MX2010006878A - Profarmacos de aspirina eficientes. - Google Patents

Abstract

La aspirina es uno de los fármacos más ampliamente utilizados en el tratamiento de inflamación, dolor y fiebre. Recientemente ha sido encontrada una aplicación en la prevención de ataques de corazón e infarto y está siendo estudiado como un agente químiopreventivo de cáncer. A pesar de su valor la aspirina continua siendo poco utilizada porque causa sangrado gástrico. La tecnología bajo desarrollo potencialmente remueve éste problema. La misma es diseñada para reducir el contacto entre el fármaco y la pared intestinal. Un compuesto de profármaco de aspirinato isosorbide es proporcionado. El compuesto tiene la estructura general como se muestra en la formula general (1) en donde Y es éster de alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, éster alcoxi de 3 a 10 átomos de carbono, un aril éster, un éster alquilaril de 1 a 8 átomos de carbono o -C(O)ORaniiio, donde Ranillo es un anillo de 5 miembros aromático o no aromático que tiene al menos un heteroátomo sustituido para un carbono del sistema de anillo, que puede ser no sustituido o sustituido con al menos un grupo liberador de óxido nítrico.

Description

PRO FARMACOS DE ASPIRINA EF ICIENTES ! Cam po de la Invención j Esta invención se refiere a profármacos de aspi rina potentes i que son estables a humedad y a hacia condiciones encontradas en el tracto G l pero que se desintegran rápidamente durante y después de j la absorción para liberar la aspirina y/o óxido n ítrico (NO). j Anteced entes de l a I nve n ci ó n : i La aspirina es uno de los fármacos más ampliamente utilizados i del mundo. El uso regular se asocia con la reducción del nesgó de mortalidad en todos los grupos de riesgo cardiovasculares. E|S un I agente antiinflamatorio, analgésico y anti-pi rético y se utiliza en la l ucha contra enfermedad cardiovascular y se predice que tiene u na función en la prevención d e cánceres colorrectales, esofágicos, I gástricos y de pulmón (por ejemplo Chan 2005) así como ataque al corazón , enfermedad de Alzheimer (Etminan y colaboradores, 2003) y otras formas de demencia. Algunos modelos predicen qu i e el consumo d iario de aspirina por la gente de más de cincuenta años de edad doblaría sus oportunidades de vida hasta sus 90 años dei edad (Morgan, 2003).

Los efectos secundarios principales asociados con el uso de ! aspirina son gastrointestinales. La aspirina causa dispepsia en casi la mitad de todos los pacientes y triplica el riesgo de sangraco G l . Los estudios endoscópicam ente controlados muestran un riesgo incrementado de sangrado en todas las dosis de aspi ri na incliso en las dosis relativamente bajas usadas en la prevención de infarto del miocardio ( M I). En un estud io, 1 0% de pacientes en dosis baja de aspiri na ( 1 0-300 mg/d ía) tienen úlceras endoscópicas después dé 1 2 semanas, con un caso que ocurre a 1 0 mg/d ía (Cryer & Feld man , 1 999 , Cryer 2002). Varios estudios han mostrado que el sangrado í comienza de 5 a 30 días después del inicio de la terapia que indica que no ocu rre la adaptación. Significativamente, el riesgo de efejctos i secundarios G l ha limitado el uso de aspirina en g rupos de paciejntes con una alta probabilidad de un evento trombótico : en una población I aleatoria el riesgo de lesión Gl seria es más alto que el riesgb de I muerte prevenible por aspiri na. Hasta el momento , no hay datos relacionados a dosis confiables para el uso profiláctico de aspi rina en cáncer, sin embargo, parece probable que sea superior qiiie la dosis óptima requerida para su función establecida en la prevención de ataque al corazón y así es probable que sea un nesgo incrementado de mayor toxicidad G l . Aunque los riesgos absolutos sean bajos ( 1 -2%), su consumo prolongado y rápidamente creciente ? causa toxicidad gastrointesti nal inducida por aspirina siendo una preocupación de salud pública (Morgan, 2003; Laheij 2001 ; Newton y colaboradores, 2004). Se reconoce un número de contri buciones a la toxicidad G l por aspirina. La pared del intestino está protegida contra el contenido luminal áspero por una capa protectora . | Esta barrera es mantenida en parte por las dos enzimas ciclooxigjenasa (COX-1 y COX-2). Los efectos protectores cardiovasculares de aspiri na provienen de su i nh ibición de la enzima ciclooxigenasa de plaqueta COX- 1 , mientras que sus efectos citoprotectivos se |han atribuido a su capacidad única de aceti lar la enzima ciclooxige nasa COX-2 que ocasiona que el ácido araquidónico se desvíe lejos de PG E2, un promotor de cáncer, hacia HETE , un supresor de cá ncer. i COX-2 también tiene una función en la cicatrización de herida en el G IT. La aspi rina inhibe, estas enzi mas mientras pasa a través del intestino durante la absorción y así atenúa su función protectora'. El i aspecto bioqu ímico de toxicid ad por lo tanto resulta de la inhibición local de COX-1 y COX-2 por aspi rina que lleva a la supresión d e l as prostaglandi nas (PG E2, PG I2) que reg ulan normalmente la secreción de ácidos gástricos y flujo de sangre. Existe también un aspecto i qu í mico claro de la toxicidad de aspi rina. La aspiri na es un ácido hidrofóbico (pKa 3.5). Es soluble en l ípidos a valores de pH ba'jos y puede traspasar la capa hidrofóbica que cubre el epitelio permitj íendo el acceso por contenidos luminales , causando irritación , llevando eventual mente a ulceración . Ésta puede ser la causa mas importante de toxicidad que el com ponente bioquímico. En un estudio reciente, la administración de aspirina oral a ratas causó lesiones gástricas mientras que no hubo daño gástrico cuando el fármaco se dio subcutáneamente, a pesar de la evidencia ¡de la inhibición de COX de ambas rutas (Mahita , 2006). La toxicidjad G l inducida por fármaco es muy compleja y el objetivo de l es frecuentemente adverso pero este estud io particular i toxicidad qu ímica es significativa.

