CN110582485A - 作为溴结构域抑制剂的吡唑衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及吡唑衍生物，包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物或所述组合物在治疗各种疾病中的用途。

Description

作为溴结构域抑制剂的吡唑衍生物
发明领域
本发明涉及作为溴结构域抑制剂的吡唑衍生物，包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物或所述组合物在治疗各种疾病或病症(例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病症、病毒感染和癌症)中的用途。
发明背景
真核生物的基因组在细胞核内高度组织化。双链DNA的长链包裹在组蛋白的八聚体(最通常包含组蛋白H2A、H2B、H3和H4的两个拷贝)的周围以形成核小体。然后通过核小体的聚集和折叠进一步压缩该基本单元，以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同的凝聚状态是可能的，并且该结构的紧密性在细胞周期期间变化，在细胞分裂过程中最紧密。染色质结构在调节基因转录中起关键作用，基因转录不能从高度凝聚的染色质中有效地发生。染色质结构由对组蛋白(尤其是组蛋白H3和H4)的一系列翻译后修饰控制，所述翻译后修饰最常发生于延伸超出核心核小体结构的组蛋白尾部内。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和SUMO化。这些表观遗传标记(epigenetic mark)由特定酶(specific enzyme)写入和擦除，所述特定酶将所述标记置于组蛋白尾部内的特定残基上，从而形成表观遗传密码，该密码然后由细胞翻译以允许染色质结构的基因特异性调节并从而转录。
组蛋白乙酰化最经常与基因转录的激活有关，因为该修饰通过改变静电作用而放松DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除了这种物理变化，特定的蛋白识别并结合至组蛋白内的乙酰化赖氨酸残基，以读取表观遗传密码。溴结构域是蛋白内的小(~110个氨基酸)而独特的结构域，其在组蛋白的背景下通常但不仅仅与乙酰化赖氨酸残基结合。已知具有大约50种蛋白的家族含有溴结构域，它们在细胞内具有一系列功能。
含有溴结构域的蛋白的BET家族包括4种蛋白(BRD2、BRD3、BRD4和BRDT)，它们含有能够与极为接近的两个乙酰化赖氨酸残基结合的串联溴结构域，增加了相互作用的特异性。从各个BET蛋白的N-末端开始编号，所述串联溴结构域通常标记为结合域1(BD1)和结合域2(BD2)(Chung等人, J Med. Chem,.2011, 54, 3827-3838)。
Chan等人报道，BET溴结构域抑制在人单核细胞中以基因特异性方式抑制对细胞因子-Jak-STAT信号传导的转录应答，这表明BET抑制通过抑制细胞因子活性部分地减少了炎症。(Chan等人, Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297)。
Klein等人报道，溴结构域蛋白抑制剂I-BET151抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞中炎性基因和基质降解酶的表达，这表明在类风湿性关节炎中靶向表观遗传阅读器蛋白(epigenetic reader protein)的治疗潜力。(Klein等人, Ann. Rheum. Dis., 2014,0:1-8)。
Park-Min等人报道，靶向溴和外末端(BET)蛋白(其通过与乙酰化组蛋白结合“读取”染色质状态)的I-BET151强烈抑制破骨细胞生成。(Park-Min等人, Nature Communications, 2014, 5, 5418)。
PCT专利申请PCT/EP2016/070519、PCT/EP2016/072216和PCT/EP2016/073532均描述了作为溴结构域抑制剂的一系列吡啶酮衍生物。
发明概述
本发明涉及式(I)化合物或其盐：
其中：
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代；或
R2是-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代；或
R2是H、-CH3、任选被1、2、3、4或5个氟取代的-C2-6烷基、-C2-6烷基OR6、-C2-6烷基NR10aR11a、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR10R11、-(CH2)mC(O)NR10R11、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基任选被1或2个可相同或不同的R7基团取代；
R3是H、-C1-4烷基、环丙基、-CH2F、-C1-3烷基OR6或-C1-3烷基CN；
R4是苯基或杂芳基，其中每个任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代；
每个R5独立地是卤素、-C0-6烷基-R8、-OC2-6烷基-R8、-OCH2苯基、-CN或-SO2C1-3烷基；
R6是H或-C1-4烷基；
每个R7独立地是氧代、卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6、-OC2-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-C0-3烷基-CONR10R11、-CN、-SO2-C1-3烷基、-SO2NR10R11或任选被-C1-4烷基取代的-SO2苯基；
R8是H、-OR6、-NR10R11或杂芳基；
每个R9独立地是卤素、-C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR6、-C0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-NHCH2CH2OR6、-NHCO2C1-4烷基、氧代、-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)NR10R11；
R10和R11各自独立地选自H和-C1-3烷基；或R10和R11可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选被1或2个取代基取代的4至7-元杂环基，所述取代基独立地选自任选被1、2或3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F；
R10a和R11a各自独立地选自H和-C1-3烷基；
m是选自2、3或4的整数；
n是选自0、1、2、3或4的整数；且
p是选自2、3或4的整数。
本发明化合物已经显示为溴结构域抑制剂，特别是BD2选择性抑制剂，并且可以用于治疗各种疾病或病症，例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病症，例如类风湿性关节炎和癌症。因此，本发明还涉及包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本发明还进一步涉及使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物治疗与溴结构域相关的疾病或病症的方法。
发明详述
式(I)化合物及其盐在本文中称为“本发明化合物”。
“BD2”指的是蛋白BRD2、BRD3、BRD4或BRDT的BET家族中的任何一个的结合域2。
“烷基”指的是具有指定碳原子数的饱和烃链。例如，本文所用的术语“C1-3烷基”和“C1-4烷基”指的是分别具有1至3个或1至4个碳原子的直链或支链烷基。进一步地，术语“C0-3烷基”指的是具有0(即键)至3个碳原子的直链或支链烷基。代表性的支链烷基具有一个、两个或三个支链。烷基可以形成链的一部分，例如，-C0-3烷基OR6指的是连接至基团R6的具有0(即键)至3个碳原子的直链或支链烷基链。“烷基”包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。
“环烷基”指的是在环中具有3、4、5、6、7、8、9或10个成员原子的饱和烃单环或双环或饱和螺环连接的双环烃环。环烷基的合适实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、螺[3.3]庚基、双环[2.2.1]庚基、金刚烷基、双环[3.1.0]己基和双环[2.2.2]辛基。“C3-7环烷基”指的是在环中具有3、4、5、6或7个成员原子的饱和烃单环或双环或饱和螺环连接的双环烃环。C3-7环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和双环[3.1.0]己基。
“卤素”指的是卤素基团，例如氟、氯、溴或碘。
“杂芳基”指的是具有5、6、8、9、10或11个成员原子的单环或双环基团，包括1、2或3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子，其中该基团的至少一部分是芳族的。与分子的其余部分的连接点可以是任何合适的碳或氮原子。“杂芳基”的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、二氢苯并二氧杂环己二烯基(dihydrobenzodioxinyl)、苯并噻吩基、苯并氮杂䓬基、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂䓬基、吲哚嗪基、吲哚基、吲哚啉基、异吲哚基、二氢吲哚基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑基、苯并噁唑基、二氢苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、二氢苯并异噻唑基、吲唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并三唑基、三唑并吡啶基、嘌呤基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、1,5-萘啶基、1,6-萘啶基、1,7-萘啶基、1,8-萘啶基和蝶啶基。
“C5-6杂芳基”指的是具有5或6个成员原子的单环芳族基团，包括1、2、3或4个独立地选自氮、硫和氧的杂原子。与分子其余部分的连接点可以是任何合适的碳或氮原子。“C5-6杂芳基”的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基。
“杂原子”指的是氮、硫或氧原子。
“杂环基”指的是含有4、5、6、7、8、9或10个环成员原子的非芳族杂环单环或双环环系统，包括一个杂原子并且任选地含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子。“杂环基”的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、1,3-二氧杂环戊烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、1,3-二噁烷基、1,4-二噁烷基、1,3-氧杂硫杂环戊烷基、1,3-氧杂硫杂环己烷基、1,3-二硫杂环己烷基、1,4-氧杂硫杂环戊烷基、1,4-氧杂硫杂环己烷基、1,4-二硫杂环己烷基、吗啉基、硫代吗啉基、六氢-1H-1,4-二氮杂䓬基、氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂双环[4.3.0]壬基、氧杂双环[2.2.1]]庚基、1,1-二氧化四氢-2H-噻喃基、1,5,9-三氮杂环十二烷基、3-氧杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基。
“4至7元杂环基”指的是含有4、5、6或7个环成员原子的非芳族杂环环系，包括一个杂原子并任选含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子。“4至7元杂环基”的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基。
“成员原子”指的是形成链或环的一个或多个原子。当链中和环内存在多于一个成员原子时，每个成员原子与链或环中的相邻成员原子共价键合。构成连接在链或环上的取代基的原子不是链或环中的成员原子。
提及基团时的“取代”表示连接在基团内的成员原子上的氢原子被替代。应当理解，术语“取代”包括如下隐含条件，即这种取代与被取代的原子和取代基的允许价态一致，并且取代产生稳定的化合物(即不会自发地进行转化(例如，重排、环化或消除)的化合物)。在某些实施方案中，单个原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合该原子的允许价态即可。对于每个取代或任选取代的基团，本文都定义了合适的取代基。
“药学上可接受的”指的是在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触而没有过多毒性、刺激或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和剂型。
“药学上可接受的赋形剂”指的是涉及赋予药物组合物形式或稠度的药学上可接受的材料、组合物或载体。当混合时，每种赋形剂必须与药物组合物的其他成分相容，以避免当给药至患者时会显著降低式(I)化合物或其药学上可接受的盐的功效的相互作用。此外，每种赋形剂当然必须是药学上可接受的，例如，纯度足够高。
“rac”指的是式(I)化合物的外消旋混合物。
本发明化合物可以以固体或液体形式存在。在固态下，本发明化合物可以以结晶或非结晶形式存在，或以其混合物存在。对于结晶形式的本发明化合物，技术人员将理解，可以形成药学上可接受的溶剂化物，其中溶剂分子在结晶期间结合到晶格中。溶剂化物可以包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、二甲基亚砜(DMSO)、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或者它们可以包括水作为结合到晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量水的组合物。本发明包括所有这样的溶剂化物。
还应理解，以结晶形式存在的某些本发明化合物，包括其各种溶剂化物，可表现出多晶现象(即以不同晶体结构存在的能力)。这些不同的结晶形式通常称为“多晶型物”。本发明包括这样的多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在堆积、几何排列和结晶固态的其他描述性质方面不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出不同的熔点、IR光谱和X射线粉末衍射图案，这可用于鉴定。应当理解，可以产生不同的多晶型物，例如，通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂。例如，温度、压力或溶剂的变化可能导致多晶型物。另外，一种多晶型物可在某些条件下自发地转化为另一种多晶型物。可以使用许多常规分析技术表征和区分式(I)化合物的多晶型物，包括但不限于X射线粉末衍射(XRPD)图案、红外(IR)光谱、拉曼光谱、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)和固态核磁共振(SSNMR)。
根据式(I)的化合物可能含有一个或多个不对称中心(也称为手性中心)，因此可以以单个对映异构体、非对映异构体或其他立体异构形式或以它们的混合物形式存在。手性中心，例如手性碳原子，也可以存在于取代基如烷基中。当未指定式(I)或本文所示的任何化学结构中存在的手性中心的立体化学时，该结构旨在涵盖任何立体异构体及其所有混合物。因此，含有一个或多个手性中心的根据式(I)的化合物可以以外消旋混合物、对映体富集的混合物、或以对映体纯的单个立体异构体的形式使用。因此，本发明包括式(I)化合物的所有异构体，无论是作为经分离使得基本上不含其他异构体(即纯的)的单个异构体，还是作为混合物(即外消旋混合物)。经分离使得基本上不含其他异构体(即纯的)的单个异构体可以被分离，使得存在少于10％，特别是少于约1％，例如少于约0.1％的另一种异构体。
具有单一立体中心的外消旋化合物表示为无立体化学(单键)或具有标注(+/-)或rac。其中相对立体化学已知的具有两个或更多个立体中心的外消旋化合物表示为顺式或反式，如在结构中所绘制。具有未知的绝对立体化学但已知的相对立体化学的已拆分的单一对映异构体用具有所绘制的适当相对立体化学的(R*或S*)指示。
在表示非对映异构体且仅涉及相对立体化学的情况下，使用粗体或散列的实键符号。在已知绝对立体化学且化合物为单一对映异构体的情况下，适当使用粗体或散列的楔形符号。
含有一个或多个不对称中心的根据式(I)的化合物的单个立体异构体可以通过本领域技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以通过如下方法进行：(1)形成非对映异构体盐、络合物或其他衍生物；(2)与立体异构体特异性试剂选择性反应，例如通过酶促氧化或还原；或(3)在手性环境中通过气-液或液相色谱法，例如在手性载体如带有结合的手性配体的硅胶上或在手性溶剂存在下。应当理解，当通过上述分离方法之一将所需的立体异构体转化为另一种化学实体时，需要进一步的步骤来释放所需的形式。或者，可以通过使用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种来合成特定的立体异构体。
应当理解，对于式(I)化合物，可能观察到互变异构体。任何与互变异构体的生物活性有关的评论都应该认为包括两种互变异构体。
应理解，本文提及的式(I)化合物及其盐包括作为游离碱或作为其盐例如作为其药学上可接受的盐的式(I)化合物。因此，在一个实施方案中，本发明涉及作为游离碱的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其盐。在进一步的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其药学上可接受的盐。
由于它们在医药中的潜在用途，式(I)化合物的盐合意地是药学上可接受的。合适的药学上可接受的盐可包括酸加成盐或碱加成盐。关于合适的药学上可接受的盐的综述，参见Berge等人, J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)。通常，通过适当使用所需的酸或碱，可以容易地制备药学上可接受的盐。所得盐可以从溶液中沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。
药学上可接受的酸加成盐可以通过式(I)化合物与合适的无机或有机酸(例如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸(如2-萘磺酸)或己酸)的反应形成，任选在合适的溶剂(如有机溶剂)中，以得到通常例如通过结晶和过滤或通过蒸发然后研磨来分离的盐。式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可包含或例如是氢溴酸盐，盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐(如2-萘磺酸盐)或己酸盐。
其他非药学上可接受的盐，例如甲酸盐或三氟乙酸盐，可以用于例如分离式(I)化合物，并且包括在本发明的范围内。
本发明在其范围内包括式(I)化合物的所有可能的化学计量和非化学计量形式的盐。
从上述内容可以理解，式(I)化合物及其盐的溶剂化物、异构体和多晶型物包括在本发明范围内。
发明描述
在第一方面，提供了式(I)化合物或其盐：
其中：
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代；或
R2是-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代；或
R2是H、-CH3、任选被1、2、3、4或5个氟取代的-C2-6烷基、-C2-6烷基OR6、-C2-6烷基NR10aR11a、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR10R11、-(CH2)mC(O)NR10R11、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基任选被1或2个可相同或不同的R7基团取代；
R3是H、-C1-4烷基、环丙基、-CH2F、-C1-3烷基OR6或-C1-3烷基CN；
R4是苯基或杂芳基，其中每个任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代；
每个R5独立地是卤素、-C0-6烷基-R8、-OC2-6烷基-R8、-O-CH2苯基、-CN或-SO2C1-3烷基；
R6是H或-C1-4烷基；
每个R7独立地是氧代、卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6、-OC2-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-C0-3烷基-CONR10R11、-CN、-SO2-C1-3烷基、-SO2NR10R11或任选被-C1-4烷基取代的-SO2苯基；
R8是H、-OR6、-NR10R11或杂芳基；
每个R9独立地是卤素、-C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR6、-C0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-NHCH2CH2OR6、-NHCO2C1-4烷基、氧代、-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)NR10R11；
R10和R11各自独立地选自H和-C1-3烷基；或R10和R11可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选被1或2个取代基取代的4至7-元杂环基，所述取代基独立地选自任选被1、2或3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F；
R10a和R11a各自独立地选自H和-C1-3烷基；
m是选自2、3或4的整数；
n是选自0、1、2、3或4的整数；且
p是选自2、3或4的整数。
在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其盐，其中：
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代；或
R2是-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代；或
R2是H、-CH3、任选被最多5个氟取代的-C2-6烷基、-C2-6烷基OR6、-C2-6烷基NR10aR11a、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR10R11、-(CH2)mC(O)NR10R11、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基任选被1或2个可相同或不同的R7基团取代；
R3是-H、-C1-4烷基、环丙基、-CH2F、-C1-3烷基OR6或-C1-3烷基CN；
R4是苯基或杂芳基，其中每个任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代；
每个R5独立地是卤素、-C0-6烷基-R8、-OC2-6烷基-R8、-CN或-SO2C1-3烷基；
R6是-H或-C1-4烷基；
每个R7独立地是氧代、卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6、-OC0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-C0-3烷基-CONR10R11、-CN、-SO2-C1-3烷基或-SO2NR10R11；
R8是-H、-OR6、-NR10R11或杂芳基；
每个R9独立地是卤素、-C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR6、-C0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-NHCH2CH2OR6、-NHCO2R6、氧代、-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)NR10R11；
R10和R11各自独立地选自-H和-C1-3烷基；或R10和R11可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选被1或2个取代基取代的4至7-元杂环基，所述取代基独立地选自任选被最多3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F；
R10a和R11a各自独立地选自-H和-C1-3烷基；
m是选自2、3或4的整数；
n是选自0、1、2、3或4的整数；且
p是选自2、3或4的整数。
在一个实施方案中，R1是甲基。
在一个实施方案中，R2是-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选1、2或3个可相同或不同的R5基团取代。在一个实施方案中，R2是-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基选自环丙基、环丁基、环己基或双环[3.1.0]己基，所述基团任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代。在另一个实施方案中，R2是任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代的环丙基、环丁基、环己基或双环[3.1.0]己基。在另一个实施方案中，R2是任选被一个选自甲基、氟和-OH的R5基团取代的环丙基、环丁基、环己基或双环[3.1.0]己基。在一个特定的实施方案中，R2是任选被一个甲基取代的环丙基。在另一个特定的实施方案中，R2是任选被OH基取代的环己基。在另一个实施方案中，R2是任选被甲氧基取代的环己基。
在一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其是-杂环基、-CH2CH2-杂环基或-CH2CH2CH2-杂环基。在另一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，所述基团任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，其任选被1或2个选自甲基、-C(O)CH3和氟的R9基团取代。在另一个实施方案中，R2是-C0-4烷基-杂环基，其中任选被1或2个R9基团取代的杂环基选自：
在另一个实施方案中，R2是H、-CH3、任选被1、2、3、4或5个氟取代的C2-6烷基、-C2-6烷基OR6、-C2-6烷基NR10R11、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR10R11、-(CH2)mC(O)NR10R11、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基任选被1或2个可相同或不同的R7基团取代。
在另一个实施方案中，R2选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH2OR6、-CH2CH2CH2OR6、-CH2CH(CH3)OR6、-CH2CH2CH(CH3)OR6、-CH2CH2CH(CH3)NR10R11、-CH2CH2CH2NR10R11、-(CH2)mSO2CH3、-(CH2)mC(O)NHCH3、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mCF3和-(CH2)mNHCO2C(CH3)3。
在另一个实施方案中，R2是-C1-6烷基，其选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、-CH2CH2CH(CH3)2和-CH2CH(CH3)2。在另一个实施方案中，R2是-C1-6烷基OR6，其选自-CH2CH2OR6、-CH2CH2CH2OR6、-CH2CH(CH3)OR6和-CH2CH2CH(CH3)OR6。在另一个实施方案中，R2是-C1-6烷基NR10R11，其选自-CH2CH2CH(CH3)NR10R11和-CH2CH2CH2NR10R11。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)mSO2CH3。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)mC(O)NHCH3。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)mCN。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)mCO2R6。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)mCF3。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)mNHCO2C(CH3)3。
在一个实施方案中，R2是-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基任选被1或2个可相同或不同的R7基团取代。在另一个实施方案中，R2是-(CH2)nC5-6杂芳基，其中所述C5-6杂芳基选自呋喃基、噻吩基、吡咯基、三唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基和嘧啶基，所述基团任选被1或2个独立地选自卤素、C1-4烷基(例如甲基)和-C0-3烷基OR6的R7取代基取代。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物，其中R2是-(CH2)nC5-6杂芳基，其中所述C5-6杂芳基是任选被C1-4烷基或-C0-3烷基OR6取代的吡唑基。在一个特定的实施方案中，提供了式(I)化合物，其中R2是-(CH2)nC5-6杂芳基，其中任选取代的C5-6杂芳基选自：
其中*表示连接点。
在一个实施方案中，R3是H、甲基、乙基、-CH2F、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2OMe或-CH2CN。在一个实施方案中，R3是H、甲基、乙基或-CH2OH。
在一个实施方案中，R4是任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代的苯基。在另一个实施方案中，R4是未取代的苯基。在另一个实施方案中，R4是被一个或两个R7基团取代的苯基，所述R7基团可相同或不同，选自卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6、-OC2-3烷基OR6和-CN。在另一个实施方案中，R4是被一个或两个R7基团取代的苯基，所述R7基团可以相同或不同，选自卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6和-CN。在另一个实施方案中，R4是被一个选自氟、氯、甲基、氰基和甲氧基的R7基团取代的苯基。
在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其为吡啶基，其任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代。在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其为未取代的吡啶基。
在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其为吲哚基(例如1H-吲哚-4-基或1H-吲哚-5-基)，其任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代。在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其为1H-吲哚-4-基。
在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其为吡咯并吡啶基(例如1H-吡咯并[2,3,b]吡啶基或1H-吡咯并[2,3,c]吡啶基)，其任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代。在另一个实施方案中，R4是杂芳基，其为未取代的吡咯并吡啶基。
在一个实施方案中，每个R5独立地是卤素或-C0-6烷基-R8，其中R8是H、OR6(例如OH)或NR10R11(例如NH2)。
在一个实施方案中，R6是H、甲基、乙基或叔丁基。
在一个实施方案中，每个R7独立地是氧代、卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-C0-3烷基-CONR10R11、-CN、-SO2-C1-3烷基或-SO2NR10R11。在另一个实施方案中，每个R7独立地是卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6或CN。
在一个实施方案中，每个R7独立地是卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6或-CN。
在一个实施方案中，R8是H、-OH或甲氧基。
