在室温搅拌16 h。反应浓缩并干燥得到(反)-N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(168 mg，0.429 mmol，93%收率)，为黄色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 0.63 min，[MH]+= 392。
中间体118：(2S,3S)-N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲 基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 315026DEST_PATH_IMAGE200
(1R,5S,6s)-6-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(133 mg，0.261 mmol)和TFA(0.201 mL，2.61 mmol)在DCM (10 mL)中在室温搅拌2 h。反应浓缩得到褐色胶状物，其用MeOH、随后用NH3溶液(2M的MeOH溶液)洗脱通过SCX SPE (1 g)。氨级分浓缩得到(2S,3S)-N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(85 mg，0.208 mmol，80%收率)，为黄色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 0.55 min，[MH]+= 410。
中间体119：(1R,5S,6s)-6-((反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 921588DEST_PATH_IMAGE201
(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(212 mg，1.071mmol) (可购自，例如，Astatech)、(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(130 mg，0.357 mmol)、乙酸钯(II) (40.1 mg，0.178 mmol)、Xantphos(103 mg，0.178 mmol)、DMAP (65.4 mg，0.535 mmol)和羰基钴(61.0 mg，0.178 mmol)被置于微波小瓶中并加盖。加入1,4-二噁烷(4 mL)，反应在biotage微波反应器中在90℃辐照1h。反应用水稀释，用EtOAc萃取。有机相用盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黑色油状物。该油状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-40% (25% EtOH/EtOAc):Etoac的梯度洗脱，得到(1R,5S,6s)-6-((反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(133 mg，0.261 mmol，73.1%收率)，为褐色油状物。
LCMS (甲酸法)：Rt = 1.11 min，[MH]+= 510。
中间体120：(2R,3R)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5-甲酸
Figure 914951DEST_PATH_IMAGE202
(2R,3R)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸甲酯(2.2 g，6.41 mmol)和氢氧化锂(0.307 g，12.81 mmol)在水(30 mL)和THF (30 mL)中在50℃搅拌16 h。反应浓缩除去THF，然后用水稀释，接着用2N HCl (水溶液)酸化至pH 3。形成沉淀，其通过过滤除去并干燥得到(2R,3R)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(2.010 g，6.10 mmol，95%收率)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：Rt 0.89 min，[M+H]+= 330。
中间体121：(2S,3S)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲 酰胺
Figure 669281DEST_PATH_IMAGE203
(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(320 mg，0.879 mmol) (320 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (5 mL)中。注射：0.5 mL溶液注射到柱上(20% EtOH/庚烷，流速 = 20 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550,100, 柱2 cm x 25 cm Chiralcel OJ (10 µm), 批号 OJ00CJ-FD022)。总注射次数 = 12。合并来自5.75-6.5 min的级分并标记为峰1。合并来自6.5-7.5 min的级分并标记为混合（mix）。合并来自7.5-9.5min的级分并标记为峰2。合并的混合级分真空浓缩并使用上述方法再次处理。合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分得到(2S,3S)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(145 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 1.17 min，[MH]+ = 364, 366。
中间体122：N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-N 7,2-二甲基 苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 671872DEST_PATH_IMAGE204
向烧瓶中加入3-溴-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)苯并呋喃-5-甲酸(713 mg，2.28mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺(226 mg，2.28 mmol)，然后加入DCM (17mL)。所得混合物在室温用DIPEA (1.20 mL，6.85 mmol)处理，所得溶液在此温度下搅拌5min。加入T3P (1.63 mL，2.74 mmol)，反应混合物在室温搅拌3 h。然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺(45.3 mg，0.457 mmol)，反应混合物在室温搅拌30 min。然后加入T3P (0.680 mL，1.14 mmol)，反应混合物在室温搅拌16 h。然后加入DIPEA (0.399 mL，2.28 mmol)，随后加入T3P (0.680 mL，1.14 mmol)，反应混合物在室温搅拌2 h。混合物然后用饱和NaHCO3 (水溶液)处理，并分离各层。水相用DCM萃取，合并的有机相用盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(583 mg，65%)，为膏状有色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 0.84 min，[M+H]+= 395 (1 Br)。
中间体123：N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-羟基苯基)- N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 195257DEST_PATH_IMAGE205
向烧瓶中加入N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(653 mg，1.66 mmol)、(3-羟基苯基)硼酸(275 mg，1.99 mmol)、乙酸钯(II) (37.3 mg，0.166 mmol)、CatacXium A (59.5 mg，0.166 mmol)和K2CO3 (136mg，0.984 mmol)，然后加入1,4-二噁烷(9 mL)和水(3 mL)，反应混合物在70℃在N2下搅拌1h。加入(3-羟基苯基)硼酸(275 mg，1.99 mmol)、乙酸钯(II) (37.3 mg，0.166 mmol)、CatacXium A (59.5 mg，0.166 mmol)和K2CO3 (229 mg，1.66 mmol)，反应混合物在70℃在N2下搅拌16 h，然后冷却至室温。反应混合物用MeOH和EtOAc洗脱通过10 g celite柱，并将级分真空浓缩。残余物用水稀释，水相用EtOAc萃取。有机相用盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在DCM和MeOH中，加入Florisil®，混合物真空浓缩。所得自由流动固体加料到50 g二氧化硅柱上，用0-80% [25% EtOH/EtOAc]:环己烷的梯度洗脱。相关级分真空浓缩得到N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-羟基苯基)-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(270 mg，40%)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 0.84 min，[M+H]+= 407。
中间体124：N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙 氧基)苯基)-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 297205DEST_PATH_IMAGE206
向烧瓶中加入N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-羟基苯基)-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(200 mg，0.492 mmol)和K2CO3 (136mg, 0.984mmol)，加入DMF (5ml)。所得混合物在室温用1-氯-2-甲氧基乙烷(0.054 mL，0.59 mmol)处理，然后在70℃搅拌2 h，加入另外的1-氯-2-甲氧基乙烷(0.135 mL，1.48 mmol)，反应混合物在70℃搅拌16h。加入另外的1-氯-2-甲氧基乙烷(0.135 mL，1.48 mmol)和K2CO3 (136mg,0.984 mmol)，反应混合物在70℃搅拌3 h，然后在90℃搅拌3 h。反应冷却至室温，用水稀释，水相用DCM萃取，有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(224 mg，98%)，为橙色油状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.96 min，[MH]+= 465。
中间体125：(顺)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲 氧基乙氧基)苯基)-N 7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 538831DEST_PATH_IMAGE207
N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N 7,2-二甲基苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(224 mg，0.482 mmol)和Pd-C 424 (可商购自，例如，Johnson Matthey, 100 mg)在EtOH (10 mL)中的混合物在室温在H2气氛(1 atm)下搅拌4天。反应过滤通过Celite以除去催化剂，然后真空浓缩得到(顺)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N 7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(198 mg，88%)，为无色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 0.92 min，[M+H]+= 467。
中间体126：(+/-)3,3-二氟-4-(3-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 79534DEST_PATH_IMAGE208
(+/-)(反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80mg，0.26 mmol)、4-(3-氨基丙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(71.5 mg，0.257 mmol)、DIPEA (0.134 mL，0.771 mmol)和HATU (147 mg，0.385 mmol)溶解在DMF (5 mL)中，所得混合物在室温搅拌15 min，然后静置过夜(16 h)。混合物然后用EtOAc稀释，有机相用水(20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3 (水溶液)洗涤，通过疏水玻璃料并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/己烷)纯化残余物得到(+/-)3,3-二氟-4-(3-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(91 mg，95%)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.27 min，[M+H]+= 572。
中间体127：(+/-)(反)-N 5-(3-(3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 457425DEST_PATH_IMAGE209
(+/-)3,3-二氟-4-(3-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(91 mg，0.159 mmol)的DCM (4 mL)溶液在室温用TFA (0.5 mL，6.49 mmol)处理，所得混合物在该温度搅拌15 min，然后将其真空浓缩，进一步在氮气流下干燥2 h得到(+/-) (反)-N 5-(3-(3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺三氟乙酸盐(75 mg，76%)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 1.03 min，[M+H]+= 472。
中间体128：(2S,3S)-N 5-(4,4-二乙氧基丁基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 58171DEST_PATH_IMAGE210
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(200 mg，0.607 mmol)、HATU (277 mg，0.729 mmol)和DIPEA (0.318 mL，1.822 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并在室温混合5 min。加入4,4-二乙氧基丁-1-胺 (0.109 mL，0.607mmol)，所得混合物在室温搅拌1.5 h。加入另外的4,4-二乙氧基丁-1-胺 (0.109 mL，0.607mmol)，反应搅拌5 min，然后静置过夜。然后将其在EtOAc中稀释，有机相用2% w/w柠檬酸(水溶液)洗涤，盐水洗涤，然后用饱和NaHCO3(水溶液)洗涤并真空浓缩。所得残余物溶解在DCM (5 mL)中。不溶物滤出，溶解在MeOH (5 mL)中并吹干过夜得到产物的第一部分。DCM滤液装载到25 g二氧化硅小柱上。用硅胶快速色谱法(20-100% EtOAc/环己烷)纯化得到产物的第二部分。两个部分合并得到(2S,3S)-N 5-(4,4-二乙氧基丁基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(158 mg，55%)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 1.08 min，[M-H]-= 471。
中间体129：(2S,3S)-N5-(3-((2r,5)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁 烷-2-基)丙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 459196DEST_PATH_IMAGE211
(2S,3S)-N 5-(4,4-二乙氧基丁基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(158 mg，0.318 mmol)、2-(1,3-二羟基丙烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(70.3 mg，0.318 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(60.4 mg，0.318 mmol)在甲苯(6 mL)中的悬浮液在40℃搅拌1.5 h，然后在70 ℃在N2下再搅拌4 h，然后使其冷却至室温，静置过夜。然后真空除去溶剂。所得残余物在EtOAc和1M Na2CO3 (水溶液)之间分配并分离各层。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用疏水玻璃料干燥。滤液真空蒸发。用硅胶快速色谱法(50 g柱，梯度70-100% EtOAc/环己烷)纯化残余物得到(2S,3S)-N 5-(3-(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(48 mg，25%)，为黄色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.12 min，[M+H]+= 602。
中间体130：(2S,3S)-N 5-(3,3-二乙氧基丙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 803590DEST_PATH_IMAGE212
向烧瓶中加入(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(250 mg，0.759 mmol)和HATU (346 mg，0.911 mmol)，然后加入DMF (4 mL)，所得混合物在室温用DIPEA (0.398 mL，2.28 mmol)处理，然后在该温度下搅拌5 min。然后加入3,3-二乙氧基丙烷-1胺(0.147 mL，0.911 mmol)，所得混合物在室温搅拌1 h，然后用水(50 mL)稀释。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，过滤通过疏水玻璃料。溶剂真空蒸发。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：20至100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到(2S,3S)-N 5-(3,3-二乙氧基丙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(306 mg，88%)，为黄色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.05 min，[M+H]+= 458。
中间体131：(2S,3S)-N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁 烷-2-基)乙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 35988DEST_PATH_IMAGE213
(2S,3S)-N 5-(3,3-二乙氧基丙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(306 mg，0.668 mmol)、2-(1,3-二羟基丙烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(162 mg，0.734 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(140 mg，0.734 mmol)在甲苯(10 mL)中的悬浮液在70℃在N2下搅拌过夜，然后使其冷却至室温并真空浓缩得到褐色固体。该残余物在EtOAc和2N Na2CO3 (水溶液)之间分配并分离各层。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用疏水玻璃料干燥。滤液真空浓缩得到(2S,3S)-N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(144.9 mg，37%)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.09 min，[M+H]+= 588。
中间体132：3-溴-4-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯
Figure 807635DEST_PATH_IMAGE214
向烧瓶中加入3-溴-4-羟基苯甲酸甲酯(40.7 g，176 mmol)、碳酸钾(48.7 g，352mmol)和碘化钾(2.047 g，12.33 mmol)，然后加入丙酮(400 mL)，所得悬浮液用(E)-(3-氯丙-1-烯-1-基)苯(27.2 mL，282 mmol)处理，然后回流搅拌8 h。混合物冷却至室温，滤出固体并在EtOAc和水之间分配。分离各层，水层再用EtOAc萃取。丙酮滤液真空浓缩，残余物溶解在合并的由萃取得到的EtOAc部分中。EtOAc层用水洗涤，合并的相通过过滤器以收集固体，将其用EtOAc洗涤并在40℃真空干燥2 h得到3-溴-4-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(7.7 g，22.18 mmol，13%收率)。分离各层，有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到3-溴-4-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(47.4 g，137 mmol，77%收率)，为浅黄色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 1.46 min，[MH]+= 在正确的m/z没有离子化。
中间体133：3-溴-4-羟基-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯
Figure 758274DEST_PATH_IMAGE215
3-溴-4-(肉桂基氧基)苯甲酸甲酯(15 g，43.2 mmol)的N,N-二甲基苯胺 (100mL)溶液在220 ℃搅拌1 h，然后冷却至室温。混合物倒入含有300 mL EtOAc的冰冷25% w/wHCl (水溶液)中。分离各层，水相用EtOAc萃取两次。合并的有机相用饱和NaHCO3 (水溶液)洗涤两次，然后用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到3-溴-4-羟基-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(15 g，43.2 mmol，100%收率)，为浅褐色油状物。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 0.85 min，[MH] + = 347。
中间体134：3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯
Figure 578462DEST_PATH_IMAGE216
3-溴-4-羟基-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(15.0 g，43.2 mmol)的DMF (100mL)溶液在室温用K2CO3 (11.9 g，86.0 mmol)处理，然后用MOM-Cl (3.94 mL，51.8 mmol)逐滴处理。10 min后，混合物在水和Et2O之间分配并分离各层。水相用Et2O萃取两次，合并的有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(330 g 柱，0至10% EtOAc/己烷)纯化残余物得到3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(13 g，77%)，为浅橙色油状物。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 1.44 min，[MH]-= 391 (1 Br)。
中间体135：3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸
Figure 930946DEST_PATH_IMAGE217
3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯(6.00 g，15.3 mmol)在MeOH (40 mL)和THF (20 mL)中的溶液在室温用NaOH (2N的水溶液，19.17 mL，38.3 mmol)处理，所得混合物在80℃搅拌1.5 h，然后冷却至室温。真空除去大部分挥发物，残余物用水稀释。水相用Et2O萃取，然后用2N HCl (水溶液)酸化。悬浮液用EtOAc萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。残余物与Et2O一起研磨，得到3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸(2.9 g，50%)，为白色固体。然后真空浓缩用于研磨的Et2O相得到另外的3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸(2.4 g，41%)，为浅褐色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 0.78 min，[M-H]-= 377 (1 Br)。
中间体136：N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-(甲氧基甲 氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺
Figure 873494DEST_PATH_IMAGE218
3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酸(2.30 g，6.10 mmol)的DMF(25 mL)溶液在室温用HATU (2.78 g，7.32 mmol)处理，然后用DIPEA (2.66 mL，15.2mmol)处理，再用(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(0.992 g，7.32 mmol)处理，所得黄色混合物在该温度下搅拌10 min，然后用水稀释。水相用EtOAc萃取三次。合并的有机相用饱和LiCl (水溶液)洗涤，然后用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(100 g 柱，40% AcOEt/己烷)纯化残余物得到N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(2.45 g，88%)，为白色泡沫。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 1.20 min，[M+H]+= 458 (1 Br)。
中间体137：(+/-)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-羟 基-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺
Figure 311429DEST_PATH_IMAGE219
N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-(甲氧基甲氧基)-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(2.45 g，5.35 mmol)的DCM (15 mL)溶液在室温用HCl (4N的二噁烷溶液，5.35 mL，21.4 mmol)处理，所得混合物在该温度搅拌1 h。混合物用Et2O稀释，搅拌4min，然后滤出所形成的白色沉淀，用Et2O淋洗，并真空干燥得到(+/-)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-羟基-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(2.2 g，99%)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.08 min，[M+H]+= 416 (1 Br)。
中间体138：(+/-)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-羟 基-5-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺
Figure 997625DEST_PATH_IMAGE220
(+/-)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-羟基-5-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(4.20 g，10.1 mmol)的DCM (50 mL)溶液在室温用m-CPBA (<77% w/w，5.68 g，25.3 mmol)处理，所得混合物在该温度搅拌3天。然后加入m-CPBA (<77% w/w,5.68 g，25.3 mmol)，混合物在室温搅拌2天。然后将混合物倒入五水合硫代硫酸钠(15.1g，60.8 mmol)在水(100 mL)中的溶液和饱和NaHCO3 (水溶液)的混合物中。两相混合物在室温搅拌20 min，然后分离各层。水相用DCM萃取两次，合并的有机相用饱和NaHCO3 (水溶液)洗涤三次，然后用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(+/-)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-羟基-5-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺(4.5 g，103%)，为极浅黄色泡沫(5/4外消旋非对映异构体混合物)。
LCMS (甲酸法)：Rt 0.88和0.93 min，[M+H]+= 432 (1 Br)。
中间体139：(反)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-7-溴-2-(羟基 甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺
Figure 204616DEST_PATH_IMAGE221
N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-溴-4-羟基-5-(环氧乙烷-2-基(苯基)甲基)苯甲酰胺(4.2 g，9.76 mmol)在水(5 mL)和DMSO (25 mL)中的溶液在0℃用KOH (1.095 g，19.52 mmol)/水(5 mL)逐滴处理。所得混合物在该温度搅拌8 h，然后用乙酸(1.285 mL，22.45 mmol)处理。加入30 mL水，出现沉淀，将其剧烈搅拌5 min，然后滤出并用水淋洗。所得残余物溶解在EtOAc (100 mL)中，有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到(反)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-7-溴-2-(羟基甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺(3.87 g，92%)，为浅黄色泡沫。LCMS (2 min甲酸法)：Rt0.93 min，[M+H]+= 432 (1 Br)。
中间体140：(反)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-7-溴-2-(氟甲 基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺
Figure 255748DEST_PATH_IMAGE222
(反)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-7-溴-2-(羟基甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺(2.6 g，6.0 mmol)的DCM (20 mL)溶液在0℃用deoxofluor (6.68 mL，18.1 mmol)处理，所得溶液在此温度下搅拌1 h，然后回流搅拌过夜。反应混合物然后冷却至室温，加入到饱和碳酸氢钠(水溶液) (100 mL)中。所得两相混合物搅拌30 min，然后分离各层。有机相用疏水玻璃料干燥，真空浓缩得到浅黄色胶状物。用硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化残余物得到(反)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-7-溴-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺(0.72 g，28%)，为无色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.09 min，[M+H]+= 434 (1 Br)。
中间体141：(反)-5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酰基)-2- (氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸甲酯
Figure 180979DEST_PATH_IMAGE223
(反)-N-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-7-溴-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺(720 mg，1.67 mmol)、乙酸钯(II) (37.4 mg，0.167mmol)和Xantphos (96 mg，0.17 mmol)在圆底烧瓶中混合，该圆底烧瓶用suba密封件密封并用氮气吹扫。加入DMF (5 mL)、NEt3 (0.696 mL，5.00 mmol)和MeOH (1.00 mL，24.7mmol)。用来自气球的一氧化碳吹扫该容器，然后在CO气氛(使用气球)下在70℃搅拌过夜。混合物然后冷却至室温并用水(20 mL)稀释。水相用EtOAc萃取，有机相用10% w/w LiCl(水溶液)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(50 g 柱，梯度：0-100%EtOAc/环己烷)纯化残余物得到(反)-5-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)氨基甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸甲酯(0.46 g，67%)，为浅褐色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 0.96 min，[M+H]+= 412。
中间体142：(反)-5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酰基)-2- (氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸甲酯
Figure 405287DEST_PATH_IMAGE224
(反)-5-((1 R ,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸甲酯(0.450 g，1.09 mmol)用手性色谱法纯化。
约80 mg的外消旋体溶解在1.5 mL EtOH和3 mL DCM中，加热该混合物直至其变成溶液。注射：总体上，4.5 mL溶液注射到柱上(总注射次数：6)。洗脱液：40% EtOH (+0.2%异丙胺)/庚烷(+0.2%异丙胺)，流速 = 30 mL/min；波长，215 nm。柱30 mm x 25 cmChiralpak IC (5 µm)。在该过程中，得到一些混合级分。将它们真空浓缩，所得残余物进行相同的过程。得到(2S*,3S*)-5-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)氨基甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸甲酯，为最快洗脱的异构体(201 mg，89%)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 0.97 min，[M+H]+= 412。
中间体143：(反)-5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酰基)-2- (氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸
Figure 732363DEST_PATH_IMAGE225
NaOH (2N 的水溶液，0.5 mL，1 mmol)在室温加入到(反)-5-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)氨基甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸甲酯(200 mg，0.486 mmol)的MeOH (10 mL)溶液中，混合物在该温度下搅拌过夜，然后真空浓缩。残余物溶解在水中，水相用2N HCl水溶液酸化至pH 2，得到浓稠悬浮液。其用DCM萃取，合并的有机相用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(反)-5-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)氨甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸(195 mg，101%)，为无色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt 0.60 min，[M+H]+= 398。
中间体144：(反)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二甲 基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 751135DEST_PATH_IMAGE226
