JP5524857B2 - 効率的アスピリンプロドラッグ - Google Patents

Description

本発明は、湿分および胃腸管の内腔で遭遇する条件に対して安定であるが、吸収の間および後に急速に分解して、アスピリンおよび／または一酸化窒素（ＮＯ）を放出する、強力なアスピリンプロドラッグに関する。

アスピリンは、世界で最も広く使用されている薬剤の１つである。通常の使用は、全ての心臓血管リスク群における死亡リスクの低下に関連している。アスピリンは抗炎症性、鎮痛性および解熱性の薬剤であり、心臓血管疾患の治療に使用されており、結腸直腸癌、食道癌、胃癌および肺癌（例えば、Ｃｈａｎ ２００５）ならびに脳卒中、アルツハイマー病（Ｅｔｍｉｎａｎら、２００３）および他の形態の認知症を予防することにおいて役割を有することが予測される。いくつかのモデルは、５０才より上の人々による毎日のアスピリン消費が、９０才代まで生きる可能性を２倍にすると予測している（Ｍｏｒｇａｎ，２００３）。

アスピリン使用に関連した主要副作用は、胃腸管系である。アスピリンは、全患者のほぼ半数において消化不良を生じ、胃腸出血のリスクを３倍にする。内視鏡管理下試験は、心筋梗塞（ＭＩ）の予防に使用される全アスピリン用量において高い出血リスクを示し、比較的低用量でさえも示す。１つの試験において、低用量アスピリン（１０〜３００ｍｇ／日）の患者の１０％が、１２週間後に内視鏡検査による潰瘍を有し、１つの症例は１０ｍｇ／日で生じた（Ｃｒｙｅｒ ＆ Ｆｅｌｄｍａｎ，１９９９、Ｃｒｙｅｒ ２００２）。いくつかの試験は、出血が治療の開始後５〜３０日で始まっていることを示しており、これは適応が生じていないことを示す。重要なことに、胃腸副作用のリスクは、アスピリンの使用を、血栓性事象の高可能性を有する患者グループに限定した：ランダム集団において、重度胃腸損傷のリスクは、アスピリンで予防できる死のリスクより高い。現在のところ、癌におけるアスピリンの予防的使用について信頼できる用量関連データが存在しないが、心臓発作の予防における確立された役割に必要とされる至適用量より高いと考えられ、従って、より高い胃腸毒性の高いリスクの可能性がある。絶対リスクは低い（１〜２％）が、その広範囲かつ急速に増加する消費により、アスピリン誘発胃腸毒性は公衆衛生上の関心事になっている（Ｍｏｒｇａｎ，２００３；Ｌａｈｅｉｊ ２００１；Ｎｅｗｔｏｎら、２００４）。

アスピリン胃腸毒性の多くの原因が認識されている。消化管壁は、保護層によって、刺激の強い管腔内容物から保護されている。このバリヤーは、２つのシクロオキシゲナーゼ酵素（ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２）によって部分的に維持されている。アスピリンの心臓血管保護作用は、血小板シクロオキシゲナーゼ酵素ＣＯＸ−１の阻害から生じるが、その細胞保護作用は、アラキドン酸を癌プロモーターであるＰＧＥ_２から癌サプレッサーであるＨＥＴＥに向かわせるシクロオキシゲナーゼ酵素ＣＯＸ−２をアセチル化するその特有の能力に起因すると考えられる。ＣＯＸ−２は、ＧＩＴにおける創傷治癒においても役割を担っている。アスピリンは、吸収の間に消化管を通過する際に、これらの酵素を阻害し、それによってそれらの保護機能を減少させる。従って、毒性の生化学的側面は、アスピリンによるＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の局所阻害に起因し、これは、胃酸分泌および血流を正常に調節するプロスタグランジン（ＰＧＥ_２、ＰＧＩ_２）の抑制を生じる。アスピリン毒性の明らかな化学的側面も存在する。アスピリンは疎水性酸（ｐＫａ３．５）である。アスピリンは、低いｐＨ値において脂溶性であり、上皮を覆っている疎水層を崩壊させることができ、それによって、管腔内容物の接近を可能にし、刺激を引き起こし、最終的に潰瘍化を生じる。これは、生化学成分より重大な毒性原因となりうる。最近の１つの研究において、ラットへの経口アスピリン投与は胃病変を生じたが、薬剤を皮下投与した場合は、両経路からのＣＯＸの阻害の形跡にも関わらず、胃損傷がなかった（Ｍａｈｉｔａ，２００６）。薬剤誘発胃腸毒性は、極めて複雑であり、頻繁に矛盾する研究結果を有する問題であるが、この特定の研究は、化学毒性が有意であることを示している。

胃腸毒性の問題は、長年にわたり薬学的関心の的となっているが、内視鏡的試験は、従来の解決策、例えば、腸溶コーティングまた緩衝化が、充分ではないことを示している（Ｋｅｌｌｙら、１９９６、Ｗａｌｋｅｒら、２００７）。従って、アスピリンを送達する、またはその胃腸作用に対処する、新しい方法を確立することは、公衆衛生上の重要事であり、有意な商機である。

この問題の潜在的に有用な解決策は、血漿に吸収された後まで、胃腸管でのアスピリン放出を遅らせることができるアスピリン誘導体の設計である。そのような誘導体は、正確には、プロドラッグと称すべきである。プロドラッグは、それ自体は不活性であるが、代謝時に活性剤を形成する治療薬である（Ａｌｂｅｒｔ，１９５８）。アスピリンプロドラッグは、その胃毒性を抑制する手段として、長年にわたり調査されている（Ｊｏｎｅｓ，１９８５）。

初期のアスピリンプロドラッグ理論は、例えばエステルによって、アスピリンカルボン酸をブロッキングすることが、アスピリンカルボン酸と胃粘膜との直接接触によって生じる胃毒性の化学的側面を有効に排除しうることを提示している。このモデルが正しければ、胃腸管上皮を通過する間に活性化されるアスピリンエステルは、薬剤放出が上皮細胞内で起こる場合でも、極めて低い胃毒性を示すと予測される。

アスピリン毒性の生化学成分がより広く理解されるようになった際に、このプロドラッグ理論は洗練された。アスピリンと対照的に、そのエステルは、ＣＯＸを阻害する能力を有していない。従って、それらは、消化管壁を通過する間に、保護的なプロスタグランジンの合成を妨げない。次に、吸収後に、血中のエステラーゼがエステルを分解し、アスピリンを放出させる。後に、薬剤が、体循環によって消化管に到達するが、かなり低い濃度で到達する；アスピリンは、体内で急速に代謝され、たった２０分間の半減期を有する。ＣＯＸ依存性粘膜防御システムの有効な遮断は、かなり高濃度のアスピリンを必要とすると考えられる。これは、アスピリンが、一方のＣＯＸ酵素（ＣＯＸ−１）の弱い阻害物質であり、もう一方（ＣＯＸ−２）の極めて弱い阻害物質であるからである。言い換えれば、アスピリンは、吸収段階の間に両方の保護酵素を阻害するが、吸収後の全身への分布後に両酵素をブロックするのに必要とされる濃度に達する可能性は低い（同様の薬物動態学議論は、心臓における内皮プロスタサイクリンより血小板トロンボキサンＡ_２に対するアスピリンの選択的阻害を説明している（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ Ａ．Ｋ．＆ ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ Ｇ．Ａ．１９８４）。

従って、アスピリンプロドラッグエステルは、局所刺激を生じないので、低い胃腸毒性を有すると推測され、高濃度でのアスピリンの胃腸の第一通過が回避され、第二分布は、ＣＯＸ−２依存性保護機能を損なわずに維持する濃度における分布である可能性がある。そのようなアスピリンエステルプロドラッグの着想は、プロドラッグが保護バリヤーの通過の間は酸性でなく、それを崩壊させないので、魅力的である。さらに、それらは、上皮において活性化されるか、特にその後に血流に入った後に活性されるかに関係なく、バリヤーを調節する生化学的機構に対して小さい影響を有することも予想される。これは、アスピリン関連の有害な胃腸作用が回避されるという利点を有する。薬剤は、胃腸管を通過し終えるまで活性化されないので、より安全である（図１）。

臨床的観点からのアスピリンの他の問題は、湿分に対して不安定であり、従って、液剤に配合できないことである。アスピリンの水溶液は、小児および老人用の医薬において特に望ましい。アスピリンの不安定性の主要原因の１つは、ＪｅｎｃｋｓおよびＰｉｅｒｒｅ（１９５８）によって最初に記載された自己媒触反応の形態である。アスピリンは、カルボン酸基およびアセチル基を有する。カルボン酸基は、近くの水分子を活性化して水酸化物を生成する能力を有し、該水酸化物はアセチル基を攻撃する。アスピリンのエステルを形成することによって、カルボン酸基はマスクされ、自己触媒反応に係わることができない。アスピリンエステルは、通常、アスピリンより安定であり、従って、アスピリンに適用できない種々の有用な方法で配合される可能性を有する。アスピリンエステルのこの第二の利点は、実験的に充分に確認されている。

一方、アスピリン毒性の除去の仮定理論は、好適なアスピリンエステルプロドラッグ候補が存在しなかったので、試験されていない。これは、アスピリンエステルプロドラッグを設計するのが極めて困難だからである。パラセタモール−ベノリレートというアスピリンエステルは、ヒトへのその投与量がアスピリン放出を生じないことが明らかになるまで、約３０年間にわたって市販されていた（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、１９８９）。

アスピリンエステルおよび関連誘導体に関する問題は、代謝の問題である。アスピリンエステルは、体内で、アスピリンではなくサリチル酸に変換される（Ｎｉｅｌｓｅｎ ＆ Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，１９８９）。アスピリンエステルは、ヒト組織および血液中で、図２に示されている可能経路によって代謝される。有効なアスピリンプロドラッグは、吸収後にアスピリンを遊離する担体基において、開裂されるべきである。アスピリンエステルの急速な加水分解は、血液および血漿中で起こる（ｔ_１／２＜１分）が、所望のアスピリン−担体エステル結合（図２のＢ位置）においてではない。その代わりに、アセチル基が開裂し（図２のＡ）、得られる生成物は、サリチル酸エステル、最終的にはサリチル酸である。この生化学経路はアスピリンを生成することができない。サリチレート対アスピリンの比率は、担体基がなんであろうと、通常、９９：１より大きい（カルボン酸薬剤を有するエステルを形成するのに使用されるプロドラッグのアルコール成分は、プロドラッグの専門用語においては担体として既知である）。エステルを酸薬剤から形成する場合、結合させる部分は、酸化学をブロックするが、それは、新しい存在物上に、いくつかのそれ自身の物理化学的性質をも与える（図２参照）。この問題は、製薬上の難題および商機の両方として、関心を集めている。この分野において、かなり多くの学術的文献および特許文献が存在する（Ｇｉｌｍｅｒら、２００２およびその中の参考文献を参照）。しかし、文献においてアスピリンプロドラッグと呼ばれている大多数の化合物は、実際は、生体外または生体内においてアスピリンプロドラッグとして機能せず、その代わりに、対応するサリチル酸エステルを放出する（Ｎｉｅｌｓｅｎ ＆ Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，１９８９）。

アスピリンエステルがプロドラッグとして機能するために、血液中での加水分解、開裂は、担体エステル結合において起こらなければならない。設計上の問題は、アスピリンをエステル化することによって、ヒト血漿の存在下において誤ったエステル基が加水分解することである。この問題は、Ｎｉｅｌｓｅｎ ＆ Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，１９８９によって最初に説明された。アスピリンが血流に入った際に、そのアセチル基が、ヒト血漿における主要エステラーゼ酵素−ブチリルコリンエステラーゼ（ＢｕＣｈＥ）によって加水分解されて、サリチル酸の生成が生じる。アスピリンは、血液ｐＨにおいて負に荷電され、ブチリルコリンエステラーゼは、負に荷電された基質を処理する際、実際には最も有効ではない。アスピリンをエステル化することによって、負電荷（代謝を抑制する）が除去され、アセチル基が、ブチリルコリンエステラーゼにかなりよく適した基質になる。従って、新しいエステル基の導入は、既存のアセチルエステルの代謝速度をかなり促進させる。例えば、アスピリンは、希薄血漿中で約１時間の半減期を有するが、アスピリンエステルは同じ脱アセチル過程を１分未満の半減期で受ける：中性フェニルアセテート、例えばアスピリンエステルは、ブチリルコリンエステラーゼの、最も効果的に加水分解される基質型に含まれる。基礎酵素学の観点からこれを解釈すれば、アスピリンエステルは、アスピリン自体より、その酵素に適合する。代謝が正確な位置で起こるようにするために、担体基がアセチル基に競合する相補性構造を有さなければならず、即ち、担体基が少なくともアセチル基と同様にＢｕＣｈＥ酵素に対して誘引性の基質でなければならないことを、Ｂｕｎｄｇａａｒｄは認識していた。それ自体の加水分解を促進するが、同時に、近接アセチル基の加水分解を抑制するさらに適した担体基が考えられる。ブチリルコリンエステラーゼ酵素は、コリンのエステルの加水分解におけるその有効性から名前を取っている。ＮｅｉｌｓｅｎおよびＢｕｎｇａａｒｄは、アスピリンのグリコールアミドエステルについて研究し、それにおいて、担体基がコリンに似るように設計し、その分離がアセチル基加水分解とうまく競合できるようにした。グリコールアミドは部分的に成功しているにすぎず、大部分の成功例は、所望方向および非生産的方向の両方において（図２の経路ＡおよびＢ）約５０％加水分解された。ＮｅｉｌｓｅｎおよびＢｕｎｇａａｒｄの研究は、成功のアスピリンプロドラッグが、アセチル基への優先度を超えるように、ヒト血漿エステラーゼに適合する担体基を必要とするという重要な原理を確立した。これは、極めて厳しい条件であることが分かり、該条件に対するそれらの反応は部分的に適切であるにすぎなかった。しかし、本明細書中に記載した技術は別にして、グリコールアミドは、部分的にでも、真のアスピリンプロドラッグとして記載することができる唯一の既知化合物である。

随時採用されている別の方法は、エステラーゼがアセチル基を攻撃しうる前に分解するように、アスピリン−担体結合が不安定なエステルを設計することである。このアプローチの問題点は、アスピリンが、水に対して、およびそのアセチル基における他の求核物質による加水分解に対して、すでにかなり不安定なことである。第二の化学的に活性なエステルの導入は、アセチル基の反応性を高める作用（および、別の不安定位置を付加する作用）を有する。水のような化学刺激によって開裂を受けることが計画的に意図されたアスピリンエステルは、貯蔵の間にそのような刺激に遭遇する可能性が高く、それによって貯蔵時に分解を受けやすいという明らかな欠点を有する。これは、第一に、アスピリンエステルプロドラッグの利点の１つ（それらは湿分に対してアスピリンより安定である）を無効にする。一般的な化学刺激に反応して開裂するように設計されたプロドラッグも、それらが吸収前に出会うＧＩＴに見られる条件下において、分解する傾向がある。