在一个实施方案中，每个R9独立地是卤素、C1-4烷基(例如甲基)、-C0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、氧代或-C(O)R6(例如C(O)CH3)。
在一个实施方案中，m是2或3。
在一个实施方案中，n是0、1或2。在另一个实施方案中，n是0。在另一个实施方案中，n是2。
在一个实施方案中，p是2或3。
应当理解的是，本发明涵盖上文所述的取代基团的所有组合。
本发明的化合物包括实施例1至261的化合物及其盐。
本发明的化合物包括实施例1至138的化合物及其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物选自：
N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
N 5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；和
N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺，
或其盐。
在一个实施方案中，提供了
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，提供了
。
在一个实施方案中，提供了
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，提供了
。
在一个实施方案中，式(I)化合物选自：
N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-((S)-1-(4-氯苯基)乙基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
(S)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-N 5-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
1-((S)-1-(4-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；和
N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺，
或其盐。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在本发明的第三方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，特别是用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
在本发明的第四方面，提供了在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或药学上其可接受的盐。
在本发明的第五方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
与已知的BET抑制剂相比，本发明的化合物可具有改善的特性(包括诸如效力、选择性和/或可开发性(developability)的性质)。本发明的某些化合物可具有这些性质的有利组合。
用途描述
式(I)化合物及其盐是溴结构域抑制剂，因此被认为在治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症中具有潜在用途。
溴结构域抑制剂被认为可用于治疗与全身性或组织炎症、对感染或缺氧的炎症反应、细胞活化和增殖、脂质代谢、纤维化有关的各种疾病或病症以及用于预防和治疗病毒感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种各样的急性或慢性自身免疫和/或炎性病症，如类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、炎性肠病(克罗恩病和溃疡性结肠炎)、哮喘、慢性阻塞性气道病、肺炎、心肌炎、心包炎、肌炎、湿疹、皮炎(包括特应性皮炎)、脱发、白癜风、大疱性皮肤病、肾炎、血管炎、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、Sjögren综合征、涎腺炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、Irvine-Gass综合征(术后白内障和术后)、视网膜色素变性、睫状体扁平部炎、鸟枪弹样视网膜脉络膜病变、视网膜外膜、囊性黄斑水肿、旁中心凹毛细管扩张、牵张性黄斑病变、玻璃体黄斑牵引综合征、视网膜脱离、视神经视网膜炎、特发性黄斑水肿、视网膜炎、干眼症(干燥性角结膜炎)、春季角结膜炎、特应性角结膜炎、葡萄膜炎(如前葡萄膜炎、全葡萄膜炎、后葡萄膜炎、葡萄膜炎相关性黄斑水肿)、巩膜炎、糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、年龄相关性黄斑营养不良、肝炎、胰腺炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、急性酒精性肝炎、慢性酒精性肝炎、酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、Childs-Pugh肝硬化、自身免疫性肝炎、暴发性肝炎、慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、系统性硬化症、系统性硬化症相关的间质性肺病、结节病、神经系统结节病、阿狄森氏病、垂体炎、甲状腺炎、I型糖尿病、II型糖尿病、巨细胞动脉炎、肾炎(包括狼疮性肾炎)、器官受累的血管炎(如肾小球肾炎)、血管炎(包括巨细胞动脉炎)、韦格纳肉芽肿病、结节性多发性动脉炎、白塞氏病、川崎(Kawasaki)病、高安氏(Takayasu)动脉炎、坏疽性脓皮病、器官受累的血管炎、移植器官的急性排斥和系统性硬化症。
在一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是经由APO-A1的调节介导的脂质代谢障碍，例如高胆固醇血症、动脉粥样硬化或阿尔茨海默氏病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是呼吸障碍，例如哮喘或慢性阻塞性气道病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是全身性炎性病症，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症或炎性肠病(克罗恩病或溃疡性结肠炎)。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是多发性硬化症。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是I型糖尿病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是类风湿性关节炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗抑郁症。
溴结构域抑制剂可用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症，如败血症、急性败血症、败血症综合征、败血性休克、内毒素血症、全身炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征、中毒性休克综合征、急性肺损伤、ARDS(成人呼吸窘迫综合征)、急性肾功能衰竭、暴发性肝炎、烧伤、急性胰腺炎、术后综合征、结节病、Herxheimer反应、脑炎、脊髓炎、脑膜炎、疟疾和与例如流感、带状疱疹、单纯疱疹和冠状病毒等病毒感染有关的SIRS。在一个实施方案中，涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症是急性败血症。
溴结构域抑制剂可用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症，如心肌梗塞、脑血管缺血(中风)、急性冠状动脉综合征、肾再灌注损伤、器官移植、冠状动脉旁路移植术、心肺旁路手术，肺、肾、肝、胃肠或外周肢体栓塞。
溴结构域抑制剂可用于治疗心血管疾病，如冠状动脉疾病(例如心绞痛或心肌梗塞)、肺动脉高压、脑血管缺血(中风)、高血压性心脏病、风湿性心脏病、心肌病、心房颤动、先天性心脏病、心内膜炎、主动脉瘤或外周动脉疾病。
溴结构域抑制剂可用于治疗纤维化病症，如特发性肺纤维化、肺纤维化、囊性纤维化、进行性大块纤维化、肾纤维化、肝纤维化、肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、术后狭窄、瘢痕疙瘩形成、硬皮病(包括硬斑病和系统性硬化症)、心肌纤维化、心房纤维化、心内膜纤维化、陈旧性心肌梗死、关节纤维化、Dupuytren挛缩、纵隔、骨髓纤维化、Peyronie病、肾源性系统性纤维化(nephrogenic systemic fibrosis)、腹膜后纤维化和粘连性关节囊炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗病毒感染，如单纯疱疹感染和再激活、唇疱疹(coldsores)、带状疱疹感染和再激活、水痘、带状疱疹、人乳头瘤病毒(HPV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、宫颈瘤、腺病毒感染(包括急性呼吸道疾病)、痘病毒感染(如牛痘或天花)，或非洲猪瘟病毒。在一个实施方案中，病毒感染是皮肤或宫颈上皮细胞的HPV感染。在另一个实施方案中，病毒感染是潜伏的HIV感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种各样的骨病，例如骨质疏松症、骨质减少、骨关节炎和强直性脊柱炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗癌症，包括血液癌症(例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)、上皮癌(包括肺癌、乳腺癌或结肠癌)、中线癌，或间质瘤、肝肿瘤、肾肿瘤或神经肿瘤。
溴结构域抑制剂可用于治疗一种或多种癌症，所述癌症选自：脑癌(神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、Cowden病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、结肠直肠癌、Wilm肿瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤癌、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、混合细胞系白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、涎腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)、NUT-中线癌和睾丸癌。
在一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病和混合细胞系白血病(MLL)的白血病。在另一个实施方案中，癌症是NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特氏淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食道癌。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是去势抗性前列腺癌。
溴结构域抑制剂可用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病，例如败血症、烧伤、胰腺炎、重度创伤、出血和缺血。在该实施方案中，溴结构域抑制剂将在诊断时给药以降低SIRS、休克发作、多器官功能障碍综合征(其包括急性肺损伤的发作)、ARDS、急性肾、肝、心脏或胃肠损伤的发生率和死亡率。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂可在与高风险的败血症、出血、大面积组织损伤、SIRS或MODS(多器官功能障碍综合征)相关的外科手术或其他程序之前给药。在一个特定的实施方案中，适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症是败血症、败血症综合征、败血性休克和内毒素血症。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗急性或慢性胰腺炎。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗烧伤。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。在一个实施方案中，提供用于治疗的N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺或其药学上可接受的盐。
式(I)化合物或其药学上的盐可用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗心血管疾病。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗纤维化病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗病毒感染。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗骨病。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。在再一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病。
还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症的药物中的用途。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗纤维化病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗病毒感染的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在再一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病的药物中的用途。
还提供了在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗心血管疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗纤维化病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗病毒感染的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在再一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
适合地，需要治疗的对象是哺乳动物，特别是人。
本发明还提供抑制含有溴结构域的蛋白的方法，该方法包括使含有溴结构域的蛋白与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。
如本文所用的，提及特定疾病或病症的“治疗”包括预防或防止这种疾病或病症。
药物组合物/给药途径/剂量
组合物
虽然为了用于治疗，可以将式(I)化合物及其药学上可接受的盐作为原料化学品给药，但是通常将活性成分呈现为药物组合物。式(I)化合物及其药学上可接受的盐在给药于患者之前通常但不是必须配制成药物组合物。因此，在另一方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种(例如两种、三种、四种、五种或六种)药学上可接受的赋形剂。在一个实施方案中，提供N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。所述式(I)化合物和药学上可接受的盐如上所述。所述一种或多种赋形剂在与所述组合物的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上必须是可接受的。根据本发明的另一个方面，还提供了制备药物组合物的方法，包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以通过例如在环境温度和大气压下混合来制备。该药物组合物可用于治疗本文所述的任何病症。
在另一方面，本发明涉及用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
由于式(I)化合物旨在用于药物组合物，因此很容易理解它们各自优选以基本上纯的形式提供，例如，至少85％纯，特别是至少98％纯(％基于重量/重量)。
药物组合物可以以每单位剂量含有预定量活性成分的单位剂型存在。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的日剂量或亚剂量或其适当分数的那些。因此，这样的单位剂量可以每天给药超过一次。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的如本文之前所述的日剂量或亚剂量(用于每天给药超过一次)、或其适当分数的那些。
药物组合物可以适于通过任何适当的途径给药，例如通过口服(包括口腔或舌下)、直肠、吸入、鼻内、局部(包括口腔、舌下或透皮)、眼部(包括局部、眼内、结膜下、巩膜外、眼球筋膜下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内)途径。此类组合物可通过药学领域中已知的任何方法制备，例如通过使活性成分与一种或多种载体或一种或多种赋形剂结合。
本发明的药物组合物可以以散装形式制备和包装，其中可以提取安全有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，然后例如以粉末或糖浆给予患者。或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型制备和包装，其中每个物理上离散的单元含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物通常可含有，例如，0.25mg至1g，或0.5mg至500mg，或1mg至100mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
通常将式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂配制成适于通过所需给药途径给药于患者的剂型。例如，剂型包括适于下列方式给药的那些：(1)口服给药，例如片剂、胶囊、囊片、丸剂、锭剂、粉末、糖浆、酏剂、混悬液、溶液、乳液、小药囊(sachet)和扁囊剂；(2)肠胃外给药，如无菌溶液、混悬液和用于复溶的粉末；(3)透皮给药，如透皮贴剂；(4)直肠给药，如栓剂；(5)吸入，如气雾剂、溶液和干粉；和(6)局部给药，如乳膏、软膏、洗液、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选的具体剂型而变化。另外，可以为了其在组合物中可以提供的特定功能而选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于产生均匀剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于产生稳定剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于一旦给药于对象后将一种或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐从一个器官或身体的一部分携带或运输至另一个器官或身体的一部分。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够增强对象顺应性。
合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：载体、稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、掩味剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以起到多于一种的功能，并且可以起到替代功能，这取决于制剂中存在多少赋形剂以及制剂中存在哪些其他赋形剂。
技术人员具有本领域的知识和技能，使得他们能够选择适当量的合适的药学上可接受的赋形剂以用于本发明。此外，存在许多技术人员可获得的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂，并且可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。
使用本领域技术人员已知的技术和方法制备本发明的药物组合物。Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)中描述了本领域常用的一些方法。
在一个实施方案中，药物组合物适于肠胃外给药，特别是静脉内给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于口服给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于局部给药。
适于肠胃外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液(其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与预期接受者的血液等渗的溶质)和水性和非水性无菌混悬液(其可以包括助悬剂和增稠剂)。组合物可以以单位剂量或多剂量容器存在，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以以冷冻干燥(冻干)状态储存，仅需要在临用前添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适于口服给药的药物组合物可以作为离散单元存在，例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫或起泡剂(whips)；或水包油液体乳液或油包水液体乳液。
例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可与口服无毒的药学上可接受的惰性载体(如乙醇、甘油、水等)合并。适于掺入片剂或胶囊中的粉末可以通过将化合物减小到合适的细小尺寸(例如通过微粉化)并与类似制备的药物载体(如可食用的碳水化合物(例如淀粉或甘露醇))混合来制备。还可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊可以通过如上所述制备粉末混合物并填充成形的明胶壳来制备。可以在填充操作之前将助流剂和润滑剂(如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇)加入到粉末混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善胶囊被摄入时药物的可用性。
此外，当需要或必要时，也可将合适的粘合剂、助流剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(如阿拉伯树胶、黄蓍胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂例如通过制备粉末混合物，制粒或击压(slugging)，添加润滑剂和崩解剂并压制成片剂来配制。粉末混合物通过如下方法制备：将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质，以及任选地，与粘合剂(如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶解阻滞剂(如石蜡)、再吸收促进剂(如季铵盐)和/或吸收剂(如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可以通过用粘合剂(如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚(acadia)粘液或纤维素或聚合物材料的溶液)润湿并强制通过筛网来造粒。作为造粒的替代方案，可以将粉末混合物通过压片机，结果是破碎成颗粒的不完全形成的块状物。可以通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒以防止粘附到片剂成形模具上。然后将润滑后的混合物压制成片剂。式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可与自由流动的惰性载体混合，直接压制成片剂，而无需经过造粒或击压步骤。可提供透明或不透明的保护包衣，所述包衣由虫胶密封包衣，糖或聚合物材料包衣和蜡的抛光包衣组成。可以将染料添加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服液如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制备，使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的酒精载体制备。混悬液可以通过将化合物分散在无毒载体中来配制。还可以加入增溶剂和乳化剂(如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐剂、调味添加剂(如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂)等。
可以设计用于口服给药的组合物以提供改变的释放曲线，从而维持或以其他方式控制治疗活性剂的释放。
适当时，可以将用于口服给药的剂量单位组合物微囊化。可以将组合物制备成延长或维持释放，例如通过将颗粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡等中。
对于适合和/或适于口服给药的组合物，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。粒径减小的(例如微粉化的)化合物或盐的优选粒径限定为约0.5至约10微米的D50值(例如使用激光衍射测量)。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可以以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层脂囊、大单层脂囊和多层脂囊。脂质体可以由多种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
适于局部给药的药物组合物可以配制成软膏、乳膏、混悬液、乳液、洗剂、粉末、溶液、糊剂、凝胶、泡沫、喷雾剂、气雾剂或油。此类药物组合物可包括常规添加剂，其包括，但不限于，防腐剂、有助于药物渗透的溶剂、共溶剂、软化剂、推进剂、粘度调节剂(胶凝剂)、表面活性剂和载体。在一个实施方案中，提供了适于局部给药的药物组合物，其包含占组合物重量的0.01-10％，或0.01-1％的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
对于眼睛或其他外部组织(例如口腔和皮肤)的治疗，组合物优选作为局部软膏、乳膏、凝胶、喷雾剂或泡沫施用。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，可以将活性成分配制成具有水包油乳膏基质或油包水基质的乳膏。
适于局部给药于眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是水性溶剂中。给药于眼睛的组合物具有眼科相容的pH和渗透压(osmolality)。一种或多种眼科上可接受的pH调节剂和/或缓冲剂可包括在本发明的组合物中，包括酸，例如乙酸，硼酸，柠檬酸，乳酸，磷酸和盐酸；碱如氢氧化钠，磷酸钠，硼酸钠，柠檬酸钠，乙酸钠和乳酸钠；和缓冲剂，如柠檬酸盐/右旋糖，碳酸氢钠和氯化铵。这些酸、碱和缓冲剂可以以将组合物的pH维持在眼科可接受范围内所需的量包括在内。一种或多种眼科上可接受的盐可以以足以使组合物的渗透压达到眼科可接受的范围的量包含在组合物中。这些盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐。
眼部递送装置可以设计用于以多种确定的释放速率和持续剂量动力学和渗透性控制释放一种或多种治疗剂。控制释放可以通过设计聚合物基质(结合可生物降解/可生物蚀解聚合物(例如聚(乙烯-乙酸乙烯酯)(EVA)，超水解PVA)、羟烷基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚己内酯、聚乙醇酸、聚乳酸、聚酸酐的不同选择和性质)，聚合物分子量，聚合物结晶度，共聚物比率，加工条件，表面光洁度，几何学，赋形剂添加和增强药物扩散、侵蚀、溶出和渗透的聚合物包衣而获得。
用于眼部递送的药物组合物还包括原位可胶凝化的含水组合物。这种组合物包含胶凝剂，其浓度有效地在与眼睛或泪液接触时促进胶凝化。合适的胶凝剂包括，但不限于，热固性聚合物。本文所用的术语“原位可胶凝化”不仅包括与眼睛或泪液接触时形成凝胶的低粘度液体，还包括更粘稠的液体，如半流体和触变凝胶，其在给药于眼睛时显示出显著增加的粘度或凝胶硬度。参见，例如，Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595- 639，因为其教导了用于眼部药物递送的聚合物实例，在此引入作为参考。
用于鼻或吸入给药的剂型可以方便地配制成气雾剂、溶液、混悬液、凝胶或干粉。
对于适合和/或适于吸入给药的组合物，优选式(I)化合物或其药学上可接受的盐为粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。粒径减小的(例如微粉化的)化合物或盐的优选粒径限定为约0.5至约10微米(例如使用激光衍射测量)的D50值。
气雾剂制剂，例如用于吸入给药，可包括活性物质在药学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液。气雾剂制剂可以以无菌形式以单剂量或多剂量存在于密封容器中，密封容器可以采用药筒或再填充的形式与雾化装置或吸入器一起使用。或者，密封容器可以是整体分配装置，例如单剂量鼻吸入器或装配有计量阀的气雾剂分配器(计量剂量吸入器)，其意图为一旦容器内容物已经用尽就丢弃。
在剂型包含气雾剂分配器的情况下，其优选包含在压力下的合适的推进剂，例如压缩空气、二氧化碳或有机推进剂，例如氢氟烃(HFC)。合适的HFC推进剂包括1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷和1,1,1,2-四氟乙烷。气雾剂剂型也可以采用泵式雾化器的形式。加压气雾剂可含有活性化合物的溶液或混悬液。这可能需要掺入另外的赋形剂，例如共溶剂和/或表面活性剂，以改善混悬制剂的分散特性和均匀性。溶液制剂还可能需要添加共溶剂，例如乙醇。
对于适合和/或适于吸入给药的药物组合物，药物组合物可以是干粉可吸入组合物。这种组合物可包含粉末基质例如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇或淀粉，式(I)化合物或其药学上可接受的盐(优选粒径减小的形式，例如微粉化形式)，和任选地，性能改性剂如L-亮氨酸或另一种氨基酸和/或硬脂酸的金属盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙。优选地，干粉可吸入组合物包含乳糖(例如乳糖一水合物)和式(I)化合物或其盐的干粉混合物。这样的组合物可以使用合适的装置给药于患者，例如由GlaxoSmithKline销售的DISKUS®装置，其描述在，例如，GB 2242134 A中。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以配制成用于从流体分配器(例如具有分配喷嘴或分配孔的流体分配器)递送的流体制剂，当将用户施加的力施加到流体分配器的泵机构时，通过所述分配喷嘴或分配孔分配计量剂量的流体制剂。这种流体分配器通常设置有流体制剂的多个计量剂量的储存器，所述剂量可在顺序泵致动时分配。分配喷嘴或孔可构造成用于插入使用者的鼻孔中，以将流体制剂喷雾分配到鼻腔中。在国际专利申请公开号WO 2005/044354 A1中描述和说明了上述类型的流体分配器。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，患者的年龄和体重、需要治疗的确切病症及其严重程度、制剂的性质以及给药途径，并且最终由主治医生或兽医决定。在药物组合物中，以游离碱计算，用于口服或肠胃外给药的每个剂量单位优选含有0.01mg至3000mg，更优选0.5mg至1000mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。以游离碱计算，用于经鼻或吸入给药的每个剂量单位优选含有0.001mg至50mg，更优选0.01mg至5mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