El problema de toxicidad Gl . ha sido el foco farmacéutica durante muchos años, pero los estudios endoscópióos ¦ ! demuestran que las soluciones convencionales tal cómo revesti m ientos entéricos o amortiguación son en el mejor de ! los casos inadecuados (Kelly y colaboradores , 1 996 , Walker y colaboradores . , 2007). Así estableciendo nuevas maneras de liberar | la aspiri na o tratar sus efectos Gl es una cuestión de importancia i pública y una oportunidad comercial significativa. ^ ' Una solución potencialmente valiosa al problema es el di seño de derivados de aspirina capaces de retardar la ocurrencia de la liberación de aspi rina en el tracto Gl hasta después de la absorjción i en el plasma. Tal derivado debe llamarse correctamente profármaco .

Los profármacos son agentes terapéuticos que son por sí mismos inactivos pero en agentes activos en forma de metabolismo (Aljbert, 1 958). Los profármacos de aspirina se investigaron durante mujchos años como un medio para la reducción de su toxicidad gástrica (Jones, 1 985). | El , profármaco de aspirina original razonado propone ; q ue bloquear el ácido carboxilico de aspiri na , por ejemplo con un éster, supri mirá eficazmente el aspecto qu ímico de la toxicidad gástrica I que resulta del contacto directo entre el ácido carboxilico de aspiri na y la mucosa gástrica. Se espera que los ésteres de aspirina que se I activan durante el paso a través del epitelio gastrointesti nal exh iban I i una toxicidad gástrica mayormente reducida si este modelo es i correcto , incluso si la liberación del fármaco sucede dentro de las . I células epiteliales.

Cuando el componente bioquímico de toxicidad de aspirina hace más ampliamente apreciado, la exposición razonada del profármaco fue refinada. En contraste con la aspirina, sus ásteres i no tienen la capacidad de inhibir COX. Por lo tanto no interrumpirían la síntesis de prostaglandinas protectoras durante el paso a través de la pared del intestino. Entonces, después de la absorción!, las I esterasas en la sangre desintegrarían el éster, liberando la aspirina.

El fármaco alcanzaría más adelante el intestino a través de la ¡ circulación sistémica pero en una concentración mucho menor; la aspirina se metaboliza rápidamente en el cuerpo y tiene un período I de solamente 20 minutos. Se sospecha que el bloqueo eficaz de los ¡ sistemas de defensa de la mucosa dependiente de COX requiere una concentración un poco alta de aspirina. Esto es debido a q!ue la aspirina es un inhibidor débil de una de las enzimas de COX (COX-1) y un inhibidor muy débil de la otra (COX-2). En otras palabras, la aspirina inhibe ambas enzimas protectoras durante la fase de ? absorción pero es poco probable alcanzar la concentración requerida i para bloquear ambas enzimas después de la distribución a través del cuerpo seguido de la absorción (una clase similar de argumento i farmacocinético explica la inhibición selectiva de la aspirina del tromboxano de plaqueta A2 con repecto a la prostaciclina endlotelial en el corazón (Pedersen A.K. & FitzGerald G.A. 1984)).

Se espera que los ésteres del profármaco de aspirina por lo tanto tengan una toxicidad Gl menor debido a que no causarán i irritación tópica, el primer paso de la aspirina a través de Gl¡ a alta concentración será evitado y l a segunda distribución es probable jque esté en una concentración que dejará intactas las funciones i protectoras dependientes de COX-2. La idea de tales profármacos de éster de aspirina es atractiva puesto que los profármacos no ¡ son ácidos durante el paso a través de la barrera protectora y nb la interrumpi rían . También se espera que tengan un impacto ¡más pequeño en la maquinaria bi oqu ímica que regula la barrera, e'stán activados en el epitelio o especialmente más adelante después de la entrada en la corriente sang uínea . Esto tiene la ventaja qué los i efectos Gl adversos asociados con la aspirina son evitados .! El i fármaco es más seguro puesto que no se activa hasta después de que haya pasado a través del tracto G l (Figura 1 ).