(反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(30 mg，0.096 mmol)、(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(21.25 mg，0.125 mmol)、HATU (55.0 mg，0.145 mmol)和DIPEA (0.050 mL，0.289 mmol)溶解在DMF (4 mL)中。反应混合物搅拌1 h。反应混合物在EtOAc和水之间分配。有机层用水、饱和NaHCO3水溶液洗涤，通过疏水玻璃料并真空蒸发。样品用MDAP(甲酸法)纯化得到(2R,3S)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(18.2 mg，0.041 mmol，42%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 1.11 min，[M+H]+= 427。
中间体145：(反)-N 7,2-二甲基-N 5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 121852DEST_PATH_IMAGE227
(反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.321 mmol)、HATU (147 mg，0.385 mmol)和DIPEA (0.168 mL，0.964 mmol)在DMF (4 mL)中在室温搅拌5 min，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(46.8 mg，0.482 mmol)，然后反应在室温搅拌1 h。反应用10%柠檬酸水溶液稀释，用EtOAc萃取。有机相用10% LiCl水溶液洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黄色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-60% (25%EtOH/EtOAc):环己烷的梯度洗脱，得到(反)-N 7,2-二甲基-N 5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(65 mg，0.166 mmol，52%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt 0.95 min，[M+H]+= 391。
中间体146：叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷
Figure 149851DEST_PATH_IMAGE228
环戊-3-烯-1-醇(5 g，59.4 mmol，可商购自，例如，Astatech)溶解在DCM (100mL)中，加入TBDMS-Cl (8.96 g，59.4 mmol)和咪唑 (4.86 g，71.3 mmol)，然后所得悬浮液在室温搅拌过周末。混合物用水(2 x 100 mL)洗涤，干燥并真空蒸发得到叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷(12.05g, 60.7 mmol，102%收率)，为浅黄色液体。
Figure 331434DEST_PATH_IMAGE229
中间体147：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6- 甲酸乙酯
Figure 786686DEST_PATH_IMAGE230
重氮乙酸乙酯(6.90 mL，66.5 mmol，可商购自，例如，Sigma Aldrich)溶解在DCM(150 mL)中，并在室温下经~ 5 h滴加到乙酸铑(II)二聚体(1 g，2.263 mmol，可商购自，例如，Sigma Aldrich)和叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷(12g, 60.5 mmol)在DCM (150 mL)中的混合物中。所得绿色溶液搅拌过夜，然后真空蒸发得到绿色液体。将其加载到340g二氧化硅柱上并用0-40% EtOAc/环己烷洗脱。将适当的级分真空蒸发得到(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(5.5g, 19.33mmol，32.0%收率)，为无色液体– NMR显示与所需产物一致，为约3:1比例的在甲硅烷醚处的异构体的混合物，其以粗品用于下一步骤。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.96 min，[MH]+ = 不存在。
中间体148：((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷- 6-基)氨基甲酸苄酯
Figure 420929DEST_PATH_IMAGE231
步骤1：在室温下氢氧化钠(20 mL，40.0 mmol)加入到(1R*,5S*,6r*)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(5.0g, 17.58 mmol)的乙醇(50 mL)溶液中，混合物搅拌3 h。TLC表明所有起始原料都已经消耗，混合物真空蒸发至约30 mL体积，然后用水(30 mL)稀释，并用乙醚(50 mL)洗涤。将来自后处理的乙醚洗涤液干燥并真空蒸发得到回收的起始原料(3.85 g) (1R*,5S*,6r*)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯。将其溶解在乙醇(30 mL)中并加入2M NaOH水溶液(20 mL)，然后混合物在70℃加热3h，然后真空蒸发。残余物溶解在水(50mL)中并用乙醚(50mL)洗涤，然后水层用2M HCl (20mL)酸化并用EtOAc (2 x 50mL)萃取。合并的有机相干燥并真空蒸发得到(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1.9g,7.41 mmol，42.2%收率)，为浅黄色固体。该产物不经纯化用于下一步骤。
步骤2：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1.8 g，7.02 mmol)溶解在甲苯(20 mL)和Et3N (1.957 mL，14.04 mmol)的混合物中，然后加入DPPA (1.815 mL，8.42 mmol)并将混合物在室温搅拌30 min。加入苄醇(1.095 mL，10.53 mmol)，将混合物在100℃加热4h，然后冷却至室温。加入乙酸乙酯(100 mL)，溶液用水(2 x 100mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥、过滤，滤液真空蒸发得到浅黄色油状物。该油状物溶解在DCM (10 mL)中，并装载到50g二氧化硅柱上，然后用0-30% EtOAc/环己烷洗脱，收集含产物级分(用高锰酸盐浸渍检测)并真空蒸发得到((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-基)氨基甲酸苄酯(1.90g, 5.26 mmol，74.9%收率)，为浅黄色油状物，NMR与所需产物一致，为约2:1比例的异构体混合物。该化合物不经进一步纯化用于下一步骤。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 1.56 min，[MH]+ = 362.6。
中间体149：(1R,3s,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己- 6-胺(9:1非对映异构体混合物)
Figure 924723DEST_PATH_IMAGE232
((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-基)氨基甲酸苄酯(0.52g, 1.438 mmol)溶解在EtOH (30mL)中，在H-Cube中在大气压力和1 ml/min流速下氢化。洗脱液真空蒸发，残余物用硅胶柱色谱法纯化，用0-10% 2M甲醇氨:DCM的梯度洗脱，得到：(1R,3s,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺(9:1非对映异构体混合物) (12 mg，37%)。
Figure 226391DEST_PATH_IMAGE233
中间体150 ：(2S,3S)-N5-((1R,3R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双 环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺 (9:1非对映异构体混合物)
Figure 852545DEST_PATH_IMAGE234
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(101 mg，0.308 mmol)、HATU (138 mg，0.363 mmol)、DMF (5 mL)和DIPEA (0.157 mL，0.901 mmol)在烧瓶中混合，搅拌15分钟。然后加入(1R,3s,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺(50 mg，0.220 mmol)，并将反应在室温搅拌3 h。反应用水稀释，用EtOAc萃取(3，有机相用10% LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥，真空浓缩得到褐色油状物。该油状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0至60%的(25% EtOH/乙酸乙酯)/环己烷的梯度洗脱得到(2S,3S)-N5-((1R,3R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(72.4 mg，0.134 mmol，61.1%收率) (9:1非对映异构体混合物)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 1.47 min，[MH]+ = 539。
实施例
实施例1和2：(2R*,3R*)-N5-环丁基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5, 7-二甲酰胺和(2R*,3S*)-N5-环丁基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰 胺
Figure 974085DEST_PATH_IMAGE235
向微波小瓶中加入5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(90mg，0.26 mmol)、八羰基二钴(44.4 mg，0.130 mmol)、环丁胺(37.0 mg，0.520 mmol)、DMAP(63.5 mg，0.520 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(9.3 mg，0.026 mmol)和Pd(OAc)2 (5.8 mg，0.026 mmol)，然后加入2-甲基四氢呋喃(3 mL)。所得混合物在微波辐射下在100℃搅拌1 h，然后在120℃搅拌30 min，然后冷却至室温。平行进行第二反应：向微波小瓶中加入5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(40 mg，0.12mmol)、八羰基二钴(9.9 mg，0.029 mmol)、环丁胺(8.2 mg，0.12 mmol)、DMAP (28.2 mg，0.231 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(4.1 mg，0.012 mmol)和Pd(OAc)2(2.6 mg，0.012 mmol)，然后加入2-甲基四氢呋喃(3 mL)。所得混合物在微波辐射下在80℃搅拌20 min，然后在120℃搅拌2 h，然后冷却至室温。然后将这两个反应混合物合并，用EtOAc (20 mL)稀释，有机相用1N HCl水溶液(20 mL)洗涤，然后用水(20 mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到两个级分，其分别用MDAP (高pH法)进一步纯化得到(2R*,3R*)-N5-环丁基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(7 mg，5%)，为浅黄色结晶固体(实施例1)，和(2R*,3S*)-N5-环丁基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(3 mg，2%)，为浅黄色胶状物(实施例2)。
LCMS (高pH法)：保留时间1.07 min，[M+H]+= 365 (实施例1)。
LCMS (高pH法)：保留时间1.09 min，[M+H]+= 365 (实施例2)。
实施例3：N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰 胺
Figure 343886DEST_PATH_IMAGE236
向微波小瓶中加入5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(250mg，0.722 mmol)、八羰基二钴(123 mg，0.361 mmol)、3-氨基丙-1-醇(108 mg，1.44 mmol)、DMAP (176 mg，1.44 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(26 mg，0.072 mmol)和Pd(OAc)2 (16 mg，0.072 mmol)，然后加入2-甲基四氢呋喃(3 mL)，所得混合物在100℃在微波辐射下搅拌1 h，然后冷却至室温，用1N HCl水溶液(20 mL)稀释。水相用EtOAc (20mL)萃取，有机相用水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到褐色胶状物。通过硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-10% MeOH/DCM)纯化所得残余物得到N5-(3-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(135 mg，51%)，为顺式和反式异构体的1:1混合物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 369。
实施例4：N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 437744DEST_PATH_IMAGE237
向微波小瓶中加入5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(250mg，0.722 mmol)、八羰基二钴(123 mg，0.361 mmol)、环丙胺(82 mg，1.4 mmol)、DMAP (176mg，1.44 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(26 mg，0.072 mmol)和Pd(OAc)2(16 mg，0.072 mmol)，然后加入2-甲基四氢呋喃(3 mL)，所得混合物在100℃在微波辐射下搅拌1 h，然后冷却至室温，用1N HCl水溶液(20 mL)稀释。水相用EtOAc (20 mL)萃取，有机相用水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到褐色胶状物。通过硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(顺式和反式异构体的1:1混合物，100 mg，39%)，为紫色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.99 min，[M+H]+= 351。
实施例5：N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 234799DEST_PATH_IMAGE238
向微波小瓶中加入DMAP (141 mg，1.15 mmol)、Pd(OAc)2 (13 mg，0.058 mmol)、八羰基二钴(99 mg，0.289 mmol)、5-溴-N,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(200 mg，0.578 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(21 mg，0.058 mmol)和甲胺(2N的THF溶液，0.58 mL，1.1 mmol)，然后加入DMF (5 mL)，所得混合物在微波辐射下在100℃搅拌1 h，然后冷却至室温，用1N HCl水溶液(20 mL)稀释。水相用EtOAc(20 mL)萃取两次，合并的有机相用饱和NH4Cl水溶液洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到黄色固体。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(1:1 顺式和反式异构体的混合物，78.5 mg，42%)，为无色油状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.90 min，[M+H]+= 325。
实施例6和7：(2R,3S)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5,7-二甲酰胺和(2S,3S)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃- 5,7-二甲酰胺
Figure 843635DEST_PATH_IMAGE239
N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(实施例3，130 mg)进行手性HPLC纯化。
- 分析方法：约130 mg物质溶解在EtOH (4 mL)中；50 μL稀释成1 mL的EtOH并注射到柱上。洗脱：10% EtOH/庚烷，f = 1.0 mL/min，波长250 nm。柱Chiralpak IA 250x4.6mm (5微米)。
- 制备方法：约130 mg物质溶解在EtOH (4 mL)中。注射：0.75 mL的溶液注射到柱上。洗脱：10% EtOH/庚烷，f = 42.5 mL/min，波长 280 nm。柱Chiralpak IA 250x30 mm (5μm)。
这样得到(2R,3S)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(8 mg，6%，实施例6)和(2S,3S)-N5-(2-羟基丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(5 mg，4%，实施例7)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.88 min，[M+H]+= 369 (实施例6)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.88 min，[M+H]+= 369 (实施例7)。
实施例8和9：(2R,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7- 二甲酰胺和(2S,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 751548DEST_PATH_IMAGE240
实施例4 (100 mg)用手性色谱法纯化：
- 分析方法：约100 mg物质溶解在 EtOH (4 mL)中；50 μL稀释成1 mL的EtOH并注射到柱上。洗脱：10% EtOH/庚烷，f = 1.0 mL/min，波长 250 nm。柱Chiralpak IA 250x4.6mm (5 μm)。
- 制备方法：约100 mg物质溶解在EtOH (4 mL)中。注射：0.75 mL该溶液注射到柱上。洗脱：10% EtOH/庚烷，f = 42.5 mL/min，波长 280 nm。柱Chiralpak IA 250x30 mm (5μm)。
这样得到(2R,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(9 mg，9%，实施例8)，为第一洗脱异构体，和被(2S,3R)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺污染的(2S,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(19 mg，19%)。该顺式和反式对映异构体的混合物进一步用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(3 mg，3%，实施例9)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.99 min，[M+H]+= 351 (实施例8)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.99 min，[M+H]+= 351 (实施例9)。
实施例8：替代方法：
DIPEA (0.128 mL，0.732 mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V) (278 mg，0.732 mmol)和环丙胺(0.052 mL，0.73 mmol)顺序加入到(2R*,3S*)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(190 mg，0.610 mmol)的DMF (2 mL)溶液中。15 min后真空浓缩混合物。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-50% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到被HATU污染的(2R*,3S*)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(400 mg)。然后将该物质用手性色谱法纯化：
- 分析方法：约0.5 mg的物质溶解在 50% EtOH/庚烷(1 mL)中，20 μL注射在柱上。洗脱：10% EtOH/庚烷，f = 1.0mL/min，波长 215 nm。柱4.6 mmid x 25cm ChiralpakIA。
- 制备方法：约400 mg物质溶解在EtOH (4 mL)中。注射(共2次)：2 mL该溶液注射到柱上。洗脱：10% EtOH/庚烷，f = 30 mL/min，波长 215 nm。柱30 mm x 25 cm ChiralpakIA (5 μm)。
这样得到(2R,3S)-N5-环丙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(91 mg，23%)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.99 min，[M+H]+ = 351。
实施例10：(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 762229DEST_PATH_IMAGE241
向微波小瓶中加入DMAP (202 mg，1.66 mmol)、Pd(OAc)2 (18 mg，0.083 mmol)、八羰基二钴(142 mg，0.414 mmol)、(2S*,3S*)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(300 mg，0.828 mmol)、环丙胺(0.070 mL，0.99 mmol)和Xantphos(57 mg，0.099 mmol)，然后加入THF (3 mL)。所得混合物在微波辐射下在110℃搅拌1 h，然后冷却至室温并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(24 mg，8%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.78 min，[M+H]+= 367。
实施例11：(2S*,3S*)-N5-环丁基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 667868DEST_PATH_IMAGE242
向微波小瓶中加入DMAP (67.5 mg，0.552 mmol)、Pd(OAc)2 (6.2 mg，0.028mmol)、八羰基二钴(47.2 mg，0.138 mmol)、(2S,3S)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.276 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(9.9 mg，0.028 mmol)和环丁胺(39.3 mg，0.552 mmol)，然后加入THF (3 mL)。所得混合物在微波辐射下在110℃搅拌1 h，然后冷却至室温，过滤通过Celite® (2.5 g垫)并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S*,3S*)-N5-环丁基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(10 mg，10%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.88 min，[M+H]+= 381。
实施例12：(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-丙基-2,3-二氢苯并呋 喃-5,7-二甲酰胺
Figure 764000DEST_PATH_IMAGE243
向微波小瓶中加入DMAP (67.5 mg，0.552 mmol)、Pd(OAc)2 (6.2 mg，0.028mmol)、八羰基二钴(47.2 mg，0.138 mmol)、(2S*,3S*)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.276 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(9.9 mg，0.028 mmol)和正丙胺(0.046 mL，0.55 mmol)，然后加入THF (2 mL)。所得混合物在微波辐射下在110℃搅拌1 h，然后冷却至室温，过滤通过celite (2.5 g垫)并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-丙基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(10 mg，10%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.85 min，[M+H]+= 369。
实施例13：(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(2-(哌啶-4-基)乙基)- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 475604DEST_PATH_IMAGE244
向微波小瓶中加入DMAP (54.0 mg，0.442 mmol)、Pd(OAc)2 (5.0 mg，0.022mmol)、八羰基二钴(37.8 mg，0.110 mmol)、(2S*,3S*)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(80 mg，0.22 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(7.9 mg，0.022 mmol)和4-(2-氨基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(101 mg，0.442 mmol)，然后加入THF (2 mL)。所得混合物在微波辐射下在110℃搅拌1 h，然后冷却至室温，用TFA(1.7 mL，过量)处理。所得混合物在该温度搅拌20 min，然后过滤通过Celite® (2.5 g垫)并真空浓缩。残余物与2N NH3的MeOH (10 mL)溶液共蒸发，然后用MDAP (高pH法)纯化得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(2-(哌啶-4-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(40 mg，41%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.53 min，[M+H]+= 438。
实施例14：(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-N5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 340792DEST_PATH_IMAGE245
向微波小瓶中加入DMAP (33.7 mg，0.276 mmol)、Pd(OAc)2 (3.1 mg，0.014mmol)、八羰基二钴(24 mg，0.069 mmol)、(2S*,3S*)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(50 mg，0.14 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(5.0 mg，0.014 mmol)和3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-胺(43.4 mg，0.276 mmol)，然后加入THF (1 mL)。所得混合物在微波辐射下在110℃搅拌1 h，然后冷却至室温并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-N5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(8 mg，12%)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.75 min，[M+H]+= 467。
实施例15：(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(3-(哌嗪-1-基)丙基)- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 479649DEST_PATH_IMAGE246
向微波小瓶中加入DMAP (84 mg，0.69 mmol)、Pd(OAc)2 (7.8 mg，0.035 mmol)、八羰基二钴(59.0 mg，0.173 mmol)、(2S*,3S*)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(125 mg，0.345 mmol)、二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(12 mg，0.035 mmol)和4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(168 mg，0.690 mmol)，然后加入THF (2 mL)。所得混合物在微波辐射下在110℃搅拌1 h，然后冷却至室温，用TFA (1.4mL，过量)处理。所得混合物在该温度搅拌10 min，然后过滤通过Celite® (2.5 g垫)并真空浓缩。残余物与2N NH3的MeOH (10 mL)溶液共蒸发，然后用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(3-(哌嗪-1-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(15 mg，10%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.39 min，[M+H]+= 453。
实施例16：(2S,3S)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5,7-二甲酰胺
Figure 761DEST_PATH_IMAGE247
将(2R,3R)-2-(羟基甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.306 mmol)的DMF (2 mL)溶液在室温下用DIPEA (0.064 mL，0.37 mmol)、HATU (139 mg，0.367 mmol)和环丙胺(0.043 mL，0.61 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌15 min，然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25% EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到被HATU污染的预期产物。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25% EtOH/EtOAc) 进一步纯化该残余物得到(2R,3R)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(14 mg，13%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.77 min，[M+H]+= 367。
实施例17：(2R*,3S*)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢 苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 516056DEST_PATH_IMAGE248
将(2S*,3R*)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(180 mg，0.578 mmol)的DMF (2 mL)溶液在室温下用DIPEA (0.121 mL，0.694 mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V) (264 mg，0.694 mmol)和4-(3-氨基丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(168 mg，0.694 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌15 min，然后用TFA (0.89 mL，12 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌20min，然后真空浓缩。残余物与2N NH3的MeOH (10 mL)溶液共蒸发，然后装载到10 g SCX 柱上，用MeOH洗脱，然后用2N NH3的MeOH溶液洗脱。氨级分真空浓缩得到(2S*,3R*)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(250 mg，99%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.66 min，[M+H]+= 436。
实施例18：(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 235750DEST_PATH_IMAGE249
(2R*,3S*)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(实施例17, 300 mg)用手性色谱法纯化：
- 分析方法：约0.5 mg的物质溶解在 50% EtOH/庚烷(1 mL)中，并将20 μL注射到柱上。洗脱：75% EtOH (0.2%异丙胺)/庚烷，f = 1.0 mL/min，波长 215 nm。柱4.6 mmid x25cm Chiralpak IC。
- 制备方法：约300 mg物质溶解在EtOH (3 mL)中。注射(共2次) ：1.5 mL的溶液注射到柱上。洗脱：75% EtOH (0.2%异丙胺)/庚烷，f = 30 mL/min，波长 215 nm。柱30 mmx 25 cm Chiralpak IC。
含最快流出的对映异构体的级分真空浓缩得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(3-(哌啶-4-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(104 mg，69%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.66 min，[M+H]+= 436。
实施例19：(2R,3S)-N5-乙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲 酰胺
Figure 545509DEST_PATH_IMAGE250
将(2S,3R)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)的DMF (0.5 mL)溶液在室温下用DIPEA (0.034 mL，0.19 mmol)、HATU(67.2 mg，0.177 mmol)和乙胺(2N的THF溶液，0.080 mL，0.16 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌15 min，然后用2N HCl水溶液(5 mL)处理。水相用EtOAc (20 mL)萃取，有机相用水(4 * 10 mL)洗涤，然后用饱和LiCl水溶液洗涤，接着用盐水洗涤。有机相然后用相分离器干燥并真空浓缩得到(2S,3R)-N5-乙基-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(50 mg，92%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.97 min，[M+H]+= 339。
实施例20：(2R,3S)-N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 616233DEST_PATH_IMAGE251
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.161 mmol)的DMF (2 mL)溶液在室温用DIPEA (0.034 mL，0.19 mmol)、HATU (67.2mg，0.177 mmol)和甲胺(2N的THF溶液，0.2 mL，0.4 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌15 min，然后用2N HCl水溶液(5 mL)处理。水相用EtOAc (20 mL)萃取，有机相用水(4 *10 mL)洗涤，然后用饱和LiCl水溶液洗涤，接着用盐水洗涤。有机相然后用相分离器干燥并真空浓缩得到(2R,3S)-N5,N7,2-三甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(40 mg，77%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.90 min，[M+H]+= 325。
实施例21：(2R,3S)-N5-((1S*,2S*)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 669639DEST_PATH_IMAGE252