アスピリンプロドラッグ分野における関心は、いわゆる一酸化窒素（ＮＯ）−アスピリンの出現と共に高まっており、それはアスピリンエステルの一種であるが、ＮＯ−放出成分が担体基に結合している。ＮＯ−アスピリンの開発の主要な理論的根拠は、ＮＯが粘膜防御を促進し、アスピリンによって生じた損傷を相殺することである（Ｆｉｏｒｕｃｃｉ ａｎｄ Ｄｅｌ Ｓｏｌｄａｔｏ，２００３）。この概念は、現在、生医学界において充分に受け入れられている。一酸化窒素およびアスピリンは、相補的および時に相乗的な薬理学的作用も有し、それによって、その組合せは、アスピリン単独より広い範囲の薬理学的作用を示すと予想される。ＮＯ放出は、血流を促進し、白血球粘着を減少させることによって、アスピリン誘発胃糜爛から胃を保護するが、ＧＭＰ経路によるその抗血栓特性は、アスピリンによるＣＯＸ−１阻害から生じる抗血小板作用を高める。従って、アスピリンおよび一酸化窒素の相互プロドラッグを生成するために、それらをエステルとして結合させることは合理的であると考えられる。ＮＣＸ−４０１６（ＮｉｃＯｘ ＳＡ、Ｆｒａｎｃｅ）は、ＮＯ−アスピリン薬剤の原型化合物である（特許文献１、特許文献２、特許文献２、特許文献３）。それは、生体内でＮＯを生成し、抗血小板作用を有する。ＮＣＸ−４０１６は、いくつかの動物モデル（ｍｏｄｅｓ）において、アスピリンより高い胃耐容性を示す。ＮＣＸ−４０１６は、１９９６年に前臨床開発が開始され、２００２年から、心臓血管障害（例えば、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）（第ＩＩ期））の処置、大腸癌予防（第Ｉ期）および癌疼痛において評価が行なわれている。

ＮＣＸ−４０１６は、過去１０年間で最も広く推奨されている医薬開発の１つであり、重要な生物医学的進歩と考えられた（例えばＬｅｖｉｎ，２００４参照）。しかし、ＮＯ−アスピリンプロドラッグとして、ＮＣＸ−４０１６は重大な設計上の欠点を有するとみられる。アスピリンエステルプロドラッグの主要試験は、それがヒト血漿または血液中でインキュベートされた場合に、それがアスピリンまたはそのサリチル酸エステルに加水分解されるかどうかということである。ＮＣＸ−４０１６は、置換フェノールのアスピリンエステルである。ヒト血漿におけるＮＣＸ−４０１６の加水分解パターンに関する公表データは存在しないが、類似のエステルであるパラセタモールというアスピリンエステル（ベノリレート、Ｗｉｌｌｉａｍｓら、１９８９）、グイカオールというアスピリンエステル（Ｑｕら、１９９０）、およびフェノールのアスピリンエステル（Ｎｉｅｌｓｅｎ ＆ Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，１９８９；表８も参照）については存在する。これらの化合物のいずれもが、関連生物学的マトリックス中でインキュベートされた場合に、０．５％より多いアスピリンを生成しなかった。従って、ＮＣＸ−４０１６がアスピリンを生成することができる、または生成するはずであるという直接的根拠がない。該化合物に関する生体内試験および生体内代謝試験は、サリチレート代謝産物のみに言及している（Ｃａｒｉｎｉら、２００２）。さらに、ＮＣＸ−４０１６によるＣＯＸ阻害は、アスピリンにおける場合ほど大きくない。これは重大な欠陥であり、なぜなら、血小板ＣＯＸ阻害は、ヒト血小板凝集を予防するためにかなり完全である必要があるからである。別の最近の研究は、ＮＣＸ−４０１６が、アスピリンを放出せずに、その標的に直接的に作用しうることを示唆している（Ｃｏｒａｚｚｉら、２００５）。最近、ヒト組織においてアスピリンおよび一酸化窒素の両方を遊離することができる化合物を設計するために他の多くの努力がなされている。結果は、失望させるものであった。報告されている全ての化合物は、典型的なサリチレート経路によって加水分解を受け、有意量のアスピリンを遊離することができないが、それらは潜在的に一酸化窒素を放出することができる（Ｇｉｌｍｅｒら、２００７；Ｖａｌｅｚｑｕｅｚら、２００５；Ｃｅｎａら、２００３）。

特許文献４は、臨床的に使用されているイソソルビドニトレートであるＩＳＭＮのサリチル酸エステルを記載している。記載された該化合物は、イソソルビド−モノ−ニトレートアスピリネート（ＩＳＭＮＡ）であり、その経皮貼布での使用可能性が議論されている。

該化合物は、その抗狭心症特性および血小板洗浄特性について有用であると記載されている。化学的加水分解試験は、イソソルビド−モノ−ニトレート（ＩＳＭＮ）、サリチル酸、ならびに血小板洗浄活性および抗狭心症活性を示すアスピリンの生成を伴う分解を示すと報告された。しかし、ＩＳＭＮＡが実行可能なアスピリンプロドラッグとして作用しうるとは予想されない。なぜなら、グリコールアミド以外に他のアスピリンエステルがアスピリンプロドラッグとして作用することが示されておらず、また、これらは血漿ＢｕＣｈＥと相補性になるように極めて意図的に設計されているからである。しかし、ＩＳＭＮＡは、生体外のウサギ組織において、血小板凝集の強力な阻害剤であることが分かり、後に、ＩＳＭＮＡがウサギ血漿エステラーゼによってアスピリンに効果的に変換されることが示された。それは、イヌにおける経口試験で試験され、該試験において、それは、下記の２つのアスピリンの薬理学的特徴において、アスピリンと比較された：トロンボキサン（血小板を刺激して凝集させる生化学物質）の生合成の阻害、および血小板凝集の機能阻害。ＩＳＭＮＡは、両マーカーに対して弱い作用を示し、これは、イヌにおいて少量のアスピリンを放出したにすぎないことを示している。ＩＳＭＮＡをイヌ血液中でインキュベートし、その加水分解を監視することによって、本発明者らは、イヌおよびウサギの血液中のエステラーゼの違いにより、それがイヌエステラーゼによってアスピリンに効果的に変換されないことを示すことができた。後に、ＩＳＭＮＡがヒト血漿においても生産的に加水分解されないことが明らかになった。生体外のヒト血漿溶液およびヒト血液中において、ＩＳＭＮＡは、＞９０％サリチレートおよび＜１０％アスピリンを生成する。同様に、ＩＳＭＮＡは、ヒト全血およびヒト血小板に富む血漿における血小板凝集の阻害剤として、アスピリンよりかなり低い効力である（そのＩＣ５０は、血小板に富む血漿中のアラキドン酸に対するヒト血小板凝集において、アスピリンの５μＭと比較して８５μＭである）。その結果は、アスピリンのエステルに関して、血小板凝集またはトロンボキサン合成を阻害する能力が、アスピリンを生成する能力と相関関係にあることを教示している：非効率なプロドラッグは、血小板凝集の非有効阻害剤になる。低レベルのアスピリン放出および効力の不足は、イソソルビド−モノ−ニトレートアスピリネート（ＩＳＭＮＡ）がヒト用の実行可能な薬剤候補になるのを妨げる。

特許文献５は、イソソルビドのジ−アスピリネート、およびイソソルビドの２つのモノ−アスピリネートエステル、即ち、イソソルビド−２−アスピリネートおよびイソソルビド−５−アスピリネートを開示している。特許文献５の主要な対象物であるイソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ）は、試験された他の多くの以前のエステルプロドラッグ候補物質と表面上はなんら変わりはなかった。

さらに、当業者は、イソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ）が実行可能なアスピリンプロドラッグとして機能することを予想しておらず、そして、加水分解が、アセチル基開裂、最終的にはサリチル酸以外のものを生じうると考えられる化学的または生化学的根拠を有していなかった。従って、本発明者らが本発明者ら自身の実験室において、ＩＳＤＡがウサギ血小板に富む血漿中で血小板凝集を阻害することを示せたことは、極めて驚きであった。それは、イヌのグループへの経口投与後に、トロンボキサン合成に対する阻害作用も有していた（Ｇｉｌｍｅｒら、２００３）。アスピリン様特性は、血漿中でのＩＳＤＡの加水分解がいくらかのアスピリンを生じることを示した。ＩＳＤＡは、燐酸緩衝ヒト血漿溶液中でインキュベートした場合に、急速な加水分解を受けて約６０％のアスピリンを生じることが示された（Ｇｉｌｍｅｒら、２００２）。残り４０％の化合物は、非生産的サリチレート経路に沿って加水分解された。その研究は、ヒト血漿に存在する特定酵素が、イソソルビドジアスピリネート（ＩＳＤＡ）からのアスピリン放出を触媒することを示した。ブチリルコリンエステラーゼが、関与しているヒト血漿酵素であることが確認された。緊密に関係しているウマ血漿ブチリルコリンエステラーゼは、たった１１％のアスピリンを生じた。Ｇｉｌｍｅｒら（２００１、２００２）、は、さらに、イソソルビド−モノ−ニトレートアスピリネート（ＩＳＭＮＡ）およびイソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ）の加水分解特性および生物学的作用も記載している。

ジアスピリネートエステルＩＳＤＡならびにＮｉｅｌｓｅｎおよびＢｕｎｇａａｒｄのグリコールアミドエステルは、ヒト血漿中でアスピリンドラッグとして有意な程度に作用することができる化学文献中の唯一のエステルである。アスピリンを加水分解生成物として生成しない化合物は、サリチル酸プロドラッグとしてより適切に分類される。これに関連して、例えば、ＩＳＭＮＡはウサギ組織においてのみアスピリンプロドラッグであるが、ヒト血液中ではサリチル酸プロドラッグである。

国際公開公報第９５／０３０６４１号 国際公開公報第９７／１６４０５号 国際公開公報第００／４４７０５号 国際公開公報第９４／０３４２１号 国際公開公報第９８／１７６７３号

本質的な治療的潜在能力により、そして、アスピリンおよび一酸化窒素の両方を放出できる化合物への要求により、よりすぐれたアスピリンプロドラッグ化合物が緊急に必要とされている。一酸化窒素を放出するアスピリンエステルは、第一に、主要な血漿加水分解モデルにおいて、アスピリンへの変換を受けることができるエステルでなければならない。特に、水性加水分解およびα−キモトリプシンに抵抗し、しかも、ヒト血漿の存在下において急速な加水分解を受けて、アスピリンおよび潜在的に他の薬理学的活性成分、特に一酸化窒素を遊離する、アスピリンプロドラッグ化合物を提供することが望ましい。

本発明により、一般式（Ｉ^＊）で示される一般構造を有するイソソルビドアスピリネート化合物を提供する：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく、ここで、Ｒ^ｒｉｎｇは、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環である］。

本発明は、本明細書に記載されている化合物の薬学的に許容される塩および／または水和物にも関する。

本明細書に使用される「アルキル」という用語は、一般式ＲＣ（Ｏ）Ｒ、またはより具体的には−ＯＣ（Ｏ）Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１のあらゆる一連の一価の基を包含し、それは脂肪族炭化水素から誘導されるエステルである。アルキルエステル鎖のアルキル鎖は、直鎖または分岐鎖であってよく、それにおいて、メチル基（−ＣＨ_３）はＣ_１アルキル基を表わし、エチル（−Ｃ_２Ｈ_５）はＣ_２アルキル基を表わし、プロピル（−Ｃ_３Ｈ_７）はＣ_３アルキル基を表わし、ブチル（−Ｃ_４Ｈ_９）はＣ_４アルキル基を表わし、フェニル（−Ｃ_５Ｈ_７）はＣ_５アルキル基を表わす。

「アルコキシエステル」という用語は、一般式ＲＣ（Ｏ）ＯＲ、またはより具体的には−ＯＣ（Ｏ）ＯＣ_ｎＨ_２ｎ＋１を有する基を包含し、ここで、Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１は直鎖または分岐鎖であってよいアルキル鎖であり、それにおいて、メチル基（−ＣＨ_３）はＣ_１アルキル基を表わし、エチル（−Ｃ_２Ｈ_５）はＣ_２アルキル基を表わし、プロピル（−Ｃ_３Ｈ_７）はＣ_３アルキル基を表わし、ブチル（−Ｃ_４Ｈ_９）はＣ_４アルキル基を表わし、フェニル（−Ｃ_５Ｈ_７）はＣ_５アルキル基を表わす。

「シクロアルキルエステル」という用語は、前記の式のＣ_ｎＨ_２ｎ＋１基が、環式アルキル基、例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン等であることを意味する。

「アリールエステル」という用語は、ＲＣ（Ｏ）Ａｒを意味し、ここで、Ａｒは、単純芳香族環から誘導される任意の官能基または置換基、例えば、ベンゼン環、トルエン、キシレン、安息香酸、ベンゾエート、ニコチネート、クロロベンゼンまたは他のハロベンゼン基を表わす。

「５員複素環のエステル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇによって表わされる任意のエステル官能基を表わし、ここで、Ｒ^ｒｉｎｇは、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環である。好適には、Ｒ^ｒｉｎｇは下記から成る群から選択されうる：チオフェン、チアジアゾリン、ピロール、イミダゾール、チアゾール、ピラゾール、４，５−ジヒドロピロール、イミダゾリジン−２−オン、ピラジン、４，５−ジヒドロチオフェンおよびイミダゾリジン−２−チオン。好ましいＲ^ｒｉｎｇは、下記の複素環である：

本発明の好ましい−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇ基は、イソ−オキサゾールオエート、オキサゾールオエート、またはチアジアゾールオエートである。

好適には、全てのこれらの化合物は、ヒト血漿において、ある程度、アスピリンを活発に放出する。ある化合物は、他の化合物より高い活性を有することが示されているが、ある化合物はＹとして選択される置換基の性質に依存してより低い活性を有する。ある化合物は、アスピリンの他にＮＯを放出する。

好適には、好ましい本発明化合物は、ヒト血漿中で放出される１５％アスピリンより高いか、またはそれに等しい活性を有する。

本発明化合物の一酸化窒素放出基は、硝酸エステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル硝酸エステル、またはＣ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステルを含みうる。

１つの実施形態において、イソソルビドアスピリネート化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、アリールエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステル（それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよい）である］。

しかし、最も好ましいのは、オキサゾールオエート、イソキサゾールエートおよびチアジアゾールオエートから成る群から選択されうる５員複素環を含むエステルを有する化合物である。

好ましい実施形態において、イソソルビドアスピリネート化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエート、ニコチネート、オキサゾールオエート、イソキサゾールエート、チアジアゾールオエート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。

本発明により、一般式（Ｉ^＊）で示される一般構造を有するイソソルビドアスピリネート化合物を提供する：

［式中、Ｙは、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇであり、ここで、Ｒ^ｒｉｎｇは、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよい］。

好ましい実施形態において、一酸化窒素放出基は、下記から成る群から選択されうる：−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２。

特に、好ましい化合物は、一般式（Ｉ^＊）で示される一般構造を有するイソソルビドアスピリネート化合物を包含する：

［式中、Ｙは、

であり、ここで、ＸおよびＹは独立に、Ｏ、ＳおよびＮから選択される］。

他の実施形態において、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する化合物を提供する：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエート、ニコチネート、オキサゾールオエート、イソキサゾールエート、チアジアゾールオエート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ｏ−ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。

他の好ましい化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造によって示される：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。

他の好ましい化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造によって示される：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。

さらに他の好ましい化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造によって示される：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ｏ−ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。

好ましい実施形態において、イソソルビドアスピリネート化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。ベンジルオキシ置換基がアリール環上に使用される場合、それはｏ−ベンジルオキシ置換基であるのが好ましい。

特に好ましい実施形態において、化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。ベンジルオキシ置換基がアリール環上に使用される場合、それはｏ−ベンジルオキシ置換基であるのが好ましい。

さらに他の実施形態において、化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２（ｎ＝１〜８）、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはハロアルキルエステルのうちの少なくとも１つによって置換されてもよい］。ベンジルオキシ置換基が化合物上に存在する場合、それはｏ−ベンジルオキシであるのが好ましい。

好適には、本発明化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ（ａｌｋｙｏｘｙ）、ｏ−ベンジルオキシ、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２（ｎ＝１〜８）、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはハロアルキルエステルのうちの少なくとも１つによって置換されてもよい］。