Otro problema con la aspiri na desde un punto de vista cl ínico es que es inestable hacia la humedad y por lo tanto no puede formularse en sol uciones. Las soluciones acuosas de aspirina serían especialmente deseables en medicina pediátrica y geriátrica. Uno de los contribuidores principales a la inestabilidad de aspi rina es una forma de autocatálisis primero descrita por Jencks and Pierre ( 1 958). i La aspirina tiene un grupo de ácido carboxílico y un grupo acetilo. El I gru po de ácido carboxílico tiene la capacidad de activar una molécula de agua próxima que genera el hidróxido que ataca el gru po acetilo. Formando un éster de aspi rina el grupo de ¡ ácido I carboxílico se enmascara y no puede acoplarse a autocatálisié. Los I ésteres de aspi rina son generalmente más estables que la aspirina y por lo tanto tiene el potencial para formularse en u na variedad de I maneras útiles que no puedan aplicarse a la aspirina . Esta seg unda ventaja a ésteres de aspirina se ha establecido experimentalment .

Por una parte, la teoría hipotetizada de elimi nación dej la toxicidad de aspiri na nunca se ha probado porque nunca ha habido I un candidato de profármaco del éster de aspirina adecuado. Esto s ! debido a que los profármacos del éster de aspirina son muy difíciles i de diseñar. U n éster de aspirina de paracetamol-benorilatado estuvo i i en el mercado durante ap roxi mad amente treinta anos hasta que se I descubrió que su dosis de administración a humanos no dio lugar a la liberación de aspirina (Wi lliams y colaboradores, 1 989). j i El problema con los ésteres de aspirina y derivados relacionados es uno metabólico . Los ésteres de aspirina se convierten en el cuerpo en u n ácido salicílico mejor que la aspirina i (N ielsen & Bundgaard , 1 989). Los ésteres de aspirina se metabolizan en tejido humano y sangre por medio de trayectorias después de la absorción. La hid rólisis rápida de ésteres de aspirina i sucede en la sangre y plasma (t1 /2 < 1 min ), pero no en el enlace de éster de aspirina portador deseado (posición B en la Fig u ra 2¡>. En el lugar, se divide el grupo acetilo (A en la Fi gu ra 2) y el pro!ducto resultante es un éster de salicilato , finalmente ácido salicílico. j Esta trayectoria bioquímica no puede prod ucir aspirina. La relación de salicilato a aspirina es generalmente mayor de 99: 1 , sin importar la identidad del grupo portador (el componente de alcohpl del profármaco usado para formar el éster con el ácido carboxílicoj del fármaco se conoce como el portador en terminología de profárm ajco ).

Si usted forma un éster de un fármaco ácido la parte que usted está j uniendo bloqua la química ácida pero también confiere a la n ueva ¡ entid ad algunas de sus propias características fisicoquímicas ¡(ver Figu ra 2). Este problema ha provocado interés como un en i|gma farmacéutico y una oportunidad comercial . Hay un cuerpo sustahcial de la literatura académica y patente en el área (Ver Gilmer y i colaboradores, 2002 y referencias del miso). Si n embargo la jgran I mayoría de compuestos referidos como profármacos de aspirina en la literatura no funciona actualmente como profármacos de aspiri rjia in i vitro o in vivo y ellos liberan el éster de salicilato correspondiente en lugar de otro (Nielsen & Bundgaard , 1 989).

Para que un éster de aspirina funcione como una hidrólisi s de profármaco en sangre la división tiene que ocurrir en el enlace de éster del portador. El desafío de diseño es que esterificando la j aspirina causa el grupo de éster incorrecto para experimentar la i hidrólisis en presencia de plasma humano . El problema primero fue explicado por Bungaard & N ielsen (1 989). Cuando la aspirina 'entra i en la corriente sangu ínea su grupo acetilo es hidrolizado pjor la enzima de esterasa domi nante en plasma humano-butilcolinesterasa (BuCh E), dando por resultad o la formación de ácido salicílico. La aspirina está negativamente cargada en el pH de la sang re y i butilcolinesterasa no está realmente en su mejor eficiericia cuando se procesan negativamente los sustratos cargados. Esterificar do la aspi ri na se elimina la carga negativa (que suprime el metabolismo) y el gru p.o aceti lo se convierte en un sustrato mucho mejor para la ¡ butilcolinesterasa. La introdu cción del nuevo grupo éster por lo tanto acelera ampliamente la veloci dad de metabolismo del éster de acetilo existente. Por ejemplo , la aspi rina tiene una vida promedio! de aproximadamente una hora en plasma diluido pero los ésteres de aspirina experimentan el mismo proceso de desacetilación con | U n a vida promedio de menos de u n minuto: los fenilacetatos neutrales, tal . í como ésteres de aspiri na están entre los tipos de sustrato ? hidrolizados más eficientemente de butilcolinesterasa. I Una i interpretación de esto en términos de enzimología básica es que el éster de aspirina adapta la enzima mejor que la aspirina por sí mismo . Bundgaard reconoci ó esto para que el metabolismo ocurra en el punto correcto , el grupo portador tiene que tener una estructura de complementariedad com petente al grupo acetilo es decir tiene que • j ser po r lo menos tan atractivo un sustrato para la enzima de BüChE como el grupo acetilo. I ncluso mejores grupos de portador pueden ser considerados que prom ueven su propia hid rólisis mientras que al mismo tiempo suprimen la hidrólisis del grupo acetilo vecino!. La í enzima de butilcolinesterasa toma su nombre de su eficacia en i ésteres de hidrolización d e colina. Neilsen y Bungaard estudiaron los ésteres de glicolamida de aspirina donde el grupo de portador se i diseñado para imitar la coli na de modo que su separación pudiera í competir con éxito con la hidrólisis del grupo acetilo. j Las i giicolamidas son solamente parcialmente acertadas con el ejemplo requerimiento altamente exigente al cual su respuesta fue solamente en parcialmente adecuada. Sin embargo, aparte de la tecnolog ía descrita en la presente, las glicolamidas son los únicos compue'stos conocidos que pueden incluso describirse, en parte como profármacos de aspirina verdaderos. j Otra estrategia que se ha adoptado de vez en cuando es diseñar ésteres donde el enlace aspi rina-portador es tah inestable que se rompe antes de que las esterasas puedan atacar el grupo acetilo . El problema con este proceso es que la aspiri na es ya absolutamente inestable hacia la hidrólisis por agua y ¡otros í nucleófilos en su grupo acetilo. La introducción de un segundo jéster i químicamente activo tiene el efecto de aumentar la reactividad del grupo acetilo (así como la adición de otro punto de labilidad).! Los ésteres de aspirina previstos deliberadamente para experimentar la división por estímulos químicos tal como agua por lo tanto tienen el defecto obvio que son probables encontrar tales estímulos durante , I almacenamiento y son por lo tanto susceptibles a deg radación en el estante. Esto niega una de las ventajas de los profármacos dé éster de aspi rina en pri mer lugar que son más estables qué la na hacia la humedad . Los profármacos diseñaron para dividirse! en respuesta a estímulos qu ímicos genéricos tienden tambiérji a desintegrarse bajo condiciones encontradas en el G IT, que; se encontrarán antes de la absorción .