(2S,3R)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(40mg，0.13 mmol)的DMF (2 mL)溶液在室温用DIPEA (0.027 mL，0.15 mmol)、HATU (53.7mg，0.141 mmol)和((1S*,2S*)-2-氨基环丙基)甲醇(11.2 mg，0.128 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌15 min，然后用2N HCl水溶液(5 mL)处理。水相用EtOAc (20 mL)萃取，有机相用水(4 * 10 mL)洗涤，然后用饱和LiCl水溶液洗涤，接着用盐水洗涤。有机相然后用相分离器干燥并真空浓缩得到(2S,3R)-N5-((1S*,2S*)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(37 mg，76%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.87 min，[M+H]+= 381。
实施例22：(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5,7-二甲酰胺
Figure 447102DEST_PATH_IMAGE253
(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(65 mg，0.20 mmol)的DMF (2 mL)溶液在室温用NEt3 (0.083 mL，0.59 mmol)、HATU(150 mg，0.395 mmol)和环丙胺(0.014 mL，0.20 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2h，然后直接用MDAP (高pH法)纯化得到(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，44)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.94 min，[M+H]+= 369。
实施例23：(2S,3S)-N5-环丙基-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃- 5,7-二甲酰胺
Figure 927762DEST_PATH_IMAGE254
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.304 mmol)的DMF (3 mL)溶液在室温用Et3N (0.085 mL，0.61 mmol)和HATU(150 mg，0.395 mmol)处理。混合物在该温度下搅拌30 min，然后加入环丙胺(0.028 mL，0.40 mmol)，所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S,3S)-N5-环丙基-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30mg，27%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.94 min，[M+H]+= 369。
实施例24：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5,N7-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7- 二甲酰胺
Figure 485783DEST_PATH_IMAGE255
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(55 mg，0.17 mmol)的DMF (3 mL)溶液在室温用Et3N (0.047 mL，0.33 mmol)和HATU (83mg，0.22 mmol)处理。所得溶液在该温度下搅拌30 min，然后加入甲胺(2N的THF溶液，0.109mL，0.217 mmol)，所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5,N7-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(16mg，28%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.85 min，[M+H]+= 343。
实施例25：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 77301DEST_PATH_IMAGE256
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.304 mmol)的DMF (3 mL)溶液在室温用Et3N (0.085 mL，0.61 mmol)和HATU(150 mg，0.395 mmol)处理。所得溶液在该温度下搅拌30 min，然后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺(28.1 mg，0.395 mmol)，所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(39 mg，34%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.00 min，[M+H]+= 383。
实施例26：(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲 基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 771588DEST_PATH_IMAGE257
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(1.9 g，5.8 mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(1.02 g，7.50 mmol)、HATU (2.85 g，7.50 mmol)和Et3N (2.010 mL，14.42 mmol)溶解在DCM (20 mL)中，所得混合物在室温搅拌16 h。然后有机相顺序用0.5N HCl水溶液(20 mL)、1N NaOH水溶液(20 mL)和盐水(20 mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到浅黄色胶状物。用硅胶快速色谱法(柱100g, 梯度：0至80% (25%EtOH/EtOAc)/环己烷)纯化该残余物得到(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(1.90 g，80%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.88 min，[M+H]+= 411。
Figure 626411DEST_PATH_IMAGE258
实施例26 另一制备
实施例26还用另一合成方法制备。在该方法中的某些中间体用如下所述的方法制备。
5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺
Figure 406148DEST_PATH_IMAGE259
5-溴-2-(肉桂基氧基)苯甲酸酯(1wt)溶解在无水N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP) (3.5体积)中。在250℃将该进料以1.45mL/min (2.76 min停留时间)泵送通过具有4 barg背压的4mL不锈钢加热管式反应器。向5-溴-2-羟基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酸甲酯的粗溶液中加入甲胺水溶液(40% wt/wt，3当量)。该溶液搅拌1小时。使用8M HCl(0.9体积，2.5当量)将pH调节至pH 5，加入TBME (9体积)并用水(2 x 9体积)洗涤。水相用TBME (6.5体积)反萃，合并的有机层用水(4体积)洗涤，然后用盐水(4体积)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩得到褐色油状物。该油状物用硅胶柱色谱法纯化，用30% 梯度(EtOAc/己烷)洗脱，得到5-溴-2-羟基-N-甲基-3-(1-苯基烯丙基)苯甲酰胺(58.3%收率)，为褐色粘性油状物。
(+/-)(2S,3S)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺
Figure 801358DEST_PATH_IMAGE260
(+/-)(2S,3S)-5-溴-2-(羟基甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(54.7 g，151 mmol)悬浮在DCM (400ml)中并在N2下搅拌，在冰浴中冷却。然后加入DIPEA(92 mL，529 mmol)，随后加入三乙胺三氢氟酸盐(30.1 mL，181 mmol)和全氟-1-丁磺酰氟(32.5 mL，181 mmol)，并将混合物搅拌18h，使其升温至室温。混合物通过加入（小心地）碳酸氢钠溶液(500ml)淬灭，并剧烈搅拌30 min，然后分离有机层并用1M HCl (500ml)洗涤。溶剂用硫酸钠干燥并真空蒸发得到浅黄色固体。该粗产物使用硅胶柱色谱法纯化，用5-60%EtOAc/环己烷的梯度洗脱，得到(2S,3S)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(42.2g, 116 mmol，77%收率)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.21 min，[MH]+= 364。
Figure 615730DEST_PATH_IMAGE261
(+/-)(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)- N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 438192DEST_PATH_IMAGE262
(+/-)(2S,3S)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(44.9 g，123 mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(21.73 g，160mmol)、PdOAc2 (1.384 g，6.16 mmol)、Xantphos (3.57 g，6.16 mmol)、2,6-二甲基砒啶(35.9 mL，308 mmol)和1,4-二噁烷(500 mL)加入装有顶置式搅拌器和进气口的1升夹套容器中，然后将容器密封并用氮气吹扫x 3，然后充入一氧化碳，并将混合物加热至90℃过夜，同时剧烈搅拌。所得褐色悬浮液分散到1升玻璃瓶中，将该容器用2 x 100 ml甲醇洗涤，并将洗涤液加入到反应混合物中，得到澄清暗褐色溶液。将该溶液蒸发至其原始体积的约一半，然后用DCM (2升)稀释，并用1M HCl (2 x 1升)和饱和盐水和水(各500ml)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发得到褐色固体。将该粗产物悬浮在乙醚(500ml)中，搅拌30min，然后过滤，将固体在真空烘箱中干燥过夜得到(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(47.9g, 117 mmol，95%收率)，为浅褐色固体，将其与来自其他批次的70g相同物质混合，得到总共120g。将固体溶解在DCM和甲醇中。加入Si硫醇树脂(Silicycle目录编号R51030B)，混合物在室温搅拌30 min，然后过滤，固体用10% MeOH/DCM洗涤。滤液真空蒸发得到褐色固体。将EtOAc加入到蒸发烧瓶中，在Buchi上在大气压下旋转30分钟，然后取出烧瓶并使悬浮液静置1 h。过滤收集产物，用EtOAc (500ml)和乙醚(500ml)洗涤，然后在真空烘箱中干燥，得到(+/-) (2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(98.9 g，241 mmol)，为浅米色。
LCMS (高pH法)：保留时间0.91 min，[M+H]+= 411。
Figure 642909DEST_PATH_IMAGE263
(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 841809DEST_PATH_IMAGE264
(+/-) (2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(24g)用手性HPLC纯化。将外消旋体(150mg)加热溶解在EtOH (2 mL) + DCM (1ml)中。注射：3.5 mL溶液注射到柱上(75% EtOH[+0.2%异丙胺]/庚烷[+0.2%异丙胺]，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref550, 100, 柱30 mm x 25 cm Chiralcel IC (5 µm), 批号 IC10028-01)。
同样将外消旋体(400-500mg)加热溶解在EtOH (2 mL) + DCM (3ml)中。注射：5mL溶液注射到柱上(75% EtOH[+0.2%异丙胺]/庚烷[+0.2%异丙胺]，流速 = 60 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550, 100, 柱5 cm x 20 cm Chiralcel IC (20 µm)，(自填充)。合并来自11-14 min的级分并浓缩得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(10.88g)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.89 min，[MH]+ = 411。
Figure 510688DEST_PATH_IMAGE265
实施例27和28：(2R,3S)-N5-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺和(2R,3S)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7, 2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 504051DEST_PATH_IMAGE266
(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(35 mg)用手性色谱法纯化：
- 分析方法：约35 mg物质溶解在EtOH (4 mL)中；50 μL稀释成1 mL的EtOH并注射到柱上。洗脱：25% EtOH (+ 0.2% w/w异丙胺)/庚烷(+ 0.2% w/w异丙胺)，f = 1.0 mL/min，波长280 nm。柱Chiralpak AD-H (250x4.6mm)。
- 制备方法：约35 mg物质溶解在EtOH (4 mL)中。注射：0.75 mL的溶液注射到柱上。洗脱：25% EtOH (+ 0.2% w/w异丙胺)/庚烷(+ 0.2% w/w异丙胺)，f = 40 mL/min，波长280 nm。柱Chiralpak AD-H (250x30mm, 5微米)。
这样得到(2R,3S)-N5-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(5 mg，29%)和(2R,3S)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(5 mg，29%)。
实施例29：(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 258381DEST_PATH_IMAGE267
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用HATU (92 mg，0.24 mmol)和Et3N (0.045 mL，0.32 mmol)处理。所得混合物搅拌1 h，然后用氢氧化铵(0.2 mL，5.14 mmol)处理。所得溶液再搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(13 mg，26%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.85 min，[M+H]+= 311。
实施例30：(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2, 3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 930146DEST_PATH_IMAGE268
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(46 mg，0.13 mmol)的DCM (10 mL)溶液在室温用HATU (63.6 mg，0.167mmol)和NEt3 (0.036 mL，0.26 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌20 min，然后用环丙胺(0.012 mL，0.17 mmol)处理。所得混合物在该温度搅拌1 h，然后用水洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25% EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到(2S*,3S*)-N5-环丙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，49%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间0.83 min，[M+H]+= 397。
实施例31：(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-N5-((1S,2S)- 2-甲基环丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 453531DEST_PATH_IMAGE269
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(110 mg，0.308 mmol)的DCM (10 mL)溶液在室温用HATU (152 mg，0.400mmol)和NEt3 (0.086 mL，0.62 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌20 min，然后用(1S,2S)-2-甲基环丙胺(49.7 mg，0.462 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用水洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25%EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(84 mg，66%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间0.91 min，[M+H]+= 411。
实施例32：(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N5,N7-二甲基-2,3-二氢 苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 883376DEST_PATH_IMAGE270
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(110 mg，0.308 mmol)的DCM (10 mL)溶液在室温用HATU (152 mg，0.400mmol)和NEt3 (0.086 mL，0.62 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌20 min，然后用甲胺(2N的THF溶液，0.308 mL，0.616 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用水洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25% EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N5,N7-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(14 mg，12%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间0.76 min，[M+H]+= 371。
实施例33：(2S*,3S*)-N5-乙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3- 二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 125001DEST_PATH_IMAGE271
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(40 mg，0.11 mmol)的DCM (10 mL)溶液在室温用HATU (42.6 mg，0.112mmol)和Et3N (0.016 mL，0.11 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌20 min，然后用乙胺(2M的THF溶液，0.12 mL，0.24 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用水(10mL)洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25%EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到(2S*3S*)-N5-乙基-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(20 mg，47%)，为无色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.82 min，[M+H]+= 385。
实施例34 (2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N5-(2-甲氧基乙基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7- 甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 400125DEST_PATH_IMAGE272
(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.14 mmol)的DCM (10 mL)溶液在室温用HATU (63.8 mg，0.168mmol)和Et3N (0.039 mL，0.28 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌20 min，然后用2-甲氧基乙胺(15.8 mg，0.210 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用水(10mL)洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25%EtOH/EtOAc)纯化所得残余物得到(2S*,3S*)-2-(羟基甲基)-N5-(2-甲氧基乙基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(48 mg，83%)，为无色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.80 min，[M+H]+= 415。
实施例35：(2R,3S)-N5-(2-甲氧基乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋 喃-5,7-二甲酰胺
Figure 981279DEST_PATH_IMAGE273
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用HATU (92 mg，0.24 mmol)和Et3N (0.045 mL，0.32 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用2-甲氧基乙胺(12.1 mg，0.161mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g柱)纯化所得残余物得到(2R,3S)-N5-(2-甲氧基乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(51 mg，86%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.97 min，[M+H]+= 369。
实施例36：(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 316445DEST_PATH_IMAGE274
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用HATU (92 mg，0.24 mmol)和Et3N (0.090 mL，0.64 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用四氢-2H-吡喃-4-胺盐酸盐(44.2mg，0.321 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱)纯化所得残余物得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-3-苯基-N5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30 mg，47%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.98 min，[M+H]+= 395。
实施例37：(2R,3S)-N5-(2-羟基乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃- 5,7-二甲酰胺
Figure 45367DEST_PATH_IMAGE275
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(30mg，0.096 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用HATU (55.0 mg，0.145 mmol)和Et3N (0.054mL，0.38 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用2-氨基乙醇(11.8 mg，0.193mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(2R,3S)-N5-(2-羟基乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，73%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.87 min，[M+H]+= 355。
实施例38：(1R,5S,6S)-6-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 124181DEST_PATH_IMAGE276
HATU (216 mg，0.569 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用Et3N (0.211 mL，1.56mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(118mg，0.379 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(98 mg，0.49 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌2h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(1R,5S,6s)-6-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(175 mg，94%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.19 min，[M+H]+= 492。
实施例39：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲 基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 622158DEST_PATH_IMAGE277
(1R,5S,6s)-6-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(150 mg，0.305 mmol)的DCM (10mL)溶液在室温用TFA (5 mL)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物溶解在MeOH (5 mL)中并装载到5 g SCX2小柱上，其用MeOH (20 mL)洗涤，然后用2N NH3的MeOH溶液 (20 mL)洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(100 mg，84%)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 392。
实施例40：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)- N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 331488DEST_PATH_IMAGE278
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(35 mg，0.089 mmol)的DMF (1 mL)溶液在室温用Et3N(0.012 mL，0.089 mmol)和乙酰氯(6.4 µL, 0.089 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用MDAP (高pH法)纯化得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，65%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.91 min，[M+H]+= 434。
实施例41：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲 基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 282127DEST_PATH_IMAGE279
HATU (82 mg，0.28 mmol)和Et3N (0.081 mL，0.58 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(25 mg，0.18 mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(45 mg，0.14 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(34 mg，60%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.93 min，[M+H]+= 393。
实施例42：(2R,3S)-N5-(2-(二甲基氨基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 164632DEST_PATH_IMAGE280
HATU (82 mg，0.28 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用Et3N (0.081 mL，0.58mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(45mg，0.14 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用N1,N1-二甲基乙烷-1,2-二胺(25.5 mg，0.289 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2R,3S)-N5-(2-(二甲基氨基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，45%)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.93min，[M+H]+= 382。
实施例43：(2R,3S)-N5-(3-(二甲基氨基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 517116DEST_PATH_IMAGE281
HATU (82 mg，0.22 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用Et3N (0.081 mL，0.58mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(45mg，0.14 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用N1,N1-二甲基丙烷-1,3-二胺(29.5 mg，0.289 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2R,3S)-N5-(3-(二甲基氨基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，44%)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.99 min，[M+H]+= 396。
实施例44：(2R*,3S*)-N5-环丙基-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并 呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 459664DEST_PATH_IMAGE282
甲磺酸((2S*,3S*)-5-(环丙基氨基甲酰基)-3-(3-甲氧基苯基)-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-2-基)甲酯(90 mg，0.19 mmol)的THF (5 mL)溶液在0℃用LiBH4(24.8 mg，1.14 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后使其升温至室温，搅拌24h。混合物在室温下不搅拌放置10天，然后用EtOAc (20 mL)稀释，用饱和NH4Cl水溶液(20mL)处理。两相混合物搅拌30 min，然后分离各层。有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到(2R*,3S*)-N5-环丙基-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(45 mg，62%)，为无色泡沫。LCMS (高pH法)：保留时间1.01 min，[M+H]+= 381。
实施例45：(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(氧杂环丁烷-3-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 897599DEST_PATH_IMAGE283
HATU (82 mg，0.22 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用Et3N (0.081 mL，0.58mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(45mg，0.145 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用氧杂环丁烷-3-胺(21.1 mg，0.289 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(氧杂环丁烷-3-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30 mg，57%)。
LCMS (高pH法)：保留时间0.93 min，[M+H]+= 367。
实施例46：2-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 255899DEST_PATH_IMAGE284
HATU (92 mg，0.24 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用Et3N (0.090 mL，0.64mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(44.4 mg，0.193 mmol，其可以根据Dowle, Michael Dennis等人, PCT国际申请2003097618得到)处理。所得混合物在室温搅拌2 h，然后用水(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(25 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/己烷)纯化所得残余物得到2-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(50 mg，60%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间1.20 min，[M+H]+= 524。
实施例47：(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吗啉-2-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺。
Figure 728469DEST_PATH_IMAGE285
2-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(45 mg，0.086 mmol)的DCM (3 mL)溶液在室温用TFA (1mL)处理，使所得溶液静置1 h，然后真空浓缩。残余物溶解在MeOH (3 mL)中并装载到2 gSCX小柱上，其用MeOH (10 mL)洗涤，然后用2N NH3的MeOH溶液洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吗啉-2-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，69%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.20 min，[M+H]+= 424。
