CN108497054A - 一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，所述方法包括：将备好的生姜采用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸，或放入高地芽孢杆菌14b发酵滤液中浸泡10～15min，然后放入气调箱中。本发明采用菌液死谷芽孢杆菌12a产生的挥发性抑菌气体熏蒸生姜来防治病虫害，操作简单、对病虫害的控制效果好，不使用任何有毒试剂，安全性高；以高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡来防止病虫害，防治效果稳定，对环境友好，工艺简单、生产成本低廉；在上述处理的基础上结合气调处理，高氧气时专性厌氧微生物会受到伤害，对于好氧微生物，氧气浓度高于某一特定值会产生并积累超氧阴离子自由基，对微生物产生毒害。同时可防止CO2浓度过高对生姜产生高CO2伤害，具有更加广泛的应用范围。
Description
技术领域
本发明涉及食品贮藏技术领域，尤其涉及生姜的贮存方法，具体涉及一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法。
背景技术
生姜在我国栽培很普遍，季节性强，它除含有一般的营养成分和许多重要的功能成分外，还含有一些特殊的成分，如姜酮、姜烯、姜酚等，产生辛辣和芳香的味道。因此，生姜除了做蔬菜以外，还是重要的调味品和中药材。采用合适的贮藏保鲜技术是保证生姜周年供应、调节市场盈缺的重要手段。
生姜贮存期间受霉菌(主要是黑曲霉菌Aspergillus niger和白地霉Geotrichumcandidum)及姜蛆的危害严重，导致大量损失。霉菌病在生姜块茎受伤、高温高湿的条件下特别容易发生，致使生姜表面产生一层黑斑块或烂皮，随着病情的发展，白霉菌和黑霉菌逐渐向块茎内渗透，造成块茎大面积腐烂。异型眼蕈蚊的幼虫俗称姜蛆，是生姜贮藏过程中的主要害虫，姜块一旦被异型眼蕈蚊幼虫危害，其经济价值大大降低。目前，控制生姜采后病虫害的主要手段是使用化学药剂，虽然取得较好的防治效果，但是长期使用化学杀菌杀虫剂，使病菌与害虫产生了抗药性，导致化学药剂的使用剂量及其残留量大大提高，食品安全隐患大。因此，迫切需要寻求一种绿色无害，安全高效的防治生姜贮藏期间病虫害的新方法，来逐步减少化学药剂的使用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，利用死谷芽孢杆菌菌液熏蒸处理或者利用高地芽孢杆菌发酵滤液浸泡处理，结合气调贮藏，降低发病率的同时抑制姜蛆导致的生姜虫害发生率。绿色无毒，安全高效。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，所述方法包括：将备好的生姜采用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸，或放入高地芽孢杆菌14b发酵滤液中浸泡10～15min。
作为优选，所述方法还包括：
将用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸过的生姜或高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡过的生姜，于室温下自然晾干后放入气调箱中，使气调箱内的气体比例为O2:CO2＝9:1。
本发明中，采用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸或高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡生姜，利用死谷芽孢杆菌12a菌液产生的挥发性抑菌气体熏蒸生姜来防治病虫害，操作简单、对病虫害的控制效果好，在处理和贮藏中不使用任何有毒试剂，安全性高；以高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡来防治病虫害，防治效果稳定，对环境友好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉，具有很高的应用价值和广阔的市场前景。后续结合气调处理，O2:CO2＝9:1，采用高氧气调，专性厌氧微生物就会受到伤害，而对于好氧微生物氧而言，氧气浓度高于某一特定值，就会产生并积累超氧阴离子自由基，对微生物产生毒害，进一步防治病虫害，同时，高氧气调可以防止CO2浓度过高对生姜产生高CO2伤害，或者产生异味等不良现象，因此具有更加广泛的应用范围。
