KR102403176B1 - 브로모도메인 억제제로서의 피라졸 유도체 - Google Patents

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리 앤드류 해리슨
젬마 미셸 리위키
시몬 크리스토퍼 크랑코 루카스
알랙산더 쥐 프레스턴
조나단 토마스 씰
이안 데이비드 월
로버트 제이 왓슨
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Abstract

본 발명은 피라졸 유도체, 이러한 화합물을 포함하는 약제 조성물 및 다양한 질병의 치료에서의 이러한 화합물 또는 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

브로모도메인 억제제로서의 피라졸 유도체
발명의 분야
본 발명은 브로모도메인 억제제인 피라졸 유도체, 이러한 화합물을 포함하는 약제 조성물 및 다양한 질병 또는 질환, 예를 들어, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환, 바이러스 감염 및 암의 치료에서의 이러한 화합물 또는 조성물의 용도에 관한 것이다.
발명의 배경
진핵생물 유기체의 유전체는 세포의 핵 내에서 고도로 유기체화되어 있다. 듀플렉스 DNA의 긴 가닥은 히스톤 단백질(가장 일반적으로 히스톤 H2A, H2B, H3 및 H4의 두 개의 복사체 포함)의 십량체(octomer)에 둘러싸여 뉴클레오솜을 형성한다. 이후, 뉴클레오솜의 응집 및 폴딩에 의해 이러한 기본 단위가 추가로 압박되어 고도로 축합된 염색질 구조가 형성된다. 다수의 상이한 축합 상태가 가능하며, 이러한 구조의 견고함은 세포 주기 동안 변화되고, 세포 분열 과정 동안 가장 조밀하다. 염색질 구조는 유전자 전사를 조절하는데 중요한 역할을 하는데, 이는 고도로 축합된 염색질로부터 효율적으로 발생할 수 없다. 염색질 구조는 히스톤 단백질, 그 중에서도 특히 히스톤 H3 및 H4에 대한 일련의 번역후 변형에 의해, 그리고 가장 일반적으로 코어 뉴클레오솜 구조를 넘어 연장되는 히스톤 테일 내에서 조절된다. 이러한 변형은 아세틸화, 메틸화, 포스포릴화, 유비퀴티닐화 및 SUMO일화를 포함한다. 이러한 후성적 표시는 특수한 효소에 의해 쓰여지고 지워지는데, 이러한 효소는 히스톤 테일 내 특정 잔기 상에 태그를 배치함으로써 후성적 코드를 형성한 후, 염색질 구조의 유전자 특이적 조절 및 이에 의한 전사를 허용하도록 세포에 의해 해석된다.
히스톤 아세틸화는 유전자 전사의 활성화와 가장 일반적으로 관련되는데 그 이유는 변형이 정전학을 변화시킴으로써 DNA와 히스톤 십량체의 상호작용을 느슨하게 하기 때문이다. 이러한 물리적 변화 외에, 특정 단백질은 히스톤 내에서 아세틸화된 리신 잔기를 인지하고 이에 결합하여 후성적 코드를 판독한다. 브로모도메인은 보통 아세틸화된 리신 잔기에 결합하나 히스톤과 관련해서 배타적이지 않은 단백질내 별개의 소형(약 110개 아미노산) 도메인이다. 브로모도메인을 함유하는 것으로 공지된 약 50개 단백질의 패밀리가 존재하고, 이들은 세포 내에서 다수의 기능을 지닌다.
브로모도메인 함유 단백질의 BET 패밀리는 아주 근접한 두 개의 아세틸화된 리신 잔기에 결합할 수 있는 탠덤(tandem) 브로모도메인을 함유하여 상호작용의 특이성을 증가시키는 4개의 단백질(BRD2, BRD3, BRD4 및 BRDT)을 포함한다. 각 BET 단백질의 N-말단 단부로부터의 넘버링(numbering)으로, 탠덤 브로모도메인은 전형적으로 결합 도메인 1(BD1) 및 결합 도메인 2(BD2)(Chung et al, J Med. Chem,. 2011, 54, 3827-3838)로 라벨링된다.
Chan 등은 BET 브로모도메인 억제가 인간 단핵구에서 유전자-특이적 방식으로 신호전달하는 사이토카인-Jak-STAT에 대한 전사 반응을 억제하고, 이는 BET 억제가 사이토카인 활성 억제를 통해 부분적으로 염증을 감소시킴을 암시한다고 보고하고 있다.(Chan et al., Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297).
Klein 등은 브로모도메인 단백질 억제제 I-BET151가 류마티스 관절염 활액 섬유아세포에서 염증 유전자 및 기질 분해 효소의 발현을 억제하는데, 이는 류마티스 관절염에서 후성적 리더 단백질(reader protein)의 표적화에 치료적 잠재력을 제시한다고 보고하고 있다.(Klein et al., Ann. Rheum. Dis., 2014, 0:1-8).
Park-Min 등은 아세틸화된 히스톤에 결합함으로써 염색질 상태를 '판독하는'브로모 및 엑스트라-말단(BET) 단백질을 표적화하는 I-BET151가 파골세포형성(osteoclastogenesis)을 강력하게 억제한다고 보고하고 있다.(Park-Min et al. Nature Communications, 2014, 5, 5418).
PCT 특허 출원 PCT/EP2016/070519호, PCT/EP2016/072216호 및 PCT/EP2016/073532호는 각각 브로모도메인 억제제로서의 일련의 피리돈 유도체를 개시하고 있다.
발명의 개요
본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염에 관한 것이다:
Figure 112019099269087-pct00001
상기 식에서,
R1은 -C1-3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2는 -C0-3알킬-사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환되고; 또는
R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴 또는 -(CH2)pO-헤테로사이클릴이고, 여기서 각각의 헤테로사이클릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환되고; 또는
R2는 H, -CH3, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C2-6알킬, -C2-6알킬OR6, -C2-6알킬NR10aR11a, -(CH2)mSO2C1-3알킬, -(CH2)mSO2NR10R11, -(CH2)mC(O)NR10R11, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mNHCO2C1-4알킬, -(CH2)mNHC(O)C1-4알킬 또는 -(CH2)n헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고;
R3은 H, -C1-4알킬, 사이클로프로필, -CH2F, -C1-3알킬OR6 또는 -C1-3알킬CN이고;
R4는 페닐 또는 헤테로아릴 기이고, 여기서 각각은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고;
각각의 R5는 독립적으로 할로, -C0-6알킬-R8, -O-C2-6알킬-R8, -OCH2페닐, -CN 또는 -SO2C1-3알킬이고;
R6은 H 또는 -C1-4알킬이고;
각각의 R7은 독립적으로 옥소, 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6, -OC2-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -C0-3알킬-CONR10R11, -CN, -SO2-C1-3알킬, -SO2NR10R11 또는 -C1-4알킬에 의해 치환되거나 비치환된 -SO2페닐이고;
R8은 H, -OR6, -NR10R11 또는 헤테로아릴이고;
각각의 R9는 독립적으로 할로, -C1-4알킬, 사이클로프로필, 사이클로부틸, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH2CH2F, -OCH2CH2OR6, -C0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -NHCH2CH2OR6, -NHCO2C1-4알킬, 옥소, -C(O)R6, -C(O)OR6 또는 -C(O)NR10R11이고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되거나; R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 결합하여 1, 2 또는 3개의 불소 원자로 치환되거나 비치환된 -C1-3알킬, -C2-4알킬OH, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기에 의해 치환되거나 비치환된 4 내지 7원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
R10a 및 R11a는 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되고;
m은 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
p는 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이다.
본 발명의 화합물은, 특히 BD2 선택적인 브로모도메인 억제제인 것으로 나타났으며, 여러 질병 또는 질환, 예를 들어, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환, 예를 들어, 류마티스 관절염 및 암의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 추가로 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물을 사용하여 브로모도메인과 관련된 질병 또는 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
화학식(I)의 화합물 및 이의 염은 본원에서 "본 발명의 화합물"로서 지칭된다.
"BD2"는 단백질 BRD2, BRD3, BRD4 또는 BRDT의 BET 패밀리 중 어느 하나의 결합 도메인 2를 나타낸다.
"알킬"은 특정 수의 탄소 원자를 갖는 포화된 탄화수소 사슬을 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 용어 "C1-3알킬" 및 "C1-4알킬"은 각각 1 내지 3개 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다. 추가로, 용어 "C0-3알킬"은 0(즉, 결합) 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다. 대표적인 분지형 알킬 기는 1개, 2개, 또는 3개의 분지를 갖는다. 알킬 기는 사슬의 일부를 형성할 수 있고, 예를 들어, -C0-3알킬OR6은 R6 기에 연결된 0(즉, 결합) 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 사슬을 나타낸다. "알킬"은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, t-부틸, 펜틸 및 헥실을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"사이클로알킬"은 고리에 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 구성원 원자를 갖는 포화된 탄화수소 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 고리 또는 포화된 스피로-결합된 바이사이클릭 탄화수소 고리를 나타낸다. 사이클로알킬의 적합한 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵타닐, 스피로[3.3]헵타닐, 바이사이클로[2.2.1]헵타닐, 아다만틸, 바이사이클로[3.1.0]헥사닐 및 바이사이클로[2.2.2]옥타닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다. "C3-7사이클로알킬"은 고리에 3, 4, 5, 6 또는 7개의 구성원 원자를 갖는 포화된 탄화수소 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 고리 또는 포화된 스피로-결합된 바이사이클릭 탄화수소 고리를 나타낸다. C3-7사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵타닐 및 바이사이클로[3.1.0]헥사닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"할로"는 할로겐 라디칼, 예를 들어, 플루오로, 클로로, 브로모, 또는 아이오도를 나타낸다.
"헤테로아릴"은 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 포함하여, 5, 6, 8, 9, 10 또는 11개의 구성원 원자를 갖는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 기를 나타내고, 기의 적어도 한 부분은 방향족이다. 분자의 나머지에 대한 부착 지점은 어떠한 적합한 탄소 또는 질소 원자에 의해서일 수 있다. "헤테로아릴" 기의 예는 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피리미디닐, 트리아지닐, 벤조푸라닐, 이소벤조푸릴, 2,3-디하이드로벤조푸릴, 1,3-벤조디옥솔릴, 디하이드로벤조디옥시닐, 벤조티에닐, 벤즈아제피닐, 2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제피닐, 인돌리지닐, 인돌릴, 인돌리닐, 이소인돌릴, 디하이드로인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 디하이드로벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 디하이드로벤즈옥사졸릴, 벤즈티아졸릴, 벤조이소티아졸릴, 디하이드로벤조이소티아졸릴, 인다졸릴, 이미다조피리디닐, 피라졸로피리디닐, 피롤로피리디닐, 벤조트리아졸릴, 트리아졸로피리디닐, 퓨리닐, 퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 퀴나졸리닐, 1,5-나프티리디닐, 1,6-나프티리디닐, 1,7-나프티리디닐, 1,8-나프티리디닐, 및 프테리디닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"C5-6헤테로아릴"은 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 포함하여, 5 또는 6개의 구성원 원자를 갖는 모노사이클릭 방향족 기를 나타낸다. 분자의 나머지에 대한 부착 지점은 어떠한 적합한 탄소 또는 질소 원자에 의해서일 수 있다. "C5-6헤테로아릴" 기의 예는 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피리미디닐 및 트리아지닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"헤테로원자"는 질소, 황, 또는 산소 원자를 나타낸다.
"헤테로사이클릴"은 한 헤테로원자 및 임의로 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 추가의 헤테로원자를 포함하여, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 고리 구성원 원자를 함유하는 비방향족 헤테로사이클릭 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 고리 시스템을 나타낸다. "헤테로사이클릴" 기의 예는 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 피롤리디닐, 피롤리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 옥사졸리닐, 티아졸리닐, 테트라하이드로푸라닐, 디하이드로푸라닐, 1,3-디옥솔라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 디하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 1,3-디옥사닐, 1,4-디옥사닐, 1,3-옥사티올라닐, 1,3-옥사티아닐, 1,3-디티아닐, 1,4-옥사티올라닐, 1,4-옥사티아닐, 1,4-디티아닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 헥사하이드로-1H-1,4-디아제피닐, 아자바이사이클로[3.2.1]옥틸, 아자바이사이클로[3.3.1]노닐, 아자바이사이클로[4.3.0]노닐, 옥사바이사이클로[2.2.1]헵틸, 1,1-디옥시도테트라하이드로-2H-티오피라닐, 1,5,9-트리아자사이클로도데실, 3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, (1r,5s)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥사닐 및 (1r,5s)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"4 내지 7원 헤테로사이클릴"은 한 헤테로원자 및 임의로 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 추가의 헤테로원자를 포함하여, 4, 5, 6 또는 7개의 고리 구성원 원자를 함유하는 비방향족 헤테로사이클릭 고리 시스템을 나타낸다. "4 내지 7원 헤테로사이클릴" 기의 예는 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐 및 모르폴리닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"구성원 원자"는 사슬 또는 고리를 형성하는 원자 또는 원자들을 나타낸다. 하나 초과의 구성원 원자가 사슬에, 그리고 고리 내에 존재하는 경우, 각각의 구성원 원자는 사슬 또는 고리 내 인접하는 구성원 원자에 공유적으로 결합된다. 사슬 또는 고리에 부착된 치환기 그룹을 구성하는 원자는 사슬 또는 고리 내의 구성원 원자가 아니다.
기와 관련하여 "치환된"은 기 내 구성원 원자에 부착된 수소 원자가 대체되는 것을 나타낸다. 용어 "치환된"은 그러한 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따르고, 치환이 안정한 화합물(즉, 자발적으로 변형, 예컨대, 재배치, 고리화 또는 제거를 거치지 않는 화합물)을 형성한다는 암묵적인 조항을 포함하는 것으로 이해해야 한다. 특정 구체예에서, 단일 원자는 그러한 치환이 허용된 원자가에 따르는 한, 하나 초과의 치환기로 치환될 수 있다. 적합한 치환기는 치환되거나 임의로 치환되는 기 각각에 대해 본원에서 정의된다.
"약제학적으로 허용되는"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 합당한 유익성/위험성 비에 상응하는, 과도한 독성, 자극 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 사람 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및 투여 형태를 나타낸다.
"약제학적으로 허용되는 부형제"는 약제 조성물에 형태 또는 컨시스턴시(consistency)를 부여하는 것과 관련된 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 나타낸다. 각각의 부형제는 환자에게 투여시 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 효능을 실질적으로 감소시킬 상호작용이 회피되도록, 혼합될 때 약제 조성물의 다른 성분들과 상용성이어야 한다. 또한, 각각의 부형제는 물론 약제학적으로 허용되는, 예를 들어, 충분히 높은 순도여야 한다.
"rac"는 화학식(I)의 화합물의 라세미 혼합물을 나타낸다.
본 발명의 화합물은 고체 또는 액체 형태로 존재할 수 있다. 고체 상태에서, 본 발명의 화합물은 결정질 또는 비결정질 형태로, 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 결정질 형태로 존재하는 본 발명의 화합물의 경우, 당업자는 용매 분자가 결정화 동안 결정질 격자내로 혼입되는 경우, 약제학적으로 허용되는 용매화물이 형성될 수 있음을 인지할 것이다. 용매화물은 비수성 용매, 예컨대, 에탄올, 이소-프로필 알콜, 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세트산, 에탄올아민, 및 에틸 아세테이트를 포함할 수 있거나, 결정질 격자에 혼입되는 용매로서 물을 포함할 수 있다. 물이 결정질 격자에 혼입되는 용매인 용매화물은 전형적으로 "수화물"로서 언급된다. 수화물은 화학량론적 수화물 뿐만 아니라 다양한 양의 물을 함유하는 조성물을 포함한다. 본 발명은 모든 그러한 용매화물을 포함한다.
다양한 용매화물을 포함하는, 결정질 형태로 존재하는 본 발명의 특정 화합물은 다형성(즉, 상이한 결정질 구조로 발생하는 능력)을 나타낼 수 있는 것으로 추가로 인지될 것이다. 이들 상이한 결정질 형태는 전형적으로 "다형체(polymorph)"로서 알려져 있다. 본 발명은 그러한 다형체를 포함한다. 다형체는 동일한 화학 조성을 갖지만, 패킹, 기하학적 배열 및 결정질 고체 상태의 그 밖의 기술적 성질(descriptive property)이 다르다. 그러므로, 다형체는 상이한 물리적 성질, 예컨대, 형상, 밀도, 경도, 변형성, 안정성 및 용해 성질을 가질 수 있다. 다형체는 전형적으로 식별을 위해 사용될 수 있는, 상이한 융점, IR 스펙트럼, 및 X-선 분말 회절 패턴을 나타낸다. 상이한 다형체는, 예를 들어, 화합물의 제조에 사용되는 반응 조건 또는 시약을 변경하거나 조절함으로써 생성될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 예를 들어, 온도, 압력 또는 용매의 변경이 다형체를 야기할 수 있다. 또한, 하나의 다형체는 특정 조건 하에서 다른 다형체로 자발적으로 변환될 수 있다. 화학식(I)의 화합물의 다형체 형태는 X-선 분말 회절(XRPD) 패턴, 적외선(IR) 스펙트럼, Raman 스펙트럼, 시차 주사 열량측정법(DSC), 열중량 분석(TGA) 및 고체상 핵자기 공명(SSNMR)을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아닌 다수의 통상적인 분석 기술을 사용하여 특징화되고 차별화될 수 있다.
화학식(I)에 따른 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심(키랄 중심으로서 또한 언급됨)을 함유할 수 있고, 이에 따라 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 또는 다른 입체이성질체 형태, 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 키랄 중심, 예컨대, 키랄 탄소 원자는 또한 알킬 기와 같은 치환기에 존재할 수 있다. 화학식(I)에, 또는 본원에서 예시되는 어떠한 화학 구조에 존재하는 키랄 중심의 입체화학이 명시되지 않은 경우, 구조는 어떠한 입체이성질체 및 이들의 모든 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 하나 이상의 키랄 중심을 함유하는 화학식(I)에 따른 화합물은 라세미 혼합물, 거울상이성질체적으로 풍부한 혼합물, 또는 거울상이성질체적으로-순수한 개별 입체이성질체로서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 실질적으로 다른 이성질체가 없는 것과 같은 분리된 개별 이성질체(즉, 순수)이든, 또는 혼합물(즉, 라세미 혼합물)이든 간에 화학식(I)의 화합물의 모든 이성질체를 포함한다. 실질적으로 다른 이성질체가 없는 것과 같은 분리된 개별 이성질체(즉, 순수)는 다른 이성질체가 10% 미만, 특히 약 1% 미만, 예를 들어, 약 0.1% 미만으로 존재하도록 분리될 수 있다.
단일 입체중심을 지닌 라세미 화합물은 입체화학(단일 결합)이 없거나 부호(+/-) 또는 rac를 갖는 것으로 표시된다. 상대 입체화학이 알려져 있는 둘 이상의 입체중심을 갖는 라세미 화합물은 구조에 묘사되는 바와 같이 시스 또는 트랜스로 표시된다. 절대 입체화학은 알려져 있지 않지만 상대 입체화학은 알려져 있는 분해된 단일 거울상이성질체는 적합한 상대 입체화학이 묘사되는 (R* 또는 S*)로 언급된다.
부분입체이성질체가 표현되고, 상대 입체화학만 언급되는 경우, 진한(bold) 또는 해시드 솔리드(hashed solid) 결합 부호(
Figure 112019099269087-pct00002
)가 사용된다. 절대 입체화학이 알려져 있고, 화합물이 단일 거울상이성질체인 경우, 진한 또는 해시드 Ÿ‡지 부호(
Figure 112019099269087-pct00003
)가 경우에 따라 사용된다.
하나 이상의 비대칭 중심을 함유하는 화학식(I)에 따른 화합물의 개별 입체이성질체는 당업자에게 공지되어 있는 방법에 의해 분해될 수 있다. 예를 들어, 그러한 분해는 (1) 부분입체이성질체 염, 착물 또는 그 밖의 유도체의 형성에 의해; (2) 입체이성질체-특이적 시약과의 선택적 반응에 의해, 예를 들어, 효소적 산화 또는 환원에 의해; 또는 (3) 키랄 환경에서, 예를 들어, 결합된 키랄 리간드를 갖는 실리카와 같은 키랄 지지체 상에서 또는 키랄 용매의 존재 하에서 가스-액체 또는 액체 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있다. 요망되는 입체이성질체가 상기 기술된 분리 절차 중 어느 하나에 의해 또 다른 화학적 실체로 변환되는 경우, 요망되는 형태를 유리시키기 위해 추가 단계가 요구되는 것이 이해될 것이다. 대안적으로, 특정 입체이성질체는 광학 활성 시약, 기질, 촉매 또는 용매를 사용하는 비대칭 합성에 의해, 또는 하나의 거울상이성질체를 비대칭 변형에 의해 다른 것으로 변환시킴으로써 합성될 수 있다.
화학식(I)의 화합물의 경우, 호변이성질체(tautomer)가 관찰될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 호변이성질체의 생물학적 활성과 관련된 어떠한 언급은 호변이성질체 둘 모두를 포함하는 것으로 간주되어야 한다.
본원에서 화학식(I)의 화합물 및 이의 염에 대한 언급은 화학식(I)의 화합물을 유리 염기로서, 또는 이의 염으로서, 예를 들어 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 한 구체예에서, 본 발명은 유리 염기로서의 화학식(I)의 화합물에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 및 이의 염에 관한 것이다. 추가의 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
화학식(I)의 화합물의 염은 약제에서의 이들의 잠재적인 용도로 인해 바람직하게는 약제학적으로 허용된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염은 산 부가염 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염에 대한 검토를 위해, 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)]을 참조한다. 전형적으로, 약제학적으로 허용되는 염은 적합한 경우 요망되는 산 또는 염기를 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 생성된 염은 용액으로부터 침전될 수 있고 여과에 의해 수집되거나 용매의 증발에 의해 회수될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 산 부가염은, 화학식(I)의 화합물을 임의로 유기 용매와 같은 적합한 용매 중에서 적합한 무기산 또는 유기산(예컨대, 브롬화수소산, 염산, 황산, 질산, 인산, 석신산, 말레산, 아세트산, 프로피온산, 푸마르산, 시트르산, 타르타르산, 락트산, 벤조산, 살리실산, 아스파르트산, p-톨루엔설폰산, 벤젠설폰산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 나프탈렌설폰산, 예컨대, 2-나프탈렌설폰산, 또는 헥산산)과 반응시켜 대개, 예를 들어, 결정화 및 여과에 의해, 또는 증발에 이어 분쇄에 의해 분리되는 염을 제공함으로써 형성될 수 있다. 화학식(I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 산 부가염은, 예를 들어, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 석시네이트, 말레에이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 푸마레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 글루타메이트, 아스파르테이트, p-톨루엔설포네이트, 벤젠설포네이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 나프탈렌설포네이트(예컨대, 2-나프탈렌설포네이트) 또는 헥사노에이트 염일 수 있거나, 이들을 포함할 수 있다.
예를 들어, 화학식(I)의 화합물의 분리를 위해 그 밖의 비-약제학적으로 허용되는 염, 예를 들어, 포르메이트 또는 트리플루오로아세테이트가 사용될 수 있고, 이들은 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명은 그 범위 내에 화학식(I)의 화합물의 염의 모든 가능한 화학량론적 및 비-화학량론적 형태를 포함한다.
상기로부터 화학식(I)의 화합물 및 이의 염의 용매화물, 이성질체 및 다형체 형태가 본 발명의 범위 내에 포함되는 것이 이해될 것이다.
발명의 진술
제1 양태에서, 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염이 제공된다:
Figure 112019099269087-pct00004
상기 식에서,
R1은 -C1-3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2는 -C0-3알킬-사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환되고; 또는
R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴 또는 -(CH2)pO-헤테로사이클릴이고, 여기서 각각의 헤테로사이클릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환되고; 또는
R2는 H, -CH3, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C2-6알킬, -C2-6알킬OR6, -C2-6알킬NR10aR11a, -(CH2)mSO2C1-3알킬, -(CH2)mSO2NR10R11, -(CH2)mC(O)NR10R11, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mNHCO2C1-4알킬, -(CH2)mNHC(O)C1-4알킬 또는 -(CH2)n헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고;
R3은 H, -C1-4알킬, 사이클로프로필, -CH2F, -C1-3알킬OR6 또는 -C1-3알킬CN이고;
R4는 페닐 또는 헤테로아릴 기이고, 여기서 각각은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고;
각각의 R5는 독립적으로 할로, -C0-6알킬-R8, -O-C2-6알킬-R8, -O-CH2페닐, -CN 또는 -SO2C1-3알킬이고;
R6은 H 또는 -C1-4알킬이고;
각각의 R7은 독립적으로 옥소, 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6, -OC2-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -C0-3알킬-CONR10R11, -CN, -SO2-C1-3알킬, -SO2NR10R11 또는 -C1-4알킬에 의해 치환되거나 비치환된 -SO2페닐이고;
R8은 H, -OR6, -NR10R11 또는 헤테로아릴이고;
각각의 R9는 독립적으로 할로, -C1-4알킬, 사이클로프로필, 사이클로부틸, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH2CH2F, -OCH2CH2OR6, -C0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -NHCH2CH2OR6, -NHCO2C1-4알킬, 옥소, -C(O)R6, -C(O)OR6 또는 -C(O)NR10R11이고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되거나; R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 결합하여 1, 2 또는 3개의 불소 원자로 치환된 -C1-3알킬, -C2-4알킬OH, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기에 의해 치환되거나 비치환된 4 내지 7원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
R10a 및 R11a는 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되고;
m은 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
p는 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이다.
한 구체예에서,
R1이 -C1-3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2가 -C0-3알킬-사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환되고; 또는
R2가 -C0-4알킬-헤테로사이클릴 또는 -(CH2)pO-헤테로사이클릴이고, 여기서 각각의 헤테로사이클릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환되고; 또는
R2가 H, -CH3, 5개 이하의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C2-6알킬, -C2-6알킬OR6, -C2-6알킬NR10aR11a, -(CH2)mSO2C1-3알킬, -(CH2)mSO2NR10R11, -(CH2)mC(O)NR10R11, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mNHCO2C1-4알킬, -(CH2)mNHC(O)C1-4알킬 또는 -(CH2)n헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고;
R3이 -H, -C1-4알킬, 사이클로프로필, -CH2F, -C1-3알킬OR6 또는 -C1-3알킬CN이고;
R4가 페닐 또는 헤테로아릴 기이고, 여기서 각각은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고;
각각의 R5가 독립적으로 할로, -C0-6알킬-R8, -O-C2-6알킬-R8, -CN 또는 -SO2C1-3알킬이고;
R6이 -H 또는 -C1-4알킬이고;
각각의 R7이 독립적으로 옥소, 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6, -OC0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -C0-3알킬-CONR10R11, -CN, -SO2-C1-3알킬 또는 -SO2NR10R11이고;
R8이 -H, -OR6, -NR10R11 또는 헤테로아릴이고;
각각의 R9가 독립적으로 할로, -C1-4알킬, 사이클로프로필, 사이클로부틸, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH2CH2F, -OCH2CH2OR6, -C0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -NHCH2CH2OR6, -NHCO2R6, 옥소, -C(O)R6, -C(O)OR6 또는 -C(O)NR10R11이고;
R10 및 R11이 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되거나; R10 및 R11이 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 결합하여 3개 이하의 불소 원자로 치환되거나 비치환된 -C1-3알킬, -C2-4알킬OH, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기에 의해 치환되거나 비치환된 4 내지 7원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
R10a 및 R11a가 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되고;
m이 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
n이 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
p가 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수인 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염이 제공된다.
한 구체예에서, R1은 메틸이다.
한 구체예에서, R2는 -C0-3알킬-사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환된다. 한 구체예에서, R2는 -C0-3알킬-C3-7사이클로알킬 기이고, 여기서 C3-7사이클로알킬 기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실 또는 바이사이클로[3.1.0]헥사닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 기들은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환된다. 다른 구체예에서, R2는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환된 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실 또는 바이사이클로[3.1.0]헥사닐이다. 다른 구체예에서, R2는 메틸, 플루오로 및 -OH로부터 선택되는 하나의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환된 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실 또는 바이사이클로[3.1.0]헥사닐이다. 특정 구체예에서, R2는 하나의 메틸 기로 치환되거나 비치환된 사이클로프로필이다. 다른 특정 구체예에서, R2는 OH 기에 의해 치환되거나 비치환된 사이클로헥실 기이다. 다른 구체예에서, R2는 메톡시 기에 의해 치환되거나 비치환된 사이클로헥실 기이다.
한 구체예에서, R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴 또는 -(CH2)pO-헤테로사이클릴이고, 여기서 각각의 헤테로사이클릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환된다. 다른 구체예에서, R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환된다. 다른 구체예에서, R2는 -헤테로사이클릴, -CH2CH2-헤테로사이클릴 또는 -CH2CH2CH2-헤테로사이클릴인 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이다. 다른 구체예에서, R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 모르폴리닐, 피페리디닐, 피페라지닐, (1r,5s)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥사닐 및 (1r,5s)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐로부터 선택되며, 상기 기들은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환된다. 다른 구체예에서, R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 메틸, -C(O)CH3 및 플루오로로부터 선택되는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환된 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 모르폴리닐, 피페리디닐, 피페라지닐, (1r,5s)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥사닐 및 (1r,5s)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐로부터 선택된다. 추가 구체예에서, R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이고, 여기서 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴은 하기로부터 선택된다:
Figure 112019099269087-pct00005
다른 구체예에서, R2는 H, -CH3, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 C2-6알킬, -C2-6알킬OR6, -C2-6알킬NR10R11, -(CH2)mSO2C1-3알킬, -(CH2)mSO2NR10R11, -(CH2)mC(O)NR10R11, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mNHCO2C1-4알킬 -(CH2)mNHC(O)C1-4알킬 또는 -(CH2)n헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환된다.
다른 구체예에서, R2는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 부틸, -CH2CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH2OR6, -CH2CH2CH2OR6, -CH2CH(CH3)OR6, -CH2CH2CH(CH3)OR6, -CH2CH2CH(CH3)NR10R11, -CH2CH2CH2NR10R11, -(CH2)mSO2CH3, -(CH2)mC(O)NHCH3, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mCF3 및 -(CH2)mNHCO2C(CH3)3로부터 선택된다.
다른 구체예에서, R2는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 부틸, -CH2CH2CH(CH3)2 및 -CH2CH(CH3)2로부터 선택되는 -C1-6알킬이다. 다른 구체예에서, R2는 -CH2CH2OR6, -CH2CH2CH2OR6, -CH2CH(CH3)OR6 및 -CH2CH2CH(CH3)OR6로부터 선택되는 -C1-6알킬OR6이다. 다른 구체예에서, R2는 -CH2CH2CH(CH3)NR10R11 및 -CH2CH2CH2NR10R11로부터 선택되는 -C1-6알킬NR10R11이다. 다른 구체예에서, R2는 -(CH2)mSO2CH3이다. 다른 구체예에서, R2는 -(CH2)mC(O)NHCH3이다. 다른 구체예에서, R2는 -(CH2)mCN이다. 다른 구체예에서, R2는 -(CH2)mCO2R6이다. 다른 구체예에서, R2는 -(CH2)mCF3이다. 다른 구체예에서, R2는 -(CH2)mNHCO2C(CH3)3이다.
한 구체예에서, R2는 -(CH2)n헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환된다. 추가 구체예에서, R2는 -(CH2)nC5-6헤테로아릴이고, 여기서 C5-6헤테로아릴은 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 트리아졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 이속사졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐 및 피리미디닐로부터 선택되며, 상기 기들은 할로, C1-4알킬(예를 들어, 메틸) 및 -C0-3알킬OR6로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7 치환기에 의해 치환되거나 비치된다. 다른 구체예에서, R2가 -(CH2)nC5-6헤테로아릴이고, 여기서 C5-6헤테로아릴이 C1-4알킬 또는 -C0-3알킬OR6에 의해 치환되거나 비치환된 피라졸릴인 화학식(I)의 화합물이 제공된다. 특정 구체예에서, R2가 -(CH2)nC5-6헤테로아릴이고, 여기서 치환되거나 비치환된 C5-6헤테로아릴 기가 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화학식(I)의 화합물이 제공된다:
Figure 112019099269087-pct00006
상기 식에서, *는 부착 지점을 나타낸다.
한 구체예에서, R3은 H, 메틸, 에틸, -CH2F, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2OMe 또는 -CH2CN이다. 한 구체예에서, R3은 H, 메틸, 에틸 또는 -CH2OH이다.
한 구체예에서, R4는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환된 페닐이다. 다른 구체예에서, R4는 비치환된 페닐이다. 다른 구체예에서, R4는 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6, -OC2-3알킬OR6 및 -CN로부터 선택되는 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환된 페닐이다. 다른 구체예에서, R4는 할로, -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6 및 -CN로부터 선택되는 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환된 페닐이다. 다른 구체예에서, R4는 플루오로, 클로로, 메틸, 시아노 및 메톡시로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 R7 기에 의해 치환된 페닐이다.
다른 구체예에서, R4는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환된 피리딜인 헤테로아릴 기이다. 다른 구체예에서, R4는 비치환된 피리딜인 헤테로아릴 기이다.
다른 구체예에서, R4는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환된 인돌릴(예를 들어, 1H-인돌-4-일 또는 1H-인돌-5-일)인 헤테로아릴 기이다. 다른 구체예에서, R4는 1H-인돌-4-일인 헤테로아릴 기이다.
다른 구체예에서, R4는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환된 피롤로피리디닐(예를 들어, 1H-피롤로[2,3,b]피리디닐 또는 1H-피롤로[2,3,c]피리디닐))인 헤테로아릴 기이다. 다른 구체예에서, R4는 비치환된 피롤로피리디닐인 헤테로아릴 기이다.
한 구체예에서, 각각의 R5는 독립적으로 할로 또는 -C0-6알킬-R8이고, 여기서 R8은 H, OR6(예를 들어, OH) 또는 NR10R11(예를 들어, NH2)이다.
한 구체예에서, R6은 H, 메틸, 에틸 또는 t-부틸이다.
한 구체예에서, 각각의 R7은 독립적으로 옥소, 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -C0-3알킬-CONR10R11, -CN, -SO2-C1-3알킬 또는 -SO2NR10R11이다. 다른 구체예에서, 각각의 R7은 독립적으로 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6 또는 CN이다.
한 구체예에서, 각각의 R7은 독립적으로 할로, -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6 또는 -CN이다.
한 구체예에서, R8은 H, -OH 또는 메톡시이다.
한 구체예에서, 각각의 R9는 독립적으로 할로, C1-4알킬(예를 들어, 메틸), -C0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, 옥소, 또는 -C(O)R6(예를 들어, C(O)CH3)이다.
한 구체예에서, m은 2 또는 3이다.
한 구체예에서, n은 0, 1 또는 2이다. 추가 구체예에서, n은 0이다. 또한 추가 구체예에서, n은 2이다.
한 구체예에서, p는 2 또는 3이다.
본 발명은 상기에서 기술된 치환기 그룹의 모든 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 화합물은 실시예 1 내지 261의 화합물 및 이들의 염을 포함한다.
본 발명의 화합물은 실시예 1 내지 138의 화합물 및 이들의 염을 포함한다.
한 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
N 5-((1r,4S)-4-하이드록시사이클로헥실)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드; 및
N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드 또는 이들의 염으로부터 선택된다.
한 구체예에서,
Figure 112019099269087-pct00007
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
한 구체예에서,
Figure 112019099269087-pct00008
이 제공된다.
한 구체예에서,
Figure 112019099269087-pct00009
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
한 구체예에서,
Figure 112019099269087-pct00010
이 제공된다.
다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-((S)-1-(4-클로로페닐)에틸)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
(S)-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-N 5-(1H-피라졸-4-일)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
1-((S)-1-(4-클로로페닐)에틸)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
1-((S)-1-(3-클로로페닐)에틸)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드; 및
N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐프로필)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드 또는 이들의 염으로부터 선택된다.
본 발명의 제2 양태에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제 조성물이 제공된다.
본 발명의 제3 양태에서, 치료, 특히 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 제4 양태에서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 제5 양태에서, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
본 발명의 화합물은 공지된 BET 억제제에 비해 개선된 프로파일을 가질 수 있다(효능, 선택성 및/또는 개발성과 같은 특성을 포함함). 본 발명의 특정 화합물은 그러한 특성의 유리한 조합을 가질 수 있다.
용도의 진술
화학식(I)의 화합물 및 이의 염은 브로모도메인 억제제이고, 이에 따라 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 잠재적 유용성을 갖는 것으로 여겨진다.
브로모도메인 억제제는 전신 또는 조직 염증, 감염 또는 저산소증에 대한 염증 반응, 세포 활성화 및 증식, 지질 대사, 섬유증과 관련된 다양한 질병 또는 질환의 치료 및 바이러스 감염의 예방 및 치료에 유용한 것으로 여겨진다.
브로모도메인 억제제는 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 골관절염, 급성 통풍, 건선, 전신홍반루푸스, 다발성경화증, 염증성 창자병(크론병 및 궤양 대장염), 천식, 만성 폐쇄 기도병, 폐렴, 심근염, 심장막염, 근육염, 습진, 피부염(아토피성 피부염 포함), 탈모증, 백반증, 수포성 피부 질환, 신장염, 맥관염, 고콜레스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 알츠하이머병, 쇼그렌 증후군, 타액선염, 중심성 망막정맥폐쇄, 분지 망막정맥폐쇄, 어바인-가스 증후군(백내장후 및 수술후), 망막색소변성증, 평면부염, 산탁맥락망막병증, 망막앞막, 낭포황반부종, 중심와부근 모세혈관확장증, 견인성 황반변증, 유리체 황반견인 증후군, 망막박리, 시신경망막염, 특발성 황반부종, 망막염, 안구 건조(건성 각결막염), 봄철 각결막염, 아토피성 각결막염, 포도막염(예컨대, 앞포도막염, 전체포도막염, 후포도막염, 포도막염 관련 황반부종), 공막염, 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 나이 관련 황반 이영양증, 간염, 췌장염, 원발쓸개관간경화증, 경화쓸개관염, 급성 알콜 간염, 만성 알콜 간염, 알콜성 지방간염, 비알콜성 지방간염(NASH), 경화증, Childs-Pugh 경화증, 자가면역 간염, 전격 간염, 만성 바이러스 간염, 알콜 간질환, 전신 경화증, 간질성 폐질환과 관련된 전신 경화증, 사르코이드증, 신경사르코이드증, 애디슨병, 뇌하수체염, 갑상샘염, 타입 I 당뇨병, 타입 II 당뇨병, 거세포 동맥염, 루푸스 신장염을 포함하는 신장염, 사구체신염과 같은 기관 관련 맥관염, 거세포 동맥염을 포함하는 맥관염, 베게너 육아종, 결절다발동맥염, 베체트병, 가와사키병, 타카야수 동맥염, 괴저성 농피증, 기관 침범을 동반한 혈관염, 이식 기관의 급성 거부반응 및 전신 경화증과 같은 광범위한 범위의 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
한 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 고콜레스테롤혈증, 죽상동맥경화증 또는 알츠하이머병과 같은 APO-A1의 조절을 통해 매개되는 지질 대사의 장애이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 호흡기 장애, 예컨대, 천식 또는 만성 폐쇄 기도병이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 류마티스 관절염, 골관절염, 급성 통풍, 건선, 전신홍반루푸스, 다발성경화증, 또는 염증성 창자병(크론병 또는 궤양대장염)과 같은 전신 염증 질병이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 다발성 경화증이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 타입 I 당뇨병이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 류마티스 관절염이다.
브로모도메인 억제제는 우울증 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 수반하는 질병 또는 질환, 예컨대, 패혈증, 급성 패혈증, 패혈증 증후군, 패혈성 쇼크, 내독소혈증, 전신염증반응증후군(SIRS), 다발성 장기 기능이상 증후군, 독소충격증후군, 급성 폐 손상, ARDS(성인 호흡곤란증후군), 급성 신부전, 전격간염, 화상, 급성 췌장염, 수술후 증후군, 사르코이드증, 헤르크스하이머 반응, 뇌염, 척수염, 수막염, 말라리아, 및 인플루엔자, 대상포진, 단순 포진 및 코로나바이러스와 같은 바이러스 감염과 관련된 SIRS의 치료에 유용할 수 있다. 한 구체예에서, 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 수반하는 질병 또는 질환은 급성 패혈증이다.
브로모도메인 억제제는 심근경색증, 뇌혈관 허혈(뇌졸중), 급성 관동맥 증후군, 신장 재관류 손상, 기관 이식, 관상동맥 우회술, 심폐우회술, 폐, 신장, 간, 위창자 또는 말초 사지 색전증과 같은 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 심혈관 질환, 예컨대, 관상 동맥 질환(예를 들어, 협심증 또는 심근경색), 폐 동맥 고혈압, 뇌혈관 허혈(뇌졸중), 고혈압성 심장병, 류마티스성 심장 질환, 심근병증, 심방세동, 선천성 심장 질환, 심내막염, 대동맥 동맥류 또는 말초 동맥 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 특발폐섬유증, 폐섬유증, 낭성섬유증, 진행성 광범위 섬유증, 신장 섬유증, 간 섬유증, 간 경변증, 비알콜성 지방간염(NASH), 비알콜성 지방간 질환(NAFLD), 외상후 협착, 켈로이드 흉터 형성, 공피증(국소피부경화증(morphea) 및 전신 경화증 포함), 심장 섬유증, 심방 섬유증, 심내막심근 섬유증, 진구성 심근경색증, 관절섬유화, 뒤퓌트랑 구축, 종격, 골수섬유증, 페이로니병, 신성 전신 섬유증, 후복막 섬유증 및 유착관절낭염과 같은 섬유증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 바이러스 감염, 예컨대, 단순 포진 감염 및 재활성화, 입술 발진, 대상 포진 감염 및 재활성화, 수두, 띠헤르페스, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 자궁 신생물, 급성 호흡기병을 포함하는 아데노바이러스 감염, 우두 또는 천연두와 같은 폭스바이러스 감염, 또는 아프리카 돼지열 바이러스의 치료에 유용할 수 있다. 한 구체예에서, 바이러스 감염은 피부 또는 자궁 상피의 HPV 감염이다. 또 다른 구체예에서, 바이러스 감염은 잠재적 HIV 감염이다.
