JP5550021B2 - 血液試料を用いて心筋虚血状態を評価する方法 - Google Patents
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Description
また、当該公報においては、上記の測定とともに、BNP値が低い(具体的には39.6pg/mL)患者についても同様の測定を行っているが、このようなBNP値が低い患者については、特定のBNPペプチドの検出に至っていないため、全く情報は得られていない。
また、本発明は、従前の方法では心不全を含む心血管疾患の有無を判断することができないBNP値(すなわち心不全疑いの有無の判断の閾値範囲18.4〜150pg/mL)を示す血液試料からであっても、心不全以外の心血管疾患、特に心筋虚血状態の有無を判断することを可能にする指標を提供することを目的とする。
(1)
被験者に由来する血液試料であって、BNP1−32分子(配列番号1)、BNP3−32分子(配列番号2)、BNP4−32分子(配列番号3)、BNP5−32分子(配列番号4)、及びBNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子からなる群から選ばれる少なくとも2種を含むB型ナトリウム利尿ホルモン(BNP)分子群を含有する血液試料を、質量数の異なる前記各BNP分子の区別及び定量が可能な検出工程に供することによって、前記BNP分子群を検出し、
前記BNP分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比を指標として、前記被験者における心筋虚血状態を評価する方法。
BNP3−32分子は、BNP1−32分子のN末端の2アミノ酸SP(アミノ酸一文字略号により表示、以下において同様)がプロセスされて生じる断片であり、配列番号2に示すアミノ酸配列を有する。BNP4−32分子は、BNP1−32分子のN末端の3アミノ酸SPKがプロセスされて生じる断片であり、配列番号3に示すアミノ酸配列を有する。BNP5−32分子は、BNP1−32分子のN末端の4アミノ酸SPKMがプロセスされて生じる断片であり、配列番号4に示すアミノ酸配列を有する。
前記分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比は、
前記BNP1−32分子の検出強度及び前記BNP3−32分子の検出強度の和と、前記BNP5−32分子の検出強度との比
である、(1)に記載の方法。
{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) (式1)
(式中、I(BNP 1-32)は前記BNP1−32分子の検出強度であり、
I(BNP 3-32)は前記BNP3−32分子の検出強度であり、
I(BNP 5-32)は前記BNP5−32分子の検出強度である。)
及びその逆比のいずれかで表される。
前記分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比は、
前記BNP3−32分子の検出強度と、前記BNP5−32分子の検出強度との比
である、(1)又は(2)に記載の方法。
I(BNP 3-32)/I(BNP 5-32) (式2)
(式中、I(BNP 3-32)は前記BNP3−32分子の検出強度であり、I(BNP 5-32)は前記BNP5−32分子の検出強度である。)
及びその逆比のいずれかで表される。
上記(2)及び(3)において、好ましくは、前記心筋虚血状態が、虚血性心疾患によるもの、又はPCI後の再狭窄によるものである、
前記分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比は、
前記BNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子の検出強度と、前記BNP5−32分子の検出強度との比
である、(1)〜(3)のいずれかに記載の方法。
I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32) (式3)
(式中、I(BNP 5-32)は前記BNP5−32分子の検出強度であり、
I(BNP 5-32+)は前記BNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子の検出強度である。)
及びその逆比のいずれかで表される。
前記血液試料は、BNP測定値が18〜150pg/mLである被験者の血液検体そのもの又は血液検体から調製されたものである、(1)〜(4)のいずれかに記載の方法。