作为优选，所述气调箱内的温度为12℃。
作为优选，所述高地芽孢杆菌14b发酵滤液的制备方法包括：
S01：活化菌株：将保存好的高地芽孢杆菌14b划线转接到NA培养基：麦芽汁培养基＝1:1的混合培养基中，置于培养箱中32℃恒温保湿培养24h；
S02：制备种子液：挑取混合培养基上生长良好的拮抗菌株高地芽孢杆菌14b单菌落接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1混合培养基中，32℃条件下60％光照振荡培养48h，振荡频率130～180r/min；
S03：制备发酵液：按体积比以5％的接种量将所述步骤S02中制备的菌株14b的种子液接种于NB麦芽汁混合液体培养液中，装料量为50～100mL/250mL，培养基初始pH值为7、发酵温度为32℃、振荡频率为130～180r/min、发酵时间为48h、光照强度为60％制得高地芽孢杆菌14b发酵液；
S04：制备发酵液滤液：将所述步骤S03中制备得到的高地芽孢杆菌14b发酵液在8000r/min条件下离心10～20min，取上清液，通过D＝0.22μm的微孔滤膜过滤得到发酵滤液原液，用无菌水将所述发酵滤液原液稀释至10～100倍制得高地芽孢杆菌14b发酵滤液。
以高地芽孢杆菌14b制备发酵滤液，防治效果稳定，对环境友好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉，具有很高的应用价值和广阔的市场前景。
作为优选，所述死谷芽孢杆菌12a菌液的制备方法包括：
将保存的死谷芽孢杆菌12a接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1的混合培养基中振荡培养40～50h，然后放到紫外光下照射处理2min,得到死谷芽孢杆菌12a菌液。
作为优选，所述死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸生姜的方法为：
将死谷芽孢杆菌12a菌液倒置于密封罐的隔板下层，密封罐的隔板上层放置生姜，密封罐盖，熏蒸20～30min。此处的密封罐包括上层和下层，上下层通过一镂空的隔板隔开，使上下层空气连通。
选用拮抗菌(死谷芽孢杆菌12a)菌液产生的挥发性抑菌气体熏蒸生姜来防治病虫害，操作简单、对病虫害的控制效果好，在处理和贮藏中不使用任何有毒试剂，安全性高，具有广阔的市场前景。
作为优选，所述备好的生姜为：用清水冲洗干净、并用纱布吸取表面多余水分的生姜。
本发明实施例提供的技术方案可以包含以下有益效果：
本发明提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，所述方法包括：将备好的生姜采用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸，或放入高地芽孢杆菌14b发酵滤液中浸泡10～15min。采用菌液死谷芽孢杆菌12a产生的挥发性抑菌气体熏蒸生姜来防治病虫害，操作简单、对病虫害的控制效果好，在处理和贮藏中不使用任何有毒试剂，安全性高，具有广阔的市场前景。以高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡来防止病虫害，防治效果稳定，对环境友好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉，具有很高的应用价值和广阔的市场前景。在上述处理的基础上结合气调处理，利用高氧气调对害虫来说，专性厌氧微生物就会受到伤害，而对于好氧微生物氧气浓度高于某一特定值，就会产生并积累超氧阴离子自由基，对微生物产生毒害。同时可以防止CO2浓度过高对生姜产生高CO2伤害，或者产生异味等不良现象，具有更加广泛的应用范围。
附图说明
为了更清楚的说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单介绍，显而易见的，对于本领域技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是基于菌株12a的16S rDNA构建的系统发育树。
图2是基于菌株14b的16S rDNA构建的系统发育树。