El interés en el área de profármaco de aspi rina se1 ha i intensificado con la llegada de las llamadas aspirinas de óxido n ítrico i (NO), que son un tipo de éster de aspirina pero con un radical de NO-liberación unido al grupo de portador. El fundamento principal i para el desarrollo de BO-aspirinas es que NO promueve la defensa de la mucosa, compensando el daño causado por aspirina (Fiorucci and Del Soldato , 2003). Este concepto ahora está bien aceptado en i la comunidad biomédica. El óxido n ítrico y aspirina también tijenen efectos farmacológicos complementarios y a veces sinérgicos así que se espera que la combinación muestre un mayor intervalo de efectos farmacológicos que aspi rina solamente. La liberación dje N O protege el estómago contra la erosión gástrica inducida por aspi ri na promoviendo el fl ujo de sangre y reducción de adhesión de leucocito mientras sus propi edades antitrombóticas a través de la trayectoria de GM P refuerza los efectos antiplaquetarios que se presentan; de la i nhibición de COX-1 por la aspi rina . Así se considera razonable ligarlos como éster en un intento por produci r un profármaco m utuo de aspirina y óxido nítrico . NCX-401 6 (NicOx SA, Francia) ¡es un compuesto prototipo para las fármacos de aspirina de N Q (WO 95/030641 , WO 97/1 6405, WO97/1 6405 , WO0044705. ). N O se produce in vivo y tiene efectos antiplaquetarios. N CX-401 6 exhi be mayor tolerabilidad gástrica que aspirina en varios modos animales.

NCX-401 6 comenzó el desarrollo precl ínico en 1 996 y desde 2002' se ha eval uado en el tratamiento de trastornos cardiovasculares (por ejemplo Enfermedad Oclusiva Arterial Periférica (PAOD) ( Fase I I )), profilaxis del cáncer de colon (Fase I ) y dolor de cáncer. ! N CX-401 6 fue uno de los acontecimientos farmacéuticos más extensamente pregonados de la última década y se consideró como un avance biomédico significativo (ver por ejemplo Levin, 2004). j Si n embargo, como un profármaco de NO-aspirina , NCX-401 6 parece ¦ ? tener un defecto de diseño significativo . La prueba clave para un profármaco del éster de aspi rina es si hidrolizó a la aspi rina o; a su éster de salicilato cuando se" incuba en plasma humano o sang re. NCX-401 6 es un éster de aspirina de un fenol sustituido. Npj hay datos publicados sobre el patrón de hidrólisis de NCX-401 6 en plasma humano sino que hay para los ésteres similares- el éster de aspirina de paracetamol (benorilato- Williams y co la bo rado res, 1989), el éster de aspirina del guicaol (Qu y colaboradores, 1 99j0), y n e s 6 e e e a deficiencia significativa deb ido a que la inhibición de COX I de plaqueta necesita ser absolutamente completa preveni r la agregación de plaqueta humana. Otro estudio reciente sugiere que NCX-401 6 pueda actuar directamente en su objetivo sin la l iberación de aspirina i 1 (Corazzi y colaboradores , 2O05). Ha habido un número de otros i esfuerzos recientes para diseñar los compuestos capaces de liberar aspiri na y óxido nítrico en tejido humano . Los resultados han sido decepcionantes. Todos los compuestos reportados experimentajn la hidrólisis a lo largo de la trayectoria de salicilato normal y fallan en liberar cantidades significativas de aspirina aunque ellos ¡ son i qu ímicos se reportaron a la d egradación mostrada con producción de isosorbida-mono-nitrato ( I SM N), ácido salicílico y aspiri na la cual expresó actividades de lavado plaqueta y anti-angina . Sin embargo , ^ i no se esperaba que ISMNA pueda actuar como un profármaco de j aspirina viable debido a que no se había mostrado otro ésterj de aspi ri na para actuar corno un profármaco de aspirina, aparte de¡ las glicolamidas, y éstos se diseñaron muy deliberadamente para ! ser complementarios al plasma B uChE . Sin embargo ISMNA resultó! ser ¡ un inhibidor potente de la agregación de plaqueta en tejido de cornejo in vitro y más adelante mostró que ISM NA es convertido eficientemente a aspirina por esterasas del plasma de conejo. : Se probó en un estudio oral en perros en los cuales se comparój con aspirina en dos de los sellos farmacológicos de aspirina : inhib'ición de la bios íntesis de tromboxano (un bioquímico que estimula las í plaquetas para agregar) e in hibición funcional de la agregació n de plaqueta . ISMNA mostró efectos débiles sobre ambos marcadores que indican que liberó solamente pequeñas cantidades de aspiri na en el perro . I ncubando ISM NA en sangre de perro y supervisando su hidrólisis podríamos mostrar que no es convertida eficientemente a aspirina por esterasas de perro debido a las diferencias entre las esterasas en sangre de perro y conejo. Más tarde resultó q ue ISMNA no se hidrolizó productivamente en cualquier plasma hujmano.