前記心筋虚血状態が、虚血性心疾患によるもの、又はPCI後の再狭窄によるものである、(1)〜(5)のいずれかに記載の方法。
前記血液試料が、前記被験者の血液検体を、前記B型ナトリウム利尿ホルモン分子群に対する抗体を用いた免疫学的濃縮に供することによって調製されるものである、(1)〜(6)のいずれかに記載の方法。
また、本発明によると、従前の方法では何らかの心血管疾患の疑いがあるとあいまいに判断されるのみで、心血管疾患の有無を判断することができないBNP値(すなわち心不全疑いの有無の判断の閾値範囲18.4〜150pg/mL)を示す血液試料からであっても、心血管疾患の有無を判断することが可能になる。
本発明は、従来用いられていたBNPについての量的観点に基づいた指標(すなわちBNP値)とは異なり、BNPについての質的観点に基づいた指標を用いる方法であるため、量的観点のみでは得られない情報を血液試料から得ることを可能にした。すなわち、本発明は、心筋虚血状態の検査を、血液検査のみによって行うことを初めて可能にした。
[1−1.被験者]
本発明の方法において被験者となりうる者は、主訴の有無を問わずどのような者でも許容される。具体的には、人間ドック患者、虚血性心疾患患者、PCIを受けた患者、心不全患者などが挙げられる。特に、従前の検査法で心臓カテーテル検査が必要とされる患者が挙げられる。また、高血圧、高脂血症、糖尿病などの疾患に罹患している者又はその疑いがある者であっても良い。
本発明で用いられる血液検体の形態としては、全血、血漿、血清が挙げられるが、中でも血漿の形態であることが好ましい。血漿の形態の血液検体を用いることによって、後述の検出工程での検出対象となるBNPの不必要な断片化(例えばC末端からの切断)を防ぐことができ、より正確な評価を行うことが可能になる。
血液検体には、血液安定剤が適宜含まれてよい。
血液安定剤としては、プロテアーゼ阻害剤や抗凝固剤などが挙げられる。このような血液安定剤としては、例えば、アプロチニン、エチレンジアミン四酢酸、ヘパリン、クエン酸、フッ化ナトリウムが含まれる。これらの血液安定剤は、当業者が適宜選択して用いることができる。本発明では、特にアプロチニンを少なくとも用いることが好ましい。具体的には、採血管にアプロチニン、EDTAを含むものを用いることが好ましい。アプロチニン、EDTAを含む採血管を用いることによって、後述の検出工程での検出対象となるBNPの不必要な断片化を防ぐことができ、より正確な評価を行うことが可能になる。
本発明において、BNP測定値又はBNP値とは、心不全などのマーカーとして広く臨床応用されている指標をいう。BNP値は、公知の方法、例えばEIA法(酵素免疫測定法)によって測定される。本発明における質的観点からみれば、BNP値とは、後述の検出工程での検出対象となるBNP分子群を含む、異なる分子量を有するBNP分子混合物全体の濃度である。
このようなBNP値を示す血液検体に対して好ましい指標としては、後述の4−1−1、4−1−2、4−1−3に記載する指標が挙げられる。
このようなBNP値を示す血液検体に対して好ましい指標としては、後述4−1−1、4−1−2に記載する指標が挙げられる。
本発明において、血液試料とは、検出工程に供される試料をいう。従って、血液試料は、上記の血液検体を適当な処理に供して調製したものであっても良いし、上記の血液検体そのものであっても良い。
本発明で検出対象となる分子は、血液試料中に存在するB型ナトリウム利尿ホルモン(BNP)分子群である。BNP分子群を構成する分子には、BNP1−32、BNP1−32からプロセシングを受けて生じた断片、及び/又はそれらを基本とする誘導体が含まれうる。BNP分子群を構成するこれら分子には、被験者の生体内で生じたものが含まれなければならない。
本発明においては、血液検体中に含まれるBNP分子群を免疫学的に濃縮することが好ましい。免疫学的濃縮法としては、免疫複合体が形成しうる条件下で、血液試料中のBNP分子群と、BNP分子群に対する抗体とを接触させることにより、BNP分子群を特異的に濃縮することができる方法であればどのような方法であっても良く、当業者によって適宜選択されうる。また、具体的なプロトコルも当業者によって容易に選択されうる。
本発明においては、免疫沈降法を用いることが好ましい。この方法においては、免疫複合体が形成しうる条件下で、血液試料と、対象となるBNP分子群に対する抗体と、沈降用の担体とを共存させ、免疫沈降物を得る。この方法は、操作が簡便でコスト性が良く、非常に汎用性が高い点で好ましい。
