JP5658502B2 - 酵素を配合した不飽和アルデヒドの消臭剤、および消臭方法 - Google Patents
酵素を配合した不飽和アルデヒドの消臭剤、および消臭方法 Download PDFInfo
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Description
例えば、汗臭、腋臭、足臭等は、臭いの元となる「汗」と臭いを生み出す「皮膚常在菌」によって作り出されていることが知られている。汗は、主にエクリン腺とアポクリン腺からなる汗腺より分泌される。人体の全体にわたって分布するエクリン腺より分泌される汗はエクリン汗とよばれる。そのほとんどが水分により構成され、その他に若干の塩化ナトリウム,乳酸,尿素等を含んでいる。一方、アポクリン腺は毛に付随して存在する汗腺で、腋窩や乳輪、陰部等の特定の部位のみに存在する。ここより分泌されるアポクリン腺はタンパク質や脂質、脂肪酸、コレステロール、グルコース、アンモニア、鉄等が含まれるミルク様の汗である。
(1)芳香成分(香料、精油など)を利用して体臭をマスキングあるいはハーモナージュするもの。
(2)体臭成分、あるいは、体臭成分をその前駆物質とともに物理的に吸着して該体臭成分の揮散を抑制するもの。
(3)酸化反応やバクテリアの活動などによる、体臭成分の前駆物質からの生成自体を抑制するもの。
上記(1)の方法は、体臭成分の生成自体を抑制するものではない。また、問題となる体臭と芳香成分による芳香とが混在することにより、必ずしも好ましくない新たな臭気の発生を招く場合もある。したがって根本的な問題の解決とはいい難い。
上記(2)の方法の代表的な例としては、例えば、無機多孔体やシクロデキストリン、あるいは活性炭等の有機多孔体による包接能や吸着能を利用して、体臭成分の揮散を抑制する方法がある。シクロデキストリンを用いる方法は、一旦包接された体臭成分が他の物質の共存により再び放出される場合があるため、根本的な問題の解決とはいえない。一方活性炭を用いる方法は、即効性を示し難い。また、粉体である活性炭を十分な量で皮膚上に保持するのは困難で、生体への直接的な適用には限度があることなどから必ずしも有効とはいえない。
上記(3)の方法の代表的な例としては、ノネナールの基質となる脂肪酸である9−ヘキサデセン酸の酸化を抑制する抗酸化物質や、9−ヘキサデセン酸の分解を抑制する抗菌物質、酵素阻害剤、トレハロース、植物抽出物等を利用する方法が挙げられる。この方法は、体臭の発生の抑制に奏効する場合がある。しかしながら、それ自体で体臭の発生を抑制するに足る用量の抗酸化物質や抗菌物質を使用するためには、例えば皮膚などに対する刺激性に注意する必要がある。
同様の結果は、エノン還元酵素、アルコール脱水素酵素、アルデヒド脱水素酵素をtrans-2-ヘキセナール、trans-2-オクテナールを含む溶液と反応させた場合にも示された。
さらに本発明者らは、エノン還元酵素を含む溶液を、trans-2-ノネナールを含むガーゼや男性が1日着たシャツに噴霧した場合に、ガーゼやシャツから悪臭を消失させ、芳香に変化させることができることも確認した。
本発明はこのような知見に基づくものであり以下の方法、組成物、使用等に関する。
〔1〕不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する工程を含む、不飽和アルデヒドの臭気を消失させる方法。
〔2〕不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する工程が、炭素−炭素間二重結合を還元することが可能な条件下で還元触媒を不飽和アルデヒドに接触させる工程である、〔1〕に記載の方法。
〔3〕炭素−炭素間二重結合を還元することが可能な条件が、電子供与体の存在下である、〔2〕に記載の方法。
〔4〕還元触媒がエノン還元酵素である、〔2〕に記載の方法。
〔5〕エノン還元酵素が以下(a)から(e)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、〔4〕に記載の方法。
(a)配列番号:1に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:2に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:2に記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加したアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(d)配列番号:1に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、下記の理化学的性状(A)および(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(e)配列番号:2に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)および(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1)α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、実質的にケトンの還元活性はない。
(2)電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(3)ケトンからβ位炭素の2つの置換基がともに水素でない基質に対しては実質的に作用しない。
(4)炭素−炭素間二重結合が環状構造中に存在する基質に対しては実質的に作用しない。
(C)至適pH
pH 6.5−7.0
(D)至適温度
37−45℃
(E)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により約43,000。ゲル濾過により約42,000。
〔6〕エノン還元酵素が以下(a)から(e)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、〔4〕に記載の方法。
(a)配列番号:3に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:4に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:4に記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加したアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(d)配列番号:3に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(e)配列番号:4に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1) 電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(2) 不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、実質的にケトンの還元活性はない。