图3为本发明实施例提供的第一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法的基础流程示意图。
图4为本发明实施例提供的第二种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法的基础流程示意图。
图5为本发明实施例提供的第二种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法中高地芽孢杆菌14b发酵滤液的制备流程示意图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案,下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明的保护范围。
以下实施例中涉及到的死谷芽孢杆菌12a为于2016年3月4日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：：CGMCC No.12179；涉及到的高地芽孢杆菌14b于2016年3月4日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：CGMCC No.12180。
保藏号为CGMCC No.12179的菌株记载在专利CN 105907669 A中，保藏号为CGMCCNo.12180的菌株记载在专利CN 105820981 A中。
实施例1
本实施例提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，具体操作如下：
将生姜用清水冲洗干净，用纱布吸去生姜表面多余水分后备用。将保存的拮抗菌12a接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1的混合培养基中振荡培养48h并通过紫外光照射处理后，在密封罐的隔板下层倒置菌液，上层放置洗净擦干的生姜，用凡士林密封罐盖，熏蒸20min后将生姜取出。为使染菌量均一，每个姜块刺3个3mm*3mm*3mm的伤口，再分别接种1*04cfu/mL的生姜霉菌病的孢子悬浮液20μL，将上述处理的姜块于20±1℃保湿贮藏，每隔3d测量病斑直径，计算抑菌率，详情见表1。每次每个处理8个姜块，该试验重复三次。
生长抑制率＝(对照病斑直径-处理病斑直径)/对照病斑直径*100％。
对比例1
只将实施例1中密封罐的隔板下层倒置的12a菌液改变为相同体积的无菌水对生姜进行熏蒸，其他试验条件以及所测指标均与实施例1相同。
表1：拮抗菌12a对生姜采后病害的控制效果
上表1中，每一列的不同字母(a,b)表示同一种处理和对照间在P＜0.05水平上有显著性差异。
由表1可见，未经拮抗菌12a菌液熏蒸处理的生姜在第3天的发病率为19％，而经过菌液熏蒸处理的生姜第6天才开始发病，而且发病率和病斑直径均显著小于对照处理，有较高的抑菌率，说明拮抗菌12a菌液熏蒸处理可以抑制生姜霉菌病的发病率，抑制病斑扩展，可以有效延缓采后病害的发生。
实施例2
本实施例提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，具体操作如下：
将生姜用清水冲洗干净，用纱布吸去生姜表面多余水分后备用。用高地芽孢杆菌14b发酵滤液原液稀释10倍得到的发酵滤液浸泡10min，室温下放置自然晾干后在每个姜块刺3个3mm*3mm*3mm的伤口，再接种1*104cfu/mL的生姜霉菌病孢子悬浮液30μL。将上述处理的姜块于20±1℃保湿贮藏，每隔3天测量病斑直径，计算抑菌率，详情见表2。每次每个处理8个姜块，该试验重复三次。
其中，发酵滤液的制备方法如下：
S01：活化菌株：将保存好的高地芽孢杆菌14b划线转接到NA培养基：麦芽汁培养基＝1:1的混合培养基中，置于培养箱中32℃恒温保湿培养24h。
S02：制备种子液：挑取混合培养基上生长良好的拮抗菌株高地芽孢杆菌14b单菌落接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1的混合培养基中，32℃条件下60％光照振荡培养48h，振荡频率180r/min。
S03：制备发酵液：按体积比以5％的接种量将所述步骤S02中制备的菌株14b的种子液接种于NB麦芽汁混合液体培养基中，装料量为100mL/250mL，培养基初始pH值为7、发酵温度为32℃、振荡频率为180r/min、发酵时间为48h、光照强度为60％制得14b发酵液。