En solución de plasma humano y en sangre humana in vitro, IjS M NA produce >90% de salicilato y < 1 0% de aspirina. ISM ÑA es i correspondientemente mucho menos potente que la aspirina¡ como inhibidor de agregación de plaqueta en sangre humana en'tera y plasma rico en plaqueta humana (su Cl50 es 85 µ? comparado con 5 µ? para aspiri na en ag regación de plaqueta humana a ácido ! araquidónico en plasma rico en plaqueta). Los resultados enseñ a'ron que para un éster de aspi rina , la capacidad de inhibir la agregación, de plaqueta o síntesis de tromboxano correlacionada con capacid ad de producir aspi rina: un profármaco ineficaz se hace para j un inhibidor ineficaz de agregación de plaqueta . El bajo nivel' ,de W09817673 , no fue aparentemente y diferente de muchos ¡otros candidatos del profármaco de éster anteriores que se habían probado .

Por otra parte, el experto en la técnica no habría esperado que el isosorbida-di-aspirinato (ISDA) funcione como un profármaco de aspirina viable y no habría tenido ninguna razón química o bioquímica de creer que la hidrólisis llevaría a algún otro qu|e la división del grupo acetilo y finalmente el ácido salicílico. Fue Jmuy I sorpresivo por lo tanto cuando podíamos mostrar en nuestro propio laboratorio que ISDA inhibe la agregación de plaqueta en plasma! rico en plaqueta de conejo. También tenía un efecto inhibidor ejn la I síntesis de tromboxano que seguía la administración oral a un grupo de perros (Gilmer y colaboradores, 2003). Las propiedades similares a la aspirina indicaron que la hidrólisis de ISDA en plasma lleva a alguna aspirina. ISDA se mostró por experimentar hidrplisis rápida cuando se incubó en soluciones plasma humano amortiguado con fosfato para producir aproximadamente 60% de aspirina (tíilmer y colaboradores, 2002). El 40% restante del compuesto se hidrolizó i a lo largo de la trayectoria improductiva de salicilato. El estudio indicó que una enzima específica presente en plasma humano cataliza la liberación de aspirina del diaspirinato de ¡sosórbida (ISDA). Se confirmó que el butilcolinesterasa fue la enzima de plasma humano implicada. La butilcolinesterasa de plasma de i caballo estrechamente vinculada generó solamente 11% de aspirina. ¦ i Gilmer y colaboradores (2001, 2002) además describe^ las características de hidrólisis y efectos biológicos del aspirinato de isosorbida-di-aspirinato (ISMNA) y isosorbida-mono-initrato (ISDA). | El I SDA de éster de diaspirinato y los ésteres de glicolamidaj de N ielsen y de Bungaard son lo s únicos ésteres en la literatura qu írriica t que pueden actuar en gran parte como profármacos de aspirina1 en plasma humano . Los compuestos que no producen aspi rina como un producto de hidrólisis se clas ifican mejor como profármacos de ácido salicílico. Por ejemplo , en el presente contexto, IS NA esj un i profármaco de aspirina sola mente en tejido del conejo pero es un i profármaco de ácido salicílico en sangre humana. ¡ ! I I Existe una necesidad apremiante de mejores compuestos del profármaco de aspirina debid o a su potencial terapéutico intrínseco y debido a la demanda de los compuestos capaces de li berar asp-i rina y óxido n ítrico. U n éster de aspirina que libera óxido n ítrico debe en I en donde Y es i es un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono , u n alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de i carbono , un ariléster, un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbono o -C(0)O Rani"°, en donde Rani ll° es un anillo aromático de 5-miembrjos o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un heteroátomo sustituido para un carbono del sistema de anillo, que puedej ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberaciójn de I óxido nítrico. j La presente invención también se relaciona con sales; y/ó hidratos farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en la presente . ¡ Como se utiliza en la presente, el término "alquilo" incluye i cualquiera de una serie de grupos univalentes de fórmula ge'neral ¡ RC(0)R, o más específicamente -OC(0)CnH2 n+ i , que es un jéster derivado de hidrocarburos alifáticos. Las cadenas alqu ilo de las i cadenas alquiléster pueden ser lineales o ramificadas en donde el . i grupo metilo (-CH3) representa un grupo alquilo de 1 átom o de i ca rbono , etilo (-C2H5) representan un grupo alquilo de 2 átom o de carbono, propilo (-C3H7) representa un grupo alquilo de 3 átomoj de carbono, butilo (-C4H9) representa un grupo alquilo de 4 átomo! de j carbono y pentilo (-C5H7) representa un grupo alquilo de 5 átomoj de carbono. j El término "alcoxiéster" incluye un grupo que tiene la fórmula general RC(0)OR, o más específicamente -OC(0)OCnH2n+i en dqnde CnH2n+ es una cadena de alquilo que puede ser lineal o ramificada ciclobutano, ciclopentano etc. ; i El término "ariléster" se toma por significar RC(0)Ar, en donde sustituido para un carbono del sistema de anillo. Adecuadamente|los ¦ i grupos Ran"'° pueden seleccionarse del grupo que consiste fde: j tiofenos, tiadiazolinas, pirróles, imidazoles, tlazoles, pirazoles, ,5-dihidropirroles, ¡midazolidin-2-onas, pirazinas, 4,5-dihidrotiofeno|s e imidazolidin-2-tionas. Loa Ranill° preferidos son anillos heterocíclicos.