实施例48-52：
Figure 841918DEST_PATH_IMAGE286
一般路线：
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(30mg，0.096 mmol)的DMF (1 mL)溶液在室温用HATU (55.0 mg，0.145 mmol)和NEt3 (19.5mg，0.193 mmol)处理，所得溶液在该温度下搅拌20 min，然后用所述伯胺(0.145 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后直接用MDAP (高pH法)纯化得到相应的实施例，在所有情况下都为灰白色固体。
下列胺分别用于实施例48至52：
- 3-氨基丙-1-醇(10.9 mg)
- 3-吗啉代丙-1-胺(20.8 mg)
- 3-甲氧基丙-1-胺(12.9 mg)
- 四氢呋喃-3-胺(12.6 mg),
- 2,2-二氟乙胺(11.7 mg)。
Figure 767149DEST_PATH_IMAGE287
实施例53：2-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 991457DEST_PATH_IMAGE288
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(30mg，0.096 mmol)的DMF (1 mL)溶液在室温用NEt3 (19.5 mg，0.193 mmol)和HATU (55.0mg，0.145 mmol)处理，所得溶液在该温度下搅拌20 min，然后用2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(30 mg，0.12 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后用MDAP (高pH法)纯化得到2-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(35 mg，68%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间1.21 min，[M+H]+= 538。
实施例54：(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(3-(吗啉-2-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 990637DEST_PATH_IMAGE289
2-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(30 mg，0.056 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA(2.0 mL , 26 mmol)处理，所得混合物在室温搅拌1 h，然后真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，并装载到2 g SCX小柱上。将其用MeOH (10 mL)洗涤，然后用2N NH3的MeOH溶液洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(3-(吗啉-2-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(24 mg，98%)，为浅黄色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.65 min，[M+H]+= 438。
实施例55：(2R,3S)-N5-乙基-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋 喃-5,7-二甲酰胺
Figure 274988DEST_PATH_IMAGE290
(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(125 mg，0.366 mmol)的DCM (10 mL)溶液在室温用HATU (209 mg，0.549 mmol)和NEt3 (0.102 mL，0.732 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌20 min，然后用乙胺(2N的THF溶液，0.366 mL，0.732 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用水(2 * 10mL)洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(2R,3S)-N5-乙基-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(110 mg，82%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间1.00 min，[M+H]+= 369。
实施例56：(2R,3S)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7, 2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 687515DEST_PATH_IMAGE291
向烧瓶中加入(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(40 mg，0.12 mmol)、((1R,2R)-2-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(18 mg，0.15 mmol)、HATU (66.8 mg，0.176 mmol)和Et3N (0.016 mL，0.12 mmol)，然后加入DMF(1 mL)。所得混合物在室温搅拌1 h，然后直接用MDAP (高pH法)纯化得到(2R,3S)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(28 mg，58%)，为无色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 411。
实施例57：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-甲氧 基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 715513DEST_PATH_IMAGE292
HATU (75 mg，0.20 mmol)和Et3N (73.5 µL, 0.527 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(25 mg，0.18 mmol)和(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(45 mg，0.13mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(37 mg，66%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.93 min，[M+H]+= 423。
实施例58：(R)-2-(3-((2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰 基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 897096DEST_PATH_IMAGE293
HATU (75 mg，0.20 mmol)和Et3N (73.5 µL, 0.527 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(41.9 mg，0.171 mmol)和(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(45 mg，0.13mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(R)-2-(3-((2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(45 mg，60%)，为无色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.19 min，[M+H]+= 568。
实施例59：(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-N5-(3-((R)-吗啉-2-基)丙 基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 24452DEST_PATH_IMAGE294
(R)-2-(3-((2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(40 mg，0.071 mmol)的DCM (2 mL)溶液在室温用TFA (1 mL)处理，所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，装载到5 g SCX小柱上，其用MeOH (10 mL)洗涤，然后用2N NH3/MeOH洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-N5-(3-((R)-吗啉-2-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30 mg，91%)，为无色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.63 min，[M+H]+= 468。
实施例60：(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-N5-(3-((S)-吗啉-2-基)丙 基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 924275DEST_PATH_IMAGE295
HATU (50.1 mg，0.132 mmol)和Et3N (49.0 µL, 0.352 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(S)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(27.9 mg，0.114 mmol)和(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(30 mg，0.088mmol)处理，所得混合物在室温搅拌1 h，然后真空浓缩。用MDAP纯化残余物得到无色固体，将其溶解在DCM (2 mL)中，用TFA (1 mL)处理。所得溶液在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，然后装载到5 g SCX小柱上，其用MeOH (10 mL)洗涤，然后用2N NH3的MeOH溶液洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R,3S)-3-(3-甲氧基苯基)-N7,2-二甲基-N5-(3-((S)-吗啉-2-基)丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(35 mg，85%)，为无色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.63 min，[M+H]+= 468。
实施例61：3-氟-3-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢 苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 490386DEST_PATH_IMAGE296
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80mg，0.26 mmol)和3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(66.9 mg，0.257 mmol)的DCM(10 mL)溶液在室温用HATU (147 mg，0.385 mmol)和Et3N (0.036 mL，0.26 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到3-氟-3-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(105 mg，74%)，为无色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.27 min，[M+H-Boc]+= 454。
实施例62：(2R,3S)-N5-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二 氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 792054DEST_PATH_IMAGE297
3-氟-3-(3-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100 mg，0.181 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA (1 mL)处理，所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，装载到5 g SCX小柱上，其用MeOH (20 mL)洗涤，然后用2N NH3的MeOH溶液洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R,3S)-N5-(3-(3-氟哌啶-3-基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(75 mg，92%)。
LCMS (高pH法)：保留时间1.01 min，[M+H]+= 454。
实施例63：(2R,3S)-N5-((1S*,2R*)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 152628DEST_PATH_IMAGE298
2-((1R*,2S*)-2-氨基环丙基)乙醇(71.5 mg，0.707 mmol)和(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(110 mg，0.353 mmol)的DCM (5mL)溶液在室温用Et3N (0.098 mL，0.707 mmol)和HATU (202 mg，0.530 mmol)处理，使所得混合物在该温度下静置16 h，然后用水(2 x 5 mL)洗涤, 使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(2R,3S)-N5-((1S*,2R*)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(160 mg，115%)，为浅黄色油状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (高pH法)：保留时间0.94 min，[M+H]+= 395。
实施例64：(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S*,2S*)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 477430DEST_PATH_IMAGE299
(2R,3S)-N5-((1S*,2R*)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(100 mg，0.254 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温，加入戴斯马丁氧化剂(161 mg，0.380 mmol)，然后混合物在室温搅拌4h。混合物用水(5 mL)洗涤，使用疏水玻璃料干燥。溶液然后用吗啉(0.044 mL，0.51 mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(215 mg，1.01 mmol)处理，混合物在室温搅拌16 h。溶液然后用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S*,2S*)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(95mg，81%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.68 min，[M+H]+= 464。
实施例65和66：(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺和(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1R,2R)-2-(2-吗 啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 847232DEST_PATH_IMAGE300
实施例64 (60 mg)用手性色谱法如下纯化：
- 分析方法：约0.5 mg的物质溶解在 50% EtOH/庚烷(1 mL)中，并将20 μL的所得溶液注射到柱上。洗脱液：25% EtOH(+0.2%异丙胺)/庚烷，流速 = 1.0 mL/min，波长215nm。柱4.6 mmid x 25 cm Chiralpak AD-H。
- 制备方法：约60 mg物质溶解在EtOH (1.5 mL)中。注射（共3次）：0.5 mL的溶液注射到柱上。洗脱液：30% EtOH (+0.2%异丙胺)/庚烷(+0.2%异丙胺)，流速 = 30 mL/min，波长215nm。柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5um)。
这样的纯化得到(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，83%)，为快速流出的对映异构体，以及(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-((1R,2R)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，83%)，为慢速流出的对映异构体。
实施例67：(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 737827DEST_PATH_IMAGE301
(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸乙酯(13 mg，0.033 mmol)的MeOH (2 mL)溶液在室温用2N NaOH水溶液(0.5 mL，1 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物溶解在水(2mL)中，用2N HCl水溶液酸化至pH 2。水相用EtOAc (2 x 5 mL)萃取，合并的有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩得到无色胶状物。该胶状物溶解在DCM (2 mL)中，所得溶液用HATU (12mg，0.033 mmol)、Et3N (4.5 µL, 0.033 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(3.5 mg，0.033 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(4.4 mg，32%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.91 min，[M+H]+= 425。
实施例68：(S)-3-氟-3-(3-((2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7- (甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 534882DEST_PATH_IMAGE302
向烧瓶中加入(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(13 mg，0.035 mmol)、(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(12 mg，0.046 mmol)、HATU (17 mg，0.046 mmol)，然后加入DCM (2 mL)，所得混合物在室温用Et3N (4.9 µL, 0.035 mmol)处理，然后在该温度下搅拌2 h，然后用DCM稀释，用水洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(S)-3-氟-3-(3-((2R*,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(22 mg，102%)，为无色胶状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.10 min，[M+H]+= 614。
实施例69：(2R*,3S*)-N5-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-3-(3-(2-羟基乙氧基) 苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 143718DEST_PATH_IMAGE303
(S)-3-氟-3-(3-((2R*3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20 mg，0.033 mmol)的DCM (2 mL)溶液在室温用TFA (200 µL, 2.60 mmol)处理，所得混合物在该温度搅拌2 h，然后真空浓缩。所得残余物溶解在MeOH (2 mL)中，装载到5 g SCX小柱上，其然后用MeOH(20 mL)洗涤，然后用2N NH3/MeOH洗脱。氨级分真空浓缩得到(2R*3S*)-N5-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(15 mg，90%)，为无色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.85 min，[M+H]+= 514。
实施例70：(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 254893DEST_PATH_IMAGE304
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(50 mg，0.20 mmol)、HATU (57.7 mg，0.152 mmol)和Et3N (0.021 mL，0.15 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h。混合物然后用DCM稀释，顺序用水、0.5N NaOH水溶液和0.5N HCl水溶液洗涤，然后使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(56 mg，66%)，为无色胶状物，其无需进一步纯化用于下一步。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.17 min，[M+H]+= 558。
实施例71：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7-甲基-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 265575DEST_PATH_IMAGE305
(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(56 mg，0.10 mmol)的DCM (1 mL)溶液在室温用TFA (1.0 mL，13 mmol)处理，所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP(高pH法)纯化所得残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(35 mg，76%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.61 min，[M+H]+= 458。
实施例72：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-N7-甲基-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 233531DEST_PATH_IMAGE306
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(60 mg，0.18 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(S)-3-(3-氨基丙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(60 mg，0.23 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和Et3N (0.025 mL，0.18 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h。溶液用DCM稀释，顺序用水、0.5N NaOH水溶液和0.5NHCl水溶液洗涤，然后使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到无色胶状物。该残余物溶解在DCM (5 mL)中，所得溶液用TFA (1 mL)处理。所得混合物在室温搅拌2 h，然后真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化所得残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(3-((R)-3-氟哌啶-3-基)丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(68 mg，79%)，为无色泡沫。
LCMS (高pH法)：保留时间0.94 min，[M+H]+= 472。
实施例73：(R)-3-氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 329663DEST_PATH_IMAGE307
向烧瓶中加入(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.26 mmol)、HATU (117 mg，0.308 mmol)和DIPEA (0.090 mL，0.51mmol)，然后加入DMF (2 mL)，所得溶液在室温搅拌5 min，然后用(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(63.3 mg，0.257 mmol)处理。所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后在水和EtOAc之间分配。分离各层，有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-70% (25% EtOH:EtOAc)/DCM)纯化所得残余物得到(R)-3-氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(95 mg，69%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.21 min，[M+H]+= 540。
实施例74：(2R,3S)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 41267DEST_PATH_IMAGE308
(R)-3-氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(95 mg，0.18 mmol)的DCM (2 mL)溶液在室温用TFA (0.014 mL，0.18 mmol)处理，所得溶液在此温度下搅拌18 h，然后真空浓缩。用MDAP(高pH法)纯化所得残余物得到(2R,3S)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(51 mg，66%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.63 min，[M+H]+= 440。
实施例75：(R)-2-(3-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 906455DEST_PATH_IMAGE309
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.46 mmol)溶解在DMF (3 mL)中，所得溶液在室温搅拌10 min。(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(40.8 mg，0.167 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌2 h。(R)-2-(3-氨基丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(20 mg，0.082 mmol)溶解在DMF (0.327mL)中，然后加入到反应混合物中。所得溶液在室温搅拌30 min，然后用水(10 mL)稀释。水相用DCM (3 x 20 mL) 萃取。合并的有机相用10% w/w LiCl溶液洗涤两次，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化所得残余物得到(R)-2-(3-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(68 mg，81%)，为黄色油状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.15 min，[M+H-Boc]+= 456。
实施例76：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(3-((R)-吗啉-2-基)丙基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 980065DEST_PATH_IMAGE310
(R)-2-(3-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(68 mg，0.12 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA (0.5 mL，6.49 mmol)处理，所得溶液在此温度下搅拌1 h，然后用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)处理。两相混合物搅拌30 min，然后用水(5 mL)稀释，用DCM (3 x 20 mL)萃取。合并的有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤两次，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在MeOH (3 mL)中，用MeOH洗脱通过500 mg NH2 isolute柱(该柱用MeOH (~10 mL)预洗)。相关级分合并并真空浓缩得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(3-((R)-吗啉-2-基)丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg，45%)，为灰白色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.86 min，[M+H]+= 456。
实施例77：(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3- (2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 563493DEST_PATH_IMAGE311
向烧瓶中加入(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(67 mg，0.090 mmol)、HATU (41.2 mg，0.108 mmol)和DIPEA (0.047 mL，0.27 mmol)，然后加入DMF (4 mL)，所得混合物在室温搅拌5 min，然后用(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(12 mg，0.090 mmol)/DMF (1 mL)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后用水(10 mL)稀释。水相用DCM(3 x 30 mL)萃取，合并的有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤两次，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-25% (2N NH3/MeOH)/DCM)纯化残余物得到(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(50 mg，61%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.82 min，[M+H]+= 453。
实施例78：(R)-2-(2-((2 S ,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure 813209DEST_PATH_IMAGE312
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(55 mg，0.17 mmol)、HATU (76 mg，0.20 mmol)和DIPEA (0.088 mL，0.50 mmol)溶解在DMF(4 mL)中，所得混合物在室温搅拌10 min，然后用(R)-2-(2-氨基乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(42.3 mg，0.184 mmol)/DMF (1 mL)处理。所得溶液在该温度下搅拌1 h，然后用水(10 mL)稀释。水相用EtOAc (3 x 30 mL)萃取，合并的有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤两次，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0-100% EtOAc/环己烷)纯化残余物得到(R)-2-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(21 mg，23%)，为无色油状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.12 min，[M+H]+= 542。
实施例79：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 798483DEST_PATH_IMAGE313
(R)-2-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(21 mg，0.039 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA (0.5 mL)处理，所得溶液在此温度下搅拌1 h，然后用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)处理。两相混合物在室温下搅拌20 min，然后用水稀释，用DCM (3 x 20 mL)萃取。合并的有机相用10% LiCl水溶液洗涤两次，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在MeOH (3 mL)中，用MeOH洗脱通过500 mg NH2 isolute柱(该柱用MeOH (~10 mL)预洗)。相关级分合并并真空浓缩得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-((R)-吗啉-2-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6 mg，35%)，为灰白色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.84 min，[M+H]+= 442。
实施例80：(2R,3S)-N5-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 108241DEST_PATH_IMAGE314
4,4-二氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(79 mg，0.14 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA (0.5 mL，6.49 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后用饱和NaHCO3水溶液处理。所得混合物在室温搅拌30 min，然后用水稀释，用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在MeOH (3 mL)中，洗脱通过NH2isolute柱(500 mg)。相关级分合并并真空浓缩得到(2R,3S)-N5-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(31 mg，48%)，为灰白色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.01 min，[M+H]+ = 458。
实施例81：4,4-二氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 116648DEST_PATH_IMAGE315
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)、HATU (73.3 mg，0.193 mmol)和DIPEA (0.084 mL，0.48 mmol)溶解在DMF(3 mL)中，同时在室温搅拌5 min。3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(59.4mg，0.225 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌2 h。加入3-(2-氨基乙基)-4,4-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(20 mg，0.076 mmol)。反应混合物在室温搅拌1 h。反应混合物用水稀释，并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤。有机层用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到4,4-二氟-3-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(79 mg，88%)，为黄色油状物.