免疫学的濃縮において用いられる抗体の他の例としては、濃縮対象とするBNP分子群に含まれるBNP分子の各々を別々に認識する複数種の抗体の混合物が挙げられる。この抗体は、濃縮対象とするBNP分子群に含まれる特定のBNP分子における特徴的な領域を使用し、その領域を有するペプチド断片を認識することができる抗体として、当業者によって適宜調製されうる。
上記の血液試料は検出工程に供される。検出工程においては、質量数の異なるBNP分子の区別及び定量が可能な方法を用いる。すなわち、BNP分子群に含まれるそれぞれの分子の区別及び定量が可能な方法を用いる。ここでいう定量とは、それぞれのBNP分子の絶対量ではなく、相対量の測定が可能であれば足りる。検出工程で用いられる方法は、上記のような方法であればどのような方法であっても良く、当業者によって適宜選択されうる。具体的には、生体特異的親和性に基づく方法や、質量分析法が挙げられる。
生体特異的親和性に基づく方法を用いる場合は、血液検体を上記の免疫学的濃縮に供し、得られた血液試料を検出工程に供しても良いし、上記の免疫学的濃縮を行うことなく、血液検体(例えば血漿検体)そのものを血液試料として検出工程に供しても良い。
質量分析法を用いる場合は、血液検体を上記の免疫学的濃縮に供し、得られた血液試料を検出工程に供することが好ましい。
質量分析法は、当業者に周知の方法であり、タンパク質・ペプチド分子の検出が可能なイオン化手段及び検出手段を特に限定することなく、当業者が適宜選択することができる。例えば、イオン化法として、電子イオン化法(EI)、化学イオン化法(CI)、高速原子衝撃法(FAB)、エレクトロスプレーイオン化法(ESI)、大気圧化学イオン化法(APCI)法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法(MALDI)、表面増強レーザー脱離イオン化法(SELDI)などを用いることができる。好ましくは、MALDI-TOF型質量分析装置を用いることができる。SELDI法を用いる場合は、上記免疫学的濃縮において用いられる抗体を用いることができる。
[4−1.指標]
本発明においては、上記の方法によって検出されたBNP分子群から選択される少なくとも1つの分子の検出強度と、当該BNP分子群から選択される少なくとも1つの他の分子の検出強度との比を評価のための指標とする。この指標は、これまでのBNPについての量的観点に基づいた指標(すなわちBNP値)とは異なり、BNPについての質的観点に基づいた指標である。このため、従来の方法と異なり、量的観点のみでは得られない情報を血液試料から得ることが可能になる。すなわち、当該指標によって、血液試料から心筋虚血の有無すなわち冠動脈の有意な狭窄(具体的には冠動脈造影所見で75%以上、左冠動脈主幹部においては50%以上)の有無を判断することが可能になる。
本発明において用いられる指標の一例として、BNP1−32分子の検出強度及びBNP3−32分子の検出強度の和と、BNP5−32分子の検出強度との比が挙げられる。具体的には、
下記式:
{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) (式1)
(式中、(BNP 1-32)は前記BNP1−32分子の検出強度であり、
I(BNP 3-32)は前記BNP3−32分子の検出強度であり、
I(BNP 5-32)は前記BNP5−32分子の検出強度である。)
で表される比及びその逆比が挙げられる。
ここで、BNP1−32分子は、分解を受けやすく、血液採取後速やかにBNP3−32へ変化することが、本発明者らによって確認されている。そのため、臨床検体その他の条件によってはBNP1−32分子が観測されない、或いはほとんど観測されない場合もある。そのような場合においては、上記の指標において考慮されたBNP1−32分子を無視した指標を用いることもできる。
I(BNP 3-32)/I(BNP 5-32) (式2)
(式中、I(BNP 3-32)は前記BNP3−32分子の検出強度であり、I(BNP 5-32)は前記BNP5−32分子の検出強度である。)
で表される比及びその逆比が挙げられる。
本発明において用いられる指標のさらなる他の一例として、BNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子の検出強度と、BNP5−32分子の検出強度との比が挙げられる。具体的には、下記式:
I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32) (式3)
