JP5567634B2 - バチルスバリスモルティスbs07m菌株、微生物製剤、及び作物育成方法 - Google Patents
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Description
以下、本発明の内容を実施例、及び実験例によってさらに具体的に説明する。
植物病に対する作物の免疫機能を活性化させる優れた菌を分離するために、全国各地の農耕地から植物の根圏土壌を採取した。
実施例1で選抜した菌株の同定は16S rRNA遺伝子塩基配列分析を用いた。
細菌の同定のためには16S rRNA遺伝子塩基配列分析を用いた。すなわち、DNA抽出キット(DNA extraction kit)で分離菌株のDNAを抽出した後、ユニバーサルプライマー(universal primer)としてfD1(5’−AGAGTTTGATCCTGGCTCAG−3’)とrP2(5’−ACGGCTACCTTGTTACGACTT−3’)を用いて16S rDNA遺伝子をPCRによって増幅した。
超低温槽(−80℃)に保管しているバチルスバリスモルティスBS07Mを、滅菌したTSA培地に塗抹し、30℃で48時間培養して再活性化させた。この際に、滅菌したTSB(Tryptic Soy broth)液体培地にバチルスバリスモルティスBS07Mを接種した後、30℃で48時間培養して再活性化させてもよい。
1)ビニールハウス条件
上述した実施例3にてバチルスバリスモルティスBS07M菌株の菌体懸濁液を準備した。
育苗期は、上記のビニールハウス条件と同様にして、ビニールハウス内の根圏土壌に本発明の菌体懸濁液を灌注処理した。その後、定植期に路地に定植して対照区と比較を行った。その結果を下記表3に示す。
バチルスバリスモルティスBS07M菌株の主要植物病原菌に対する抗菌活性効果は、図4に示すとおりである。すなわち、本発明のバチルスバリスモルティスBS07M菌株は、植物病原性真菌である、コレトリクム・アクタツム(Colletorichum acutatum)、アルテルナリア・アルテルネート(Alternaria alternate)、ボトリティス・シネレア(Botrytis Cinerea)、ペニシリウム・イタリクム(Penicillium italicum)、ペニシリウム・エクスパンスム(Penicillium expansum)、フザリウム・オキシスポルム(Fusarium oxysporum)、リゾクトニア・ソラニー(Rhizoctonia solani)、及びスクレロティニア・スクレロチオラム(Sclerotinia sclerotiorum)に対する抗菌活性を示すことを確認した。
BS07M菌株から抗菌物質を分離するために、TSA培地10Lをペトリ皿(15.0×1.5cm)に分注した後、BS07M菌株を接種して7日間培養し、しかる後に、80%メタノールで2回浸漬抽出した後、セライトフィルターで濾過して菌体を除去した。その後、濃縮してC−18、シリカG60、及びLH20カラムクロマトグラフィーなどを用いて抗菌活性物質を分離した。この際、生物活性はリゾクトニア・ソラニー(Rhizoctonia solani)でモニタリングした。
1)実験方法
(1)シロイヌナズナ植物体の栽培
バチルスバリスモルティスBS07M菌株が有する植物の誘導抵抗性増進効果による抗真菌性遺伝子の発現変化を確認した。確認には、シロイヌナズナ野生型(Col 0)、形質転換株(親シロイヌナズナ生態型に由来したPR遺伝子を発現することができないように形質転換されたシロイヌナズナ(nah G:SA分解能を有する)、及び遺伝子で形質転換されたシロイヌナズナ(etr3−5、npr1)を使用した。
前述のように準備されたシロイヌナズナ植物体に実施例3で得られたバチルスバリスモルティスBS07M菌株の菌体懸濁液を108cfu/mLの濃度で土壌灌注した後、1週後、RNA分析のために植物体から葉の組織を収得した。
バチルスバリスモルティスBS07M菌株の処理による植物体の病抵抗性遺伝子の発現は、図11に示すように、前述にて処理された野性型シロイヌナズナからの病抵抗性遺伝子PR1の発現が確認されたが、NahG変異株では発現しないことからみて、SAによる病抵抗性経路によると判断され、当該病抵抗性経路により植物の免疫活性が増大するものと判断される。
バチルスバリスモルティスBS07M菌株の誘導抵抗性発現による植物病抑制効果を調べるために、室内及び圃場試験条件で行った。
バチルスバリスモルティスBS07Mの植物根圏処理の後、キュウリ幼苗及びタバコ幼苗の耐寒性を調べた。
受託番号:KCTC11991BP
受託日付:2011年7月28日
Claims (14)
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有し、作物の生育を促進する、微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 前記作物は、トウガラシ、キュウリ及びタバコの中から選ばれたいずれか一つであることを特徴とする、請求項1に記載の微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有し、植物病原性菌への抗菌活性能を有する、微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 前記植物病原性菌が、コレトリクム・アクタツム(Colletorichum acutatum)、アルテルナリア・アルテルネート(Alternaria alternate)、ボトリティス・シネレア(Botrytis Cinerea)、ペニシリウム・イタリクム(Penicillium italicum)、ペニシリウム・エクスパンスム(Penicillium expansum)、フザリウム・オキシスポルム(Fusarium oxysporum)、リゾクトニア・ソラニー(Rhizoctonia solani)、及びスクレロティニア・スクレロチオラム(Sclerotinia sclerotiorum)の中から選ばれたいずれか一つであることを特徴とする、請求項3に記載の微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有し、植物病に対する作物の免疫機能活性能を有する、微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 前記植物病が、トウガラシ疫病(Phytophthora capsici)、トウガラシ軟化病(Pectobacterium carotovora)、トウガラシ炭疽病(Colletotrichum acutatum)、及びキュウリモザイクウイルス(cucumber mosaic virus)の中から選ばれたいずれか一つであることを特徴とする、請求項5に記載の微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有し、作物の耐寒性増大能を有する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 微生物農薬、微生物肥料、種子コーティング剤、土壌改良剤、堆肥腐熟剤、葉面撒布剤、及び灌注撒布剤のいずれか一つの有効成分として用いられる、請求項1〜7のいずれか1項に記載の微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有し、作物の生育を促進能、植物病原性菌への抗菌活性能、植物病に対する作物の免疫機能活性能、及び作物の耐寒性増大能の少なくともいずれか一つを有する微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BP。
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有する微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BPの菌体またはその培養液を含む、微生物製剤。
- 配列番号1に示す16S rRNAの配列を有する微生物バチルスバリスモルティス(Bacillus vallismortis)BS07M菌株KCTC11991BPの菌体またはその培養液から生産されるイツリン(Iturin)系化合物を含む、微生物製剤。
- 請求項10または11の微生物製剤を作物に撒布または土壌灌注し、作物の生育を促進する作物育成方法。
- 請求項10または11の微生物製剤を作物に撒布または土壌灌注し、植物病原性菌を防除する作物育成方法。
- 請求項10または11の微生物製剤を作物に撒布または土壌灌注し、作物の耐寒性を増強させる作物育成方法。
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