브로모도메인 억제제는 매우 다양한 골 질환, 예컨대, 골다공증, 골감소증, 골관절염 및 강직성 척추염의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 혈액 암(예컨대, 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종), 상피 암(폐, 유방 또는 결장 암종을 포함), 정중선 암종, 또는 중간엽, 간, 신장 또는 신경학적 종양을 포함하는 암의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 뇌종양(신경 교종), 아교모세포종, 바나얀-조나나(Bannayan-Zonana) 증후군, 코웬(Cowden)병, 레미트-두크로스(Lhermitte-Duclos)병, 유방암, 염증성 유방암, 결장직장암, 윌름(Wilm) 종양, 유잉(Ewing) 육종, 횡문근 육종, 상의세포종, 수모세포종, 결장암, 두경부암, 신장암, 폐암, 간암, 흑색종, 편평 세포 암종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종암, 골육종, 뼈의 거대 세포 종양, 갑상선암, 림프아구성 T-세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 털세포 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 호중구성 백혈병, 급성 림프아구성 T-세포 백혈병, 형질 세포종, 면역아세포 대세포 백혈병, 맨틀 세포 백혈병, 다발성 골수종, 거대아구성(megakaryoblastic) 백혈병, 급성 거핵 세포성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 혼합 계통 백혈병, 적백혈병, 악성 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프아구성 T-세포 림프종, 버킷 림프종, 난포 림프종, 신경 모세포종, 방광암, 요로상피세포암, 외음부암, 자궁 경부암, 자궁 내막암, 신장암, 중피종, 식도암, 타액선암, 간세포암, 위암, 비인두암, 구강암, 입암(cancer of the mouth), GIST(위장관 기질 종양), NUT-중심선 암종 및 고환암으로부터 선택된 하나 이상의 암의 치료에 유용할 수 있다.
한 구체예에서, 암은 백혈병, 예를 들어, 급성 단구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 및 혼합 계통 백혈병(MLL)으로부터 선택된 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 암은 NUT-중심선 암종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 다발성 골수종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 폐암, 예컨대, 소세포 폐암(SCLC)이다. 또 다른 구체예에서, 암은 신경모세포종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 버킷 림프종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 자궁 경부암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 식도암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 난소암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 유방암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 결장직장암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 전립선암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 난치성 전립선암이다.
브로모도메인 억제제는 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병, 예컨대, 패혈증, 화상, 췌장염, 주요 외상, 출혈 및 허혈의 치료에 유용할 수 있다. 이러한 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 급성 폐 손상, ARDS, 급성 신장, 간, 심장이나 위장 손상 및 사망의 발생을 포함하는 SIRS, 쇼크 발생, 다발성 장기 기능이상 증후군의 발병을 감소시키기 위해 진단 시점에 투여될 것이다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 패혈증, 출혈, 광범위한 조직 손상, SIRS 또는 MODS(다발성 장기 기능이상 증후군)의 고 위험과 관련된 외과적 또는 그 밖의 처치 전에 투여될 것이다. 특정 구체예에서, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환은 패혈증, 패혈증 증후군, 패혈성 쇼크 및 내독소혈증(endotoxaemia)이다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 급성 또는 만성 췌장염의 치료를 위해 처방된다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인은 화상의 치료를 위해 처방된다.
따라서, 본 발명은 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 한 구체예에서, 치료에 사용하기 위한 N 5 -((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3 -메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 한 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 한 구체예에서, 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 심혈관 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 섬유증 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 뼈 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 암의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 추가의 구체예에서, 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
또한, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 한 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 한 구체예에서, 류마티스 관절염의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 심혈관 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 섬유증 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 바이러스 감염의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 암의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 추가의 구체예에서, 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
또한, 치료를 필요로 하는 대상체에서 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 한 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 한 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 류마티스 관절염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 질병 또는 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 허혈-재관류 손상과 관련된 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 심혈관 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 섬유증 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 추가의 구체예에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
적합하게는, 이러한 치료를 필요로 하는 대상체는 포유동물, 특히 인간이다.
본 발명은 브로모도메인 함유 단백질을 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하여, 브로모도메인 함유 단백질을 억제시키는 방법을 추가로 제공한다.
본원에서 사용되는 특정 질병 또는 질환의 "치료"에 대한 언급은 그러한 질병 또는 질환의 방지 또는 예방을 포함한다.
약제 조성물/투여 경로/투여량
조성물
치료에 사용하기 위해, 화학식(I)의 화합물 뿐만 아니라 이의 약제학적으로 허용되는 염이 미가공 화학물질로서 투여될 수 있는 것이 가능하기는 하지만, 활성 성분을 약제 조성물로서 제공하는 것이 일반적이다. 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 일반적으로, 그러나 비필수적으로, 환자에게 투여하기 전에 약제 조성물로 제형화될 것이다. 따라서, 또 다른 양태에서, 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제 조성물이 제공된다. 한 구체예에서, N 5 -((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3 -메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제가 제공된다. 화학식(I)의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 염은 상기 기술된 바와 같다. 부형제(들)은 조성물의 다른 성분들과 상용성이고, 이의 수혜자에 대해 유해하지 않다는 측면에서 허용가능해야 한다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 또한 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합시키는 것을 포함하여 약제 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물은, 예를 들어, 주위 온도 및 대기압에서 혼합에 의해 제조될 수 있다. 약제 조성물은 본원에 기술된 질환 중 어느 하나를 치료하는데 사용될 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제 조성물에 관한 것이다.
화학식(I)의 화합물은 약제 조성물에 사용하기 위한 것이므로, 이들은 각각 바람직하게는 실질적으로 순수한 형태로, 예를 들어, 85% 이상의 순도, 특히 98% 이상의 순도(중량 기준의 경우 중량%)로 제공되는 것으로 용이하게 이해될 것이다.
약제 조성물은 단위 용량(unit dose) 당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량 형태로 제시될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 활성 성분의 1일 용량 또는 서브 용량(sub-dose), 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 것들이다. 따라서, 그러한 단위 용량은 1일 1회 초과로 투여될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 본원에서 상기 언급된 바와 같이, 활성 성분의 1일 용량 또는 서브 용량(1일 1회 초과의 투여를 위해), 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 것들이다.
약제 조성물은 어떠한 적절한 경로, 예를 들어, 경구(구강 또는 설하 포함), 직장, 흡입, 비강내, 국소(구강, 설하 또는 경피 포함), 안구(국소, 안구내, 결막하, 공막상, 또는 테논하(sub-Tenon) 포함), 질 또는 비경구(피하, 근육내, 정맥내 또는 피내 포함) 경로에 의한 투여를 위해 구성될 수 있다. 그러한 조성물은 약학 분야에 알려진 어떠한 방법에 의해, 예를 들어, 활성 성분을 담체(들) 또는 부형제(들)와 회합시킴으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 약제 조성물은, 안전하고 효과적인 양의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 추출될 수 있고, 이후 환자에게, 예컨대, 분말 또는 시럽으로 제공될 수 있는 벌크 형태로 제조되고 포장될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 약제 조성물은 각각의 물리적으로 이산된 단위가 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 단위 투여 형태로 제조되고 포장될 수 있다. 단위 투여 형태로 제조되는 경우, 본 발명의 약제 조성물은 전형적으로, 예를 들어, 0.25 mg 내지 1 g, 또는 0.5 mg 내지 500 mg, 또는 1 mg 내지 100 mg의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유할 수 있다.
화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 부형제들은 전형적으로 요망되는 투여 경로에 의해 환자에게 투여하기에 적합한 투여 형태로 제형화될 것이다. 예를 들어, 투여 형태는 (1) 정제, 캡슐, 당의정, 환제, 트로키제, 분말, 시럽, 엘릭시르제, 현탁액, 용액, 에멀젼, 사세 및 카세트와 같은 경구 투여; (2) 멸균 용액, 현탁액 및 재구성용 분말과 같은 비경구 투여; (3) 경피 패치와 같은 경피 투여; (4) 좌약과 같은 직장 투여; (5) 에어로졸, 용액 및 건조 분말과 같은 흡입; 및 (6) 크림, 연고, 로션, 용액, 페이스트, 스프레이, 포움 및 겔과 같은 국소 투여에 적합한 것들을 포함한다.
적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 선택된 특정 투여 형태에 의거하여 다를 것이다. 또한, 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 조성물에 제공될 수 있는 특정 기능을 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 균일한 투여 형태의 생산을 용이하게 하는 능력으로 선택될 수 있다. 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 안정한 투여 형태의 생산을 용이하게 하는 능력으로 선택될 수 있다. 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 대상체에 투여되면 화학식(I)의 화합물 또는 화합물들 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 한 기관, 또는 몸의 일부로부터 또 다른 기관 또는 몸의 일부로 운반 또는 전달하는 것을 용이하게 하는 능력으로 선택될 수 있다. 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 대상체 순응성을 증진시키는 능력으로 선택될 수 있다.
적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 하기 유형의 부형제를 포함한다: 담체, 희석제, 충전제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 활택제, 과립화제, 코팅제, 습윤제, 용매, 조용매, 현탁제, 에멀젼화제, 감미제, 향료, 향미 차단제, 착색제, 고결 방지제, 습윤제, 킬레이트제, 가소제, 점도 증가제, 항산화제, 방부제, 안정화제, 계면활성제 및 완충제. 당업자는 특정 약제학적으로 허용되는 부형제가 하나 초과의 기능을 제공할 수 있고, 부형제가 제형 내에 얼마나 많이 존재하고, 어떠한 다른 부형제가 제형에 존재하는 지에 따라 대체 기능을 수행할 수 있음을 인지할 것이다.
숙련된 기술자는 본 발명에서 사용하기에 적합한 양으로 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제를 선택할 수 있도록 당업계의 지식 및 기술을 보유한다. 또한, 약제학적으로 허용되는 부형제를 기술하고 있고, 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제를 선택하는데 유용할 수 있는, 숙련된 기술자가 이용할 수 있는 많은 자료가 있다. 예는 Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited), 및 The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)를 포함한다.
본 발명의 약제 조성물은 당업자에게 공지되어 있는 기술 및 방법을 사용하여 제조된다. 당업계에서 일반적으로 사용되는 일부 방법이 Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)에 기술되어 있다.
한 구체예에서, 약제 조성물은 비경구 투여, 특히 정맥내 투여를 위해 구성된다.
한 구체예에서, 약제 조성물은 경구 투여를 위해 구성된다.
한 구체예에서, 약제 조성물은 국소 투여를 위해 구성된다.
비경구 투여용으로 구성된 약제 조성물은 조성물이 의도된 수혜자의 혈액과 등장성이 되도록 항산화제, 완충제, 세균발육저지제(bacteriostat) 및 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 조성물은 단위 용량 또는 다회 용량 용기, 예를 들어, 밀봉된 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주입을 위한 물의 첨가만이 요구되는 냉동-건조(동결건조) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
경구 투여용으로 구성된 약제 조성물은 개별 단위, 예컨대, 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 포움(foam) 또는 휘프(whip); 또는 수중유형 액체 에멀젼 또는 유중수형 액체 에멀젼으로 제공될 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태의 경구 투여의 경우, 활성 약물 성분은 경구용 비독성 약제학적으로 허용되는 불활성 담체, 예컨대, 에탄올, 글리세롤 및 물 등과 조합될 수 있다. 정제 또는 캡슐 내에 혼입시키기에 적합한 분말은 화합물을 적합한 미세 크기로 감소시키고(예를 들어, 마이크론화(micronisation)에 의해), 유사하게 제조된 약제학적 담체, 예컨대, 식용 탄수화물, 예를 들어, 전분 또는 만니톨과 혼합함으로써 제조될 수 있다. 풍미제, 보존제, 분산제 및 착색제가 또한 제공될 수 있다.
캡슐은 상기 기재된 분말 혼합물을 제조하고, 형성된 젤라틴 시스(sheath)를 충전시킴으로써 제조될 수 있다. 활택제(glidant) 및 윤활제, 예컨대, 콜로이드 실리카, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 고형 폴리에틸렌 글리콜은 충전 작업 전에 분말 혼합물에 첨가될 수 있다. 붕해제 또는 가용화제, 예컨대, 아가-아가, 칼슘 카르보네이트 또는 소듐 카르보네이트가 또한 캡슐이 섭취될 때 약제의 이용율(availability)을 개선시키기 위해 첨가될 수 있다.
더구나, 요망되거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 활택제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 붕해제(붕괴제) 및 착색제가 또한 혼합물 내에 혼입될 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대, 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미료, 천연 및 합성 검, 예컨대, 아카시아, 트래거캔스 또는 소듐 알기네이트, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 및 왁스 등을 포함한다. 이러한 투여 형태에 사용된 윤활제는 소듐 올레에이트, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트 및 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토나이트 및 잔탄 검 등을 포함한다. 정제는, 예를 들어, 분말 혼합물을 제조하고, 과립화시키거나 슬러깅(slugging)시키고, 윤활제 및 붕해제를 첨가하고, 정제로 압착(pressing)시킴으로써 제형화된다. 분말 혼합물은 적합하게 빻아진(comminuted) 화합물을 상기 기재된 희석제 또는 염기와, 임의로, 결합제, 예컨대, 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 또는 폴리비닐 피롤리돈, 용해 지연제(retardant), 예컨대, 파라핀, 재흡수 촉진제(resorption accelerator), 예컨대, 4차 염 및/또는 흡수제, 예컨대, 벤토나이트, 카올린 또는 디칼슘 포스페이트와 혼합시킴으로써 제조된다. 분말 혼합물은 결합제, 예컨대, 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점액질(acadia mucilage) 또는 셀룰로스 또는 중합체 물질의 용액으로 습윤시키고, 스크린(screen)에 통과시킴으로써 과립화될 수 있다. 과립화에 대한 대안으로서, 분말 혼합물이 타정기를 통해 진행될 수 있고, 결과물은 과립으로 파쇄된 불완전하게 형성된 슬러그이다. 과립은 스테아르산, 스테아레이트 염, 탈크 또는 광유의 첨가에 의해 윤활되어 정제 형성 다이(die)에 고착하는 것을 예방할 수 있다. 이후, 윤활된 혼합물은 정제로 압착된다. 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한 자유 유동 불활성 담체와 함께 조합되고, 과립화 또는 슬러깅 단계를 거치지 않고 곧바로 정제로 압착될 수 있다. 쉘락(shellac)의 실링 코팅제(sealing coat), 당 또는 중합체 물질의 코팅 및 왁스의 폴리쉬 코팅(polish coating)으로 구성된 투명하거나 불투명한 보호 코팅이 제공될 수 있다. 염료는 상이한 단위 투여량을 구별하기 위해 이러한 코팅에 첨가될 수 있다.
경구용 유체, 예컨대, 용액, 시럽 및 엘릭시르제(elixir)는 제시되는 양이 소정량의 화합물을 함유하도록 하는 투여 단위 형태로 제조될 수 있다. 시럽은 적합하게 풍미가 가해진 수용액 중에 화합물을 용해시킴으로써 제조될 수 있지만, 엘릭시르제는 비독성 알콜 비히클의 사용을 통해 제조된다. 현탁액은 비독성 비히클 중에 화합물을 분산시킴으로써 제형화될 수 있다. 가용화제 및 에멀젼화제, 예컨대, 에톡실화 이소스테아릴 알콜 및 폴리옥시 에틸렌 소르비톨 에테르, 보존제, 풍미 첨가제, 예컨대, 페퍼민트 오일 또는 천연 감미료 또는 사카린 또는 그 밖의 인공 감미료 등이 또한 첨가될 수 있다.
경구 투여용 조성물은 치료 활성제의 방출을 지연하거나 달리 제어하기 위해 변형된 방출 프로파일을 제공하도록 설계될 수 있다.
경구 투여용 투여 단위 조성물은 경우에 따라 마이크로캡슐화될 수 있다. 조성물은 또한, 예를 들어, 중합체, 또는 왁스 등으로 미립 물질을 코팅 또는 임베딩시킴으로써 방출을 연장 또는 지속시키도록 제조될 수 있다.
경구 투여에 적합하고/거나 경구 투여를 위해 구성되는 조성물의 경우, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들어, 마이크론화(micronisation)에 의해 얻어진 입도 감소된 형태일 수 있다. 입도 감소된(예를 들어, 마이크론화된) 화합물 또는 염의 바람직한 입도는 약 0.5 내지 약 10 마이크론의 D50 값(예를 들어, 레이저 회절을 사용하여 측정되는 경우)으로 정의될 수 있다.
화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한 리포솜 전달 시스템, 예컨대, 소형 단일박막 소포체(unilamellar vesicle), 대형 단일박막 소포체 및 다중박막 소포체(multilamellar vesicle)의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대, 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
국소 투여용으로 구성된 약제 조성물은 연고, 크림, 현탁액, 에멀젼, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 포움, 스프레이, 에어로졸(aerosol) 또는 오일로 제형화될 수 있다. 그러한 약제 조성물은 보존제, 약물 침투를 보조하기 위한 용매, 조용매, 연화제, 분사제, 점도 조절제(겔화제), 계면활성제 및 담체를 포함하나, 이로 제한되지 않는 통상적인 첨가제를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 조성물에 대해 0.01 내지 10 중량%, 또는 0.01 내지 1 중량%의 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 국소 투여용으로 구성된 약제 조성물이 제공된다.
눈 또는 그 밖의 외부 조직, 예를 들어, 입 및 피부의 치료를 위해, 조성물은 바람직하게는 국소용 연고, 크림, 겔, 스프레이 또는 포움으로서 적용된다. 연고로 제형화될 경우, 활성 성분은 파라핀 또는 수혼화성 연고 기재와 함께 사용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 수중유형 크림 기재 또는 유중수형 기재의 크림으로 제형화될 수 있다.
눈에 대한 국소 투여용으로 구성된 약제 조성물은 활성 성분이 적합한 담체, 특히 수성 용매에 용해되어 있거나 현탁되어 있는 점안액을 포함한다. 눈에 투여되어야 하는 조성물은 안과적으로 상용가능한 pH 및 삼투질 농도(osmolality)를 가질 것이다. 산, 예컨대, 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산; 염기, 예컨대, 소듐 하이드록사이드, 소듐 포스페이트, 소듐 보레이트, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 및 소듐 락테이트; 및 완충제, 예컨대, 시트레이트/덱스트로스, 소듐 바이카르보네이트 및 암모늄 클로라이드를 포함하는, 하나 이상의 안과적으로 허용되는 pH 조절제 및/또는 완충제가 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다. 그러한 산, 염기, 및 완충제는 안과적으로 허용되는 범위 내에서 조성물의 pH를 유지하는데 필요한 양으로 포함될 수 있다. 하나 이상의 안과적으로 허용되는 염은 조성물의 삼투질 농도가 안과적으로 허용되는 범위가 되도록 하기에 충분한 양으로 조성물에 포함될 수 있다. 그러한 염은 소듐, 포타슘 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 바이카르보네이트, 설페이트, 티오설페이트 또는 바이설파이트 음이온을 지닌 것들을 포함한다.
안구 전달 장치는 다수의 규정된 방출 속도 및 지속된 투여 동력학 및 침투성을 지닌 하나 이상의 치료제의 제어 방출을 위해 설계될 수 있다. 제어 방출은 약물 확산, 침식, 용해 및 삼투를 증진시킬 중합체 분자량, 중합체 결정화도, 공중합체 비, 가공 조건, 표면 피니쉬, 기하형태, 부형제 첨가 및 중합체 코팅의, 생분해성/생부식성 중합체(예를 들어, 폴리(에틸렌 비닐) 아세테이트(EVA), 수퍼가수분해된(superhydrolyzed) PVA), 하이드록시알킬 셀룰로스(HPC), 메틸셀룰로스(MC), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스(HPMC), 폴리카프롤락톤, 폴리(글리콜)산, 폴리(락트)산, 다가무수물의 상이한 선택 및 특성을 포함하는 중합체 매트릭스의 설계를 통해 얻어질 수 있다.
또한, 안구 전달을 위한 약제 조성물은 동일계(in situ) 겔화가능한 수성 조성물을 포함한다. 그러한 조성물은 눈 또는 눈물과의 접촉시 겔화를 촉진하는데 효과적인 농도로 겔화제를 포함한다. 적합한 겔화제는 열경화성 중합체를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 용어 "동일계 겔화가능한"은 눈 또는 눈물과의 접촉시 겔을 형성하는 저 점도의 액체를 포함할 뿐만 아니라 눈으로의 투여시 실질적으로 증가된 점도 또는 겔 강성을 나타내는 세미-유체(semi-fluid) 및 틱소트로프 겔(thixotropic gel)과 같은 보다 점성의 액체도 포함한다. 예를 들어, 안구 약물 전달에 사용하기 위한 중합체의 예에 대한 교시를 위해 본원에서 참고로 포함되는 문헌(Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57: 1595-639)을 참조한다.
코 또는 흡입 투여용 투여 형태는 에어로졸, 용액, 현탁액, 겔 또는 건조 분말로 편리하게 제형화될 수 있다.
흡입 투여용으로 적합하고/거나 흡입 투여용으로 구성된 조성물의 경우, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들어, 마이크론화에 의해 얻어진 입도가 감소된 형태인 것이 바람직하다. 입도가 감소된(예를 들어, 마이크론화) 화합물 또는 염의 바람직한 입도는 약 0.5 내지 약 10 마이크론(예를 들어, 레이저 회절을 사용하여 측정된 바와 같은)의 D50 값으로 정의된다.
예를 들어, 흡입 투여용의 에어로졸 제형은 약제학적으로 허용되는 수성 또는 비수성 용매 중의 활성 물질의 용액 또는 미세 현탁액을 포함할 수 있다. 에어로졸 제형은 밀봉된 용기에 무균 형태로 1회 또는 다회 투여량으로 제공될 수 있고, 이것은 분무 장치(atomising device) 또는 흡입기(inhaler)로의 사용을 위해 카트리지(catridge) 또는 리필(refill)의 형태를 취할 수 있다. 다르게는, 밀봉된 용기는 용기의 내용물이 소진되면 폐기의 목적으로 계량 밸브(metering valve)(계량식 흡입기(metered dose inhaler))가 장착된 1회 용량 코용 흡입기 또는 에어로졸 디스펜서와 같은 일원화 분배 장치(unitary dispensing device)일 수 있다.
투여 형태가 에어로졸 디스펜서를 포함하는 경우, 바람직하게는 가압 하에 있는 적합한 분사제(propellant), 예컨대, 압축 공기, 이산화탄소 또는 유기 분사제, 예컨대, 하이드로플루오로카본(HFC)을 함유한다. 적합한 HFC 분사제는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 포함한다. 에어로졸 투여 형태는 또한 펌프-분무기(pump-atomiser)의 형태를 취할 수 있다. 가압 에어로졸은 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있다. 이것은 현탁 제형의 분산 특징 및 균질성을 개선시키기 위해 추가 부형제, 예를 들어, 조용매 및/또는 계면활성제의 혼입을 필요로 할 수 있다. 용액 제형은 또한 에탄올과 같은 조용매의 첨가를 필요로 할 수 있다.
흡입 투여용으로 적합하고/거나 흡입 투여용으로 구성된 약제 조성물의 경우, 약제 조성물은 건조 분말 흡입가능한 조성물일 수 있다. 그러한 조성물은 분말 기재, 예컨대, 락토스, 글루코스, 트레할로스, 만니톨 또는 전분, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염(바람직하게는, 입도가 감소된 형태, 예를 들어, 마이크론화 형태), 및 임의로 성능 개질제, 예컨대, L-류신 또는 또 다른 아미노산 및/또는 스테아르산의 금속 염, 예컨대, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 건조 분말 흡입가능한 조성물은 락토스, 예를 들어, 락토스 모노하이드레이트와 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염의 건조 분말 블렌드(blend)를 포함한다. 그러한 조성물은, 예를 들어, GB 2242134 A호에 기재된 GlaxoSmithKline에 의해 판매되는 DISKUS® 장치와 같은 적합한 장치를 사용하여 환자에게 투여될 수 있다.
화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 유체 디스펜서, 예를 들어, 유체 디스펜서의 펌프 메커니즘에 사용자에 의해 가해진 힘의 적용시 유체 제형의 계량된 용량이 분배되는 디스펜싱 노즐 또는 디스펜싱 오리피스(orifice)를 갖는 유체 디스펜서로부터의 전달을 위해 유체 제형으로서 제형화될 수 있다. 그러한 유체 디스펜서에는 일반적으로 다회 계량된 용량의 유체 제형의 저장소가 제공되고, 용량은 순차적인 펌프 작동시 분배가능하다. 디스펜싱 노즐 또는 오리피스는 비강으로 유체 제형의 스프레이 분배를 위해 사용자의 콧구멍 내로의 삽입을 위해 구성될 수 있다. 상기 언급된 유형의 유체 디스펜서는 국제 특허 출원 공개 WO 2005/044354 A1호에 기재되고 예시된다.
치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 환자의 나이 및 체중, 치료를 요하는 정확한 질환 및 이의 중증도, 제형의 성질, 및 투여 경로를 포함하는 다수 인자에 좌우될 것이고, 최종적으로 주치의 또는 수의사의 재량에 좌우될 것이다. 약제 조성물에서, 경구 또는 비경구 투여를 위한 각각의 투여 단위는 유리 염기로서 계산하여 0.01 mg 내지 3000 mg, 더욱 바람직하게는 0.5 mg 내지 1000 mg의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 것이 바람직하다. 코 또는 흡입 투여를 위한 각각의 투여 단위는 유리 염기로서 계산하여, 0.001 mg 내지 50 mg, 더욱 바람직하게는 0.01 mg 내지 5 mg의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 것이 바람직하다.
약제학적으로 허용되는 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 유리 염기로서 계산하여, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을, 예를 들어, 일당 0.01 mg 내지 3000 mg, 일당 0.5 mg 내지 1000 mg 또는 일당 100 mg 내지 2500mg의 경구 또는 비경구 용량, 또는 일당 0.001 mg 내지 50 mg 또는 일당 0.01 내지 5 mg의 비강 또는 흡입 용량의 일일 용량(성인 환자에 대해)으로 투여할 수 있다. 이러한 양은 일당 단일 용량으로 또는 보다 일반적으로 전체 일일 용량이 동일하도록 일당 소정 회수(예컨대, 2, 3, 4, 5 또는 6회)의 서브-용량으로 제공될 수 있다. 이의 염의 효과적인 양은 화학식(I)의 화합물 자체의 효과적인 양의 소정 비율로서 결정될 수 있다.
화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 단독으로 또는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 병용 요법(combination therapy)은 적어도 하나의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 투여, 및 적어도 하나의 다른 치료학적 활성제의 사용을 포함한다. 화학식(I)의 화합물(들) 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 다른 치료학적 활성제(들)는 단일 약제 조성물로 함께 또는 따로 투여될 수 있고, 따로 투여될 경우, 이것은 동시에 또는 어떠한 순서로 순차적으로 일어날 수 있다. 화학식(I)의 화합물(들) 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 다른 치료학적 활성제(들)의 양 및 상대적인 투여 타이밍은 요망되는 조합된 치료 효과를 달성하기 위해 선택될 것이다. 따라서, 추가의 양태에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 다른 치료학적 활성제와 함께 포함하는 조합물이 제공된다.
따라서, 한 양태에서, 본 발명에 따른 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물은 하나 이상의 그 밖의 치료제, 예를 들어, 항생제, 항바이러스제, 글루코코르티코스테로이드, 무스카린성 길항제, 베타-2 효능제, 및 비타민 D3 유사체로부터 선택된 치료제를 포함하거나 그러한 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 암 치료에 적합한 추가의 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 그러한 추가의 치료제의 예는 문헌(Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita 및 S. Hellman (editors), 6th edition (2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers)에 기술되어 있다. 당업자는 제제의 조합물이 약물의 특정 특징 및 관련된 암을 기반으로 하여 유용할 것임을 파악할 수 있을 것이다. 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 조합하여 사용되는 추가의 치료제는 미세소관 저해제(anti-microtubule agent)(예컨대, 디테르페노이드(diterpenoid) 및 빈카 알카로이드(vinca alkaloid)); 백금 배위 착물; 알킬화제(예컨대, 질소 머스타드, 옥사자포스포린, 알킬설포네이트, 니트로소우레아, 및 트리아젠); 항생제(예컨대, 안트라사이클린(anthracyclin), 악티노마이신(actinomycin) 및 블레오마이신(bleomycins)); 토포아이소머라제 II 억제제(예컨대, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin)); 항대사물질(예컨대, 푸린 및 피리미딘 유사체 및 항-폴레이트 화합물); 토포아이소머라제 I 억제제(예컨대, 캄프토테신(camptothecin); 호르몬 및 호르몬 유사체); 신호 전달 경로 억제제(예컨대, 티로신 수용체 억제제); 비-수용체 티로신 키나제 혈관신생 억제제; 면역치료제(예를 들어, 니볼루맙(nivolumab) 및 펨브롤리주맙(pembrolizumab)을 포함하는 PD-1 억제제, 및 이필리무맙(ipilimumab)을 포함하는 CTLA-4 억제제); 프로아폽토틱제(proapoptotic agent); 후성적 또는 전사 조절제(예컨대, 히스톤 데아세틸라제 억제제) 및 세포주기 신호전달 억제제를 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 일반적으로 흡입, 정맥내, 경구 또는 비내 경로에 의해 투여되는 다른 치료제와 함께 투여될 때, 형성되는 약제 조성물은 동일한 경로에 의해 투여될 수 있음이 이해될 것이다. 다르게는, 조성물의 개별 성분은 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.
치료 제제의 활성 및/또는 안정성 및/또는 물리적 특성, 예컨대, 용해성을 최적화시키기 위해, 다른 치료 제제(들)는 경우에 따라 염의 형태, 예를 들어, 알칼리 금속 또는 아민 염 또는 산 부가염, 또는 전구약물로서, 또는 에스테르, 예를 들어, 저급 알킬 에스테르로서, 또는 용매화물, 예를 들어, 수화물로서 사용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 또한, 경우에 따라, 치료 제제는 광학적으로 순수한 형태로 사용될 수 있음이 명백할 것이다.
상기 언급된 조합물은 약제 조성물의 형태로 사용하는데 편리하게 제공될 수 있고, 따라서 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 상기 명시된 조합물을 포함하는 약제 조성물은 본 발명의 추가 양태를 나타낸다.
일반적인 합성 경로
본 발명의 화합물은 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 이전에 정의된 어떠한 변수는 달리 명시되지 않는 한 계속해서 이전에 정의된 의미를 가질 것이다. 예시적인 일반적 합성 방법은 하기 반응식에 나타나 있으며, 본 발명의 다른 화합물을 제조하는데 용이하게 적용될 수 있다. 본 발명의 특정 화합물은 실시예 부분에서 제조된다.
화학식(I)의 화합물은 하기 반응식 중 어느 하나에서 기술되는 바와 같이 제조될 수 있다:
반응식 1:
Figure 112019099269087-pct00011
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 상기에서 기술된 바와 같고, X는 Br, Cl 또는 OH이다.
상기 반응식 1에서 보여진 단계와 관련하여, 하기 반응 조건이 사용될 수 있다:
단계 1: 에스테르의 아미드화이고, 선택적으로 적합한 용매, 예를 들어, THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예를 들어 0℃ 내지 r.t.에서 화학식 R1-NH2의 적절한 아민을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 2: X = OH인 경우 Mitsunobu 커플링 반응이고, Mitsunobu 커플링 시약, 예를 들어, Ph3P와 같은 적합한 포스핀과 함께 DEAD 또는 DIAD의 존재 하에; 또는 대안적으로 CMBP와 같은 적합한 포스포란 시약과 함께 적합한 용매, 예를 들어, THF 또는 아세토니트릴에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 120℃에서 임의의 적합한 알콜을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 3: X = Br 또는 Cl인 경우 알킬화 반응이고, 적합한 용매, 예를 들어, 아세톤에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서 적합한 염기, 예를 들어, 포타슘 카르보네이트를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 4: 염기-매개 에스테르 가수분해이고, 선택적으로 적합한 용매 또는 용매의 혼합물, 예를 들어, 1,4-디옥산 및 물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 임의의 적합한 염기, 예를 들어, 리튬 하이드록사이드를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 5: 아미드 커플링 반응이고, 적합한 3차 아민, 예를 들어, 트리에틸아민 또는 DIPEA의 존재 하에, 적합한 아미드 커플링 반응물, 예를 들어, HATU의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, DCM 또는 DMF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 아민 시약인 R2-NH2를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 6: 산-매개 에스테르 절단이고, 선택적으로 적합한 용매 또는 용매의 혼합물, 예를 들어, 1,4-디옥산 및 물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 환류에서 가열하며 황산과 같은 임의의 적합한 산을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 7: 아미드 커플링 반응이고, 적합한 3차 아민, 예를 들어, 트리에틸아민 또는 DIPEA의 존재 하에, 적합한 아미드 커플링 반응물, 예를 들어, HATU의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, DCM 또는 DMF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 아민 시약인 R1-NH2를 사용하여 수행될 수 있다.
당업자는 상기 기재된 화합물의 하나 이상의 작용기를 보호하는 것이 유리할 수 있음을 이해할 것이다. 보호기의 예 및 이들의 제거 수단은 그러한 절차와 관련하여 본원에 참조로서 포함되는 문헌[T. W. Greene 'Protective Groups in Organic Synthesis' (4th edition, J. Wiley and Sons, 2006)]에서 찾아볼 수 있다.
적합한 아민 보호기는 적절한 경우 산 매개 절단에 의해(예를 들어, 1,4-디옥산 중 염산 또는 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산과 같은 산을 이용함) 또는 환원적으로(예를 들어, 벤질 또는 벤질옥시카르보닐 기의 수소첨가분해 또는 아세트산 중 아연을 이용한 2',2',2'-트리클로로에톡시카르보닐 기의 환원적 제거) 제거될 수 있는 아실(예를 들어, 아세틸), 카르바메이트(예를 들어, 2',2',2'-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 또는 t-부톡시카르보닐) 및 아릴알킬(예를 들어, 벤질)을 포함한다. 다른 적합한 아민 보호기는 염기 촉매화 가수분해에 의해 제거될 수 있는 트리플루오로아세틸(-C(O)CF3)을 포함한다.
상기 기술된 경로 중 어느 하나에서, 여러 기 및 모이어티가 분자에 도입되는 합성 단계의 정확한 순서는 달라질 수 있는 것으로 이해될 것이다. 공정의 한 단계에 도입된 기 또는 모이어티가 후속하는 변형 및 반응에 영향을 받지 않도록 보장하고, 이에 따라 합성 단계의 순서를 선택하는 것은 당업자의 기술 범위 내에 있을 것이다.
상기 기술된 특정 중간체 화합물은 또한 본 발명의 추가의 양태를 형성한다.
전술한 임의의 반응 또는 공정에 대해, 통상적인 가열 및 냉각 방법, 예를 들어, 온도-조절된 오일-조 또는 온도-조절된 핫-블록, 및 얼음/염 조 또는 드라이 아이스/아세톤 조가 각각 사용될 수 있다. 통상적인 분리 방법, 예를 들어, 수성 또는 비수성 용매로부터 또는 상기 용매로의 추출이 사용될 수 있다. 무수 마그네슘 설페이트 또는 무수 소듐 설페이트와 함께 진탕시키거나, 소수성 프릿을 통해 통과시키는 것과 같은 유기 용매, 용액 또는 추출물을 건조하는 통상적인 방법이 이용될 수 있다. 필요에 따라 통상적인 정제 방법, 예를 들어, 결정화 및 크로마토그래피, 예를 들어, 실리카 크로마토그래피 또는 역상 크로마토그래피를 사용할 수 있다. 결정화는 에틸 아세테이트, 메탄올, 에탄올, 또는 부탄올과 같은 통상적인 용매, 또는 이들의 수성 혼합물을 사용하여 수행될 수 있다. 특정 반응 시간 및 온도는 전형적으로 반응-모니터링 기법, 예를 들어, 박층 크로마토그래피 및 LC-MS에 의해 결정될 수 있음을 이해할 것이다.
일반적인 실험 세부사항
표시되는 모든 온도는 ℃이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 이들 공정, 반응식 및 실시예에서 사용되는 기호 및 관례는 현대 과학 문헌(예를 들어, Journal of the American Chemical Society)에서 사용되는 것들과 일치한다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 출발 물질은 상업적 공급처로부터 입수되었고, 추가 정제 없이 사용되었다. 특히, 하기 약어는 실시예에서, 그리고 명세서 전반에서 사용될 수 있다:
일반적인 방법
일반적인 실험 세부사항
본원에서 사용되는 바와 같은, 이들 공정, 반응식 및 실시예에서 사용되는 기호 및 관례는 현대 과학 문헌(예를 들어, Journal of the American Chemical Society)에서 사용되는 것들과 일치한다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 출발 물질은 상업적 공급처로부터 입수되었고, 추가 정제 없이 사용되었다. 특히, 하기 약어는 실시예에서, 그리고 명세서 전반에서 사용될 수 있다:
약어
AcOH 아세트산
AMU 원자 질량 단위
Aq 수성
BOC/Boc 3차-부틸옥시카르보닐
Cs2CO3 세슘 카르보네이트
CHCl3 클로로포름
CMBP (시아노메틸렌)트리부틸포스포란
CPME 사이클로펜틸 메틸 에테르
CV 컬럼 부피
DCM 디클로로메탄
DIAD 디이소프로필 아조디카르복실레이트
DIBAL-H 디이소부틸알루미늄 하이드라이드
DIPEA 디이소프로필에틸아민
DMAP 4-디메틸아미노피리딘
DMF 디메틸포름아미드
DMSO 디메틸설폭사이드
DMSO-d6 중수소화 디메틸설폭사이드
DPPA 디페닐포스포릴 아지드
Et3N 트리에틸아민
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
h 시간(들)
HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HBr 하이드로겐 브로마이드
HCl 염산
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
Isolera Biotage® 플래쉬 정제 시스템
K2CO3 포타슘 카르보네이트
LiCl 리튬 클로라이드
LCMS 액체 크로마토그래피-질량 분석기
LiOH 리튬 하이드록사이드
M 몰(농도)
MDAP 질량 유도 자동분취용 크로마토그래피
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
2-MeTHF 2-메틸테트라하이드로푸란
min 분(들)
MS 질량 분석기
Ms-Cl 메탄설포닐 클로라이드
N 노말(농도)
N2 질소 가스
NaBH4 소듐 보로하이드라이드
Na2CO3 소듐 카르보네이트
NaH 소듐 하이드라이드
NaHCO3 소듐 바이카르보네이트
NaOH 소듐 하이드록사이드
Na2SO4 소듐 설페이트
NH3 암모니아
NH4Cl 암모늄 클로라이드
NUT 고환의 핵 단백질
obs 모호함
Ph3P 트리페닐포스핀
RBF 둥근 바닥 플라스크
Rt 체류 시간
rt 실온
sat 포화된
SCX Isolute 강력 양이온 교환 흡수성 SPE
SFC 초임계 유체 크로마토그래피
SiO2 실리콘 디옥사이드
SNAP Biotage® (실리카) 플래쉬 크로마토그래피 카트리지
SP4 Biotage® 플래쉬 정제 시스템
SPE 고체상 추출
T3P 프로필포스폰산 안하이드라이드 용액
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라하이드로푸란
TBDMS-Cl 3차-부틸디메틸실릴 클로라이드
TLC 박층 크로마토그래피
Ts 토실
pTsCl 토실 클로라이드
UPLC 초고성능 액체 크로마토그래피
UV 자외선
XantPhos 1,1'-(9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스[1,1-디페닐포스핀
하기 화합물의 명칭은 화합물 명명 프로그램 "ACD Name Pro 6.02"을 사용하거나 ChemDraw 울트라 12.0의 명명 기능을 사용하여 얻어졌다.
LCMS 방법
포름산(Formic) 방법
LC 조건
UPLC 분석을 40℃에서 Acquity UPLC CSH C18 컬럼(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 물 중 0.1% v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1% v/v 포름산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00012
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 모드 : 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
스캔 간 지연: 0.10초
높은 pH 방법
LC 조건
UPLC 분석을 40℃에서 Acquity UPLC CSH C18 컬럼(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 암모니아 용액에 의해 pH 10으로 조절된 물 중 10 mM 암모늄 하이드로겐 카르보네이트
B = 아세토니트릴
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00013
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 모드: 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
스캔 간 지연: 0.10초
TFA 방법
LC 조건
UPLC 분석을 40℃에서 Acquity UPLC CSH C18 컬럼(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 물 중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00014
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 모드: 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
스캔 간 지연: 0.10초
방법 A
LC 조건
UPLC 분석을 35℃에서 Acquity BEH C18 컬럼(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 물 중 0.1% v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1% v/v 포름산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00015
방법 B
LC 조건
UPLC 분석을 35℃에서 Acquity BEH C18 컬럼(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 물 중 0.05% v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.05% v/v 포름산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00016
방법 C
LC 조건
UPLC 분석을 35℃에서 Xbridge C18 컬럼(150 mm x 4.6 mm, i.d. 3.5㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 물 중 0.05% v/v 트리플루오로아세트산 용액
B = 아세토니트릴
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00017
방법 D
LC 조건
UPLC 분석을 35℃에서 Acquity BEH C18 컬럼(100 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 아세토니트릴 중 0.05% v/v 포름산 용액
B = 물 중 0.05% v/v 포름산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00018
방법 E
LC 조건
UPLC 분석을 35℃에서 Acquity BEH C18 컬럼(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7㎛ 패킹 직경)에서 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 아세토니트릴 중 0.05% v/v 포름산 용액
B = 물 중 0.05% v/v 포름산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112019099269087-pct00019
일반적인 MDAP 정제 방법
하기에 열거된 것은 화합물 정제에 사용되었거나 사용될 수 있는 질량 유도 자동분취용 크로마토그래피(MDAP) 방법의 예이다.
MDAP(높은 pH). 15분 또는 25분에 걸쳐 0 내지 100% 용매 B의 용리 구배를 사용하여, 암모니아 용액에 의해 pH 10으로 조정된 물 중 10 mM 암모늄 바이카르보네이트(용매 A) 및 아세토니트릴(용매 B)로 용리되는, Xselect CSH C18 컬럼(150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 HPLC 분석을 주위 온도에서 수행하였다.
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 신호였다. 질량 스펙트럼은 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무를 사용하여 Waters ZQ 질량 분광계로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 반올림하였다.
MDAP(포름산). 15분 또는 25분에 걸쳐 0 내지 100% 용매 B의 용리 구배를 사용하여, 물 중 0.1% 포름산(용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산(용매 B)으로 용리되는, Xselect CSH C18 컬럼(150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 HPLC 분석을 주위 온도에서 수행하였다.
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 신호였다. 질량 스펙트럼은 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무를 사용하여 Waters ZQ 질량 분광계로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 반올림하였다.
MDAP(TFA). 15분 또는 25분에 걸쳐 0 내지 100% 용매 B의 용리 구배를 사용하여, 물 중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액(용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액(용매 B)으로 용리되는, Xselect CSH C18 컬럼(150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 HPLC 분석을 주위 온도에서 수행하였다.
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 신호였다. 질량 스펙트럼은 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무를 사용하여 Waters ZQ 질량 분광계로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 반올림하였다.
NMR
스펙트럼은 302 K에서 400 MHz 또는 600 MHz NMR 기계에서 실행되었다.
중간체 1: 메틸 3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00020