S04：制备发酵液滤液：将所述步骤S03中制备得到的14b发酵液在8000r/min条件下离心20min，取上清液，通过D＝0.22μm的微孔滤膜过滤得到发酵滤液原液，用无菌水将所述发酵滤液原液稀释至10倍制得14b发酵滤液。
生长抑制率＝(对照病斑直径-处理病斑直径)/对照病斑直径*100％。
对比例2：只将实施例2中高地芽孢杆菌14b发酵滤液原液稀释10倍得到的发酵滤液改变为相同体积的无菌水对生姜进行浸泡处理，其他试验条件以及所测指标均与实施例2相同。每隔3天测量病斑直径，详情见表2。
表2：高地芽孢杆菌14b的发酵滤液浸泡处理对姜块上病斑扩展的影响
上述表2中：每一列的不同字母(a，b)表示同一品种姜块处理和对照间在P＜0.05水平上有显著性差异。
由上表2可知，经菌株14b发酵滤液处理过的姜块的病斑直径明显小于对照组，有较高的抑制率，说明高地芽孢杆菌14b微生物菌剂可抑制病斑扩展，有效延缓采后病害的发生，减轻采后病害的侵染情况。
实施例3
选取生命力强，大小一致的姜蛆置于塑料托盘中，每盘含姜蛆幼虫50头，每个处理分三组平行试验，分别置于4个适宜容积且大小形状相同的气调箱内，置于20℃培养箱中进行处理。处理期间，4个气调箱分别通入气体质量分数为100％O2、90％O2+10％CO2、80％O2+20％CO2的气体，以自然空气作为对照(CK)，通气速率为0.01m3·min-1，通入气体用O2/CO2测定仪每2h校正一次。处理过程中每隔6h进行相应指标的测定，详情见表3。姜蛆死亡率的测定方法是直接观察法，姜蛆死亡后颜色会从白色变为黑褐色，另外给予其针刺等刺激后无反应也可作为一种辅助的判断措施。
对比例3：将实施例3中通入气调箱中的气体改变为自然空气对姜蛆幼虫进行气调处理，其他试验条件以及所测指标均与实施例3相同。每隔6h进行相应指标的测定，详情见表3。
表3：气调处理对姜蛆死亡率的影响
死亡率是表征气调抑制姜蛆活性的最重要指标，因此可以根据姜蛆死亡程度来判断气调效果的好坏。由表3可知，处理期间除对照处理外，各处理的姜蛆死亡率均呈现先快后慢的上升趋势，其中以90％O2+10％CO2处理姜蛆死亡率上升最快，36h内死亡率就高于70％；其他两组处理姜蛆死亡率均低于90％O2+10％CO2处理组，80％O2+20％CO2处理致死效果最差。
实施例4
本实施例提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，具体操作如下：
将生姜用清水冲洗干净，用纱布吸去生姜表面多余水分，将保存的拮抗菌12a接种到5L NB麦芽汁混合液体培养基中振荡培养50h后在紫外光下照射处理2min，在密封罐的隔板下层倒置菌液，上层放置洗净擦干的生姜，用凡士林密封罐盖，熏蒸30min后将生姜取出接种1*104个孢子/mL的病原菌孢子悬浮液20μL和15头姜蛆幼虫/kg生姜，放气调箱中，用N2赶走空气，用精准配气系统将气调箱内的气体比例配成O2：CO2＝9：1，每个处理三组重复，放到12℃的气调库中贮藏，每隔2d测量病斑直径和虫斑直径并调查病害的发病率，每隔12h调查姜蛆的死亡率和姜蛆侵染率。详情见表4。
对比例4
将实施例4中的密封罐的隔板下层倒置的12a菌液改变为相同体积无菌水对生姜进行熏蒸，其他试验条件以及所测指标均与实施例4相同。每隔2d测量病斑直径和虫斑直径并调查病害的发病率，每隔12h调查姜蛆的死亡率和姜蛆侵染率。详情见表4。
对比例5
将实施例4中通入的气体成分改变为自然空气对其进行气调处理，其他试验条件以及所测指标均与实施例4相同。每隔2d测量病斑直径和虫斑直径并调查病害的发病率，每隔12h调查姜蛆的死亡率和姜蛆侵染率。详情见表4。
实施例5
本实施例提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，具体操作如下：
将生姜用清水冲洗干净，用纱布吸去生姜表面多余水分后备用。然后将备好的生姜放入上述制备得到的高地芽孢杆菌14b发酵滤液中浸泡15min，室温下放置，自然晾干后接种1*104个孢子/mL的病原菌孢子悬浮液30μL和15头姜蛆幼虫/kg生姜，放入气调箱中，用N2赶走空气，用精准配气系统将气调箱内的气体比例配成O2：CO2＝9：1，每个处理三组重复，放到12℃的气调库中贮藏，每隔2d测量病斑直径和虫斑直径并调查病害的发病率，每隔12h调查姜蛆的死亡率和姜蛆侵染率。详情见表4。