(3) 3-Methyl-4-(3-pyridyl)-3-buten-2-oneのα,β−不飽和結合を選択的に還元し、90% ee以上の (S)-3-methyl-4-(3-pyridyl)-3-butan-2-oneを生成する。
(C)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により約47,000。ゲル濾過により約92,000。
(D)作用pH
pH 5.0−8.0
(E)至適温度
37−45℃
〔7〕電子供与体が以下(1)から(6)からなる群より選択される少なくとも1つの補酵素である、〔3〕に記載の方法;
(1)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)、
(2)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)、
(3)還元型フラビンモノヌクレオチド(FMNH2)、
(4)還元型フラビンアデニンジヌクレオチド(FADH2)、
(5)ユビキノン(UQ)、および
(6)ピロロキノリンキノン(PQQ)。
〔8〕不飽和アルデヒドが2−ノネナール、2−オクテナール、2−ヘキサナールからなる群より選択される、〔1〕に記載の方法。
〔9〕不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する反応を触媒する還元触媒を有効成分として含有する、不飽和アルデヒドの臭気の消失用組成物。
〔10〕さらに電子供与体を含有する、〔9〕に記載の組成物。
〔11〕還元触媒がエノン還元酵素である、〔9〕に記載の組成物。
〔12〕エノン還元酵素が以下(a)から(e)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である〔11〕に記載の組成物。
(a)配列番号:1に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:2に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:2に記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加したアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(d)配列番号:1に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、下記の理化学的性状(A)および(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(e)配列番号:2に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)および(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1)α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、実質的にケトンの還元活性はない。
(2)電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(3)ケトンからβ位炭素の2つの置換基がともに水素でない基質に対しては実質的に作用しない。
(4)炭素−炭素間二重結合が環状構造中に存在する基質に対しては実質的に作用しない。
(C)至適pH
pH 6.5−7.0
(D)至適温度
37−45℃
(E)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により約43,000。ゲル濾過により約42,000。
〔13〕エノン還元酵素が以下(a)から(e)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、〔11〕に記載の組成物。
(a)配列番号:3に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:4に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:4に記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加したアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(d)配列番号:3に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(e)配列番号:4に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1) 電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(2) 不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、実質的にケトンの還元活性はない。
(3) 3-Methyl-4-(3-pyridyl)-3-buten-2-oneのα,β−不飽和結合を選択的に還元し、90% ee以上の (S)-3-methyl-4-(3-pyridyl)-3-butan-2-oneを生成する。
(C)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により約47,000。ゲル濾過により約92,000。
(D)作用pH
pH 5.0−8.0
(E)至適温度
37−45℃
〔14〕電子供与体が以下(1)から(6)からなる群より選択される少なくとも1つの補酵素である、〔10〕に記載の組成物;
(1)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)、
(2)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)、
(3)還元型フラビンモノヌクレオチド(FMNH2)、
(4)還元型フラビンアデニンジヌクレオチド(FADH2)、および
(5)ユビキノン(UQ)、および
(6)ピロロキノリンキノン(PQQ)。
〔15〕不飽和アルデヒドが2−ノネナール、2−オクテナール、2−ヘキサナールからなる群より選択される、〔9〕に記載の組成物。
〔16〕不飽和アルデヒドの臭気の消失において使用するための不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する反応を触媒する還元触媒。
一方本発明の方法や組成物では、発生した体臭の元となる物質を別の物質に変化させることができる。したがって本発明の方法や組成物を用いることにより、一度発生した体臭を根本的に消失させることが可能である。さらに本発明の方法や組成物では、体臭を悪臭から芳香に変化させることもできる。このような効果は、これまでに知られている加齢臭を抑制する手段にはないものである。
また本発明においては、好ましい態様において、エノン還元酵素が用いられる。酵素は、抗酸化剤や抗菌剤などとは異なり、安全に使用することができる。