LCMS (高pH法)：保留时间1.28 min，[M+H]+ = 558。
实施例82：(2R,3S)-N5-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 170055DEST_PATH_IMAGE316
3,3-二氟-4-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(75 mg，0.13 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA (0.5 mL，6.49 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h，然后用饱和NaHCO3水溶液处理。所得混合物搅拌30 min，然后用水稀释，用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，洗脱通过500 mg NH2 isolute柱。相关级分合并并真空浓缩得到(2R,3S)-N5-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，52%)，为灰白色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.99 min，[M+H]+ = 458。
实施例83：3,3-二氟-4-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 9835DEST_PATH_IMAGE317
(2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50mg，0.16 mmol)、HATU (73.3 mg，0.193 mmol)和DIPEA (0.084 mL，0.48 mmol)溶解在DMF(3 mL)中，在室温搅拌5 min。4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(59.4 mg，0.225 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌2 h。加入4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(30 mg，0.11 mmol)，反应混合物在室温搅拌1 h，然后用水稀释，并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，然后经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP 柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到3,3-二氟-4-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(75 mg，84%)，为黄色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.27 min，[M+H]+ = 558。
实施例84：(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-N5-((1R,4S)-4-羟基环己基)-N7-甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 490495DEST_PATH_IMAGE318
(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)在DMF (2 mL)中在室温下搅拌5 min，加入反式氨基环己醇(21.0 mg，0.182 mmol)，所得混合物在室温搅拌30 min。反应然后用水稀释，并用EtOAc 萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到白色固体。该固体使用硅胶柱色谱法 (SNAP10 Si柱)纯化，用0-100% (25% EtOH:EtOAc):DCM的梯度洗脱，得到(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-N5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(51 mg，79%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.86 min，[M+H]+ = 427。
实施例85：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6R)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2- 羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 782936DEST_PATH_IMAGE319
(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(67 mg，0.090 mmol)、HATU (41.2 mg，0.108 mmol)和DIPEA (0.047 mL，0.27 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(12 mg，0.090 mmol) 溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌1 h。反应混合物然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% 2N NH3/(20:80 MeOH:DCM)的梯度洗脱，得到(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(50 mg，61%)。(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(47 mg，0.10mmol)通过手性色谱法使用4.6 mmid x 25cm Chiralcel OD-H 柱纯化，用庚烷:EtOH 70:30洗脱，得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(8.5 mg，18%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.82 min，[M+H]+ = 453。
实施例86：(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-N5-((1R,3S)-3-羟基环丁基)-N7-甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 577717DEST_PATH_IMAGE320
(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)在DMF (2 mL)中在室温搅拌5 min，然后用(1r,3r)-3-氨基环丁醇盐酸盐(22.5 mg，0.182mmol)处理。所得混合物在室温搅拌30 min，然后用水稀释，用EtOAc萃取。有机相用10% w/wLiCl水溶液洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩得到白色固体。该固体使用硅胶柱色谱法(SNAP10 Si柱)纯化，用0-100% (25% EtOH:EtOAc):DCM的梯度洗脱，得到(2S*,3S*)-2-(氟甲基)-N5-((1r,3S)-3-羟基环丁基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(52 mg，86%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.82 min，[M+H]+ = 399。
实施例87：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 272003DEST_PATH_IMAGE321
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。加入((1R,2R)-2-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(22.5mg，0.182 mmol)，混合物在室温搅拌1.5 h，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/wLiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-100% EtOAc/环己烷的梯度洗脱，随后用0-25% (2N NH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(33 mg，55%)，为灰白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.85 min，[M+H]+ = 399。
实施例88：(2S,3S)-N5-((1R,5S,6S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲 基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 923565DEST_PATH_IMAGE322
(1R,5S,6S)-6-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(140 mg，0.275 mmol)的DCM(5 mL)溶液在室温用TFA (0.5 mL)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用饱和NaHCO3水溶液处理。混合物在室温搅拌20 min，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10%w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥和真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，用MeOH洗脱通过500 mg NH2 isolute柱。相关级分合并，并真空浓缩。残余物用MDAP(高pH法)纯化得到(2S,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(53 mg，47%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.84 min，[M+H]+ = 410。
实施例89：(1R,5S,6S)-6-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
Figure 968881DEST_PATH_IMAGE323
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.304 mmol)、HATU (139 mg，0.364 mmol)和DIPEA (0.159 mL，0.911 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(72.2 mg，0.364 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌1 h，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(25 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2NNH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到(1R,5S,6s)-6-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(140 mg，90%)，为黄色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.13 min，[M+H]+ = 510。
实施例90：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(四氢呋喃-3-基)-2,3-二氢 苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 364090DEST_PATH_IMAGE324
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。四氢呋喃-3-胺(17.2 mg，0.197 mmol)溶解在DMF(1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌1 h，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到粗物质。该粗品用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(四氢呋喃-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30 mg，50%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.90 min，[M+H]+ = 399。
实施例91：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-羟基乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 850566DEST_PATH_IMAGE325
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(43 mg，0.13 mmol)、HATU (59.6 mg，0.157 mmol)和DIPEA (0.068 mL，0.39 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。加入2-氨基乙醇(9.46 µL, 0.157 mmol)，反应混合物在室温搅拌2 h，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2NNH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到粗物质。该粗品用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-羟基乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(23 mg，47%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.81 min，[M+H]+ = 373。
实施例92：(2S*,3S*)-N5-((1R,5S,6S)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6- 基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 938608DEST_PATH_IMAGE326
(2S*,3S*)-N5-((1R,5S,6S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(35 mg，0.085 mmol)溶解在乙酸酐(1.00mL，10.6 mmol)中，反应混合物在室温在氮气下搅拌1.5 h，然后真空浓缩。残余物在甲苯(4mL)中共蒸发，然后用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到(2S*,3S*)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(19mg，49%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.85 min，[M+H]+ = 452。
实施例93：(2R,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3- 基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 205641DEST_PATH_IMAGE327
(2R,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.13 mmol)、HATU (61.4 mg，0.162 mmol)和DIPEA (0.071 mL，0.40 mmol)溶解在DMF (4 mL) 中，同时在室温搅拌5 min。2-(吡啶-3-基)乙胺(19.7 mg，0.162 mmol)溶解在DMF (1mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌2 h，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到(2R,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(33 mg，51%)，为灰白色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间0.83 min，[M+H]+ = 476。
实施例94：(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6S)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6- 基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 404541DEST_PATH_IMAGE328
(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，0.071 mmol)溶解在乙酸酐(1.00 mL，10.6 mmol)中，反应混合物在室温在氮气下搅拌1 h，然后真空浓缩。残余物与甲苯共蒸发，然后用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6 mg，17%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.78 min，[M+H]+ = 494。
实施例95：(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3- (2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 807841DEST_PATH_IMAGE329
(1R,5S,6S)-6-((2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(60 mg，0.109 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用TFA (0.50 mL，6.5 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌1 h，然后用饱和NaHCO3水溶液处理。混合物搅拌20 min，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物用MDAP(高pH法)纯化得到(2R*,3S*)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，65%)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.75 min，[M+H]+ = 452。
实施例96：(1R,5S,6S)-6-((2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7- (甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔 丁酯
Figure 4467DEST_PATH_IMAGE330
(2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.13 mmol)、HATU (61.4 mg，0.162 mmol)和DIPEA (0.071 mL，0.40 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(32.0 mg，0.162 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，然后将其在室温搅拌2 h，然后用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl水溶液洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。所得残余物使用硅胶柱色谱法(10 g SNAP Si柱)纯化，用0-25% (2N NH3/(20:80 MeOH:DCM))/DCM的梯度洗脱，得到(1R,5S,6s)-6-((2R*,3S*)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(60 mg，81%)，为橙色/黄色油状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.02 min，[M+H]+ = 552。
实施例97：(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 758797DEST_PATH_IMAGE331
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用(R)-3-(2-氨基乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(50 mg，0.20 mmol)、HATU (57.7 mg，0.152 mmol)和Et3N (0.021 mL，0.15 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后顺序用水、0.5N NaOH水溶液和0.5N HCl水溶液洗涤，随后干燥并真空蒸发得到(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(56 mg，66%)，为无色胶状物，其不经进一步纯化用于下一步骤。
LCMS (甲酸法)：保留时间1.18 min，[M+H]+ = 558。
实施例98：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7-甲基-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 495808DEST_PATH_IMAGE332
(R)-3-氟-3-(2-((2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(56 mg，0.10 mmol)的DCM (1 mL)溶液在室温用TFA (1.0 mL，13 mmol)处理，混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物用MDAP(高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-((R)-3-氟哌啶-3-基)乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(35 mg，76%)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.61 min，[M+H]+ = 458。
实施例99-108：
以下实施例是在外消旋混合物的手性纯化后获得的两种对映异构体中活性最低的，或者是由具有如下所示的立体化学的手性中间体合成的：
Figure 19194DEST_PATH_IMAGE333
Figure 449038DEST_PATH_IMAGE334
Figure 425084DEST_PATH_IMAGE335
。
实施例109：(反)-N5-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物)
Figure 903470DEST_PATH_IMAGE336
4,4-二氟-3-(2-((反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(非对映异构体混合物)(79 mg，0.14 mmol)溶解在DCM (5 mL)中，并加入TFA (0.50 mL，6.5 mmol)。反应混合物在室温搅拌1h，加入饱和NaHCO3 (水溶液) (10 mL)并将混合物搅拌30 min。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在MeOH中，洗脱通过500 mg NH2 isolute 柱，用另外的MeOH洗脱。合并级分并真空浓缩得到产物(反)-N5-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物) (31 mg，0.068 mmol，47.8%收率)，为灰白色胶状物。
LCMS (高pH法)：保留时间1.01 min，[M+H]+= 458。
实施例111：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N7-甲基-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 546941DEST_PATH_IMAGE337
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)在DMF(2 mL)中在室温下搅拌5 min，加入反式氨基环己醇(21.0 mg，0.182 mmol)并将反应在室温搅拌30 min。反应用水稀释，用EtOAc萃取，有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到白色固体，该固体使用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% (25% EtOH:EtOAc):DCM的梯度洗脱，得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(51 mg，0.120 mmol，79%收率)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.86 min，[M+H]+= 427。
实施例112：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2- 羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 882107DEST_PATH_IMAGE338
(+/-)(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(60 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH (2 mL)中。注射：1 mL溶液注射到柱上(30% EtOH/庚烷，流速= 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550, 100, 柱 30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm), 批号ODH11158-01)。总注射次数 = 4。合并来自12-14 min的级分并标记为峰2。
收集对应于峰2的级分得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(产量25 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.83 min，[MH]+ = 453。
实施例113：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1r,3S)-3-羟基环丁基)-N7-甲基-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 611029DEST_PATH_IMAGE339
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)在DMF(2 mL)中在室温下搅拌5 min，加入(1r,3r)-3-氨基环丁醇盐酸盐(22.5 mg，0.182 mmol)并将反应在室温搅拌30 min。反应用水稀释，用EtOAc萃取，有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到白色固体。该固体使用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% (25% EtOH:EtOAc):DCM的梯度洗脱，得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1r,3S)-3-羟基环丁基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(52 mg，0.131 mmol，86%收率)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.82 min，[M+H]+= 399。
实施例114：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(四氢呋喃-3-基)-2,3-二 氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物)
Figure 689843DEST_PATH_IMAGE340
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.15 mmol)、HATU (69.3 mg，0.182 mmol)和DIPEA (0.080 mL，0.45 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。四氢呋喃-3-胺(17.2 mg，0.197 mmol)溶解在DMF(1mL)中，并加入到反应混合物中，其然后在室温搅拌1 h。反应混合物用水稀释，用DCM萃取，并加入盐水。有机相用10% w/w LiCl溶液(水溶液)洗涤并加入盐水。有机层经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-20% 2M NH3/MeOH:DCM的梯度洗脱，得到粗制标题化合物。其进一步使用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(四氢呋喃-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物) (30 mg，0.075 mmol，50%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.90 min，[MH]+ = 399。
实施例115：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-羟基乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 125504DEST_PATH_IMAGE341
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(43 mg，0.13 mmol)、HATU (59.6 mg，0.157 mmol)和DIPEA (0.068 mL，0.39 mmol) 溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。加入2-氨基乙醇(9.46 µl, 0.157 mmol)，反应混合物在室温搅拌2 h。反应混合物用水洗涤并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)和盐水洗涤。有机层经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-10% 2M NH3/MeOH:DCM的梯度洗脱，得到粗制标题化合物。该粗品进一步使用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-(2-羟基乙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(23 mg，0.062 mmol，47.3%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.81 min，[MH]+ = 373。
实施例116：(反)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3- (3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 631572DEST_PATH_IMAGE342
(反)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，0.071 mmol)(实施例95)溶解在乙酸酐(1 mL，10.60 mmol)中，反应混合物在室温在N2下搅拌1 h。真空浓缩反应混合物。残余物溶解在甲苯(5 mL)中并真空浓缩。残余物溶解在DCM中，用硅胶柱色谱法纯化，用0-5% MeOH:DCM的梯度洗脱，得到(反)-N5-((1R,5S,6s)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6.0mg，0.012 mmol，17%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.78 min，[MH]+ = 494。