药学上可接受的式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以以如下每日剂量(对于成年患者)给药，例如，以游离碱计算，每天0.01mg至3000mg，每天0.5mg至1000mg或每天100mg至2500mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的口服或肠胃外剂量，或每天0.001mg至50mg或每天0.01mg至5mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的经鼻或吸入剂量。该量可以以每天单次剂量给药或更通常以每天多次(例如两次，三次，四次，五次或六次)亚剂量给药，使得每日总剂量相同。其盐的有效量可以根据式(I)化合物自身的有效量的比例确定。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以单独使用或与其他治疗剂组合使用。因此，根据本发明的组合疗法包括给药至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和使用至少一种其他治疗活性剂。一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐和其他一种或多种治疗活性剂可以在单一药物组合物中一起给药或分开给药，并且当分开给药时，给药可以同时或以任何顺序依次发生。选择一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐和一种或多种其他治疗活性剂的用量和给药的相对时机，以达到所需的组合治疗效果。因此，在另一方面，提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其他治疗活性剂的组合。
因此，在一个方面，根据本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以与一种或多种其他治疗剂组合使用或包括一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂例如选自抗生素、抗病毒药、糖皮质激素、毒蕈碱拮抗剂、β-2激动剂和维生素D3类似物。在进一步的实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以与适用于治疗癌症的其他治疗剂组合使用。这些其他治疗剂的实例描述于V. T. Devita和S. Hellman(编辑)的Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版(2001年)，Lippincott Williams & Wilkins Publishers。基于药物的特定特征和所涉及的癌症，本领域普通技术人员将能够辨别哪些药剂组合会是有用的。与式(I)化合物或其药学上可接受的盐组合使用的其他治疗剂包括，但不限于，抗微管剂(如二萜类化合物和长春花生物碱)；铂配位络合物；烷基化剂(如氮芥、氧氮磷杂环己烯(oxazaphosphorines)、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)；抗生素(如蒽环霉素、放线菌素和博来霉素)；拓扑异构酶II抑制剂(如表鬼臼毒素)；抗代谢物(如嘌呤和嘧啶类似物以及抗叶酸化合物)；拓扑异构酶I抑制剂(如喜树碱；激素和激素类似物)；信号传导通路抑制剂(如酪氨酸受体抑制剂)；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂(如PD-1抑制剂，包括纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)，以及CTLA-4抑制剂，包括伊匹单抗(ipilimumab))；促凋亡剂；表观遗传或转录调节剂(如组蛋白去乙酰化酶抑制剂)和细胞周期信号传导抑制剂。
应当理解，当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与通常通过吸入、静脉内、口服或鼻内途径给药的其他治疗剂组合给药时，所得药物组合物可以通过相同途径给药。或者，组合物的各个组分可以通过不同途径给药。
对于本领域技术人员显而易见的是，在适当的情况下，一种或多种其他治疗剂可以以盐的形式(例如作为碱金属盐或胺盐或作为酸加成盐)，或前药，或者作为酯(例如低级烷基酯)，或作为溶剂化物(例如水合物)使用，以优化该治疗剂的活性和/或稳定性和/或物理特性，例如溶解度。还清楚的是，在适当的情况下，该治疗剂可以以光学纯的形式使用。
上述组合可以方便地以药物组合物的形式使用，因此包含如上定义的组合和药学上可接受的赋形剂的药物组合物代表本发明的另一方面。
一般合成路线
本发明化合物可通过多种方法制备。除非另有说明，否则任何先前定义的变量将继续具有先前定义的含义。说明性的一般合成方法在以下方案中列出，并且可以容易地适用于制备本发明的其他化合物。在实施例部分中制备了本发明的具体化合物。
式(I)化合物可如以下任一方案中所述制备：
方案1：
其中R1、R2、R3和R4如上所述，X为Br、Cl或OH。
关于以上方案1中所示的步骤，可以采用以下反应条件：
步骤1：为酯的酰胺化反应，并且可以使用适当的式R1-NH2的胺，任选在合适的溶剂例如THF的存在下，在合适的温度例如0℃至室温下进行。
步骤2：为Mitsunobu偶联反应，其中X=OH，并且可以使用任何合适的醇，在Mitsunobu偶联剂例如DEAD或DIAD的存在下使用合适的膦例如Ph3P，或者使用合适的磷烷试剂例如CMBP，在合适的溶剂例如THF或乙腈中，在合适的温度例如室温或120℃下进行。
步骤3：为烷基化反应，其中X=Br或Cl，并且可以使用合适的碱例如碳酸钾，在合适的溶剂例如丙酮中，在合适的温度例如室温下进行。
步骤4：为碱介导的酯水解，并且可以使用任何合适的碱例如氢氧化锂，任选在合适的溶剂或溶剂混合物例如1,4-二噁烷和水中，在合适的温度例如室温下进行。
步骤5：为酰胺偶联反应，并且可以使用胺试剂R2-NH2，在合适的叔胺例如三乙胺或DIPEA的存在下，在合适的酰胺偶联反应物例如HATU的存在下，在合适的溶剂例如DCM或DMF中，在合适的温度例如室温下进行。
步骤6：为酸介导的酯裂解，并且可以使用任何合适的酸例如硫酸，任选在合适的溶剂或溶剂混合物例如1,4-二噁烷和水中，在合适的温度例如回流加热下进行。
步骤7：为酰胺偶联反应，并且可以使用胺试剂R2-NH2，在合适的叔胺例如三乙胺或DIPEA的存在下，在合适的酰胺偶联反应物例如HATU的存在下，在合适的溶剂例如DCM或DMF中，在合适的温度例如室温下进行。
本领域技术人员将认识到，保护上述化合物的一个或多个官能团可能是有利的。保护基及其去除方法的实例可以在T. W. Greene ‘Protective Groups in OrganicSynthesis’ (第4版, J. Wiley and Sons, 2006)中找到，其由于与这些程序有关而通过引用并入本文。
合适的胺保护基包括酰基(例如乙酰基，氨基甲酸酯(例如2',2',2'-三氯乙氧羰基、苄氧羰基或叔丁氧羰基)和芳基烷基(例如苄基)，其在适当时可以被酸介导的裂解去除(例如，使用酸如盐酸/1,4-二噁烷或三氟乙酸/二氯甲烷)或还原性去除(例如，氢解苄基或苄氧羰基或使用锌/乙酸还原去除2',2',2'-三氯乙氧羰基)。其他合适的胺保护基包括可通过碱催化水解去除的三氟乙酰基(-C(O)CF3)。
应当理解，在上述任何路线中，可以改变通过合成步骤将各种基团和部分引入分子中的这些合成步骤的精确顺序。确保在该方法的一个阶段引入的基团或部分不会受到后续转化和反应的影响以及相应选择合成步骤的顺序将在本领域技术人员的技能范围内。
上述某些中间体化合物构成了本发明的又一方面。
对于任何上述反应或方法，可分别采用常规的加热和冷却方法，例如温度调节的油浴或温度调节的热块，以及冰/盐浴或干冰/丙酮浴。可以使用常规的分离方法，例如从水性或非水性溶剂中提取或提取到水性或非水性溶剂中。可以使用干燥有机溶剂、溶液或提取物的常规方法，例如与无水硫酸镁或无水硫酸钠一起摇动，或通过疏水性玻璃料。可以根据需要使用常规的纯化方法，例如结晶和色谱法，例如二氧化硅色谱法或反相色谱法。可以使用常规溶剂如乙酸乙酯、甲醇、乙醇或丁醇或其水性混合物进行结晶。应当理解，具体的反应时间和温度通常可以通过反应监测技术来确定，例如薄层色谱法和LC-MS。
一般实验细节
所有提及的温度均以℃为单位。
如本文所用的，在这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例与当代科学文献(例如，Journal of the American Chemical Society)中使用的符号和惯例一致。除非另有说明，否则所有原料均得自商业供应商并且无需进一步纯化即可使用。具体地，在实施例和整个说明书中可能使用以下缩略语：
一般方法
一般实验细节
如本文所用的，在这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例与当代科学文献(例如，Journal of the American Chemical Society)中使用的符号和惯例一致。除非另有说明，否则所有原料均得自商业供应商并且无需进一步纯化即可使用。具体地，在实施例和整个说明书中可能使用以下缩略语：
缩略语
AcOH 乙酸
AMU 原子质量单位
Aq 水性的
BOC/Boc 叔丁氧基羰基
Cs2CO3 碳酸铯
CHCl3 氯仿
CMBP (氰基亚甲基)三丁基膦
CPME 环戊基甲基醚
CV 柱体积
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIBAL-H 二异丁基氢化锂
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DMSO-d6 氘代二甲基亚砜
DPPA 二苯基磷酰基叠氮化物
Et3N 三乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HBr 溴化氢
HCl 盐酸
HPLC 高效液相色谱
Isolera Biotage®快速纯化系统
K2CO3 碳酸钾
LiCl 氯化锂
LCMS 液相色谱–质谱法
LiOH 氢氧化锂
M 摩尔(浓度)
MDAP 质量导向自动制备色谱法
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
2-MeTHF 2-甲基四氢呋喃
min 分钟
MS 质谱法
Ms-Cl 甲磺酰氯
N 当量(浓度)
N2 氮气
NaBH4 硼氢化钠
Na2CO3 碳酸钠
NaH 氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaOH 氢氧化钠
Na2SO4 硫酸钠
NH3 氨
NH4Cl 氯化铵
NUT 睾丸中的核蛋白
obs 遮蔽的
Ph3P 三苯基膦
RBF 圆底烧瓶
Rt 保留时间
rt 室温
sat 饱和的
SCX Isolute强阳离子交换吸附SPE
SFC 超临界流体色谱
SiO2 二氧化硅
SNAP Biotage®(二氧化硅)快速色谱柱
SP4 Biotage®快速纯化系统
SPE 固相萃取
T3P 丙基膦酸酐溶液
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TBDMS-Cl 叔丁基二甲基氯硅烷
TLC 薄层色谱法
Ts 甲苯磺酰基
pTsCl 对甲苯磺酰氯
UPLC 超高效液相色谱法
UV 紫外线
XantPhos 1,1'-(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双[1,1-二苯基膦]。
使用化合物命名程序“ACD Name Pro 6.02”或使用ChemDraw Ultra 12.0的命名功能获得以下化合物的名称。
LCMS方法
甲酸法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v 甲酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v甲酸于乙腈中的溶液。
所用梯度为：
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS : Waters ZQ
电离模式 : 交替扫描正负电喷雾
扫描范围 : 100至1000 AMU
扫描时间 : 0.27 sec
扫描延迟间隔时间 : 0.10 sec。
高pH法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 10 mM碳酸氢铵/水，用氨溶液调节至pH10
B = 乙腈。
所用梯度为：
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS : Waters ZQ
电离模式 : 交替扫描正负电喷雾
扫描范围 : 100至1000 AMU
扫描时间 : 0.27 sec
扫描延迟间隔时间 : 0.10 sec。
TFA法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v三氟乙酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v 三氟乙酸于乙腈中的溶液。
所用梯度为：
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS : Waters ZQ
电离模式 : 交替扫描正负电喷雾
扫描范围 : 100至1000 AMU
扫描时间 : 0.27 sec
扫描延迟间隔时间 : 0.10 sec。
方法A
LC条件
在35℃在Acquity BEH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v 甲酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v甲酸于乙腈中的溶液。
所用梯度为：
方法B
LC条件
在35℃在Acquity BEH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.05% v/v 甲酸于水中的溶液
B = 0.05% v/v甲酸于乙腈中的溶液。
所用梯度为：
方法C
LC条件
在35℃在Xbridge C18柱(150 mm x 4.6 mm, i.d. 3.5 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.05% v/v 三氟乙酸于水中的溶液
B = 乙腈。
所用梯度为：
方法D
LC条件
在35℃在Acquity BEH C18柱(100 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.05% v/v 甲酸于乙腈中的溶液
B = 0.05% v/v甲酸于水中的溶液。
所用梯度为：
方法E
LC条件
在35℃在Acquity BEH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.05% v/v 甲酸于乙腈中的溶液
B = 0.05% v/v甲酸于水中的溶液。
所用梯度为：
一般MDAP纯化方法
下面列出的是已经使用或可以用于化合物纯化的质量导向自动制备色谱(MDAP)方法的实例。
MDAP (高pH法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，使用用氨溶液调节至pH 10的10 mM碳酸氢铵/水(溶剂A)和乙腈 (溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (甲酸法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用0.1%甲酸/水(溶剂A)和0.1%甲酸/乙腈(溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (TFA)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用0.1% v/v 三氟乙酸于水中的溶液(溶剂A)和0.1% v/v三氟乙酸于乙腈中的溶液(溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
NMR
在400 MHz或600 MHz NMR机器上以302 K运行光谱。
中间体1：3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
将1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(10g，54.3mmol，可从例如Fluorochem商购)在甲胺(5wt％的水溶液)(67.5g，109mmol，可从例如Spectrochem商购)中的溶液在0℃在氮气下搅拌。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。16小时后，将反应混合物用1N HCl中和，用EtOAc(500mL)萃取，并用盐水(100mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并将滤液浓缩，得到粗化合物5-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(4g，14.19mmol，26％收率)。再次以相同的规模重复反应，得到另外的3.8g粗化合物，并再次使用在0℃在氮气下搅拌的1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(20g，54.3mmol)在甲胺(5wt％的水溶液)(67.5g，109mmol)中的溶液，使用与上述相同的后处理，得到另外的7g粗化合物。通过柱色谱法(100-200硅胶)纯化合并的粗批次，用0-10％MeOH/DCM洗脱。收集所需的级分并减压干燥，得到粗化合物(10g)。将其用无水甲醇(100mL)稀释并在室温下保持24小时。24小时后，将固体通过布氏漏斗过滤，用冷却的无水甲醇(20mL)洗涤，然后将残余物用戊烷洗涤并干燥，得到5-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(8g，43.6mmol，20％收率)，为灰白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.44分钟，[MH]+=184.1。
中间体2：(S)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯
在0℃在氮气下将(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(8.24g，40.7mmol)滴加到1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(5g，27.2mmol，可从例如Fluorochem商购)、(R)-1-苯基乙-1-醇(3.98g，32.6mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)和聚合物键合型三苯基膦3 mmol/g(13.70g，40.7mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)在2-MeTHF(50mL)中的悬浮液中。将混合物搅拌过夜，使其温热至室温。在单独的反应中，将1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(2g，10.86mmol)、(R)-1-苯基乙-1-醇(1.592g，13.03mmol)和聚合物键合型三苯基膦3 mmol/g(5.48g，16.29mmol)在RBF中合并，加入2-MeTHF(50mL)，混合物在氮气下搅拌，在冰浴中冷却30分钟，然后经30分钟滴加(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(3.29g，16.29mmol)，并将所得混合物搅拌过夜，使其温热至室温。合并反应混合物，将合并的悬浮液过滤，并将固体聚合物键合型三苯基膦(氧化物)用EtOAc(100mL)洗涤。然后将合并的有机物用水(200mL)洗涤，干燥并真空蒸发，并将残余物通过在340g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-25％EtOAc/环己烷洗脱。真空蒸发含有产物的级分，得到(S)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(7.2g，24.97mmol，66％收率)，为无色油状物。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.13分钟，[MH]+=289.2。
中间体3：(S)-5-(甲氧基羰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3-甲酸
将(S)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(15g，52.0mmol)溶于1,4-二噁烷(60 mL)，然后加入水(120 mL)，然后逐滴加入H2SO4(1.664 mL，31.2 mmol)。将混合物回流加热3天，然后冷却至室温，并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到无色胶状物，将其溶于DCM中，并加载到340 g二氧化硅柱上，然后用0-50％(1％AcOH/EtOAc)/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到(S)-5-(甲氧基羰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3-甲酸(6.7g，24.43mmol，47％收率)，为无色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.96分钟，[MH]+=275.3。
中间体4：(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
将(S)-5-(甲氧基羰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3-甲酸(2g，7.29mmol)溶于DCM(20mL)并加入Et3N(1.525mL，10.94mmol)和HATU(3.33g，8.75mmol)，随后加入甲胺(2M的THF溶液)(3.65mL，7.29mmol)，并将混合物在室温搅拌2小时，然后用水(20mL)和0.5M HCl(20mL)洗涤。将有机层干燥并真空蒸发，并将残余物通过色谱法在50g二氧化硅柱上纯化，得到(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(2.1g，7.31mmol，100％收率)，为无色胶状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.99分钟，[MH]+=288.2。
中间体5：(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸
将(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(4.2g，14.62mmol)溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)的混合物中，然后加入NaOH(2M水溶液，14.62mL，29.2mmol)，并将混合物在室温搅拌3小时。真空蒸发溶剂，将残余物溶于水(30mL)中，并用乙醚洗涤，然后将水层用2M HCl酸化至pH 4，并将所得混合物搅拌20分钟，同时在冰浴中冷却。过滤收集得到的固体，得到(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(3.3g，12.07mmol，83％收率)，为无色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.86分钟，[MH]+=274.2。
中间体6：1-苄基-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯
向在0℃在氮气下搅拌的1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(10g，54.3mmol)在丙酮(100mL)中的溶液中加入K2CO3(15.01g，109mmol)，然后经1分钟滴加苄基溴(7.10mL，59.7mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时。将反应过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗产物。将粗产物用正戊烷(3×10mL)研磨，然后真空干燥，得到纯的1-苄基-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(8.5g，31.0mmol，57％收率)，为白色固体。
LCMS(10分钟方法D)：Rt=4.87分钟，[MH]+=275.0。
中间体7：1-苄基-5-(甲氧基羰基)-1H-吡唑-3-甲酸
向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(30g，109mmol)在1,4-二噁烷(140mL)和水(280mL)中的溶液中一次性加入浓H2SO4(2.92mL，54.7mmol，18.4M)。将反应混合物在回流下搅拌72小时。然后将反应冷却至室温，并用EtOAc(3×125mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到粗产物。将粗产物加入硅胶60-120柱中，用15％EtOAc/正己烷洗脱，并将收集的起始原料级分在减压下浓缩，得到为灰白色固体的回收的起始原料(15g)。然后用60％EtOAc/己烷洗脱该柱，并在真空下浓缩收集的纯级分，以提供纯的1-苄基-5-(甲氧基羰基)-1H-吡唑-3-甲酸(6g)，为白色固体。还分离出不纯的级分，得到另外的10g粗混合物，将其加入硅胶60-120柱中，并用60％EtOAc/己烷洗脱，以提供另外的纯级分。将它们真空浓缩，获得第二批纯净的所需产物(5.5g)，将其合并，得到1-苄基-5-(甲氧基羰基)-1H-吡唑-3-甲酸(11.5g，44.0mmol，40％收率)，为灰白色固体。然后用EtOAc冲洗该柱，得到另一批不纯的产物(3.4g)。
LCMS(10分钟方法D)：Rt=4.89分钟，[MH]+=261.0。
中间体8：1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-5-(甲氧基羰基)-1H-吡唑-3-甲酸(13.6g，50.7mmol)和DIPEA(26.6mL，152mmol)在DMF(100 mL)中的溶液中加入HATU(28.9g，76mmol)，然后经1分钟一次性加入甲胺盐酸盐(4.11g，60.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×100mL)萃取。用水(3×50mL)、盐水溶液洗涤合并的有机层，然后经硫酸钠干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗产物。将粗产物加入硅胶60-120柱中，用65％EtOAc/正己烷洗脱，并将收集的纯级分减压浓缩，得到1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(12.1g，42.7mmol，收率84％)，为灰白色固体。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=2.32分钟，[MH]+=274.1。
中间体9：1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸
经1分钟向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(12.1g，42.7mmol)在THF(70mL)和水(70mL)中的溶液中一次性添加LiOH(5.11g，213mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。然后将反应用水(20mL)稀释，然后水层用EtOAc(3×15mL)洗涤。然后将水层的pH用2N HCl调节至pH 1，然后将其用EtOAc(3×100mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到粗产物。将粗产物加入硅胶60-120柱中，并用85％EtOAc/正己烷洗脱，并将收集的纯级分减压浓缩，得到所需产物1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(8.5 g，32.8 mmol，77％收率)，为灰白色固体。
LCMS(10分钟方法D)：Rt=3.25分钟，[MH]+=260.1。
中间体10：N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(500mg，1.525mmol，对于制备，参见实施例92)在乙醇(1mL)中的溶液中一次性加入碳载氢氧化钯(100mg，0.712mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应通过硅藻土床过滤，然后用乙醇(25mL)洗涤，并将滤液在真空下浓缩，得到粗产物。将粗产物用乙醚(3×1mL)研磨，得到结晶固体，过滤，并将固体真空干燥，得到N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(250mg，1.045mmol，收率68.5％)，为白色固体。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=1.29分钟，[MH]+=209.3。
中间体11：N 5-环丙基-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(250mg，1.045mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加K2CO3(433mg，3.13mmol)，然后一次性加入(1-溴乙基)苯(232mg，1.253mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应物料倒入冰水中，然后用EtOAc(3×20mL)萃取。用水(3×15mL)、盐水溶液洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗产物。这显示了两种位置异构体。
位置异构体1
LCMS(10分钟方法D)：Rt=3.40分钟，[MH]+=313.1。
位置异构体2
LCMS(10分钟方法D)：Rt=3.48分钟，[MH]+=313.1。
中间体12：1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲酸甲酯
向在0℃下在氮气下搅拌的1H-吲哚-5-甲酸甲酯(2g，11.42mmol)在DMF(15mL)中的溶液中分批加入NaH(0.548g，13.70mmol，在矿物油中的60％分散体)，然后将反应混合物在相同温度下搅拌10分钟，然后在室温下搅拌30分钟，然后经1分钟分批加入pTsCl(2.61g，13.70mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×25mL)萃取。合并的有机层用冷水(3×15mL)、盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗产物。将粗产物加入硅胶60-120柱中，用15％EtOAc/正己烷洗脱，并将收集的纯级分减压浓缩，得到1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲酸甲酯(1.9g，5.59mmol，收率49.0％)，为灰白色固体。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=3.27分钟，[MH]+=330.0。
中间体13：(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲醇
经1分钟向在室温在氮气下搅拌的1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲酸甲酯(1.9g，5.59mmol)在DCM(20mL)中的溶液中逐滴加入DIBAL-H溶液(25.2mL，25.2mmol，1M的甲苯溶液)。将反应混合物在-78℃下搅拌2.5小时。然后在-78℃下用甲醇(0.226mL，5.59mmol)淬灭反应，然后温热至环境温度。用饱和的罗谢尔盐溶液(120mL)稀释反应物料，并搅拌16小时，然后分离各层，并将水相用DCM(2×100mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到粗产物。将粗产物用正戊烷(3×2mL)研磨，然后真空干燥，得到(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲醇(1.70g，5.41mmol，97％收率)，为灰白色固体。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=2.72分钟，[MH]+=300.0。
中间体14：5-(溴甲基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚
在1分钟内向在室温在氮气下搅拌的(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲醇(1.70g，5.41mmol)在DCM(20mL)中的溶液中滴加HBr溶液(0.294mL，5.41mmol)。将反应混合物在室温搅拌4小时。将反应倒入冰水中，然后在室温下搅拌10分钟，然后过滤并将固体产物在真空下干燥，得到5-(溴甲基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(1.48g，3.49mmol，65%收率)，为灰白色固体。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=3.47分钟，[MH]+=365.9。