本発明において不飽和アルデヒドとは、アルデヒド基を有する不飽和炭化水素を意味する。本発明における不飽和アルデヒドは、しばしば体臭の原因となる臭気を発する。本発明における不飽和アルデヒドとしては、例えば、ノネナール(例えば2−ノネナール)、オクテナール(例えば2−オクテナール)、ヘキセナール(例えば2−ヘキセナール)などが挙げられるがこれらに限定されない。
本発明は、不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元することを特徴とする。以下に、不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合の還元反応を例示する。以下の例示は、2−ノネナールの2位の炭素−炭素間二重結合を還元することにより、ノナナールが生成する反応である。
不飽和アルデヒドの臭気が消失したか否かは、例えば、直接臭いを嗅ぐことによって判定することができる。例えば、不飽和アルデヒドの1つである2−ノネナールは、青臭さと脂臭さを併せ持つ。あるいは、カメムシのような臭いを有すると表現することもできる(カメムシの臭いはtrans-2-ヘキセナールに由来する)。一方、2−ノネナールの2位のC=Cを還元することによって得られるノナナールは、清涼感のある臭いを有する。このような臭いの相違から、不飽和アルデヒドの臭気が消失したか否かを判定することができる。
あるいは、分析器機を用いて不飽和アルデヒドの臭気の有無を判定することができる。例えば、シャツに含まれる不飽和アルデヒドの有無を確認する場合、シャツにあらかじめ縫いこんだガーゼパットをヘキサンなどの溶媒に浸漬し、脂質を抽出させる。このようにして集められたサンプルを、例えばヘッドスペースガスクロマトグラフィーあるいはマススペクトルなどの装置を用いて解析することにより、サンプル中の不飽和アルデヒドの有無を確認することができる。
あるいは、実施例に記載のように、常法によりアルデヒドをジニトロフェニルヒドラジン(DNPH)により誘導化し、GCにて分析することにより、不飽和アルデヒドの有無を確認することはできる。
・還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)
・還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)
・還元型フラビンモノヌクレオチド(FMNH2)
・還元型フラビンアデニンジヌクレオチド(FADH2)
・ユビキノン(UQ)
・ピロロキノリンキノン(PQQ)
(A1)作用
NADPHを電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B1)基質特異性
(1)α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、実質的にケトンの還元活性を有しない。
(2)電子供与体としては、NADHよりもNADPHに対して、有意に高い活性を有する。
(3)ケトンからβ位炭素の2つの置換基がともに水素でない基質に対しては実質的に作用しない。
(4)炭素−炭素間二重結合が環状構造中に存在する基質に対しては実質的に作用しない。
(C1)至適pH
pH 6.5−7.0
(D1)至適温度
37−45℃
(E1)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(以下、SDS-PAGEと略す)により約43,000。ゲル濾過により約42,000。
クライベロマイセス・ラクティス(Kluyveromyces lactis)由来のエノン還元酵素KLER1の塩基配列を配列番号:1に、当該塩基配列によってコードされるアミノ酸配列を配列番号:2に示す。
(A2)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B2)基質特異性
(1)電子供与体としては、NADHよりもNADPHに対して、有意に高い活性を有する。
(2)不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、実質的にケトンの還元活性はない。
(3) 3-Methyl-4-(3-pyridyl)-3-buten-2-oneのα,β−不飽和結合を選択的に還元し、90% ee以上の (S)-3-methyl-4-(3-pyridyl)-3-butan-2-oneを生成する。
(C2)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により約47,000。ゲル濾過により約92,000。
(D2)作用pH
pH 5.0−8.0
(E2)至適温度
37−45℃
クライベロマイセス・ラクティス(Kluyveromyces lactis)由来のエノン還元酵素KYE1の塩基配列を配列番号:3に、当該塩基配列によってコードされるアミノ酸配列を配列番号:4に示す。
エノンに対する還元活性測定法:50mM リン酸カリウム緩衝液(pH 6.5)、0.2mM NADPH、20mM エチルビニルケトンおよび酵素を含む反応液中30℃で反応させ、NADPHの減少に伴う340nmの吸光度の減少を測定する。1Uは、1分間に1μmolのNADPHの減少を触媒する酵素量とすることができる。また、蛋白質の定量は、バイオラッド製蛋白質アッセイキットを用いた色素結合法により行うことができる。
クライベロマイセス・ラクティスから精製することができるエノン還元酵素は、上記理化学的性質(A1)−(E1)、あるいは(A2)−(E2)を有する。
・パン酵母由来のエノン還元酵素
・タバコ由来のエノン還元酵素
・ラット肝臓由来のエノン還元酵素
・サッカロミセス・カールズバーゲンシスやサッカロミセス・セレビジアエ由来の旧黄色酵素
・クロストリジウム・チロブチリカム由来の2−エノエート還元酵素
・クロストリジウム・クライベリ由来のアクリロイル−CoA還元酵素
・サッカロミセス・セレビジアエ由来のエノン還元活性を有する酵素
・ヒラタケ抽出物由来のエノン還元酵素
Wannerらは、同じパン酵母より2種類のエノン還元酵素(EIおよびEII)の精製と性質を報告している(Eur. J. Biochem. 255, 271-278 (1998))。EIは、ゲル濾過における分子量が75,000であり、SDS-PAGEによる分子量が37,000および34,000のヘテロ2量体である。EIIは、ゲル濾過における分子量が130,000であり、SDS-PAGEによる分子量が56,000および64,000のヘテロ2量体である。
エノン還元酵素−IIは、α,β−不飽和ケトンのβ位炭素に水素を有さない化合物((R)-pulegone)も基質になる。また、ゲル濾過における分子量が132,000、SDS-PAGEによる分子量が22,000および45,000である(Phytochemistry 31,2599-2603 (1992))。
p74はゲル濾過における分子量が74,000、SDS-PAGEによる分子量が37,000である。
YNN4、YL60、YCZ2のDDBJアクセッション番号を以下に示す。
YNN4:アミノ酸配列 P53912、塩基配列 Z46843
YL60:アミノ酸配列 P54007、塩基配列 U22383
YCZ2:アミノ酸配列 P25608、塩基配列 X59720