Los grupos -C(0)ORani"° preferidos de la invención son¡ iso-oxazoleoato, oxazoleoato o tiadiazoleoato.

Adecuadamente, todos estos compuestos liberan activamente aspirina en plasma humano a un grado. Algunos de los compuestos se han mostrado por tener mejor actividad que otros compuestos mientras que algunos compuestos tienen una poca actividad dependiendo de la naturaleza del sustituyente elegido como Y. j Algún compuesto libera NO en adición a aspirina. 1 I Adecuadamente, los compuestos preferidos de la inve'nción tienen actividad de mayor o igual a 15% de aspirina liberaba en plasma humano. I i El grupo que libera óxido nítrico de los compuestos jde la invención puede comprender un nitrato éster, un nitrato éster de alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, un nitrato éster de de 3 a 10 átomos de carbono o un nitrato éster de alquilo de 1 ¡a 8 I átomos de carbono. j En una modalidad, el compuesto del aspirinato de isosorbida tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxiéster jde 1 a 8 átomos de carbono, un cicloalquiléster de 3 a 10 átomo's de I carbono, un cicloalcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que p.uede ser insustituido o sustituido con ON02; o un ariléster ó un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbono, que ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de l de óxido nítrico. ! Sin embargo, más preferidos son los compuestos que tienen ésteres que comprenden anillos heterociclicos de 5 miembros que pueden seleccionarse del grupo que consiste de oxazoleoato, isoxazoleato y tiadiazoleoato. j I En una modalidad preferida, el compuesto del aspirinato de ¦ J isosorbida tiene la estructura general como se muestra en la fórmula i general (I) j en donde Y es j un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxiéster ;de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituidoi con ! ON02; o ¡ un cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono o un cieloalcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede! ser insustituido o sustituido con ON02; o un ariléster insustituido o sustituido, alquilariléster, benzoato, un grupo nicotinato, oxazoleoato, isoxazoleato, tiadiazoleoatoj que puede sustituir por al menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcóxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -0NO2, í -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]ciclicoON02, -0C0ArÓNO2, -OCOAr(CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m=3-10. ^ ¡ De acuerdo con la invención se proporciona un compuesto del aspirinato de isosorbida que tiene la estructura general como se i muestra en la fórmula general (I*) ¡ en donde es Y ! -C(0)ORani"°, en donde Rani"° es un anillo aromático dé 5-miembros o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un i heteroátomo sustituido para un carbono del sistema de anillo, ¡que i puede ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico. | 1 En una modalidad preferido, el grupo de liberación de oxido I nítrico puede seleccionarse del grupo que consiste de: -N02, -ON02, -(CH2)nON02l -OC(0)[(CH2)m]ciC|icoON02, -OCOArON02, -OCOAr (CH2)nON02.

Particularmente, los compuestos preferidos incluyen; un compuesto del aspirinato de isosorbida que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general ( ) i en donde es Y en donde X e Y son independiente seleccionados de O, S y N.

I En otra modalidad, se proporciona un compuesto que tiene ¡una í estructura general como se muestra en la fórmula general (I) j en donde Y es un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxi^ster i de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato, nicotinato, i oxazoleoato, isoxazoleato, tiadiazoleoato insustituido o sustituido, que puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, a de 1 a 8 átomos de carbono alquilo, bencilo, a de 1 a 8 átomos de carbono alcoxi, o-benciloxi, -NHC(0)R, J-NH2, I -N02, -ON02, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]clcl¡coON02, -OCOArON02, -OCOAr(CH2)n0NO2 o un haloalquiléster de 1 a 5 i átomos de carbono, ! en' donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carboneo o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m = 3-10.