中间体15：N 5-环丙基-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲基)-1H-吡 唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(300mg，1.366mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入K2CO3(566mg，4.10 mmol)，然后经1分钟滴加5-(溴甲基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(703mg，1.640mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×15mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到为位置异构体混合物的粗产物(420mg)，其无需纯化即可用于下一步。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=2.82分钟，[MH]+=492.0。位置异构体1
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=2.85分钟，[MH]+=492.0。位置异构体2。
中间体16：N 5-环丙基-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡 唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(300mg，1.366mmol)在丙酮(1mL)中的溶液中添加K2CO3(566mg，4.10mmol)，然后一次性加入4-(溴甲基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(597mg，1.640mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×25mL)萃取。用水(3×15mL)、盐水溶液洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到为位置异构体混合物的粗产物(550mg)，其无需纯化即可用于下一步。
LCMS(10分钟方法D)：Rt=4.39分钟，[MH]+=492.1。位置异构体1
LCMS(10分钟方法D)：Rt=4.44分钟，[MH]+=492.1。位置异构体2。
中间体17：N 3,N 5-二甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将1H-吡唑-3,5-二甲酸(200mg，1.281mmol)、甲胺(2M的THF溶液，0.705mL，1.409mmol)和HATU(536mg，1.409mmol)合并在DMF(2mL)中。加入DIPEA(0.448mL，2.56mmol)，并将反应混合物在室温在N2下搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干，并将粗产物用于下一步。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.37分钟，[MH]+=183.1。
中间体18：4-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶
将4-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(5g，25.4mmol，可商购自例如Fluorochem)溶于DMF(50mL)中，并在冰浴中在氮气下冷却，然后以小份加入NaH(矿物油中的60％悬浮液，1.319g，33.0mmol)，将混合物搅拌20分钟，然后添加甲苯磺酰氯(5.32g，27.9mmol)。将混合物搅拌过夜，使其温热至室温，然后将混合物用水(100mL)稀释并搅拌30分钟，得到白色悬浮液。将其过滤并将固体用水洗涤，然后干燥得到无色固体。将粗产物悬浮于乙醚(20mL)中并搅拌5分钟，然后用环己烷(20mL)稀释并过滤，得到所需产物(7.9g，22.49mmol，89％收率)，为无色固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt = 1.24分钟，[MH]+ = 351/353。
中间体19：1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-甲酸甲酯
将4-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(7.8g，22.21mmol)、乙酸钯(II)(0.499g，2.221mmol)和xantphos(1.285g，2.221mmol)在圆底烧瓶中合并，将其用suba封口密封并用氮气吹扫。加入DMF(20mL)、Et3N(9.29mL，66.6mmol)和甲醇(17.97mL，444mmol)，用来自气球的一氧化碳吹扫容器，然后在CO气氛下加热过夜。将混合物用水(20mL)稀释，并用EtOAc(20mL)萃取，有机层用10％LiCl水溶液洗涤，干燥并真空蒸发，并将残余物通过在50g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，得到所需产物(4.4g，13.32mmol，60％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt = 1.12分钟，[MH]+ = 331.1。
中间体20：(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲醇
在氮气下将1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-甲酸甲酯(510mg，1.544mmol)溶于DCM(15mL)中并冷却至-78℃。将DIBAL-H(1M的THF溶液，15.44mL，15.44mmol)滴加至反应中，并将其在-78℃下搅拌3小时。在-78℃下用甲醇(逐滴加入15mL)淬灭反应，然后使其温热至室温。加入罗谢尔盐(在25mL水中饱和)，并将混合物搅拌45分钟。分离混合物，有机层用盐水(50mL)洗涤，通过疏水玻璃料过滤并真空浓缩，得到黄色固体。将该固体溶于DCM(15mL)中，置于氮气下并冷却至-78℃。逐滴加入DIBAL-H(1M的THF溶液，15.44mL，15.44mmol)，然后将反应温热至-40℃。将其在该温度下搅拌5小时。在-40℃下用甲醇(逐滴加入15mL)淬灭反应，然后使其温热至室温。加入罗谢尔盐(在30mL水中饱和)，并将混合物搅拌45分钟。分离混合物，有机层用盐水(2×25mL)洗涤，通过疏水玻璃料过滤并真空浓缩，得到黄色油状物(486mg)。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用5-50％(3：1 EtOAc：EtOH)/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到所需产物(148mg，0.416mmol，27％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt = 0.57分钟，[MH]+ = 303.1。
中间体21：1-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙酮
将1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙-1-酮(500mg，3.12mmol，可从例如ActivateScientific商购)溶于DMF(5mL)中并在氮气氛下在冰浴中冷却至0℃。分批加入氢化钠(60％，在矿物油中，150mg，3.75mmol)，并将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后温热至室温30分钟。加入甲苯磺酰氯(714mg，3.75mmol)，得到橙色悬浮液(放热加入)，并将反应混合物在室温搅拌15分钟。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，并通过逐滴添加水(3mL)淬灭。然后将其在乙酸乙酯(20mL)和饱和LiCl水溶液(20mL)之间分配。分离出有机层并用乙酸乙酯进一步萃取水层。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，得到约1.5 g粗棕色残余物。将其通过硅胶柱色谱法纯化，用5-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱，得到所需产物(438mg，1.254mmol，40％收率)，为浅黄色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt = 1.12分钟，[MH]+ = 315。
中间体22：1-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙醇
向1-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙-1-酮(438mg，1.393mmol)在乙醇(10mL)中的悬浮液中加入THF(4mL)以溶解反应混合物，然后在冰浴中加入硼氢化钠(58.0mg，1.533mmol)。将反应混合物在氮气气氛下在室温搅拌1小时。加入1M HCl溶液(20mL)，水层用DCM萃取。将合并的有机层干燥(疏水性玻璃料)并浓缩，得到所需产物(493mg，1.325mmol，95％收率)，为浅黄色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt = 0.98分钟，[MH]+ = 317。
中间体23：1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲酸甲酯
将1H-吲哚-5-甲酸甲酯(4.31g，24.60mmol，可商购自例如Sigma Aldrich)溶于DMF(50mL)中，并冷却至0℃。以小份加入NaH(矿物油中的60％悬浮液，1.181g，29.5mmol)，并将反应搅拌1小时。加入甲苯磺酰氯(5.63g，29.5mmol)，并使反应物温热至室温并搅拌过夜。加入额外的NaH(0.480g，在矿物油中的60％悬浮液)，并将反应在室温搅拌1小时。用水(25mL)淬灭反应。加入水(175mL)，并用乙酸乙酯(2×250mL)萃取反应。合并的有机物用盐水(200mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到褐色固体。将1：1 MeOH：DCM(50mL)添加至粗产物中，并加入自由流动的二氧化硅(5g)。真空除去溶剂，将二氧化硅装载到100g硅胶柱筒上，并用5-25％乙酸乙酯/环己烷洗脱。合并级分并真空浓缩。将粗产物于最少量的DCM中施加到340g硅胶柱筒上，并用0-25％乙酸乙酯/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到所需产物(6.463g，18.64mmol，76％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.27分钟，[MH]+=330.4。
中间体24：1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)乙酮
将1-(1H-吲哚-5-基)乙-1-酮(1g，6.28mmol，可商购自例如Fluorochem)溶于DMF(10mL)中，并冷却至0℃。以小份添加NaH(0.302g，7.54mmol，在矿物油中的60％分散体)，搅拌15分钟。加入甲苯磺酰氯(1.437g，7.54mmol)，使反应物温热至室温，并搅拌1.5小时。加入另外的NaH(63mg，0.25当量，在矿物油中的60％分散体)，并将反应搅拌30分钟。用水(40mL)淬灭反应。反应混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，合并的有机物用盐水(75mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到褐色固体。将粗产物于最少的DCM中施加到100 gULTRA SNAP柱中，并用0-5％乙酸乙酯/DCM洗脱。合并适当的级分并在真空中浓缩以产生1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)乙-1-酮(1.408g，4.27mmol，68％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.20分钟，[MH]+=314.3。
中间体25：1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)乙醇
将1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)乙-1-酮(1.394g，4.45mmol)溶于THF(40mL)中，在冰浴中冷却至0℃，并放入在氮气下。加入硼氢化钠(0.337g，8.90mmol)，并将反应在室温搅拌过夜。加入另外的硼氢化钠(0.169g)，并将反应搅拌2.5小时。将反应冷却至0℃，并用1NHCl(20mL)缓慢淬灭。然后将其用DCM(2 x 25 mL)萃取，并将合并的有机物通过疏水玻璃料过滤并真空浓缩，得到1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)乙-1-醇(1.398g，4.21mmol，95％收率)，为无色胶状物。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.11分钟，[M-H]-=314.3。
中间体26：(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲醇
在氮气下将1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲酸甲酯(1.027g，3.12mmol)溶于THF(25mL)中，并冷却至-78℃。经10分钟滴加DIBAL-H(1M的THF溶液，8mL，8.00mmol)，并将反应在-78℃下搅拌4小时。使反应温热至室温，并搅拌过夜。将反应冷却至-78℃，并经10分钟滴加DIBAL-H(1M的THF溶液，6.5mL，6.50mmol)。然后将反应温热至室温，并搅拌1.5小时。将反应冷却至0℃，并用MeOH(滴加10mL)淬灭。加入饱和的罗谢尔盐(50mL)，并使反应温热至室温。将水(50mL)和DCM(50mL)添加至反应混合物，并分离各层。有机层用盐水(50mL)洗涤，通过疏水玻璃料洗脱并在真空中浓缩，得到无色油状物。将粗产物于最少量的DCM中施加至硅胶柱上，并用5-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到所需产物(876mg，2.76mmol，89％收率)，为无色胶状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.98分钟，[MH]+=317。
中间体27：1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)乙酮
将1-(1H-吲哚-4-基)乙-1-酮(500mg，3.14mmol，可商购自例如Activate Scientific)溶于DMF(5 mL)中，并在氮气氛下在冰浴中冷却至0℃。分批加入氢化钠(151mg，3.77mmol，在矿物油中的60％分散体)，并将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后温热至室温30分钟。加入甲苯磺酰氯(719mg，3.77mmol)，得到橙色悬浮液(放热加入)，并将反应混合物在室温搅拌15分钟。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，并通过滴加水(3mL)淬灭。然后将其在乙酸乙酯(20mL)和饱和LiCl水溶液(20mL)之间分配。分离有机层，水层进一步用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，得到1.11g粗棕色残余物。将其通过硅胶色谱法纯化，用5-30％乙酸乙酯/环己烷洗脱，得到所需产物(809mg，2.323mmol，74％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.24分钟，[MH]+=314。
中间体28：1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)乙醇
在冰浴中向1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)乙-1-酮(803mg，2.56mmol)在乙醇(20mL)中的悬浮液中加入硼氢化钠(107mg，2.82mmol)。将反应混合物在氮气气氛下在室温搅拌1.5小时。加入THF(17mL)以溶解反应混合物，将其在室温下搅拌另外2小时。加入另一份硼氢化钠(107mg，2.82mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。加入1M HCl溶液(20mL)，水层用DCM萃取。将合并的有机层干燥(疏水性玻璃料)并浓缩，得到所需产物(797mg，2.274mmol，89％收率)，为粉红色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.12分钟，[MH]-=314.2。
中间体29：1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯
将1H-吲哚-4-甲酸甲酯(5g，28.5mmol，可商购自例如Alfa Aesar)溶于DMF(50mL)中，并在冰浴中冷却。分批加入NaH(在矿物油中的60％悬浮液，1.370g，34.2mmol)，并将反应搅拌30分钟。加入甲苯磺酰氯(6.53g，34.2mmol)，将反应搅拌并温热过夜。将反应在冰浴中冷却，并用水(200mL)小心地淬灭。用EtOAc(2 x 250 mL)萃取混合物。合并的有机物用盐水(200mL)洗涤，并通过疏水玻璃料洗脱，然后真空浓缩，得到棕色固体。将粗产物于最少量的DCM中施加至100g硅胶柱上，并用5-25％乙酸乙酯/环己烷洗脱。真空浓缩适当的级分，得到所需产物(6.554g，18.90mmol，66％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.32分钟，[MH]+=330.2。
中间体30：(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲醇
将1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(6.248g，18.97mmol)在氮气下溶解在DCM(200mL)中并冷却至-78℃。经约30分钟缓慢加入DIBAL-H(1M，83mL，83mmol)，并将反应在-78℃下搅拌90分钟，然后搅拌并温热至室温持续整个周末。将反应在冰浴中冷却，并用MeOH(2mL，以0.1mL等分试样)缓慢淬灭。加入饱和的罗谢尔盐溶液(200mL)，搅拌混合物，使其温热至室温3小时。分离各层，有机层通过疏水性玻璃料洗脱，然后真空浓缩，得到黄色油状物。将粗产物于最少的DCM中施加到100g硅胶柱上，并用5-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱。真空浓缩适当的级分，得到所需产物(5.172g，16.30mmol，86％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.07分钟，[MH]+=301.2。
中间体31：1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲酸乙酯
将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲酸乙酯(1.00g，5.26mmol，可商购自例如Alfa Aesar)溶于DMF(10mL)中，并在冰浴中冷却。添加NaH(在矿物油中的60％悬浮液，0.252g，6.31mmol)，并将反应搅拌15分钟。加入甲苯磺酰氯(1.203g，6.31mmol)，并使反应物温热至室温，并搅拌1小时。将反应在冰浴中冷却，并用水(5mL)淬灭。将反应真空浓缩，将盐水(50mL)加入到残余物中，将其用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到褐色固体。将粗产物于最少量的DCM中施加到50g硅胶柱上，并用5-25％(3：1EtOAc：EtOH)/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩产生奶油状固体。将该粗产物溶解在1：2的MeOH：DCM(15mL)中，并加入自由流动的二氧化硅(10g)。真空除去溶剂，并将二氧化硅加载到100g ULTRA SNAP柱上，并用5-25％(3：1 EtOAc：EtOH)/环己烷洗脱。真空浓缩适当的级分，得到所需产物(1.084g，2.52mmol，48％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.27分钟，[MH]+=345.1。
中间体32：(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲醇
将1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲酸乙酯(936mg，2.72mmol)在氮气下溶于DCM(25mL)中，并冷却至-78℃。将DIBAL-H(1M的THF溶液，27.2mL，27.2mmol)滴加到该反应中，并将该反应在-78℃下搅拌过夜。将反应用MeOH(以小份加入1mL)淬灭，然后温热至室温。加入罗谢尔盐(在50mL水中饱和)，并将混合物搅拌15分钟。分离各层，有机层用盐水(2×25mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到橙色固体。将水层用10％MeOH/DCM(50mL)萃取。合并得到的两个有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到橙色油状物。合并粗产物，并于最少的DCM中将其施加于25g硅胶柱上，并用5-40％(3：1 EtOAc：EtOH)/环己烷洗脱。将适当的级分真空浓缩，得到所需产物，为白色固体(659mg，2.07mmol，76％收率)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.92分钟，[MH]+=303.1。
中间体33：(S)-1-(1-(4-氯苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲 酯
将3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(0.5g，2.73mmol)溶于THF(20mL)和乙腈(5mL)中。加入(R)-1-(4-氯苯基)乙-1-醇(0.4mL，2.96mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)和Ph3P(1.078g，4.11mmol)，并将反应置于氮气下并冷却至0℃。滴加DIAD(0.8mL，4.11mmol)，使反应物温热至室温，并搅拌90分钟。将EtOAc(25mL)加入到反应混合物中，然后加入水(50mL)。分离各层，有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色油状物。将粗产物于最少的DCM中施加到100 g ULTRA SNAP柱上，并用5-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱。合并所需的级分并真空浓缩，得到(S)-1-(1-(4-(氯苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(415mg，1.225mmol，收率45％)，为无色胶状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.08分钟，[MH]+=322.4。
以与中间体33类似的方式制备以下中间体。
中间体43：(S)-1-(1-(3-氯苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲 酯
将3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(0.5g，2.73mmol)、(R)-1-(3-氯苯基)乙-1-醇(0.513g，3.28mmol)、氰基亚甲基三丁基膦(CMBP)(1.432mL，5.46mmol，可商购自例如TCI)和甲苯(10mL)加入反应容器中。将反应容器密封并在Biotage Initiator微波中加热至150℃持续30分钟。冷却反应后，将其真空浓缩，得到棕色油状物。将粗产物于最少的DCM中施加到100 g ULTRA SNAP柱上，并用5-60％乙酸乙酯/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到(S)-1-(1-(3-(氯苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(462 mg，1.364 mmol，50％收率)，为橙色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.09分钟，[MH]+=322.2。
以与中间体43类似的方式制备以下中间体。
中间体49：3-(甲基氨基甲酰基)-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡 唑-5-甲酸
将3-(甲基氨基甲酰基)-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(265mg，0.426mmol)溶于甲醇(2.5mL)和THF(2.5mL)中。加入在水中的1M LiOH(0.852mL，0.852mmol)，并将混合物在50℃下搅拌90分钟。将反应真空浓缩。使残余物在乙酸乙酯和水(各10mL)之间分配。将水层用2M HCl酸化，然后用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，用Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到所需产物(173.5mg，0.326mmol，77％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.13分钟，[MH]+=453.3。
以类似于中间体49的方式制备以下中间体。
中间体65：N 5 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己6-基)-N 3 -甲基-1-((1-甲苯磺 酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将3-(甲基氨基甲酰基)-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酸(173mg，0.382mmol)溶于DMF(5mL)中。加入DIPEA(0.200mL，1.147mmol)，然后加入HATU(218mg，0.573mmol)，将反应搅拌5分钟，得到褐色溶液。然后加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(对于制备，参见中间体94，57.0mg，0.421mmol)，并使反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(各15mL)之间分配。有机层用2M HCl(15mL)、盐水(15mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，为黄色油状物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用10-60％(3：1 EtOAc：EtOH)/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到所需产物(99.7mg，0.178mmol，46％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.09分钟，[MH]+=534.3。
中间体66：1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸
将3-(甲基氨基甲酰基)-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酸(139mg，0.307mmol)溶于THF(6 mL)和甲醇(3mL)中。加入碳酸铯(500mg，1.536mmol)，并将反应在70℃下搅拌3.5小时。将反应真空浓缩，将水(10mL)加入到残余物中，然后将其用2NHCl酸化，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到所需产物(91.5mg，0.291mmol，95％收率)，为粉红色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.75分钟，[MH]+=299.1。
中间体67：(1R,5S,6s)-6-(1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H- 吡唑-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
将1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(78.6mg，0.263mmol)溶解在DMF(5mL)中。加入HATU(150mg，0.395mmol)，然后加入DIPEA(0.138mL，0.790mmol)，并将反应搅拌5分钟，得到褐色溶液。加入(1R,5S,6s)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯盐酸盐(68.0mg，0.290mmol，可从例如Astatech商购)，将反应在室温下搅拌1小时。将反应真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(各10mL)之间分配。分离各层，有机层用2N HCl(10mL)、盐水(10mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，为褐色固体。将粗产物于最少量的DCM(带有几滴MeOH)中施加到10 gULTRA SNAP柱上，并用5-50％(3：1 EtOAc：EtOH)/环己烷洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到所需产物(93.8mg，0.186mmol，71％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.00分钟，[MH]+=479。
中间体68：3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸
将氢氧化钠(6mL，12.00mmol，2M水溶液)加至3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(1g，5.88mmol，可从例如Fluorochem商购)在乙醇(10mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌2小时，然后真空蒸发至其原始体积的一半，并用2M HCl酸化至〜pH 2。溶液用氯化钠饱和(添加固体，并将混合物搅拌1小时)，然后首先用10％MeOH/DCM(5×10mL)萃取，然后用EtOAc(5×10mL)萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥，并真空蒸发，得到3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(0.65g，4.57mmol，78％收率)，为无色胶状物。将其粗品用于随后的反应中。
中间体69：6-氨基双环[3.1.0]己-3-醇
将3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(650mg，4.57mmol)溶解在甲苯(10mL)和叔丁醇(10mL)中，然后加入Et3N(1.275 mL，9.15 mmol)和叠氮磷酸二苯酯(1.478 mL，6.86mmol)，并将混合物在80℃加热过夜。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，并用水(20mL)洗涤，将溶剂干燥并蒸发，得到浅黄色胶状物。将其溶解在DCM(10mL)中，并加载到50 g二氧化硅柱上，然后用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，将茚三酮活性级分真空蒸发，得到三批不纯的Boc保护的胺中间体(每种可能以不同的非对映异构体为主要组分)：批次A(105mg)，批次B(122mg)和批次C(85mg)。将它们各自溶解在DCM(3mL)中，并添加TFA(1mL)，将溶液搅拌1小时，然后真空蒸发，将残余物溶解在甲醇中，并加载到5g SCX柱上。将它们用甲醇洗涤，然后用2M甲醇氨洗脱。真空蒸发洗脱液，得到三批产物，为浅黄色玻璃状物(每种可能以不同的非对映异构体为主要组分)：批次A(15mg)，批次B(12mg)和批次C(14mg)。将粗产物使用并在随后的反应中偶联。