ヒラタケ由来のエノン還元酵素は、例えば、ヒラタケ粗酵素液に硫酸ストレプトマイシン沈殿、メタノール分画を行った後、ゲル濾過クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなど常法に従い単離することができる(日本農芸化学会 2004年度大会講演要旨集p116 講演番号2B03p21、日本農芸化学会 2010年度大会講演要旨集p39 講演番号2AIp09)。
あるいは本発明におけるポリヌクレオチドは、配列番号:4に記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列を含み、かつ、前記理化学的性状(A2)−(E2)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含む。
当業者であれば、配列番号:1または3に記載のDNAに部位特異的変異導入法(Nucleic Acid Res. 10,pp.6487(1982) , Methods inEnzymol. 100, pp.448 (1983), Molecular Cloning 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) , PCR A Practical Approach IRLPress pp.200(1991) )などを用いて、適宜置換、欠失、挿入、および/または付加変異を導入することが可能である。
あるいは本発明におけるポリヌクレオチドは、配列番号:3に記載の塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズできるポリヌクレオチドであって、かつ前記理化学的性状(A2)−(E2)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチドも含む。
ストリンジェントな条件でハイブリダイズできるポリヌクレオチドとは、配列番号:1または3に記載中の任意の少なくとも20個、好ましくは少なくとも30個、例えば40、60または100個の連続した配列を一つまたは複数選択したDNAをプローブDNAとし、例えばECL direct nucleic acid labeling and detection system (AmershamPharmaica Biotech社製)を用いて、マニュアルに記載の条件(wash:42℃、0.5x SSCを含むprimary wash buffer)において、ハイブリダイズするポリヌクレオチドを指す。あるいは、本発明におけるストリンジェントなハイブリダイゼーション条件として、例えば、6M尿素、0.4%SDS、0.1xSSCの条件を挙げることもできる。
あるいは本発明におけるポリヌクレオチドは、配列番号:4に示されるアミノ酸配列と少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%以上(96%、97%、98%、99%)の同一性(ホモロジー)を有し、かつ前記理化学的性状(A2)−(E2)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含む。
蛋白質の同一性検索は、例えばSWISS-PROT、PIRなどの蛋白質のアミノ酸配列に関するデータベースやDNA Databank of JAPAN(DDBJ)、EMBL、Gene-BankなどのDNAに関するデータベース、DNA配列を元にした予想アミノ酸配列に関するデータベースなどを対象に、FASTA programやBLAST programなどを用いて、例えば、インターネット上で行うことができる。
あるいは、配列番号:2に記載のアミノ酸配列を用いてDDBJを対象にBLAST programを用いて同一性検索を行った結果、既知の蛋白質の中で最も高い同一性を示したのは、Cochliobolus carbonum toxD proteinの36%(Identity)、54%(Positives)であった。本発明において同一性とは、例えば、BLAST programを用いたPositiveの相同性の値を示す。
配列番号:4に記載のアミノ酸配列を用いてSWISS-PROTを対象にBLAST programを用いて同一性検索を行った結果、既知の蛋白質の中で最も高い同一性を示したのは、Saccharomyces carlesbergensis Old Yellow Enzyme 1 (OYE1の71%(Identity)、84%(Positives)であった。
エシェリヒア(Escherichia)属
バチルス(Bacillus)属
シュードモナス(Pseudomonas)属
セラチア(Serratia)属
ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属
コリネバクテリイウム(Corynebacterium)属
ストレプトコッカス(Streptococcus)属
ラクトバチルス(Lactobacillus)属など宿主ベクター系の開発されている細菌
ロドコッカス(Rhodococcus)属
ストレプトマイセス(Streptomyces)属など宿主ベクター系の開発されている放線菌
サッカロマイセス(Saccharomyces)属
クライベロマイセス(Kluyveromyces)属
シゾサッカロマイセス(Schizosaccharomyces)属
チゴサッカロマイセス(Zygosaccharomyces)属
ヤロウイア(Yarrowia)属
トリコスポロン(Trichosporon)属
ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属
ピキア(Pichia)属
キャンディダ(Candida)属などの宿主ベクター系の開発されている酵母
ノイロスポラ(Neurospora)属
アスペルギルス(Aspergillus)属
セファロスポリウム(Cephalosporium)属
トリコデルマ(Trichoderma)属などの宿主ベクター系の開発されているカビ
R1=H、メチル基、エチル基、フェニル基、3−ピリジル基、2−ピリジル基、3−ニトロフェニル基、3−メトキシフェニル基、および4−メトキシフェニル基
R2=H、メチル基、およびエチル基
R3=H、メチル基、およびエチル基
酵素の質量は精製度によって変化するため酵素の抽出物を重量で表現することは困難であるが、例えば2μgから1mg、好ましくは10μgから200μgなどの量を使用することができる。
酵素の使用量は、接触させる対象の性質や面積、状態に応じて調整することができる。
・反応温度:4-55℃、好ましくは15-45℃
・pH:4-9、好ましくは5.0-8.0、さらに好ましくはpH6.0-7.0
・基質濃度:0.01-90%、好ましくは0.1-20%
さらに、反応液中に界面活性剤を加えることもできる。界面活性剤としては、0.1〜5.0 重量%のTriton X-100、あるいはTween 60などが用いられる。
また、不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する反応を触媒する還元触媒の活性を妨げない範囲で、反応液中にさらに保湿剤、抗菌剤、静菌剤、殺菌剤、保存剤、酸化防止剤、紫外線遮蔽剤、紫外線吸収剤、制汗剤、薬理効果を示す成分、乳化剤、感触向上剤、粉体原料、清涼化剤、噴射剤、pH調節剤、着香料、芳香剤、着色料、蛋白質、アミノ酸、繊維質、脂質、塩類などを配合することもできる。これらの具体例については後述した。