实施例117：(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基) 乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 847789DEST_PATH_IMAGE343
将(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50 mg，0.13 mmol)、HATU (61.4 mg，0.162 mmol)和DIPEA (0.071 mL，0.40 mmol)溶解在DMF (4 mL)中，同时在室温搅拌5 min。2-(吡啶-3-基)乙胺(19.7 mg，0.162 mmol)溶解在DMF (1 mL)中，并加入到反应混合物中，其然后在室温搅拌2 h。反应混合物用水洗涤并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤并加入盐水。有机层经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-5% MeOH:DCM的梯度洗脱，得到(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺( 33 mg，0.069 mmol，51%收率)，为灰白色胶状物。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.83 min，[MH]+ = 476。
实施例118：(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 730295DEST_PATH_IMAGE344
(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(150mg，0.455 mmol)、HATU (208 mg，0.547 mmol)和DIPEA (0.239 mL，1.37 mmol)溶解在DMF(5 mL)中，同时在室温搅拌5 min。加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(53.1 mg，0.547 mmol)，反应混合物在室温搅拌3 h。加入另外的HATU (87 mg，0.23 mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺(22.1 mg，0.228 mmol)，反应混合物在室温搅拌30 min。反应混合物用水洗涤并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl溶液(水溶液)洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-7% (2M NH3/MeOH):DCM的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(131 mg，0.321mmol，70%收率)，为灰白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.92 min，[MH]+ = 409。
实施例119：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 82779DEST_PATH_IMAGE345
(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(126 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH (10 mL)中。注射：0.5 mL溶液注射到柱上；等度法 50:50 庚烷:乙醇，流速 = 20 mL/min，检测波长 =280 nm. Ref 400 nm，100 nm，柱250 mm x 20 cm Regis Whekl-O1[R,R] (5 µm)。总注射次数 = 20。合并来自16-19.5 min的级分并浓缩得到(2R,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(产量 39mg)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.92 min，[MH]+ = 409。
实施例120：(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 963010DEST_PATH_IMAGE346
(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(150mg，0.455 mmol)、HATU (208 mg，0.547 mmol)、DIPEA (0.239 mL，1.37 mmol)溶解在DMF(5 mL)中，同时在室温搅拌5 min。加入1H-吡唑-4-胺(45.4 mg，0.547 mmol)，反应混合物在室温搅拌2 h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-7% 2M NH3/MeOH:DCM的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(65 mg，0.16 mmol，36%收率)，为灰白色胶状物。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.87 min，[MH]+ = 395。
实施例121：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢 苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 400945DEST_PATH_IMAGE347
(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(62 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (2 mL)中。注射：1 mL溶液注射到柱上；等度法 15%乙醇:庚烷；流速 = 20 mL/min，检测波长 = 215 nm。Ref 550nm，100 nm，柱2 cm x 25 cm Chiralcel OJ (10 µm)。总注射次数 = 2。合并来自10-14min的级分并浓缩得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(产量 25 mg)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.87 min，[MH]+ = 395。
实施例122：(反)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)- N7-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 821562DEST_PATH_IMAGE348
(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.272 mmol)、Xantphos (16 mg，0.027 mmol)、乙酸钯(II) (6.1 mg，0.027mmol)、DMAP (100 mg，0.817 mmol)、羰基钴(100 mg，0.272 mmol)和(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(55.4 mg，0.408 mmol)在微波小瓶中混合，将微波小瓶密封并用氮气冲洗，然后加入1,4-二噁烷(3 mL)，混合物在微波反应器中在100℃辐照1 h。将小瓶内容物用0.5 M HCl (水溶液)稀释，用EtOAc萃取。合并的有机相用0.5 M HCl (水溶液)洗涤，然后干燥并真空蒸发得到褐色残余物。该残余物用硅胶柱色谱法纯化，用0-25% EtOH/EtOAc的梯度洗脱，得到(反)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-三氘代甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(70.2 mg，0.170 mmol，62%收率)，为浅黄色泡沫。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.88 min，[MH]+ = 414。
实施例123：(反)-N5-(2-(1H-吡唑-4-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 294131DEST_PATH_IMAGE349
2-(1H-吡唑-4-基)乙胺盐酸盐(122 mg，0.824 mmol)、(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.275 mmol)、乙酸钯(II) (30.8 mg，0.137 mmol)、Xantphos (79 mg，0.14 mmol)、DMAP (50.3 mg，0.412 mmol)和羰基钴(46.9mg，0.137 mmol)置于微波小瓶中并加盖。加入1,4-二噁烷(4 mL)，反应在biotage微波反应器中在90℃辐照60 min。反应用水稀释，用EtOAc萃取。有机层用疏水玻璃料干燥并浓缩得到紫色油状物。该油状物用MDAP (甲酸法)纯化得到(反)-N5-(2-(1H-吡唑-4-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(4.0 mg，9.5 µmol，3%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.83 min，[MH]+ = 423。
实施例124：(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 142002DEST_PATH_IMAGE350
(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲胺盐酸盐(122 mg，0.824 mmol)、(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.275 mmol)、乙酸钯(II)(30.8 mg，0.137 mmol)、Xantphos (79 mg，0.14 mmol)、DMAP (50.3 mg，0.412 mmol)和羰基钴(46.9 mg，0.137 mmol) 置于微波小瓶中并加盖。加入1,4-二噁烷(4 mL)，反应在biotage微波反应器中在90℃辐照1 h。反应在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到橙色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% (25%EtOH/EtOAc):环己烷的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(46 mg，0.11 mmol，40%收率)，为黄色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.86 min，[MH]+ = 423。
实施例125：(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 1986DEST_PATH_IMAGE351
2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙胺(34.4 mg，0.275 mmol)、(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.275 mmol)、乙酸钯(II) (30.8mg，0.137 mmol)、Xantphos (79 mg，0.14 mmol)、DMAP (50.3 mg，0.412 mmol)和羰基钴(46.9 mg，0.137 mmol)置于微波小瓶中并加盖。加入1,4-二噁烷(4 mL)，反应在biotage微波反应器中在90℃辐照60 min。反应用水和10% w./w柠檬酸(水溶液)稀释，用EtOAc萃取，有机相用饱和NaHCO3 (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到褐色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% (25% EtOH:EtOAc):环己烷的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，0.073 mmol，27%收率)，为褐色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.88 min，[MH]+ = 437。
实施例126：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 226294DEST_PATH_IMAGE352
(反)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(200 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH (4 mL)中。注射：1mL溶液注射到柱上；等度法 30% 乙醇:庚烷；流速 = 30 mL/min，检测波长 =215 nm. Ref 550 nm，100 nm，柱30 mm x 25cm Chiralcel AD-H (5µm)。总注射次数 = 4。合并来自15-18 min的级分并浓缩得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(99 mg，0.25 mmol，50%收率)，为黄色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.82 min，[MH]+ = 399。
实施例127和128：(2R,3S)-N5-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲 基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺和(2R,3S)-N5-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3- 基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 553370DEST_PATH_IMAGE353
(2R,3S)-N5-(2-((+/-)(R)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(21 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH (1mL)中。注射：1 mL溶液注射到柱上；等度法 25% 乙醇(+0.2%异丙胺):庚烷(+0.2%异丙胺)；流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm. Ref 550 nm，100 nm，柱30 mm x 25 cmChiralcel OJ-H (5 µm)。合并来自7-10 min的级分并浓缩得到(2R,3S)-N5-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6.0mg，29%收率)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 1.01 min，[MH]+ = 458。
合并来自14-22 min的级分并浓缩得到(2R,3S)-N5-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(7 mg，33%收率)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 1.01 min，[MH]+ = 458。
实施例129：(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰 胺
Figure 837721DEST_PATH_IMAGE354
(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(200mg，0.607 mmol)、HATU (254 mg，0.668 mmol)和DIPEA (0.318 mL，1.82 mmol)在DMF (4mL)中在室温搅拌5 mins，加入NH4Cl (97 mg，1.8 mmol)，反应在室温搅拌5 min。反应用10% w/w柠檬酸(水溶液)稀释，用EtOAc萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黄色固体。该固体使用硅胶柱色谱法纯化，用0-12% EtOH:EtOAc的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(125 mg，0.381 mmol，63%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.81 min，[MH]+ = 329。
实施例130：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲 酰胺
Figure 250247DEST_PATH_IMAGE355
(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(90mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (4 mL)中。注射：2 mL溶液注射到柱上；等度法 30%乙醇:庚烷；流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm. Ref 550 nm，100 nm，柱30 mm x 25cm Chiralpak AD-H (5 µm)。总注射次数 = 2。合并来自12.5-14.5 min的级分并浓缩得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(27 mg，0.082mmol，30%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.80 min，[MH]+ = 329。
实施例131：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 12667DEST_PATH_IMAGE356
(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(220mg，0.668 mmol)和HATU (305 mg，0.802 mmol)溶解在DMF (2 mL)中，加入DIPEA (0.350mL，2.00 mmol)，反应混合物在室温搅拌5 min。加入((1R,2R)-2-氨基环丙基)甲醇(58.2mg，0.668 mmol)，反应在室温搅拌1 h。反应混合物在EtOAc (30 mL)中稀释，并用2% w/w柠檬酸水溶液(30 mL)洗涤两次，然后有机层再次用盐水(15 mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3 (水溶液) (30 mL)洗涤，并通过疏水玻璃料。滤液浓缩并使用硅胶柱色谱法纯化，用70-100%EtOAc:环己烷的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(149 mg，0.374 mmol，56%收率)，为黄色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.81 min，[MH]+ = 399。
(反)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2R)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(149 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (4 mL)中。注射：0.5 mL溶液注射到柱上(10% EtOH/庚烷，流速 = 20 mL/min，检测波长 = 215 nm，4.Ref 550, 100, 柱30 mm x 25 cm Chiralcel OJ-C (5 µm)，批号 ODH11158-01)。总注射次数 = 8。合并来自10-10.5 min的级分并浓缩得到(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(产量 25 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.82 min，[MH]+ = 399。
实施例132：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((反)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7-甲基-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 131933DEST_PATH_IMAGE357
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(200 mg，0.607 mmol)溶解在DMF (5 mL)中。加入DIPEA (0.318 mL，1.82 mmol)、HATU(346 mg，0.911 mmol)和反-2-(2-氨基环丙基)乙-1-醇(132 mg，0.911 mmol)，反应在室温搅拌过夜。反应真空浓缩。残余物溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO3 (水溶液)和盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥, 过滤通过疏水玻璃料并真空浓缩。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用5-100% EtOAc:环己烷的梯度洗脱，得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((反)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(200 mg，0.485 mmol，80%收率)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.91 min，[MH]+ = 413。
实施例133：(反)-N5-(2-(4H-1,2,4-三唑-4-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 587185DEST_PATH_IMAGE358
向(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(0.033 g，0.10 mmol)和HATU (38 mg)的DMF (0.5 mL)溶液中加入DIPEA (63 μL)。溶液用所述胺(0.120 mmol)处理。反应然后震荡，接着在室温静置23 h。反应直接用MDAP (高pH法)纯化得到(反)N5-(2-(4H-1,2,4-三唑-4-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(18 mg，32%)。
LCMS (甲酸法)：RT = 0.83 min，[MH]+= 423。
类似制备了下列实施例：
Figure 487008DEST_PATH_IMAGE359
Figure 53118DEST_PATH_IMAGE360
。
实施例144：(反)(2R,3S)-N5-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物)
Figure 89207DEST_PATH_IMAGE361
(反)3,3-二氟-4-(2-((2R,3S)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酰胺基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(非对映异构体混合物) (75 mg，0.13mmol)溶解在DCM (5 mL)中，并加入TFA (0.50 mL，6.5 mmol)。反应混合物在室温搅拌1 h。加入饱和NaHCO3 (水溶液) (10 mL)并将混合物搅拌30 min。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，经疏水玻璃料干燥并真空浓缩。残余物溶解在MeOH (3 mL)中，洗脱通过500 mg NH2 isolute柱。该柱用MeOH (~10 mL)预洗。相关级分合并并真空浓缩得到(反)-N5-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物) (32 mg，0.070 mmol，52%收率)，为灰白色胶状物。
LCMS (甲酸法)：Rt = 0.99 min，[MH]+= 458。
实施例145 (反)2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(2-(吡啶-2-基)乙基)-2,3-二 氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 653044DEST_PATH_IMAGE362
2-(2-氨基乙基)-吡啶 (50.3 mg，0.412 mmol)、(反)5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(100 mg，0.275 mmol)、乙酸钯(II) (30.8 mg，0.137mmol)、Xantphos (79 mg，0.14 mmol)、DMAP (50.3 mg，0.412 mmol)和羰基钴(46.9 mg，0.137 mmol) 置于微波小瓶中并加盖。加入1,4-二噁烷(4 mL)，反应在biotage微波反应器中在90℃辐照60min。反应用水稀释，用EtOAc萃取，有机相用水洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黑色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-25% EtOH:EtOAc的梯度洗脱，得到黄色固体。其进一步用MDAP (高pH法)纯化得到(反)2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(2-(吡啶-2-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(34 mg，0.078 mmol，29%收率)，为黄色固体。
LCMS (高pH法)：Rt = 0.64 mins, [MH]+= 434。
实施例146和实施例147：(2R,3S)-N5-(2-((R*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2- 二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺和(2R,3S)-N5-(2-((S*)-3,3-二氟哌 啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 40163DEST_PATH_IMAGE363
(2R,3S)-N5-(2-(3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(非对映异构体混合物) (23 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH (3 mL)中。注射：1 mL溶液注射到柱上(20% EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550, 100，柱30mm x 25cm Chiralpak IC (5um), 批号IC10028-01)。总注射次数 = 1。合并来自64-69 min的级分并标记为峰1。合并来自72-80 min的级分并标记为峰2。
收集对应于峰1的级分得到(2R,3S)-N5-(2-((R*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(9 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.99 min，[MH]+ = 458。
收集对应于峰2的级分得到(2R,3S)-N5-(2-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(10 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.99 min，[MH]+ = 458。
实施例148：(反)N7,2-二甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并 呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 144385DEST_PATH_IMAGE364
(反)2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.321 mmol)、HATU (147 mg，0.385 mmol)和DIPEA (0.168 mL，0.964 mmol)在DMF (4 mL)中在室温搅拌5 min。加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(46.8 mg，0.482 mmol) (可商购自，例如，Fluorochem)，反应在室温搅拌1 h。反应用10% w/w柠檬酸(水溶液)稀释，用EtOAc萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黄色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-60% (25% EtOH/EtOAc):环己烷的梯度洗脱，得到(反)N7,2-二甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(65 mg，0.17 mmol，52%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.95 min，[MH]+ = 391。
实施例149 (反)-N7,2-二甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3-苯基-2, 3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 300560DEST_PATH_IMAGE365
(反)-2-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100 mg，0.321 mmol)、HATU (147 mg，0.385 mmol)和DIPEA (0.168 mL，0.964 mmol)在DMF (4 mL)中在室温搅拌5 min。加入2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙胺(40.2 mg，0.321 mmol) (可商购自，例如，Fluorochem)，反应在室温搅拌1 h。反应用10% w/w柠檬酸(水溶液)稀释，用EtOAc萃取。有机相用10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黄色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-60% (25% EtOH/EtOAc):环己烷的梯度洗脱，得到(反)-N7,2-二甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(114 mg，0.272 mmol，85%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.93 min，[MH]+ = 419.3。
实施例150：(反)-2-(氟甲基)-N5-((反)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7-甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 97615DEST_PATH_IMAGE366
(反)2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100mg，0.304 mmol)、HATU (139 mg，0.364 mmol)和DIPEA (0.159 mL，0.911 mmol)在DMF (4mL)中在室温搅拌5 min。加入2-((反)-2-氨基环丙基)乙醇(39.9 mg，0.395 mmol)，反应在室温搅拌2 h。反应用EtOAc稀释，用10% w/w柠檬酸(水溶液)和10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到褐色油状物。该油状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-12%EtOH:EtOAc的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N5-((反)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(70 mg，0.17 mmol，56%收率)，为无色胶状物。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.91 min，[MH]+ = 413。