中间体70：叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷
将环戊-3-烯-1-醇(5g，59.4mmol，可从例如Astatech商购)溶解在DCM(100mL)中，加入TBDMS-Cl(8.96g，59.4mmol)和咪唑(4.86g，71.3mmol)，然后将所得悬浮液在室温搅拌整个周末。用水(2×100mL)洗涤混合物，干燥并真空蒸发，得到叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷(12.05g，60.7mmol，102％收率)，为浅黄色液体。
中间体71：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6- 甲酸乙酯，非对映异构体的混合物
将重氮乙酸乙酯(6.90mL，66.5mmol)溶于DCM(150mL)中，并在室温下经〜5小时滴加到乙酸铑(II)二聚体(1g，2.263mmol)和叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基硅烷(12g，60.5mmol)在DCM(150mL)中的混合物中。将所得绿色溶液搅拌过夜，然后真空蒸发，得到绿色液体。将其加载到340 g二氧化硅柱上，用0-40％EtOAc/环己烷洗脱，并使用高锰酸盐浸液使级分的TLC板可视化。真空蒸发活性级分，得到(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(5.5g，19.33 mmol，32.0％收率)(无色液体)，为甲硅烷基醚位置处的异构体混合物(〜3：1比率)，并将其以粗品用于下一步。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.96分钟，[MH]+＝不存在。
中间体72：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6- 甲酸，非对映异构体的混合物
在室温下将氢氧化钠(20mL，40.0mmol，2M水溶液)添加到(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(5.0g，17.58mmol)在乙醇(50mL)中的溶液中，并将混合物搅拌3小时。TLC表明所有起始原料都已消耗完，将混合物真空蒸发至约30mL体积，然后用水(30mL)稀释并用乙醚(50mL)洗涤。将来自后处理的乙醚洗涤液干燥并真空蒸发，得到回收的起始原料：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(3.85g)。将其溶解在乙醇(30mL)中，并添加2M NaOH水溶液(20mL)，然后将混合物在70℃加热3小时，然后真空蒸发。将残余物溶于水(50mL)中，并用乙醚(50mL)洗涤，然后将水层用2M HCl(20mL)酸化，并用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1.9g，7.41mmol收率42.2％)，为淡黄色固体，NMR与异构体混合物一致。产物不经纯化直接用于下一步。
中间体73：((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6- 基)氨基甲酸苄酯，非对映异构体混合物
将(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1.8g，7.02mmol)溶于甲苯(20mL)和Et3N(1.957mL，14.04mmol)的混合物中，然后加入DPPA(1.815mL，8.42mmol)，并将混合物在室温搅拌30分钟。加入苄醇(1.095mL，10.53mmol)，并将混合物在100℃加热4小时，然后冷却至室温。加入乙酸乙酯(100mL)，溶液用水(2×100mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤，并真空蒸发滤液，得到浅黄色油状物。将其溶解于DCM(10mL)中，并加载到50 g二氧化硅柱上，然后用0-30％EtOAc/环己烷洗脱，收集含产物的级分(通过高锰酸盐浸液检测)并真空蒸发，得到((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯(1.90g，5.26mmol，75％收率)，为淡黄色油状物，NMR与所需产物一致，为约2：1比率的异构体混合物。该化合物无需进一步纯化即可用于下一步。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.56分钟，[MH]+=362.6。
中间体74：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺， 非对映异构体混合物
将((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯(1.9g，5.26mmol)溶于乙醇(100mL)中并在大气压下以1 mL/min的流速在H-Cube中氢化。真空蒸发洗脱液，得到(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺(1.12g，4.92mmol，84％收率)，为淡黄色油状物。产物是甲硅烷基醚位置处的非对映异构体的不等比混合物，比率约为65:35。
中间体75：N 5-((1r,4r)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1-(1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚- 4-基)乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(255 mg，0.547 mmol)在DMF(4 mL)中的溶液中加入HATU(312mg，0.820mmol)，然后加入(1r,4r)-4-氨基环己-1-醇(126mg，1.093mmol，可商购自例如Fluorochem)和DIPEA(0.477mL，2.73mmol)。将得到的反应混合物在室温下在空气中搅拌5小时。将反应混合物真空浓缩以除去DMF，并在乙酸乙酯和饱和LiCl水溶液之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(疏水性玻璃料)，浓缩得到粗橙色油状物。将其通过硅胶柱色谱法纯化，用0-50％(25％乙醇/乙酸乙酯)/乙酸乙酯洗脱，得到所需产物(330mg，0.439mmol，80％收率)，为浅黄色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.07分钟，[M+Na]+=586。
以与中间体75类似的方式制备以下中间体：
中间体83：1-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡 唑-5-甲酸
将3-(甲基氨基甲酰基)-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(106mg，0.227mmol)溶于甲醇(1.5mL)和THF(1.5mL)中。加入在水中的1MLiOH(0.453mL，0.453mmol)，并将反应在室温搅拌过夜。加入另外的在水中的1M LiOH(0.453mL)，并将反应搅拌4小时。将残余物在水和乙酸乙酯(各10mL)之间分配。水层用2NHCl酸化并用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。然后将水层用10％MeOH/DCM(2×15mL)萃取，并将水层真空浓缩，得到粗残余物。将粗产物溶于1∶1 DMSO∶MeCN(2mL)中，过滤，然后通过MDAP(高pH法)纯化。真空浓缩适当的级分，得到标题化合物(22mg，0.051mmol，23％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.37分钟，[MH]+=300.2。
中间体84：(S)-N 5-(3,3-二乙氧基丙基)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5- 二甲酰胺
将(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(121mg，0.443mmol)溶解在DMF(2mL)中。加入HATU(255mg，0.671mmol)，然后加入3,3-二乙氧基丙-1-胺(0.12mL，0.742mmol，可商购自例如Acros)，然后加入DIPEA(0.39mL，2.233mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌3.25小时。将反应混合物在饱和LiCl水溶液(20mL)、Na2CO3(〜1mL)和乙酸乙酯(20mL)之间分配；分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×20mL)萃取水层。合并有机层，用水(2×10mL)反萃取，并通过装有疏水性玻璃料的滤筒过滤。真空蒸发滤液，得到无色胶状物。将其重新溶解在二氯甲烷中，并直接加到10 g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过SP4快速柱色谱法纯化(0-60％乙酸乙酯/环己烷)。合并相关级分，得到(S)-N 5-(3,3-二乙氧基丙基)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(103 mg，0.230 mmol，52％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.05分钟，[MH]+=403.2。
中间体85：2-(1,3-二羟基丙烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
在室温下向2-氨基丙烷-1,3-二醇(2.839g，31.2mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)在DMF(60mL)中的溶液中滴加异苯并呋喃-1,3-二酮(4.62g，31.2mmol，可从例如SigmaAldrich商购)。将反应加热至90℃并搅拌过夜。将反应混合物在EtOAc(200mL)和水(250mL)之间分配，并分离各层。分析有机层并显示其包含产物。因此，将水层进一步用EtOAc(2×100mL)萃取，然后将合并的有机物用水(2×50mL)和饱和LiCl水溶液(50mL)反萃取。然后将有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到2-(1,3-二羟基丙烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.33g，15.05mmol，48％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.52分钟，[MH]+=222.2。
中间体86：N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)乙 基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将(S)-N 5-(3,3-二乙氧基丙基)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(113mg，0.280mmol)、2-(1,3-二羟基丙烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(62mg，0.280mmol)和对甲苯磺酸一水合物(12mg，0.063mmol)在甲苯(3mL)中的混合物在氮气下在110℃下搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温，并将挥发物真空蒸发，得到黄色固体。将其在10％甲醇/DCM(10mL)、水(5mL)和饱和Na2CO3水溶液(10mL)之间分配并分离各层。用10％甲醇/DCM(3×10mL)和乙酸乙酯(5mL)萃取水相。合并有机层，并通过装有疏水性玻璃料的滤筒过滤。真空浓缩有机层，得到138mg粗产物。将粗产物溶于DCM中，并通过快速色谱法(10g SNAP二氧化硅柱)纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。合并相关级分并真空浓缩，得到N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(102 mg，0.154 mmol，55％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.10分钟，[MH]+=532.2。
中间体87：(S)-N 5-(4,4-二乙氧基丁基)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5- 二甲酰胺
将(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(125mg，0.457mmol)溶解在DMF(2mL)中。加入HATU(272mg，0.715mmol)，然后加入4,4-二乙氧基丁烷-1-胺(0.13mL，0.752mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)，然后加入DIPEA(0.4mL，2.290mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌6小时。再添加HATU(209mg，0.549mmol)、4,4-二乙氧基丁烷-1-胺(0.1mL，0.579mmol)和然后DIPEA(0.1mL，0.573mmol)，之后搅拌另外3小时。将反应混合物在饱和LiCl水溶液(20mL)和乙酸乙酯(20mL)之间分配，分离各层。用另外的乙酸乙酯(2×20mL)萃取水层。合并有机层，用水(2×10mL)反萃取，并通过装有疏水性玻璃料的滤筒过滤。真空蒸发滤液，得到无色胶状物。将其重新溶解在二氯甲烷中，直接加到10 g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过SP4快速柱色谱法纯化(0-70％乙酸乙酯/环己烷)。合并相关级分并真空浓缩，得到(S)-N 5-(4,4-二乙氧基丁基)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(190 mg，0.411 mmol，收率90％)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.07分钟，[M-H]-=415.3。
中间体88：N 5-(3-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基) 丙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将(S)-N 5-(4,4-二乙氧基丁基)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(190mg，0.456mmol)、2-(1,3-二羟基丙烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(112mg，0.506mmol)和对甲苯磺酸一水合物(19mg，0.100mmol)在甲苯(4mL)中的混合物在氮气下在110℃下搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温，并将挥发物真空蒸发，得到黄色固体。将其在10％甲醇/DCM(10mL)、水(5mL)和饱和Na2CO3水溶液(10mL)之间分配并分离各层。用10％甲醇/DCM(3×10mL)和乙酸乙酯(5mL)萃取水相，合并有机层，并通过装有疏水性玻璃料的滤筒过滤。真空浓缩有机层，得到207mg粗产物。将粗产物溶于DCM中，并通过快速色谱法纯化(25gSNAP二氧化硅柱)，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。合并相关级分并真空浓缩，得到N 5-(3-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(81mg，0.119 mmol，26％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.12分钟，[MH]+=546.2。
中间体89：(S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙醇
将(S)-1-苯基乙烷-1,2-二醇(251mg，1.817mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)溶解在DCM(7mL)中，然后添加DMAP(22mg，0.180mmol)。将溶液冷却至0℃，然后加入三乙胺(0.380mL，2.72mmol)和逐滴加入TBDMS-Cl(411mg，2.72mmol)/DCM(3mL)。然后将反应混合物在室温搅拌2小时。向反应混合物中加入NH4Cl(7mL)。分离各层，并将水层用DCM(2×10mL)再次萃取。将合并的有机层干燥并真空浓缩，得到448mg的粗产物，将其直接用于下一步。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.41分钟，[M-H]-=251.1。
中间体90：(R)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙基)-3-(甲基氨 基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
将3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(216mg，1.179mmol)、(S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙-1-醇(327mg，1.297mmol)/甲苯(2.5mL)、三正丁基膦(0.582mL，2.359mmol)和2-(三丁基亚正膦基)乙腈(0.464mL，1.769mmol)合并。将反应混合物在5mL微波小瓶中在120℃下加热45分钟。将(S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙-1-醇(119mg，0.471mmol)进一步加入到反应混合物中，然后在微波中于120℃加热45分钟。将反应混合物真空浓缩，得到1.574g粗产物。将粗产物再溶解于DCM中，并通过快速色谱法纯化(100g SNAP二氧化硅柱)，用0-65％EtOAc∶环己烷洗脱。合并相关级分并真空浓缩，得到(R)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(276mg，0.562mmol，48％收率)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.42分钟，[MH]+=418.4。
中间体91：(S)-3-(甲氧羰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸
在0℃下将LiOH(0.888 g，21.16 mmol)/水(20 mL)添加到(S)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯(6.1 g，21.16 mmol)在甲醇(50mL)和2-MeTHF(50mL)中的溶液中，并将溶液在0℃下搅拌2小时，然后用2M HCl(12mL)酸化并真空蒸发至原始体积的一半。将混合物进一步酸化至pH 2，然后用EtOAc(2×50mL)萃取，并将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到无色胶状物。将其溶解在DCM中，并加载到100g二氧化硅柱上，然后用0-50％(1％AcOH/EtOAc)/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到(S)-3-(甲氧基羰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(4.2 g，15.31 mmol，72％收率)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.00分钟，[MH]+=275.2。
中间体92：(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸
在室温下将LiOH(751mg，31.4mmol)添加到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(1000 mg，6.27 mmol，可从例如Pharmablock商购)在水(10mL)、THF(10mL)和MeOH(10mL)中的溶液中。将所得悬浮液搅拌3小时。为了进行后处理，将混合物蒸发，将剩余的粗制固体溶解在最少量的水中，用HCl(5mL，25％m/m)淬灭，并用MeOH/DCM溶剂萃取4次，合并的有机相经疏水玻璃料干燥，真空蒸发，得到所需化合物(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(750 mg，5.85 mmol，93％收率)。
中间体93：(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸苄酯
将(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(340mg，2.65mmol)溶于甲苯(12mL)中，然后加入Et3N(1.110mL，7.96mmol)、叠氮磷酸二苯酯(0.686mL，3.18mmol)和苯甲醇(0.552mL，5.31mmol)，并将混合物回流加热2小时。将溶液用EtOAc(10mL)稀释，并用水(10mL)和NaHCO3溶液(10mL)洗涤，将有机层干燥并蒸发，并将残余物通过在25g二氧化硅柱上的色谱法纯化，用0-50％EtOAc/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸苄酯(460 mg，1.972 mmol，74.3％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.83分钟，[MH]+=234.3。
中间体94：(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐
将(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸苄酯(460mg，1.972mmol)溶解在EtOH(20mL)中，并使用H-cube(设置：rt，1巴，1 mL/min流速)和10％Pd/C CatCart 30作为催化剂将反应氢化。使反应通过H-Cube循环1.5小时，然后用HCl(7M水溶液，1.332mL，9.86mmol)酸化混合物，并真空蒸发，得到油状固体。将该固体真空干燥 2天，得到所需的产物(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己6-胺盐酸盐(262mg，1.836mmol，93％收率)，为灰白色固体。
中间体95：4-甲氧基环戊-1-烯
将环戊-3-烯-1-醇(10g，119mmol，可从例如Fluorochem商购)溶解在DMF(100mL)和THF(50 mL)的混合物中，并在冰浴中在氮气下冷却，然后以小份加入NaH(在矿物油中的60％悬浮液，5.71g，143mmol)，并将混合物搅拌30分钟，然后添加MeI(9.66mL，155mmol)。将得到的悬浮液在0℃下搅拌2小时，然后加入到水(500mL)中，并用乙醚(500mL)萃取。有机层用水(2×200mL)和盐水(200mL)洗涤，干燥并真空蒸发，得到所需产物，为浅黄色液体，其无需进一步纯化即可用于随后的反应。
中间体96：3-甲氧基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯
将重氮乙酸乙酯(82mL，119mmol)溶于DCM(100mL)中，并在室温下经4小时逐滴添加到4-甲氧基环戊-1-烯(对于制备，参见中间体95，11.68g，119mmol)和乙酸铑(II)二聚体(2.63g，5.95mmol)在DCM(100 mL)中的混合物中，然后将混合物搅拌另外2小时，然后用水(300mL)洗涤并将有机层干燥并真空蒸发得到粗的浅绿色液体。将其溶解在环己烷中，并加载到100g SNAP超二氧化硅柱上，通过快速色谱法纯化，用0-20％EtOAc/环己烷洗脱。真空蒸发适当的级分，得到呈无色油状的3-甲氧基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(1.4g，7.60mmol，6％收率)，其为异构体的混合物，还含有一些残余的重氮乙酸乙酯。其无需任何进一步纯化即可用于后续反应。
中间体97：3-甲氧基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸
将3-甲氧基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(对于制备，参见中间体96，1.4g，7.60mmol)溶于乙醇(10mL)中并加入2M NaOH水溶液(10mL，20.00mmol)，然后将混合物在室温搅拌过夜。真空蒸发溶剂，并将残余物用2M HCl(水溶液)(11mL)酸化，然后用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到浅黄色油状物，将其直接用于下一步。
中间体98：(3-甲氧基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-甲氧基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(对于制备，参见中间体97，0.74g，4.74mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.956g，7.11mmol)和Et3N(1.321mL，9.48mmol)溶于甲苯(20mL)中，将混合物搅拌30分钟，然后加入叔丁醇(6mL)，并将混合物回流加热3小时，然后使其在室温下静置过夜。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，然后用水和碳酸氢钠水溶液洗涤，并真空蒸发。将所得胶状物溶解在DCM中，并加载到25g SNAP超二氧化硅柱上，然后通过快速色谱法纯化，用0-30％EtOAc/环己烷洗脱。真空蒸发含有产物的级分，得到(3-甲氧基双环[3.1.0]己-6基)氨基甲酸叔丁酯(0.45g，1.980mmol，42％收率)，为无色固体。
中间体99：3-甲氧基双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐
将(3-甲氧基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯(对于制备，参见中间体98，380mg，1.672mmol)溶于HCl(4M的二噁烷溶液，5mL，20.00mmol)中，将反应混合物在室温搅拌5小时。将反应混合物浓缩，得到3-甲氧基双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(270mg，1.402mmol，84％收率)，为浅棕色固体。
中间体100：7,7-二甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮
在0℃在氮气下，向1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(5.45g，34.9mmol，可商购自例如SigmaAldrich)在无水THF(20mL)中的溶液中加入氢化钠(60％在矿物油中，2.79g，69.8mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌1小时，然后加入甲基碘(5.45mL，87mmol)。将反应混合物在10℃至室温搅拌1.5小时。用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(2×80mL)萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，并通过疏水玻璃料干燥。将有机层真空浓缩，得到〜6.8g的粗黄色残余物。通过SiO2色谱法(Biotage SNAP Ultra 100 g柱，用5-65％乙醚/环己烷洗脱)纯化，得到7,7-二甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(3.07g，14.16mmol，41％收率)，为无色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.78分钟，[MH]+=185.0。
中间体101：7,7-二甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇
在0℃(冰浴)下向7,7-二甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(对于制备，参见中间体100，3.04g，16.50mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中分批加入硼氢化钠(0.624g，16.50mmol)，并将得到的反应混合物在室温搅拌1小时。加入水(10mL)，并真空除去甲醇。将反应混合物在水和DCM之间分配。分离有机层，水层用DCM(2×20mL)进一步萃取。将合并的有机层干燥(疏水性玻璃料)并真空浓缩，得到7,7-二甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(2.87g，13.10mmol，79％收率)，为无色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.62分钟，[MH]+=187.1。
中间体102：4-羟基-3,3-二甲基环己酮
向7,7-二甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(对于制备，参见中间体101，2.87g，15.41mmol)在甲醇(13mL)中的溶液中加入HCl(2M水溶液，30mL，60.0mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，并将残余物用饱和NaHCO3水溶液中和(至pH 7)。将水层用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，将合并的有机层干燥(疏水性玻璃料)并真空浓缩，得到4-羟基-3,3-二甲基环己-1-酮(2.18g，12.26mmol，收率80％)，为浅黄色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.54分钟，[MH]+=143.0。
中间体103：4-(苄基氨基)-2,2-二甲基环己醇，非对映异构体混合物
将4-羟基-3,3-二甲基环己-1-酮(对于制备，参见中间体102，124mg，0.872mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中。加入苯甲胺(0.114mL，1.046mmol)和乙酸(0.050mL，0.872mmol)，并将反应混合物在室温在N2下搅拌。3.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(222mg，1.046mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(5mL)淬灭，分离有机层。用DCM(2×10mL)进一步萃取水层，将合并的有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，得到〜270mg的粗黄色油状物。将其通过在SiO2上的色谱法(Biotage SNAP 25g柱，用0-100％(25％EtOH/乙酸乙酯)/环己烷洗脱)纯化，得到产物的混合物。浓缩所需的级分，得到4-(苄基氨基)-2,2-二甲基环己醇(63mg，0.27mmol，26％收率)，为浅黄色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.38分钟，[MH]+=234.2。
中间体104：(+/-)-4-氨基-2,2-二甲基环己醇，非对映异构体混合物
将4-(苄基氨基)-2,2-二甲基环己-1-醇(对于制备，参见中间体103，63mg，0.270mmol)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加入10％钯/碳(40mg)，并将该混合物在氢气氛下于室温搅拌21小时。通过硅藻土过滤反应混合物以除去催化剂，并浓缩以得到呈无色油状的4-氨基-2,2-二甲基环己-1-醇(35mg，0.208mmol，77％收率)，为非对映异构体的外消旋混合物。
中间体105：1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-7-甲酸甲酯