ハロアルキルエステル基が化合物の一部分である場合、ハロ置換基は、Ｃｌ、ＢｒまたはＦであってよい。

化合物がハロアルキルエステルを含む実施形態において、ハロ置換基は、好適には、Ｃｌ、ＢｒまたはＦである。塩素および臭素が最も好ましい置換基である。しかし、Ｂｒ置換基を有するハロアルキルエステルが特に好ましい。

好適には、本発明化合物は、ヒトカルボキシエステラーゼの活性部位に高度の相補性を有し、それによって理想的経路に沿って加水分解を進め、アスピリンを遊離する。

好都合には、該化合物は、２つ以上のヒト酵素によって特異的に活性化でき、なぜなら、患者が、一方に関して異常酵素機能を有する場合、おそらく他方が補われ、アスピリンを放出するからである。

さらにアスピリンプロドラッグ化合物は、胃腸管の内腔に見出される条件下において安定であるが、血流への吸収後にアスピリンに急速に分解される。

他の利点がこれらの化合物から得られ、なぜなら、それらは湿分に対して安定であり、従って、湿分に遭遇しうる配合において成功裡に使用できるからである。湿分安定性アスピリンプロドラッグは、溶液および経皮形態における配合の可能性を包含する多くの理由から有利である。アスピリンの経皮送達に関する問題の１つは、皮膚からの湿分が、貼付剤中のアスピリン貯留物の加水分解を生じることである。好適には、湿分安定性化合物は、貯蔵のために保護防湿性薬学的包装を必要としない。

好ましい実施形態において、基Ｙは、下記から成る群から選択されうる：

本発明化合物は、一般式（Ｉ）におけるＹがこれらの特定構造のいずれかによって表わされる場合、ヒト血漿において、幾分それぞれ異なる程度にアスピリンを放出し、従って、全て活性である。

しかし、下記から成る群：

から選択されるＹ置換基を有する化合物が特に好ましく、なぜなら、これらの基のいずれかを含む化合物は、ヒト血漿において１５％アスピリン放出より高いか、またはそれに等しい活性を示すからである。

他の好ましい実施形態において、本発明化合物は、１５％レベルより高いかまたはそれに等しいアスピリン放出活性を有する化合物を含み、該レベルは、３７℃、ｐＨ７．４（燐酸緩衝液）の緩衝ヒト血漿への候補エステルの添加後に、ピークアスピリン生成においてＨＰＣＬによって測定される初期エステル濃度（モル）のパーセンテージとしてのアスピリンの量に基づく。

特定の実施形態において、化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、メチル、ベンジルオキシ、メトキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＯ_２、−ＯＡｃ、−ＣＨ_２ＯＮＯ_２のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい］。ベンジルオキシ置換基をアリール環上に使用する場合、それはｏ−ベンジルオキシ置換基であるのが好ましい。

特定の実施形態において、化合物は、一般式（Ｉ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、メチル、ベンジルオキシ、メトキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＯ_２、−ＣＨ_２ＯＮＯ_２のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい］。ベンジルオキシ置換基をアリール環上に使用する場合、それはｏ−ベンジルオキシ置換基であるのが好ましい。

最も好ましいイソソルビドアスピリネート化合物は、下記の構造の１つを有する：

または、イソソルビドアスピリネート化合物は、下記から成る群から選択される任意の１つの構造を有しうる：

本発明の他の態様において、一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有する薬剤用担体化合物を提供する：

［式中、
Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく、ここで、Ｒ^ｒｉｎｇは、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり；
Ｘは、薬剤分子である］。

この態様において、好ましい実施形態は、一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有する薬剤用担体化合物を提供する：

［式中、
Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、アリールエステル、またはＣ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステルであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく；
Ｘは、薬剤分子である］。

本発明の好ましい担体は、一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。

他の実施形態において、本発明の担体は、一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。
ハロアルキルエステル官能基を含む化合物において、ハロ置換基は、Ｃｌ、ＢｒまたはＦであってよいが、Ｂｒが特に好ましい。

好都合にも、本発明のアスピリンプロドラッグ化合物は、水性加水分解およびα−キモトリプシンに抵抗し、しかも、ヒト血漿の存在下に急速加水分解を受けて、アスピリンおよび潜在的に他の薬理学的活性成分を遊離する。好ましい本発明化合物は、アスピリンの他に、一酸化窒素を遊離する。

従って、この態様において、本発明化合物は、より適したアスピリンプロドラッグ化合物、特に、アスピリンおよび一酸化窒素の両方を放出することができるプロドラッグ化合物を提供するので有利である。アスピリンおよび一酸化窒素（ｎｉｔｒｏｕｓ ｏｘｉｄｅ）（ＮＯ）の両方を放出することができるプロドラッグデバイスが特に有利である。そのような化合物は、それらの個別成分より低い毒性であるが、より広い範囲の薬理学的作用および効能を有する可能性が高く、なぜなら、アスピリンおよび一酸化窒素は、心臓血管疾患および癌用途において相乗効果を有するからである。

一酸化窒素放出アスピリンエステルは、まず第一に、主要血漿加水分解モデルまたは類似の生物学的関連モデルにおいて、アスピリンへの変換を受けることができるエステルでなければならない。本発明の担体は、硝酸エステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル硝酸エステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステルを含む一酸化窒素放出基を有しうる。

本発明のプロドラッグが、典型的な消化プロテアーゼの存在下において、および粘膜ＣＡＣＯ−２細胞に見られる酵素に対して、安定であるが、ヒトエステラーゼ、特にＢｕＣｈＥおよびＣＥ−２によって、アスピリンに加水分解しうるという事実により、さらなる利点が得られる。この態様において、担体は、一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエート、ニコチネート、オキサゾールオエート、イソキサゾールエート、チアジアゾールオエート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０であり；
Ｘは、薬剤分子である］。

好適には、本発明の担体は、それらのヒトエステラーゼ活性部位との相補性により、加水分解を正確な位置に向ける。

特に好ましい実施形態において、本発明の担体は、一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有しうる：

［式中、Ｙは、
Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；または、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；であり、
ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である］。
ハロアルキルエステル官能基を含む好ましい化合物において、ハロ置換基は、Ｃｌ、ＢｒまたはＦであってよいが、Ｂｒが特に好ましい置換基である。

他の有利な実施形態において、担体化合物は、下記から成る群から選択されうる：

［式中、Ｘは、プロドラッグ形態で運搬される薬剤分子である］。

本発明の他の態様において、本明細書に記載されている担体化合物を含んで成る薬剤化合物を提供する。

さらに他の態様において、本発明は、先に記載した化合物、および少なくとも１つの医薬的に許容される担体または賦形剤を含んで成る医薬組成物を提供する。

特定の態様において、本発明の化合物および／または組成物を生体内または生体外で使用して、アスピリンが作用を有しないレベルで構成的血小板グリコール−タンパク質発現を減少させうる。

本発明の化合物および／または組成物を、生体内または生体外で使用して、アスピリン様作用を誘発することもできる。アスピリン様作用は、例えば、抗血小板活性の減少、またはＣＯＸ生成物、例えば、トロンボキサンＡ_２またはマロンジアルデヒドの阻害である。好都合には、好ましい本発明化合物は、アスピリン自体より強力であり、ヒト血小板凝集のより優れた阻害剤であり、ＣＯＸ下流生成物（例えば、トロンボキサンＡ_２およびマロンジアルデヒド）ならびに構成的血小板グリコ−タンパク質発現のより優れた阻害剤である。

他の態様において、本発明化合物は、心臓血管および脳血管障害、疼痛、発熱、炎症、癌、アルツハイマー病または認知症を包含する疾患または症状または徴候の処置のための医薬の製造に使用できる。

アスピリンは、吸収の間に腸壁の細胞を化学的に刺激することによって、およびその保護バリヤーの分泌を妨げることによって、胃出血を生じる。この問題の解決法は、吸収過程において後に除去されるマスキング基を化学的に結合させることによって、アスピリンを一時的に不活性にして、胃腸管の脆弱面から離すことである。この技術の開発における主要課題は、血液中で予想通り正確に除去されるマスキング基を見出すことであり、これは他に誰も克服できていない障害であった。本質的に、本発明は、体によって活性化されるアスピリンの不活性形態を提供する。

設計をさらに改良して、一酸化窒素先駆物質を担体基に組み込んで、アスピリンと共にＮＯを放出することができるさらなる化合物を提供する。従って、そのような二重プロドラッグは、潜在的に、２つの異なるレベルで病理学的過程を妨げる。ニトロ−アスピリン法は広く受け入れられつつあるが、本明細書に記載されている方法は、ヒト組織においてアスピリンおよびＮＯの両方を立証可能に生成する唯一の方法である。

ヒト血液中におけるイソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ、表２の１６）の加水分解を、それがどのようにアスピリンを生成するかを見出すために調査した。

イソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ、１６）は４つのエステル基を有し、１つは、２個の各アスピリン成分上に位置し、もう１つは、これらの各成分をイソソルビドコアに結合させている。そのアスピリン生成データの直接的解釈は、位置２または５における２個のアスピリネートエステルの１つが、エステラーゼによって直接的にＩＳＤＡから分離して、アスピリンを遊離するということであった。これは部分的に真実であるが、実際のメカニズムはより興味深く、予期しないものであることが明らかになった。ＩＳＤＡにおける４個のエステル基は、潜在的に複雑な一連のエステル代謝産物を伴うエステラーゼによる加水分解を受けやすい。最終的に、これらの全てがイソソルビドおよびサリチル酸に加水分解される。加水分解カスケードをクロマトグラフィーによって追跡することができ、それは、代謝産物が発生し、崩壊するのに伴って、各代謝産物の分離および測定を可能にする。多くの実験を行ない、該実験において、ＩＳＤＡを生物学的培地に導入し、反応を連続的時点で停止し、代謝産物混合物をＨＰＬＣによって測定した。時間経過に伴うこのデータのプロットを、加水分解プログレス曲線と称する。ＩＳＤＡのプログレス曲線を、図３Ａおよび３Ｂに示す。曲線は、時間の経過に伴うＩＳＤＡの消失およびアスピリンの出現を示す。これらの曲線の注意深い調査は、次の２つのことを示している：親ＩＳＤＡが消失した後に、アスピリン濃度が増加し続けた；および、第二に、そのピークが、他の代謝産物の増加および消失後に現れた。これは意外かつ極めて重大な発見であり、なぜなら、それは、ＩＳＤＡがヒト血漿に添加された後に現れるアスピリンが、ＩＤＳＡ自体からではなくＩＳＤＡの代謝産物から放出されることを示したからである。従って、ＩＳＤＡの潜在的代謝産物の全てが独立に合成され、それらを血漿中でインキュベートし、ＨＰＬＣによってそれらの加水分解を追跡することによって、ＨＰＬＣによりアスピリンプロドラッグとして評価された。これらの１つであるイソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）は、主要ヒト血漿モデルにおいて現在までに知られている最も有効なプロドラッグであることがわかった（図４ＡおよびＢ）。ヒト血漿において、それは、担体イソソルビド−５−サリチレートと共に、大部分がアスピリンに変換される。それは、精製ＢｕＣｈＥ溶液中で、ほぼ排他的にこの経路に沿って、加水分解される（図４Ｂ）。

これらの結果は全体的に、イソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ、１６）が、真アスピリンプロドラッグ、その代謝産物イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）の、先駆物質として作用することを示した。

ヒト血漿ＢｕＣｈＥが、先ず、イソソルビド−ジ−アスピリネート（ＩＳＤＡ）のアスピリネートのアセチル基（位置５に結合している）を選択的に除去し、それによってイソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）を生成することが見出された。次に、ヒトＢｕＣｈＥは、イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）からアスピリンを効果的に分離する。ＩＳＤＡは、他の並行経路に沿った加水分解を受け（図５は、明快にするための、これの概略版である）、それはイソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）ほど効果的にアスピリンに代謝されず、生物学的アッセイにおいても強力でないことがわかった。ＩＳＡＳは、血漿中で８５％のアスピリン放出率（ｔ_１／２ ２分）を有するが、ＩＳＤＡは、アスピリン経路に沿って約６０％加水分解され、残りの４０％は非生産的サリチレート経路に沿って進む。実際には、ＩＳＤＡは結合した２個のアスピリン分子を有するので、その全体的歩留まりは厳密には３０％である。特定の酵素阻害剤および精製酵素溶液を使用して、我々は、ＩＳＡＳの独特に正確な活性化に関与しているヒト血漿中の酵素を、ブチリルコリンエステラーゼとして明解に確定することができた（例えば、図５）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）は、特許文献５に記載されていない。それは潜在的代謝産物であるが、それがプロドラッグになることは誰も予想できなかった。ＩＳＤＡの他の実際のまたは潜在的な代謝産物（例えば、５−アスピリネート、２−アスピリネートまたは２−サリチレート−５−アスピリネート）をそれぞれ合成し、特性決定した。これらはいずれも、ヒト血漿においてアスピリンプロドラッグとして作用しなかった。

好都合には、ＩＳＡＳ（２）は、コラーゲン（図６）、ＡＤＰおよびアラキドン酸によって誘発されるヒト血小板凝集の阻害剤としてアスピリンより有意に強力であり、従って、トロンボキサンＡ_２およびマロンジアルデヒドを包含するＣＯＸ下流生成物を阻害する。それは、さらに、アスピリンが作用を有しない濃度における構成的グリコ−タンパク質発現を減少させる。イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）のアスピリンより高い効力は、薬剤開発の点から望ましいが、困惑させるものであり、継続的調査の対象である。さらに、イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）は、その薬理学的作用を発揮するために、エステラーゼによって活性化される必要があることも示され、それは内因性生物学的活性を有さず、従って、プロドラッグである。ＩＳＡＳはヒト血液中で加水分解を受け、＜２分の半減期を有するが、それは、典型的な消化プロテアーゼの存在下において、およびＣＡＣＯ−２細胞に見られるエステラーゼに対して安定である。それは、ヒト全血中においてアラキドン酸に対して血小板凝集を阻害し（インピーダンス法）、１７μＭのＩＣ_５０を有する。この方法におけるアスピリンのＩＣ_５０は、２５μＭである。ＩＳＡＳは、生体内でのＴＸＡ_２合成（ＴＸＢ_２／全血）および洗浄血小板によるＭＤＡ合成を妨げるのにも有効である。

酵素試験は、イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）が、次の２つのヒト酵素によって特に活性されることを示している：ヒト血漿中のＢｕＣｈＥ、および、それほど急速でないが同じ経路Ａ／Ｂ比を有し、腸管上皮ミクロソームに存在するヒトカルボキシエステラーゼ−２（ＣＥ−２）。２つの酵素がイソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）からアスピリンを放出できるという観察は、臨床的に重要性を持ち、有利である：患者が一方に対して異常酵素機能を有する場合、他方が補ってアスピリンを放出する可能性が高い。設計に関する他の利点は、化合物が胃腸管の内腔に見られる条件下に安定であるが、吸収後に、充分に特性決定された代謝産物（サリチル酸、イソソルビド、そして当然アスピリン）に急速に分解することである。（これに関して、ＣＥ−２およびＢｕＣｈＥによる基質選択性の類似は、極めて意外である。）化合物の他の利点は、その担体が最終的にサリチル酸およびイソソルビド（無害の、または医薬的に充分に特性決定された化合物）に代謝されることである。ＩＳＡＳはそれ自体で有意な医薬的長所を有するが、その発見はより一般的に価値のあるものを示す。ＩＳＡＳの発見、および血漿におけるその生成およびアスピリン放出についての動態モデルが、我々の最近のレポート（Ｍｏｒｉａｒｔｙら、２００８）に記載されている。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）は、アスピリンプロドラッグとして作用し、なぜなら、プロドラッグ分子のイソソルビド−５−サリチレート部分が、ヒトカルボキシエステラーゼの活性部位に高度の相補性を有するからである。それが極めて急速な加水分解を受けるのはこのためである。ＩＳＡＳのイソソルビド−５−サリチレート部分または担体基は、アスピリンからのその分離をうまく促進し、それと同時にアスピリンアセチル基の加水分解を抑制する。それは、新しい極めて有効な担体型を、アスピリンおよび潜在的に他のカルボン酸薬剤に導入する。これは、本発明に重要な洞察である。