本発明の組成物は、さらに電子供与体を含むことができる。電子供与体は上述のものを用いることができる。
還元触媒や電子供与体の使用量、配合比率等は上述の通りである。
具体的には、例えば
α−カロチン、β−カロチン、γ−カロチン、リコピン、クリプトキサンチン、ゼアキサンチン、イソゼアキサンチン、ロドキサンチン、カプサンチン、クロセチン等のカロチノイド、
2,5−ジメチルフラン、2−メチルフラン、2,5−ジフェニルフラン、1,3−ジフェニルイソベンゾフラン等のフラン類、
α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール等のビタミンE類、
ヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、アラニン、アラニンのアルキルエステル等のアミノ酸類、
1,4−ジアジシクロオクタン、ジブチルヒドロキシトルエン(BHT)、没食子酸エステル類、
アスコルビン酸、タンニン類、フラボノイド
等を挙げることができるがこれらに限定されない。
オウゴン抽出物、カワラヨモギ抽出物、アセンヤク抽出物、セージ抽出物、チャ抽出物、ローズマリー抽出物、ウイキョウ抽出物、タイム抽出物、ナツメグ抽出物、コショウ抽出物、ターメリック抽出物、バニラ抽出物、パプリカ抽出物、ヨクイニン抽出物、サイコ抽出物、木瓜抽出物、スホウ抽出物、キュレン抽出物、ジョンラブ抽出物等の生薬抽出物
を挙げることができるが、これらに限定されない。
プロピレングリコール、グリセリン、1,3−ブチレングリコール、エリスリトール、ジプロピレングリコール、キシリトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、ヘキシレングリコール、ジグリセリン、マルチトールなどの多価アルコール、
マルトース、D−マンニット、水アメ、ブドウ糖、果糖、乳糖、グルコサミン、シクロデキストリンなどの糖類、
カルボキシメチルキチンなどの多糖誘導体、
ピロリドンカルボン酸ナトリウムなどのアミノ酸およびその塩、
乳酸および乳酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アデノシンリン酸ナトリウムなどの有機酸およびその塩
などが挙げられる。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や、本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、約0.1%乃至約50%の範囲が好適である。
安息香酸およびその塩、ソルビン酸およびその塩、デヒドロ酢酸およびその塩などの有機酸類、
パラオキシ安息香酸メチルおよびパラオキシ安息香酸エチルなどの安息香酸エステル誘導体、
フェノール、クレゾール、クロルクレゾール、イソプロピルメチルフェノール、トリクロルヒドロキシジフェニルエーテルなどのフェノール類、
塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼントニウム、塩化セチルピリミジウムなどの第4アンモニウム塩、
クロルヘキシジングルコネート、塩酸クロルヘキシジンなどのクロルヘキシジン誘導体、
トリクロルカルバニリド、ハロカルバンなどのジフェニル尿素誘導体、
ジヒドロファルネソール
などが挙げられる。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.001%乃至5%、望ましくは、0.01%乃至1%の範囲が好適である。
アスコルビン酸およびその塩、アスコルビン酸ステアリン酸エステルや糖転移アスコルビン酸などのアスコルビン酸誘導体、
クエン酸およびその塩、酢酸トコフェロール、ジブチルヒドロキシトルエン、トコフェロール、パルミチン酸およびその塩、パルミチン酸アスコルビル、ピロ亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、茶カテキン
などが挙げられる。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、約0.001%乃至約10%、望ましくは、約0.01%乃至約5%の範囲が好適である。
酸化チタン、タルク、カオリンなどの紫外線遮蔽能を有する無機物質、
5−クロロウラシル、グアニン、シトシンなどの紫外線遮蔽能を有する有機物質
などが挙げられる。
パラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシルエステル、シノキサート、パラメトキシ桂皮酸エチルヘキシルエステル、2−(2−ヒドロキシ−5−メチルフェニル)ベンゾトリアゾール、オキシベンゾゾン、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル
などが挙げられる。
さらに以下の紫外線吸収剤も本発明において好適に用いることができる。
パラアミノ安息香酸等のパラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、
アントラニル酸メチル等のアントラニル酸系紫外線吸収剤、
サリチル酸オクチル、サリチル酸フェニル、サリチル酸ホモメンチル等のサリチル酸系紫外線吸収剤、
パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、パラメトキシケイ皮酸−2−エチルヘキシル、ジパラメトキシケイ皮酸モノ−2−エチルヘキサン酸グリセリル、〔4−ビス(トリメチルシロキシ)メチルシリル−3−メチルブチル〕−3,4,5−トリメトキシケイ皮酸エステル等のケイ皮酸系紫外線吸収剤、
2,4−ジヒドロキシベンゾフェノン、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン−5−スルホン酸、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン−5−スルホン酸ナトリウム等のベンゾフェノン系紫外線吸収剤、
2−フェニル−5−メチルベンゾオキサゾール、4−tert−ブチル−4'−メトキシジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、約0.1%乃至約50%の範囲が好適である。
塩化アルミニウム、オキシ塩化アルミニウム、塩基性臭化アルミニウム、硫酸アルミニウム、クロルヒドロキシアルミニウム、クロルヒドロキシアルミニウムジルコニウム、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム(ミョウバン)、硫酸亜鉛、フェノールスルホン酸アルミニウム、フェノールスルホン酸、塩基性乳酸アルミニウム亜鉛、酸化亜鉛、パラフェノールスルホン酸亜鉛
などが挙げられる。
さらに、以上の化合物とアミノ酸、望ましくは、グリシンとの複合体などの収斂性化合物が挙げられる。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.01%乃至40%の範囲が好適である。