Otros compuestos preferidos se ilustran por la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) en donde Y es i un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxiéster|de 1 i a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato, nicotiinato, I oxazoleoato, isoxazoleato, tiadiazoleoato insustituido o sustituido, ' I que puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, a de 1 a 8 átomos de carbono alquilo, benc'ilo, a de 1 a 8 átomos de carbono alcoxi, o-benciloxi, -NHC(0)R, ¡-NH2, -N02, -ON02, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]CÍClicoON02, -OCOArON02, -OCOAr(CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos i de carbono, ¡ I en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carb-ono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n=1-8, m=3-10. j Otros compuestos preferidos se ilustran por la estructura general como se muestra en la fórmula general (I ) en donde Y I es un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono , que puedei ser insustituido o sustituido con ON02; o j un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono oj un cicloalcoxiéster de 1 a 8 átomos- de carbono, que puede j ser i nsustituido o sustituido con ON02; o un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, ! que ' i puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidróxido, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono , bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi , -N HC(0)R, -N H2, -N02 , -CjN02, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]ciclicoON02, -OCOArC>N02, -OCOAr(CH2)nON 02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono , ¡ en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbpno o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono , n = 1 -8 , m = 3-10. ' i Los compuestos adicionales preferidos se ilüstran por la estructura general como se muestra en la fórmula ¡ general ( I ) ! en donde Y es ; un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ¡ser I insustituido o sustituido con ON02; o ¡ un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, |que I puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidroxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, o-benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -ON I02, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]cic,¡CoON02, -OCOArON02, -OCOAr (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, í en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbo;no o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n=1-8, m = 3-10. ' En una modalidad preferida, el compuesto del aspirinato de i isosorbida puede tener la estructura general como se muestra en la i fórmula general (I) ; en donde Y es j i un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxiéster ¦i de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido I con ON02; o • ? un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, que puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 áto(mos de carbono,, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -ON02, -(CH2)nON02, -OC(O)[(CH2)m]c¡cl¡C0ONO2, -OCOArON02, -OCOAr(CH2)nON02 o' un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, ¦ i en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o . I alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m = 3-10. Donde el sustituyente de benciloxi que es usado en un anillo arilo, se pr fiere que sea un sustituyente de o-benciloxi. j En una modalidad particularmente preferida, el compuesto puede tener la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) ! en donde Y es un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono, insustituido o sustituido con O N02; o un grupo benzoato o n icoti nato insustituido o puede sustituir por lo menos uno del grupo que com prende hidróxibo , un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi, -N HC(0)R, -NH2, -N 02, -ONj02, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]c[cl icoON02, -OCOArON02, -OCÓAr (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, j haloalquiiéster, el sustituyente halo es adecuadamente Cl , Br o F. El cloro y bromo son los sustituyentes halo más preferidos. ' Sin embargo , los haloalquilésteres que tienen sustituyentes Br son ¡ particularmente preferidos. 1 I Adecuadamente, los compuestos de la invención tienen un alto grado de complementariedad al sitio activo de las carboxilestérasas humanas y así dirigiendo la hidrólisis a lo largo de la trayectoria ideal , liberando aspirina . j Ventajosamente, los compuestos p ueden activarse específicamente por más de una enzima humana, desde entonces si ¡ un paciente tiene función de enzima aberrante con respecto a una , otra es probablemente para compensar y liberar aspirina. i Además, los compuestos del profármaco de aspirina ¡son i estables bajo condiciones encontradas en el l umen del tracto Gl pero analizado rápidamente después de la absorción en la circulación sangu ínea a aspi ri na . j Otras ventajas se presentan de estos compuestos puesto ! que son estables hacia humedad y así pueden utilizarse con éxito en formulaciones donde la humedad puede encontrarse. Un profármaco í de aspirina estable a humedad es ventajoso por muchas razones incluyendo la posibilidad de formulación en formas de solución y transdérmicas. Uno de los p roblemas con la li beración transdérmica de aspirina es que la humedad de la piel causa hidrólisis del i depósito de aspirina en el parche. Adecuadamente, los compuestos estables a humedad no requerirán el empaquetamiento farmacéutico i a prueba de humedad protector para al macenamiento. ! En una modalidad preferida, el grupo Y puede seleccio arse del grupo que consiste de: general (I) está representada por una de estas estructuras particulares, los compuestos liberaran aspirina en el plasma hurrjiano a algunos varios grados y así todos son activos. ' Sin embargo, los compuestos que tienen un sustituyeme Y seleccionado del grupo que consiste de: | i son particularmente preferidos, puesto que los compuestos que • i comprenden cualquiera de estos grupo muestra actividades de jmayor que o igual al 15% de aspirina liberada en plasma humano. ¡ En otra modalidad preferida, los compuestos de la invención comprenden los que tengan actividades de liberación pirina . . mayor que o igual ál 15% de nivel, basado en la cantidad pirina como un porcentaje de la concentración de éster inicial en moles medidos por H PCL en producción de aspirina máxima seguido dé la adición de de ésteres candidato al plasma humano amortiguado a 37°C a pH 7.4 (amortiguador de fosfato). j En modalidades específicas, los compuestos pueden tener la estructura general como se muestra en la fórmula general (I ) ¡ en donde Y es un grupo benzoato o nicoti nato insustituido o sustituido, que puede sustituir por lo menos un de hidróxido , metilo , benciloxi , metoxi, -N HC(0)CH3, -OC(0)CH2Br, -N 02, -CDAc. -CH2ON02. En donde el sustituyente benciloxi que se usa en un anillo arilo, se prefiere que sea un sustituyente o-benciloxi .