메탄아민(물 중 5% wt 용액)(67.5 g, 109 mmol, 예를 들어, Spectrochem으로부터 시판됨) 중 디메틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(10 g, 54.3 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨)의 용액을 질소 하에 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 16 h 후, 반응 혼합물을 1N HCl로 중화시키고, EtOAc(500 mL)로 추출하고, 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축시켜 메틸 5-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(4 g, 14.19 mmol, 26% 수율)의 미정제 화합물을 수득하였다. 반응을 동일한 규모로 다시 반복하여 추가 3.8 g의 미정제 화합물을 수득하고, 다시 메탄아민(물 중 5% wt 용액)(67.5 g, 109 mmol) 중 디메틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(20 g, 54.3 mmol)의 용액을 사용하여 질소 하에 0℃에서 상기와 동일한 워크-업을 사용하여 교반시켜 추가로 7 g의 미정제 화합물을 수득하였다. 합친 미정제물 배치를 DCM 중 0-10% MeOH로 용리하며 컬럼 크로마토그래피(100-200 실리카겔)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 수집하고, 감압 하에 건조시켜 미정제 화합물(10 g)을 수득하였다. 이것을 무수 메탄올(100 mL)로 희석하고, rt에서 24 h 동안 유지하였다. 24 h 후, 고체를 Buchner 깔때기를 통해 여과하고, 냉각된 무수 메탄올(20 mL)로 세척한 다음 잔류물을 펜탄으로 세척하고, 건조시켜 메틸 5-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(8 g, 43.6 mmol, 20% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 14.27 (br. s., 1 H) 8.42 (br. s., 1 H) 7.22 (br. s., 1 H) 3.83 (s, 3 H) 2.76 (d, J=4.6 Hz, 3 H)
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.44분, [MH]+ = 184.1.
중간체 2: 메틸 ( S )-디메틸 1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00021
디이소프로필 (E)-디아젠-1,2-디카르복실레이트(8.24 g, 40.7 mmol)를 2-MeTHF(50 mL) 중 디메틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(5 g, 27.2 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨), (R)-1-페닐에탄-1-올(3.98 g, 32.6 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨) 및 중합체 결합된 트리페닐포스핀 3 mmol/g(13.70 g, 40.7 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)의 현탁액에 0℃에서 질소 하에 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반하여, 이를 rt로 가온시켰다. 분리된 반응으로, 디메틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(2 g, 10.86 mmol), (R)-1-페닐에탄-1-올(1.592 g, 13.03 mmol) 및 중합체 결합된 트리페닐포스핀 3 mmol/g(5.48 g, 16.29 mmol)을 RBF에서 합치고, 2-MeTHF(50 mL)를 첨가하고, 혼합물을 얼음 조에서 30분 동안 냉각하며 질소 하에 교반한 다음, 디이소프로필 (E)-디아젠-1,2-디카르복실레이트(3.29 g, 16.29 mmol)를 30분 동안 적가하고, 생성된 혼합물을 밤새 교반하여, 이를 rt로 가온시켰다. 반응 혼합물을 합치고, 합친 현탁액을 여과하고, 고체 중합체 결합된 트리페닐포스핀(옥사이드)를 EtOAc(100 mL)로 세척하였다. 이후 합친 유기물을 물(200 mL)로 세척하고, 건조하고, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 0-25% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 340 g 실리카 컬럼 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 디메틸 (S)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(7.2 g, 24.97 mmol, 66% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.39 (s, 1 H) 7.29 - 7.33 (m, 4 H) 7.22 - 7.28 (m, 1 H) 6.63 (q, J=7.1 Hz, 1 H) 3.96 (s, 3 H) 3.86 (s, 3 H) 1.99 (d, J=7.1 Hz, 3 H)
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.13분, [MH]+ = 289.2.
중간체 3: ( S )-5-(메톡시카르보닐)-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00022
디메틸 (S)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(15 g, 52.0 mmol)를 1,4-디옥산(60 mL)에 용해시킨 다음, 물(120 mL)을 첨가한 후 H2SO4(1.664 mL, 31.2 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 환류에서 3일 동안 가열한 다음, rt로 냉각하고, EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 무색 검을 수득하였고, 이를 DCM에 용해하고 340 g 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음 0-50%(1% AcOH/EtOAc)/사이클로헥산으로 용리시켰고, 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 (S)-5-(메톡시카르보닐)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3-카르복실산(6.7 g, 24.43 mmol, 47% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.46 (s, 1 H) 7.24 - 7.37 (m, 5 H) 6.66 (q, J=7.1 Hz, 1 H) 3.88 (s, 3 H) 2.00 (d, J=7.1 Hz, 3 H). 1개의 교환가능한 양성자가 관찰되지 않음.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.96분, [MH]+ = 275.3.
중간체 4: ( S )-메틸 3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00023
(S)-5-(메톡시카르보닐)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3-카르복실산(2 g, 7.29 mmol)을 DCM(20 mL)에 용해시키고, Et3N(1.525 mL, 10.94 mmol) 및 HATU(3.33 g, 8.75 mmol)에 이어 메탄아민(THF 중 2M)(3.65 mL, 7.29 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반한 다음, 물(20 mL) 및 0.5M HCl(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 건조시키고, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 50 g 실리카 컬럼 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜 메틸 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(2.1 g, 7.31 mmol, 100% 수율)를 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.38 (s, 1 H) 7.23 - 7.35 (m, 5 H) 6.96 (d, J=3.7 Hz, 1 H) 6.63 (q, J=7.1 Hz, 1 H) 3.86 (s, 3 H) 3.03 (s, 3 H) 1.92 (d, J=7.1 Hz, 3 H)
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.99분, [MH]+ = 288.2.
중간체 5: ( S )-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00024
메틸 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(4.2 g, 14.62 mmol)를 메탄올(10 mL) 및 THF(10 mL)의 혼합물에 용해시킨 다음, NaOH(2M 수용액, 14.62 mL, 29.2 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 3 h 동안 rt에서 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고, 잔류물을 물(30 mL)에 용해시키고, 에테르로 세척한 다음, 수성층을 2M HCl을 사용하여 pH 4로 산성화하고, 생성된 혼합물을 얼음 조에서 냉각하면서 20분 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하여 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(3.3 g, 12.07 mmol, 83% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.62 (br. s., 1 H) 8.26 (d, J=4.6 Hz, 1 H) 7.18 - 7.37 (m, 5 H) 7.14 (s, 1 H) 6.61 (q, J=6.8 Hz, 1 H) 2.77 (d, J=4.6 Hz, 3 H) 1.80 - 1.91 (m, 3 H)
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.86분, [MH]+ = 274.2.
중간체 6: 디메틸 1-벤질-1 H -피라졸-3,5-디카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00025
질소 하에 0℃에서 교반된 아세톤(100 mL) 중 디메틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(10 g, 54.3 mmol)의 용액에 K2CO3(15.01 g, 109 mmol)를 첨가한 다음, 벤질 브로마이드(7.10 mL, 59.7 mmol)를 1분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 5 h 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 n-펜탄(3x 10 mL)으로 분쇄한 다음, 진공 하에 건조시켜 순수한 디메틸 1-벤질-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(8.5 g, 31.0 mmol, 57% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (10분 방법 D): Rt = 4.87분, [MH]+ = 275.0.
중간체 7: 1-벤질-5-(메톡시카르보닐)-1 H -피라졸-3-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00026
질소 하에 rt에서 교반된 1,4-디옥산(140 mL) 및 물(280 mL) 중 디메틸 1-벤질-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(30 g, 109 mmol)의 용액에 농축된 H2SO4(2.92 mL, 54.7 mmol, 18.4M)를 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 72 h 동안 환류에서 교반하였다. 이후 반응물을 Rt로 냉각하고, EtOAc(3x 125 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 60-120 컬럼에 첨가하고, n-헥산 중 15% EtOAc로 용리하고, 수집된 출발 물질 분획을 감압 하에 농축시켜 회수된 출발 물질(15 g)을 회백색 고체로서 수득하였다. 이후 컬럼을 헥산 중 60% EtOAc로 용리하고, 수집된 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 순수한 1-벤질-5-(메톡시카르보닐)-1H-피라졸-3-카르복실산(6 g)을 백색 고체로서 제공하였다. 불순한 분획을 또한 분리하여 추가로 10 g의 미정제 혼합물을 수득하고, 여기에 실리카겔 60-120 컬럼을 첨가하고, 헥산 중 60% EtOAc로 용리시켜 추가로 순수한 분획을 제공하였다. 이들을 진공 하에 농축시켜 두 번째 배치의 순수한 요구되는 생성물(5.5 g)을 얻었고 이를 합쳐 1-벤질-5-(메톡시카르보닐)-1H-피라졸-3-카르복실산(11.5 g, 44.0 mmol, 40% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. 이후 컬럼을 EtoAc로 플러싱하여 추가 배치의 불순한 생성물(3.4 g)을 제공하였다.
LCMS (10분 방법 D): Rt = 4.89분, [MH]+ = 261.0.
중간체 8: 메틸 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00027
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(100 mL) 중 1-벤질-5-(메톡시카르보닐)-1H-피라졸-3-카르복실산(13.6 g, 50.7 mmol) 및 DIPEA(26.6 mL, 152 mmol)의 용액에 HATU(28.9 g, 76 mmol)를 첨가한 후, 메탄아민 하이드로클로라이드(4.11 g, 60.8 mmol)를 1회 충전으로 1분 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 100 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(3x 50 mL), 염수 용액으로 세척한 다음, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 60-120 컬럼에 첨가하고, n-헥산 중 65% EtOAc로 용리하고, 수집된 순수한 분획을 감압 하에 농축시켜 메틸 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(12.1 g, 42.7 mmol, 84% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 2.32분, [MH]+ = 274.1.
중간체 9: 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00028
질소 하에 rt에서 교반된 THF(70 mL) 및 물(70 mL) 중 메틸 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(12.1 g, 42.7 mmol)의 용액에 LiOH(5.11 g, 213 mmol)를 1회 충전으로 1분 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 이후 반응물을 물(20 mL)로 희석한 다음, 수성층을 EtOAc(3x 15 mL)로 세척하였다. 이후 수성층 pH를 2NHCl에 의해 pH 1로 조정한 다음, 이를 EtoAc(3x 100 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 60-120 컬럼에 첨가하고, n-헥산 중 85% EtOAc로 용리하고, 수집된 순수한 분획을 감압 하에 농축시켜 요망되는 생성물, 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(8.5 g, 32.8 mmol, 77% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (10분 방법 D): Rt = 3.25분, [MH]+ = 260.1.
중간체 10: N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00029
질소 하에 rt에서 교반된 에탄올(1 mL) 중 1-벤질-N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(500 mg, 1.525 mmol, 제조를 위해, 실시예 92 참조)의 용액에 탄소상 팔라듐 하이드록사이드(100 mg, 0.712 mmol)를 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트 베드를 통해 여과한 다음, 에탄올(25 mL)로 세척하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 디에틸 에테르(3x 1 mL)로 분쇄하여 결정질 고체를 수득하고, 여과하고, 고체를 진공 하에 건조시켜 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(250 mg, 1.045 mmol, 68.5% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 1.29분, [MH]+ = 209.3.
중간체 11: N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00030
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(2 mL) 중 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(250 mg, 1.045 mmol)의 용액에 K2CO3(433 mg, 3.13 mmol)을 첨가한 후 (1-브로모에틸)벤젠(232mg, 1.253 mmol)을 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(3x 15 mL), 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 이는 2개의 위치이성질체를 나타내었다.
위치이성질체 1
LCMS (10분 방법 D): Rt = 3.40분, [MH]+ = 313.1.
위치이성질체 2
LCMS (10분 방법 D): Rt = 3.48분, [MH]+ = 313.1.
중간체 12: 메틸 1-토실-1 H -인돌-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00031
질소 하에 0℃에서 교반된 DMF(15 mL) 중 메틸 1H-인돌-5-카르복실레이트(2 g, 11.42 mmol)의 용액에 NaH(0.548 g, 13.70 mmol, 광유 중 60% 현탁액)를 조금씩 나누어 첨가한 다음, 반응 혼합물을 10분 동안 동일한 온도에서 교반하고, 이어서 rt에서 30분 동안 교반한 후, pTsCl(2.61 g, 13.70 mmol)을 조금씩 나누어 1분 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 25 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 냉수(3x 15 mL), 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 60-120 컬럼에 첨가하고, n-헥산 중 15% EtOAc로 용리하고, 수집된 순수한 분획을 감압 하에 농축시켜 메틸 1-토실-1H-인돌-5-카르복실레이트(1.9 g, 5.59 mmol, 49.0% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 3.27분, [MH]+ = 330.0.
중간체 13: (1-토실-1 H -인돌-5-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00032
질소 하에 rt에서 교반된 DCM(20 mL) 중 메틸 1-토실-1H-인돌-5-카르복실레이트(1.9 g, 5.59 mmol)의 용액에 DIBAL-H(25.2 mL, 25.2 mmol, 톨루엔 중 1M 용액)의 용액을 1분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2.5 h 동안 교반하였다. 이후 반응물을 메탄올(0.226 mL, 5.59 mmol)로 -78℃에서 켄칭한 다음. 주위 온도로 가온시켰다. 반응 덩어리를 포화된 Rochelle 염 용액(120 mL)으로 희석하고, 16 h 동안 교반한 다음, 층을 분리하고, 수성상을 DCM(2x 100 mL)으로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 n-펜탄(3x 2 mL)으로 분쇄한 다음 진공 하에 건조시켜 (1-토실-1H-인돌-5-일)메탄올(1.70 g, 5.41 mmol, 97% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 2.72분, [MH]+ = 300.0.
중간체 14: 5-(브로모메틸)-1-토실-1 H -인돌
Figure 112019099269087-pct00033
질소 하에 rt에서 교반된 DCM(20 mL) 중 (1-토실-1H-인돌-5-일)메탄올(1.70 g, 5.41 mmol)의 용액에 HBr(0.294 mL, 5.41 mmol)의 용액을 1분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 4 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 10분 동안 rt에서 교반한 다음, 여과하고, 고체 생성물을 진공 하에 건조시켜 5-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌(1.48 g, 3.49 mmol, 65% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 3.47분, [MH]+ = 365.9.
중간체 15: N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1-((1-토실-1 H -인돌-5-일)메틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00034
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(2 mL) 중 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(300 mg, 1.366 mmol)의 용액에 K2CO3(566 mg, 4.10 mmol)를 첨가한 후, 5-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌(703 mg, 1.640 mmol)을 1분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 1 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물(420 mg)을 위치이성질체의 혼합물로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 2.82분, [MH]+ = 492.0. 위치이성질체 1
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 2.85분, [MH]+ = 492.0. 위치이성질체 2
중간체 16: N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1-((1-토실-1 H -인돌-4-일)메틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00035
질소 하에 rt에서 교반된 아세톤(1 mL) 중 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(300 mg, 1.366 mmol)의 용액에 K2CO3(566 mg, 4.10 mmol)를 첨가한 후, 4-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌(597 mg, 1.640 mmol)을 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x25 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(3x 15 mL), 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 위치이성질체의 혼합물(550 mg)로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
LCMS (10분 방법 D): Rt = 4.39분, [MH]+ = 492.1. 위치이성질체 1
LCMS (10분 방법 D): Rt = 4.44분, [MH]+ = 492.1. 위치이성질체 2
중간체 17: N 3 , N 5 -디메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00036
1H-피라졸-3,5-디카르복실산(200 mg, 1.281 mmol), 메탄아민(THF 중 2M, 0.705 mL, 1.409 mmol) 및 HATU(536 mg, 1.409 mmol)를 DMF(2 mL)에서 합쳤다. DIPEA(0.448 mL, 2.56 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 N2 하에 2 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 미정제물을 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.37분, [MH]+ = 183.1.
중간체 18: 4-브로모-1-토실-1 H -피롤로[2,3-c]피리딘
Figure 112019099269087-pct00037
4-브로모-1H-피롤로[2,3-c]피리딘(5 g, 25.4 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨)을 DMF(50 mL)에 용해하고, 얼음 조에서 질소 하에 냉각한 다음, NaH(광유 중 60% 현탁액, 1.319 g, 33.0 mmol)를 조금씩 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 후 토실 클로라이드(5.32 g, 27.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하여, 이를 rt로 가온시킨 다음, 혼합물을 물(100 mL)로 희석하고, 30분 동안 교반시켜 백색 현탁액을 제공하였다. 이것을 여과하고, 고체를 물로 세척한 다음, 건조시켜 무색 고체를 제공하였다. 미정제 생성물을 에테르(20 mL)에 현탁하고, 5분 동안 교반한 다음, 사이클로헥산(20 mL)으로 희석하고, 여과시켜 요망되는 생성물(7.9 g, 22.49 mmol, 89% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.24분, [MH]+ = 351/353
중간체 19: 메틸 1-토실-1 H -피롤로[2,3- c ]피리딘-4-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00038
4-브로모-1-토실-1H-피롤로[2,3-c]피리딘(7.8 g, 22.21 mmol) 팔라듐(II) 아세테이트(0.499 g, 2.221 mmol) 및 xantphos(1.285 g, 2.221 mmol)를 둥근 바닥 플라스크에서 합치고, 이를 수바(suba) 시일로 밀봉하고, 질소로 퍼징하였다. DMF(20 mL), Et3N(9.29 mL, 66.6 mmol) 및 메탄올(17.97 mL, 444 mmol)을 첨가하고, 용기를 풍선으로부터 일산화탄소로 퍼징한 다음, CO 대기 하에 밤새 가열하였다. 혼합물을 물(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL)로 추출하고, 유기층을 10% LiCl 수용액으로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 50 g 실리카 컬럼 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜 요망되는 생성물(4.4 g, 13.32 mmol, 60% 수율)을 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.12분, [MH]+ = 331.1
중간체 20: (1-토실-1 H -피롤로[2,3- c ]피리딘-4-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00039
메틸 1-토실-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-4-카르복실레이트(510 mg, 1.544 mmol)를 질소 하에 DCM(15 mL)에 취하고, -78℃로 냉각하였다. DIBAL-H(THF 중 1M, 15.44 mL, 15.44 mmol)를 반응물에 적가하고, 이를 -78℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응물을 메탄올(15 mL 적가)로 -78℃에서 켄칭시킨 다음 rt로 가온하였다. Rochelle 염(25 mL의 물에서 포화됨)을 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 분리하고, 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 이 고체를 DCM(15 mL)에 취하고, 질소 하에 두고, -78℃로 냉각하였다. DIBAL-H(THF 중 1M, 15.44 mL, 15.44 mmol)를 적가한 다음, 반응물을 -40℃ 이하로 가온시켰다. 이것을 이 온도에서 5 h 동안 교반하였다. 반응물을 메탄올(15 mL 적가)로 -40℃에서 켄칭시킨 다음 rt로 가온하였다. Rochelle 염(30 mL의 물에서 포화됨)을 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 분리하고, 유기층을 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 농축시켜 황색 오일(486 mg)을 수득하였다. 미정제 생성물을 사이클로헥산 중 5-50%(3:1 EtOAc:EtOH)로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(148 mg, 0.416 mmol, 27% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.57분, [MH]+ = 303.1
중간체 21: 1-(1-토실-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-4-일)에타논
Figure 112019099269087-pct00040
1-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)에탄-1-온(500 mg, 3.12 mmol, 예를 들어, Activate Scientific으로부터 시판됨)을 DMF(5 mL)에 용해시키고, 얼음-조에서 질소 대기 하에 0℃로 냉각하였다. 소듐 하이드라이드(광유 중 60%, 150 mg, 3.75 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 후 rt로 30분 동안 가온시켰다. 토실 클로라이드(714 mg, 3.75 mmol)를 첨가하여 오렌지색 현탁액(발열성 첨가)을 제공하고, 반응 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-조에서 0℃로 냉각하고, 물(3 mL)의 적가에 의해 켄칭시켰다. 이후 이것을 에틸 아세테이트(20 mL)와 포화된 LiCl 수용액(20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트로 추가로 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 약 1.5 g의 미정제 갈색 잔류물을 수득하였다. 이것을 5-50% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 요망되는 생성물(438 mg, 1.254 mmol, 40% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.12분, [MH]+ = 315
중간체 22: 1-(1-토실-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-4-일)에탄올
Figure 112019099269087-pct00041
에탄올(10 mL) 중 1-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)에탄-1-온(438 mg, 1.393 mmol)의 현탁액에 THF(4 mL)를 첨가하여 반응 혼합물을 용해시킨 후, 소듐 보로하이드라이드(58.0 mg, 1.533 mmol)를 얼음-조에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 대기 하에 rt에서 1 h 동안 교반하였다. 1M HCl 용액(20 mL)을 첨가하고, 수성층을 DCM으로 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(소수성 프릿) 농축시켜 요망되는 생성물(493 mg, 1.325 mmol, 95% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.98분, [MH]+ = 317
중간체 23: 메틸 1-토실-1 H -인돌-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00042
메틸 1H-인돌-5-카르복실레이트(4.31 g, 24.60 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)를 DMF(50 mL)에 취하고, 0℃로 냉각하였다. NaH(광유 중 60% 현탁액, 1.181 g, 29.5 mmol)를 조금씩 첨가하고, 반응물을 1 h 동안 교반하였다. 토실 클로라이드(5.63 g, 29.5 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt로 가온하고, 밤새 교반하였다. 추가 NaH(0.480 g, 광유 중 60% 현탁액)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 1 h 동안 교반하였다. 반응물을 물(25 mL)로 켄칭시켰다. 물(175 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 250 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 염수(200 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 갈색 고체를 수득하였다. 1:1 MeOH:DCM(50 mL)을 미정제 생성물에 첨가하고, 자유 흐름 실리카를 첨가하였다(5 g). 용매를 진공에서 제거하고, 실리카를 100 g 실리카겔 컬럼 카트리지 상에 로딩하고, 사이클로헥산 중 5-25% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 분획을 합치고, 진공에서 농축시키고. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 340 g 실리카겔 컬럼 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 0-25% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(6.463 g, 18.64 mmol, 76% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.27분, [MH]+ = 330.4
중간체 24: 1-(1-토실-1 H -인돌-5-일)에타논
Figure 112019099269087-pct00043
1-(1H-인돌-5-일)에탄-1-온(1 g, 6.28 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨)을 DMF(10 mL)에 취하고, 0℃로 냉각하였다. NaH(0.302 g, 7.54 mmol, 광유 중 60% 현탁액)를 조금씩 첨가하고, 15분 동안 교반하였다. 토실-Cl(1.437 g, 7.54 mmol)을 첨가하고, 반응물을 rt로 가온시키고, 1.5 h 동안 교반하였다. 추가 NaH(63 mg, 0.25 eq., 광유 중 60% 현탁액)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 물(40 mL)로 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 50 mL)로 추출하고, 합친 유기물을 염수(75 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 갈색 고체를 수득하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 100 g 울트라 SNAP 카트리지에 적용하고, DCM 중 0-5% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 1-(1-토실-1H-인돌-5-일)에탄-1-온(1.408 g, 4.27 mmol, 68% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.20분, [MH]+ = 314.3.
중간체 25: 1-(1-토실-1 H -인돌-5-일)에탄올
Figure 112019099269087-pct00044
1-(1-토실-1H-인돌-5-일)에탄-1-온(1.394 g, 4.45 mmol)을 THF(40 mL)에 취하고, 얼음 조에서 0℃로 냉각하고, 질소 하에 두었다. 소듐 보로하이드라이드(0.337 g, 8.90 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 밤새 교반하였다. 추가 소듐 보로하이드라이드(0.169 g)를 첨가하고, 반응물을 2.5 h 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각하고, 1N HCl(20 mL)로 서서히 켄칭시켰다. 이후 이것을 DCM(2 x 25 mL)으로 추출하고, 합친 유기물을 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 농축시켜 1-(1-토실-1H-인돌-5-일)에탄-1-올(1.398 g, 4.21 mmol, 95% 수율)을 무색 검으로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.11분, [M-H]- = 314.3.
중간체 26: (1-토실-1 H -인돌-5-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00045
메틸 1-토실-1H-인돌-5-카르복실레이트(1.027 g, 3.12 mmol)를 질소 하에 THF(25 mL)에 취하고, -78℃로 냉각하였다. DIBAL-H(THF 중 1M, 8 mL, 8.00 mmol)를 10분 동안 적가하고, 반응물을 -78℃에서 4 h 동안 교반하였다. 반응물을 rt로 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 -78℃로 냉각하고, DIBAL-H(THF 중 1M, 6.5 mL, 6.50 mmol)를 10분 동안 적가하였다. 이후 반응물을 rt로 가온하고, 1.5 h 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각하고, MeOH(10 mL 적가)로 켄칭시켰다. 포화된 Rochelle 염(50 mL)을 첨가하고, 반응물을 rt로 가온하였다. 물(50 mL) 및 DCM(50 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 용리하고, 진공에서 농축시켜 무색 오일을 수득하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 실리카겔 컬럼에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-50% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(876 mg, 2.76 mmol, 89% 수율)을 무색 검으로 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.98분, [MH]+ = 317
중간체 27: 1-(1-토실-1 H -인돌-4-일)에타논
Figure 112019099269087-pct00046
1-(1H-인돌-4-일)에탄-1-온(500 mg, 3.14 mmol, 예를 들어, Activate Scientific으로부터 시판됨)을 DMF(5 mL)에 용해시키고, 얼음-조에서 질소 대기 하에 0℃로 냉각하였다. 소듐 하이드라이드(151 mg, 3.77 mmol, 광유 중 60% 현탁액)를 조금씩 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 후 30분 동안 rt로 가온시켰다. 토실 클로라이드(719 mg, 3.77 mmol)를 첨가하여 오렌지색 현탁액(발열성 첨가)을 제공하고, 반응 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-조에서 0℃로 냉각하고, 물(3 mL)의 적가에 의해 켄칭시켰다. 이후 이것을 에틸 아세테이트(20 mL)와 포화된 LiCl 수용액(20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트로 추가로 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 1.11 g의 미정제 갈색 잔류물을 제공하였다. 이것을 5-30% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리하며 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜 요망되는 생성물(809 mg, 2.323 mmol, 74% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.24분, [MH]+ = 314
중간체 28: 1-(1-토실-1 H -인돌-4-일)에탄올
Figure 112019099269087-pct00047
에탄올(20 mL) 중 1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에탄-1-온(803 mg, 2.56 mmol)의 현탁액에 소듐 보로하이드라이드(107 mg, 2.82 mmol)를 얼음-조에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 대기 하에 rt에서 1.5 h 동안 교반하였다. THF(17 mL)를 첨가하여 반응 혼합물을 용해시키고, 이를 rt에서 추가 2 h 동안 교반하였다. 추가 부분의 소듐 보로하이드라이드(107 mg, 2.82 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. 1M HCl 용액(20 mL)을 첨가하고, 수성층을 DCM으로 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(소수성 프릿), 농축시켜 요망되는 생성물(797 mg, 2.274 mmol, 89% 수율)을 분홍색 고체로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.12분, [MH]- = 314.2
중간체 29: 메틸 1-토실-1 H -인돌-4-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00048
메틸 1H-인돌-4-카르복실레이트(5 g, 28.5 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 시판됨)를 DMF(50 mL)에 취하고, 얼음-조에서 냉각하였다. NaH(광유 중 60% 현탁액, 1.370 g, 34.2 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 토실 클로라이드(6.53 g, 34.2 mmol)를 첨가하고, 반응물을 교반하고, 밤새 가온시켰다. 반응물을 얼음-조에서 냉각하고, 물(200 mL)로 신중하게 켄칭시켰다. 혼합물을 EtOAc(2 x 250 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 염수(200 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 용리한 다음, 진공에서 농축시켜 갈색 고체를 제공하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 100 g 실리카겔 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-25% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(6.554 g, 18.90 mmol, 66% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.32분, [MH]+ = 330.2
중간체 30: (1-토실-1 H -인돌-4-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00049
메틸 1-토실-1H-인돌-4-카르복실레이트(6.248g, 18.97 mmol)를 질소 하에 DCM(200 mL)에 취하고, -78℃로 냉각하였다. DIBAL-H(1M, 83 mL, 83 mmol)를 약 30분 동안 서서히 첨가하고, 반응물을 -78℃에서 90분 동안 교반한 후 주말 내내 rt로 가온하였다. 반응물을 얼음-조에서 냉각하고, MeOH(0.1 mL 분취량 중 2 mL)로 서서히 켄칭시켰다. 포화된 Rochelle 염 용액(200 mL)을 첨가하고, 혼합물을 교반하고, rt로 3 h 동안 가온시켰다. 층을 분리하고, 유기층을 소수성 프릿을 통해 용리한 다음 진공에서 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 100 g 실리카겔 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-50% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(5.172 g, 16.30 mmol, 86% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.07분, [MH]+ = 301.2
중간체 31: 에틸 1-토실-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-4-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00050
에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-카르복실레이트(1.00 g, 5.26 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 시판됨)를 DMF(10 mL)에 취하고, 얼음 조에서 냉각하였다. NaH(광유 중 60% 현탁액, 0.252 g, 6.31 mmol)를 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 토실 클로라이드(1.203 g, 6.31 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt로 가온시키고, 1 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음 조에서 냉각하고, 물(5 mL)로 켄칭시켰다. 반응물을 진공에서 농축시키고, 염수(50 mL)를 잔류물에 첨가하고, 이를 에틸 아세테이트(2 x 50 mL)로 추출하였다. 이 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 갈색 고체를 수득하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 50 g 실리카겔 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-25%(3:1 EtOAc:EtOH)로 용리하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 크림색 고체를 수득하였다. 이 미정제 생성물을 1:2 MeOH:DCM(15 mL)에 취하고, 자유 흐름 실리카를 첨가하였다(10 g). 용매를 진공에서 제거하고, 실리카를 100 g 울트라 SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 사이클로헥산 중 5-25%(3:1 EtOAc:EtOH)로 용리하였다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(1.084 g, 2.52 mmol, 48% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.27분, [MH]+ = 345.1
중간체 32: (1-토실-1 H -피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00051
에틸 1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-카르복실레이트(936 mg, 2.72 mmol)를 질소 하에 DCM(25 mL)에 취하고, -78℃로 냉각하였다. DIBAL-H(THF 중 1M, 27.2 mL, 27.2 mmol)를 반응물에 적가하고, 반응물을 -78℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 MeOH(1 mL를 조금씩 첨가함)로 켄칭시킨 다음, rt로 가온시켰다. Rochelle 염(50 mL의 물에서 포화됨)을 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 유기층을 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 오렌지색 고체를 수득하였다. 수성층을 DCM(50 mL) 중 10% MeOH로 추출하였다. 2개의 생성된 유기층을 합치고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였다. 미정제 생성물을 합치고, 최소 DCM에서 25 g 실리카겔 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-40%(3:1 EtOAc:EtOH)로 용리시켰다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물을 백색 고체로서 수득하였다(659 mg, 2.07 mmol, 76% 수율).
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.92분, [MH]+ = 303.1
중간체 33: ( S )-메틸 1-(1-(4-클로로페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00052
메틸 3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(0.5 g, 2.73 mmol)를 THF(20 mL) 및 아세토니트릴(5 mL)에 취했다. (R)-1-(4-클로로페닐)에탄-1-올(0.4 mL, 2.96 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨) 및 Ph3P (1.078 g, 4.11 mmol)을 첨가하고, 반응물을 질소 하에 두고, 0℃로 냉각하였다. DIAD(0.8 mL, 4.11 mmol)를 적가하고, 반응물을 rt로 가온시키고, 90분 동안 교반되게 두었다. EtOAc(25 mL)를 반응 혼합물에 첨가한 다음, 물(50 mL)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 100 g 울트라 SNAP 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-50% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 요망되는 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 메틸 (S)-1-(1-(4-클로로페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(415 mg, 1.225 mmol, 45% 수율)를 무색 검으로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.08분, [MH]+ = 322.4.
다음 중간체는 중간체 33과 유사한 방식으로 제조되었다.
Figure 112019099269087-pct00053
Figure 112019099269087-pct00054
중간체 43: ( S )-메틸 1-(1-(3-클로로페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00055
메틸 3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(0.5 g, 2.73 mmol), (R)-1-(3-클로로페닐)에탄-1-올(0.513 g, 3.28 mmol), 시아노메틸렌트리부틸포스포란(CMBP)(1.432 mL, 5.46 mmol, 예를 들어, TCI로부터 시판됨) 및 톨루엔(10 mL)을 반응 용기에 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, Biotage 개시 마이크로파에서 150℃로 30분 동안 가열하였다. 반응물을 냉각시킨 후, 이것을 진공에서 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM에서 100 g 울트라 SNAP 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-60% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 메틸 (S)-1-(1-(3-클로로페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(462 mg, 1.364 mmol, 50% 수율)를 오렌지색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.09분, [MH]+ = 322.2.
다음 중간체는 중간체 43과 유사한 방식으로 제조되었다.
Figure 112019099269087-pct00056
Figure 112019099269087-pct00057
중간체 49: 3-(메틸카르바모일)-1-((1-토실-1 H -인돌-4-일)메틸)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00058
메틸 3-(메틸카르바모일)-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(265 mg, 0.426 mmol)를 메탄올(2.5 mL) 및 THF(2.5 mL)에 취했다. 물 중 1M LiOH(0.852 mL, 0.852 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 90분 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트와 물(각각 10 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 2M HCl을 사용하여 산성화한 다음, 에틸 아세테이트(2 x 10mL)로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(173.5 mg, 0.326 mmol, 77% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.13분, [MH]+ = 453.3
다음 중간체는 중간체 49와 유사한 방식으로 제조되었다.
Figure 112019099269087-pct00059
Figure 112019099269087-pct00060
Figure 112019099269087-pct00061
중간체 65: N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1-((1-토실-1 H -인돌-4-일)메틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00062
3-(메틸카르바모일)-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(173 mg, 0.382 mmol)을 DMF(5 mL)에 취했다. DIPEA(0.200 mL, 1.147 mmol)에 이어, HATU(218 mg, 0.573 mmol)를 첨가하고, 반응물을 5분 동안 교반시켜 갈색 용액을 제공하였다. 이후 (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민 하이드로클로라이드(제조를 위해, 중간체 94 참조, 57.0 mg, 0.421 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 밤새 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 소듐 바이카르보네이트(각각 15 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 2M HCl(15 mL), 염수(15 mL)로 세척한 다음, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 미정제 생성물을 황색 오일로서 수득하였다. 미정제 생성물을 사이클로헥산 중 10-60%(3:1 EtOAc:EtOH)로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(99.7 mg, 0.178 mmol, 46% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.09분, [MH]+ = 534.3
중간체 66: 1-((1 H -인돌-4-일)메틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00063
3-(메틸카르바모일)-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(139 mg, 0.307 mmol)을 THF(6 mL) 및 메탄올(3 mL)에 취했다. 세슘 카르보네이트(500 mg, 1.536 mmol)를 첨가하고, 반응물을 70℃에서 3.5 h 동안 교반시켰다. 반응물을 진공에서 농축시키고, 물(10 mL)을 잔류물에 첨가한 다음, 이것을 2N HCl을 사용하여 산성화하고, 에틸 아세테이트(2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(91.5 mg, 0.291 mmol, 95% 수율)을 분홍색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.75분, [MH]+ = 299.1
중간체 67: (1 R ,5 S ,6 s )- 3차 -부틸 6-(1-((1 H -인돌-4-일)메틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복사미도)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00064