ビタミン類としては、
レチノールをはじめとするビタミンA類、
チアミン、パントテン酸ならびにその誘導体をはじめとするビタミンB類、
アスコルビン酸ならびにその誘導体をはじめとするビタミンC類、
トコフェロールならびにその誘導体をはじめとするビタミンE類、
ルチン、ヘスペリジン、ナリンジンなどのフラボノイドならびにその誘導体をはじめとするビタミンP類、などが挙げられる。
ホルモン類としては、卵胞ホルモン、プレグネロンなどが挙げられる。
植物抽出物としては、カミツレ抽出物、カンゾウ抽出物などが挙げられる。
動物抽出物としては、胎盤抽出物などが挙げられる。
感光素としては、
感光素101号(化学名:2,2′[3′−[2−(3−ヘプチル−4−メチル−4−チアゾリン−2−イリデン)エチリデン]プロペニレン]ビス(3−ヘプチル−4−メチルチアゾリウムヨーダイド)、慣用名:プラトニン)、
感光素201号(化学名:3−ヘプチル−2−[(3−ヘプチル−4−メチル−2(3H)−チアゾリデン)メチル]−4−メチルチアゾリウム ヨーダイド、慣用名:ピオニン)、
感光素301号(化学名:2−[2−[(5−ブロモ−2−ピリジニル)アミノ]エテニル]−1−エチル−6−メチルピリジニウム ヨーダイド、慣用名:タカナール)、
感光素401号(化学名:3,4−ジメチル−2−[2−(フェニルアミノ)エテニル]オキサゾリウム ヨーダイド、慣用名:ルミネキス)
などが挙げられる。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.0001%乃至5%の範囲が好適である。
ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、親油型モノステアリン酸グリセリン、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン、トリオクタン酸トリメチロールプロパン、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなどのエステル、
ポリオキシエチレンアルキルエーテルなどのエーテル、
レシチンなどのリン脂質
などが挙げられる。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総当たり、通常、0.01%乃至20%の範囲が好適である。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.01%乃至50%の範囲が好適である。
グァーガム、クインスシード、トラガント、ペクチン、キサンタンガム、キチン、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、アルギン酸ナトリウム、カチオン化セルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチル澱粉、アルギン酸プロピレングリコール、コラーゲン、ケラチン、カゼイン、アルブミン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウムクロリドエーテル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルメチルエーテル、カルボキシビニルポリマーなどの水溶性高分子、
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウムなどの電解質、
各種の油分
などが挙げられる。
以上のような増粘剤の利用は、本発明の組成物を皮膚に直接適用して使用する際の使用感の改善ないしは調整に奏効する。以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.01%乃至30%の範囲が好適である。
ナイロン(ポリアミド)粉末、ポリウレタン粉末、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、架橋型ポリスチレン粉末、架橋型シリコーン粉末などの合成樹脂粉体、
無水ケイ酸、酸化マグネシウム、マグネシア・シリカ(無水ケイ酸と酸化マグネシウムを含む組成物)、モンモリロナイト、ヒドロキシアパタイト、ケイ酸マグネシウム、マイカ、カーボンブラック、セリサイト、ゼオライト、酸化アルミニウム、酸化ジルコニウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、硫酸バリウム、雲母チタン(酸化チタン被膜により被覆された雲母粉末)、酸化カルシウム、ケイ酸バリウム、ケイ酸カルシウム、真珠粉末をはじめとする、白色、赤色系、褐色系、黄色系、黒色系、紫色系、緑色系もしくは青色系の無機顔料の粉末化物、
各種の有機顔料の粉末化物、
各種の金属顔料の粉末化物、
シルク粉末やウール粉末などの天然粉体
などが挙げられる。
以上のような粉体原料は、本発明の組成物において、例えば、着色剤、基剤、賦形剤、担体、コーティング剤、光沢化剤などとして利用することができる。以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.01%乃至50%の範囲が好適である。
以上のような成分の含量は、用いる成分の種類や本発明の組成物の利用分野・利用形態にもよるが、総重量当たり、通常、0.001%乃至5%、望ましくは、0.01%乃至1%の範囲が好適である。
なお、以上に説明したような成分を直接的または間接的に生体に接触させて使用する場合、生体への外用または内用が許容される調製品を用いるのが望ましい。
・イノシット、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸ベンジル、ニコチン酸アミド、ビタミンD2 (エルゴカルシフェロール)、ビオチン等のビタミン類;エストラジオール、エチニルエストラジオール等のホルモン類、
・アラントイン、アズレン、グリチルレチン酸等の抗炎症剤、
・アルブチン等の美白剤、
・酸化亜鉛、タンニン酸等の収斂剤、
・L−メントール、カンフル等の清涼剤、
・イオウ、塩化リゾチーム等。
また、上記の抗酸化剤のうち生薬抽出物以外の抗酸化剤を、皮膚外用剤としての本発明の組成物中に配合することができる。
あるいは本発明の組成物は、水溶液、ローション、スプレー液、懸濁液および乳化液などの液状、粉末、顆粒およびブロック状などの固体状、クリームおよびペーストなどの半固体状、ゲル状等の形態とすることができる。また必要に応じて、瓶、袋、缶、スプレー缶、噴霧容器、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。
例えば、化粧品分野、日用品分野、衛生用品分野、医用品分野、介護用品分野、運動用品分野などで利用しうる形状に成形された、織布、不織布、スポンジ、多孔性合成樹脂、綿、脱脂綿などが挙げられる。また、以下の物品に利用することができる。
ティッシュ・ペーパー、ウェット・ティッシュ、紙製おしぼり、おしぼり、手ぬぐい、タオル、ハンカチ、足拭き用マット、クッション、ドアカバーなどの日用品、
衣類・寝具・日用品等の洗濯用の洗濯洗剤、洗濯仕上げ剤、柔軟剤、糊付け剤などの洗濯用品、
紙などにより成形された使い捨て品を含む、肌着、靴下、シャツ、ズボン、スカートなどの衣類、