イソソルビド−５−サリチレート構造を、そのエステラーゼ相補性を維持しながら、向上した医薬特性のために変えることができるかどうかという疑問が生じた。さらに、ＩＳＭＮＡ（それにおいて、５−サリチレートがニトレートで置き換えられている）はヒト血漿においてアスピリンプロドラッグではないので、５位置での置換のパターンがアスピリン放出に重大な意味を持つという根拠があった。結論は、５−ニトレートが生産的ヒトエステラーゼ結合に適合性でないということである。約２５の化合物を調製し、それらにおいて、５位置を意図的に変化させて、担体基のアスピリン放出特性における５−基の影響を試験した（図７および表２）。新規アスピリンエステルを、ヒト血漿溶液中でインキュベートし、血漿溶液に添加した化合物のモル量に対して生成されたアスピリンの量を測定することによって試験した。エステルは、特徴的に急速な加水分解を、ＡおよびＢ経路に沿って種々の程度に受け、あるものはＩＳＡＳの生産性に近い放出率を有していた（表２および図７）。

一連の２５のエステルのアスピリン放出特性を表２に示し、構造式としてのいくつかの選択例をアスピリン放出（％）と共に図７に示す。５位置の基が、加水分解の方向に顕著に影響を与えることが示された（図８、および図９中の例）。

非置換化合物（イソソルビド−２−アスピリネート、１７）はアスピリンプロドラッグではなく、５−置換がアスピリン放出に必要とされることを示している。一般に、有意なアスピリン放出が、５−ベンゾエートおよびニコチネートエステルによって生じることが見出された。脂肪族エステルで置換された化合物の場合の優性加水分解部位は、通常のアセチルエステルであった（表２の化合物４、５、２３参照）。フェニル基が２位および３位で置換されたアリールエステルが、最も生産的であることとも見出された。例えば、化合物１は生産的アスピリン経路に沿って約６０％に加水分解を受ける。

見出された最も有効な化合物はＩＳＡＳであり、それは精製ブチリルコリンエステラーゼの存在下にアスピリンへのほぼ完全な変換を受け、ヒト血液中で約８０％であった。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）、ＩＳＤＡの代謝産物は、ヒトエステラーゼの存在下にアスピリンプロドラッグとして作用する置換５−芳香族エステル化合物の新しいファミリーに属する。オルトまたはメタ位でさらに置換されたベンゾエート化合物がそのように成功している理由は不明であるが、酵素の活性部位における好都合な配置による可能性が高い。酵素攻撃の位置のこの種の遠隔制御は異例である。

このように、特定のイソソルビド系担体基は、正確な位置で加水分解を促進し、ヒト血液中でのアスピリン遊離を生じることが見出された（上記ｂ）。特定の置換イソソルビド化合物は、ヒト血液中でインキュベートした場合に、アスピリンを有意量で放出する。選択的加水分解は、担体基と、血漿に存在するヒトブチリルコリンエステラーゼ、および腸管上皮におけるＣＥ−２との、極めて特異的な相互作用によって生じる。

アスピリンのイソソルビドエステルが、アスピリンプロドラッグとして作用しうることが認識されたことによって、５位置が適切に置換されることが本発明に極めて重要であることが分かった。最も有効な置換基は５−アリールエステルであり、それはベンゼン環の−２または−３位置でさらに置換されている。そのような基は、アセチル基加水分解ではなく、遠隔イソソルビド−２位置でのアスピリン放出を促進する。化合物２は、最も有効であり、プロドラッグについて最も研究され、それは、アスピリンプロドラッグ用の新しい有効担体種の同定に導いている。しかし、本発明は、５位置において異なる置換がなされているが、血漿酵素の存在下に等しく効果的にアスピリンに変換される他の化合物も包含し、予期している。特に、アスピリンおよび一酸化窒素ＮＯの両方を放出することができるプロドラッグに、強い商業的および学術的関心が持たれている。

生産的加水分解のための構造的必要条件（またはエステラーゼ部位内の指向）が同定されたので、アスピリンおよび一酸化窒素の両方のプロドラッグを設計する努力が続けられている。ＳＡＲは、イソソルビド−５−ベンゾエート担体基が、その加水分解指向特性に影響を与えずに、ベンゼン環上で硝酸エステルでのさらなる置換を許容しうることを示唆した。残念なことに、芳香族硝酸エステルは、オルト−ニトロフェノールに容易に不均化を起こす不安定なフェノールの硝酸エステルである。それに代わって、下記のパターンに適合するイソソルビド−２−アスピリネート−５−ベンゾエートの多くのニトロキシメチル誘導体が生成された。これらは、表２の化合物２０〜２３を包含する。

これらは、主要ヒト血漿加水分解モデルにおいて、ヒト血漿中でアスピリンを生成する能力について試験された。前記のパターンと一致して、オルト−およびメタ−置換ニトロキシメチル化合物は、ヒト血漿においてアスピリンを遊離することが見出された。パラ置換化合物からのアスピリン放出はなかった。成功している化合物は、明らかにＣＥ−２酵素に媒介されて、ヒト腸ミクロソームの存在下においても有意量のアスピリンを放出し、最も重要なＩＳＡＳと同じパターンに従っていた（図９）。これの利点は、患者が低ＢｕＣｈＥ活性を有している場合に、ＣＥ−２が一酸化窒素供与成分と共にアスピリンを放出しうることである。化合物２０は、生体外で、コラーゲン誘発血小板凝集について試験され、凝集の阻害においてアスピリンより強力であることが見出された。それは、ＰＲＰにおけるＡＤＰ誘発血小板凝集の、より強力な阻害剤でもある。しかし、それはＮＯも遊離するので、アスピリンが作用を有しない病理学的刺激に対する凝集を阻害すると予想される。アスピリンは、トロンボキサン依存性凝集、即ち、ただ１つの刺激に対する血小板凝集だけを阻害する。それは、高用量コラーゲン凝集、またはＡＤＰに対する凝集において、ほとんど作用を有しない。一酸化窒素は、アスピリンの胃毒性を減少させ、潰瘍治癒を促進することが示されている。アスピリンおよび一酸化窒素の両方を遊離することができる化合物は、癌予防、治療、および心臓血管疾患処置において、有意な潜在能力を有する。糖タンパク質インテグリン受容体ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａの活性化は、血小板凝集が生じるのに極めて重要である。さらに、α顆粒から血小板表面膜へのＰ−セレクチンの移動は、それぞれ、血小板接着の基礎となる。我々は、種々の濃度の化合物を使用して、凝集時のこれらの受容体を測定した。図３２〜３６は、ｐｒｏ−ａｓａおよびニトロ−ａｓａが、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａの活性化およびＰ−セレクチンの移動を有意に減少させたことを示している。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａの活性化は、凝集を刺激するかまたは阻害する経路の被制御動的相互作用である。一酸化窒素は、主要阻害剤経路を媒介し、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ機能を調節する。アスピリンは、ＩＳＡＳ（２）または硝酸エステル化合物３１〜３２と同じ濃度において、血小板活性化を阻害できなかった。

本発明は、本発明化合物を含んで成る医薬組成物も提供し、該組成物は、経口投与用に、カプセル剤または錠剤として、または経皮投与用に、例えば皮膚貼付剤の形態に適合させうる。該組成物は、坐剤または水性配合物の形態であってもよい。

本発明は、抗血小板活性および／または他のアスピリン型活性、例えば、解熱および／または抗炎症活性を達成する化合物の使用も提供する。

本発明の特に好ましい実施形態において、組成物は、他の医薬的存在物、特に、治療用油、一般に魚油、例えばタラ肝油、または植物油、例えばイヴニングプリムローズ油を含有する。この場合、組成物は、活性成分を含む充填剤を含有する保持シェルを有するカプセルの形態でありうる。充填剤は、懸濁化剤、例えば、１つまたはそれ以上のコロイド状二酸化珪素、水素化植物油（任意に、蜜蝋との組合せ）、高融点部分グリセリド、および／またはレシチンから選択されるような懸濁化剤を包含しうる。充填剤は、抗酸化剤、例えば、１つまたはそれ以上のＤ−アルファトコフェロール、Ｄ−アルファトコフェロールアセテート、混合トコフェロールおよびアスコルビン酸から選択される抗酸化剤も包含しうる。シェルはゼラチンシェルであってよい。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
一般式（Ｉ ^＊ ）で示される一般構造を有するイソソルビドアスピリネート化合物：

であって、式中、Ｙは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ ^ｒｉｎｇ であり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく、ここでＲ ^ｒｉｎｇ は環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環である、イソソルビドアスピリネート化合物。
（項目２）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有するイソソルビドアスピリネート化合物：

であって、式中、Ｙは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、アリールエステル、またはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステルであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよい、イソソルビドアスピリネート化合物。
（項目３）
一酸化窒素放出基が、硝酸エステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル硝酸エステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキル硝酸エステル、またはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルキル硝酸エステルを含む、項目１または２に記載の化合物。
（項目４）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する、項目１に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

であって、式中、Ｙは、
Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエート、ニコチネート、オキサゾールオエート、イソキサゾールエート、チアジアゾールオエート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、ベンジル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ _２ 、−ＯＮＯ _２ 、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ 、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ _２ ） _ｍ ］ _{ｃｙｃｌｉｃ} ＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ またはＣ _１ 〜Ｃ _５ ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
であり、
ここで、Ｒは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である、イソソルビドアスピリネート化合物。
（項目５）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する、項目１または４に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

であって、式中、Ｙは、
Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエート、ニコチネート、オキサゾールオエート、イソキサゾールエート、チアジアゾールオエート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、ベンジル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ｏ−ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ _２ 、−ＯＮＯ _２ 、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ 、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ _２ ） _ｍ ］ _{ｃｙｃｌｉｃ} ＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ またはＣ _１ 〜Ｃ _５ ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
であり、
ここで、Ｒは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である、イソソルビドアスピリネート化合物。
（項目６）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する、項目１または４に記載の化合物：

であって、式中、Ｙは、
Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、ベンジル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ｏ−ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ _２ 、−ＯＮＯ _２ 、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ 、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ _２ ） _ｍ ］ _{ｃｙｃｌｉｃ} ＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ またはＣ _１ 〜Ｃ _５ ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
であり、
ここで、Ｒは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である、化合物。
（項目７）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する、項目１または４に記載の化合物：

であって、式中、Ｙは、
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ｏ−ベンジルオキシ、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ （ｎ＝１〜８）、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステルまたはハロアルキルエステルのうちの少なくとも１つによって置換されてもよい、化合物。
（項目８）
ハロアルキルエステルのハロ置換基が、Ｃｌ、ＢｒまたはＦである、項目４〜７に記載の化合物。
（項目９）
Ｙが：

から成る群から選択される、先行するいずれかの項目に記載の化合物。
（項目１０）
Ｙが：

から成る群から選択される、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する、先行するいずれかの項目に記載の化合物：

であって、式中、Ｙは、非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、メチル、ｏ−ベンジルオキシ、メトキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ _３ 、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ _２ Ｂｒ、−ＮＯ _２ 、−ＣＨ _２ ＯＮＯ _２ のうちの少なくとも１つによって置換されてもよく、式中、Ｙは、非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基であって、それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、メチル、ｏ−ベンジルオキシ、メトキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ _３ 、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ _２ Ｂｒ、−ＮＯ _２ 、−ＣＨ _２ ＯＮＯ _２ のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい、化合物。
（項目１２）
式（ＩＩ）で示される構造を有する、先行するいずれかの項目に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

（項目１３）
式（ＩＩＩ）で示される構造を有する、項目１〜１２に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

（項目１４）
式（ＩＶ）で示される構造を有する、項目１〜１２に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

（項目１５）
式（Ｖ）で示される構造を有する、項目１〜１２に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

（項目１６）
式（ＶＩ）で示される構造を有する、項目１〜１２に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

（項目１７）
式（ＶＩＩ）で示される構造を有する、項目１〜１２に記載のイソソルビドアスピリネート化合物：

（項目１８）

から成る群から選択されるいずれか１つの構造を有する、項目１〜１２に記載のイソソルビドアスピリネート化合物
（項目１９）
一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有する薬剤用担体化合物：

であって、式中、Ｙは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ ^ｒｉｎｇ であり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく、ここで、Ｒ ^ｒｉｎｇ は、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり；
Ｘは、薬剤分子である、薬剤用担体化合物。
（項目２０）
一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有する、項目１９に記載の薬剤用担体化合物：

であって、式中、Ｙは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ シクロアルコキシエステル、アリールエステル、またはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステルであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく；
Ｘは、薬剤分子である、薬剤用担体化合物。
（項目２１）
前記一酸化窒素放出基が、硝酸エステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル硝酸エステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキル硝酸エステル、またはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルキル硝酸エステルを含む、項目１９または２０に記載の担体。
（項目２２）
一般式（ＩＩ）で示される一般構造を有する、項目１９〜２１に記載の担体：

であって、式中、Ｙは、
Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、ベンジル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ _２ 、−ＯＮＯ _２ 、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ 、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ _２ ） _ｍ ］ _{ｃｙｃｌｉｃ} ＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ またはＣ _１ 〜Ｃ _５ ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
であり、
ここで、Ｒは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０であり；
Ｘは、薬剤分子である、担体。
（項目２３）
一般式（Ｉ）で示される一般構造を有する、項目１に記載の化合物：

であって、式中、Ｙは、
Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよい）；あるいは
非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、ベンジル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ _２ 、−ＯＮＯ _２ 、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ 、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ _２ ） _ｍ ］ _{ｃｙｃｌｉｃ} ＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ またはＣ _１ 〜Ｃ _５ ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
であり、
ここで、Ｒは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０であり；
Ｘは、薬剤分子である、化合物。
（項目２４）
前記ハロアルキルエステルのハロ置換基が、Ｃｌ、ＢｒまたはＦである、項目２２または２３に記載の担体。
（項目２５）
前記担体が：

から成る群から選択される、項目１９〜２２に記載の担体化合物であって、式中、Ｘは薬剤分子である、担体化合物。
（項目２６）
項目１９〜２２に記載の担体化合物を含む薬剤化合物。
（項目２７）
項目１〜２５に記載の化合物、および少なくとも１つの医薬的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
（項目２８）
アスピリンが作用を有しないレベルで構成的血小板グリコール−タンパク質発現を減少させるための、項目１〜２５に記載の化合物または項目２７に記載の組成物の使用。
（項目２９）
アスピリン様作用を誘発するための、項目１〜２５に記載の化合物または項目２７に記載の組成物の使用。
（項目３０）
前記アスピリン様作用が、抗血小板活性の減少、ＣＯＸ生成物の阻害である、項目２９に記載の使用。
（項目３１）
前記阻害されるＣＯＸ生成物が、トロンボキサンＡ２またはマロンジアルデヒドである、項目２９または３０に記載の使用。
（項目３２）
心臓血管および脳血管障害、疼痛、発熱、炎症、癌、アルツハイマー病または認知症の処置のための医薬の製造における、項目１〜２５に記載の化合物の使用。
（項目３３）
アスピリンを放出するために２位におけるアセチル基の加水分解を促進するために、前記イソソルビド−２−アスピリネート基が、５位においてアルキルまたはアリールエステルで置換されている、項目１〜２５に記載の化合物。
（項目３４）
心臓血管および脳血管障害、疼痛、発熱、炎症、癌、アルツハイマー病または認知症の処置における、一般式（Ｉ ^＊ ）で示される一般構造を有する化合物の使用：