实施例151：(反)-2-(氟甲基)-N5-((1R,2S)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7-甲基-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 644134DEST_PATH_IMAGE367
(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(100mg，0.304 mmol)、HATU (139 mg，0.364 mmol)和DIPEA (0.159 mL，0.911 mmol)在DMF (4mL)中在室温搅拌5 min。加入4-(2-氨基乙基)四氢-2H-噻喃 1,1-二氧化物 (70.0 mg，0.395 mmol) (可商购自，例如，Enamine)，反应在室温搅拌1 h。反应用EtOAc稀释，用10%w/w柠檬酸(水溶液)和10% w/w LiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黄色胶状物。该胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-12% EtOH:EtOAc的梯度洗脱，得到(反)-N5-(2-(1,1-二氧化四氢-2H-噻喃-4-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(97 mg，0.20 mmol，65%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.89 min，[MH]+ = 489。
实施例152：(2R,3S)-N7,2-二甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 817626DEST_PATH_IMAGE368
(反)-N7,2-二甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(96 mg，0.23 mmol) 用手性HPLC纯化。
分析方法：约0.5 mg溶解在50%EtOH/庚烷(1 mL)中，将20 μL注射到柱上，用30%EtOH/庚烷洗脱；流速 = 1.0ml/min，波长215 nm，4. 柱4.6 mmid x 25 cm Chiralcel OJ-H。
制备方法：约96 mg溶解在2 mL EtOH中。2 mL溶液注射到柱上，用30%EtOH/庚烷洗脱；流速 = 30 mL/min，波长，215nm, 4. 柱30 mm x 25 cm Chiralcel OJ-H (5um)。在9.5和14 min之间洗出的级分合并并浓缩得到(2S,3R)-N7,2-二甲基-N5-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(48 mg，0.12 mmol，50%收率)，为白色固体。
LCMS (高pH法)：Rt 0.93 min，[MH]+= 419。
实施例153：(2R,3S)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二 甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 828307DEST_PATH_IMAGE369
(反)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(18 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH(1.5 mL)中。注射：1.5 mL溶液注射到柱上(25% EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长= 215 nm，4. Ref 550, 100, 柱3 cm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 μm), 批号ADH13231)。总注射次数 = 1。合并来自14-17 min的级分并标记为峰1。合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分得到(2R,3S)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 1.10 min，[MH]+ = 427。
实施例154：(2S,3R)-N7,2-二甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢 苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 796263DEST_PATH_IMAGE370
(反)-N7,2-二甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(54 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (7 mL)中。注射：0.5 mL溶液注射到柱上(50% EtOH/庚烷，流速 = 20 mL/min，检测波长 = 280 nm，4. Ref 400, 100, 柱2 cm x 25 cm Regis Whekl-O1 [R,R] (5 μm)。合并来自15-19 min的级分并浓缩得到：(2S,3R)-N7,2-二甲基-N5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(21 mg)。
LCMS (2 min甲酸法)：Rt = 0.95 min，[MH]+ = 391。
实施例155：(2R,3S)-N 5-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
实施例156：(2R,3S)-N 5-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
实施例157：(2S,3R)-N 5-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
实施例158：(2S,3R)-N 5-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯 基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 892395DEST_PATH_IMAGE371
(反)-N 5-(2-((+/-)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体溶解在EtOH (1 mL)中。注射：1 mL溶液注射到柱上(50% EtOH/庚烷+ 0.2%异丙胺，流速 = 30 mL/min，检测波长 =215 nm，4. Ref 550, 100, 柱3 cm x 25 cm Chiralpak IC 批号 IC10028-01 (5 μm)。总注射次数 = 2。合并来自14-16 min的级分并标记为峰1。合并来自20-22 min的级分并标记为峰2。合并来自24-25.5 min的级分并标记为峰3。合并来自25.5-27 min的级分并标记为混合（mix）。合并来自27-29 min的级分并标记为峰4。合并的混合级分真空浓缩并使用上述方法再次处理。
收集对应于峰1的级分并用MDAP (高pH法)纯化得到(2R,3S)-N 5-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6 mg)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.98 min，[MH]+ = 458。
收集对应于峰2的级分得到(2R,3S)-N 5-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(6 mg)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.98 min，[MH]+ = 458。
收集对应于峰1的级分得到(2S,3R)-N 5-(2-((S*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(7 mg)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.98 min，[MH]+ = 458。
收集对应于峰2的级分得到(2S,3R)-N 5-(2-((R*)-4,4-二氟哌啶-3-基)乙基)-N 7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(7 mg)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.98 min，[MH]+ = 458。
实施例159：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基- 3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 338420DEST_PATH_IMAGE372
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)的DMF (5 mL)溶液在室温用((1S,2S)-2-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(45.0 mg，0.36 mmol)、HATU (139 mg，0.364 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)处理，所得混合物在该温度下搅拌2 h，然后真空浓缩。残余物溶解在EtOAc (10 mL)中，有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥, 过滤通过疏水玻璃料并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度5-100% (3:1 EtOAc:EtOH)/环己烷)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(70 mg，72%)。样品用MDAP (甲酸法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(49mg，45%)，为膏状固体。
LCMS (高pH法)：Rt = 0.83 min，[MH]+= 399。
实施例160：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-((1R,5S,6s)-3-丙酰基-3- 氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 406870DEST_PATH_IMAGE373
(2S,3S)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(132 mg，0.323 mmol)的DCM (5 mL)溶液在室温用DIPEA (0.113 mL，0.646 mmol)处理，然后用丙酰氯(0.056 mL，0.65 mmol)处理。所得溶液在该温度下搅拌1h，然后用水处理。分离各层，水相用DCM萃取两次。合并的有机相过滤通过疏水玻璃料并真空浓缩。用硅胶快速色谱法(10 g 柱，梯度：0至70%的[25% (v/v) EtOH/乙酸乙酯]/环己烷)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-((1R,5S,6s)-3-丙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(91 mg，61%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 466。
实施例161：(反)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲 氧基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 545728DEST_PATH_IMAGE374
在微波小瓶中装入(反)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(198 mg，0.424mmol)、DBU (0.128 mL，0.849 mmol)，然后加入DMF (2 mL)，所得混合物在100℃在微波辐射下搅拌1 h，然后冷却至室温。反应再用DBU (0.128 mL，0.849 mmol)处理，在微波辐射下在120℃搅拌1 h，然后冷却至室温。反应混合物用水稀释，用EtOAc萃取。有机层用10% w/wLiCl (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用MDAP(甲酸法)纯化残余物得到(反)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，16%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.93 min，[M+H]+= 467。
实施例162和163：(2R,3S)-N5-(3-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N7,2-二甲 基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺和(2R,3S)-N5-(3-((R*)-3,3-二氟哌啶-4- 基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 129156DEST_PATH_IMAGE375
(+/-)(2R,3S)-N5-(3-(3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(75 mg，0.16 mmol)用手性色谱法纯化。
- 制备方法：这分两个阶段进行：使用chiralpak IC分离两对异构体，然后使用chiralpak IE和IF在第二轮色谱法中纯化各个混合物。方法1（异构体对的拆分）使用Chiralpak IC (250 x 4.6 mm, 5微米)，流速为1mL/min。使用UV二极管阵列在250nm（带宽40nm，参考400nm带宽100nm）下进行检测。洗脱液由流动相A：庚烷（含有0.2% v/v异丙胺）和流动相B：EtOH（含有0.2% v/v异丙胺）组成。等度法使用50:50的流动相A:流动相B，运行时间为30分钟。然后使用方法2进一步分离流出最快的异构体对：使用的手性柱是ChiralpakIE（250×4.6mm，5微米），流速为1 mL/min。使用UV二极管阵列在250nm（带宽40nm，参考400nm带宽100nm）下进行检测。洗脱液由流动相A：庚烷（含有0.2% v/v异丙胺）和流动相B：EtOH（含有0.2% v/v异丙胺）组成。等度法使用50:50流动相A:流动相B，运行时间为50分钟。(2R,3S)-N5-(3-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺是从该第二次纯化得到的流出最慢的对映异构体-为白色固体(13 mg，69%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.70 min，[M+H]+= 472。
(2R,3S)-N5-(3-((S*)-3,3-二氟哌啶-4-基)丙基)-N7,2-二甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺是从该第二次纯化得到的流出最快的对映异构体-为白色固体(11 mg，59%)。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.70 min，[M+H]+= 472。
实施例164：(2R,3R)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-((1R,5S,6s)-3-丙酰基-3- 氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 378871DEST_PATH_IMAGE376
(2R,3R)-N5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(95 mg，0.23 mmol)和丙酸酐(500 µL, 0.232mmol)在室温搅拌1 h。反应用水稀释，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到无色油状物。该油状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-12% EtOH:EtOAc的梯度洗脱，得到(2R,3R)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-((1R,5S,6s)-3-丙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(75 mg，0.161 mmol，69.4%收率)，为白色固体。
实施例165：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2- 羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 364145DEST_PATH_IMAGE377
(反)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(嘧啶-5-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(37 mg，0.082 mmol)用手性色谱法纯化。
- 分析方法：约0.5 mg的物质溶解在 50% EtOH/庚烷(1 mL)中，将20 μL注射到柱上，以流速 = 1.0 mL/min用30% EtOH (+0.2%异丙胺)/庚烷洗脱；检测方法：波长 215 nm。柱4.6 mmid x 25 cm Chiralcel OD-H。
- 制备方法：约37 mg的物质溶解在1 mL的EtOH中。将该溶液注射到柱上，以流速= 30 mL/min用30% EtOH (+0.2%异丙胺)/庚烷(+0.2%异丙胺)洗脱，波长：215nm。所用柱为30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 μm)。对最慢的异构体(2R,3R)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(嘧啶-5-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺进行相同的纯化过程两次以增加对映体过量，得到10 mg (54%)的白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.80 min，[M+H]+= 453。
实施例166：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 611587DEST_PATH_IMAGE378
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)和HATU (111 mg，0.292 mmol)溶解在DMSO (0.85 mL)中，所得溶液用DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)处理，反应混合物在室温搅拌5 min。加入1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应在室温搅拌1 h。加入另外的HATU (111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物搅拌5 min，然后加入1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应混合物在室温搅拌2 h。加入另外的HATU(111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物搅拌5 min，然后加入1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应混合物在室温搅拌2 h，然后静置过夜。再次加入HATU (111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物搅拌5 min，然后加入1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应混合物搅拌3 h，然后静置过周末。反应混合物已经分离并变成固体，并且似乎并非所有反应物都已进入溶液中，因此将另外的DMSO（1mL）加入到反应混合物中并将其在室温下搅拌3小时。加入1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应混合物在室温搅拌1 h，然后静置过夜。加入另外的HATU (111 mg，0.292 mmol)、DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)和1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应在室温搅拌1 h。加入另外的HATU(111 mg，0.292 mmol)、DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)和1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应在室温搅拌1 h。然后用MDAP (高pH法)纯化反应混合物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(24.8 mg，25%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.79 min，[M+H]+= 410。
实施例167：(2S,3S)-N5-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-2-(氟甲 基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 682311DEST_PATH_IMAGE379
向(2S,3S)-N5-(3-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(48 mg，0.080mmol)在EtOH (2 mL)中的悬浮液中加入水合肼(3.9 µL, 0.080 mmol)，所得悬浮液在50℃下搅拌23 h。加入另外的EtOH (1 mL)，反应在50℃再搅拌24 h。加入水合肼(3.9 µL,0.080 mmol)，反应在50℃搅拌过周末。向反应混合物中加入另外的水合肼(39 µL, 0.80mmol)，并将温度降至40℃。反应混合物搅拌8 h，然后使其冷却至室温并静置过夜。在N2气流下蒸发挥发物。残余物用MDAP(高pH法)纯化得到(2S,3S)-N5-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(21.8 mg，58%)，为米黄色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.63 min，[M+H]+= 472。
实施例168：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 735718DEST_PATH_IMAGE380
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)和HATU (111 mg，0.292 mmol)在DMSO (0.85 mL)中的溶液在室温用DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)处理，反应混合物在该温度下搅拌5 min，然后用1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-胺(23.8 mg，0.243 mmol)处理。所得混合物在室温搅拌1 h。然后加入另外的HATU (111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物在室温搅拌5 min，然后用1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-胺(23.8 mg，0.243 mmol)处理。然后将反应混合物室温搅拌1 h，然后静置过周末。然后用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(69.5 mg，70%)，为黄色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.89 min，[M+H]+= 410。
实施例169：(2S,3S)-N5-(2-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-2-(氟甲 基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 575498DEST_PATH_IMAGE381
向(2S,3S)-N5-(2-(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(145 mg，0.247 mmol)的EtOH (10 mL)悬浮液中加入水合肼(0.120 mL，2.47 mmol)，所得溶液在50℃搅拌20 h，然后使其冷却至室温。反应浓缩得到粘性黄色固体，将其用MDAP (甲酸法)纯化得到(2S,3S)-N5-(2-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32.4 mg，29%)，为无色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.61 min，[M+H]+= 458。
实施例170：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(哒嗪-4-基)-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 56157DEST_PATH_IMAGE382
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)和HATU (111 mg，0.292 mmol)在DMSO (0.85 mL)中的溶液在室温用DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol) 处理，反应混合物在该温度搅拌5 min。然后加入哒嗪-4-胺(23.1 mg，0.243 mmol)，反应在室温搅拌1 h。然后向反应中加入另外的HATU (111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，所得混合物在室温搅拌5 min。然后加入哒嗪-4-胺(23.1 mg，0.243 mmol)，反应混合物在室温搅拌1 h。混合物然后用MDAP(高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-N5-(哒嗪-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(65.2 mg，66%)，为橙色胶状物。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.83 min，[M+H]+= 407。
实施例171：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2- 甲氧基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 286282DEST_PATH_IMAGE383
将(反)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(30 mg，0.064 mmol)进行手性分离：
- 分析方法：约0.5 mg的物质溶解在50% EtOH/庚烷(1 mL)中，并将20 μL注射到柱上。洗脱液：30% EtOH/庚烷，流速 = 1.0 mL/min，波长215 nm；柱4.6 mmid x 25 cmChiralcel OD-H。
- 制备方法：约30 mg的物质溶解在1 mL EtOH中，将其注射到柱上。洗脱液：30%EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，波长215 nm；柱30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 μm)。
(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺是最快洗脱的异构体，得到15mg (100%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.93 min，[M+H]+= 467。
实施例172：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 143379DEST_PATH_IMAGE384
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)和HATU (111 mg，0.292 mmol)的DMSO (0.85 mL)溶液在室温用DIPEA(0.127 mL，0.729 mmol)处理，反应混合物在室温搅拌5 min，然后加入4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)。所得混合物在室温搅拌1 h。加入另外的HATU (111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物在室温搅拌5 min，然后加入4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-胺(23.8 mg，0.243 mmol)，反应在室温搅拌1 h。反应混合物然后用水稀释，并将水相用DCM洗涤。有机相使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用MDAP (高pH法)纯化残余物得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(5.8 mg，6%)，为浅橙色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.81 min，[M+H]+= 410。
实施例173：(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7-乙基- 2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 837666DEST_PATH_IMAGE385
(2S,3S)-5-(((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)氨基甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸(21 mg，0.053 mmol)的DCM (10 mL)悬浮液在室温用NEt3 (0.015 mL，0.11 mmol)和HATU (26 mg，0.069 mmol) 处理，随后用乙胺(0.053mL，0.11 mmol) 处理，所得混合物在该温度搅拌2 h，然后用水洗涤，使用疏水玻璃料干燥并真空浓缩。用MDAP (甲酸法)纯化残余物得到(2S*,3S*)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7-乙基-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(14mg，62%)，为无色固体。
LCMS (高pH法)：保留时间0.97 min，[M+H]+= 425。
实施例174：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-3-苯基- 2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 489227DEST_PATH_IMAGE386
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)的DCM (1 mL)溶液在室温用亚硫酰氯 (28.9 mg，0.243 mmol) 处理，所得混合物在50℃搅拌4 h。然后加入另外的亚硫酰氯 (28.9 mg，0.243 mmol)，反应在70℃搅拌2 h，然后冷却至室温并真空浓缩。残余物与甲苯共蒸发。残余物然后溶解在DMF (1mL)中，溶液在室温用2-甲基-2H-四唑-5-胺(24.1 mg，0.243 mmol)和DIPEA (0.042 mL，0.24 mmol)处理，然后在该温度下搅拌过夜。加入另外的2-甲基-2H-四唑-5-胺(48.1 mg，0.486 mmol)和DIPEA (0.084 mL，0.486 mmol)，所得混合物在50℃搅拌2 h，然后冷却至室温并真空浓缩。残余物用MDAP (甲酸法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(80 mg，80%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.75 min，[M+H]+= 411。
实施例175：(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7-环丙 基-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 534543DEST_PATH_IMAGE387