(式中、I(BNP 5-32)は前記BNP5−32分子の検出強度であり、I(BNP 5-32+)は前記BNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子の検出強度である。)
で表される比及びその逆比が挙げられる。
このような指標を利用して狭窄の有無を判断する場合、患者に由来する血液試料についての当該比の値を、あらかじめ定めた基準値と比較すると良い。基準値は、例えば、予め上記の比の値を確認した複数の被験者について、心臓カテーテル検査による狭窄があったか否かの結果を、統計学的解析手法を用いて解析することにより設定することができる。
1)血漿調製
被験者:インフォームドコンセントの得られた健常者から採血を行った。
採血:肘静脈より一般的な方法で採血した。採血管としては、EDTA−アプロチニン採血管及びEDTA採血管を検討した。血清調製のためには血清分離剤を含む一般的な採血管を使用した。
採血後の処理:採血後直ちに外部からBNP1−32(最終濃度200fmol/mL)をスパイクし、採血後ただちに血漿分離を行った(実際に調製のために要した時間は15〜30分である)。また、時間変化を検討した結果、ただちに血漿分離が不可能な場合は、4度もしくは氷上にて保管後6時間以内に血漿分離を行った。その血漿は直ちに液体窒素で凍らせ、マイナス80度にて保存した。
その結果を図1に示す。図1(i)〜(iii)が示すように、いずれもN末端のSPの2アミノ酸(アミノ酸一文字略号で表記、以下において同様)がプロセスされたフラグメント(BNP3−32)が生じていることがわかった。N末端のSPの2アミノ酸がプロセスされることは、従来から報告のあるとおりである。
一方、図1(ii)及び(iii)が示すように、EDTA−アプロチニン採血管を使用した場合、N末端のSPKがプロセスされたフラグメントが極微量検出されたものの、C末端がプロセスされたフラグメントはほとんど検出されなかった。
なお、採血から血漿調製までの時間変化についても検討した。すなわち、採血後ただちに血漿分離を行った場合、4度で6時間保管後に血漿分離を行った場合のそれぞれについて分析した。その結果、この両者で変化のないことを確認した(データ示さず)。
1)血漿調製
被験者:インフォームドコンセントの得られた健常者から採血を行った。
採血:肘静脈よりEDTA−アプロチニン採血管を使用して採血した。
採血後の処理:採血後はすみやかに氷上、もしくは4度にて保存した。採血後6時間以内に血漿分離を行い、その血漿はただちに液体窒素で凍らせ、マイナス80度にて保存した。この血漿を融解し、BNP混合物(Mixed BNP)として、BNP1−32、BNP3−32、BNP4−32及びBNP5−32(各々5fmolずつ)を添加した。このようなBNP添加検体(500μL)を2個調製した。
また別途、BNP添加を行わずに血漿分離を行った検体も調製し、上記と同様に凍結保存した。このようなBNP非添加検体(500μL)も2個調製した。
1次抗体にKYBNPII((株)塩野義製薬より供与を受けたもの)を、2次抗体に抗マウスIgG結合ビーズ(Dynabeads M-280 Sheep anti-Rabbit IgG、ベリタス社、カタログNo.112.03)を用いて、血漿中のBNPを免疫沈降した。
具体的には、上記BNP添加検体のうち1個と、上記BNP非添加検体のうち1個とのそれぞれについて、以下の方法により免疫沈降を行った。
次に、KYBNPII 2μLを加え、室温で1時間インキュベートすることにより、KYBNPIIをビーズに結合させた。
対照としては、KYBNPIIを加えずに、ビーズを室温で1時間インキュベートした。
これらのビーズをPBSで5回洗浄した後、KYBNPIIを結合させたビーズを20μLのPBSに懸濁し、氷上においた。
マイナス80度にて保存しておいた検体を、37度の温浴槽にてすみやかに融解し、氷上においた。
融解した検体(500μL)に、PBS(10×)50μL、DDW 440μL、10%(w/v) Zwittergent (Calbiochem社)を加え1mLとした。
上記のKYBNPIIを結合させたビーズを20μL加えた。
対照として、上記でKYBNPIIを加えずに1時間インキュベートしたビーズを20μL加えた。
室温にて1時間インキュベートし、血漿中のBNPをビーズに結合させた。
このビーズをPBSで4回洗浄した。
さらに、20mM NH4HCO3で1回洗浄した。
このビーズからのBNPの溶出は、5μLの0.5%(v/v) TFAを用いて行った。