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(78.6 mg, 0.263 mmol)을 DMF(5 mL)에 취했다. HATU(150 mg, 0.395 mmol)에 이어, DIPEA(0.138 mL, 0.790 mmol)를 첨가하고, 반응물을 5분 동안 교반시켜 갈색 용액을 제공하였다. 3차-부틸 (1R,5S,6s)-6-아미노-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-카르복실레이트, 하이드로클로라이드(68.0 mg, 0.290 mmol, 예를 들어, Astatech로부터 시판됨)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 1 h 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트와 소듐 바이카르보네이트(각각 10 mL) 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 유기층을 2N HCl(10 mL), 염수(10 mL)로 세척한 다음, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 미정제 생성물을 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 생성물을 최소 DCM(몇 방울의 MeOH과 함께)에서 10 g 울트라 SNAP 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중 5-50%(3:1 EtOAc:EtOH)으로 용리시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(93.8 mg, 0.186 mmol, 71% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.00분, [MH]+ = 479
중간체 68: 3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00065
소듐 하이드록사이드(6 mL, 12.00 mmol, 2M 수용액)를 에탄올(10 mL) 중 에틸 3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(1 g, 5.88 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반한 다음, 진공에서 원래 부피의 절반으로 증발시키고, 2M HCl을 사용하여 약 pH 2로 산성화하였다. 용액을 소듐 클로라이드로 포화시킨 후(고체를 첨가하고 혼합물을 1 h 동안 교반함), 10% MeOH/DCM(5 x 10 mL)으로 일차 추출한 다음 EtOAc(5 x 10 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(0.65 g, 4.57 mmol, 78% 수율)을 무색 검으로서 수득하였다. 이것을 미정제물로서 후속 반응에 사용하였다.
중간체 69: 6-아미노바이사이클로[3.1.0]헥산-3-올
Figure 112019099269087-pct00066
3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(650 mg, 4.57 mmol)을 톨루엔(10 mL) 및 3차-부탄올(10 mL)에 용해시킨 다음, Et3N(1.275 mL, 9.15 mmol) 및 디페닐 포스포르아지데이트(1.478 mL, 6.86 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 물(20 mL)로 세척하고, 용매를 건조시키고, 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 이것을 DCM(10 mL)에 용해시키고, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하고, 닌하이드린 활성 분획을 진공에서 증발시켜 3개 배치의 불순한 Boc-보호된 아민 중간체(각각 상이한 부분입체이성질체를 주요 성분으로 할 것임)인 배치 A(105 mg), 배치 B(122 mg) 및 배치 C(85 mg)를 제공하였다. 이들 각각을 DCM(3 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL)를 첨가하고, 용액을 1 h 동안 교반한 다음, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 5 g SCX 카트리지 상에 로딩하였다. 이들을 메탄올로 세척한 다음 2M 메탄올성 암모니아로 용리시켰다. 용리액을 진공에서 증발시켜 3개 배치의 생성물을 담황색 유리(각각 상이한 부분입체이성질체를 주요 성분으로 할 것임)인 배치 A(15 mg), 배치 B(12 mg) 및 배치 C(14 mg)로서 제공하였다. 생성물을 미정제물로서 사용하여 후속 반응에서 커플링시켰다.
중간체 70: 3차 -부틸(사이클로펜트-3-엔-1-일옥시)디메틸실란
Figure 112019099269087-pct00067
사이클로펜트-3-엔-1-올(5 g, 59.4 mmol, 예를 들어, Astatech로부터 시판됨)을 DCM(100 mL)에 용해시키고, TBDMS-Cl(8.96 g, 59.4 mmol) 및 이미다졸(4.86 g, 71.3 mmol)을 첨가한 다음, 생성된 현탁액을 rt에서 주말 내내 교반하였다. 혼합물을 물(2 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 3차-부틸(사이클로펜트-3-엔-1-일옥시)디메틸실란(12.05 g, 60.7 mmol, 102% 수율)을 담황색 액체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.68 (s, 2 H) 4.50 - 4.62 (m, 1 H) 2.59 (dd, J=14.9, 6.8 Hz, 2 H) 2.23 - 2.37 (m, 2 H) 0.91 (s, 9 H) 0.09 (s, 6 H).
중간체 71: (1 R ,5 S ,6 r )-에틸 3-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00068
에틸 디아조아세테이트 (6.90 mL, 66.5 mmol)를 DCM(150 mL)에 용해시키고, 약 5 h 동안 DCM(150 mL) 중 로듐(II) 아세테이트 이량체(1 g, 2.263 mmol) 및 3차-부틸(사이클로펜트-3-엔-1-일옥시)디메틸실란(12 g, 60.5 mmol)의 혼합물에 rt에서 적가하였다. 생성된 녹색 용액을 밤새 교반한 다음, 진공에서 증발시켜 녹색 액체를 제공하였다. 이것을 340 g 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 0-40% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하고, 분획의 TLC 플레이트를 과망간산염 딥(permanganate dip)을 사용하여 시각화하였다. 활성 분획을 진공에서 증발시켜 에틸 (1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(5.5g, 19.33 mmol, 32.0% 수율)를 무색 액체로서, 실릴 에테르 위치에서의 이성질체의 혼합물(약 3:1 비)로서 제공하였고, 이는 미정제물로서 다음 단계로 진행되었다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.96분, [MH]+ = 존재하지 않음.
중간체 72: (1 R ,5 S ,6 r )-3-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00069
소듐 하이드록사이드(20 mL, 40.0 mmol, 2M 수용액)를 에탄올(50 mL) 중 에틸 (1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(5.0 g, 17.58 mmol)의 용액에 rt에서 첨가하고, 혼합물을 3 h 동안 교반하였다. TLC는 모든 출발 물질이 소비되었다고 제안하였고, 혼합물을 진공에서 약 30 mL의 부피로 증발시킨 다음, 물(30 mL)로 희석하고, 에테르(50 mL)로 세척하였다. 워크업으로부터 에테르 세척물을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 회수된 출발 물질: 에틸 (1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(3.85 g)을 제공하였다. 이것을 에탄올(30 mL)에 용해시키고, 2M NaOH 수용액(20 mL)을 첨가한 다음, 혼합물을 70℃에서 3 h 동안 가열시킨 후, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 물(50 mL)에 용해시키고, 에테르(50 mL)로 세척한 다음, 수성층을 2M HCl(20 mL)로 산성화하고, EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 (1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(1.9 g, 7.41 mmol, 42.2% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였으며, NMR은 이성질체의 혼합물과 일치한다. 생성물은 정제 없이 다음 단계로 진행되었다.
중간체 73: 벤질 ((1 R ,5 S ,6 r )-3-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00070
(1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(1.8 g, 7.02 mmol)을 톨루엔(20 mL) 및 Et3N(1.957 mL, 14.04 mmol)의 혼합물에 용해시킨 다음, DPPA(1.815 mL, 8.42 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 rt에서 교반시켰다. 벤질 알콜(1.095 mL, 10.53 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 4 h 동안 가열한 다음, rt로 냉각시켰다. 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하고, 용액을 물(2 x 100 mL)로 세척한 다음, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공에서 증발시켜 담황색 오일을 제공하였다. 이것을 DCM(10 mL)에 용해시키고, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음, 0-30% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하고, 생성물-함유 분획(과망간산염 딥에 의해 검출됨)을 수집하고, 진공에서 증발시켜 벤질 ((1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(1.90 g, 5.26 mmol, 75% 수율)를 담황색 오일로서 수득하였으며, NMR은 약 2:1 비의 이성질체의 혼합물로서 요망되는 생성물과 일치한다. 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계로 진행시켰다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.56분, [MH]+ = 362.6.
중간체 74: (1 R ,5 S ,6 r )-3-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00071
벤질 ((1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(1.9 g, 5.26 mmol)를 에탄올(100 mL)에 용해시키고, H-큐브에서 대기압 및 1 mL/분의 유량으로 수소화시켰다. 용리액을 진공에서 증발시켜 (1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민(1.12 g, 4.92 mmol, 84% 수율)을 담황색 오일로서 제공하였다. 생성물은 약 65:35의 비를 갖는 실릴 에테르 위치에서의 불균형 부분입체이성질체의 혼합물이다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.22 ppm, 1H [A] (br.t, CH),　3.80 ppm 1H [B] (m, CH),　2.47 ppm, 1H [A] (t, CH),　2.05-1.93 ppm　2H [A] + 3H [B] (m, 5xCH),　1.75-1.66 ppm -NH2 [A] + -NH2 [B] + 2xCH [B},　1.62 ppm 2H, [A] (dd, 2xCH). 둘 모두의 부분입체이성질체가 할당됨.
1.20-1.15 ppm 2H [A] + 2H [B] (M, 4xCH), 0.86 ppm, 9H [A] (s, 3 x CH3) + 9H [B] (s, 3 x CH3),　0.00 ppm, 6H [A + B] (s, 2 x CH3)
중간체 75: N 5 -((1 r ,4 r )-4-하이드록시사이클로헥실)- N 3 -메틸-1-(1-(1-토실-1 H -인돌-4-일)에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00072
DMF(4 mL) 중 3-(메틸카르바모일)-1-(1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(255 mg, 0.547 mmol)의 용액에 HATU(312 mg, 0.820 mmol)에 이어 (1r,4r)-4-아미노사이클로헥산-1-올(126 mg, 1.093 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨) 및 DIPEA(0.477 mL, 2.73 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 rt에서 공기 중에서 5 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 DMF를 제거하고, 에틸 아세테이트와 포화된 LiCl 수용액 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고(소수성 프릿), 농축시켜 미정제 오렌지색 오일을 수득하였다. 이것을 0-50%(에틸 아세테이트 중 25% 에탄올)/에틸 아세테이트로 용리하며 실리카겔 컬럼 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜 요망되는 생성물(330 mg, 0.439 mmol, 80% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.07분, [M+Na]+ = 586
다음 중간체는 중간체 75와 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00073
Figure 112019099269087-pct00074
중간체 83: 1-((1 H -피롤로[2,3- c ]피리딘-4-일)메틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00075
메틸 3-(메틸카르바모일)-1-((1-토실-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-4-일)메틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(106 mg, 0.227 mmol)를 메탄올(1.5 mL) 및 THF(1.5 mL)에 취했다. 물 중 1M LiOH(0.453 mL, 0.453 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 밤새 교반시켰다. 추가의 물 중 1M LiOH(0.453 mL)를 첨가하고, 반응물을 4 h 동안 교반하였다. 잔류물을 물과 에틸 아세테이트(각각 10 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 2N HCl을 사용하여 산성화하고, 에틸 아세테이트(2 x 15 mL)로 추출하였다. 이후 수성층을 DCM 중 10% MeOH(2 x 15 mL)로 추출하고, 수성층을 진공에서 농축시켜 미정제 잔류물을 제공하였다. 미정제 생성물을 1:1 DMSO:MeCN(2 mL)에 용해시키고, 여과한 다음, MDAP(높은 pH)로 정제시켰다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 표제 화합물(22 mg, 0.051 mmol, 23% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.37분, [MH]+ = 300.2
중간체 84: ( S )- N 5 -(3,3-디에톡시프로필)- N 3 -메틸-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00076
(S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(121 mg, 0.443 mmol)을 DMF(2 mL)에 용해시켰다. HATU(255 mg, 0.671 mmol)를 첨가한 다음 3,3-디에톡시프로판-1-아민(0.12 mL, 0.742 mmol, 예를 들어, Acros로부터 시판됨)에 이어 DIPEA(0.39 mL, 2.233 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 3.25 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 LiCl(20 mL), Na2CO3(약 1 mL), 및 에틸 아세테이트(20 mL) 사이에서 분배시키고; 층을 분리하였다. 수성층을 추가 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 물(2 x 10 mL)로 역 추출하고, 소수성 프릿이 구비된 카트리지를 통해 여과시켰다. 여과액을 진공에서 증발시켜 무색 검을 제공하였다. 이것을 디클로로메탄에 재용해시키고, 10 g SNAP 실리카 카트리지의 상부에 직접 적용하고, SP4 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(0-60% 에틸 아세테이트/사이클로헥산)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합쳐 (S)-N 5-(3,3-디에톡시프로필)-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(103 mg, 0.230 mmol, 52% 수율)를 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.05분, [MH]+ = 403.2.
중간체 85: 2-(1,3-디하이드록시프로판-2-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure 112019099269087-pct00077
DMF(60 mL) 중 2-아미노프로판-1,3-디올(2.839 g, 31.2 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)의 용액에 이소벤조푸란-1,3-디온(4.62 g, 31.2 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)을 rt에서 적가하였다. 반응물을 90℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL)와 물(250 mL) 사이에서 분배시키고, 층을 분리하였다. 유기층을 분석하였고 생성물을 함유한 것으로 나타났다. 따라서 수성층을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추가 추출한 다음 합친 유기물을 물(2 x 50 mL) 및 포화된 LiCl 수용액(50 mL)으로 역 추출하였다. 이후 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 진공에서 농축시켜 2-(1,3-디하이드록시프로판-2-일)이소인돌린-1,3-디온(3.33 g, 15.05 mmol, 48% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.52분, [MH]+ = 222.2.
중간체 86: N 5 -(2-((2 r ,5 S )-5-(1,3-디옥사이소인돌린-2-일)-1,3-디옥산-2-일)에틸)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00078
톨루엔(3 mL) 중 (S)-N 5-(3,3-디에톡시프로필)-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(113 mg, 0.280 mmol), 2-(1,3-디하이드록시프로판-2-일)이소인돌린-1,3-디온(62 mg, 0.280 mmol) 및 p-톨루엔설폰산 모노하이드레이트(12 mg, 0.063 mmol)의 혼합물을 110℃에서 질소 하에 2 h 동안 교반하였다. 이후 반응 혼합물을 rt로 냉각하고, 휘발성분을 진공에서 증발시켜 황색 고체를 제공하였다. 이것을 DCM(10 mL) 중 10% 메탄올, 물(5 mL) 및 포화된 수성 Na2CO3(10 mL) 사이에서 분배시키고, 층을 분리하였다. 수성상을 DCM(3 x 10 mL) 중 10% 메탄올 및 에틸 아세테이트(5 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 소수성 프릿이 구비된 카트리지를 통해 여과하였다. 유기층을 진공에서 농축시켜 138 mg의 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 DCM에 취하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피(10 g SNAP 실리카 카트리지)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-디옥사이소인돌린-2-일)-1,3-디옥산-2-일)에틸)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(102 mg, 0.154 mmol, 55% 수율)를 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.10분, [MH]+ = 532.2.
중간체 87: ( S )- N 5 -(4,4-디에톡시부틸)- N 3 -메틸-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00079
(S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(125 mg, 0.457 mmol)을 DMF(2 mL)에 용해시켰다. HATU(272 mg, 0.715 mmol)를 첨가한 다음 4,4-디에톡시부탄-1-아민(0.13 mL, 0.752 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)에 이어 DIPEA(0.4 mL, 2.290 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 6 h 동안 교반하였다. 추가 HATU(209 mg, 0.549 mmol), 4,4-디에톡시부탄-1-아민(0.1 mL, 0.579 mmol) 및 이어서 DIPEA(0.1 mL, 0.573 mmol)를 첨가한 다음 추가 3 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 LiCl(20 mL)과 에틸 아세테이트(20 mL) 사이에서 분배시키고, 층을 분리하였다. 수성층을 추가 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 물(2 x 10 mL)로 역 추출하고, 소수성 프릿이 구비된 카트리지를 통해 여과하였다. 여과액을 진공에서 증발시켜 무색 검을 제공하였다. 이것을 디클로로메탄에 재용해시키고, 10 g SNAP 실리카 카트리지의 상부에 직접 적용하고, SP4 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(0-70% 에틸 아세테이트/사이클로헥산)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 (S)-N 5-(4,4-디에톡시부틸)-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(190 mg, 0.411 mmol, 90% 수율)를 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.07분, [M-H]- = 415.3.
중간체 88: N 5 -(3-((2 r ,5 S )-5-(1,3-디옥사이소인돌린-2-일)-1,3-디옥산-2-일)프로필)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00080
톨루엔(4 mL) 중 (S)-N 5-(4,4-디에톡시부틸)-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(190 mg, 0.456 mmol), 2-(1,3-디하이드록시프로판-2-일)이소인돌린-1,3-디온(112 mg, 0.506 mmol) 및 p-톨루엔설폰산 모노하이드레이트(19 mg, 0.100 mmol)의 혼합물을 110℃에서 질소 하에 2 h 동안 교반하였다. 이후 반응 혼합물을 rt로 냉각하고, 휘발성분을 진공에서 증발시켜 황색 고체를 제공하였다. 이것을 DCM(10 mL) 중 10% 메탄올, 물(5 mL) 및 포화된 수성 Na2CO3(10 mL) 사이에서 분배시키고, 층을 분리하였다. 수성상을 DCM(3 x 10 mL) 중 10% 메탄올 및 에틸 아세테이트(5 mL)로 추출하고, 유기층을 합치고, 소수성 프릿이 구비된 카트리지를 통해 여과하였다. 유기층을 진공에서 농축시켜 207 mg의 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 DCM에 취하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피(25 g SNAP 실리카 카트리지)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 N 5-(3-((2r,5S)-5-(1,3-디옥사이소인돌린-2-일)-1,3-디옥산-2-일)프로필)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(81 mg, 0.119 mmol, 26% 수율)를 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.12분, [MH]+ = 546.2.
중간체 89: ( S )-2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에탄올
Figure 112019099269087-pct00081
(S)-1-페닐에탄-1,2-디올(251 mg, 1.817 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)을 DCM(7 mL)에 용해시킨 후 DMAP(22 mg, 0.180 mmol)를 첨가하였다. 용액을 0℃로 냉각시킨 후 트리에틸아민(0.380 mL, 2.72 mmol)을 첨가하고, DCM(3 mL) 중 TBDMS-Cl(411 mg, 2.72 mmol)을 적가하였다. 이후 반응 혼합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 NH4Cl(7 mL)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성물을 DCM(2 x 10 mL)으로 재추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고, 진공에서 농축시켜 448 mg의 미정제 생성물을 수득하였고 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.41분, [M-H]- = 251.1.
중간체 90: ( R )-메틸 1-(2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00082
메틸 3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(216 mg, 1.179 mmol), 톨루엔(2.5 mL) 중 (S)-2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에탄-1-올(327 mg, 1.297 mmol), 트리-n-부틸포스핀(0.582 mL, 2.359 mmol) 및 2-(트리부틸포스포라닐리덴)아세토니트릴(0.464 mL, 1.769 mmol)을 합쳤다. 반응 혼합물을 5 mL 마이크로파 바이알에서 120℃로 45분 동안 가열하였다. 추가 (S)-2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에탄-1-올(119 mg, 0.471 mmol)을 반응 혼합물에 첨가한 후 45분 동안 120℃에서 마이크로파로 가열하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 1.574 g의 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 DCM에 재용해시키고, 0-65% EtOAc:사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피(100 g SNAP 실리카 카트리지)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 메틸 (R)-1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(276 mg, 0.562 mmol, 48% 수율)를 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.42분, [MH]+ = 418.4.
중간체 91: ( S )-3-(메톡시카르보닐)-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00083
물(20 mL) 중 LiOH(0.888 g, 21.16 mmol)를 메탄올(50 mL) 및 2-MeTHF(50 mL) 중 디메틸 (S)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트(6.1 g, 21.16 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하고, 용액을 0℃에서 2 h 동안 교반한 다음, 2M HCl(12 mL)로 산성화하고, 진공에서 원래 부피의 절반으로 증발시켰다. 혼합물을 pH 2로 추가 산성화한 다음, EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하고, 합친 유기물을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 무색 검을 제공하였다. 이것을 DCM에 용해시키고, 100 g 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음, 0-50%(EtOAc 중 1% AcOH)/사이클로헥산으로 용리하고, 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 (S)-3-(메톡시카르보닐)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(4.2 g, 15.31 mmol, 72% 수율)을 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.00분, [MH]+ = 275.2.
중간체 92: (1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00084
LiOH(751 mg, 31.4 mmol)를 물(10 mL), THF(10 mL) 및 MeOH(10 mL) 중 (1R,5S,6r)-에틸 3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(1000 mg, 6.27 mmol, 예를 들어, Pharmablock로부터 시판됨)의 용액에 rt에서 첨가하였다. 생성된 현탁액을 3 h 동안 교반하였다. 워크-업을 위해, 혼합물을 증발시키고, 남아 있는 미정제 고체를 최소량의 물에 용해시키고, HCl(5 mL, 25% m/m)로 켄칭하고, MeOH/DCM 용매로 4회 추출하고, 합친 유기상을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 요망되는 화합물 (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(750 mg, 5.85 mmol, 93% 수율)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.13 (s, 1 H) 3.80 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 3.62 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.00 - 2.15 (m, 2 H) 1.32 (t, J=3.1 Hz, 1 H)
중간체 93: 벤질 (1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일카르바메이트
Figure 112019099269087-pct00085
(1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(340 mg, 2.65 mmol)을 톨루엔(12 mL)에 용해시킨 다음, Et3N(1.110 mL, 7.96 mmol), 디페닐 포스포르아지데이트(0.686 mL, 3.18 mmol) 및 벤질 알콜(0.552 mL, 5.31 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 2 h 동안 가열하였다. 용액을 EtOAc(10 mL)로 희석하고, 물(10 mL) 및 NaHCO3 용액(10 mL)으로 세척하고, 유기층을 건조시키고, 증발시키고, 잔류물을 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 25 g 실리카 컬럼 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하고, 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 벤질 (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일카르바메이트(460 mg, 1.972 mmol, 74.3% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.83분, [MH]+ = 234.3.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.29 - 7.41 (m, 5 H) 5.11 (br. s., 2 H) 4.86 (br. s., 1 H) 3.98 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.72 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.45 - 2.52 (m, 1 H) 1.80 (br. s, 2 H)
중간체 94: (1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 하이드로클로라이드
Figure 112019099269087-pct00086
벤질 (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일카르바메이트(460 mg, 1.972 mmol)를 EtOH(20 mL)에 용해시키고, 반응물을 H-큐브(설정: rt, 1 bar, 1 mL/분 유량) 및 촉매로서 10% Pd/C CatCart 30을 사용하여 수소화시켰다. 반응물을 H-큐브를 통해 1.5 h 동안 순환시킨 후 혼합물을 HCl(7M 수성, 1.332 mL, 9.86 mmol)로 산성화하고, 진공에서 증발시켜 유성 고체를 수득하였다. 고체를 진공에서 2일 동안 건조시켜 요망되는 생성물 (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 하이드로클로라이드(262 mg, 1.836 mmol, 93% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.48 (br. s., 3 H) 3.80 (d, J=8.8 Hz, 2 H) 3.59 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.24 (t, J=2.3 Hz, 1 H) 2.07 (t, J=2.6 Hz, 2 H).
중간체 95: 4-메톡시사이클로펜트-1-엔
Figure 112019099269087-pct00087
사이클로펜트-3-엔-1-올(10 g, 119 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨)을 DMF(100 mL) 및 THF(50 mL)의 혼합물에 용해시키고, 얼음 조에서 질소 하에 냉각시킨 다음, NaH(광유 중 60% 현탁액, 5.71 g, 143 mmol)를 조금씩 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반한 다음 MeI(9.66 mL, 155 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 2 h 동안 교반한 다음, 물(500 mL)에 첨가하고, 에테르(500 mL)로 추출하였다. 유기층을 물(2 x 200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 요망되는 생성물을 담황색 액체로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 후속 반응으로 진행시켰다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.61 - 5.82 (m, 2 H) 4.13 (dt, J=6.72, 3.48 Hz, 1 H) 3.35 (s, 3 H) 2.59 (dd, J=15.77, 6.72 Hz, 2 H) 2.32 - 2.47 (m, 2 H)
중간체 96: 에틸 3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00088
에틸 디아조아세테이트(82 mL, 119 mmol)를 DCM(100 mL)에 용해시키고, DCM(100 mL) 중 4-메톡시사이클로펜트-1-엔(제조를 위해, 중간체 95 참조, 11.68 g, 119 mmol) 및 로듐(II) 아세테이트 이량체(2.63 g, 5.95 mmol)의 혼합물에 rt에서 4 h 동안 적가한 다음, 혼합물을 추가 2 h 동안 교반한 후, 물(300 mL)로 세척하고, 유기층을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 미정제 옅은 녹색 액체를 제공하였다. 이것을 사이클로헥산에 용해시키고, 100 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 0-20% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 진공에서 증발시켜 에틸 3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(1.4 g, 7.60 mmol, 6% 수율)를 일부 잔류 에틸 디아조아세테이트도 함유하는 이성질체의 혼합물로서 무색 오일로서 제공하였다. 이것을 임의의 추가 정제 없이 후속 반응에 이용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.26 (q, J=7.09 Hz, 2 H) 3.51 (m, J=7.50, 7.50 Hz, 1 H) 3.25 (s, 3 H) 2.26 (dd, J=13.08, 6.97 Hz, 2 H) 1.89 (td, J=2.93, 1.22 Hz, 2 H) 1.74 - 1.83 (m, 2 H) 1.27 - 1.34 (m, 4 H)
중간체 97: 3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00089
에틸 3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(제조를 위해, 중간체 96 참조, 1.4 g, 7.60 mmol)를 에탄올(10 mL)에 용해시키고, 2M NaOH(10 mL, 20.00 mmol)의 수용액을 첨가한 다음, 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고, 잔류물을 2M HCl(aq.)(11 mL)로 산성화한 다음, EtOAc(2 x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 담황색 오일을 제공하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.54 (m, J=7.50, 7.50 Hz, 1 H) 3.28 (s, 3 H) 2.30 (dd, J=13.20, 7.09 Hz, 2 H) 1.99 (td, J=2.93, 1.22 Hz, 2 H) 1.74 - 1.89 (m, 2 H) 1.31 (t, J=2.93 Hz, 1 H). 교환 가능한 양성자가 관찰되지 않음.
중간체 98: 3차 -부틸 (3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트
Figure 112019099269087-pct00090
3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(제조를 위해, 중간체 97 참조, 0.74 g, 4.74 mmol), 디페닐 포스포릴 아지드(1.956 g, 7.11 mmol) 및 Et3N(1.321 mL, 9.48 mmol)를 톨루엔(20 mL)에 용해시키고, 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 3차-부탄올(6 mL)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 3 h 동안 가열한 다음, rt에서 밤새 정치시켰다. 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석한 다음, 물과 소듐 바이카르보네이트 수용액으로 세척하고, 진공에서 증발시켰다. 생성된 검을 DCM에 용해시키고, 25 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음, 0-30% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 3차-부틸 (3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(0.45 g, 1.980 mmol, 42% 수율)를 무색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.58 (br. s, 1 H) 3.48 (quin, J=7.34 Hz, 1 H) 3.26 (s, 3 H) 2.24 (dd, J=12.84, 6.97 Hz, 2 H) 2.16 (br. s., 1 H) 1.71 - 1.80 (m, 2 H) 1.39 - 1.49 (m, 11 H)
중간체 99: 3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 하이드로클로라이드
Figure 112019099269087-pct00091
3차-부틸 (3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(제조를 위해, 중간체 98 참조, 380 mg, 1.672 mmol)를 HCl(디옥산 중 4M, 5 mL, 20.00 mmol)에 용해시키고, 반응 혼합물을 rt에서 5 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 3-메톡시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민 하이드로클로라이드(270 mg, 1.402 mmol, 84% 수율)를 연갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.20 (br. s., 3 H) 3.54 (m, J=7.30 Hz, 1 H) 3.16 (s, 3 H) 2.25 (br. s., 1 H) 2.05 - 2.14 (m, 2 H) 1.60 - 1.70 (m, 4 H)
중간체 100: 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온
Figure 112019099269087-pct00092
건조 THF(20 mL) 중 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(5.45 g, 34.9 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)의 용액에 소듐 하이드라이드(광유 중 60%, 2.79 g, 69.8 mmol)를 0℃에서 질소 하에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 rt에서 1 h 동안 교반한 다음 메틸 아이오다이드(5.45 mL, 87 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 rt로 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 암모늄 클로라이드 용액(50 mL)으로 켄칭시키고, 수성층을 에틸 아세테이트(2x 80 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시켰다. 유기층을 진공에서 농축시켜 약 6.8 g의 미정제 황색 잔류물을 수득하였다. 이것을 SiO2 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜(Biotage SNAP 울트라 100 g 카트리지, 5-65% 디에틸 에테르/사이클로헥산으로 용리함) 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(3.07 g, 14.16 mmol, 41% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.78분, [MH]+ = 185.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.95 - 4.06 (m, 4 H) 2.56 - 2.64 (m, 2 H) 2.02 (d, J=1.26 Hz, 2 H) 1.87 - 1.94 (m, 2 H) 1.19 (s, 6 H)
중간체 101: 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올
Figure 112019099269087-pct00093
메탄올(10 mL) 중 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(제조를 위해, 중간체 100 참조, 3.04 g, 16.50 mmol)의 용액에 0℃(얼음-조)에서 소듐 보로하이드라이드(0.624 g, 16.50 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 rt에서 1 h 동안 교반하였다. 물(10 mL)을 첨가하고, 메탄올을 진공에서 제거하였다. 반응 혼합물을 물과 DCM 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 DCM(2x 20 mL)으로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(소수성 프릿), 진공 하에 농축시켜 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(2.87 g, 13.10 mmol, 79% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.62분, [MH]+ = 187.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.82 - 4.04 (m, 4 H) 3.42 (ddd, J=8.31, 4.66, 3.40 Hz, 1 H) 1.53 - 1.90 (m, 5 H) 1.40 - 1.50 (m, 2 H) 1.03 (br. s., 6 H)
중간체 102: 4-하이드록시-3,3-디메틸사이클로헥사논
Figure 112019099269087-pct00094
메탄올(13 mL) 중 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(제조를 위해, 중간체 101 참조, 2.87 g, 15.41 mmol)의 용액에 HCl(2M 수용액, 30 mL, 60.0 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔류물을 포화된 NaHCO3 수용액으로 (약 pH 7로) 중화시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트(2x 40 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 건조시키고(소수성 프릿), 진공에서 농축시켜 4-하이드록시-3,3-디메틸사이클로헥산-1-온(2.18 g, 12.26 mmol, 80% 수율)을 담황색 오일로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.54분, [MH]+ = 143.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.74 (dt, J=6.67, 3.46 Hz, 1 H) 2.37 - 2.67 (m, 2 H) 2.22 - 2.36 (m, 1 H) 2.04 - 2.18 (m, 2 H) 1.97 (dt, J=13.60, 6.80 Hz, 1 H) 1.02 (br. s, 6 H). 교환 가능한 양성자가 관찰되지 않음.
중간체 103: 4-(벤질아미노)-2,2-디메틸사이클로헥산올, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00095
4-하이드록시-3,3-디메틸사이클로헥산-1-온(제조를 위해, 중간체 102 참조, 124 mg, 0.872 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 용해시켰다. 페닐메탄아민(0.114 mL, 1.046 mmol) 및 아세트산(0.050 mL, 0.872 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 하에 rt에서 교반하였다. 3.5 h 후, 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(222 mg, 1.046 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 NaHCO3 수용액(5 mL)으로 켄칭시키고, 유기층을 분리하였다. 수성층을 DCM(2x10 mL)으로 추가 추출하고, 합친 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 약 270 mg의 미정제 황색 오일을 제공하였다. 이것을 SiO2 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜(Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100%의 (에틸 아세테이트 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리함) 생성물의 혼합물을 제공하였다. 요망되는 분획을 농축시켜 4-(벤질아미노)-2,2-디메틸사이클로헥산올(63 mg, 0.27 mmol, 26% 수율)을 담황색 오일로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.38분, [MH]+ = 234.2.
중간체 104: (+/-)-4-아미노-2,2-디메틸사이클로헥산올, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00096
4-(벤질아미노)-2,2-디메틸사이클로헥산-1-올(제조를 위해, 중간체 103 참조, 63 mg, 0.270 mmol)을 에틸 아세테이트(6 mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(40 mg)을 첨가하고, 혼합물을 수소의 대기 하에 rt에서 21 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하여 촉매를 제거하고, 농축시켜 4-아미노-2,2-디메틸사이클로헥산-1-올(35 mg, 0.208 mmol, 77% 수율)을 무색 오일로서 부분입체이성질체의 라세미 혼합물로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.32 (dd, J=11.58, 4.53 Hz, 1 H) 2.78 - 2.92 (m, 2 H) 1.25 - 1.93 (m, 18 H) 1.06 - 1.18 (m, 1 H) 0.96 - 1.05 (m, 6 H) 0.88 - 0.95 (m, 6 H).
중간체 105: 메틸 1-토실-1 H -인돌-7-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00097
메틸 1H-인돌-7-카르복실레이트(1000 mg, 5.71 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific으로부터 시판됨)를 DMF(18 mL)에 취하고, 질소 하에 0℃로 냉각하였다. 소듐 하이드라이드(광유 중 60% 현탁액, 287 mg, 7.18 mmol)를 조금씩 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 토실-Cl(1308 mg, 6.86 mmol)을 첨가하고, 반응물을 rt로 가온시키고, 16 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0도로 냉각한 후 추가 소듐 하이드라이드(광유 중 60% 현탁액, 114 mg, 2.85 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 후 rt로 가온시켰다. 반응 혼합물을 추가 15분 동안 교반한 후 추가 부분의 토실-Cl(552 mg, 2.90 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 2 h 동안 교반하였다. 이후 반응 혼합물을 60℃로 1.5 h 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물(약 6 mL)로 켄칭시킨 후 포화된 수성 LiCl(100 mL)과 에틸 아세테이트(30 mL) 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성물을 에틸 아세테이트(2 x 30 mL)로 2회 더 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(소수성 프릿), 진공에서 농축시켜, 미정제 생성물을 황색 오일로서 제공하였다. 미정제 생성물을 디클로로메탄에 재용해시키고, 100 g SNAP 실리카 카트리지의 상부에 직접 적용하고, SP4 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(0-25% 에틸 아세테이트/사이클로헥산)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 메틸 1-토실-1H-인돌-7-카르복실레이트(1025 mg, 2.80 mmol, 49% 수율)를 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.18분, [MH]+ = 330.1.
중간체 106: (1-토실-1 H -인돌-7-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00098
디클로로메탄(31 mL) 중 메틸 1-토실-1H-인돌-7-카르복실레이트(제조를 위해, 중간체 105 참조, 1025 mg, 3.11 mmol)의 용액을 질소 하에 -78℃로 냉각하고, DIBAL-H(THF 중 1M 용액, 7.78 mL, 7.78 mmol)를 15분 동안 적가하고, 반응물을 -78℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응물을 18 h 동안 교반한 후 추가 DIBAL-H(톨루엔 중 25 중량% 용액, 4.19 mL, 6.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20 h 동안 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에서 메탄올로 켄칭시킨 후 rt로 가온시켰다. 반응물을 Rochelle 염 용액(10 mL)으로 희석하고, 64 h 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성상을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 건조시킨 다음, 진공에서 농축시켜 미정제 생성물 (1-토실-1H-인돌-7-일)메탄올(950 mg, 2.84 mmol, 91% 수율)을 오렌지색 오일로서 수득하였고, 이를 그대로 후속 반응에 사용하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.18분, [M-OH]+ = 284.1.
중간체 107: 메틸 1-토실-1 H -인다졸-4-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00099
메틸 1H-인다졸-4-카르복실레이트(530 mg, 3.01 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)를 DMF(6.4 mL)에 취하고, 질소 하에 0℃로 냉각하였다. 소듐 하이드라이드(광유 중 60% 현탁액, 241 mg, 6.02 mmol)를 조금씩 첨가하고, 반응물을 10분 동안 교반하였다. 토실-Cl(775 mg, 4.07 mmol)을 첨가한 후 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 반응물을 rt로 가온시키고, 1 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 250 mL의 물에 부은 다음 여과하였다. 침전물을 진공 오븐에서 밤새 건조시켜 메틸 1-토실-1H-인다졸-4-카르복실레이트(719 mg, 1.959 mmol, 65% 수율)를 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.22분, [MH]+ = 331.1.
중간체 108: (1-토실-1 H -인다졸-4-일)메탄올
Figure 112019099269087-pct00100
디클로로메탄(24 mL) 중 메틸 1-토실-1H-인다졸-4-카르복실레이트(제조를 위해, 중간체 107 참조, 804 mg, 2.434 mmol)의 용액을 질소 하에 -78℃로 냉각하고, DIBAL-H(1.637 mL, 2.434 mmol, 톨루엔 중 25% wt)를 15분 동안 적가하고, 반응물을 -78℃에서 62 h 동안 교반하였다. 추가 DIBAL-H(3.27 mL, 4.87 mmol, 톨루엔 중 25% wt)를 -78℃에서 반응물에 첨가한 후 1 h 동안 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에서 메탄올로 켄칭한 후 rt로 가온시켰다. 반응물을 Rochelle 염 용액(10 mL)으로 희석하고, 16 h 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성상을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 건조시킨 다음, 진공에서 증발시켜 (1-토실-1H-인다졸-4-일)메탄올(686 mg, 2.042 mmol, 84% 수율)을 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.00분, [MH]+ = 303.1.