(2S,3S)-5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酰基)-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酸(50 mg，0.13 mmol)/DMF (1 mL)在室温用DIPEA(0.066 mL，0.38 mmol)处理，然后用HATU (71.8 mg，0.189 mmol)处理，反应在该温度下搅拌5 min，然后用环丙胺(9.76 µL, 0.138 mmol)处理。混合物在室温搅拌1 h，然后真空浓缩。残余物在乙酸乙酯和饱和NaHCO3 (水溶液) 之间分配并分离各层。有机相用2N HCl(水溶液)洗涤，然后用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。用MDAP (甲酸法)纯化所得残余物得到(2S,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7-环丙基-2-(氟甲基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(34.7 mg，60%)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.96 min，[M+H]+= 437。
实施例176：(2R,3S)-N5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-3-(3-(2- 羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 867436DEST_PATH_IMAGE388
(反)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(25 mg)用手性HPLC纯化。将外消旋体加热溶解在EtOH (1mL)中。注射：1 mL溶液注射到柱上(50% EtOH [+0.2%异丙胺]/庚烷[+0.2%异丙胺]，流速 =30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550, 100, 柱30 mm x 25 cm Chiralcpak AD-H(5 µm), 批号 ADH13231)。合并来自23-31 min的级分得到(2R,3S)-3-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)-N7,2-二甲基-N5-(2-(吡啶-3-基)乙基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(7.0 mg，0.015 mmol，28%收率)。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.83 min，[MH]+ = 476。
实施例177：(反)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲 基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 416229DEST_PATH_IMAGE389
(反)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(50cmg, 0.15 mmol)溶解在DCM (10 mL)中，加入Et3N (0.042 mL，0.30 mmol)和HATU(69.3 mg，0.182 mmol)，随后加入(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(30mg，0.18 mmol)。混合物在室温搅拌1 h，然后用水洗涤，干燥并真空蒸发，所得浅黄色胶状物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% EtOAc:环己烷的梯度洗脱，得到(反)-N 5-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(43 mg，0.097 mmol，64%收率)，为无色泡沫。
LCMS (甲酸法)：Rt = 1.05 min，[MH]+= 445。
实施例178：(反)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-N 5-((反)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3- 苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 504270DEST_PATH_IMAGE390
2-(氟甲基)-N 5-((1R,2S)-2-(2-羟基乙基)环丙基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(70 mg，0.17 mmol)和戴斯马丁氧化剂(144 mg，0.339 mmol)在DCM(5 mL)中在室温搅拌16 h。反应用饱和NaHCO3 (水溶液)洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到黄色固体。固体用DCM (5 mL)稀释，用吗啉(0.030 mL，0.34 mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(180 mg，0.849 mmol)处理，在室温搅拌1 h。反应在室温静置9天。反应用水处理，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，用疏水玻璃料干燥并浓缩得到褐色油状物。该油状物用MDAP (甲酸法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N7-甲基-N5-((1R,2R)-2-(2-吗啉代乙基)环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(5 mg，6%收率)，为黄色油状物。
LCMS (甲酸法)：Rt 0.63 min，[MH]+= 482。
实施例179：(反)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-N5-(1S,2S)-2-甲基环丙基)-3-苯基-2,3- 二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 771304DEST_PATH_IMAGE391
(反)-5-溴-2-(氟甲基)-N-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-甲酰胺(0.200 g，0.549 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙烷-1-胺盐酸盐(0.089 g，0.82 mmol)、Xantphos(0.016 g，0.027 mmol)、乙酸钯(II) (6.16 mg，0.0270 mmol)和碳酸钠(0.175 g，1.65mmol)在50 mL RBF中混合，并用氮气冲洗烧瓶，然后加入甲苯(8 mL)，溶剂用氮气鼓泡，然后用一氧化碳鼓泡10 min。安装含有一氧化碳的气球，混合物在80℃加热过周末，得到黑色悬浮液。其用DCM (20 mL)稀释并用水洗涤。有机层用水(10 mL)洗涤，通过疏水玻璃料干燥，然后真空蒸发。残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-100% EtOAc/环己烷的梯度洗脱，得到(反)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-N5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(0.132 g，0.345 mmol，63%收率)，为无色固体。
LCMS (甲酸法)：Rt 1.01 min，[MH]+= 383。
实施例180：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-N 5-(嘧啶-5-基)-2,3-二氢苯 并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 704625DEST_PATH_IMAGE392
(2S,3S)-2-(氟甲基)-7-(甲基氨基甲酰基)-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(80 mg，0.24 mmol)和HATU (111 mg，0.292 mmol)溶解在DMSO (0.9 mL)中，加入DIPEA(0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物在室温搅拌5 min。加入嘧啶-5-胺(23.1 mg，0.243mmol)，反应在室温搅拌30 min。反应混合物静置过夜。加入HATU (111 mg，0.292 mmol)和DIPEA (0.127 mL，0.729 mmol)，反应混合物搅拌5 min，然后加入嘧啶-5-胺(23.1 mg，0.243 mmol)，反应混合物在室温搅拌1 h。加入嘧啶-5-胺(23.1 mg，0.243 mmol)，在室温搅拌1 h。反应稀释至3 mL的DMSO中，并用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N 7-甲基-3-苯基-N 5-(嘧啶-5-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(32 mg，0.079 mmol，32%收率)，为白色固体。
LCMS (甲酸法)：保留时间0.90 min，[M+H]+= 407。
实施例181 – 202：
以下实施例是在外消旋混合物的手性纯化后获得的两种对映异构体中活性最低的，或者是由具有下面所示的立体化学的手性中间体合成的：
Figure 308257DEST_PATH_IMAGE393
Figure 567200DEST_PATH_IMAGE394
Figure 55950DEST_PATH_IMAGE395
Figure 58541DEST_PATH_IMAGE396
。
实施例203：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己烷- 6-基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
实施例204：(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己烷- 6-基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺
Figure 581926DEST_PATH_IMAGE397
(2S,3S)-N5-((1R,3R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-基)-2-(氟甲基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(72.4 mg，0.134 mmol) (9:1非对映异构体混合物)溶解在DCM (3 mL)中，加入4M HCl/二噁烷(0.084mL，0.37 mmol)。反应在室温搅拌30 min。反应混合物用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机相过滤通过疏水玻璃料，真空浓缩得到黄色固体。该固体使用硅胶柱色谱法纯化，用10至100% (25% EtOH/乙酸乙酯):环己烷的梯度洗脱，然后用MDAP (高pH法)纯化得到(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(31.6 mg，55%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.86 min，[MH]+ = 425。
和(2S,3S)-2-(氟甲基)-N5-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-基)-N7-甲基-3-苯基-2,3-二氢苯并呋喃-5,7-二甲酰胺(4.3 mg，8%收率)，为白色固体。
LCMS (2 min 高pH法)：Rt = 0.90 min，[MH]+ = 425。
生物学数据
式(I)化合物可以在以下一种或多种测定中测试：
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）测定
使用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）竞争测定评估溴结构域结合。为了实现这种方法，用Alexa Fluor® 647（这是一种远红外荧光染料）标记一种已知高亲和力的泛BET相互作用小分子（参考化合物X）。参考化合物X充当溴结构域结合的报告物，并且是TR-FRET对的受体荧光团组分。与抗-6*His抗体缀合的铕螯合物被用作TR-FRET对中的供体荧光团。抗-6*His抗体选择性结合至添加到本研究中使用的每个BET串联溴结构域蛋白构建体的氨基末端的六组氨酸纯化表位。当供体和受体荧光团紧密接近（在20-80 Å之间）时，产生TR-FRET信号，这在本测定中通过参考化合物X与溴结构域蛋白的结合而实现。
参考化合物X：4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺基)苯基)氨基)-6-氧代己基)-2-((2E,4E)-5-(3,3-二甲基-5-磺酸基-1-(4-磺酸基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-2-基)戊-2,4-二烯-1-叉基)-3-甲基-5-磺酸基吲哚啉-1-基)丁烷-1-磺酸盐)
Figure 683874DEST_PATH_IMAGE398
向N-(5-氨基戊基)-2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺(制备参见参考化合物J，WO2011/054848A1，1.7 mg，3.53 µmol)的DMF (40μl)溶液中加入AlexaFluor647-ONSu (2.16 mg，1.97 µmol)也在DMF (100μl)中的溶液。混合物用DIPEA (1 µl, 5.73 µmol)碱化，并在涡旋混合器上搅拌过夜。
将反应混合物蒸发至干。将固体溶于乙腈/水/乙酸(5/4/1，<1 ml) 中，过滤并施加到Phenomenex Jupiter C18制备柱上，用下列梯度(A = 0.1% 三氟乙酸/水，B= 0.1%TFA/90%乙腈/10%水)洗脱：流速 = 10 ml/min，AU = 20/10 (214nm)：
5-35%，t=0min：B = 5%；t=10min：B = 5%；t=100min：B = 35%；t=115min：B = 100%(Sep. grad：0.33%/min)。
主要组分在26-28%B的范围内洗脱，但似乎由两个峰组成。通过分析HPLC(Spherisorb ODS2, 经60 min1至35%)分析应含有“两种”组分的中间级分(F1.26)：单组分在28%B洗脱。
合并级分F1.25/26&27并蒸干。用DMF转移，蒸发至干，用无水乙醚研磨，并将蓝色固体在<0.2毫巴的条件下干燥过夜：1.54mg。
分析HPLC (Sphersisorb ODS2, 经60min1至35%B)：MSM10520-1：[M+H]+ (obs)：661.8/-对应于M-29。对于M-29的计算质量1320.984，这相当于[(M+2H)/2]+。这是AlexaFluor 647染料的标准发生事件，表示在质谱仪条件下理论上损失了两个亚甲基。
测定原理：为了产生TR-FRET信号，用λ337 nm的激光激发供体荧光团，其随后导致在λ618 nm处的发射。如果受体荧光团非常接近，则可能发生能量转移，这导致Alexa Fluor® 647在λ665 nm处的发射。在竞争性化合物存在下，参考化合物X可以从与溴结构域的结合中置换。如果发生置换，则受体荧光团不再接近供体荧光团，这阻止了荧光能量转移，以及随后在λ665处的Alexa Fluor® 647发射损失。
使用跨越溴结构域1（BD1）和溴结构域2（BD2）的蛋白质截短物评估式(I)化合物与参考化合物X对与BET家族（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT）结合的竞争。为了监测与BD1或BD2的差异结合，在乙酰赖氨酸结合口袋中产生关键酪氨酸至丙氨酸的单个残基突变。为了验证该方法，为每个BET家族成员产生双残基突变串联结构域蛋白。利用荧光偏振方法，测定每个单突变体和双突变体对参考化合物X的结合亲和力。与未突变的野生型串联BET蛋白相比，双突变串联蛋白对参考化合物X的亲和力大大降低（Kd降低> 1000倍）。单突变溴结构域串联蛋白对参考化合物X的亲和力与相应的非突变的BET蛋白是等效的。这些数据证明酪氨酸至丙氨酸的单突变使突变的溴结构域和参考化合物X之间的相互作用的Kd降低> 1000倍。在TR-FRET竞争测定中，参考化合物X以等价于对未突变的溴结构域的Kd的浓度使用，这确保未检测到突变的溴结构域的结合。
蛋白质产生：重组人溴结构域[(BRD2 (1-473) (Y113A)和(Y386A), BRD3 (1-435) (Y73A)和(Y348A)，BRD4 (1-477) (Y97A)和(Y390A)，和BRDT (1-397) (Y66A)和(Y309A)]在大肠杆菌细胞中表达(对于BRD2/3/4，在pET15b载体中，以及对于BRDT，在pET28a载体中)，在N-末端具有6-His标签。将His-标记的溴结构域粒状沉淀重悬于50 mMHEPES (pH7.5)、300 mM NaCl、10 mM咪唑和1 μl/ml蛋白酶抑制剂混合物中，使用超声处理从大肠杆菌细胞中提取并使用镍琼脂糖凝胶高效柱纯化，洗涤蛋白，然后用含有缓冲液50mM HEPES (pH7.5)、150mM NaCl、500mM 咪唑的0-500 mM咪唑的线性梯度经20个柱体积洗脱。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成最后纯化。将纯化的蛋白在-80℃下储存在20 mM HEPES pH 7.5和100mM NaCl中。通过肽质量指纹图谱确认蛋白质身份，并通过质谱法确认预测的分子量。
溴结构域 BRD2、3、4和T，BD1 + BD2突变体TR-FRET竞争测定的方案：
将所有测定组分溶解于由50mM HEPES pH7.4、50mM NaCl、5%甘油、1mM DTT和1mMCHAPS组成的测定缓冲液中。将参考化合物X在含有20nM单突变串联溴结构域蛋白的测定缓冲液中稀释至等价于对该溴结构域的2*Kd的浓度。将含有溴结构域和参考化合物X的溶液加入到Greiner 384孔黑色低体积微量滴定板中的测试化合物或DMSO载体（在该测定中使用最多0.5％DMSO）的剂量响应稀释液中，随后在室温下孵育30分钟。向所有孔中加入等体积的3nM抗-6*His铕螯合物，然后在室温下再孵育30分钟。使用Perkin Elmer多模板读数器，通过在λ337 nm激发供体荧光团，随后在50 μsec的延迟后，分别在λ615nm和λ665nm处测量供体和受体荧光团的发射，来检测TR-FRET。为了控制这些测定，在每个微量滴定板上包括每个未抑制的（DMSO载体）和抑制的(WO2011/054846A1的实施例11的10*IC50浓度)TR-FRET测定的16个重复。
然后应用以下形式的四参数曲线拟合：
y = a + (( b – a)/( 1 + ( 10 ^ x/10 ^ c ) ^ d )
其中‘a’是最小值，‘b’是Hill斜率，‘c’是pIC50以及‘d’是最大值。
除了实施例17、28、63、70、73、77和108之外，所有实施例均各自基本上如上所述在BRD4 BD1和BRD4 BD2 TR-FRET测定中进行了测试。本领域技术人员将认识到，用于功能活性的体外结合测定和基于细胞的测定易受到实验可变性的影响。因此，应理解，下面给出的pIC50值仅是示例性的。pIC50值以log10单位表示。
发现所有测试化合物在至少一种上述测定中具有≥4.0的pIC50。
发现实施例6、7、34、85、100-107、132、133、164、172、174、181-190和192-201在BRD4 BD2测定中具有≥ 4.0且< 6.0的pIC50。
发现所有其他测试化合物在BRD4 BD2测定中具有≥ 6.0的pIC50。
实施例26在上述BRD4 BD2 TR-FRET测定中具有7.8的平均pIC50 (n = 16)，以及在上述BRD4 BD1 TR-FRET测定中具有4.7的平均pIC50 (n = 16)。
实施例38在上述BRD4 BD2 TR-FRET测定中具有8的平均pIC50 (n = 2)，以及在上述BRD4 BD1 TR-FRET测定中具有4.7的平均pIC50 (n = 2)。
实施例54在上述BRD4 BD2 TR-FRET测定中具有7.8的平均pIC50 (n = 7)，以及在上述BRD4 BD1 TR-FRET测定中具有4.6的平均pIC50 (n = 9)。
相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性的计算
相对于BRD4 BD1，对BRD4 BD2的选择性如下计算：
选择性 = BRD4 BD2 pIC50 – BRD4 BD1 pIC50。
除了实施例101-107、132、174、183、185、187、188、192和194-198之外，发现所有测试化合物在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为≥ 1个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少10倍。
发现实施例1、2、4、5、8-16、18-27、29-33、35-41、43-62、64-69、72、74、76、79-84、86-99、109-131、134-158、160-163、165-171、173、175-180和202在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为≥ 2个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少100倍。
发现实施例26在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.1个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例38在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.3个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少100倍。
发现实施例54在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.2个对数单位，因此对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。

Claims (37)

1.式(I)化合物
Figure DEST_PATH_IMAGE002
或其盐
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R2为-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中各个杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代；或
R2为H、-CH3、任选被至多五个氟取代的C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR11R12、-(CH2)mC(O)NR11R12、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R13、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中杂芳基任选被一个或两个可以相同或不同的R14基团取代；
R3为苯基，所述苯基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R7基团取代；
R4为-C1-3烷基、-CH2OR6或-CH2F；
各个R5独立地为卤素、-C0-6烷基-R8、-O-C2-6烷基-R8、-CN 或-SO2C1-3烷基；
R6为-H或C1-3烷基；
各个R7独立地为-卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR10、-C0-3烷基-NR15R16、-C0-3烷基-CONR15R16、CN或-SO2R17；
R8为-H、-OR10a、-NR18R19或杂芳基；
各个R9独立地为卤素、C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR13、-C0-3烷基OR13、-C0-3烷基NR11R12、-NHCH2CH2OR13、-NHCO2R13、氧代、-C(O)R13、-C(O)OR13或-C(O)NR11R12；
R10a为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR11R12或-C2-3烷基OH；
R10为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基NR15R16或-C2-3烷基OH；
R11和R12各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
R13为-H或C1-4烷基；
各个R14独立地为卤素、C1-4烷基、环丙基、环丁基或-OR13；
R15和R16各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R15和R16可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
R17为-C1-3烷基或-NR15R16；
R18和R19各自独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C1-6烷基、环烷基、杂环基、-C2-3烷基NR13COC1-3烷基、C2-3烷基NR15R16 和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中所述-C1-6烷基和环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R18和R19可以与它们所连接的氮连接在一起形成4至7元杂环基，所述杂环基任选被独立地选自-C1-3烷基、-OH和F的一个或两个取代基取代；
m为选自2、3和4的整数；
p为选自2、3和4的整数；
n为选自0、1、2、3和4的整数；
并且其中
所述环烷基是具有3、4、5、6或7个成员原子的环烷基；
所述杂环基是含有4、5、6、7、8、9或10个环成员原子，包括一个杂原子并任选地含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子的单环或双环杂环基；
所述杂芳基是具有5或6个成员原子，包括1、2或3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子的单环或双环杂芳基，其中该基团的至少一部分是芳族的。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中式(I)化合物为式(IA)化合物：
Figure DEST_PATH_IMAGE004
其中R1、R2、R3和R4根据式(I)定义。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R1为甲基。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基且所述C3-7环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代。
5.根据权利要求4所述的化合物或其盐，其中R2为任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代的环丙基、环丁基或环己基。
6.根据权利要求5所述的化合物或其盐，其中R5为-C0-6烷基-R8。
7.根据权利要求6所述的化合物或其盐，其中R5选自甲基、-CH2OH、-OH和-CH2CH2吗啉基。
8.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中R2为-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，且各个杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代。
9.根据权利要求8所述的化合物或其盐，其中R2为-C0-4烷基-杂环基，且所述杂环基任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代。
10.根据权利要求9所述的化合物或其盐，其中-C0-4烷基-杂环基选自杂环基、-CH2CH2-杂环基和-CH2CH2CH2-杂环基。
11.根据权利要求8至10中任一项所述的化合物或其盐，其中所述杂环基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，所述基团任选被一个或两个可以相同或不同的R9基团取代。
12.根据权利要求11所述的化合物或其盐，其中所述杂环基任选被一个或两个R9基团取代，所述R9基团选自甲基、-C(O)CH3和氟。
13.根据权利要求12所述的化合物或其盐，其中所述任选被一个或两个R9基团取代的杂环基选自：
Figure DEST_PATH_IMAGE006
Figure DEST_PATH_IMAGE008
。
14.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2为-H、-CH3、任选被至多五个氟取代的C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mC(O)NR11R12、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R13、-(CH2)mNHCO2C(CH3)3或-(CH2)nC5-6杂芳基，且C5-6杂芳基任选被一个或两个可以相同或不同的R14基团取代。
15.根据权利要求14所述的化合物或其盐，其中R2为-H、-CH3、C2-6烷基、-C2-6烷基OR13、-C2-6烷基NR11R12或-(CH2)nC5-6杂芳基。
16.根据权利要求15所述的化合物或其盐，其中R2 为-H、甲基、乙基、丙基、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH(CH3)OH、-CH2CH2OCH3、-CH2CH2CH2OCH3、-CH2CH2N(CH3)2、-CH2CH2CH2N(CH3)2、-CH2CHF2或-CH2CH2吡啶基。
17.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R3为任选被-OCH3或-OCH2CH2OH取代的苯基。
18.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R4为甲基、-CH2F或-CH2OH。
19.化合物，其为
Figure DEST_PATH_IMAGE010
或其盐。
20.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐。
21.药物组合物，其包含如权利要求20中所限定的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
22.组合产品，其包含如权利要求20中所限定的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其他治疗活性剂。
23.如权利要求20中所限定的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗。
24.如权利要求20中所限定的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
25.用于根据权利要求24所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。
26.用于根据权利要求24所述用途的化合物，其中所述疾病或病症涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
27.用于根据权利要求24所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是病毒感染。
28.用于根据权利要求24所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是癌症。
29.用于根据权利要求24所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
30.如权利要求20中所限定的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
31.如权利要求20中所限定的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
32.根据权利要求31所述的用途，其中所述疾病或病症是急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。
33.根据权利要求31所述的用途，其中所述疾病或病症涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
34.根据权利要求31所述的用途，其中所述疾病或病症是病毒感染。
35.根据权利要求31所述的用途，其中所述疾病或病症是癌症。
36.根据权利要求31所述的用途，其中所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
37.根据权利要求31至36中任一项所述的用途，其中所述对象是人。
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Granted publication date: 20220225