以下の(a)〜(d)の検体について、質量分析を行った。
(a):BNP濃縮操作を行ったBNP添加検体
(b):BNP濃縮操作を行わなかったBNP添加検体
(c):BNP濃縮操作を行ったBNP非添加検体
(d):BNP濃縮操作を行わなかったBNP非添加検体
マトリックスには5mg/mL DHBと2.5mg/mL のCHCAの混合マトリックスを用いた。
風乾後、すみやかにAXIMA-CFR plusにて分析を行った。
AXIMA-CFR plusでの分析はリニアモードで行い、m/zの較正にはACTH (18-39) fragment、Insulin oxidized B-chainを用いた。
ヒト市販血清0.5mLに、下記濃度のBNP1−32を加えて調製した血清サンプル(e)、(f)、(g)、(h)、(i)及び(j)を、実験例2と同様のBNP濃縮及び質量分析に供した。
(e):20fmol(70pg)/0.5mL血清
(f):10fmol(35pg)/0.5mL血清
(g):5fmol(17.5pg)/0.5mL血清
(h):2.5fmol(8.75pg)/0.5mL血清
(i):1fmol(3.5pg)/0.5mL血清
(j):0fmol(0pg)/0.5mL血清
1)血漿調製
被験者:心臓カテーテル検査を行う患者のうち、インフォームドコンセントの得られた患者(♯1037)から採血を行った。
採血:カテーテル導入前にカテーテルシースより血液を採取し、その血液をEDTA−アプロチニン採血管に分注した。この患者のBNP値は、117.1pg(〜33fmol)/mLであった。
採血後の処理:採血後4度で保管し、6時間以内に血漿分離を行った。その血漿は直ちに液体窒素で凍らせ、分析に供するまでマイナス80度にて保存した。
3)以下のサンプル(k)、(l)、(m)について、実施例2と同様に質量分析に供した。
(k):BNP濃縮を行った♯1037検体
(l):BNP濃縮を行わなかった♯1037検体
(m):健常者由来血漿にBNP混合物(BNP1−32、BNP3−32、BNP4−32及びBNP5−32;各々5fmolずつ)を添加したサンプル
本実施例では、インフォームドコンセントが得られた患者♯1086(BNP値:89.0pg/mL)及び患者♯1067(BNP値:92.6pg/mL)から採血した血液を、実験例4と同様に血漿分離、BNP濃縮及び質量分析に供した。
本実施例では、インフォームドコンセントが得られた24患者から採血した血液(BNP値:40.8pg/mL〜147.8pg/mL)を、実験例4と同様に血漿分離、BNP濃縮及び質量分析に供した。
心臓カテーテルの診断結果情報から、狭窄があった患者と、有意な狭窄がなかった患者とについて、当該比の値との相関を調べた。なお、有意な狭窄の有無という2群判別にはStudentのt検定(両側)および、後述の実施例4でROC曲線を用いた検討を行った。
図6が示すように、有意な狭窄が有ると診断された患者では、有意な狭窄が無いと診断された患者と比較して、I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32)の値が有意に(p=0.002)大きいという結果が得られた。すなわち、BNP値が40.8pg/mL〜147.8pg/mLである場合に、有意な狭窄が有ると診断された患者と有意な狭窄が無いと診断された患者とでは、I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32)の値に顕著な相関が見られた。
本実施例では、インフォームドコンセントが得られた41患者から採血した血液(BNP値:21.4pg/mL〜147.8pg/mL)について、実施例2と同様にMSシグナルのパターン解析、及び当該パターンと有意狭窄の有無との相関の調査を行った。
図7が示すように、有意な狭窄が有ると診断された患者では、有意な狭窄が無いと診断された患者と比較して、I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32)の値が有意に(p=0.0026)大きいという結果が得られた。すなわち、BNP値が21.4pg/mL〜147.8pg/mLである場合にも、有意な狭窄が有ると診断された患者と有意な狭窄が無いと診断された患者とでは、I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32)の値に顕著な相関が見られた。