중간체 109: (+/-)-1-(3-플루오로-2-메틸페닐)에탄올
Figure 112019099269087-pct00101
1-(3-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-온(1000 mg, 6.57 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 시판됨)을 THF(10 mL) 및 에탄올(10 mL)에 취하고, 0℃로 냉각하고, 질소 하에 두었다. 소듐 보로하이드라이드(456 mg, 12.05 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응물을 pH 3까지 1M HCl을 사용하여 서서히 켄칭시킨 후, 물을 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성층을 DCM(2 x 20 mL)으로 2회 더 추출하였다. 유기층을 소듐 바이카르보네이트 수용액으로 역 추출하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 농축시켜 무색 오일을 미정제 생성물, 1-(3-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-올(875 mg, 5.11 mmol, 78% 수율)로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.85분, No [MH]+
중간체 110: 에틸 3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00102
에틸 디아조아세테이트(15 mL, 21.69 mmol)를 DCM(100 mL)에 용해시키고, DCM(100 mL) 중 ((사이클로펜트-3-엔-1-일옥시)메틸)벤젠(3.1 g, 17.79 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨) 및 로듐(II) 아세테이트 이량체(0.393 g, 0.890 mmol)의 혼합물에 rt에서 4 h 동안 적가한 다음, 혼합물을 추가 2 h 동안 교반한 후, 물(300 mL)로 세척하고, 유기층을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 옅은 녹색 액체를 제공하였다. 이것을 0-20% EtOAc/사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제시켜 (+/-)-에틸 3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(0.91 g, 3.50 mmol, 20% 수율)를 무색 액체로서 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.26분, [MH]+ = 261.3
중간체 111: 3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00103
(+/-)-에틸 3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실레이트(제조를 위해, 중간체 110 참조, 0.9 g, 3.46 mmol)를 EtOH(20 mL)에 용해시키고, NaOH(5 mL, 10.00 mmol, 2M 수성)를 첨가한 다음, 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공에서 원래 부피의 대략 절반으로 증발시킨 다음, 2M HCl(aq)에 의해 pH 4로 산성화하고, EtOAc(50 mL)로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 (+/-)-3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(0.74 g, 3.19 mmol, 92% 수율)을 무색 고체 및 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.56분, [MH]+ = 233.3
중간체 112: 3차 -부틸 (3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00104
3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(제조를 위해, 중간체 111 참조, 0.74 g, 3.19 mmol), 디페닐 포스포릴 아지드(1.140 g, 4.14 mmol) 및 Et3N(0.888 mL, 6.37 mmol)을 톨루엔(20 mL)에 용해시키고, 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 3차-부탄올(6 mL)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 3 h 동안 가열한 다음, rt에서 밤새 정치시켰다. 혼합물을 EtOAc로 희석한 다음, 물 및 포화된 NaHCO3(aq.)로 세척하고, 진공에서 증발시켰다. 생성된 검을 0-30% EtOAc:사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제시켜 3차-부틸 ((1R,3r,5S,6s)-3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(0.35 g, 1.154 mmol, 36.2% 수율)를 무색 고체 및 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.26분, [MH]+ = 304.3.
중간체 113: 3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, HCl, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00105
3차-부틸 (3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(제조를 위해, 중간체 112 참조, 350 mg, 1.154 mmol)를 HCl(디옥산 중 4M, 5 mL, 20.00 mmol)에 용해시키고, 반응 혼합물을 rt에서 4 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 3-(벤질옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 하이드로클로라이드(253 mg, 0.897 mmol, 78% 수율)를 담황색 고체 및 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.90분, [MH]+ = 204.2.
중간체 114: (+/-)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온
Figure 112019099269087-pct00106
THF(67 mL) 중 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(1.04 g, 6.66 mmol, Apollo Scientific과 같은 상업적 공급처로부터 입수됨)의 용액에 N2 하에 -78℃에서 THF 중 1M LiHMDS(7.32 mL, 7.32 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 1 h 동안 교반하고, MeI(0.547 mL, 8.66 mmol)를 적가하였다. 반응물을 3 h 동안 -78℃에서 교반한 다음, rt로 밤새 가온시켰다. 이후 이것을 포화된 NH4Cl(aq) 용액으로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합친 유기물을 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 갈색 오일로 농축시켯다. 이 오일을 0 내지 32% EtOAc:사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 (+/-)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(443 mg, 2.60 mmol, 39% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4) δ ppm 3.95 - 4.16 (m, 4 H) 2.58 - 2.88 (m, 2 H) 2.24 - 2.41 (m, 1 H) 2.04 - 2.17 (m, 2 H) 1.90 - 2.01 (m, 1 H) 1.71 (t, J=13.1 Hz, 1 H) 0.94 - 1.07 (m, 3 H)
중간체 115: (+/-)-(트랜스)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올
Figure 112019099269087-pct00107
THF(10 mL) 중 7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(제조를 위해, 중간체 114 참조, 438 mg, 2.57 mmol)의 용액에 -78℃에서 THF 중 2M LiAlH4 용액(1.67 mL, 3.35 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1.5 h 동안 -78℃에서 교반하였다. 이후 이것을 0℃로 가온시키고, 반응 혼합물을 Rochelle 염 용액으로 조심스럽게 켄칭시켰다. EtOAc를 첨가하고, 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출하고, 합친 유기물을 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(430 mg, 2.397 mmol, 93% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ = 4.43 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.88 - 3.75 (m, 4H), 2.96 (ddt, J = 4.8, 5.7, 10.1 Hz, 1H), 1.75 - 1.68 (m, 1H), 1.64 - 1.60 (m, 1H), 1.63 - 1.59 (m, 1H), 1.51 - 1.44 (m, 1H), 1.48 - 1.41 (m, 1H), 1.43 - 1.35(m, 1H), 1.19 (t, J = 12.9 Hz, 1H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H)
중간체 116: (+/-)-(트랜스)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥사논
Figure 112019099269087-pct00108
아세톤(7 mL) 중 (+/-)-(트랜스)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(제조를 위해, 중간체 115 참조, 425 mg, 2.468 mmol)의 용액에 H2SO4(18 mL, 9.00 mmol, 0.5M)를 첨가하고, 용액을 20 h 동안 rt에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합친 유기물을 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥산-1-온(290 mg, 2.265 mmol, 92% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4) δ ppm 3.93 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 3.10 (td, J=10.2, 4.4 Hz, 1 H) 1.90 - 2.13 (m, 2 H) 1.73 - 1.86 (m, 1 H) 1.25 - 1.59 (m, 2 H) 1.09 (t, J=13.1 Hz, 1 H) 0.97 - 1.03 (m, 3 H). 교환 가능한 양성자가 관찰되지 않음.
중간체 117: ( S )- N -((1 S ,3 R ,4 R )-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥실)-2-메틸프로판-2-설핀아미드 및 ( S )- N -((1 S ,3 S ,4 S )-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥실)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1:1 부분입체이성질체 혼합물)
Figure 112019099269087-pct00109
(+/-)-(트랜스)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥산-1-온(제조를 위해, 중간체 116 참조, 1.99 g, 15.53 mmol)을 THF(30 mL) 중 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.304 g, 18.63 mmol) 및 테트라에톡시티타늄(5.43 mL, 25.9 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응물을 60℃에서 1.5 h 동안 그리고 이어서 70℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 혼합물을 rt로 냉각한 다음 -78℃로 냉각하였다. THF 중 L-셀렉트라이드의 1M 용액(38.8 mL, 38.8 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하며 rt로 서서히 가온시켰다. 이후 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고, MeOH을 적가하였다. 미정제 반응 혼합물을 염수에 부었다. 생성된 현탁액을 셀라이트의 플러그를 통해 여과하고, 여과 케익을 EtOAc로 세척하였다. 이후 여과액을 진공에서 농축시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합친 유기물을 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공에서 황색 오일로 농축시켰다. 이 오일을 10 내지 42%의 (AcOEt 중 25% EtOH):사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제시켜 (S)-N-((1S,3R,4R)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥실)-2-메틸프로판-2-설핀아미드 및 (S)-N-((1S,3S,4S)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥실)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1:1 부분입체이성질체 혼합물)(303.5 mg, 1.301 mmol, 8% 수율)를 황색 검으로서 수득하였고, 이를 직접 다음 반응에 사용하였다.
중간체 118: (1 R ,2 R ,4 S )-4-아미노-2-메틸사이클로헥산올 및 (1 S ,2 S ,4 S )-4-아미노-2-메틸사이클로헥산올(1:1 부분입체이성질체 혼합물)
Figure 112019099269087-pct00110
디옥산 중 4M HCl(1 mL, 4.00 mmol)을 DCM(5 mL) 중 (S)-N-((1S,3R,4R)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥실)-2-메틸프로판-2-설핀아미드 화합물 및 (S)-N-((1S,3S,4S)-4-하이드록시-3-메틸사이클로헥실)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1:1 부분입체이성질체 혼합물, 제조를 위해, 중간체 117 참조)(300 mg, 1.286 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 rt에서 교반하였다. 디옥산 중 추가 4M HCl(1 mL, 4.00 mmol)을 첨가하고, 반응물을 6 h 동안 rt에서 교반하였다. 디옥산 중 추가 4M HCl(1 mL, 4.00 mmol)을 첨가하고, 반응물을 1 h 동안 rt에서 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축시키고, MeOH에 용해하고, MeOH 및 MeOH 용액 중 2M NH3로 세척하며 2 g SCX 컬럼(MeOH로 미리-조건화됨)을 통해 용리시켰다. 암모니아 분획을 진공에서 농축시켜 (1R,2R,4S)-4-아미노-2-메틸사이클로헥산올 및 (1S,2S,4S)-4-아미노-2-메틸사이클로헥산올(1:1 부분입체이성질체 혼합물)(74.5 mg, 0.577 mmol, 45% 수율)을 갈색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 4.17 - 4.51 (m, 2 H) 2.91 - 3.03 (m, 2 H) 2.86 (td, J=10.2, 4.3 Hz, 2 H) 1.61 - 1.82 (m, 4 H) 1.35 - 1.58 (m, 4 H) 1.09 - 1.28 (m, 4 H) 0.95 - 1.07 (m, 2 H) 0.90 (dd, J=9.4, 6.7 Hz, 6 H) 0.61 - 0.84 (m, 2 H)
중간체 119: ( R )-1-(3-플루오로-4-메틸페닐)에탄올
Figure 112019099269087-pct00111
(+)-DIP-Cl(1.265 g, 3.94 mmol)을 THF(20 mL)에 취하고, -25℃로 N2 하에 냉각하였다. THF(10 mL) 중 1-(3-플루오로-4-메틸페닐)에탄-1-온(0.5 g, 3.29 mmol, Alfa Aesar와 같은 상업적 공급처로부터 입수됨)을 첨가하고, 반응물을 -25℃에서 rt로 가온함에 따라 밤새 교반하였다. 반응물을 -35℃로 냉각하고, THF(5 mL) 중 추가 (+)-DIP-Cl(1.265 g, 3.94 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 6 h 동안 교반하면서 -35 내지 -25℃로 유지한 다음 rt로 밤새 가온시켰다. 반응물을 아세트알데하이드(0.5 mL, 8.85 mmol)로 켄칭하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 Et2O(20 mL)에 취하고, 디에탄올아민(1.036 g, 9.86 mmol)을 첨가하고, 이것을 2 h 동안 교반하였다. 백색 침전물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과액을 진공에서 농축시켜 무색 오일을 제공하였다. 이 오일을 0-25% EtOAc:사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제시켜 (R)-1-(3-플루오로-4-메틸페닐)에탄-1-올(836 mg, 2.71 mmol, 83% 수율)을 무색 액체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.89분, no [MH]+
중간체 120: (+/-)-7-클로로바이사이클로[3.2.0]헵트-2-엔-6-온
Figure 112019099269087-pct00112
아연(8.42 g, 129 mmol)을 AcOH(100 mL) 중 (+/-)-7,7-디클로로바이사이클로[3.2.0]헵트-2-엔-6-온(24 g, 136 mmol, Alfa Aesar와 같은 상업적 공급처로부터 입수됨)의 용액에 rt에서 1 h 동안 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 추가 1 h 동안 교반한 다음, 물로 희석하고, 디에틸 에테르로 추출하였다. 유기층을 물과 포화된 소듐 바이카르보네이트 용액 및 염수로 세척한 다음, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 (+/-)-7-클로로바이사이클로[3.2.0]헵트-2-엔-6-온(20 g, 140 mmol, 순도 = 70%)을 담황색 액체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.89 - 5.97 (m, 1 H) 5.70 - 5.79 (m, 1 H) 5.03 - 5.14 (m, 1 H) 3.78 - 3.97 (m, 2 H) 2.66 - 2.80 (m, 1 H) 2.41 - 2.55 (m, 1 H)
중간체 121: (+/-)-바이사이클로[3.1.0]헥스-2-엔-6-카르복실산, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00113
1,4-디옥산(24 mL) 및 물(10 mL) 중 KOH(2.16 g, 38.5 mmol)의 교반된 혼합물에 (+/-)-7-클로로바이사이클로[3.2.0]헵트-2-엔-6-온(제조를 위해, 중간체 120 참조, 1.307 g, 5.50 mmol)을 적가하였다. 이후 클로로-SM을 함유하는 플라스크는 추가 1,4-디옥산(300 μL)을 지닌 반응 용기로 세척되었다. 반응물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 2M HCl(aq.)에 의해 약 pH 2로 산성화하였다. 유기물을 DCM(3 x 40 mL)으로 추출하고, 합친 유기물을 밤새 정치시켰다. 16 h 후, 합친 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하고, 진공에서 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 이것을 진공에서 추가 건조시켜 요망되는 생성물을 갈색 왁스 같은 고체 - (+/-)-바이사이클로[3.1.0]헥스-2-엔-6-카르복실산(581 mg, 4.68 mmol, 85% 수율)으로서 수득하였고, 이는 약 40%-엔도/약 60%-엑소(요망됨)의 혼합물이었다.
LCMS (2분 포름산): (엑소) Rt = 0.65분, no m/z; (엔도) Rt = 0.54분, no m/z
중간체 122: (+/-)-벤질 (시스)-바이사이클로[3.1.0]헥스-2-엔-6-일카르바메이트
Figure 112019099269087-pct00114
DPPA(26.0 mL, 121 mmol)를 톨루엔(10 mL) 중 (+/-)-바이사이클로[3.1.0]헥스-2-엔-6-카르복실산, 부분입체이성질체의 혼합물(제조를 위해, 중간체 121 참조, 10 g, 81 mmol) 및 Et3N(22.46 mL, 161 mmol)의 용액에 rt에서 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 벤질 알콜(16.75 mL, 161 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 3 h 동안 가열하였다. 용액을 EtOAc로 희석하고, 물과 포화된 소듐 바이카르보네이트 용액(aq)으로 세척한 다음, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 갈색 오일을 제공하였다. 이 오일을 0-50% EtOAc:사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제시켜 (+/-)-벤질 ((시스)-바이사이클로[3.1.0]헥스-2-엔-6-일)카르바메이트(3.7 g, 16.14 mmol, 20.03% 수율)를 무색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.08분, [MH]+ = 230.3
중간체 123: (+/-)-벤질 ((시스)-2-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트
Figure 112019099269087-pct00115
보란-메틸 설파이드 복합체(2.299 mL, 24.21 mmol)를 THF(10 mL) 중 (+/-)-벤질 ((시스)-바이사이클로[3.1.0]헥스-2-엔-6-일)카르바메이트(제조를 위해, 중간체 122 참조, 3.7 g, 16.14 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 교반한 다음, 30분 동안 rt로 가온시켰다. 물(2 mL)에 이어 2M NaOH(16.14 mL, 32.3 mmol)의 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 얼음 조에서 냉각한 다음 H2O2(30%, 3.30 mL, 32.3 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 추가 1 h 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하고, 혼합물을 30분 동안 강렬하게 교반한 다음, 유기층을 분리하고, 수성물을 EtOAc로 추출하였다. 합친 유기물을 5% 소듐 티오설포네이트 용액(aq.)으로 세척한 다음, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 검을 제공하였다. 이 검을 에테르로 분쇄하고, 생성된 무색 고체를 여과에 의해 수집하였다. 여과액을 진공에서 증발시켜 무색 검을 제공하고, 이를 0-50% EtOAc:사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 이후 흐르는 분획은 무색 검(0.53 g)을 제공하였고, 이는 정치시 부분적으로 고화되었다. 이 물질을 EtOAc에 용해하고, 밤새 정치시켜 무색 고체를 제공하고, 이를 여과에 의해 수집하였다. 여과액을 진공에서 증발시켜 무색 검을 제공하였다. 이 검을 0-50% EtOAc:사이클로헥산의 구배로 용리하며 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제시켜 (+/-) 벤질 ((시스)-2-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(180 mg, 0.728 mmol, 5% 수율)를 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.19 - 7.44 (m, 6 H) 4.96 - 5.04 (m, 2 H) 4.53 (d, J=1.0 Hz, 1 H) 4.07 (t, J=4.6 Hz, 1 H) 2.09 (br. s., 1 H) 1.83 (m, J=1.0, 1.0 Hz, 1 H) 1.62 (dd, J=12.1, 8.4 Hz, 1 H) 1.32 - 1.40 (m, 3 H) 1.09 - 1.23 (m, 1 H)
중간체 124: (+/-)-(시스)-6-아미노바이사이클로[3.1.0]헥산-2-올
Figure 112019099269087-pct00116
(+/-)-벤질 ((시스)-2-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(제조를 위해, 중간체 123 참조, 180 mg, 0.728 mmol)를 EtOH(10 mL)에 용해하고, 10% Pd/C(35 mg, 0.329 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 대기압 하에 6.5 h 동안 수소화시켰다. 촉매를 여과하고, 반응 혼합물을 농축시켜 (+/-)-(시스)-6-아미노바이사이클로[3.1.0]헥산-2-올(82 mg, 0.728 mmol, 순도 = 80%)을 담황색 오일로서 수득하였고, 이를 미정제물로서 직접 다음 단계에 사용하였다.
중간체 125: (+/-)-(트랜스)-3-메톡시사이클로펜탄아민 하이드로클로라이드
Figure 112019099269087-pct00117
(+/-)-3차-부틸 ((트랜스)-3-메톡시사이클로펜틸)카르바메이트(제조를 위해, 중간체 126 참조, 280 mg, 1.040 mmol)를 디옥산 중 4M 염산의 용액(2.5 mL, 10.00 mmol)에 취하고, 2 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-3-메톡시사이클로펜탄-1-아민 하이드로클로라이드(167 mg, 0.991 mmol, 95% 수율)를 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.05 (br s, 3 H) 3.85 - 3.89 (m, 1 H) 3.50 - 3.57 (m, 1 H) 3.17 (s, 3 H) 1.89 - 2.04 (m, 3 H) 1.70 - 1.77 (m, 1 H) 1.55 - 1.65 (m, 2 H).
중간체 126: (+/-)- 3차 -부틸 ((트랜스)-3-메톡시사이클로펜틸)카르바메이트
Figure 112019099269087-pct00118
분쇄된 3Å 분자체를 진공 하에 250 mL의 둥근-바닥 플라스크에 두고, 히트 건으로 가열하였다. 플라스크를 냉각하고, 무수 디클로로메탄(13 mL) 중 (+/-)-3차-부틸 ((트랜스)-3-하이드록시사이클로펜틸)카르바메이트(370 mg, 1.838 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 시판됨)를 첨가하였다. N1,N1,N8,N8-테트라메틸나프탈렌-1,8-디아민(1.357 g, 6.33 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃로 냉각하고, 질소의 대기 하에 두었다. 트리메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트(680 mg, 4.60 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt로 가온시키고, 급속히 20 h 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석하고, 물(50 mL)로 세척하였다. 수성층을 디클로로메탄(2 x 25 mL)으로 추출하고, 합친 유기물을 0.5 M HCl 수용액(15 mL), 포화된 소듐 바이카르보네이트 용액(20 mL), 및 염수(30 mL)로 세척하였다. 유기상을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 미정제 생성물을 디클로로메탄에 재용해시키고, 25 g SNAP 실리카 카트리지의 상부에 직접 적용하고, 사이클로헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리하며 SP4 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 (+/-)-3차-부틸 ((트랜스)-3-메톡시사이클로펜틸)카르바메이트(280 mg, 1.040 mmol, 57% 수율)를 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.80 (br d, 1 H) 3.84 (q, 1 H) 3.75 - 3.80 (m, 1 H) 3.14 (s, 3 H) 1.80 - 1.90 (m, 3 H) 1.46 - 1.56 (m, 2 H) 1.38 (s, 9 H) 1.29 - 1.36 (m, 1 H).
중간체 127: 1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에타논
Figure 112019099269087-pct00119
3-하이드록시아세토페논(5.0 g, 36.7 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨), 에틸렌 카르보네이트(4.85 g, 55.1 mmol) 및 포타슘 카르보네이트(5.08 g, 36.7 mmol)를 DMF(50 mL)에서 혼합하고, 120℃에서 밤새 질소 하에 가열한 다음, 혼합물을 물(200 mL)로 희석하고, EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 물(200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 담황색 오일을 제공하였다. 이것을 DCM에 용해시키고, 100 g SNAP 울트라 컬럼 상에 로딩하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하였다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에탄-1-온(5.5 g, 30.5 mmol, 83% 수율)을 제공하고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.67분, [M-H]- = 179.1.
중간체 128: 1-(3-(2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에타논
Figure 112019099269087-pct00120
TBDMS-Cl(4.97 g, 33.0 mmol)을 DCM(50 mL) 중 1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에탄-1-온(제조를 위해, 중간체 127 참조, 5.4 g, 30.0 mmol) 및 이미다졸(2.45 g, 36.0 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 교반한 다음, 주말 내내 정치시켰다. 생성된 현탁액을 물(2 x 100 mL)로 세척하고, 유기층을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 무색 오일을 제공하였다. 이것을 100 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 0-30% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에탄-1-온(6.6 g, 22.41 mmol, 75% 수율)을 무색 액체로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.46분, [MH]+ = 295.3.
중간체 129: (+/-)-1-(3-(2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에탄올
Figure 112019099269087-pct00121
소듐 보로하이드라이드(1.27 g, 33.6 mmol)를 에탄올(50 mL) 중 1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에탄-1-온(제조를 위해, 중간체 128 참조, 6.6 g, 22.41 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 교반한 다음, 암모늄 클로라이드 용액(50 mL, 처음에는 천천히 그리고 한 방울씩 - 격렬한 발포성!)을 매우 조심스럽게 첨가하여 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 염수(50 mL)로 희석하고, EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하고, 합친 유기물을 건조시키고, 진공에서 증발시켜 1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에탄-1-올(5.61 g, 18.92 mmol, 84% 수율)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 1.41분, [MH]+ = 296.3.
중간체 130: (+/-)-메틸 1-(1-(3-(2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실레이트
Figure 112019099269087-pct00122
DCM(10 mL) 중 DIAD(1.38 mL, 7.10 mmol)를 DCM(20 mL) 중 메틸 3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(제조를 위해, 중간체 1 참조, 1 g, 5.46 mmol), 1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에탄-1-올(제조를 위해, 중간체 129 참조, 1.942 g, 6.55 mmol) 및 트리페닐포스핀(1.862 g, 7.10 mmol)의 용액에 0℃에서 5분 동안 적가하고, 혼합물을 밤새 교반하여, 이를 rt로 가온시켰다. 용액을 물(20 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 이것을 DCM에 용해시키고, 100 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음, 0-60% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하고, 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 (+/-)-메틸 1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(2.61 g, 5.65 mmol, 104% 수율)를 담황색 검으로서 제공하였고, 이것은 부분입체이성질체의 약 4:1 혼합물이었다(미량 성분으로서 대체 피라졸 알킬화 생성물을 지님).
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.43분, [MH]+ = 462.3.
중간체 131: (+/-)-1-(1-(3-(2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1 H -피라졸-5-카르복실산
Figure 112019099269087-pct00123
(+/-)-메틸 1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실레이트(제조를 위해, 중간체 130 참조, 2.6 g, 5.63 mmol)를 메탄올(30 mL)에 용해시키고, NaOH(10 mL, 20.00 mmol, 물 중 2M)를 첨가한 다음, 혼합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 이후 용매를 진공에서 증발시켰다. 생성된 고체를 물(30 mL)에 용해시키고, 에테르(2 x 30 mL)로 세척한 다음, 수성층을 2M HCl(aq.)(11 mL)로 산성화하고, 생성된 혼합물을 EtOAc(2 x 30 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 물로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 (+/-)-1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(2.22 g, 4.96 mmol, 88% 수율)을 무색 검으로서, 대략 4:1 비의 위치이성질체(이전 단계로부터 미량 성분으로서 대체 피라졸 알킬화 생성물을 지님)로서 수득하였고, 이는 이 단계에서 분리할 수 없는 것처럼 보였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.99분, [MH]+ = 448.4.
중간체 132: 1-(1-(3-(2-(( 3차 -부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)- N 3 -메틸- N 5 -((1 S ,2 S )-2-메틸사이클로프로필)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00124
(+/-)-1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(제조를 위해, 중간체 131 참조, 2 g, 4.47 mmol), (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판-1-아민, 하이드로클로라이드(0.625 g, 5.81 mmol), HATU(2.209 g, 5.81 mmol) 및 Et3N(1.868 mL, 13.40 mmol)을 DCM(20 mL)에 용해시키고, 혼합물을 2 h 동안 교반한 다음, 주말 동안 rt에서 정치시켰다. 생성된 혼합물을 물(50 mL)과 함께 1 h 동안 교반한 다음, 유기층을 분리하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 이것을 DCM에 용해시키고, 100 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-N 3 -메틸-N 5 -((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(1.10 g, 2.197 mmol, 49% 수율, 부분입체이성질체의 혼합물)를 무색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 1.44분, [MH]+ = 501.4.
실시예:
실시예 1: N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00125
DMF(0.8 mL) 중 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(98 mg, 0.359 mmol)의 용액에 HATU(205 mg, 0.538 mmol)에 이어 (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 하이드로클로라이드(107 mg, 0.789 mmol) 및 DIPEA(0.313 mL, 1.793 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 rt에서 공기 중에서 18 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MDAP(포름산)에 의해 정제시켰다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 포화된 NaHCO3 용액과 DCM 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 DCM(2x 20 mL)으로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 진공에서 농축시켜 N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(25 mg, 0.063 mmol, 18% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 7.20 - 7.32 (m, 5 H) 7.09 (s, 1 H) 6.59 (d, J=7.1 Hz, 1 H) 3.99 (dd, J=8.3, 2.7 Hz, 2 H) 3.72 (dt, J=8.2, 3.5 Hz, 2 H) 2.93 (s, 3 H) 2.53 (t, J=2.4 Hz, 1 H) 1.92 (d, J=7.1 Hz, 3 H) 1.85 - 1.90 (m, 1 H) 1.77 - 1.82 (m, 1 H). 2개의 교환 가능한 양성자가 관찰되지 않음.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.85분, [MH]+ = 355.3.
제1 MDAP 주입 후 남아 있는 미정제 생성물을 또한 포화된 NaHCO3 용액 및 DCM 사이에서 분배된 요망되는 생성물을 함유하는 분획과 함께 MDAP(포름산)에 의해 정제하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 DCM(2x 20 mL)으로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 진공에서 농축시켜 제2 배치의 N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(30 mg, 0.076 mmol, 21% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.85분, [MH]+ = 355.3.
실시예 2: N 5 -((1 r ,4 S )-4-하이드록시사이클로헥실)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00126
DMF(5 mL) 중 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(451 mg, 1.650 mmol)의 용액에 HATU(941 mg, 2.475 mmol)에 이어 (1r,4r)-4-아미노사이클로헥산올(트랜스)(380 mg, 3.30 mmol) 및 DIPEA(1.441 mL, 8.25 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 rt에서 공기 중에서 40분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 DMF를 제거하고, 에틸 아세테이트와 포화된 LiCl 수용액 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고(소수성 프릿), 농축시켜 약 1.5 g의 미정제 생성물을 오렌지색 오일(DMF 함유)로서 제공하였다. 이것을 SiO2 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜(Biotage SNAP 25g 카트리지, 20-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산에 이어, 100% 에틸 아세테이트 내지 12% 에탄올/에틸 아세테이트로 용리함) 447 mg의 무색 오일을 제공하였다. 이것을 MDAP(포름산)로 추가 정제하였다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 포화된 NaHCO3 용액과 DCM 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 DCM(2x 20 mL)으로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 진공에서 농축시켜 N 5-((1r,4S)-4-하이드록시사이클로헥실)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(163 mg, 0.396 mmol, 24% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.16 - 1.25 (m, 2 H) 1.25 - 1.36 (m, 2 H) 1.67 -1.80 (m, 2 H) 1.78 - 1.86 (m, 2 H) 1.83 (d, J=6.0 Hz, 3 H) 2.77 (d, J=4.8 Hz, 3 H) 3.31 - 3.39 (m, 1 H) 3.57 - 3.66 (m, 1 H) 4.52 (d, J=4.5 Hz, 1 H) 6.67 (q, J=7.0 Hz, 1 H) 7.22 - 7.25 (m, 1 H) 7.23 - 7.24 (m, 1 H) 7.24 - 7.27 (m, 2 H) 7.28 - 7.31 (m, 2 H) 8.11 (q, J=4.5 Hz, 1 H) 8.28 (d, J=7.8 Hz, 1 H)
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.82분, [MH]+ = 371.3.
실시예 3: N 5 -((1 R ,3 R ,5 S ,6 r )-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00127
미정제 3차-부틸 (3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(37 mg, 0.173 mmol)를 DCM(10 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 미정제 잔류물을 DCM(5 mL)에 용해시킨 다음, HATU(86 mg, 0.226 mmol), Et3N(0.048 mL, 0.347 mmol) 및 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(47.4 mg, 0.173 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고, 잔류물을 MDAP(높은 pH)에 의해 정제시켜 N 5-((1R,3R,5S,6s)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(3 mg, 8.14 μmol, 5% 수율)를 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.36 - 1.40 (m, 2 H) 1.58 (ddt, J=12.4, 8.3, 4.4, 4.4 Hz, 2 H) 1.82 (d, J=7.0 Hz, 3 H) 2.01 (dt, J=12.6, 7.1 Hz, 2 H) 2.42 (dt, J=3.9, 2.0 Hz, 1 H) 2.75 (d, J=4.6 Hz, 3 H) 3.80 (br t, J=7.0 Hz, 1 H) 4.59 (br d, J=3.3 Hz, 1 H) 6.68 (q, J=7.0 Hz, 1 H) 7.19 (s, 1 H) 7.21 - 7.26 (m, 1 H) 7.23 - 7.26 (m, 2 H) 7.27 - 7.33 (m, 2 H) 8.13 (q, J=4.6 Hz, 1 H) 8.42 (d, J=4.0 Hz, 1 H)
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.79분, [MH]+ = 369.4.
다음 실시예는 실시예 3과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00128
Figure 112019099269087-pct00129
Figure 112019099269087-pct00130
Figure 112019099269087-pct00131
Figure 112019099269087-pct00132
Figure 112019099269087-pct00133
Figure 112019099269087-pct00134
Figure 112019099269087-pct00135
Figure 112019099269087-pct00136
실시예 44-49는 다음 방법의 배열을 통해 제조되었다:-
20 mL 바이알에 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(0.027 g, 0.1 mmol) x 14 = 383 mg 및 HATU(0.042 g, 0.110 mmol) x 14 = 586 mg을 칭량하였다. 이 바이알에 DMF(0.5 mL) x 14 = 7 mL 및 DIPEA(0.050 mL, 0.286 mmol) x 14 = 700 μL를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 다음 각각 적절한 사전-칭량된 아민(0.120 mmol)을 함유하는 바이알로 분취시켰다(550 μL). (주: 추가 DIPEA(0.050 mL, 0.286 mmol)를 HCl 염인 아민에 첨가하였다). 혼합물을 66 h 동안 반응시켰다. T3P(100 μL, EtOAc 중 50 wt%) 및 DIPEA(0.050 mL, 0.286 mmol)를 첨가하고, 5분 후 추가 아민(0.120 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 추가 24 h 동안 반응시켰다. 반응물을 MDAP(높은 pH)에 의해 정제하고 농축시켜 다음을 제공하였다:-
Figure 112019099269087-pct00137
Figure 112019099269087-pct00138
실시예 50-64는 다음의 상업용 아민을 사용하여 아미드 어레이의 일부로서 제조되었다,
Figure 112019099269087-pct00139
Figure 112019099269087-pct00140
방법: (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(0.027 g, 0.100 mmol)*18 = 492 mg의 원액 및 HATU(0.038 g, 0.100 mmol)*18 = 684 mg를 DMF(0.5 mL)*18 = 9.0 mL에 용해시켰다. 이 원액에 DIPEA(0.052 mL, 0.300 mmol) x 18를 첨가하였다. 바이알을 캡핑하고, rt에서 진탕시켜 완전히 용해시켰다. 2분 후 상기 원액의 분취량(0.5 mL)을 1 mL의 플라스틱 매트릭스 바이알에서 사전-칭량된 아민*18(0.120 mmol, 양에 대해서는 표 참조)의 세트에 첨가하였다. 각 바이알을 캡핑하고, 진탕시켜 용해를 돕고, 밤새 18 h 동안 rt에서 정치시켰다. T3P(50 wt% EtOAc) 120 μL 및 DIPEA(0.052 mL, 0.300 mmol)를 각 반응 혼합물에 첨가하고, >48 h 동안 rt에 두었다. 반응물을 MDAP(높은 pH)에 의해 정제시켜 최종 화합물을 제공하였다(양에 대해서는 표 참조)
3차-부틸 ((1r,4r)-4-(2-아미노에틸)사이클로헥실)카르바메이트의 커플링에 상응하는 반응 중간체의 Boc 보호는 DCM(0.5 mL)에서 CPME 중 3M HCl(0.5 mL)을 사용하여 수행되었다. 유리 마이크로파 바이알을 반응 용기로서 사용하였다. 반응물을 밤새 22 h 동안 35℃에서 교반하였다. 추가 DCM(0.5 mL) 및 CPME 중 3M HCl(0.5 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 이를 밤새 18 h 동안 35℃에서 교반하였다. 이후 질소의 스트림 하에 용매를 제거하여 건조시켜 유리 아민의 HCl 염을 수득하였다. 추가 DCM(0.5 mL) 및 CPME 중 3M HCl(0.5 mL)을 고체 물질에 첨가하였다. 용액을 rt에서 주말 내내 정치시켰다. 용매를 제거하여 건조시켜 하기 표에 제시된 유리 아민의 HCl 염(실시예 60)을 수득하였다.
Figure 112019099269087-pct00141
Figure 112019099269087-pct00142
Figure 112019099269087-pct00143
실시예 65: ( S )- N 3 , N 5 -디메틸-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00144
THF(1 mL) 중 N 3,N 5-디메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(39 mg, 0.214 mmol)의 현탁액에 (R)-1-페닐에탄올(40 mg, 0.327 mmol) 및 트리페닐포스핀(90 mg, 0.343 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고, DIAD(0.067 mL, 0.343 mmol)를 첨가하였다. 이후 바이알을 마이크로파에서 140℃로 15분 동안 가열하였다. 이후 반응 혼합물을 140℃에서 추가 20분 동안 가열하였다. 추가 부분의 (R)-1-페닐에탄올(40 mg, 0.327 mmol), 트리페닐포스핀(90 mg, 0.343 mmol) 및 DIAD(0.067 mL, 0.343 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 140℃에서 15분 동안 가열하였다. 용매를 진공에서 제거하여 약 770 mg의 미정제 황색 오일을 제공하였다. 이것을 SiO2 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜(Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리함) 50 mg의 무색 오일을 제공하였다. 이것을 MDAP(높은 pH)에 의해 추가 정제하였다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 진공에서 농축시켜 (S)-N 3,N 5-디메틸-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(17 mg, 0.053 mmol, 25% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.82분, [MH]+ = 287.2.
실시예 66: 1-벤질- N 5 -((1 r ,4 r )-4-하이드록시사이클로헥실)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00145
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(1 mL) 중 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(150 mg, 0.509 mmol) 및 DIPEA(0.267 mL, 1.527 mmol)의 용액에 HATU(290 mg, 0.764 mmol)를 첨가한 다음 (1r,4r)-4-아미노사이클로헥산올(70.4 mg, 0.611 mmol)을 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 덩어리를 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(2x 15 mL), 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 50% DCM + 디에틸 에테르(3x 1 mL)로 분쇄하여, 고체 생성물을 제공하였고, 이를 여과하고, 진공 하에 15분 동안 건조시켜 1-벤질-N 5-((1r,4r)-4-하이드록시사이클로헥실)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(160 mg, 0.447 mmol, 88% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (4.5분 방법 A): Rt = 1.61분, [MH]+ = 357.1.
실시예 67: 1-벤질- N 5 -사이클로부틸- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00146
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(1 mL) 중 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(200 mg, 0.733 mmol) 및 DIPEA(0.384 mL, 2.199 mmol)의 용액에 HATU(418 mg, 1.099 mmol)를 첨가한 다음 사이클로부탄아민(104 mg, 1.466 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)을 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 60-120 컬럼에 첨가하고, n-헥산 중 65% EtOAc로 용리하였다. 수집된 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 1-벤질-N 5-사이클로부틸-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(84 mg, 0.255 mmol, 35% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (10분 방법 D): Rt = 4.26분, [MH]+ = 313.2.
실시예 68: ( S* )- N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1-(1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00147
중간체 11을 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 분취용 NP-HPLC 조건은 다음과 같았다:-
컬럼/치수 : Chiralpak IC (250 x 30 mm), 5 μm
이동상 : n-헥산 : 에탄올(70:30)
유량 : 38 mL/분
온도 : 주위
파장 : 249 nm
진행 시간 : 18분
용해도 : THF+ n-헥산+에탄올
로딩 능력/Inj : 33.0 mg/Inj
총 주입 수 : 10 피크 1에 상응하는 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 (S*)-N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(36 mg, 0.105 mmol, 15% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
LCMS (4.5분 방법 B): Rt = 1.89분, [MH]+ = 313.2.
실시예 69: N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1-(3-메틸벤질)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00148