であって、式中、Ｙは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ ^ｒｉｎｇ であり、ここで、Ｒ ^ｒｉｎｇ は、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよい、使用。
（項目３５）
心臓血管および脳血管障害、疼痛、発熱、炎症、癌、アルツハイマー病または認知症の処置に使用するための医薬の製造における、一般式（Ｉ ^＊ ）で示される一般構造を有する化合物の使用：

であって、式中、Ｙは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ ^ｒｉｎｇ であり、ここで、Ｒ ^ｒｉｎｇ は、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよい、使用。
（項目３６）
実質的にここに記載されているとおりの、および／または添付の実施例を参考にした、項目１〜５５または３３に記載の化合物。
（項目３７）
実質的にここに記載されているとおりの、および／または添付の実施例を参考にした、項目２７に記載の組成物。
（項目３８）
実質的にここに記載されているとおりの、および／または添付の実施例を参考にした、項目２８〜３２または３４〜３５に記載の使用。

図１は、アスピリン毒性除去理論を示す。 図２は、成功のアスピリンプロドラッグが、エステルＢにおいて、Ｏ−アセチル基Ａより高い率で加水分解を受けなければならないことを示す。 図３Ａは、１０％ヒト血漿（ｐＨ７．４、３７℃）におけるＩＳＤＡの加水分解についてのプログレス曲線を示す：連続的時点においてＨＰＬＣによって測定された親およびいくつかのその代謝産物の濃度を示す：ＩＳＤＡ（●）、アスピリン（ ）、サリチル酸（○）、イソソルビド−２／５−アスピリネート−２／５−サリチレート（□）、イソソルビドジサリチレート（◇）およびイソソルビド−５−サリチレート（△）。最大アスピリンは親ＩＳＤＡの消失に関して遅延し、代謝産物がその生成に関与していることを示す。図３Ｂは、ＩＳＤＡ曲線を除いてプロットを再度示す。 図４Ａは、５０％ヒト血漿（ｐＨ７．４）中、３７℃におけるイソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレートＩＳＡＳ（２）の加水分解についてのプログレス曲線を示す：ＩＳＡＳ（□）、イソソルビドジサリチレート（◇）、イソソルビド−５−サリチレート（△）、アスピリン（ ）およびサリチル酸（○）。図４Ｂは、精製ヒト血清ＢｕＣｈＥ、ｐＨ７．４および３７℃での、イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレートＩＳＡＳの加水分解についてのプログレス曲線を示す：イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（□）、イソソルビド−５−サリチレート（△）、アスピリン（ ）、サリチル酸（○）およびイソソルビドジサリチレート（◇）。 図５は、ＩＳＤＡが、先ず、５−アスピリネートのアセチル基において加水分解を受け（７０％）て、ＩＳＡＳ（２）を放出し、これが、主にアスピリンおよびイソソルビド−５−サリチレートへの加水分解を受けることを示す。血漿コリンエステラーゼ（ＢｕＣｈＥ）による生産的介入の主要点が、赤で示されている。これはエステラーゼに対して比較的安定であることに注目すべきである。ＩＳＤＡの加水分解は、非生産的並行経路に沿っても進み（３０％）、該経路はアスピリンを放出せず、その代わりにイソソルビドおよびサリチル酸を放出する。 図６Ａは、生体外でのＩＳＡＳ（２）およびアスピリン（ＡＳＡ）による、コラーゲン誘発ヒト血小板凝集の阻害を示す濃度反応曲線を示す。凝集を５０％阻害する薬剤濃度（ＩＣ_５０）も示されている。ＩＳＡＳは、凝集においてＡＳＡより有意に強力である（データは平均±ＳＤ、ｐ＜０．０１、ｎ＝４）。 図６Ｂは、ＩＳＡＳ（２）、一酸化窒素放出プロドラッグ３１、３２、３３およびアスピリンについての相対阻害曲線を示す。 図６は、ＩＳＡＳ、化合物３１〜３３またはアスピリンと共にインキュベーションした後の、ＰＲＰの％凝集を示す。この図は、５つの化合物、アスピリン、ＩＳＡＳおよび３つの異性硝酸塩３１、３２、３３の、異なる３つの濃度での、コラーゲンに対する凝集のパーセント阻害ではなくコラーゲンに対するパーセント凝集を示す（^＊＊＊Ｐ＜０．０５）。 図７は、表２からの、ヒト血漿溶液中でインキュベートした選択的５−エステルの例を示す。％値は、サリチル酸エステルを遊離する部位Ａ、およびアスピリンを遊離する部位Ｂで生じた加水分解の量を表わす。この図は、遠隔位置５のエステル構造への、位置２でのアスピリン放出依存性を示す。 図８は、５−置換基「Ｒ」が加水分解経路に決定的に影響を及ぼすことを示す。 図９は、ヒト腸管上皮からのミクロソームの存在下にインキュベーションした後の、イソソルビド−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）−ベンゾエートの消失、ならびに、アスピリン、サリチル酸、およびニトレート置換イソソルビド担体の遊離を示す。 図１０は、保護サリチル酸へのカップリング、次に脱ベンジル化による、ＩＳＭＮからのＩＳＡＳの合成を示す。 図１１は、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート２１の調製ための合成経路を示す。 図１２は、２−クロロメチルベンゾイルクロリドの調製ための合成経路を示す。 図１３は、ニトレート置換５−エステルの直接合成を示す。 図１４は、クロロメチルベンゾエートでのエステル化、およびハライドの硝酸銀との交換による、イソソルビド−２−アスピリネートの３−ニトロキシベンゾエートエステルの合成を示す。 図１５は、ＨＬＭ中のＩｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）を示す。９．４μＭのアスピリンが生成された。 図１６は、ＨＩＭ中のＩｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）（１．０４×１０^−４Ｍ）を示す。２７μＭのアスピリンが生成された。 図１７は、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）を添加する前に、強力ＢＣｈＥ阻害剤と共に５分間インキュベートされたＨＬＭを示す。１６μＭのアスピリンが生成された。 図１８は、ＨＬＭおよびｉｓｏ−ＯＭＰＡ（１０μＭ）中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）（１．１×１０^−４Ｍ）を示す。８．５μＭのアスピリンが生成された。 図１９は、ＨＩＭおよびＢＮＰＰ（１４μＭ）中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ、２）（１．０４×１０^−４Ｍ）を示す。 図２０は、５０％ヒト血漿中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２１）（２．５×１０^−４Ｍ）を示す。２６μＭのアスピリンが生成された。 図２１は、８０％ヒト血漿中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２１）（１×１０^−４Ｍ）を示す。２１μＭのアスピリンが生成された。 図２２は、ＨＬＭおよびｉｓｏ−ＯＭＰＡ（１４．４μＭ）中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２１）（１×１０^−４Ｍ）を示す。１．４μＭのアスピリンが生成された。 図２３は、ＨＩＭ中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２１）（１．０５×１０^−４Ｍ）を示す。２０μＭのアスピリンが生成された。 図２４は、ＨＩＭおよびｉｓｏ−ＯＭＰＡ（１４μＭ）中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２１）（１．１×１０^−４Ｍ）を示す。１２．７μＭのアスピリンが生成された。 図２５は、５０％ヒト血漿中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（２−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２０）（１×１０^−４Ｍ）を示す。１０．３μＭのアスピリンが生成された。 図２６は、ＨＩＭ中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（２−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２０）（１×１０^−４Ｍ）を示す。２１．７μＭのアスピリンが生成された。 図２７は、５０％ヒト血漿中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（４−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２２）（１×１０^−４Ｍ）を示す。２μＭのアスピリンが生成された。 図２８は、ＨＩＭ中の、Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（４−ニトロキシメチル）ベンゾエート（２２）（１×１０^−４Ｍ）を示す。９．９７μＭのアスピリンが生成された。 図２９は、ＨＩＭ（４０μｇ／ｍＬ）中の、２−アセトキシ安息香酸フェニルエステル（アスピリンのフェノールエステル）（１．０９×１０^−４Ｍ）を示す。７．７μＭのアスピリンが生成された。 図３０は、ＨＩＭ（２０μｇ／ｍＬ）中の、２−アセトキシ安息香酸フェニルエステル（１．０９×１０^−４Ｍ）を示す。５．３μＭのアスピリンが生成された。 図３１は、異なる３つの濃度での、５つの試験化合物による、生体外でのＡＤＰに反応した血小板凝集の阻害を示す。ゼロ濃度は、賦形剤、ＤＭＳＯによる阻害である。 図３２は、試験化合物２、３１〜３３、アスピリンで処理した洗浄血小板における、コラーゲンに反応したＰＡＣ−１発現を示す。この図は、洗浄血小板における、パーセントＰＡＣ−１糖たんぱく質発現を示す。この調製物においてエステラーゼがほとんど存在せず、従って、データは、本発明のプロドラッグのエステラーゼ活性化が、生体外での血小板機能の阻害前に必要とされることを示す。 図３３は、試験化合物２、３１〜３３、アスピリンを使用した、血小板に富む血漿におけるコラーゲンに反応したＰＡＣ−１発現を示す。この図は、血小板に富む血漿における糖タンパク質発現の程度を示す。糖タンパク質発現は、完全凝集における血小板の架橋に必要とされ、データは、本発明化合物が、血漿調製物におけるこの発現を抑制することにおいて、アスピリンより強力であることを示す。 図３４は、試験化合物２、３１〜３３、アスピリンを使用した、血小板に富む血漿におけるコラーゲンに対するＰ−セレクチン発現を示す。Ｐ−セレクチンは別の糖タンパク質であり、その発現は血小板活性化と相関する。本発明化合物は、血漿調製物における血小板活性化を阻害することにおいて、アスピリンよりはるかに強力である。 図３５は、試験化合物２、３１〜３３、アスピリンを使用した、洗浄血小板におけるコラーゲンに対するＰ−セレクチン発現を示す。ここでも再び、洗浄血小板において、糖タンパク質発現の幾分かの減少が見られる（コラーゲンとの有意な差（^＊＊＊Ｐ＜０．００１））。しかし、エステラーゼが欠乏している洗浄血小板懸濁液において、該化合物はアスピリンほど有効ではない。

一般実験法：材料
５−ＩＳＭＮは、Ｓｉｆａ Ｌｔｄ．から得た。精製ヒト血清ブチリルコリンエステラーゼ（ＥＣ３．１．１．８）、ウサギ肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＥＣ３．１．１．１）、ＢＮＰＰ（ビス−４−ニトロフェニルホスフェート）、ｉｓｏ−ＯＭＰＡ（テトライソプロピルピロホスホラミド）、プールヒト肝臓ミクロソーム、３−クロロメチルベンゾイルクロリド、４−クロロメチルベンゾイルクロリド、硝酸銀、フタリド、ジクロロトリフェニルホスホラン、およびＨＰＬＣ用溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃから得た。コラーゲンおよびＡＤＰは、Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ（Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ、ＰＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）から得た。高親和性ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに対するアロフィコシアニン（ＡＰＣ）接合モノクローナル抗体（ＰＡＣ−１−ＡＰＣ）、およびヒト血小板Ｐセレクチンに対するＡＰＣ接合モノクローナル抗体（ＣＤ６２Ｐ）は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ）から購入した。

他の全ての溶媒および試薬は、分析用であった。プールヒト腸ミクロソームは、ＵＫのＢＤ Ｇｅｎｔｅｓｔから得た。

本発明化合物は、イソソルビド−モノ−ニトレートアスピリネート（ＩＳＭＮＡ）から容易に調製され、それ自体は、Ｇｉｌｍｅｒら、２００１に従って、イソソルビド−モノ−ニトレート（ＩＳＭＮ）のアセチルサリチル（ｓａｌｉｃｏｙｌ）クロリドでのエステル化によって調製される。ニトレートは、水素の雰囲気下に、炭素上パラジウムでの処理によって選択的に除去されて、主要中間体イソソルビド−２−アスピリネートを生じる。該化合物は、イソソルビドの選択的５−エステル化、次に、２位におけるアスピリネート基の結合によっても得られる（イソソルビドにおける５位置は、エンドであるにもかかわらず、アシル化に対して２−エキソ位置より反応性であり、なぜなら、５−ＯＨは分子内Ｈ結合によって活性化されるからである）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（ＩＳＡＳ）の場合、サリチル酸での直接アシル化は、サリチレート−ＯＨとイソソルビド−ＯＨとの競合によって難しくなる。従って、ベンジル−エーテル保護サリチル酸を、先ず、標準ＤＣＣカップリング法によって導入し、ベンジル保護を還元条件下に除去する（図１０）。

本発明の他のエステル化合物は、ＤＣＣカップリングを使用するか、またはトリエチルアミンのような第三級塩基の存在下に適切な酸塩化物で処理することによる、直接アシル化によって調製できる。ニトロキシ置換エステルは、適切に置換された酸に直接的に結合させることによって調製しうる。または、ニトロキシ置換化合物は、クロリドまたはブロミドを有する酸で先ずエステル化することによっても得られ、次に、それをアセトニトリル中においてＡｇＮＯ_３で処理することによってニトレートと置きかえることができる。