本実施例では、有意な狭窄の有無という2群判別にROC曲線を用いた解析を行った。BNP値x(pg/mL)の範囲が、10<x<150、40<x<150、及び10<x<40の場合について、得られたROC曲線を図8に示す。図8が示すように、BNP値の範囲が40<x<150の場合に特に精度が良く、この場合のAUCは0.94、I(BNP 5-32+)/I(BNP 5-32)=0.75としたときの感度は91%、特異度は85%であった。
本実施例では、インフォームドコンセントが得られた33患者から採血した血液(BNP値:21.9pg/mL〜645.8pg/mL)について、実施例2と同様にMSシグナルのパターン解析、及び当該パターンと有意狭窄の有無との相関の調査を行った。なお、2群判別にはWilcoxon検定を用いた。
図9が示すように、有意な狭窄が有ると診断された患者では、有意な狭窄が無いと診断された患者と比較して、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) の値が有意に(p=0.0007)小さいという結果が得られた。すなわち、有意な狭窄が有ると診断された患者と有意な狭窄が無いと診断された患者とでは、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) の値に顕著な相関が見られた。
本実施例では、有意な狭窄の有無という2群判別にROC曲線を用いた解析を行った。BNP値が21.9pg/mL〜645.8pg/mLの33患者について、得られたROC曲線を図10に示す。図10が示すように、AUCは0.85、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32)=0.79としたときの感度は79%、特異度は93%であった。
実施例5における33患者について、実施例5と同様に当該パターンと高血圧の有無との相関の調査を行った。
図11が示すように、高血圧と判断される患者(HTN+)と判断されない患者(HTN-)との間には、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) の値に有意な差はない(p=0.8411)という結果が得られた。すなわち、狭窄の有無と当該指標の値との間の相関関係が示された実施例5で得られた結果と異なり、高血圧の有無と当該指標の値とでは相関がないことが示された。
実施例5における33患者について、実施例5と同様に当該パターンと高脂血症の有無との相関の調査を行った。
図12が示すように、高脂血症と判断される患者(HL+)と判断されない患者(HL-)との間には、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) の値に有意な差はない(p=0.7680)という結果が得られた。すなわち、狭窄の有無と当該指標の値との間の相関関係が示された実施例5で得られた結果と異なり、高脂血症の有無と当該指標の値とでは相関がないことが示された。
実施例5における33患者について、実施例5と同様に当該パターンと糖尿病の有無との相関の調査を行った。
図13が示すように、糖尿病と判断される患者(DM+)と判断されない患者(DM-)との間には、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) の値に有意な差はない(p=0.5712)という結果が得られた。すなわち、狭窄の有無と当該指標の値との間の相関関係が示された実施例5で得られた結果と異なり、糖尿病の有無と当該指標の値とでは相関がないことが示された。
実施例5における33患者について、実施例5と同様に当該パターンと性別との相関の調査を行った。
図14が示すように、男性(M)と女性(F)との間には、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 5-32) の値に有意な差はない(p=0.5383)という結果が得られた。すなわち、狭窄の有無と当該指標の値との間の相関関係が示された実施例5で得られた結果と異なり、性別と当該指標の値とでは相関がないことが示された。
指標として、I(BNP 4-32)/I(BNP 5-32)を用いた以外は、実施例5と同様にMSシグナルのパターン解析、及び当該パターンと有意狭窄の有無との相関の調査を行った。その結果を図15に示す。図15が示すように、有意な狭窄が有ると診断された患者と有意な狭窄が無いと診断された患者との間において、当該指標のp値は、0.0771であった。