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(2 mL) 중 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(300 mg, 1.366 mmol)의 용액에 K2CO3(566 mg, 4.10 mmol)를 첨가한 다음 1-(브로모메틸)-3-메틸벤젠(0.211 mL, 1.640 mmol, 예를 들어, Sigma Aldrich로부터 시판됨)을 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 25 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(3x 15 mL), 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 2개 위치이성질체의 혼합물인 미정제 생성물을 제공하였다. 이들을 SFC 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 분취용 SFC 조건은 다음과 같았다:-
컬럼/치수 : LuxCellulose-2 (250 x 30 mm), 5 μm
% CO2 : 60.0%
% 조용매 : 40.0% (MeOH)
총 흐름 : 90.0 g/분
배압 : 100.0 bar
UV : 211 nm
스택 시간 : 3.8분
로딩/Inj : 16.0 mg
용해도 : 메탄올
총 주입 수 : 20
기계 상세 : Make/Model: Thar SFC-200-005
피크 1에 상응하는 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1-(3-메틸벤질)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(76 mg, 0.238 mmol, 63% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
LCMS (4.5분 방법 B): Rt = 1.90분, [MH]+ = 313.2.
실시예 70: 1-((1 H -인돌-5-일)메틸)- N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00149
질소 하에 rt에서 교반된 메탄올(1 mL) 중 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1-((1-토실-1H-인돌-5-일)메틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(420 mg, 0.666 mmol)의 용액에 NaOH(80 mg, 1.999 mmol)를 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 덩어리를 rt로 냉각한 다음, 물(20 mL)로 희석하고, 이어서 수성층을 EtOAc(3x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(3x 10 mL), 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 위치이성질체의 혼합물로서 수득하였다. 이들을 SFC, 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 분취용 SFC 조건은 다음과 같았다:-
컬럼/치수 : Chiralpak IC (250 x 30 mm), 5 μm
% CO2 : 50.0%
% 조용매 : 50.0% (MeOH)
총 흐름 : 60.0 g/분
배압 : 100.0 bar
UV : 215 nm
스택 시간 : 6.5분
로딩/Inj :8.0 mg
용해도 : MeOH
총 주입 수 : 40
피크 1에 상응하는 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 1-((1H-인돌-5-일)메틸)-N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(95 mg, 0.272 mmol, 85% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였다.
LCMS (4.5분 방법 B): Rt = 1.68분, [MH]+ = 338.2.
실시예 71: 1-((1 H -인돌-4-일)메틸)- N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00150
질소 하에 rt에서 교반된 메탄올(1 mL) 중 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(400 mg, 0.745 mmol)의 용액에 NaOH(29.8 mg, 0.745 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석한 다음, DCM(3x 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 위치이성질체의 미정제 혼합물(410 mg)을 제공하고, 이를 SFC에 의해 정제하였다. 분취용 SFC 조건은 다음과 같았다:-
컬럼/치수 : Chiralpak AD-H (250 x 21 mm), 5 μm
% CO2 : 60.0%
% 조용매 : 40.0% (MeOH)
총 흐름 : 60.0 g/분
배압 : 100.0 bar
UV : 215 nm
스택 시간 : 3.6분
로딩/Inj : 2.6 mg
용해도 : 메탄올+DCM
총 주입 수 : 34
피크 1에 상응하는 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(400 mg, 0.745 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (4.5분 방법 B): Rt = 1.65분, [MH]+ = 338.2.
실시예 72: N 5 -((1 R ,3 S ,5 S ,6 r )-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00151
3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-카르복실산(720 mg, 5.06 mmol)을 톨루엔(10 mL) 및 3차-부탄올(10 mL)에 용해시킨 다음, Et3N(1.412 mL, 10.13 mmol) 및 디페닐 포스포르아지데이트(1.637 mL, 7.60 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 물(20 mL)로 세척하고, 용매를 건조시키고, 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 이것을 DCM(10 mL)에 용해시키고, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩한 다음, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하고, 닌하이드린 활성 분획을 진공에서 증발시켜 3차-부틸 (3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트의 부분입체이성질체의 혼합물을 제공하였고, 이를 미정제물로서 다음 단계에 이용하였다. 3차-부틸 (3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)카르바메이트(55 mg, 0.258 mmol)(미정제)를 DCM(10 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고, 잔류물을 신선한 DCM(10 mL)에 용해시키고, Et3N(0.072 mL, 0.516 mmol), HATU(147 mg, 0.387 mmol) 및 (S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(70.5 mg, 0.258 mmol)을 첨가한 다음, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 이것을 MDAP(높은 pH)에 의해 정제시켜 N 5-((1R,3S,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(16 mg, 0.043 mmol, 17% 수율)를 무색 고체로서 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.84분, [MH]+ = 369.3.
실시예 73: N 5 -(2-((2 r ,5 S )-5-아미노-1,3-디옥산-2-일)에틸)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00152
에탄올(3 mL) 중 N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-디옥사이소인돌린-2-일)-1,3-디옥산-2-일)에틸)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(102 mg, 0.192 mmol)의 현탁액에 하이드라진 하이드레이트(90 μL, 1.836 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 4 h 동안 교반하였다. 미정제 생성물을 여과하고, MDAP(높은 pH)에 의해 정제시켰다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 진공에서 농축시켜 N 5-(2-((2r,5S)-5-아미노-1,3-디옥산-2-일)에틸)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(61 mg, 0.137 mmol, 71% 수율)를 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.78분, [MH]+ = 402.2.
실시예 74: N 5 -(3-((2 r ,5 S )-5-아미노-1,3-디옥산-2-일)프로필)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00153
에탄올(3 mL) 중 N 5-(3-((2r,5S)-5-(1,3-디옥사이소인돌린-2-일)-1,3-디옥산-2-일)프로필)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(81 mg, 0.148 mmol)의 현탁액에 하이드라진 하이드레이트(90 μL, 1.836 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 19 h 동안 교반하였다. 미정제 생성물을 여과하고, MDAP(높은 pH)에 의해 정제하였다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 진공에서 농축시켜 N 5-(3-((2r,5S)-5-아미노-1,3-디옥산-2-일)프로필)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(42 mg, 0.091 mmol, 61% 수율)를 제공하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.80분, [MH]+ = 416.3.
실시예 75: N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-(( R )-2-하이드록시-1-페닐에틸)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00154
N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-((R)-2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에틸)-N 3 -메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(214 mg, 0.442 mmol)를 디옥산 중 4M 염산(500 μL, 2.000 mmol)에 취하고, 1.5 h 동안 교반하였다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO(2 x 1 mL)에 용해시키고, MDAP(높은 pH)에 의해 정제시켰다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-((R)-2-하이드록시-1-페닐에틸)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(68.4 mg, 0.166 mmol, 38% 수율)를 두 번째로 용리되는 위치이성질체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.71분, [MH]+ = 371.2.
실시예 76: N 5 -((1 R ,5 S ,6 s )-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00155
DCM(2 mL) 중 3차-부틸 (1R,5S,6s)-6-(3-(메틸카르바모일)-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복사미도)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-카르복실레이트(95 mg, 0.209 mmol)의 부분 현탁액에 TFA(0.5 mL, 6.49 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 6 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 2 g SCX 카트리지(MeOH로 미리-조건화됨) 상에 로딩하였다. 이것을 MeOH(30 mL)에 이어 MeOH 중 2M NH3(30 mL)로 용리하였다. 생성물을 함유하는 암모니아 분획을 합치고, 농축시켜 표제 화합물(57 mg, 0.145 mmol, 69% 수율)을 담황색 오일로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.51분, [MH]+ = 354.4
실시예 77: N 5 -((1 R ,5 S ,6 s )-3-아세틸-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00156
N 5-((1R,5S,6s)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(49 mg, 0.139 mmol)를 아세트산 안하이드라이드(300 μL, 3.18 mmol)에서 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 반응물을 포화된 NaHCO3(aq.)로 희석하고, EtOAc로 추출하고, 유기상을 물로 세척하고, 소수성 프릿을 사용하여 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(46 mg, 0.105 mmol, 76% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.77분, [MH]+ = 396.4
실시예 78: 1-((1 H -인돌-4-일)메틸)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00157
N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(99.7 mg, 0.187 mmol)를 THF(4 mL) 및 메탄올(2 mL)에 취했다. 세슘 카르보네이트(304 mg, 0.934 mmol)를 첨가하고, 반응물을 73℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축하였다. 물(10 mL)을 잔류물에 첨가하고, 이어서 2N HCl을 사용하여 산성화한 다음, 에틸 아세테이트(2 x 10 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 Na2SO4로 건조시키과, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물(63.8 mg, 0.160 mmol, 85% 수율)을 보라색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.74분, [MH]+ = 380.3
실시예 79: 1-((1 H -인돌-4-일)메틸)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 s )-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00158
3차-부틸 (1R,5S,6s)-6-(1-((1H-인돌-4-일)메틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복사미도)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-카르복실레이트(86.5 mg, 0.181 mmol)를 DCM(4 mL)에 취했다. TFA(1 mL, 12.98 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축하였다. 이후 샘플을 메탄올 중에서 로딩하고, 메탄올로 세척한 다음 2M 암모니아/메탄올로 용리하면서, 1 g SCX 카트리지를 사용하여 고체상 추출에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 증발시켜 미정제 생성물을 크림색 고체로서 수득하였다. 미정제 생성물을 1:2 MeOH:DCM(30 mL)에 취하고, 자유 흐름 실리카를 첨가하였다(1 g). 용매를 진공에서 제거하고, 실리카를 최소 DCM에서 10 g 울트라 SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 2CV에 대해 DCM 중 0%(메탄올 중 2M NH3)에 이어 0-20%(메탄올 중 2M NH3)/DCM으로 용리하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물, 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N 5-((1R,5S,6s)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(29.4 mg, 0.070 mmol, 39% 수율)를 녹색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.46분, [MH]+ = 379.4
실시예 80: 1-(1-(1 H -인돌-4-일)에틸)- N 5 -((1 r ,4 r )-4-하이드록시사이클로헥실)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00159
메탄올(2 mL) 및 THF(4 mL) 중 N 5-((1r,4r)-4-하이드록시사이클로헥실)-N 3-메틸-1-(1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(330 mg, 0.585 mmol)의 용액에 Cs2CO3(1546 mg, 4.74 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 2.5 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시키고, 염수로 세척하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트(2x 15 mL)로 추가 추출하였다. 유기층을 합치고, 소수성 프릿으로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 153 mg의 미정제 잔류물을 제공하였다. 미정제 생성물을 1:1 DMSO:메탄올(2 mL)에 용해시키고, MDAP(포름산)에 의해 정제하였다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 포화된 NaHCO3 용액 및 DCM 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 두 추가 부분의 DCM(2 x 15 mL)으로 추가 추출하였다. 유기층을 합치고, 건조시키고(소수성 프릿), 진공에서 농축시켜 표제 화합물(79 mg, 0.193 mmol, 33% 수율)을 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.76분, [M-H]- = 408
실시예 81: 1-(( S *)-1-(1 H -인돌-4-일)에틸)- N 5 -((1 r ,4 S )-4-하이드록시사이클로헥실)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드(메틸 중심에서 알 수 없는 구성의 단일 거울상이성질체)
Figure 112019099269087-pct00160
69 mg의 1-(1-(1H-인돌-4-일)에틸)-N 5-((1r,4r)-4-하이드록시사이클로헥실)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(제조를 위해 실시예 80 참조)를 다음 조건을 이용하여 키랄 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하였다:
미정제 샘플을 가열하며 EtOH(4 mL)에 용해시켰다.
주입: 2 mL의 용액을 컬럼 상에 주입하였다.
용매: 20% EtOH(+0.2% 이소프로필아민)/헵탄, 유량=30 mL/분. 파장 215 nm
컬럼: 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 μm)
총 주입 수: 2
처음 용리되는 피크에 상응하는 분획을 합치고, 증발시켜 요망되는 생성물(30 mg)을 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.74분, [M-H]- = 408
실시예 82: 1-(1-(1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-4-일)에틸)- N 3 -메틸- N 5 -((1 S ,2 S )-2-메틸사이클로프로필)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00161
메탄올(2 mL) 및 THF(4 mL) 중 N 3-메틸-N 5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(1-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(300 mg, 0.576 mmol)의 용액에 Cs2CO3(1502 mg, 4.61 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물(현탁액)을 70℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트(2x 20 mL)로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿으로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 152 mg의 미정제 잔류물을 수득하였다. 이것을 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산에 이어 100% 에틸 아세테이트 내지 25% EtOH/에틸 아세테이트의 구배로 용리하며 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물을 담황색 고체(74 mg, 28% 수율)로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.65분, [MH]+ = 367.1
실시예 83: 1-(( S* )-1-(1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-4-일)에틸)- N 3 -메틸- N 5 -((1 S ,2 S )-2-메틸사이클로프로필)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00162
실시예 82(62 mg)를 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 라세미체를 가열하며 EtOH(4 mL)에 용해시켰다. 주입: 2 mL의 용액을 컬럼 20% EtOH(+0.2% 이소프로필아민)/헵탄(+0.2% 이소프로필아민) 상에 주입하였다(유량 = 30 mL/분, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100, 컬럼 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 μm), lot no. ADH13231). 총 주입 수 = 2. 10-11분으로부터의 분획을 벌크화하고, 피크 1로 표시하였다. 14-16분으로부터의 분획을 벌크화하고, 피크 2로 표시하였다. 벌크화된 순수한 분획을 진공에서 농축시킨 다음, 칭량된 플라스크로 옮겼다.
피크 1에 상응하는 분획을 수집하여 실시예 83(23 mg)을 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.67분, [MH]+ = 367.2.
실시예 84: 1-((1 H -인돌-5-일)메틸)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00163
N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((1-토실-1H-인돌-5-일)메틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(135 mg, 0.253 mmol)를 THF(2 mL) 및 메탄올(1 mL)에 현탁시켰다. 세슘 카르보네이트(412 mg, 1.265 mmol)를 첨가하고, 반응물을 70℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축시키고. 물(20 mL)을 잔류물에 첨가하고, 이것을 에틸 아세테이트(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(67.4 mg, 0.169 mmol, 67% 수율)을 옅은 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 높은 pH): Rt = 0.76분, [MH]+ = 380.5
실시예 85: 1-(1-(1 H -인돌-5-일)에틸)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00164
N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-(1-(1-토실-1H-인돌-5-일)에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(117 mg, 0.214 mmol)를 THF(2 mL) 및 메탄올(1 mL)에 취했다. 세슘 카르보네이트(348 mg, 1.068 mmol)를 첨가하고, 반응물을 70℃에서 2 h 동안 교반하였다. 물(15 mL)을 잔류물에 첨가하고, 이것을 에틸 아세테이트(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 무색 고체를 수득하였다. 미정제 생성물을 MDAP(포름산)에 의해 정제하였다. MDAP가 생성물을 수집하지 못했으므로, 폐기물을 진공에서 농축하고, 잔류물을 MDAP(포름산)에 의해 정제하였다. MDAP가 생성물을 수집하지 못했으므로, 폐기물을 진공에서 수집하고, 잔류물을 MDAP(포름산)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 질소의 스트림 하에 건조시켜 1-(1-(1H-인돌-5-일)에틸)-N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(12.2 mg, 0.028 mmol, 13% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.82분, [M-H]- = 392.
실시예 86: 1-(1-(1 H -인돌-4-일)에틸)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00165
메탄올(2 mL) 및 THF(4 mL) 중 N 5-((1R,5S)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-(1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(278 mg, 0.508 mmol)의 용액에 Cs2CO3(1323 mg, 4.06 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 2.5 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트(2x 20 mL)로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿으로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 152 mg의 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 MDAP(포름산)에 의해 정제하였다. 요망되는 생성물을 함유하는 분획을 포화된 NaHCO3 용액 및 DCM 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 DCM(2x 20 mL)으로 추가 추출하였다. 합친 유기층을 건조시키고(소수성 프릿), 진공에서 농축시켜 요망되는 생성물(44 mg, 0.101 mmol, 20% 수율)을 연한 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (높은 pH): Rt = 0.80분, [M-H]- = 392
실시예 87: 1-(( S *)-1-(1 H -인돌-4-일)에틸)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00166
36 mg의 1-(1-(1H-인돌-4-일)에틸)-N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(제조를 위해 실시예 86 참조)를 다음 조건을 사용하여 키랄 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하였다:
미정제 샘플을 가열하며 EtOH(4 mL)에 용해시켰다.
주입: 2 mL의 용액을 컬럼 상에 주입하였다.
용매: 20% EtOH/헵탄, 유량=30 mL/분. 파장 215 nm
컬럼: 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 μm)
총 주입 수: 2
처음 용리되는 피크에 상응하는 분획을 합치고, 증발시켜 요망되는 생성물(13 mg)을 제공하였다.
LCMS (포름산): Rt = 0.80분, [M-H]- = 392
실시예 88: 1-(( S )-1-(3-클로로페닐)에틸)- N 5 -((1 R ,3 R ,5 S ,6 r )-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00167
N 5-((1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-((S)-1-(3-클로로페닐)에틸)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(257 mg, 0.497 mmol)를 디옥산 중 4M 염산(5 mL, 20.00 mmol)에 취하고, rt에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 미정제 생성물을 MDAP(높은 pH)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 1-((S)-1-(3-클로로페닐)에틸)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(35 mg, 0.083 mmol, 17% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.89분, [MH]+ = 403.6.
다음 실시예는 실시예 88과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00168
실시예 90: 1-(( S )-1-(3-클로로페닐)에틸)- N 5 -((1 R ,3 S ,5 S ,6 r )-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00169
N 5-((1R,5S,6r)-3-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-((S)-1-(3-클로로페닐)에틸)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(257 mg, 0.497 mmol)를 디옥산 중 4M 염산(5 mL, 20.00 mmol)에 취하고, rt에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 미정제 생성물을 MDAP(높은 pH)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 진공에서 농축시켜 1-((S)-1-(3-클로로페닐)에틸)-N 5-((1R,3S,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(52.5 mg, 0.124 mmol, 24.91% 수율)를 크림색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.92분, [MH]+ = 403.6.
다음 실시예는 실시예 90과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00170
실시예 92: 1-벤질- N 5 -사이클로프로필- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00171
질소 하에 rt에서 교반된 DMF(1 mL) 중 1-벤질-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(1 g, 3.66 mmol) 및 DIPEA(3.84 mL, 21.99 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드(0.642 mL, 7.33 mmol)를 첨가한 다음 사이클로프로판아민(0.418 g, 7.33 mmol)을 1회 충전으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 16 h 동안 교반하였다. 반응물을 얼음물에 붓고, 이어서 EtOAc(3x 20 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 60-120 컬럼에 첨가하고, n-헥산 중 65% EtOAc로 용리하고, 수집된 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 1-벤질-N 5-사이클로프로필-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(901 mg, 2.75 mmol, 75% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다.
LCMS (5.5분 방법 E): Rt = 2.47분, [MH]+ = 299.3.
실시예 93-138:
실시예 93-138은 상기 기술된 실시예와 유사한 방식으로 제조되었다.
Figure 112019099269087-pct00172
Figure 112019099269087-pct00173
Figure 112019099269087-pct00174
Figure 112019099269087-pct00175
Figure 112019099269087-pct00176
Figure 112019099269087-pct00177
Figure 112019099269087-pct00178
실시예 139: N 5 -((1 r ,4 S )-4-메톡시사이클로헥실)- N 3 -메틸-1-(( S )-1-페닐에틸)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00179
(S)-3-(메틸카르바모일)-1-(1-페닐에틸)-1H-피라졸-5-카르복실산(제조를 위해, 중간체 5 참조, 112 mg, 0.410 mmol)을 DMF(1 mL)에 용해시킨 후 HATU(234 mg, 0.615 mmol)를 첨가하였다. 이후 (1r,4r)-4-메톡시사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드(82 mg, 0.445 mmol)에 이어 DIPEA(0.358 mL, 2.049 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 샘플을 직접 MDAP(높은 pH)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공에서 농축시켜 N 5-((1r,4S)-4-메톡시사이클로헥실)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(135 mg, 0.316 mmol, 77% 수율)를 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.96분, [MH]+ = 385.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 8.32 (d, J=7.83 Hz, 1 H) 8.09 - 8.17 (m, 1 H) 7.20 - 7.34 (m, 6 H) 6.67 (q, J=7.01 Hz, 1 H) 3.60 - 3.74 (m, 1 H) 3.23 (s, 3 H) 3.03 - 3.14 (m, 1 H) 2.78 (d, J=4.65 Hz, 3 H) 1.94 - 2.05 (m, 2 H) 1.84 (d, J=7.09 Hz, 4 H) 1.71 - 1.79 (m, 1 H) 1.13 - 1.40 (m, 4 H)
실시예 140: N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-(인돌린-4-일메틸)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00180
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(제조를 위해, 실시예 78 참조, 10 mg, 0.026 mmol)를 빙초산(1 mL)에 취했다. 소듐 시아노보로하이드라이드(3.31 mg, 0.053 mmol)를 첨가하고, 반응물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, DCM 중 10% MeOH로 추출하였다. 수성층을 진공에서 농축시키고, DCM 중 10% MeOH로 추출하였다. 합친 유기물을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 농축시켜 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 MDAP(높은 pH)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 진공에서 농축시켜 N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-(인돌린-4-일메틸)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(3.8 mg, 8.47 μmol, 32% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
LCMS (2분 HpH): Rt = 0.69분, [MH]+ = 382.2
실시예 141: 1-(1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에틸)- N 3 -메틸- N 5 -((1 S ,2 S )-2-메틸사이클로프로필)-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드, 부분입체이성질체의 혼합물
Figure 112019099269087-pct00181
1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-N 3 -메틸-N 5 -((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(제조를 위해, 중간체 132 참조, 1.1 g, 2.197 mmol, 부분입체이성질체의 혼합물)를 DCM(20 mL)에 용해시키고, HCl(5 mL, 5.00 mmol, 에테르 중 1M)을 첨가한 다음, 혼합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고, 잔류물을 DCM(10 mL)에 용해시키고, 25 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 이를 0-100% (25% EtOH/EtOAc)/사이클로헥산으로 용리하고, 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 1-(1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에틸)-N 3 -메틸-N 5 -((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(0.71 g, 1.837 mmol, 84% 수율, 부분입체이성질체의 혼합물)를 무색 고체로서 수득하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.81분, [M+Na]+ = 409.3.
실시예 142: (+/-)- N 5 -((1 R ,5 S ,6 r )-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-(1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에틸)- N 3 -메틸-1 H -피라졸-3,5-디카르복사미드
Figure 112019099269087-pct00182
(+/-)-1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-3-(메틸카르바모일)-1H-피라졸-5-카르복실산(제조를 위해, 중간체 131 참조, 0.27 g, 0.603 mmol), (1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-아민, 하이드로클로라이드(0.106 g, 0.784 mmol), HATU(0.298 g, 0.784 mmol) 및 Et3N(0.252 mL, 1.810 mmol)을 DCM(20 mL)에 용해시키고, 혼합물을 2 h 동안 교반한 다음, 주말 내내 rt에서 정치시켰다. 생성된 혼합물을 물(50 mL)과 함께 1 h 동안 교반한 다음, 유기층을 분리하고, 건조시키고, 진공에서 증발시켜 담황색 검을 제공하였다. 이것을 DCM에 용해시키고, 100 g SNAP 울트라 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리하였다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 (+/-)-N 5 -((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-(1-(3-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)페닐)에틸)-N 3 -메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(0.14 g, 0.265 mmol, 44% 수율)를 무색 고체로서 제공하였다. 이 고체를 DCM(5 mL)에 용해시키고, HCl(2 mL, 2.0 mmol, 에테르 중 1M)을 첨가한 다음. 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고, 미정제 생성물을 DCM에 용해시키고, 10 g 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 0-100%(25% EtOH/EtOAc)/사이클로헥산으로 용리하며 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 생성물-함유 분획을 진공에서 증발시켜 (+/-)-N 5 -((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-(1-(3-(2-하이드록시에톡시)페닐)에틸)-N 3 -메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드(81 mg, 0.195 mmol, 32% 수율)를 무색 포움으로서 제공하였다.
LCMS (2분 포름산): Rt = 0.71분, [MH]+ = 415.4.
다음 실시예는 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00183
Figure 112019099269087-pct00184
Figure 112019099269087-pct00185
Figure 112019099269087-pct00186
Figure 112019099269087-pct00187
Figure 112019099269087-pct00188
Figure 112019099269087-pct00189
Figure 112019099269087-pct00190
Figure 112019099269087-pct00191
다음 실시예는 실시예 81과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00192
Figure 112019099269087-pct00193
Figure 112019099269087-pct00194
Figure 112019099269087-pct00195
Figure 112019099269087-pct00196
Figure 112019099269087-pct00197
다음 실시예는 실시예 88과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00198
Figure 112019099269087-pct00199
Figure 112019099269087-pct00200
다음 실시예는 실시예 74와 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00201
다음 실시예는 실시예 75와 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00202
Figure 112019099269087-pct00203
다음 실시예는 실시예 86과 유사한 방식으로 제조되었다:
Figure 112019099269087-pct00204
실시예 220-261은 상기 기술된 실시예와 유사한 방식으로 제조되었다.
Figure 112019099269087-pct00205
Figure 112019099269087-pct00206
Figure 112019099269087-pct00207
Figure 112019099269087-pct00208
Figure 112019099269087-pct00209
Figure 112019099269087-pct00210
Figure 112019099269087-pct00211
Figure 112019099269087-pct00212
Figure 112019099269087-pct00213
Figure 112019099269087-pct00214
생물학적 데이터
화학식(I)의 화합물은 하기 검정 중 하나 이상으로 시험될 수 있다:
시간 분해 형광 공명 에너지 전이(Time Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer)(TR-FRET) 검정
브로모도메인 결합을 시간 분해 형광 공명 에너지 전이(time resolved fluorescent resonance energy transfer (TR-FRET)) 경쟁 검정을 이용하여 평가하였다. 이 접근법을 가능하게 하기 위해, 알려져 있는 고친화도의 pan-BET 상호작용 소분자를 원적외선 형광 염료(비교 화합물 X)인 Alexa Fluor® 647로 라벨링하였다. 비교 화합물 X는 브로모도메인 결합의 리포터로서 작용하고, TR-FRET 쌍의 어셉터 형광단 성분이다. 항-6*His 항체에 컨쥬게이션된 유로퓸 킬레이트를 TR-FRET 쌍의 도너 형광단으로서 사용하였다. 항-6*His 항체는 본 연구에 사용된 각각의 BET 탠덤 브로모도메인 단백질 작제물의 아미노-말단에 첨가되는 6개의 히스티딘 정제 에피토프에 선택적으로 결합한다. 도너 및 어셉터 형광단이 20-80Å 사이로 아주 근접하게 있을 때, TR-FRET 신호가 생성되며, 이는 비교 화합물 X가 브로모도메인 단백질에 결합함으로써 이 검정에서 가능하게 된다.
비교 화합물 X: 4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]디아제핀-4-일)아세트아미도)펜틸)아미노)-6-옥소헥실)-2-((2E,4E)-5-(3,3-디메틸-5-설포-1-(4-설포부틸)-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일리덴)-3-메틸-5-설포인돌린-1-일)부탄-1-설포네이트)
Figure 112019099269087-pct00215
DMF(40 μL) 중 N-(5-아미노펜틸)-2-((4S)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]디아제핀-4-일)아세트아미드(제조를 위해, 비교 화합물 J, WO2011/054848A1호 참조, 1.7 mg, 3.53 μmol)의 용액에 또한 DMF(100 μL) 중 AlexaFluor647-ONSu(2.16 mg, 1.966 μmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 DIPEA(1 μl, 5.73 μmol)로 염기성화시키고, 볼텍스 믹서(vortex mixer)에서 밤새 교반하였다.
반응 혼합물을 증발 건조시켰다. 고체를 MeCN/물/AcOH(5/4/1, <1 mL)에 용해시키고, 여과하고, Phenomenex Jupiter C18 분취용 컬럼에 적용하고, 다음의 구배로 용리시켰다(A = 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산, B= 0.1% TFA/90% MeCN/10% 물): 유량 = 10 mL/분., AU = 20/10 (214nm):
5-35%, t=0분: B = 5%; t=10분: B = 5%; t=100분: B = 35%; t=115분: B = 100%(분리 구배: 0.33%/분)
주 성분이 26-28%B 범위에 걸쳐 용리되었지만, 두 개의 피크로 구성되는 것으로 나타났다. 성분 "둘 모두"를 함유해야 하는 중간 분획(F1.26)을 분석용 HPLC에 의해 분석하였다(Spherisorb ODS2, 60분에 걸쳐 1 내지 35%): 28%B에서 단일 성분 용리.
분획 F1.25/26&27을 합치고, 증발 건조시켰다. DMF와 함께 옮기고, 증발 건조시키고, 건조 에테르로 분쇄하고, 청색 고체를 밤새 <0.2mbar에서 건조시켰다: 1.54 mg.
분석용 HPLC(Sphersisorb ODS2, 60분에 걸쳐 1 내지 35%B): MSM10520-1: [M+H]+ (obs): M-29에 상응하는 661.8/-. 이는 M-29인 1320.984의 계산된 질량에 대한 [(M+2H)/2]+와 동일시된다. 이는 Alexa Fluor 647 염료에 의한 표준 발생률이고, 질량 분석기의 조건 하에서의 두 개의 메틸렌 기의 이론적 손실을 나타낸다.
검정 원리: TR-FRET 신호를 생성하기 위해, 도너 형광단을 λ337 nm에서 레이저에 의해 여기시키고, 이어서 λ618 nm에서 방출되게 하였다. 어셉터 형광단이 아주 인접하여 있다면, 에너지 전이가 일어날 수 있으며, 이는 λ665 nm에서 Alexa Fluor® 647의 방출을 유도한다. 경쟁 화합물의 존재 하에, 비교 화합물 X는 브로모도메인에 결합하는 것에서 벗어날 수 있다. 변위가 발생하면, 어셉터 형광단은 더 이상 도너 형광단에 근접하지 않는데, 이는 형광 에너지 전이를 막고, 이어서 λ665 nm에서 Alexa Fluor® 647 방출의 손실을 막는다.
BET 패밀리(BRD2, BRD3, BRD4 및 BRDT)와의 결합에 대한 화학식(I)의 화합물과 비교 화합물 X의 경쟁은 브로모도메인 1(BD1) 및 브로모도메인 2(BD2) 둘 모두에 걸친 단백질 트렁케이트(protein truncate)를 사용하여 평가되었다. BD1 또는 BD2에 대한 차등 결합을 모니터링하기 위해, 주요 티로신에서 알라닌으로의 단일 잔기 돌연변이가 아세틸 리신 결합 포켓(pocket)에서 이루어졌다. 이 접근법을 검증하기 위해, BET 패밀리 구성원 각각에 대해 이중 잔기 돌연변이체 탠덤 도메인 단백질을 생성시켰다. 형광 편광 접근법을 이용하여, 비교 화합물 X에 대한 단일 및 이중 돌연변이체 각각에 대한 결합 친화도를 결정하였다. 비교 화합물 X에 대한 이중 돌연변이체 탠덤 단백질의 친화도는 돌연변이되지 않은 야생형 탠덤 BET 단백질과 비교하여 크게 감소되었다(Kd에서 > 1000배 감소). 비교 화합물 X에 대한 단일 돌연변이된 브로모도메인 탠덤 단백질의 친화도는 상응하는 돌연변이되지 않은 BET 단백질과 동등하였다. 이들 데이터는 티로신에서 알라닌으로의 단일 돌연변이가 돌연변이된 브로모도메인과 비교 화합물 X 간의 상호작용의 Kd를 > 1000배 만큼 감소시킴을 입증하였다. TR-FRET 경쟁 검정에서, 비교 화합물 X는 돌연변이되지 않은 브로모도메인에 대한 Kd와 동등한 농도로 사용되며, 이는 돌연변이된 브로모도메인에서의 결합이 검출되지 않음을 보장한다.
단백질 생성: 재조합 인간 브로모도메인[(BRD2 (1-473) (Y113A) 및 (Y386A), BRD3 (1-435) (Y73A) 및 (Y348A) BRD4 (1-477) (Y97A) 및 (Y390A) 및 BRDT (1-397) (Y66A) 및 (Y309A)]을 N-말단에 6-His 태그를 지니는 이. 콜라이(E. coli) 세포(BRD2/3/4에 대해 pET15b 벡터에서, 그리고 BRDT에 대해 pET28a 벡터에서)에서 발현시켰다. His-태깅된 브로모도메인 펠릿을 50mM HEPES(pH7.5), 300mM NaCl, 10mM 이미다졸 & 1 μL/mL 프로테아제 억제제 칵테일(cocktail) 중에 재현탁시키고, 초음파처리를 이용하여 이. 콜라이 세포로부터 추출하고, 니켈 세파로스 고성능 컬럼을 사용하여 정제하고, 단백질을 세척한 후, 20 컬럼 부피 이상의, 완충제 50mM HEPES(pH7.5), 150mM NaCl, 500mM 이미다졸과 함께 0-500mM 이미다졸의 선형 구배로 용리시켰다. 최종 정제를 Superdex 200 분취용 등급 크기 배제 컬럼에 의해 완료하였다. 정제된 단백질을 -80℃에서 20mM HEPES pH 7.5 및 100mM NaCl 중에 저장하였다. 단백질 실체를 펩티드 질량 지문법(peptide mass fingerprinting)에 의해 확인하고, 예상되는 분자량을 질량 분광법에 의해 확인하였다.
브로모도메인 BRD2, 3, 4 및 T, BD1 + BD2 돌연변이체 TR-FRET 경쟁 검정에 대한 프로토콜: 모든 검정 성분을 50 mM HEPES pH7.4, 50mM NaCl, 5% 글리세롤, 1mM DTT 및 1mM CHAPS로 구성된 검정 완충제에 용해시켰다. 비교 화합물 X를 이 브로모도메인에 대한 2*Kd와 동일한 농도로, 20 nM 단일 돌연변이체, 탠덤 브로모도메인 단백질을 함유하는 검정 완충제로 희석하였다. 브로모도메인 및 비교 화합물 X를 함유하는 용액을 Greiner 384 웰 블랙 저용적 미세역가 플레이트에서 시험 화합물의 용량 반응 희석물 또는 DMSO 비히클(이 검정에서 최대 0.5% DMSO가 사용됨)에 첨가하고, 이어서 30분 동안 rt에서 인큐베이션하였다. 3nM의 동일 부피의 항-6*His 유로퓸 킬레이트를 모든 웰에 첨가한 후, rt에서 추가 30분 동안 인큐베이션을 수행하였다. λ337 nm에서 도너 형광단을 여기시키고, 이어서 50 μsec의 지연 후, λ615 nm 및 λ665 nm에서 도너 및 어셉터 형광단의 방출을 각각 측정함으로써 Perkin Elmer Multimode 플레이트 판독기를 사용하여 TR-FRET를 검출하였다. 이들 검정을 제어하기 위해, 각각 비억제된(DMSO 비히클) 및 억제된(WO 2011/054846A1호의 실시예 11의 10*IC50 농도) TR-FRET 검정의 16개의 복제물을 각 미세역가 플레이트 상에 포함시켰다.
이후, 하기 형태의 cA 4 파라미터 곡선 핏(four parameter curve fit)을 적용시켰다:
y = a + (( b - a)/( 1 + ( 10 ^ ×/10 ^ c ) ^ d )
상기 식에서, 'a'는 최소값이고, 'b'는 힐 슬로프(Hill slope)이고, 'c'는 pIC50이고, 'd'는 최대값이다.
모든 화합물(실시예)을 본질적으로 상기 기재된 대로 BRD4 BD1 및 BRD4 BD2 TR-FRET 검정에서 각각 시험하였다. 당업자는 기능 활성에 대한 시험관내 결합 검정 및 세포-기반 검정에 실험적 변동이 있음을 인지할 것이다. 따라서, 하기 제공된 pIC50 값은 단지 예시적인 것으로 이해되어야 한다. pIC50 값은 log10 단위로 표시된다.
실시예 131, 242-247 및 249-261을 제외한 모든 실시예는 상기 기재된 적어도 하나의 검정에서 pIC50 ≥ 5.0인 것으로 나타났다.
실시예 94, 96, 102, 106, 108-110, 112, 114, 132, 135, 135, 136, 137, 229, 233, 234, 236-241 및 248은 BRD4 BD2 검정에서 pIC50 ≥ 5.0 및 < 6.0인 것으로 나타났다.
모든 다른 화합물은 BRD4 BD2 검정에서 pIC50 ≥ 6.0 및 < 8.0인 것으로 나타났다. 특히, 실시예 1은 BRD4 BD2 검정에서 7.2의 pIC50을 갖는 것으로 나타났다; 실시예 2는 BRD4 BD2 검정에서 7.1의 pIC50을 갖는 것으로 나타났다; 실시예 3은 BRD4 BD2 검정에서 7.5의 pIC50을 갖는 것으로 나타났다; 그리고 실시예 139는 BRD4 BD2 검정에서 7.4의 pIC50을 갖는 것으로 나타났다.
BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성 계산
BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성을 하기와 같이 계산하였다:
선택성 = BRD4 BD2 pIC50 - BRD4 BD1 pIC50
실시예 114, 116, 131, 134, 136-138 및 238-261을 제외한 모든 실시예는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 ≥ 1 log 단위의 선택성을 갖는 것으로 나타났으므로, BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 적어도 10배 더 선택적이다.
실시예 1-91, 139-219는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 ≥ 2 log 단위의 선택성을 갖는 것으로 나타났으므로, BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 적어도 100배 더 선택적이다.
실시예 1은 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 2.8 log 단위의 선택성을 갖는 것으로 나타났다.
실시예 2는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 3.0 log 단위의 선택성을 갖는 것으로 나타났다.
실시예 3은 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 3.0 log 단위의 선택성을 갖는 것으로 나타났다.
실시예 139는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대해 3.0 log 단위의 선택성을 갖는 것으로 나타났다.