実験例：イソソルビド−２−アスピリネート−５−エステルの合成：分子式は図２に示されている。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［２−メチルベンゾエート］ １
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のイソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．９８ｍｍｏｌ）および２−トルオイルクロリド（０．０９ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次に、水（２×２５ｍＬ）、ＨＣｌ（１Ｍ、２５ｍＬ）およびＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で洗浄し、次に、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を真空除去して、粗生成物０．４１ｇを褐色油状物として得た。カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（２：１）を溶離剤として使用）によって精製して、生成物を黄色油状物として得た。これをエタノールで再結晶して、化合物１を白色固形物として得た（０．１１ｇ、３９．６％）。
融点１０４〜１０６℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９８７．１および２９２２．８（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６２．０および１７１８．１（Ｃ＝Ｏ）、１２５９．５および１１９９．８（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７２．４（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４４９．１２１２（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４４９．１２３８（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート、ＩＳＡＳ、２
２−ベンジルオキシ安息香酸（３６４．８ｍｇ＝１．６ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、撹拌した。Ｉｓ−２−ａｓｐ−５−ＯＨ（５００ｍｇ＝１．６ｍｍｏｌ）および１０％ ＤＭＡＰを添加した。フラスコを０℃に冷却し、ＤＣＣ（３４０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌を５分間継続し、温度を室温にし、一晩撹拌した。反応物を濾過し、濾液を０．１Ｍ ＨＣｌ、５％ ＮａＨＣＯ_３および水で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて、油状物を得た。これを、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（２：１））によって精製して、白色生成物を得た（Ｒｆ＝０．４、２２８ｍｇ）。これをメタノール／酢酸エチル（１：１）に溶解させた。Ｐｄ／Ｃを添加し、反応物を水素下に一晩撹拌した。反応物を濾過し、濃縮した。油状物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（１：１）を使用）によって精製して、白色固形物を得た（１０７ｍｇ、Ｒｆ＝０．６７）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［３−メチルベンゾエート］ ３
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、トルエン（１５ｍＬ）に０℃で溶解し、ＤＣＣ（０．１３ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０８ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をそれに添加した。１０分後、反応器を室温にもどし、３−トルイル酸（０．０９ｇ）を添加し、２４時間撹拌した。ＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（３０ｍＬ）および水（３×３０ｍＬ）で洗浄した後、反応混合物を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、粗生成物を透明油状物として得た。カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（３：２）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物３を白色結晶として得た（０．１２ｇ、４３．２％）。
融点９６〜９８℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９８７．１および２９２２．８（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６２．０および１７１８．１（Ｃ＝Ｏ）、１２５９．５および１１９９．８（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７２．４（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４４９．１２１２（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４４９．１２３４）（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−アセテート ４
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のイソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）および無水酢酸（０．０６ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応器を室温で２４時間撹拌し、次に、水（２×２０ｍＬ）、ＨＣｌ（１Ｍ、３０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を回転蒸発によって除去して、粗生成物０．５２ｇを得た。カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（３：２）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物４を白色結晶性物質として得た（０．１ｇ、４３．８％）。
融点９６〜９８℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９６６．９および２９２８．６（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７５１．６および１７３４．０（Ｃ＝Ｏ）、１６０７．８（Ｃ＝Ｃ、伸縮）、１２６２．０および１１９３．９（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０８２．５（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：３７３．０８９９（Ｍ^＋＋２３）、実測値：３７３．０８７７（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−プロピオネート ５
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．３ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、無水プロピオン酸（０．１４ｍＬ、１．０７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０９ｍＬ、１．０７ｍｍｏｌ）をそれに添加した。これを室温で２４時間撹拌し、次に、ＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）および水（２×３０ｍＬ）で洗浄した。反応物を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、粗生成物を黄色油状物として得た（０．１９ｇ）。カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（５：２）を溶離剤として使用）によって精製して、生成物を白色結晶として得た（０．３ｇ、８４．３％）。
融点５４〜５６℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９８９．０および２９３３．０（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６４．０および１７３４．５（Ｃ＝Ｏ）、１６０６．３（Ｃ＝Ｃ、伸縮）、１２５４．３および１１９３．６（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０８０．６（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：３８７．１０５６（Ｍ^＋＋２３）、実測値：３８７．１０６９（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−ベンゾエート ６
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のイソソルビド−２−アスピリネート １７（１．０ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、安息香酸（０．５９ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（１．３４ｇ、６．４９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３８ｇ、３．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次に、沈殿物を濾過によって除去し、濾液をＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ）、Ｎａ_２ＨＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）および水（３×３０ｍＬ）で洗浄した。それを無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、無色油状物を得、これをエタノールで再結晶して、生成物を白色結晶として得た（１．１３ｇ、８４．３％）。
融点８０〜８２℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９９１．１および２９３２．９（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６２．９および１７２０．６（Ｃ＝Ｏ）、１２７５．５および１１９９．１（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７８．４（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４３５．１０５６（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４３５．１０４３（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−ニコチネート ７
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のイソソルビド−２−アスピリネート １７（０．３ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を、０℃で、ＤＣＣ（０．２ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１２ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の存在下に、１０分間撹拌した。反応器を室温にもどし、ニコチン酸（０．１２ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加し、２４時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）、水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を粗油状物として得た（０．９５ｇ）。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタンおよび酢酸エチル（９５：５）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物７を白色結晶として得た（０．１２ｇ、２９．７％）。
融点９４〜９６℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３３２７．６（Ｎ＝Ｃ）、２９２９．６（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７３１．７および１７１８．７（Ｃ＝Ｏ）、１６５４．４（Ｃ＝Ｃ、伸縮）、１８０．７および１１９５．９（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０９０．４（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４３６．１００８（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４３６．１０１１（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［イソ−ニコチネート］ ８
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）に０℃で溶解し、ＤＣＣ（０．１３ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０８ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をそれに添加した。１０分後、反応器を室温にもどし、イソ−ニコチン酸（０．０８ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加し、２４時間撹拌した。反応物を、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）、水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、化合物８を白色粉末として得た（０．１７ｇ、６３．１％）。
融点８６〜８８℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３３２７．８（Ｎ＝Ｃ）、２９２９．３（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７５１．８および１７１０．７（Ｃ＝Ｏ）、１６２８．０（Ｃ＝Ｃ、伸縮）、１２４９．０および１１９４．１（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０８２．８（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４３６．１００８（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４３６．１００４（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−ベンジルオキシベンゾエート ９
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のイソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２７ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、ベンジルオキシ安息香酸（０．２０ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．１８ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０１ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応器を室温で２４時間撹拌し、次に、濾過し、濾液をＨＣｌ（３０ｍＬ、０．１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）および水（２×３０ｍＬ）で洗浄した。無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した後、ジクロロメタンを真空除去して、粗生成物０．７ｇを無色油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（３：１）を溶離剤として使用）によって精製して、０．１９ｇの化合物９を白色結晶として得た（４１．５％）。
融点７６〜７８℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１７７２．７および１７２６．２（Ｃ＝Ｏ）、１２７６．６（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７８．１（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：５４１．１４５７（Ｍ^＋＋２３）、実測値：５４１．１４６０（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（２−アミノベンゾエート） １０
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．６９ｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、ＤＣＣ（０．４４ｇ、２．２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をそれに添加し、反応器を０℃で１０分間撹拌した。室温にもどした後、アントラニル酸（０．２９ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を添加し、３時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）および水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を粗黄色油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（４：１）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物１０を黄色固形物として得た（０．３９ｇ、４１．５％）。生成物を、試験に必要になるまで０〜４℃で保存した。
融点１５０〜１５２℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４４３．４（Ｎ−Ｈ、伸縮）、２９２０．５（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７４２．７（Ｃ＝Ｏ）、１５４８．０（Ｎ−Ｈ、変角）、１２２０．９および１１５８．６（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０４７．４（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［２’−メトキシ］−ベンゾエート １１
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、トルエン（１５ｍＬ）に０℃で溶解し、ＤＭＡＰ（０．０８ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（０．１３ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をそれに添加した。１０分後、反応器を室温にもどし、２−アニス酸（２−メトキシ安息香酸、０．１０ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加し、１２時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）および水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を粗油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（３：１）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物１１を白色結晶として得た（０．２３ｇ、７９．８％）。
融点１３２〜１３４℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９２０．５（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６４．９および１７２０．４（Ｃ＝Ｏ）、１２５３．２（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７５．２（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４６５．１１６２（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４６５．１１３１（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［３’−メトキシ］−ベンゾエート １２
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、トルエン（１５ｍＬ）に０℃で溶解し、ＤＭＡＰ（０．０８ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（０．１３ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をそれに添加した。１０分後、反応器を室温にもどし、３−アニス酸（３−メトキシ安息香酸）（０．１０ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加し、１２時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）および水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を粗油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（３：１）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物１２を白色結晶として得た（０．２３ｇ、７９．８％）。
融点１２５〜１２８℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９８０．９（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６８．３および１７２３．８（Ｃ＝Ｏ）、１２９８．５および１２５３．５（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７５．９（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４６５．１１６２（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４６５．１１６８（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［４−メトキシ］−ベンゾエート １３
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、トルエン（１５ｍＬ）に０℃で溶解し、ＤＭＡＰ（０．０８ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（０．１３ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をそれに添加した。１０分後、反応器を室温にもどし、４−アニス酸（４−メトキシ安息香酸）（０．１０ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加し、１２時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）および水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を粗油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（２：１）を溶離剤として使用）によって精製して、生成物を白色結晶として得た（０．１７ｇ、５８．９％）。
融点１４１〜１４４℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９９４．１および２９３６．７（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６４．および７２４．９（Ｃ＝））、１６０５．８（Ｃ＝Ｃ、伸縮）、１２６０．５（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７８．６（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４６５．１１６２（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４６５．１１５７（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−［４−メチルベンゾエート］ １４
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、トルエンに０℃で溶解し、トリエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．９８ｍｍｏｌ）および４−トルオイルクロリド（０．９３ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を添加した。反応器を室温にもどし、１０分間撹拌し、次に、ＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）、水（３×３０ｍＬ）およびＮａＣｌ飽和溶液（３０ｍＬ）で洗浄した。反応物を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、酢酸エチルを補助溶媒として使用して溶媒を真空除去して、粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（９：１）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物１４を白色結晶として得た（０．１ｇ、３５．９９％）。
融点１０２〜１０４℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：２９８２．７および２９２３．６（Ｃ−Ｈ、伸縮）、１７６３．９および１７１７．８（Ｃ＝Ｏ）、１６０８．５（Ｃ＝Ｃ）、１２７５．４および１２０２．０（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、１１００．３（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４４９．１２１２（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４４９．１２２９（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（４−ニトロベンゾエート） １５
（化合物１６は、この記載に含まれないことに注意）
イソソルビド−２−アスピリネート １７（０．２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に室温で溶解させた。その反応器に４−ニトロベンゾイルクロリド（０．１５ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．１２ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で４８時間撹拌し、次に、ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２５ｍＬ）、飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）および水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を粗黄色油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（３：２）を溶離剤として使用）によって精製して、化合物１５を無色油状物として得、これをエタノールで再結晶した際に、生成物を白色結晶として生じた（０．１５ｇ、５０．５％）。
融点６６〜６８℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１７７２．７および１７２６．２（Ｃ＝Ｏ）、１２７６．６（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１０７８．１（Ｃ−Ｏ−Ｃ）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：４８０．０９０７（Ｍ^＋＋２３）、実測値：４８０．０９２２（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−ＯＨ １７
ジクロロメタン（１６０ｍＬ）中のアセチルサリチロイルクロリド（分子量１９８．６０ｇ／ｍｏｌ、１０．９ｇ＝５４．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、トリエチルアミン（分子量１０１．１９ｇ／ｍｏｌ、ｄ＝０．７２６ｇ／ｍＬ、９．１ｍＬ＝６５．４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を０℃に冷却し、５−ＩＳＭＮ（分子量１９１．１２ｇ／ｍｏｌ、１０ｇ＝５２．３ｍｍｏｌ）を添加した。そのフラスコを室温で一晩撹拌し、光から保護した。混合物を、ＨＣｌ（２Ｍ）、５％ ＮａＨＣＯ_３、および水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、油状物を得た。これを、熱いエタノール（結晶化を極めて遅くすることができる）で再結晶して、黄色結晶１０ｇを得た。これをメタノール／酢酸エチル（１：１）に溶解し、Ｐｄ／Ｃを添加し、水素バルーンを取り付けた。一晩撹拌し、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル ２：１）によって監視して、反応の終了を確認した。混合物を濾過し、溶媒を除去した。いくらかのジクロロメタンを添加し、濃縮し、ジエチルエーテルを添加し、１０〜１５分間静置し、濃縮して、白色結晶を得た（７．４ｇ）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（３−（２−ブロモ−アセトキシ））−ベンゾエート １８
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の、イソソルビド−２−アスピリネート−５−サリチレート（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（０．０５２ｍＬ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ブロモアセチルクロリド（０．０３ｍＬ、０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応物を水（２×５ｍＬ）で洗浄し、溶媒を真空除去して、化合物１８を無色油状物として得た（０．１３ｇ）。
ＩＲ_ｖｍａｘ（フィルム）ｃｍ^−１：１７６５．６および１７２４．３（Ｃ＝Ｏ）、１６０８．１（Ｃ＝Ｏ）、１２８８．４および１２５１．４（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、１１９６．９および１１３５．６（Ｃ−Ｏ−Ｃ）、７３２．６（Ｃ−Ｂｒ）。ＨＲＭＳ：計算値：５３１．１０１３（Ｍ^＋）、実測値：５７０．４４５３（Ｍ^＋＋２３）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−シクロプロパノエート １９
シクロプロパンカルボニルクロリド（分子量１０４．５４ｇ／ｍｏｌ、ｄ＝１．１５２ｇ／ｍＬ、２５０μＬ＝２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（５００μＬ＝６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。イソソルビド−２−アスピリネート １７（５０６．２ｍｇ＝１．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。２Ｍ ＨＣｌ（１０ｍＬ）、５％ ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル ２：１）Ｒｆ＝０．３によって精製して、油状物３９６ｍｇを得た。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（ｐ−シアノベンゾエート） ２０
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）および４−シアノベンゾイルクロリド（１２０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＧＰ２に従って反応させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：４）後に、黄色油状物２１３ｍｇ（８１％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２３Ｈ_１９Ｏ_８Ｎ、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：４３８．４０６８、実測値：４３８．４１８３。分析Ｃ_２３Ｈ_１９Ｏ_８Ｎ 計算値Ｃ：６３．１６、Ｈ：４．３８、Ｎ：３．２０、実測値Ｃ：６３．４６、Ｈ：４．５１、Ｎ：２．９７。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（ｐ−フェニルベンゾエート） ２１
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）および４−フェニルベンゾイルクロリド（１５６ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を反応させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：４）後に、無色油状物１８５ｍｇ（６５％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２８Ｈ_２４Ｏ_８、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：４８９．４９３３、実測値：４８９．５０２１。分析Ｃ_２８Ｈ_２４Ｏ_８ 計算値Ｃ：６８．８５、Ｈ：４．９５、実測値Ｃ：６８．８８、Ｈ：５．０８。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（６−クロロニコチネート） ２２
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）および６−クロロニコチノイルクロリド（２３０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）をＧＰ２に従って反応させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ ３：７）後に、白色固形物２５６ｍｇ（７０％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２１Ｈ_１８ＣｌＮＯ_８、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：４４８．８３０４、実測値：４４８．８２９５。分析Ｃ_２１Ｈ_１８ＣｌＮＯ_８ 計算値Ｃ：５６．３２、Ｈ：４．０５、Ｎ：３．１３、実測値Ｃ：５６．２０、Ｈ：４．２１、Ｎ：３．０２。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（２−クロロ−６−メチル−ピリジン−４−オエート） ２３
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）および２−クロロ−６−メチルピリジン−４−カルバモイルクロリド（２４７ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）をＧＰ２に従って反応させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ ２：６）後に、白色泡状物１９６ｍｇ（５３％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２２Ｈ_２０ＣｌＮＯ_８、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：４６２．８５７０、実測値：４６２．８６０１。分析Ｃ_２２Ｈ_２０ＣｌＮＯ_８ 計算値Ｃ：５７．２１、Ｈ：４．３６、Ｎ：３．０３、実測値Ｃ：５６．９１、Ｈ：４．３８、Ｎ：２．９４。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（−３，５−エトキシベンゾエート） ２４
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および３，５−エトキシベンゾイルクロリド（１５７ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＧＰ２に従って反応させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：４）後に、粘性黄色油状物２９６ｍｇ（７４％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２６Ｈ_２８Ｏ_１０、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：５００．４９４５、実測値：５００．４９３２。分析Ｃ_２６Ｈ_２８Ｏ_１０ 計算値Ｃ：６２．３９、Ｈ：５．６４、実測値Ｃ：６２．４５、Ｈ：５．７９。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（−３−メチル−イソキサゾール−４−オエート） ２５
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および３−メチル−イソキサゾール−４−カルボン酸（１２７ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＧＰ１に従って反応させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：３）後に、白色泡状物２２８ｍｇ（８３％）を得た。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（−４−メチル−１，２，３−チアジアゾール−５−オエート） ２６
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および４−メチル−１，２，３−チアジアゾール−５−カルボン酸を反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：３）後に、淡ピンク色泡状物２２８ｍｇ（８３％）を得た。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（Ｎ−Ｂｏｃ−イソニペコテート） ２７
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および４Ｎ−Ｂｏｃ−イソニペコ酸（１６２ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ ３：９７）後に、灰色がかった白色の泡状物１６６ｍｇ（４９％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２６Ｈ_３３Ｏ_１０Ｎ、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：５２０．４６１６、実測値：５２０．４６３１。分析Ｃ_２６Ｈ_３３Ｏ_１０Ｎ 計算値Ｃ：６０．１１、Ｈ：６．４０、Ｎ：２．６９、実測値Ｃ：６０．１５、Ｈ：６．７９、Ｎ：２．７６。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（ｍ−アセトアミドベンゾエート） ２８
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびｍ−アセトアミド安息香酸（１２８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ ３：９７）後に、白色固形物２０２ｍｇ（６６％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２４Ｈ_２３Ｏ_９Ｎ、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：４７０．４３９２、実測値：４７０．４４０３。分析Ｃ_２４Ｈ_２３Ｏ_９Ｎ 計算値Ｃ：６１．４１、Ｈ：４．９３、Ｎ：２．９８、実測値Ｃ：６１．５２、Ｈ：５．０９、Ｎ：２．８６。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（ｍ−ベンジルオキシベンゾエート） ２９
イソソルビド−２−アスピリネート １７（２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）およびｍ−ベンジルオキシ安息香酸（１８２ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をＧＰ１に従って反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：２）後に、白色固形物３４６ｍｇ（８５％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２９Ｈ_２６Ｏ_９、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：５１８．４３４４、実測値：５１８．４３５７。分析Ｃ_２９Ｈ_２６Ｏ_９ 計算値Ｃ：６７．１９、Ｈ：５．０５、実測値Ｃ：６７．２８、Ｈ：５．０９。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（ｐ−ベンジルオキシベンゾエート） ３０
イソソルビド−２−アスピリネート（２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）およびｍ−ベンジルオキシ安息香酸（１８２ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をＧＰ１に従って反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯａｃ：Ｈｅｘ １：２）後に、白色固形物３４６ｍｇ（８５％）を得た。

ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２９Ｈ_２６Ｏ_９、［Ｍ＋Ｈ］^＋ 計算値：５１８．４３４４、実測値：５１８．４３３８。分析Ｃ_２９Ｈ_２６Ｏ_９ 計算値Ｃ：６７．１９、Ｈ：５．０５、実測値Ｃ：６７．３５、Ｈ：５．１８。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（２−ニトロキシメチル）ベンゾエート ３１
フタリド（分子量１３４．１３ｇ／ｍｏｌ、５．０３ｇ＝３７ｍｍｏｌ）およびジクロロトリフェニルホスホラン（分子量３３３．１９ｇ／ｍｏｌ、１２．３ｇ＝３８ｍｍｏｌ）を、１８０℃で４時間、撹拌しながら加熱した^［３］。緑色から褐色への色の変化が４時間の間に見られた。ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル ２：１）は、３つのスポットを示し、ＮＭＲによって、上部スポット（Ｒｆ ０．７７）が２−クロロメチルベンゾイルクロリドのスポットであり、第二スポット（Ｒｆ ０．５７）がフタリドであり、下部スポット（Ｒｆ ０．１４）がトリフェニホスホラスであることを確認した。多量のフタリドが未反応であった。２−クロロメチルベンゾイルクロリド（図１２）（分子量１８９．０４ｇ／ｍｏｌ、６００μＬ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（分子量１０１．１９ｇ／ｍｏｌ、ｄ＝０．７２６ｇ／ｍＬ、６００μＬ＝４．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。化合物１７（分子量３０８．１４ｇ／ｍｏｌ、０．５２９８ｇ＝１．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、光から保護しながら室温で一晩撹拌した。混合物（緑色）を、ＨＣｌ（２Ｍ、１０ｍＬ）、５％ ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）、および蒸留水（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濃縮して、褐色／緑色油状物７６９．５ｍｇを得た。これをクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（２：１）を使用）に付して、褐色固形物（Ｒｆ ０．３８）４１９．４ｍｇを得た。

４００ｍｇをＣＨ_３ＣＮ／ＴＨＦ（６ｍＬ、４／２ ｖ／ｖ）に溶解し、ＡｇＮＯ_３（分子量１６９．８７ｇ／ｍｏｌ、０．３０ｇ＝１．７ｍｍｏｌ）で処理し、４時間還流させ、次に、光から保護しながら室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。これを酢酸エチル（１０ｍＬ）および水（２ｍＬ）で再形成した。有機相を、水（３×２ｍＬ）、ブライン（２ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して油状物を得、これをクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（２：１）を使用）に付して、黄色蝋状物質９５ｍｇを得た。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（３−ニトロキシメチル）ベンゾエート ３２
３−クロロメチルベンゾイルクロリド（分子量１８９．０４ｇ／ｍｏｌ、ｄ＝１．３３ｇ／ｍＬ、５００μＬ＝３．５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（分子量１０１．１９ｇ／ｍｏｌ、ｄ＝０．７２６ｇ／ｍＬ、６００μＬ＝４．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。化合物１７（分子量３０８．１４ｇ／ｍｏｌ、０．５１１ｇ＝１．６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を光から保護しながら室温で一晩撹拌した。混合物を、ＨＣｌ（２Ｍ、１０ｍＬ）、５％ ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）および蒸留水（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濃縮して、油状物１．１８ｇを得た。これをクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（３：１）を使用）に付して、油状物（Ｒｆ ０．２）９０３．４ｍｇを得た。

これをＣＨ_３ＣＮ／ＴＨＦ（６ｍＬ、４／２ ｖ／ｖ）に溶解し、ＡｇＮＯ_３（分子量１６９．８７ｇ／ｍｏｌ、０．６７ｇ＝３．９ｍｍｏｌ）で処理し、４時間還流させ、次に、光から保護しながら室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。これを酢酸エチル（１０ｍＬ）および水（２ｍＬ）で再形成した。有機相を、水（３×２ｍＬ）、ブライン（２ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して油状物を得、これをクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（１：１）を使用）に付して、黄色蝋状物質１８４．３ｍｇを得た。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（４−ニトロキシメチル）ベンゾエート ３３
４−クロロメチルベンゾイルクロリド（分子量１８９．０４ｇ／ｍｏｌ、６５０μＬ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（分子量１０１．１９ｇ／ｍｏｌ、ｄ＝０．７２６ｇ／ｍＬ、６００μＬ＝４．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。化合物１７（分子量３０８．１４ｇ／ｍｏｌ、０．５３２０ｇ＝１．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を光から保護しながら室温で一晩撹拌した。混合物を、ＨＣｌ（２Ｍ、１０ｍＬ）、５％ ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）および蒸留水（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濃縮し、クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（２：１）を使用）に付して、白色固形物１００ｍｇを得た。

これをＣＨ_３ＣＮ／ＴＨＦ（６ｍＬ、４／２ ｖ／ｖ）に溶解し、ＡｇＮＯ_３（分子量１６９．８７ｇ／ｍｏｌ、７５ｍｇ＝０．４ｍｍｏｌ）で処理し、４時間還流させ、次に、光から保護しながら室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。これを酢酸エチル（１０ｍＬ）および水（２ｍＬ）で再形成した。有機相を、水（３×２ｍＬ）、ブライン（２ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して油状物を得、これをクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（２：１）を使用）に付して、灰色がかった白色の固形物２８．３ｍｇを得た。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−（ニトロキシ）−アセテート ３４
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のイソソルビド−２−アスピリネート １７（０．４９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（０．３３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．０２ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびニトロキシ酢酸（０．１９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、次に、濾過し、濾液をＨＣｌ（２×１０ｍＬ、０．１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２×１０ｍＬ）および水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した後、ジクロロメタンを真空除去して、生成物を粗油状物として得た。シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチル（５：２）を溶離として使用）によって精製して、化合物２３（０．３８ｇ）を無色油状物として得た。
ＩＲ_ｖｍａｘ（フィルム）ｃｍ^−１：１７５９．０および１７２７．５（Ｃ＝Ｏ）、１６４３．６（ＮＯ_２）、１２８７．７（ＮＯ_２）、１２５６．３（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、１１９３．５（Ｃ−Ｏ−Ｃ）。ＨＲＭＳ：計算値：４１１．０８０２（Ｍ^＋）、実測値：（Ｍ^＋）。

イソソルビド−２−アスピリネート−５−モノニトレート ＩＳＭＮＡ
トルエン（１００ｍＬ）中のＩＳ−５−ＭＮ（５ｇ、２６．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、トリエチルアミン（５．５２ｍＬ、３．９６ｍｍｏｌ）およびアセチルサリチロイルクロリド（６．３１ｇ、３１．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温にもどし、６時間撹拌し、次に、水（２×５０ｍＬ）、ＨＣｌ（１Ｍ、２×５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空除去して、生成物を油状物として得た。これをエタノールから結晶化して、生成物５．４２ｇを白色結晶として得た（５８．０５％）。
融点８２〜８４℃。ＩＲ_ｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１７５７．６および１７３３．４（Ｃ＝Ｏ）、１６５１．８（ＮＯ_２）、１２６１．４（Ｃ（Ｏ）ＯＲ、芳香族）、９１５．５（ＯＮＯ_２）ｃｍ^−１。ＨＲＭＳ：計算値：３７６．０６４５（Ｍ^＋＋２３）、実測値：３７６．０６４０（Ｍ^＋＋２３）。

実験方法：血漿／酵素溶液を使用する加水分解試験
燐酸緩衝液ｐＨ７．４を用いた血漿の希釈によって、プール血漿／血清溶液（４ｍＬ）を正確な濃度に調製した（例えば、１０％溶液の場合、０．４ｍＬの血漿／血清を３．６ｍＬの燐酸緩衝液ｐＨ７．４に添加した）。３７±０．５℃での血漿／血清試料の平衡後に、アセトニトリル中の試験化合物の保存溶液（１×１０^−４Ｍ）１００μＬを添加し、２５０μＬのアリコートを所定時間間隔で除去した。ｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏの２％ｗ／ｖ溶液（水：アセトニトリル、１：１）５００μＬを含有する１．５ｍＬのエッペンドルフ試験管に、試料を移した。試験管を２分間渦撹拌し、次に、１０，０００ｒｐｍにおいて３分間、室温で遠心分離した。上澄みを吸引除去し、ＨＰＬＣによって分析した。試験化合物および代謝産物の濃度を、同じ濃度範囲および同じ実験条件下で当日に得た校正曲線に関して測定した。腸管吸収後の薬剤の初回通過の間の条件を模倣するために、選択化合物をヒト肝臓（ＨＬＭ）および腸管上皮（ＨＩＭ）からのミクロソームの存在下に３７℃で燐酸緩衝液中においてインキュベートした。これらの条件下のエステルの代謝運命も、培地中の薬剤および代謝産物の濃度を時間の関数として測定することによって、ＲＰＨＰＬＣにより確認した。関与酵素の素性は、血漿（ＢｕＣｈＥ）の場合は精製酵素を使用することによって、および、エステラーゼ特異性阻害剤（ＢｕＣｈＥについてはｉｓｏＯＭＰＡ、およびカルボキシエステラーゼについてはＢＮＰＰ）の存在下に加水分解実験を繰り返すことによって、確認した。血漿およびミクロソーム試料のＢｕＣｈＥ活性は、Ｅｌｌｍａｎアッセイにより決定された（Ｅｌｌｍａｎら、１９６４）。

ＨＰＬＣ手順
高速液体クロマトグラフィーは、Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウエアによって制御されるＷａｔｅｒｓ６００ポンプおよびコントローラー、Ｗａｔｅｒｓ ７１７自動試料採取器、およびＷａｔｅｒｓ２９９６フォトダイオードアレー検出器から成るシステムを使用して行なった。Ｈｉｃｈｒｏｍ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ Ｃ１８カラム（４．０×２５０ｍｍ）を使用した。移動相は、使用前に濾過し、アッセイ全体を通してヘリウムを注入した。使用した最終勾配法は下記の通りであった：

該方法は、直線性、精度、ならびにＬＯＱおよびＬＯＤの代謝産物に関して承認された。アスピリンおよびサリチル酸の優れた分離を与える方法を開発することは、時間を要する作業であり、なぜなら、緩衝液ｐＨ３．１９を使用するスフェリソルブ（ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ）ＯＤＳ Ｃ１８カラムの初期選択が、極度のテーリングおよび低分離を与えたからである（ｐＨ３．１９の緩衝液は、それらのｐＫａに近いので選択された（アスピリンは３．５であり、サリチル酸は２．９７である）^［２］）。これは、最終的に、ヒクロムヌクレオシル（ｈｉｃｈｒｏｍ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）カラムおよび緩衝液ｐＨ２．５を使用することによって解決した。アスピリンは３．５のｐＫａを有する弱酸であるので、緩衝液ｐＨをそのｐＫａより低くすることは、化合物がより疎水性になるので保持を減少させる。ヌクレオシルカラムは、２つの化合物の優れたピーク形および分離を与えた。最初に、一水和物塩を使用し、これは、１８分において大きい緩衝剤ピークを生じた。二水和物塩の使用は、ピークを除去した。しかし、この操作の終わり近くで、いくつかの大きい緩衝剤ピークが再び現れ始めた。

主要化合物がアスピリン様活性を有することを立証する血小板凝集阻害、ＴＸＢ_２、血小板ＧＰ２Ｂ３Ａ発現、ＭＤＡおよび対応するデータを測定する方法も存在する。

全血凝集試験
血液の５００μＬアリコートを、生理食塩水５００μＬと混合し、３７℃で１０分間、Ｃｈｒｏｎｏ−Ｌｏｇ全血凝集検出計５９１／５９２型の培養ウェルにおいて、インキュベートした。次に、試料をアッセイウェルに移し、基線を確定し、適量の前記試薬を添加した。凝集を６分間にわたって監視し、インピーダンス出力をチャート式記録計に記録した。阻害剤を試験する際、刺激剤の添加（撹拌しながら１０分間）の前に、全血を、ＤＭＳＯ中の適切な濃度の阻害剤と共に３７℃において所定時間にわたってプレインキュベートした。３種類の凝集剤、ＡＡ（０．５ｍＭ）、ＡＤＰ（１０μＭ）およびコラーゲン（５μｇ／ｍＬ）を使用した。阻害剤の存在下に凝集反応が観察されなかった場合、対照実験を阻害剤の非存在において行なった。高濃度（０．２５％以上）のＤＭＳＯは、血小板細胞質イオン化カルシウムにおける濃度依存性変化を誘発しうる。各実験前に、ＰＲＰを使用して対照を実験して、正常凝集反応を得た。試料を、３７℃で１０分間、１０μＬのＤＭＳＯと共にインキュベートして、それが凝集反応への阻害作用を有していないことを確かめた。ＩＳＡＳの２つの代謝産物、サリチル酸およびイソソルビドを、それらが血小板への阻害作用を有するかを確認するために試験した。このモデルにおいて、ＩＳＡＳは、全ての凝集刺激剤に対する血小板凝集の阻害において、アスピリンまたはＩＳＤＡより有意に高い効力を示した。

血小板に富む血漿の血小板凝集
試験前の少なくとも１４日間に血小板機能に作用することが公知であるどのような薬剤も服用していない健康なボランティアから、血液を採取した。血小板に富む血漿（ＰＲＰ）および洗浄血小板懸濁液（２．５×１０^８血小板／ｍＬ）を、先に記載した血液から調製した。
先に記載した光凝集測定によって、血小板凝集を測定した。簡単に言えば、凝集剤の添加前に、ＰＲＰおよび洗浄血小板試料（２．５×１０^８／ｍＬ）を、全血イオン化カルシウム光凝集検出計（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ Ｃｏｒｐ．、Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ、ＰＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）および（ＢＩＯ／ＤＡＴＡ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ）に配置し、３７℃で１０分間、９００ｒｐｍで撹拌しながらインキュベートした。作用物質の添加によって凝集を開始させ、Ａｇｇｒｏ−Ｌｉｎｇソフトウエアによって少なくとも６分間監視した。阻害剤を使用する実験のために、これらの化合物と共に１０分間プレインキュベーションした後に、凝集を開始させた。

ＡＤＰの凝集効力を試験するために、濃度反応（０．３〜１０ｕＭ）曲線を生成した。種々の濃度（３〜５ｕｇ／ｍＬ）のコラーゲンも使用して、血小板凝集を誘発した。作用物質の最大下濃度、即ち、最大凝集の約９５％を生じる濃度を使用して、凝集阻害剤の作用を試験した。結果を、最大光透過のパーセント変化で示し、１００％は血小板培地のみの光透過を表わす。