将1H-吲哚-7-甲酸甲酯(1000mg，5.71mmol，可商购自例如Apollo Scientific)溶于DMF(18 mL)中，并在氮气下冷却至0℃。以小份加入氢化钠(在矿物油中的60％悬浮液，287mg，7.18mmol)，并将反应搅拌15分钟。加入甲苯磺酰氯(1308mg，6.86mmol)，使反应温热至室温并搅拌16小时。将反应混合物冷却至0度，然后再添加氢化钠(在矿物油中的60％悬浮液，114mg，2.85mmol)。将反应混合物搅拌15分钟，然后温热至室温。将反应混合物再搅拌15分钟，然后加入另一部分甲苯磺酰氯(552mg，2.90mmol)。将所得溶液搅拌2小时。然后将反应混合物加热至60℃持续1.5小时。用水(〜6mL)淬灭反应混合物，然后在饱和LiCl水溶液(100mL)和乙酸乙酯(30mL)之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(2 x 30 mL)再萃取两次。将合并的有机层干燥(疏水性玻璃料)并真空浓缩，得到粗产物，为黄色油状物。将粗产物重新溶解在二氯甲烷中，直接施加到100g SNAP二氧化硅柱的顶部，并通过SP4快速柱色谱法纯化(0-25％乙酸乙酯/环己烷)。合并相关级分并真空浓缩，得到1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-7-甲酸甲酯(1025mg，2.80mmol，49％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.18分钟，[MH]+=330.1。
中间体106：(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-7-基)甲醇
在氮气下，将1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-7-甲酸甲酯(对于制备，参见中间体105，1025mg，3.11mmol)在二氯甲烷(31 mL)中的溶液冷却至-78℃，并经15分钟滴加DIBAL-H(1M的THF溶液，7.78mL，7.78mmol)，将反应在-78℃搅拌1.5小时。将反应搅拌18小时，然后再添加DIBAL-H(25重量％的甲苯溶液，4.19mL，6.22mmol)。将反应混合物搅拌20小时。当仍然在-78℃时将反应用甲醇淬灭，然后温热至室温。将反应用罗谢尔盐溶液(10mL)稀释，并搅拌64小时。分离各层，水相用DCM(3×20mL)萃取。合并的有机层通过疏水玻璃料干燥，然后真空浓缩，得到粗产物(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-7-基)甲醇(950mg，2.84mmol，91％收率)，为橙色油状物，其原样用于后续反应。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.18分钟，[M-OH]+=284.1。
中间体107：1-甲苯磺酰基-1H-吲唑-4-甲酸甲酯
将1H-吲唑-4-甲酸甲酯(530mg，3.01mmol，可商购自例如Sigma Aldrich)溶于DMF(6.4mL)中并在氮气下冷却至0℃。以小份加入氢化钠(矿物油中的60％悬浮液，241mg，6.02mmol)，并将反应搅拌10分钟。加入甲苯磺酰氯(775mg，4.07mmol)，然后在0℃搅拌30分钟。使反应温热至室温并搅拌1小时。将反应混合物倒入250mL水中，然后过滤。将沉淀物在真空烘箱中干燥过夜，得到1-甲苯磺酰基-1H-吲唑-4-甲酸甲酯(719mg，1.959mmol，65％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.22分钟，[MH]+=331.1。
中间体108：(1-甲苯磺酰基-1H-吲唑-4-基)甲醇
在氮气下，将1-甲苯磺酰基-1H-吲唑-4-甲酸甲酯(对于制备，参见中间体107，804mg，2.434mmol)在二氯甲烷(24mL)中的溶液冷却至-78℃，经15分钟滴加DIBAL-H(1.637mL，2.434mmol，25重量％甲苯溶液)，将反应在-78℃下搅拌62小时。在-78℃下将另外的DIBAL-H(3.27mL，4.87mmol，25重量％甲苯溶液)加入到反应中，然后搅拌1小时。当仍然在-78℃时将反应用甲醇淬灭，然后温热至室温。将反应用罗谢尔盐溶液(10mL)稀释，并搅拌16小时。分离各层，水相用DCM(3×20mL)萃取。合并的有机层通过疏水性玻璃料干燥，然后真空蒸发，得到(1-甲苯磺酰基-1H-吲唑-4-基)甲醇(686mg，2.042mmol，84％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.00分钟，[MH]+=303.1。
中间体109：(+/-)-1-(3-氟-2-甲基苯基)乙醇
将1-(3-氟-2-甲基苯基)乙-1-酮(1000mg，6.57mmol，可从例如Alfa Aesar商购)溶于THF(10mL)和乙醇(10mL)中，冷却至0℃，并置于氮气下。加入硼氢化钠(456mg，12.05mmol)，并将反应在室温下搅拌1.5小时。将反应用1M HCl缓慢淬灭直至pH 3，然后加入水。分离各层，水层再用DCM(2×20mL)萃取两次。有机层用碳酸氢钠水溶液反萃取，通过疏水玻璃料并真空浓缩，得到无色油状物，其为粗产物1-(3-氟-2-甲基苯基)乙-1-醇(875mg，5.11mmol，收率78％)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.85分钟，无[MH]+。
中间体110：3-(苄氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯，非对映异构体的混合物
将重氮乙酸乙酯(15mL，21.69mmol)溶于DCM(100mL)中，在室温下经4小时滴加至((环戊-3-烯-1-基氧基)甲基)苯(3.1g，17.79mmol，可商购自例如Fluorochem)和乙酸铑(II)二聚体(0.393g，0.890mmol)在DCM(100mL)中的混合物中，然后将混合物搅拌另外2小时，然后用水(300mL)洗涤，干燥有机层并真空蒸发，得到浅绿色液体。将其使用硅胶柱色谱法纯化，用0-20％EtOAc/环己烷梯度洗脱，得到(+/-)-3-(苄氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(0.91g，3.50mmol，收率20％)，为无色液体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.26分钟，[MH]+=261.3。
中间体111：3-(苄氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸，非对映异构体的混合物
将(+/-)-3-(苄氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯(对于制备，参见中间体110，0.9g，3.46mmol)溶于EtOH(20mL)中，加入NaOH(5mL，10.00mmol，2M水溶液)，然后将混合物在室温搅拌过夜。真空蒸发溶剂至其原始体积的约一半，然后用2M HCl(水溶液)酸化至pH 4，并用EtOAc(50mL)萃取。干燥有机层并真空蒸发，得到(+/-)-3-(苄氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(0.74g，3.19mmol，92％收率)，为无色固体，为非对映异构体的混合物。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.56分钟，[MH]+=233.3。
中间体112：(3-(苄氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯，非对映异构体的 混合物
将3-(苄氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(对于制备，参见中间体111，0.74g，3.19mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.140g，4.14mmol)和Et3N(0.888mL，6.37mmol)溶于甲苯(20mL)中，并将混合物搅拌30分钟，然后加入叔丁醇(6mL)，并将混合物回流加热3小时，然后使其在室温下静置过夜。将混合物用EtOAc稀释，然后用水和饱和NaHCO3(水溶液)洗涤，并真空蒸发。使用硅胶柱色谱法纯化所得胶状物，用0-30％EtOAc：环己烷梯度洗脱，得到((1R,3r,5S,6s)-3-(苄氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯(0.35g，1.154mmol，36.2％收率)，为无色固体，为非对映异构体的混合物。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.26分钟，[MH]+=304.3。
中间体113：3-(苄氧基)双环[3.1.0]己-6-胺，HCl，非对映异构体混合物
将(3-(苄氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯(对于制备，参见中间体112，350mg，1.154mmol)溶于HCl(4M的二噁烷溶液，5mL，20.00mmol)，将反应混合物在室温搅拌4小时。浓缩反应混合物，得到3-(苄氧基)双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(253mg，0.897mmol，78％收率)，为淡黄色固体，为非对映异构体的混合物。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.90分钟，[MH]+=204.2。
中间体114：(+/-)-7-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮
在-78℃在N2下向1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(1.04g，6.66mmol，购自商业供应商如Apollo Scientific)在THF(67mL)中的溶液中加入1M LiHMDS/THF(7.32mL，7.32mmol)。将反应搅拌1小时，并逐滴加入MeI(0.547mL，8.66mmol)。将反应在-78℃下搅拌3小时，然后使其温热至室温过夜。然后将其用饱和NH4Cl(水性)溶液淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机物通过疏水玻璃料过滤，真空浓缩成棕色油状物。将该油状物通过硅胶柱色谱法纯化，用0至32％EtOAc：环己烷的梯度洗脱，得到(+/-)-7-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(443mg，2.60mmol，39％收率)，为白色固体。
中间体115：(+/-)-(反式)-7-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇
在-78℃下向7-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(对于制备，参见中间体114，438mg，2.57mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入2M LiAlH4的THF溶液(1.67mL，3.35mmol)。将混合物在-78℃下搅拌1.5小时。然后将其温热至0℃，将反应混合物用罗谢尔盐溶液小心地淬灭。加入EtOAc并分离各层，水层用EtOAc萃取，合并的有机物通过疏水玻璃料过滤并真空浓缩，得到(+/-)-(反式)-7-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(430mg，2.397mmol，93％收率)，为无色油状物。
中间体116：(+/-)-(反式)-4-羟基-3-甲基环己酮
向(+/-)-(反式)-7-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(对于制备，参见中间体115，425mg，2.468mmol)在丙酮(7mL)中的溶液中加入H2SO4(18mL，9.00mmol，0.5M)，并将溶液在室温搅拌20小时。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机物通过疏水性玻璃料过滤，并真空浓缩，得到(+/-)-(反式)-4-羟基-3-甲基环己-1-酮(290mg，2.265mmol，收率92％)，为黄色油状物。
中间体117：(S)-N-((1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰 胺和(S)-N-((1S,3S,4S)-4-羟基-3-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1：1非对映异 构体混合物)
将(+/-)-(反式)-4-羟基-3-甲基环己-1-酮(对于制备，参见中间体116，1.99g，15.53mmol)添加至(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.304g，18.63mmol)和四乙氧基钛(5.43mL，25.9mmol)在THF(30mL)中的溶液中，将反应在60℃下搅拌1.5小时，然后在70℃下搅拌1.5小时。将混合物冷却至室温，然后冷却至-78℃。逐滴加入1M的三仲丁基硼氢化锂在THF中的溶液(38.8mL，38.8mmol)，并在搅拌下将反应混合物缓慢温热至室温过夜。然后将反应混合物冷却至0℃，并逐滴加入MeOH。将粗反应混合物倒入盐水中。将得到的悬浮液通过硅藻土塞过滤，并将滤饼用EtOAc洗涤。然后将滤液真空浓缩，用水稀释并用EtOAc萃取。合并的有机物通过疏水玻璃料过滤，真空浓缩成黄色油状物。使用硅胶柱色谱法纯化该油状物，用10％至42％的(25％EtOH/AcOEt)：环己烷梯度洗脱，得到(S)-N-((1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺和(S)-N-((1S,3S,4S)-4-羟基-3-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1：1非对映异构体混合物)(303.5mg，1.301mmol，收率8％)，为黄色胶状物，其直接用于下一步反应。
中间体118：(1R,2R,4S)-4-氨基-2-甲基环己醇和(1S,2S,4S)-4-氨基-2-甲基环 己醇(1：1非对映异构体混合物)
将4M HCl/二噁烷(1mL，4.00mmol)添加到(S)-N-((1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺化合物和(S)-N-((1S,3S,4S)-4-羟基-3-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1：1非对映异构体混合物，对于制备，参见中间体117)(300mg，1.286mmol)在DCM(5mL)中的溶液中，将反应在室温搅拌过夜。加入更多的4M HCl/二噁烷(1mL，4.00mmol)，并将反应在室温搅拌6小时。加入另外的4M HCl/二噁烷(1mL，4.00mmol)，并将反应在室温搅拌1小时。将反应真空浓缩，溶解在MeOH中，并通过2g SCX柱(用MeOH预先调节)洗脱，用MeOH和2M NH3的MeOH溶液洗涤。将氨级分真空浓缩，得到(1R,2R,4S)-4-氨基-2-甲基环己醇和(1S,2S,4S)-4-氨基-2-甲基环己醇(1：1非对映异构体混合物)(74.5mg，0.577mmol，45％收率)，为棕色胶状物。
中间体119：(R)-1-(3-氟-4-甲基苯基)乙醇
将(+)-DIP-Cl(1.265g，3.94mmol)溶于THF(20mL)中，并在N2下冷却至-25℃。加入在THF(10mL)中的1-(3-氟-4-甲基苯基)乙-1-酮(0.5g，3.29mmol，购自商业供应商例如AlfaAesar)，并将反应搅拌过夜，同时将其从-25℃温热至室温。将反应冷却至-35℃，并添加另外的(+)-DIP-Cl(1.265g，3.94mmol)/THF(5mL)。将反应保持在-35至-25℃，同时将其搅拌6小时，然后使其温热至室温过夜。用乙醛(0.5mL，8.85mmol)淬灭反应，并真空浓缩。将残余物溶于Et2O(20mL)中，加入二乙醇胺(1.036g，9.86mmol)，将其搅拌2小时。通过硅藻土滤出白色沉淀物，并将滤液真空浓缩，得到无色油状物。使用硅胶柱色谱法纯化该油状物，用0-25％EtOAc：环己烷的梯度洗脱，得到(R)-1-(3-氟-4-甲基苯基)乙-1-醇(836mg，2.71mmol，收率83％)，为无色液体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.89分钟，无[MH]+。
中间体120：(+/-)-7-氯双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮
在室温下经1小时将锌(8.42g，129mmol)以小份添加到(+/-)-7,7-二氯双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮(24g，136mmol，可得自商业供应商例如Alfa Aesar)在AcOH(100mL)中的溶液中。将混合物再搅拌1小时，然后用水稀释并用乙醚萃取。将有机层用水和饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤，然后干燥并真空蒸发，得到(+/-)-7-氯双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮(20g，140mmol，纯度=70％)，为淡黄色液体。
中间体121：(+/-)-双环[3.1.0]己-2-烯-6-甲酸，非对映异构体的混合物
向KOH(2.16g，38.5mmol)在1,4-二噁烷(24mL)和水(10mL)中的搅拌混合物中加入(+/-)-7-氯双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮(对于制备，参见中间体120，1.307g，5.50mmol)。然后将含有氯-SM的烧瓶用另外的1,4-二噁烷(300μL)洗涤到反应容器中。将反应搅拌30分钟。反应用2M HCl(水溶液)酸化至pH〜2。用DCM(3×40mL)萃取有机物，并将合并的有机物静置过夜。16小时后，将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到棕色油状物。将其进一步真空干燥，得到所需产物，为褐色蜡状固体-(+/-)-双环[3.1.0]己-2-烯-6-甲酸(581mg，4.68mmol，85％收率)，其为〜40％-内型/〜60％-外型(需要的)的混合物。
LCMS(2分钟甲酸法)：(外型)Rt=0.65分钟，无m/z；(内型)Rt=0.54分钟，无m/z。
中间体122：(+/-)-(顺式)-双环[3.1.0]己-2-烯-6-基氨基甲酸苄酯
在室温下将DPPA(26.0mL，121mmol)添加到(+/-)-双环[3.1.0]己-2-烯-6-甲酸(非对映异构体的混合物)(对于制备，参见中间体121，10g，81mmol)和Et3N(22.46mL，161mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中，将混合物搅拌30分钟，然后加入苯甲醇(16.75mL，161mmol)，并将混合物回流加热3小时。将溶液用EtOAc稀释，并用水和饱和碳酸氢钠溶液(水溶液)洗涤，然后干燥并真空蒸发，得到棕色油状物。使用硅胶柱色谱法纯化该油状物，用0-50％EtOAc：环己烷的梯度洗脱，得到(+/-)-((顺式)-双环[3.1.0]己-2-烯-6-基)氨基甲酸苄酯(3.7g，16.14mmol，20.03％收率)，为无色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.08分钟，[MH]+=230.3。
中间体123：(+/-)-((顺式)-2-羟基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯
在0℃下将硼烷-二甲硫醚络合物(2.299mL，24.21mmol)添加到(+/-)-((顺式)-双环[3.1.0]己-2-烯-6-基)氨基甲酸苄酯(对于制备，参见中间体122，3.7g，16.14mmol)在THF(10mL)中的溶液中，将混合物搅拌2小时，然后经30分钟温热至室温。加入水(2mL)，然后加入 2M NaOH水溶液(16.14mL，32.3mmol)。将混合物在冰浴中冷却，然后加入H2O2(30％，3.30mL，32.3mmol)，并将混合物再搅拌1小时。将混合物用EtOAc和水稀释，并将混合物剧烈搅拌30分钟，然后分离有机层，并将水层用EtOAc萃取。合并的有机物用5％硫代硫酸钠溶液(水溶液)洗涤，然后干燥并真空蒸发，得到胶状物。将该胶状物用乙醚研磨，并通过过滤收集得到的无色固体。真空蒸发滤液，得到无色胶状物，将其通过硅胶柱色谱法纯化，用0-50％EtOAc：环己烷的梯度洗脱。随后的流动级分得到无色胶状物(0.53g)，其在静置时部分固化。将该物质溶于EtOAc，静置过夜，得到无色固体，将其通过过滤收集。真空蒸发滤液，得到无色胶状物。使用硅胶柱色谱法纯化该胶状物，用0-50％EtOAc：环己烷的梯度洗脱，得到(+/-)-((顺式)-2-羟基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯(180mg，0.728mmol，收率5％)，为无色胶状物。
中间体124：(+/-)-(顺式)-6-氨基双环[3.1.0]己-2-醇
将(+/-)-((顺式)-2-羟基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯(对于制备，参见中间体123，180mg，0.728mmol)溶于EtOH(10mL)中并加入10％Pd/C(35mg，0.329mmol)。将反应混合物在大气压下氢化6.5小时。滤出催化剂，并将反应混合物浓缩，得到(+/-)-(顺式)-6-氨基双环[3.1.0]己-2-醇(82mg，0.728mmol，纯度=80％)，为浅黄色油状物，其直接以粗品用于下一步。
中间体125：(+/-)-(反式)-3-甲氧基环戊胺盐酸盐
将(+/-)-((反式)-3-甲氧基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(对于制备，参见中间体 126，280mg，1.040mmol)溶于4M盐酸的二噁烷溶液(2.5mL，10.00mmol)，搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，得到(+/-)-(反式)-3-甲氧基环戊-1-胺盐酸盐(167mg，0.991mmol，95％收率)。
中间体126：(+/-)-((反式)-3-甲氧基环戊基)氨基甲酸叔丁酯
在真空下将粉碎后的3Å分子筛置于250 mL圆底烧瓶中，并用加热枪加热。使烧瓶冷却，并加入(+/-)-((反式)-3-羟基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(370mg，1.838mmol，可从例如Fluorochem商购)/无水二氯甲烷(13mL)。添加N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺(1.357g，6.33mmol)，将反应冷却至0℃，并置于氮气氛下。加入四氟硼酸三甲基氧鎓(680mg，4.60mmol)，使反应温热至室温，并迅速搅拌20小时。用二氯甲烷(50mL)稀释反应，并用水(50mL)洗涤。用二氯甲烷(2×25mL)萃取水层，合并的有机物用0.5M HCl水溶液(15mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和盐水(30mL)洗涤。将有机相通过疏水玻璃料并在真空中蒸发，得到黄色油状物。将粗产物重新溶解在二氯甲烷中，并直接施加到25g SNAP二氧化硅柱的顶部，通过SP4快速柱色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱。合并相关级分并真空浓缩，得到(+/-)-((反式)-3-甲氧基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，1.040mmol，57％收率)。
中间体127：1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙酮
将3-羟基苯乙酮(5.0g，36.7mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)、碳酸亚乙酯(4.85g，55.1mmol)和碳酸钾(5.08g，36.7mmol)在DMF(50mL)中混合并在氮气下在120℃加热过夜，然后用水(200mL)稀释混合物并用EtOAc(2×100mL)萃取。用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤合并的有机物，干燥并真空蒸发，得到浅黄色油状物。将其溶解在DCM中，加载到100g SNAPUltra柱上，并用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。真空蒸发含有产物的级分，得到1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙-1-酮(5.5g，30.5mmol，83％收率)，将其直接用于下一步。
LCMS(2分钟高pH)：Rt=0.67分钟，[M-H]-=179.1。
中间体128：1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙酮
将TBDMS-Cl(4.97g，33.0mmol)添加到1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙-1-酮(对于制备，参见中间体 127，5.4g，30.0mmol)和咪唑(2.45g，36.0mmol)在DCM(50mL)中的混合物中，将混合物搅拌2小时，然后静置整个周末。用水(2×100mL)洗涤得到的悬浮液，干燥有机层并真空蒸发，得到无色油状物。将其加载到100g SNAP超二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-30％EtOAc/环己烷洗脱。真空蒸发含有产物的级分，得到1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙-1-酮(6.6g，22.41mmol，75％收率)，为无色液体，其直接用于下一步。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.46分钟，[MH]+=295.3。
中间体129：(+/-)-1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙醇
在0℃下将硼氢化钠(1.27g，33.6mmol)添加到1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙-1-酮(对于制备，参见中间体 128，6.6g，22.41mmol)在乙醇(50mL)中的溶液中，将混合物搅拌2小时，然后通过非常小心地加入氯化铵溶液(50mL，最初缓慢地逐滴 - 剧烈冒泡！)淬灭。将所得混合物用盐水(50mL)稀释，并用EtOAc(2×100mL)萃取，将合并的有机物干燥并真空蒸发，得到1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙-1-醇(5.61 g，18.92 mmol，84％收率)，为无色油状物，其直接用于下一步。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=1.41分钟，[MH]+=296.3。
中间体130：(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙 基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
在0℃下，经5分钟将DIAD(1.38mL，7.10mmol)/DCM(10mL)滴加到3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(对于制备，参见中间体 1，1g，5.46mmol)、1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙-1-醇(对于制备，参见中间体129，1.942g，6.55mmol)和三苯基膦(1.862g，7.10mmol)在DCM(20mL)中的溶液中，将混合物搅拌过夜，使其温热至室温。用水(20mL)洗涤溶液，干燥并真空蒸发，得到浅黄色胶状物。将其溶解在DCM中，并加载到100g SNAP超二氧化硅柱上，然后用0-60％EtOAc/环己烷洗脱，并将含产物的级分真空蒸发，得到(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(2.61g，5.65mmol，104％收率)，为浅黄色胶状物，其是非对映异构体的约4：1混合物(替代的吡唑烷基化产物为次要组分)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.43分钟，[MH]+=462.3。
中间体131：(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙 基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸
将(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(对于制备，参见中间体130，2.6g，5.63mmol)溶解于甲醇(30mL)中，并加入NaOH(10mL，20.00mmol，2M水溶液)，然后将混合物在室温搅拌2小时。然后将溶剂真空蒸发。将所得固体溶于水(30mL)中，并用乙醚(2×30mL)洗涤，然后将水层用2M HCl(水溶液)(11mL)酸化，用EtOAc(2 x 30 mL)萃取所得的混合物。合并的有机物用水洗涤，干燥并真空蒸发，得到(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(2.22g，4.96mmol，88％收率)，为无色胶状物，为约4：1比率的位置异构体(来自前一步骤的替代的吡唑烷基化产物为次要组分)，这在现阶段似乎是不可分离的。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.99分钟，[MH]+=448.4。
中间体132：1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)- N 3 -甲基-N 5 -((1S,2S)-2-甲基环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
将(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(对于制备，参见中间体131，2g，4.47mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(0.625g，5.81mmol)、HATU(2.209g，5.81mmol)和Et3N(1.868mL，13.40mmol)溶解于DCM(20mL)中，将混合物搅拌2小时，然后使其在室温静置整个周末。将所得混合物用水(50mL)搅拌1小时，然后分离有机层，干燥并真空蒸发，得到浅黄色胶状物。将其溶解在DCM中，加载到100g SNAP超二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。将含有产物的级分真空蒸发，得到1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-N 3-甲基-N 5 -((1S,2S)-2-甲基环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(1.10g，2.197mmol，49％收率，非对映异构体混合物)，为无色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=1.44分钟，[MH]+=501.4。
实施例：
实施例1：N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙 基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(98mg，0.359mmol)在DMF(0.8mL)中的溶液中加入HATU(205mg，0.538mmol)，接着加入(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(107mg，0.789mmol)和DIPEA(0.313mL，1.793mmol)。将得到的反应混合物在室温下在空气中搅拌18小时。通过MDAP(甲酸法)纯化反应混合物。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。分离有机层，水层进一步用DCM(2×20mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(25 mg，0.063 mmol，18％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.85分钟，[MH]+=355.3。
第一次MDAP注射后剩余的粗产物也通过MDAP(甲酸法)纯化，将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。分离有机层，水层进一步用DCM(2×20mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到第二批N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(30mg，0.076mmol，21％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.85分钟，[MH]+=355.3。