Claims (30)

  1. 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure 112021129131374-pct00216

    상기 식에서,
    R1은 -C1-3알킬이고;
    R2는 -C0-3알킬-사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환되고, 고리에 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 구성원 원자를 갖는 포화된 탄화수소 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 고리 또는 포화된 스피로-결합된 바이사이클릭 탄화수소 고리를 나타내거나;
    R2는 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환되고, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 하나의 헤테로원자 및 선택적으로 추가의 헤테로원자를 포함하여, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 고리 구성원 원자를 함유하는 비방향족 헤테로사이클릭 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 고리 시스템을 나타내거나;
    R2는 H, -CH3, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C2-6알킬, -C2-6알킬OR6, -C2-6알킬NR10aR11a, -(CH2)mSO2C1-3알킬, -(CH2)mSO2NR10R11, -(CH2)mC(O)NR10R11, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mNHCO2C1-4알킬, -(CH2)mNHC(O)C1-4알킬 또는 -(CH2)n헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고, 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 포함하여, 5 또는 6개의 구성원 원자를 갖는 모노사이클릭 방향족 기를 나타내고;
    R3은 H, -C1-4알킬, 사이클로프로필, -CH2F, -CH(OH)CH3, 또는 -C1-3알킬OR6이고;
    R4는 페닐 또는 헤테로아릴 기이고, 여기서 각각은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되고, 헤테로아릴 기는 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 포함하여, 5, 6, 8, 9, 10 또는 11개의 구성원 원자를 갖는 모노사이클릭 방향족 기 또는 바이사이클릭 기를 나타내고, 바이사이클릭 기의 적어도 한 고리는 방향족이고;
    각각의 R5는 독립적으로 할로, -C0-6알킬-R8, -O-C2-6알킬-R8, -OCH2페닐, -CN 또는 -SO2C1-3알킬이고;
    R6은 H 또는 -C1-4알킬이고;
    각각의 R7은 독립적으로 옥소, 할로, 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 치환되거나 비치환된 -C1-4알킬, C3-4사이클로알킬, -C0-3알킬OR6, -OC2-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -C0-3알킬-CONR10R11, -CN, -SO2-C1-3알킬, -SO2NR10R11 또는 -C1-4알킬에 의해 치환되거나 비치환된 -SO2페닐이고;
    R8은 H, -OR6, 또는 -NR10R11이고;
    각각의 R9는 독립적으로 할로, -C1-4알킬, 사이클로프로필, 사이클로부틸, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH2CH2F, -OCH2CH2OR6, -C0-3알킬OR6, -C0-3알킬NR10R11, -NHCH2CH2OR6, -NHCO2C1-4알킬, 옥소, -C(O)R6, -C(O)OR6 또는 -C(O)NR10R11이고;
    R10 및 R11은 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되거나; R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 결합하여 1, 2 또는 3개의 불소 원자로 치환되거나 비치환된 -C1-3알킬, -C2-4알킬OH, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기에 의해 치환되거나 비치환된 4 내지 7원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
    R10a 및 R11a는 각각 독립적으로 H 및 -C1-3알킬로부터 선택되고;
    m은 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되는 정수이다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 메틸인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  3. 제1항에 있어서, R2가 -C0-3알킬-C3-7사이클로알킬 기이고, 여기서 C3-7사이클로알킬 기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실 또는 바이사이클로[3.1.0]헥사닐로부터 선택되며, 상기 기들은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기에 의해 치환되거나 비치환되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  4. 제1항에 있어서, R2가 -C0-4알킬-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 모르폴리닐, 피페리디닐, 피페라지닐, (1r,5s)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥사닐 및 (1r,5s)-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐로부터 선택되며, 상기 기들은 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R9 기에 의해 치환되거나 비치환되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  5. 제1항에 있어서, R2가 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 부틸, -CH2CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH2OR6, -CH2CH2CH2OR6, -CH2CH(CH3)OR6, -CH2CH2CH(CH3)OR6, -CH2CH2CH(CH3)NR10aR11a, -CH2CH2CH2NR10aR11a, -(CH2)mSO2CH3, -(CH2)mC(O)NHCH3, -(CH2)mCN, -(CH2)mCO2R6, -(CH2)mCF3 및 -(CH2)mNHCO2C(CH3)3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항에 있어서, R2가 -(CH2)nC5-6헤테로아릴이고, 여기서 C5-6헤테로아릴 기는 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 트리아졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 이속사졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐 및 피리미디닐로부터 선택되며, 상기 기들은 할로, C1-4알킬, C3-4사이클로알킬 및 -C0-3알킬OR6로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 치환되거나 비치환되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  7. 제1항에 있어서, R3이 H, 메틸, 에틸, -CH2F, -CH2OH, -CH(OH)CH3, 또는 -CH2OMe인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  8. 제1항에 있어서, R4가 비치환된 페닐이거나 할로, -C1-4알킬, -C0-3알킬OR6 및 -CN으로부터 선택되는 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기에 의해 치환된 페닐인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제1항에 있어서, R4가 피리딜, 인돌릴 및 피롤로피리디닐로 구성된 군으로부터 선택되는 헤테로아릴 기이고, 상기 기들은 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기에 의해 치환되거나 비치환되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 하기로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure 112021055007677-pct00217