シーツ、布団カバー、枕カバー、毛布、タオルケットなどの寝具手袋、
帽子、マフラー、鉢巻き、ヘアバンド、靴などの身の回り品、
包帯、眼帯、ガーゼ、パッドつき絆創膏、湿布、湿布の基布、綿棒、マスク、おむつ、使い捨ておむつ、生理用品などの衛生用品、医用品ないしは介護用品、
運動靴、トレーニングウェア、サポーター、胴着、ヘルメットあて、グローブ、ミットなどの運動用品、
床、手すり、家具等の清掃用の雑巾、布巾、モップなどの清掃用品、
エステティック用品、
マッサージ用品、
体臭ケア用品などとしてのローション、クリーム、ゲル、天花粉などの皮膚外用組成物、
シャンプー、ドライシャンプー、リンス、ヘアトニック、ヘアリキッド、ヘアムース、ヘアクリーム、ポマード、育毛剤、養毛剤などの頭皮・頭髪用組成物、
マウス・ウォッシュ、練歯磨などの口腔用組成物、
魚介類用餌、水槽浄化剤、愛玩動物用浴用剤などの愛玩動物用品
本発明の組成物を含有する上に例示した物品は、総重量あたり、エノン還元酵素を、無水物換算でその合計として、通常、約0.00001重量%乃至約30重量%、望ましくは、約0.0001重量%乃至約10重量%含有される。
以上のような物品は、本発明の組成物を含まない物品と比較し、それを利用する者から発生する体臭を消失させるとともに、当該物品に付着した、生体からの分泌物に起因する体臭ないしは体臭様の臭気を消失させる機能を有する。
・イヌ、ネコ、キツネ、タヌキをはじめとする食肉類、
・リス、ハムスター、ハツカネズミ、モルモット、ウサギをはじめとする齧歯類、
・キツネザル、アイアイ、メガネザル、テナガザルをはじめとするヒト以外の霊長類、
・ウシ、ヒツジ、ヤギ、イノシシ、ブタをはじめとする偶蹄類、
・ウマをはじめとする奇蹄類(以上哺乳類)、
・ニワトリ、シチメンチョウ、チャボ、ウズラ、インコ、ブンチョウ、カナリア、ジュウシマツ、キュウカンチョウ、ハトなどの鳥類、
・熱帯魚、金魚、コイ、タイ、エビ、カニなどの魚介類
したがって本発明の組成物は、個人が日常的に利用することのみならず、例えば、理容・美容業界、温泉を含む公衆浴場業界、エステティック業界、マッサージ業界、清掃業界、畜産・水産業界、哺乳類・鳥類・魚介類を含む愛玩動物ないしは鑑賞用動物の取扱い業界、医療分野、介護分野等においても有利に利用できる。
あるいは本発明は不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する反応を触媒する還元触媒の、不飽和アルデヒドの臭気の消失における使用に関する。
加えて本発明は、不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する反応を触媒する還元触媒と薬学的に許容される担体を配合する工程を含む、臭気消失剤の製造方法に関する。
さらに本発明は、不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合を還元する反応を触媒する還元触媒の、不飽和アルデヒドの臭気の消失用組成物の製造における使用に関する。
なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
[実施例1]trans-2-ノネナールの消臭
酵母由来のアルコール脱水素酵素(シグマアルドリッチ)、酵母由来のアルデヒド脱水素酵素(シグマアルドリッチ)、酵母由来のエノン還元酵素-1(KLER1、特開2002-247987)、酵母由来のエノン還元酵素-2(KYE1、特開2003-033185)を各1 U、補酵素を10 mM、trans-2-ノネナールを2 mMとした反応液を調製し、30℃で15分間、酵素反応を行った。なお、各酵素の1Uは1分間で1μmolの基準物質を変換する酵素量とした。各酵素の基準物質は、アルコール脱水素酵素はエタノール、アルデヒド脱水素酵素はアセトアルデヒド、エノン還元酵素はエチルビニルケトンである。
反応後、官能試験において臭いの変化を評価した。結果を表1に示した。エノン還元酵素は悪臭がしなくなっただけではなく、逆に清涼感のある芳香に変化した。
実施例1と同様に、trans-2-ヘキセナール、trans-2-オクテナールについても官能評価を行った。評価に用いた酵素は、酵母由来のエノン還元酵素-1(KLER1、特開2002-247987)、酵母由来のエノン還元酵素-2(KYE1、特開2003-033185)とし、補酵素NADPHを10 mM、各不飽和アルデヒドを2 mMとして、30℃で15分間、pH 6.5にて酵素反応を行った。
反応後、官能試験において臭いの変化を評価した。結果を表2に示した。エノン還元酵素は、いずれの不飽和アルデヒドに対して消臭効果を示し、実施例1と同様に清涼感のある匂いに変化した。
10 μgのtrans-2-ノネナールを1 mLの水に溶解させ、その水溶液を10 cm×10 cmのガーゼに吸水させた。次に、0.5 Uの酵母由来のエノン還元酵素-1(KLER1、特開2002-247987)、および酵母由来のエノン還元酵素-2(KYE1、特開2003-033185)、0.55 mgのNADPHをpH 6.5に調整したリン酸カリウム緩衝液に溶解させ、最終液量を10 mLとし、消臭酵素液を調製した。なお、ここでの1 Uは、trans-2-ノネナールの炭素−炭素二重結合を1μmol/minで還元する酵素量とした。この消臭酵素液 1 mL分をtrans-2-ノネナール含有ガーゼに噴霧し、室温で5分間放置し、官能試験において臭いの変化を評価した。その結果、いずれのエノン還元酵素において、trans-2-ノネナールの悪臭がなくなり、逆に清涼感のある良い匂いに変化した。
57歳男性が1日着たシャツを10 cm×10 cm に切ったものを2枚用意し、シャツAとシャツBとした。シャツAには実施例3で調製した消臭酵素液を1 mL噴霧し、シャツB(対照)には酵素なしの溶液を1 mL噴霧した。その結果、シャツAは対照と比べ明らかに悪臭はしなくなった。
Claims (12)
- trans-2-ノネナール、trans-2-ヘキセナール、およびtrans-2-オクテナールからなる群より選択される不飽和アルデヒドの炭素−炭素間二重結合をエノン還元酵素により還元する工程を含む、当該不飽和アルデヒドの臭気を消失させる方法。
- 炭素−炭素間二重結合の還元を、電子供与体の存在下で行うことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- エノン還元酵素が酵母由来のエノン還元酵素-1またはエノン還元酵素-2である、請求項1に記載の方法。
- エノン還元酵素が以下(a)から(c)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、請求項1に記載の方法。
(a)配列番号:1に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:2に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:2に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1)α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、ケトンの還元活性はない。