实施例2：N 5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑- 3,5-二甲酰胺
向(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(451mg，1.650mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(941mg，2.475mmol)，接着加入(1r,4r)-4-氨基环己醇(反 式)(380mg，3.30mmol)和DIPEA(1.441mL，8.25mmol)。将得到的反应混合物在室温下在空气中搅拌40分钟。将反应混合物真空浓缩以除去DMF，并在乙酸乙酯和饱和LiCl水溶液之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(疏水性玻璃料)，浓缩得到〜1.5g粗产物，为橙色油状物(含有DMF)。将其通过在SiO2上的色谱法(Biotage SNAP 25g柱，用20-100％乙酸乙酯/环己烷、然后100％乙酸乙酯至12％乙醇/乙酸乙酯洗脱)纯化，得到447mg的无色油状物。将其通过MDAP(甲酸法)进一步纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。分离有机层，水层进一步用DCM(2×20mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到N 5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(163 mg，0.396 mmol，24％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.82分钟，[MH]+=371.3。
实施例3：N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1- 苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将粗制(3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯(37mg，0.173mmol)溶解在DCM(10mL)中，加入TFA(1mL)，然后将混合物在室温搅拌2小时。真空蒸发溶剂，得到浅黄色胶状物。将粗残余物溶于DCM(5mL)中，然后加入HATU(86mg，0.226mmol)、Et3N(0.048mL，0.347mmol)和(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(47.4mg，0.173mmol)，并将混合物在室温搅拌2小时。真空蒸发溶剂，将残余物通过MDAP(高pH法)纯化，得到N 5-((1R,3R,5S,6s)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(3mg，8.14μmol，5％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.79分钟，[MH]+=369.4。
以与实施例3类似的方式制备以下实施例。
实施例44-49通过阵列用以下方法制备：
向20mL的小瓶中称量(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(0.027g，0.1mmol)×14=383mg和HATU(0.042g，0.110mmol)×14=586mg。向该小瓶中添加DMF(0.5 mL)×14=7 mL和DIPEA(0.050 mL，0.286 mmol)×14=700 µL。将混合物搅拌5分钟，然后等分到小瓶(550μL)中，每个小瓶包含适当的预先称重的胺(0.120mmol)。(注意：将另外的DIPEA(0.050mL，0.286mmol)加入到为盐酸盐的胺中)。使混合物反应66小时。加入T3P(100μL，50wt％的EtOAc溶液)和DIPEA(0.050mL，0.286mmol)，并在5分钟后加入另外的胺(0.120mmol)。使混合物再反应24小时。通过MDAP(高pH法)纯化反应，并浓缩以得到：
使用以下市售胺，将实施例50-64制备为酰胺阵列的一部分，
方法：将(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(0.027g，0.100mmol)*18=492 mg和HATU(0.038g，0.100mmol)*18=684mg的储备溶液溶于DMF(0.5mL)*18=9.0mL中。向该储备溶液中添加DIPEA(0.052mL，0.300mmol)x 18。将小瓶加盖并在室温下摇动以使其完全溶解。2分钟后，将等分试样(0.5mL)的上述储备溶液添加到1mL塑料基质小瓶中的一组预先称重的胺* 18(0.120 mmol，数量见表)中。将每个小瓶加盖并摇动以帮助溶解，并在室温下放置过夜18小时。将T3P(50重量％的EtOAc溶液)120μL和DIPEA(0.052mL，0.300mmol)加入到各反应混合物中，并在室温下放置＞ 48小时。通过MDAP(高pH法)纯化反应，得到最终化合物(数量见表)。
使用3M HCl/CPME(0.5mL)在DCM(0.5mL)中进行反应中间体的Boc脱保护，对应于((1r,4r)-4-(2-氨基乙基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的偶联。使用玻璃微波小瓶作为反应容器。将反应在35℃下搅拌过夜，持续22小时。将另外的DCM(0.5mL)和3M HCl/CPME(0.5mL)添加到反应混合物中，将其在35℃搅拌过夜，持续18小时。然后在氮气流下除去溶剂至干，得到游离胺的HCl盐。将另外的DCM(0.5mL)和3M HCl/CPME(0.5mL)加入到固体物质中。溶液在室温下静置整个周末。除去溶剂至干，得到游离胺的HCl盐(实施例60)，如下表所示。
实施例65：(S)-N 3,N 5-二甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向N 3,N 5-二甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(39mg，0.214mmol)在THF(1mL)中的悬浮液中添加(R)-1-苯基乙醇(40mg，0.327mmol)和三苯基膦(90mg，0.343mmol)，将反应混合物在室温搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃，并添加DIAD(0.067mL，0.343mmol)。然后将小瓶在微波中于140℃加热15分钟。然后将反应混合物在140℃下再加热20分钟。加入另外部分的(R)-1-苯基乙醇(40mg，0.327mmol)、三苯基膦(90mg，0.343mmol)和DIAD(0.067mL，0.343mmol)，并将反应混合物在140℃加热15分钟。真空除去溶剂，得到〜770mg的粗黄色油状物。将其通过在SiO2上的色谱法(Biotage SNAP 25g柱，用0-100％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到50mg无色油状物。将其通过MDAP(高pH法)进一步纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩，得到(S)-N 3,N 5-二甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(17mg，0.053mmol，25％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.82分钟，[MH]+=287.2。
实施例66：1-苄基-N 5-((1r,4r)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(150mg，0.509mmol)和DIPEA(0.267mL，1.527mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(290mg，0.764mmol)，接着一次性加入(1r,4r)-4-氨基环己醇(70.4mg，0.611mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应物料倒入冰水中，然后用EtOAc(3×20mL)萃取。用水(2×15mL)、盐水溶液洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液，得到粗产物。将粗产物用50％DCM+乙醚(3x 1 mL)研磨，得到固体产物，将其过滤并在真空下干燥15分钟，得到1-苄基-N 5-((1r,4r)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(160mg，0.447mmol，88％收率)，为灰白色固体。
LCMS(4.5分钟方法A)：Rt=1.61分钟，[MH]+=357.1。
实施例67：1-苄基-N 5-环丁基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(200mg，0.733mmol)和DIPEA(0.384mL，2.199mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(418mg，1.099mmol)，接着一次性加入环丁胺(104mg，1.466mmol，可从例如Sigma Aldrich商购)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×20mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到粗产物。将粗产物加入硅胶60-120柱中，并用65％EtOAc/正己烷洗脱。将收集的纯级分真空浓缩，得到1-苄基-N 5-环丁基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(84mg，0.255mmol，35％收率)，为白色固体。
LCMS(10分钟方法D)：Rt=4.26分钟，[MH]+=313.2。
实施例68：(S*)-N 5-环丙基-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
中间体11通过手性HPLC纯化。制备型NP-HPLC条件如下：
柱/尺寸：Chiralpak IC(250 x 30 mm)，5 µm
流动相：正己烷：乙醇(70:30)
流速38 mL/min；
温度：环境温度
波长：249 nm
运行时间：18分钟
溶解性：THF+正己烷+乙醇
加载能力/进样：33.0 mg/进样
进样总数：10。将对应于峰1的纯级分真空浓缩，得到(S*)-N 5-环丙基-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(36 mg，0.105 mmol，收率15％)，为白色固体。
LCMS(4.5分钟方法B)：Rt=1.89分钟，[MH]+=313.2。
实施例69：N 5-环丙基-N 3-甲基-1-(3-甲基苄基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(300mg，1.366mmol)在DMF(2 mL)中的溶液中加入K2CO3(566mg，4.10mmol)，接着一次性加入1-(溴甲基)-3-甲基苯(0.211mL，1.640mmol，可商购自例如Sigma Aldrich)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×25mL)萃取。用水(3×15mL)、盐水溶液洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液，得到粗产物，其为2种位置异构体的混合物。这些通过SFC手性HPLC纯化。制备型SFC条件如下：
柱/尺寸：LuxCellulose-2 (250 x 30 mm)，5μm
％CO2：60.0％
助溶剂％：40.0％(MeOH)
总流量：90.0 g/min
背压：100.0巴；
UV：211 nm
延迟时间(stack time)：3.8分钟
加载/进样量：16.0 mg
溶解性：甲醇
进样总数：20
仪器细节：品牌/型号：Thar SFC-200-005
将对应于峰1的纯级分真空浓缩，得到N 5-环丙基-N 3-甲基-1-(3-甲基苄基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(76 mg，0.238 mmol，63％收率)，为白色固体。
LCMS(4.5分钟方法B)：Rt=1.90分钟，[MH]+=313.2。
实施例70：1-((1H-吲哚-5-基)甲基)-N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的N 5-环丙基-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(420mg，0.666mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中一次性加入NaOH(80mg，1.999mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌16小时。将反应物料冷却至室温，然后用水(20mL)稀释，然后将水层用EtOAc(3×15mL)萃取。用水(3×10mL)、盐水溶液洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到为位置异构体混合物的粗产物。其通过SFC、手性HPLC纯化。制备型SFC条件如下：
柱/尺寸：Chiralpak IC (250 x 30 mm)，5μm
％CO2：50.0％
助溶剂％：50.0％(MeOH)
总流量：60.0 g/min
背压：100.0巴；
UV：215 nm
延迟时间：6.5分钟
加载/进样：8.0 mg
溶解性：MeOH
进样总数：40
将对应于峰1的纯级分真空浓缩，得到1-((1H-吲哚-5-基)甲基)-N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(95mg，0.272mmol，85％收率)，为灰白色固体。
LCMS(4.5分钟方法B)：Rt=1.68分钟，[MH]+=338.2。
实施例71：1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的N 5-环丙基-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(400mg，0.745mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中加入NaOH(29.8mg，0.745mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌16小时。将反应用水稀释，然后用DCM(3×15mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并将滤液在真空下浓缩，得到位置异构体的粗混合物(410mg)，将其通过SFC纯化。制备型SFC的条件如下：
柱/尺寸：Chiralpak AD-H(250 x 21 mm)，5μm
％CO2：60.0％
助溶剂％：40.0％(MeOH)
总流量：60.0 g/min
背压：100.0巴；
UV；215 nm
延迟时间：3.6分钟
加载/进样：2.6 mg
溶解性：甲醇+DCM
进样总数：34
真空浓缩对应于峰1的纯级分，得到N 5-环丙基-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(400 mg，0.745 mmol)，为灰白色固体。
LCMS(4.5分钟方法B)：Rt=1.65分钟，[MH]+=338.2。
实施例72：N 5-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1- 苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(720mg，5.06mmol)溶于甲苯(10mL)和叔丁醇(10mL)中，然后加入Et3N(1.412 mL，10.13 mmol)和叠氮磷酸二苯酯(1.637mL，7.60mmol)，并将混合物在80℃加热过夜。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，并用水(20mL)洗涤，将溶剂干燥并蒸发，得到浅黄色胶状物。将其溶解在DCM(10mL)中，并加载到50g二氧化硅柱上，然后用0-100％EtOAc/环己烷洗脱，将茚三酮活性级分真空蒸发，得到(3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯的非对映异构体的混合物，其以粗品用于以下步骤。将(3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯(55mg，0.258mmol)(粗品)溶解在DCM(10mL)中并加入TFA(1mL)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。真空蒸发溶剂，并将残余物溶于新鲜的DCM(10mL)中，加入Et3N(0.072mL，0.516mmol)、HATU(147mg，0.387mmol)和(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(70.5mg，0.258mmol)，然后将混合物在室温搅拌2小时。用水(10mL)洗涤反应混合物，干燥并真空蒸发，得到浅黄色胶状物。将其通过MDAP(高pH法)纯化，得到N 5-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(16mg，0.043mmol，17％收率)，为无色固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.84分钟，[MH]+=369.3。
实施例73：N 5-(2-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-N 3-甲基-1-((S)-1- 苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(102mg，0.192mmol)在乙醇(3mL)中的悬浮液中加入水合肼(90μL，1.836mmol)。将反应在40℃搅拌4个小时。过滤粗产物，并通过MDAP(高pH法)纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩，得到N 5-(2-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)乙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(61 mg，0.137mmol，71％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.78分钟，[MH]+=402.2。
实施例74：N 5-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-N 3-甲基-1-((S)-1- 苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向N 5-(2-((2r,5S)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(81mg，0.148mmol)在乙醇(3mL)中的悬浮液中加入水合肼(90μL，1.836mmol)。将反应在40℃下搅拌19个小时。过滤粗产物，并通过MDAP(高pH法)纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩，得到N 5-(3-((2r,5S)-5-氨基-1,3-二噁烷-2-基)丙基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(42 mg，0.091mmol，61％收率)。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.80分钟，[MH]+=416.3。
实施例75：N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-((R)-2-羟基-1-苯 基乙基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-((R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙基)-N 3 -甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(214mg，0.442mmol)溶于4M盐酸/二噁烷(500µL，2.000mmol)，搅拌1.5 小时。将样品溶解在1：1 MeOH：DMSO(2 x 1 mL)中，并通过MDAP(高pH法)纯化。合并相关级分并真空浓缩，得到N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-((R)-2-羟基-1-苯基乙基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(68.4mg，0.166mmol，38％收率)，为第二种洗脱的位置异构体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.71分钟，[MH]+=371.2。
实施例76：N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯 基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向(1R,5S,6s)-6-(3-(甲基氨基甲酰基)-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(95mg，0.209mmol)在DCM(2mL)中的部分悬浮液中加入TFA(0.5mL，6.49mmol)，并将反应混合物在室温搅拌6小时。将反应混合物浓缩并加载到2g SCX柱上(用MeOH预先调节)。将其用MeOH(30mL)、然后2M NH3/MeOH(30mL)洗脱。合并含有产物的氨级分并浓缩，得到标题化合物(57mg，0.145mmol，收率69％)，为浅黄色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.51分钟，[MH]+=354.4。
实施例77：N 5-((1R,5S,6S)-3-乙酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1- ((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(49mg，0.139mmol)在乙酸酐(300µL，3.18mmol)中在室温下搅拌2 小时。将反应用饱和NaHCO3(水溶液)稀释并用EtOAc萃取，将有机相用水洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并浓缩，得到标题化合物(46mg，0.105mmol，76％收率)，为无色油状物。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.77分钟，[MH]+=396.4。
实施例78：1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 5-((1R,5S,6r))-3-氧杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)甲基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(99.7mg，0.187mmol)溶于THF(4mL)和甲醇(2mL)中。加入碳酸铯(304mg，0.934mmol)，并将反应加热至73℃并搅拌过夜。将反应在真空中浓缩。将水(10mL)加入到残余物中，然后将其用2N HCl酸化，然后用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到标题化合物(63.8mg，0.160mmol，85％收率)，为紫色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.74分钟，[MH]+=380.3。
实施例79：1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6- 基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将(1R,5S,6s)-6-(1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(86.5mg，0.181mmol)溶于DCM(4mL)中。加入TFA(1mL，12.98mmol)，并将混合物在室温搅拌2小时。将反应真空浓缩。然后将样品加载到甲醇中，并使用1 g SCX柱通过固相萃取进行纯化，用甲醇洗涤，然后用2M氨/甲醇洗脱。合并适当的级分，并真空蒸发，得到粗产物，为奶油状固体。将粗产物溶于1：2 MeOH：DCM(30mL)中，并加入自由流动的二氧化硅(1g)。真空除去溶剂，然后将二氧化硅于最少的DCM中装载到10 g ULTRA SNAP柱上，并用0％(2M NH3/甲醇)/DCM洗脱2CV，然后用0-20％(2M NH3/甲醇)/DCM洗脱。合并适当的级分并真空浓缩，得到所需产物 1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 5-((1R,5S,6s)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(29.4mg，0.070mmol，39％收率)，为绿色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.46分钟，[MH]+=379.4。
实施例80：1-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N 5-((1r,4r)-4-羟基环己基)-N 3-甲基- 1H-吡唑-3，5-二甲酰胺
向N 5-((1r,4r)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1-(1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(330 mg，0.585 mmol)在甲醇(2 mL)和THF(4 mL)中的溶液中加入Cs2CO3(1546mg，4.74mmol)，并将反应混合物在70℃搅拌2.5小时。将反应混合物真空浓缩，并在乙酸乙酯和水之间分配，用盐水洗涤。分离各层，并将水层用乙酸乙酯(2 x 15 mL)进一步萃取。合并有机层，用疏水玻璃料干燥并真空浓缩，得到153mg粗残余物。将粗产物溶解在1：1 DMSO：甲醇(2mL)中，并通过MDAP(甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。分离各层，并用另外两份DCM(2×15mL)进一步萃取水层。合并有机层，干燥(疏水玻璃料)并真空浓缩，得到标题化合物(79mg，0.193mmol，33％收率)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.76分钟，[M-H]-=408。
实施例81：1-((S*)-1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N 5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N 3-甲 基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(甲基中心的单一对映异构体，构型未知)
使用以下条件，通过手性柱色谱法分离69mg的1-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N 5-((1r,4r)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(制备参见实施例80)：
将粗制样品在加热下溶于EtOH(4mL)。
进样：将2 mL溶液进样到柱上
溶剂：20％乙醇(+0.2％异丙胺)/庚烷，流速=30mL/min。波长215 nm
柱：30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)
进样总数：2
合并对应于第一洗脱峰的级分并蒸发，得到所需产物(30mg)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.74分钟，[M-H]-=408。
实施例82：1-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-N 3-甲基-N 5-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向N 3-甲基-N 5-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-1-(1-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(300mg，0.576mmol)在甲醇(2mL)和THF(4mL)中的溶液中加入Cs2CO3(1502mg，4.61mmol)，将反应混合物(悬浮液)在70℃下搅拌1.5小时。将反应混合物真空浓缩，并在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层分离，并将水层用乙酸乙酯(2×20 mL)进一步萃取。合并的有机层用疏水玻璃料干燥并真空浓缩，得到152mg粗残余物。将其通过硅胶色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯/环己烷洗脱，然后用100％乙酸乙酯至25％EtOH/乙酸乙酯梯度洗脱。将含有所需产物的级分真空浓缩，得到所需产物，为浅黄色固体(74mg，28％收率)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.65分钟，[MH]+=367.1。
实施例83：1-((S*)-1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-N 3-甲基-N 5-((1S, 2S)-2-甲基环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
实施例82(62mg)通过手性HPLC纯化。在加热下将外消旋物溶解于EtOH(4mL)中。进样：将2 mL溶液注入到柱上(20％EtOH(+0.2％异丙胺)/庚烷(+0.2％异丙胺)，流速=30 mL/min，检测波长=215 nm，4. Ref 550，100，柱30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH13231)。进样总数=2。合并10-11分钟的级分并标记为峰1。将14-16分钟的级分合并，标记为峰2。将合并的纯级分真空浓缩，然后转移至称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以提供实施例83(23mg)
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.67分钟，[MH]+=367.2。
实施例84：1-((1H-吲哚-5-基)甲基)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6- 基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)甲基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(135mg，0.253mmol)悬浮在THF(2mL)和甲醇(1mL)中。加入碳酸铯(412mg，1.265mmol)，并将反应在70℃下搅拌1小时。将反应真空浓缩。将水(20mL)加入到残余物中，并将其用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到所需产物(67.4mg，0.169mmol，67％收率)，为浅棕色固体。
LCMS(2分钟高pH法)：Rt=0.76分钟，[MH]+=380.5。
实施例85：1-(1-(1H-吲哚-5-基)乙基)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-(1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-基)乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(117mg，0.214mmol)溶于THF(2mL)和甲醇(1mL)中。加入碳酸铯(348mg，1.068mmol)，并将反应在70℃下搅拌2小时。将水(15mL)加入到残余物中，并将其用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到无色固体。粗产物通过MDAP(甲酸法)纯化。MDAP未收集到产物，因此将废物在真空中浓缩，残留物通过MDAP(甲酸法)纯化。MDAP未收集到产物，因此将废物在真空中浓缩，残留物通过MDAP(甲酸法)纯化。在氮气流下干燥适当的级分，得到1-(1-(1H-吲哚-5-基)乙基)- N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(12.2mg，0.028mmol，13％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.82分钟，[M-H]-=392。