    Figure 112021055007677-pct00218

    Figure 112021055007677-pct00219

    Figure 112021055007677-pct00220

    Figure 112021055007677-pct00221

    Figure 112021055007677-pct00222

    Figure 112021055007677-pct00223

    Figure 112021055007677-pct00224

    Figure 112021055007677-pct00225

    Figure 112021055007677-pct00226

    Figure 112021055007677-pct00227

    Figure 112021055007677-pct00228

    Figure 112021055007677-pct00229

    .
  11. 하기로부터 선택되는 화합물:
    N 5-((1r,4S)-4-하이드록시사이클로헥실)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
    N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드
    N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-1-((S)-1-(4-클로로페닐)에틸)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
    (S)-N 3-메틸-1-(1-페닐에틸)-N 5-(1H-피라졸-4-일)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
    1-((S)-1-(4-클로로페닐)에틸)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
    1-((S)-1-(3-클로로페닐)에틸)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드;
    N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-하이드록시바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐프로필)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드; 및
    N 5-((1r,4S)-4-메톡시사이클로헥실)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 하기 화학식으로 표시되는 N 5-((1R,5S,6r)-3-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-6-일)-N 3-메틸-1-((S)-1-페닐에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복사미드인 화합물:
    Figure 112021055007677-pct00230

    또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제 조성물로서, 암 또는 류마티스 관절염의 치료를 위한 약제 조성물.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
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