对比例6
将实施5中的高地芽孢杆菌14b发酵滤液原液稀释10倍得到的发酵滤液改为相同体积的无菌水对生姜进行浸泡处理，其他试验条件以及所测指标均与实施例5相同。每隔2d测量病斑直径和虫斑直径并调查病害的发病率，每隔12h调查姜蛆的死亡率和姜蛆侵染率。详情见表4。
对比例7
将实施例5中通入的气体成分改变为自然空气对其进行气调处理，其他试验条件以及所测指标均与实施例5相同。每隔2d测量病斑直径和虫斑直径并调查病害的发病率，每隔12h调查姜蛆的死亡率和姜蛆侵染率。详情见表4。
表4：气调结合拮抗菌处理对生姜病虫害控制的影响
注：每一列的不同字母(a，b，c，d)表示同一处理和对照间在P＜0.05水平上有显著性差异。
由表4可知，12a死谷芽孢杆菌熏蒸处理以及高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡处理可以明显降低病害的发病率，气调处理也能明显提高姜蛆的死亡率,降低侵染率。同时，生物防治与物理防治结合的方法其病害发病率均低于对比例发病率，姜蛆的死亡率均高于对比例。
实施例6
本实施例提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，具体操作如下：
将生姜用清水冲洗干净，用纱布吸去生姜表面多余水分。将保存的拮抗菌12a接种到5L NB麦芽汁混合液体培养基中振荡培养40h后在紫外光下照射处理2min，在密封罐的隔板下层倒置菌液，上层放置洗净擦干的生姜，用凡士林密封罐盖，熏蒸20min后将生姜取出放气调箱中，用N2赶走空气，用精准配气系统将气调箱内的气体比例配成O2：CO2＝9：1，每个处理三组重复，放到12℃的气调库中贮藏，定期观察气调箱内贮存生姜的病虫害发生率，详情见表5。
实施例7
本实施例提供一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，具体操作如下：
将生姜用清水冲洗干净，用纱布吸去生姜表面多余水分后备用。将保存好的高地芽孢杆菌14b划线转接到NA培养基：麦芽汁培养基＝1:1的混合培养基中，置培养箱32℃恒温保湿培养24h；挑取生长良好的拮抗菌14b单菌落接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1的混合培养基中，32℃下60％光照振荡培养48h，振荡频率为130～180r/min；按体积比以5％的接种量将上述菌株14b种子液接种于NB麦芽汁混合液体培养基中，装料量为50～100mL/250mL，初始pH值为7，发酵温度为32℃，振荡频率为130～180r/min，发酵时间为48h、光照强度为60％制得14b发酵液；将发酵液在8000r/min下离心10～20min，取上清，通过D＝0.22μm的微孔滤膜过滤得到发酵滤液原液，用无菌水将该发酵滤液原液稀释至10倍制得14b发酵滤液。将备好的生姜放入发酵滤液中浸泡15min，室温下放置自然晾干后放入气调箱中，用N2赶走空气，用精准配气系统将气调箱内的气体比例配成O2：CO2＝9：1，每个处理三组重复，放到12℃的气调库中贮藏，定期观察气调箱内贮存生姜的病虫害发生率，详情见表5。
对比例8：贮存所用生姜不经过拮抗菌剂熏蒸或浸泡且不对其进行气调处理。其他指标均与实施例6和实施例7相同。定期观察贮存生姜的病虫害发生率，详情见表5。
表5：气调结合拮抗菌处理对生姜贮藏期间病虫害的影响
注：每一列的不同字母(a，b)表示同一处理和对照间在P＜0.05水平上有显著性差异。
由表5可知，经过拮抗菌处理的生姜在贮藏期间其病害发生率均低于对照组，其抑菌作用明显。同时处理组在气调箱内均未发现有姜蛆危害的姜块。由此可以说明在生姜长期贮藏中，气调结合拮抗菌处理可以明显降低生姜病虫害发病率。
实施例8
平板对峙实验：将生姜致病病原菌(黑曲霉和白地霉)以及其他常见果蔬致病病原菌经分离纯化后，在无菌条件下每种致病菌用打孔器打取5mm菌饼接种于PDA培养基平板中央，在距菌饼四周的2cm处点接死谷芽孢杆菌12a菌液或高地芽孢杆菌14b发酵滤液，对照组点接无菌水，封口膜密封，置于25℃培养箱培养，每个菌种处理做三个重复，3～5d后观察抑菌效果。详情见表6。
表6：拮抗菌对生姜病原菌以及常见果蔬病原菌的拮抗作用
“－”表示没有拮抗效果；“+”表示抑菌圈直径m≤12mm；“++”表示抑菌圈直径12mm＜m＜18mm；“+++”表示抑菌圈直径m≥18mm。