(2)電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(3)ケトンからβ位炭素の2つの置換基がともに水素でない基質に対しては作用しない。
(4)炭素−炭素間二重結合が環状構造中に存在する基質に対しては作用しない。
(C)至適pH
pH 6.5−7.0
(D)至適温度
37−45℃
(E)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により43,000。ゲル濾過により42,000。 - エノン還元酵素が以下(a)から(c)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、請求項1に記載の方法。
(a)配列番号:3に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:4に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:4に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1) 電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(2) 不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、ケトンの還元活性はない。
(3) 3-Methyl-4-(3-pyridyl)-3-buten-2-oneのα,β−不飽和結合を選択的に還元し、90% ee以上の (S)-3-methyl-4-(3-pyridyl)-3-butan-2-oneを生成する。
(C)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により47,000。ゲル濾過により92,000。
(D)作用pH
pH 5.0−8.0
(E)至適温度
37−45℃ - 電子供与体が以下(1)から(6)からなる群より選択される少なくとも1つの補酵素である、請求項2に記載の方法;
(1)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)、
(2)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)、
(3)還元型フラビンモノヌクレオチド(FMNH2)、
(4)還元型フラビンアデニンジヌクレオチド(FADH2)、
(5)ユビキノン(UQ)、および
(6)ピロロキノリンキノン(PQQ)。 - エノン還元酵素を有効成分として含有する、trans-2-ノネナール、trans-2-ヘキセナール、およびtrans-2-オクテナールからなる群より選択される不飽和アルデヒドの臭気の消失用組成物。
- さらに電子供与体を含有する、請求項7に記載の組成物。
- エノン還元酵素が酵母由来のエノン還元酵素-1またはエノン還元酵素-2である、請求項7に記載の組成物。
- エノン還元酵素が以下(a)から(c)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、請求項7に記載の組成物。
(a)配列番号:1に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:2に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:2に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1)α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、ケトンの還元活性はない。
(2)電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(3)ケトンからβ位炭素の2つの置換基がともに水素でない基質に対しては作用しない。
(4)炭素−炭素間二重結合が環状構造中に存在する基質に対しては作用しない。
(C)至適pH
pH 6.5−7.0
(D)至適温度
37−45℃
(E)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により43,000。ゲル濾過により42,000。 - エノン還元酵素が以下(a)から(c)からなる群より選択されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質である、請求項7に記載の組成物。
(a)配列番号:3に記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド、
(b)配列番号:4に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
(c)配列番号:4に記載のアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、下記の理化学的性状(A)から(E)を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド、
(A)作用
還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を電子供与体として、α,β−不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元し、対応する飽和炭化水素を生成する。
(B)基質特異性
(1) 電子供与体としては、還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドよりも還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸に対して、有意に高い活性を有する。
(2) 不飽和ケトンの炭素−炭素間二重結合を還元するが、ケトンの還元活性はない。
(3) 3-Methyl-4-(3-pyridyl)-3-buten-2-oneのα,β−不飽和結合を選択的に還元し、90% ee以上の (S)-3-methyl-4-(3-pyridyl)-3-butan-2-oneを生成する。
(C)分子量
ドデシル硫酸ナトリウム −ポリアクリルアミドゲル電気泳動により47,000。ゲル濾過により92,000。
(D)作用pH
pH 5.0−8.0
(E)至適温度
37−45℃ - 電子供与体が以下(1)から(6)からなる群より選択される少なくとも1つの補酵素である、請求項8に記載の組成物;
(1)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)、
(2)還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)、
(3)還元型フラビンモノヌクレオチド(FMNH2)、
(4)還元型フラビンアデニンジヌクレオチド(FADH2)、および
(5)ユビキノン(UQ)、および
(6)ピロロキノリンキノン(PQQ)。
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