指標として、{I(BNP 1-32)+I(BNP 3-32)}/I(BNP 4-32)を用いた以外は、実施例5と同様にMSシグナルのパターン解析、及び当該パターンと有意狭窄の有無との相関の調査を行った。その結果を図16に示す。図16が示すように、有意な狭窄が有ると診断された患者と有意な狭窄が無いと診断された患者との間において、当該指標のp値は、0.3820であった。
また、本発明によると、従前の方法では何らかの心血管疾患の疑いがあるとあいまいに判断されるのみで、心血管疾患の有無を判断することができないBNP値(すなわち心不全疑いの有無の判断の閾値範囲18.4〜150pg/ml)を示す血液試料からであっても、心血管疾患の有無を判断することが可能になる。
Claims (6)
- 被験者に由来する血液試料であって、BNP1−32分子(配列番号1)、BNP3−32分子(配列番号2)、BNP4−32分子(配列番号3)、BNP5−32分子(配列番号4)、及びBNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子からなる群から選ばれる少なくとも2種を含むB型ナトリウム利尿ホルモン(BNP)分子群を含有する血液試料を、質量数の異なる前記各BNP分子の区別及び定量が可能な検出工程に供することによって、前記BNP分子群を検出し、
前記BNP分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比を指標として、前記被験者における心筋虚血状態を評価する方法であって、
前記分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比は、
前記BNP1−32分子の検出強度及び前記BNP3−32分子の検出強度の和と、前記BNP5−32分子の検出強度との比
である、心筋虚血状態を評価する方法。 - 被験者に由来する血液試料であって、BNP1−32分子(配列番号1)、BNP3−32分子(配列番号2)、BNP4−32分子(配列番号3)、BNP5−32分子(配列番号4)、及びBNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子からなる群から選ばれる少なくとも2種を含むB型ナトリウム利尿ホルモン(BNP)分子群を含有する血液試料を、質量数の異なる前記各BNP分子の区別及び定量が可能な検出工程に供することによって、前記BNP分子群を検出し、
前記BNP分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比を指標として、前記被験者における心筋虚血状態を評価する方法であって、
前記分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比は、
前記BNP3−32分子の検出強度と、前記BNP5−32分子の検出強度との比
である、心筋虚血状態を評価する方法。 - 被験者に由来する血液試料であって、BNP1−32分子(配列番号1)、BNP3−32分子(配列番号2)、BNP4−32分子(配列番号3)、BNP5−32分子(配列番号4)、及びBNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子からなる群から選ばれる少なくとも2種を含むB型ナトリウム利尿ホルモン(BNP)分子群を含有する血液試料を、質量数の異なる前記各BNP分子の区別及び定量が可能な検出工程に供することによって、前記BNP分子群を検出し、
前記BNP分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比を指標として、前記被験者における心筋虚血状態を評価する方法であって、
前記分子群から選択される少なくとも1種の分子の検出強度と、前記分子群から選択される少なくとも1種の他の分子の検出強度との比は、
前記BNP5−32分子より質量数が16Da大きい分子の検出強度と、前記BNP5−32分子の検出強度との比
である、心筋虚血状態を評価する方法。 - 前記血液試料は、BNP測定値が18〜150pg/mlである被験者の血液検体そのもの又は血液検体から調製されたものである、請求項1〜3のうちのいずれかに記載の方法。
- 前記心筋虚血状態が、虚血性心疾患によるもの、又は冠動脈インターベンション後の再狭窄によるものである、請求項1〜4のうちのいずれかに記載の方法。
- 前記血液試料が、前記被験者の血液検体を、前記B型ナトリウム利尿ホルモン分子群に対する抗体を用いた免疫学的濃縮に供することによって調製されるものである、請求項1〜5のうちのいずれかに記載の方法。
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