实施例86：1-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己- 6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向N 5-((1R,5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-(1-(1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-4-基)乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(278mg，0.508mmol)在甲醇(2mL)和THF(4mL)中的溶液中加入Cs2CO3(1323mg，4.06mmol)，将反应混合物在70℃下搅拌2.5小时。将反应混合物真空浓缩，并在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层分离，并将水层用乙酸乙酯(2×20 mL)进一步萃取。合并的有机层用疏水玻璃料干燥并真空浓缩，得到152mg粗残余物，将其通过MDAP(甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。分离有机层，水层进一步用DCM(2×20mL)萃取。干燥合并的有机层(疏水性玻璃料)，真空浓缩，得到所需产物(44mg，0.101mmol，20％收率)，为浅棕色固体。
LCMS(高pH法)：Rt=0.80分钟，[M-H]-=392。
实施例87：1-((S*)-1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环 [3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
使用下列条件，通过手性柱色谱法分离36mg的1-(1-(1H-吲哚-4-基)乙基)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(制备参见实施例86)：
将粗制样品在加热下溶于EtOH(4mL)。
进样：将2 mL溶液进样到柱上。
溶剂：20％EtOH/庚烷，流速=30mL/min。波长215 nm
柱：30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)
进样总数：2
合并对应于第一洗脱峰的级分并蒸发，得到所需产物(13mg)。
LCMS(甲酸法)：Rt=0.80分钟，[M-H]-=392。
实施例88：1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0] 己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将N 5-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)-1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(257mg，0.497mmol)溶于4M盐酸/二噁烷(5mL，20.00mmol)中，并在室温下搅拌30分钟。将反应真空浓缩，得到褐色胶状物。粗产物通过MDAP(高pH法)纯化。真空浓缩适当的级分，得到1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(35mg，0.083mmol，17％收率)，为黄色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.89分钟，[MH]+=403.6。
以类似于示例88的方式制备以下示例：
实施例90：1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0] 己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
N 5-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)-1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(257mg，0.497mmol)溶于4M盐酸/二噁烷(5mL，20.00mmol)中，并在室温下搅拌30分钟。将反应真空浓缩，得到褐色胶状物。粗产物通过MDAP(高pH法)纯化。真空浓缩所需的级分，得到1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(52.5mg，0.124mmol，24.91％收率)，为奶油状固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.92分钟，[MH]+=403.6。
以与实施例90类似的方式制备以下实施例：
实施例92：1-苄基-N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
向在室温在氮气下搅拌的1-苄基-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(1g，3.66mmol)和DIPEA(3.84mL，21.99mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入草酰氯(0.642mL，7.33mmol)，然后一次性加入环丙胺(0.418g，7.33mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应倒入冰水中，然后用EtOAc(3×20mL)萃取，合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗产物。将粗产物加入硅胶60-120柱中，并用65％EtOAc/正己烷洗脱，将收集的纯级分真空浓缩，得到1-苄基-N 5-环丙基-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(901mg，2.75mmol，收率75％)，为灰白色固体。
LCMS(5.5分钟方法E)：Rt=2.47分钟，[MH]+=299.3。
实施例93-138:
以与上述实施例类似的方式制备实施例93-138。
实施例139：N 5-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡 唑-3,5-二甲酰胺
将(S)-3-(甲基氨基甲酰基)-1-(1-苯基乙基)-1H-吡唑-5-甲酸(制备参见中间体 5，112mg，0.410mmol)溶于DMF(1mL)，然后添加HATU(234mg，0.615mmol)。然后加入(1r,4r)-4-甲氧基环己-1-胺盐酸盐(82mg，0.445mmol)，然后加入DIPEA(0.358mL，2.049mmol)，并将反应在室温下搅拌2小时。样品直接通过MDAP(高pH法)纯化。合并相关级分并真空浓缩，得到N 5-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(135mg，0.316mmol，77％收率)。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.96分钟，[MH]+=385.2。
实施例140：N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(吲哚啉-4-基甲基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将1-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(对于制备，参见实施例78，10mg，0.026mmol)溶于冰乙酸(1mL)中。加入氰基硼氢化钠(3.31mg，0.053mmol)，并将反应在室温下搅拌2小时。用水稀释反应，并用10％MeOH/DCM萃取。将水层真空浓缩，并用10％MeOH/DCM萃取。使合并的有机物通过疏水玻璃料，并真空浓缩，得到粗残余物，将其通过MDAP(高pH法)纯化。真空浓缩适当的级分，得到N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(吲哚啉-4-基甲基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(3.8mg，8.47μmol，32％收率)，为白色固体。
LCMS(2分钟HpH)：Rt=0.69分钟，[MH]+=382.2。
实施例141：1-(1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N 3 -甲基-N 5 -((1S,2S)-2-甲基 环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
将1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-N 3 -甲基-N 5 -((1S,2S)-2-甲基环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(对于制备，参见中间体 132，1.1g，2.197mmol，非对映异构体混合物)溶于DCM(20 mL)中，并加入HCl(5mL，5.00mmol，1M在乙醚中)，然后将混合物在室温搅拌2小时。真空蒸发溶剂，将残余物溶于DCM(10mL)中，并加载到25g SNAP Ultra二氧化硅柱上，将其用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱，将含有产物的级分真空蒸发，得到1-(1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N 3 -甲基-N 5 -((1S,2S)-2-甲基环丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(0.71g，1.837mmol，收率84％，非对映异构体的混合物)，为无色固体。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.81分钟，[M+Na]+=409.3。
实施例142：(+/-)-N 5 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(1-(3-(2- 羟基乙氧基)苯基)乙基)-N 3 -甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
将(+/-)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-3-(甲基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酸(对于制备，参见中间体 131，0.27g，0.603mmol)、(1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(0.106g，0.784mmol)、HATU(0.298g，0.784mmol)和Et3N(0.252mL，1.810mmol)溶解于DCM(20mL)中，并将混合物搅拌2小时，然后使其在室温静置整个周末。将所得混合物用水(50mL)搅拌1小时，然后分离有机层，干燥并真空蒸发，得到浅黄色胶状物。将其溶解在DCM中，加载到100g SNAP超二氧化硅柱上，并用0-100％EtOAc/环己烷洗脱。真空蒸发含有产物的级分，得到(+/-)-N 5 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(1-(3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)乙基)-N 3 -甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(0.14g，0.265mmol，44％收率)，为无色固体。将该固体溶解在DCM(5mL)中，加入HCl(2mL，2.0mmol，1M在乙醚中)，然后将混合物在室温搅拌2小时。真空蒸发溶剂，将粗产物溶解在DCM中，加载到10g二氧化硅柱上，并通过快速色谱法纯化，用0-100％(25％EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱。真空蒸发含有产物的级分，得到(+/-)-N 5 -((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N 3 -甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(81 mg，0.195 mmol，32％收率)，为无色泡沫。
LCMS(2分钟甲酸法)：Rt=0.71分钟，[MH]+=415.4。
以与实施例1类似的方式制备下列实施例。
以与实施例81类似的方式制备下列实施例。
以与实施例88物类似的方式制备下列实施例。
以与实施例74类似的方式制备下列实施例：
以与实施例75类似的方式制备下列实施例。
以与实施例86类似的方式制备下列实施例。
以与上述实施例类似的方式制备实施例220-261。
生物学数据
式(I)化合物可以在以下一种或多种测定中测试：
时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)测定
使用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)竞争测定评估溴结构域结合。为了实现这种方法，用Alexa Fluor® 647(这是一种远红外荧光染料)标记一种已知高亲和力的泛BET相互作用小分子(参考化合物X)。参考化合物X充当溴结构域结合的报告物，并且是TR-FRET对的受体荧光团组分。与抗-6*His抗体缀合的铕螯合物被用作TR-FRET对中的供体荧光团。抗-6*His抗体选择性结合至添加到本研究中使用的每个BET串联溴结构域蛋白构建体的氨基末端的六组氨酸纯化表位。当供体和受体荧光团紧密接近(在20-80 Å之间)时，产生TR-FRET信号，这在本测定中通过参考化合物X与溴结构域蛋白的结合而实现。
参考化合物X：4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺基)戊基)氨基)-6-氧代己基)-2-((2E,4E)-5-(3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-2-基)戊-2,4-二烯-1-叉基)-3-甲基-5-磺基吲哚啉-1-基)丁烷-1-磺酸盐)
向N-(5-氨基戊基)-2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺(制备参见参考化合物J，WO2011/054848A1，1.7mg，3.53 µmol)于DMF (40μl)中的溶液中加入AlexaFluor647-ONSu (2.16 mg，1.966 µmol) 也在DMF (100μl)中的溶液。混合物用DIPEA (1 µl, 5.73 µmol)碱化，并在涡旋混合器上搅拌过夜。
将反应混合物蒸发至干。将固体溶于MeCN/水/AcOH(5/4/1，<1 ml) 中，过滤并施加到Phenomenex Jupiter C18制备柱上，用下列梯度(A = 0.1% 三氟乙酸/水，B= 0.1%TFA/90% MeCN/10%水)洗脱：流速 = 10 mL/min，AU = 20/10 (214nm)：
5-35%，t=0min：B = 5%；t=10min：B = 5%；t=100min：B = 35%；t=115min：B = 100%(Sep. grad：0.33%/min)。
主要组分在26-28%B的范围内洗脱，但似乎由两个峰组成。通过分析HPLC(Spherisorb ODS2, 经60 min 1至35%)分析应含有“两种”组分的中间级分(F1.26)：单组分在28%B洗脱。
合并级分F1.25/26&27并蒸发至干。用DMF转移，蒸发至干，用无水乙醚研磨，并将蓝色固体在<0.2毫巴下干燥过夜：1.54mg。
分析HPLC (Sphersisorb ODS2, 经60min 1至35%B)：MSM10520-1：[M+H]+ (obs)：661.8/-与M-29相符。对于M-29的计算质量1320.984，这相当于[(M+2H)/2]+。这是使用Alexa Fluor 647染料的标准发生事件，表示在质谱仪条件下理论上损失了两个亚甲基。
测定原理：为了产生TR-FRET信号，用λ337 nm的激光激发供体荧光团，其随后导致在λ618 nm处的发射。如果受体荧光团非常接近，则可能发生能量转移，这导致Alexa Fluor® 647在λ665 nm处的发射。在竞争性化合物存在下，参考化合物X可以从与溴结构域的结合中置换。如果发生置换，则受体荧光团不再接近供体荧光团，这阻止了荧光能量转移，以及随后在λ665处的Alexa Fluor® 647发射损失。
使用跨越溴结构域1(BD1)和溴结构域2(BD2)的蛋白截短物评估式(I)化合物与参考化合物X对与BET家族(BRD2、BRD3、BRD4和BRDT)结合的竞争。为了监测与BD1或BD2的差异结合，在乙酰赖氨酸结合口袋中产生关键酪氨酸至丙氨酸的单个残基突变。为了验证该方法，为每个BET家族成员产生双残基突变串联结构域蛋白。利用荧光偏振方法，测定每个单突变体和双突变体对参考化合物X的结合亲和力。与非突变的野生型串联BET蛋白相比，双突变串联蛋白对参考化合物X的亲和力大大降低(Kd降低> 1000倍)。单突变溴结构域串联蛋白对参考化合物X的亲和力与相应的非突变的BET蛋白是等效的。这些数据证明酪氨酸至丙氨酸的单突变使突变的溴结构域和参考化合物X之间的相互作用的Kd降低> 1000倍。在TR-FRET竞争测定中，参考化合物X以等价于对非突变的溴结构域的Kd的浓度使用，这确保不检测到突变的溴结构域的结合。
蛋白产生：重组人溴结构域[(BRD2 (1-473) (Y113A)和(Y386A), BRD3 (1-435)(Y73A)和(Y348A)，BRD4 (1-477) (Y97A)和(Y390A)，和BRDT (1-397) (Y66A)和(Y309A)]在大肠杆菌细胞中表达(对于BRD2/3/4，在pET15b载体中，以及对于BRDT，在pET28a载体中)，在N-末端具有6-His标签。将His-标记的溴结构域粒状沉淀重悬于50 mM HEPES(pH7.5)、300 mM NaCl、10 mM咪唑和1 μl/ml蛋白酶抑制剂混合物中，使用超声处理从大肠杆菌细胞中提取并使用镍琼脂糖凝胶高效柱纯化，洗涤蛋白，然后用缓冲液50mM HEPES(pH7.5)、150mM NaCl、500mM 咪唑以0-500 mM咪唑的线性梯度经20个柱体积洗脱。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成最后纯化。将纯化的蛋白在-80℃下储存在20 mMHEPES pH 7.5和100mM NaCl中。通过肽质量指纹图谱确认蛋白身份，并通过质谱法确认预测的分子量。
溴结构域 BRD2、3、4和T，BD1 + BD2突变体TR-FRET竞争测定的方案：
将所有测定组分溶解于由50mM HEPES pH7.4、50mM NaCl、5%甘油、1mM DTT和1mMCHAPS组成的测定缓冲液中。将参考化合物X在含有20nM单突变、串联溴结构域蛋白的测定缓冲液中稀释至等价于对该溴结构域的Kd的2倍的浓度。将含有溴结构域和参考化合物X的溶液加入到Greiner 384孔黑色低体积微量滴定板中的测试化合物或DMSO载体(在该测定中使用最多0.5％DMSO)的剂量响应稀释液中，随后在室温下孵育30分钟。向所有孔中加入等体积的3nM抗-6*His铕螯合物，然后在室温下再孵育30分钟。使用Perkin Elmer多模板读数器，通过在λ337 nm激发供体荧光团，随后在50 μsec的延迟后，分别在λ615nm和λ665nm处测量供体和受体荧光团的发射，来检测TR-FRET。为了控制这些测定，在每个微量滴定板上包括每个未抑制的(DMSO载体)和抑制的(WO2011/054846A1的实施例11的IC50浓度的10倍)TR-FRET测定的16个重复。
然后应用以下形式的四参数曲线拟合：
y = a + (( b – a)/( 1 + ( 10 ^ x/10 ^ c ) ^ d )
其中‘a’是最小值，‘b’是Hill斜率，‘c’是pIC50，以及‘d’是最大值。
所有化合物(实施例)均各自基本上如上所述在BRD4 BD1和BRD4 BD2 TR-FRET测定中进行了测试。本领域技术人员将认识到，用于功能活性的体外结合测定和基于细胞的测定易受到实验可变性的影响。因此，应理解，下面给出的pIC50值仅是示例性的。pIC50值以log10单位表示。
发现所有实施例(除了实施例131、242-247和249-261)在至少一种上述测定中具有≥5.0的pIC50。
发现实施例94、96、102、106、108-110、112、114、132、135、135、136、137、229、233、234、236-241和248在BRD4 BD2测定中具有≥ 5.0 且< 6.0的pIC50。
发现所有其他化合物在BRD4 BD2测定中具有≥ 6.0且< 8.0的pIC50。尤其是，发现实施例1在BRD4 BD2测定中具有7.2的 pIC50；发现实施例2在BRD4 BD2测定中具有7.1 的pIC50；发现实施例3在BRD4 BD2测定中具有7.5的pIC50；并且发现实施例139在BRD4 BD2测定中具有7.4的pIC50。
相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性的计算
相对于BRD4 BD1，对BRD4 BD2的选择性如下计算：
选择性 = BRD4 BD2 pIC50 – BRD4 BD1 pIC50
发现所有实施例(除了实施例114、116、131、134、136-138和238-261)在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为≥ 1个log单位，因此相对于BRD4BD1对BRD4 BD2的选择性是至少10倍。
发现实施例1-91、139-219在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4BD2的选择性为≥ 2个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例1在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.8个log单位。
发现实施例2在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.0个log单位。
发现实施例3在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.0个log单位。
发现实施例139在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.0个log单位。

Claims (30)

1.式(I)化合物或其盐：
其中：
R1是-C1-3烷基或环丙基；
R2是-C0-3烷基-环烷基，其中所述环烷基任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代；或
R2是-C0-4烷基-杂环基或-(CH2)pO-杂环基，其中每个杂环基任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代；或
R2是H、-CH3、任选被1、2、3、4或5个氟取代的-C2-6烷基、-C2-6烷基OR6、-C2-6烷基NR10aR11a、-(CH2)mSO2C1-3烷基、-(CH2)mSO2NR10R11、-(CH2)mC(O)NR10R11、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mNHCO2C1-4烷基、-(CH2)mNHC(O)C1-4烷基或-(CH2)n杂芳基，其中所述杂芳基任选被1或2个可相同或不同的R7基团取代；
R3是H、-C1-4烷基、环丙基、-CH2F、-C1-3烷基OR6或-C1-3烷基CN；
R4是苯基或杂芳基，其中每个任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代；
每个R5独立地是卤素、-C0-6烷基-R8、-OC2-6烷基-R8、-OCH2苯基、-CN或-SO2C1-3烷基；
R6是H或-C1-4烷基；
每个R7独立地是氧代、卤素、任选被1、2或3个氟取代的-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6、-OC2-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-C0-3烷基-CONR10R11、-CN、-SO2-C1-3烷基、-SO2NR10R11或任选被-C1-4烷基取代的-SO2苯基；
R8是H、-OR6、-NR10R11或杂芳基；
每个R9独立地是卤素、-C1-4烷基、环丙基、环丁基、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR6、-C0-3烷基OR6、-C0-3烷基NR10R11、-NHCH2CH2OR6、-NHCO2C1-4烷基、氧代、-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)NR10R11；
R10和R11各自独立地选自H和-C1-3烷基；或R10和R11可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选被1或2个取代基取代的4至7-元杂环基，所述取代基独立地选自任选被1、2或3个氟原子取代的-C1-3烷基、-C2-4烷基OH、-OH和F；
R10a和R11a各自独立地选自H和-C1-3烷基；
m是选自2、3或4的整数；
n是选自0、1、2、3或4的整数；且
p是选自2、3或4的整数。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中R1是甲基。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2是-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基选自环丙基、环丁基、环己基或双环[3.1.0]己基，所述基团任选被1、2或3个可相同或不同的R5基团取代。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2是-C0-4烷基-杂环基，其中所述杂环基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(1r,5s)-3-氧杂双环[3.1.0]己基和(1r,5s)-3-氮杂双环[3.1.0]己基，所述基团任选被1或2个可相同或不同的R9基团取代。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH2OR6、-CH2CH2CH2OR6、-CH2CH(CH3)OR6、-CH2CH2CH(CH3)OR6、-CH2CH2CH(CH3)NR10R11、-CH2CH2CH2NR10R11、-(CH2)mSO2CH3、-(CH2)mC(O)NHCH3、-(CH2)mCN、-(CH2)mCO2R6、-(CH2)mCF3和-(CH2)mNHCO2C(CH3)3。
6.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2是-(CH2)nC5-6杂芳基，其中所述C5-6杂芳基选自呋喃基、噻吩基、吡咯基、三唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基和嘧啶基，所述基团任选被1或2个独立地选自卤素、C1-4烷基、C3-4环烷基和-C0-3烷基OR6的取代基取代。
7.根据前述权利要求任一项所述的化合物或其盐，其中R3是H、甲基、乙基、-CH2F、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2OMe或-CH2CN。
8.根据前述权利要求任一项所述的化合物或其盐，其中R4是未取代的苯基或被1或2个R7基团取代的苯基，所述R7基团可以相同或不同，选自卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基OR6和-CN。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其盐，其中R4是选自吡啶基、吲哚基和吡咯并吡啶基的杂芳基，所述基团任选被1、2或3个可相同或不同的R7基团取代。
10.化合物或其盐，所述化合物选自实施例1至261。
11.化合物或其盐，所述化合物选自
N 5-((1r,4S)-4-羟基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-((S)-1-(4-氯苯基)乙基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
(S)-N 3-甲基-1-(1-苯基乙基)-N 5-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
1-((S)-1-(4-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
1-((S)-1-(3-氯苯基)乙基)-N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
N 5-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基丙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；和
N 5-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺。
12.化合物或其盐，所述化合物是下式表示的N 5-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)-N 3-甲基-1-((S)-1-苯基乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
。
13.根据前述权利要求任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
14.药物组合物，其包含如权利要求13中限定的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
15.组合产品，其包含如权利要求13中限定的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其他治疗活性剂。
16.如权利要求13中限定的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
17.如权利要求13中限定的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
18.用于根据权利要求17所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。
19.用于根据权利要求17所述用途的化合物，其中所述疾病或病症涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
20.用于根据权利要求17所述用途的化合物，其中所述疾病或病状是病毒感染。
21.用于根据权利要求17所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是癌症。
22.用于根据权利要求17所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
23.如权利要求13中限定的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
24.需要治疗的对象中适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的治疗方法，所述方法包括给予治疗有效量的如权利要求13中限定的化合物或其药学上可接受的盐。
25.根据权利要求24所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。
26.根据权利要求24所述的治疗方法，其中所述疾病或病症涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
27.根据权利要求24所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是病毒感染。
28.根据权利要求24所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是癌症。
29.根据权利要求24所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
30.根据权利要求24至29中任一项所述的治疗方法，其中所述对象是人。
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