ＴＸＢ２合成の阻害
アスピリンは、細胞内でトロンボキサンシンターゼによって強力凝集物質ＴＸＡ_２に変換されるＰＧＨ２の、シクロオキシゲナーゼ媒介合成を減少させることによって、血小板凝集を阻害する。ＴＸＡ_２は、直接測定に極めて消失性および不安定性であるが、その代謝産物ＴＸＢ_２は、親の有用な指標を与えると一般に考えられている。生体内または生体外での組織のアスピリン処理は、ＴＸＢ_２の抑制に反映される。これに関して本発明化合物とアスピリンとを比較するために、非処理全血を、アスピリンまたは試験化合物の存在下に、３７℃で１時間にわたって凝固させた。次に、試料を遠心分離した。血清を収集し、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから得た酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）キットを使用して、ＴＸＢ_２を測定した。その実験は、ＴＸＢ_２合成の完全阻害を与える数値からの下降濃度でアスピリンを使用して行なった。これらのアッセイにおいて、ＩＳＡＳは、より低いＩＣ_５０に反映されるように、アスピリンより有意に強力であった。

フローサイトメトリー
個々の血小板の表面における受容体発現を分析するために、および試料調製手順によって生じる血小板活性を最小限にするために、撹拌または渦撹拌工程は使用しなかった。阻害剤の存在および非存在下の、血小板表面の活性ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａおよびＰ−セレクチンの存在量を、フローサイトメトリーによって測定した。血小板試料を、先ず、作用物質、コラーゲンまたはＡＤＰで活性化した。血小板凝集が５０％最大光透過に達した際に、反応を、生理食塩水での１０倍希釈によって停止させた。休止血小板（ｒｅｓｔｉｎｇ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ）を対照として使用した。大部分の実験において、血小板を、作用物質の添加前に１０分間、阻害剤と共にプレインキュベーションした。次に、血小板試料を、暗所で、飽和濃度（１０μｇ／ｍＬ）のＰ−セレクチン（ＣＤ６２Ｐ−ＡＰＣ）の存在下に室温で５分間、撹拌せずにインキュベートした。活性ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ血小板受容体は、前記と同じ濃度でＰＡＣ−１モノクローナル抗体を使用して測定した。ＰＡＣ−１は、血小板または血小板付近における、活性血小板の高親和性ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体上のエピトープを特異的に認識する^５。インキュベーション後、試料をＦＡＣＳ Ｆｌｏｗ液で希釈し、５分以内に、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ）を使用して分析した。フローサイトメトリーを、先に記載したように、単一染色血小板試料において行なった^３。大きさ（前方散乱）、粒状度（側方散乱）および細胞蛍光を測定するために器具を構成した。単一血小板を入れ、血小板凝集物および微小粒子を除外するために、前方および側方散乱の二次元分析ゲートを引いた。個々の血小板の蛍光を分析することによって、抗体結合を測定した。細胞自己蛍光についての補正後に、平均蛍光強度を測定した。各試料について、対数尺を使用して、蛍光を分析した。蛍光ヒストグラムを、１０，０００の各事象に関して得た。Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ ＲＸＰソフトウエアを使用してデータを分析し、任意単位における対照蛍光のパーセンテージとして表わした。

加水分解およびアスピリン放出測定のための生物学的試料の調製
ヒト血液試料は、静脈穿刺によって、Ｌｉ−Ｈｅｐａｒｉｎ Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｏｎｏｖｅｔｔｅ管に採取した（９ｍＬ）。血漿試料は、１０，０００ｒｐｍで５分間の血液の遠心分離によって得、試験に必要になるまでアリコートにして凍結した。プールヒト肝臓ミクロソーム（ＨＬＭ）は、燐酸緩衝液ｐＨ７．４（０．１Ｍ）で５ｍＬに希釈して、２ｍｇ／ｍＬの保存溶液を得た。試験に必要になるまで、アリコートを凍結した。プールヒト腸ミクロソームは（ＨＩＭ）は、燐酸緩衝液ｐＨ７．４（０．１Ｍ）で５ｍＬに希釈して、８０μｇ／ｍＬの保存溶液を得た。試験に必要になるまで、アリコートを凍結した。

コリンエステラーゼ活性
ＨＬＭおよびＨＩＭにおけるブチリルコリンエステラーゼ（ＢＣｈＥ）活性を、３７℃で、Ｅｌｌｍａｎ法（Ｅｌｌｍａｎら、１９６４）によって、分光光度的に（４０５ｎｍ）測定した。ブチリルチオコリンヨージド（ＢＴＣＩ）（０．５ｍＭ）を基質として使用した。反応を、最終容量２５０μＬの９６ウェルの培養皿で行なった。最初に、燐酸緩衝液ｐＨ８．０（０．１Ｍ）およびミクロソームを混合し、３０分間インキュベートした。ＤＴＮＢ（０．３ｍＭ）およびＢＴＣＩを添加し、反応を測定した。ミクロソームへの音波破砕（４×５秒）を使用し、中間で氷の上に１分間置いて、アッセイも行なった。これは、ミクロソームが試薬の浸透のために開くことを確実にする^［５］。活性を方程式１によって計算した：

表２は、番号付け、および３７℃、ｐＨ７．４（燐酸緩衝液）の緩衝ヒト血漿への候補エステルの添加後にピークアスピリン生成において測定した初期エステル濃度（モル）のパーセンテージとしてのアスピリンの量と共に、化合物を示す。

試験動物からの血漿における試験の結果
Ｉｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート ２（０．１ｍＭ）の定量的加水分解スクリーニングは、モルモット、ハムスター、ウサギおよびサル血漿を使用して試験した。この試験の目的は、生物学的試験および臨床前開発に好適な種を決定することであった。結果は、既に同定されているヒト酵素の役割を確認するものであると考えられた（なぜなら、これらは実験動物に多様に分布しているからである）。

いったん勾配法が成功裡に開発されると、ウサギは血小板凝集試験の潜在的モデルであるので、５０％ウサギ血漿における２の加水分解を行なった。Ｅｌｌｍａｎアッセイは、１．１μｍｏｌ／Ｌ／分でのＢＣｈＥ活性を示した。結果は、ハムスターおよびサルが臨床前試験の好適な候補になることを示唆している。これらの種からの血漿は、ヒトと類似したレベルのＢｕＣｈＥを有するので、ヒト代謝におけるその酵素の役割も裏付けられる。

腸管または肝臓ミクロソームの存在下のＩｓ−２−アスピリネート−５−サリチレート、ＩＳＡＳ（２）の加水分解結果
ヒト血漿における加水分解試験は、ＩＳＡＳ（２）が成功のアスピリンプロドラッグであることを示した。この研究は、吸収段階の間に他の組織において、主に胃上皮および後に肝臓において、どれぐらいのアスピリン放出が起こるかを評価するために、肝臓および腸ミクロソーム調製物を含むように分析を広げることを意図していた。ヒト肝臓ミクロソームおよびヒト腸ミクロソームの存在下に薬剤をインキュベートした際に、９μＭおよび５６μＭのアスピリンが生成された（それぞれ、図１３および図１４）。これは、ＢＣｈＥの存在によるのか、または何らかの他の酵素によるのかについて、疑問を生じ、なぜなら、ヒト血液はブチリルコリンエステラーゼのみを含有するが、肝臓および腸管上皮はカルボキシエステラーゼ（ＣＥ）（主に、肝臓にＣＥ−１、腸管にＣＥ−２）も含有するからである。従って、プロドラッグの添加前に、ミクロソーム調製物を、ｉｓｏ−ＯＭＰＡ（確立されたＢＣｈＥ阻害剤）と共にプレインキュベートし、それによって、ミクロソーム調製物に存在しうるどのようなＢＣｈＥも阻害するのに充分な時間を与える。次に、加水分解アッセイを先に記載したように実施して、アスピリン生成において、あるとすればどのような作用があるかを調べた。特異的ＢＣｈＥ阻害剤の使用は、アスピリン生成を減少させず、何らかの他の酵素が関与していることを示唆した。Ｅｌｌｍａｎアッセイを両ミクロソーム調製物において行ない、存在するとすればどのようなレベルのＢＣｈＥが存在するかを測定した。極少量が見出されたにすぎず（表３．１）、高レベルのアスピリン生成を生じるとは考えられなかった。

ブランク女性血漿＝１４．９８μｍｏｌ／Ｌ／分。血漿は約５ｍｇ／Ｌ ＢＣｈＥを含有し^［５］、従って、これは０．０１２５μｇ／ｍＬ ＢＣｈＥの等量である。

ウサギ肝臓カルボキシラーゼを使用して、薬剤の加水分解を測定し、５．９９μＭアスピリンが生成された（図１８）−ＨＬＭと同様のレベル。

薬剤の添加前に、ＢＮＰＰ、既知のカルボキシエステラーゼ阻害剤を、ＨＩＭおよびＨＬＭと共に１０分間インキュベートし、それによってカルボキシエステラーゼ活性をノックアウトした。アスピリン生成の顕著な減少が見られ、６０分後、薬剤が消失しなかった。それは、ＩＳＡＳがＣＥ−１およびＣＥ−２ならびにＢｕＣｈＥの基質であると結論付けることができる。これらの酵素は、同じファミリーに属するが、基質特異性において顕著な違いを有する。例えば、ＣＥ酵素は、正荷電基質、例えば、コリンエステルを包含するＢｕＣｈＥに好まれる基質の、加水分解において、非効率である。これらの酵素は、通常、一緒のグループに分けられない。意外にも、ＩＳＡＳの場合、ＨＩＭ試料に存在するＣＥ−２は、ＢｕＣｈＥと同じ特異性および有効性を示し、アスピリン放出の同様に適したベクターである。結果は、２つ以上の酵素が、化合物からアスピリンを放出できることを示す。

Ｉｓ−２−アスピリネート−５−（４−ニトロキシメチル）ベンゾエート ２２の加水分解結果

非イソソルビド系参考アスピリンエステルの加水分解結果
２つの非イソソルビド系アスピリンエステル、即ち、２−メトキシフェニル−２−アセトキシベンゾエート（グアイコルエステル）および２−アセトキシ安息香酸フェニルエステルの加水分解を、ヒト腸ミクロソーム（４０μｇ／ｍＬ）において評価した。これらのエステルはいずれも、ヒト血漿においてアスピリンプロドラッグとして作用せず、即ち、ヒト血漿エステラーゼ作用が、これらのエステルからのアスピリン放出を生じさせない。

フェニルアスピリネートは、ヒト腸ミクロソームと接触して、無視できる量のアスピリンを生成し、これは、これらの基質に対して、ＣＥ−２優先度がＢｕＣｈＥとわずかに異なることを示し、それの存在下に加水分解がアスピリン発生なしに起こる。しかし、ＩＳＡＳおよびニトロキシメチル類似体と比較して、アスピリン生成がほとんどなかった。言い換えれば、これらの化合物は、ヒト血漿においてアスピリンプロドラッグではなく、ＣＥ−２の存在下に非効率アスピリンプロドラッグである。データは、ＣＥ−２と本発明のプロドラッグとの相互作用が、有効なアスピリン生成を生じる点で独特であることを示している。

Claims (17)

1. 一般構造：
   

   

   を有するイソソルビドアスピリネート化合物、またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物であって、式中、Ｙは、
   Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステルであり、それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよいか；
   アリールエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステルであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよいか、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇであり、ここでＲ^ｒｉｎｇは、イソ−オキサゾールオエート、オキサゾールオエートまたはチアジアゾールオエートから選択される環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり、これは、非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく、これは、少なくとも１個のヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルによって置換されてもよく、ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０であり、
   そして該アリールエステルは、ベンゼン、トルエン、キシレン、安息香酸、ベンゾエート、ニコチネートおよびハロベンゼンからなる群より選択される、イソソルビドアスピリネート化合物、またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
2. 一般構造：
   

   

   
   を有するイソソルビドアスピリネート化合物、またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物であって、式中、Ｙは、
   Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシエステル、Ｃ _３ 〜Ｃ _１０ シクロアルキルエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ シクロアルコキシエステルであり、それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ _２ で置換されてもよいか；
   置換されていてもよいし非置換であってもよい、アリールエステル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルアリールエステル、イソ−オキサゾールオエート、オキサゾールオエートまたはチアジアゾールオエートであり、それらは、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキル、ベンジル、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ _２ 、−ＯＮＯ _２ 、−（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ 、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ _２ ） _ｍ ］ _{ｃｙｃｌｉｃ} ＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ _２ 、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＯＮＯ _２ またはＣ _１ 〜Ｃ _５ ハロアルキルエステルからなる基のうちの少なくとも１つによって置換されてもよく、ここで、Ｒは、Ｃ _１ 〜Ｃ _８ アルキルまたはＣ _１ 〜Ｃ _８ アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０であり、
   そして該アリールエステルは、ベンゾエート、ニコチネートおよびイソニコチネートからなる群より選択されるか、またはベンゼン、トルエン、キシレン、安息香酸からなる群より選択されるアリール基を含む、イソソルビドアスピリネート化合物、またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
3. 前記アリールエステルは、ベンゼン環の２位または３位において、ヒドロキシド、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルによって置換されており、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
4. 前記アリールエステルがベンゾエートまたはニコチネートである、請求項３に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
5. 前記一酸化窒素放出基が、硝酸エステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステル、またはＣ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル硝酸エステルを含む、請求項１、３または４のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
6. 前記一酸化窒素放出基が、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２および−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２からなる群より選択され得る、請求項５に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
7. 前記ハロアルキルエステルのハロ置換基が、Ｃｌ、ＢｒまたはＦである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
8. Ｙが
   

   

   であり、ここで、ＸおよびＺは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
9. Ｙが
   

   

   
   からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物。
10. 以下からなる群より選択される構造を有する、イソソルビドアスピリネート化合物、またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物：
    

    
11. 一般構造：
    

    

    を有する薬剤用担体化合物であって、式中、Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、アリールエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｒｉｎｇであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく、ここで、Ｒ^ｒｉｎｇは、環系の炭素と置き換えられた少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環または非芳香族５員環であり；
    Ｘは、アスピリネートである、薬剤用担体化合物。
12. Ｙは、
    （ｉ）Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステル、Ｃ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル、アリールエステル、またはＣ_１〜Ｃ_８アルキルアリールエステルであり、それらは非置換であってもよく、または少なくとも１個の一酸化窒素放出基で置換されてもよく；
    （ｉｉ）Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；あるいは
    Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；あるいは
    非置換または置換のアリールエステル、アルキルアリールエステル、ベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
    であり、
    ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０であり；ならびに
    （ｉｉｉ）Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシエステル（それは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；あるいは
    Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキルエステルまたはＣ_１〜Ｃ_８シクロアルコキシエステル（それらは非置換であってもよく、またはＯＮＯ_２で置換されてもよい）；あるいは
    非置換または置換のベンゾエートまたはニコチネート基（それらは、ヒドロキシド、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、−ＯＮＯ_２、−（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２、−ＯＣ（Ｏ）［（ＣＨ_２）_ｍ］_{ｃｙｃｌｉｃ}ＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒＯＮＯ_２、−ＯＣＯＡｒ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＯ_２またはＣ_１〜Ｃ_５ハロアルキルエステルを含む群のうちの少なくとも１つによって置換されてもよい）；
    ここで、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_８アルコキシ基であり、ｎ＝１〜８、ｍ＝３〜１０である；
    からなる群から選択される、請求項１１に記載の担体化合物。
13. 前記一酸化窒素放出基が、硝酸エステル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステル、Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル硝酸エステル、またはＣ_１〜Ｃ_８アルキル硝酸エステルを含む、請求項１１または１２に記載の担体化合物。
14. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物、または請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の担体化合物および少なくとも１つの医薬的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
15. 医薬として使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物を含む組成物。
16. 心臓血管および脳血管障害、疼痛、発熱、炎症、癌、アルツハイマー病または認知症の処置において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物を含む組成物。
17. 心臓血管および脳血管障害、疼痛、発熱、炎症、癌、アルツハイマー病または認知症の処置に使用するための医薬の製造における、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩および／もしくは水和物の使用。

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