由表6可知，拮抗菌对生姜贮藏期间主要病害致病菌(黑曲霉和白地霉)具有较好的拮抗作用，而对常见果蔬致病病原菌拮抗效果甚微。桔青霉是附着在苹果等水果上常见的真菌；禾谷镰刀菌是引起小麦等粮食作物腐败的真菌；链格孢菌是多种水果蔬菜病害的常见致病菌，引起多种经济植物病害，造成田间和产后损失。
本发明实施例中，所述生姜均购买于山东潍坊安丘。所述生姜均无病害、无机械伤，成熟度一致。
综上所述，本发明针对生姜贮存特制的高地芽孢杆菌14b发酵滤液、死谷芽孢杆菌12a菌液对生姜采后病害有较强的拮抗作用，同时气调处理能明显抑制姜蛆活性，显著提高其死亡率，降低侵染率。物理防治结合生物防治方法抑制生姜病虫害安全有效，在该领域具有广阔的应用前景。
当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。
Claims (7)
1.一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述方法包括：将备好的生姜采用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸，或放入高地芽孢杆菌14b发酵滤液中浸泡10～15min。
2.根据权利要求1所述的一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述方法还包括：
将用死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸过的生姜或高地芽孢杆菌14b发酵滤液浸泡过的生姜，于室温下自然晾干后放入气调箱中，使气调箱内的气体比例为O2:CO2＝9:1。
3.根据权利要求2所述的一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述气调箱内的温度为12℃。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述高地芽孢杆菌14b发酵滤液的制备方法包括：
S01：活化菌株：将保存好的高地芽孢杆菌14b划线转接到NA培养基：麦芽汁固体培养基＝1:1的混合培养基中，置于培养箱中32℃恒温保湿培养24h；
S02：制备种子液：挑取混合培养基上生长良好的拮抗菌株高地芽孢杆菌14b单菌落接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1的混合培养基中，32℃条件下60％光照振荡培养48h，振荡频率130～180r/min；
S03：制备发酵液：按体积比以5％的接种量将所述步骤S02中制备的菌株14b的种子液接种于NB麦芽汁混合液体培养液中，装料量为50～100mL/250mL，培养基初始pH值为7、发酵温度为32℃、振荡频率为130～180r/min、发酵时间为48h、光照强度为60％制得高地芽孢杆菌14b发酵液；
S04：制备发酵液滤液：将所述步骤S03中制备得到的高地芽孢杆菌14b发酵液在8000r/min条件下离心10～20min，取上清液，通过D＝0.22μm的微孔滤膜过滤得到发酵滤液原液，用无菌水将所述发酵滤液原液稀释至10～100倍制得高地芽孢杆菌14b发酵滤液。
5.根据权利要求1-3任一项所述的一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述死谷芽孢杆菌12a菌液的制备方法包括：
将保存的死谷芽孢杆菌12a接种到NB液体培养基：麦芽汁液体培养基＝1:1的混合培养基中振荡培养40～50h，然后放到紫外光下照射处理2min,得到死谷芽孢杆菌12a菌液。
6.根据权利要求1-3任一项所述的一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述死谷芽孢杆菌12a菌液熏蒸生姜的方法为：
将死谷芽孢杆菌12a菌液倒置于密封罐的隔板下层，密封罐的隔板上层放置生姜，密封罐盖，熏蒸20～30min。
7.根据权利要求1-3任一项所述的一种防治生姜贮藏期间的病虫害的方法，其特征在于，所述备好的生姜为：用清水冲洗干净、并用纱布吸取表面多余水分的生姜。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180907 |
|
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