I En una modalidad específica, los compuestos pueden tener la estructura general como se muestra en la fórmula general ( I ) ¡ en donde Y es un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, que puede sustituir por lo menos un de hidróxido!, -Cl , metilo, benciloxi, metoxi, -NHC(0)CH3, -OC(0)CH2Br, -Np2, -CH2ON02. En donde el sustituyente benciloxi que se usa en un anillo arilo, se prefiere que sea un sustituyente o-benciloxi. i Los compuestos del aspirinato de isosorbida más preferidos ¦ ' í tienen una de las siguientes estructuras i i Alternativamente , el compuesto del aspiri nato de isosprbida puede tener una de las estructuras seleccionadas del grupo que consiste de: J sto de p se mue en on e es un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxiéster de i 1 a 8 átomos de carbono, un cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono, un ariléster, un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carb'ono o I -C(0)ORa i"°, en donde Rani"° es un anillo aromático de 5-miembros o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un heteroiátomo sustituido por^ un carbono d el sistema de anillo, que puede ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de li beración de óxido nítrico , y ! X es la molécula del fármaco. j I En este aspecto , una modalidad preferida proporciona ; un i compuesto de portador para un fármaco que tiene la estructura i general como se muestra en la fórmula general (I I) j en donde Y es un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono , un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono , un ariléster o un aiquiiariléster de 1 a - i 8 átomos de carbono , que puede ser insustituido o sustituido con por I lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico, y X es la molécula del fármaco. i ¦ i Los portadores preferidos de la invención pueden tener la estructura general como se muestra en la fórmula general (I I ) en donde Y es un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono, q ue puede insustituido o sustituido con ON02; o un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono, que ser insustituido o sustituido con ON02; o | un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato o icotinato insustituido o sustituido, que puede sustituir por lo menos uno! del grupo que comprende hidroxido, un alquilo de 1 a 8 átomos| de carbono, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, bencMoxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -ON02, -(CH2)nON02, i -OC(O)[(CH2)m]cíc,¡C0ONO2, -OCOArON02, -OCOAr(CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, i en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m=3-10. ¡ En o ener la estructu en donde Y es i ' I un cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono, que puede ser I insustituido o sustituido con ON02; o I un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido! que I puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidroxido, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi de |l a 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -NÓ2, -ON02, í -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]CÍC|icoON02, -OCOArON02, -OCOAr í (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbon'o, en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcbxi de 1 a 8 átomos de carbono , n = 1 -8, m=3-1 0. j En compuestos que comprenden un grupo funcional j de haloalquiléster, el sustituyente halo puede ser Cl , Br o F , no obstante el Br es más particularmente preferido . i Ventajosamente , los compuestos del profármaco de aspi rina d e la invención resisten la hid ról isis acuosa y a-quimotri psina, con todo experimentarán hidrólisis rápida en presencia de plasma humano i para liberar aspirina y potencialmente' otras fracciones farmacológicas activas. Los compuestos preferidos de la invención liberan el óxido n ítrico además de aspirina . I Así en este aspecto, los compuestos de la invención | son i ventajosos puesto que proporcionan mejores compuestos j del profármaco de aspirina , particularmente un compuesto de profár'maco i capaz de liberar aspirina y óxido nítrico. Los dispositivos de i profármaco capaces de liberar aspirina y óxido nitroso ( NO); son i ventajosos particularmente. Tales compuestos son probablemente menos tóxicos pero tienen un mayor espectro de acciones y eficacia farmacológicas que sus componentes individualizados, debido a que I la aspirina y óxido nítrico tienen efectos sinérgicos en enferrnedad cardiovascular y apl i caciones de cáncer. ¡ Un éster de aspirina q ue libera óxido nítrico debe en primer lugar ser un éster capaz de experimentar conversión a aspirinai en el modelo de hidrólisis de plasma clave o mod elo biológicamente relevante similar. El portado r de la invención puede tener un ¡grupo • í que libera óxido n ítrico que comprende un éster de nitrato , un alquilnitratoéster de 1 a 8 átomos de carbono, cicloalquilnitratoéster I de 3 a 10 átomos de carbono o alquiinitratéster de 1 a 8 átomos dé í carbono. - ¦ j Otras ventajas resultan del hecho de que los profármacos de la invención son estables en presencia de proteasas digestivas normales y hacia enzimas encontradas en células CACO-2J de mucosa, pero pueden hidrolizarse a aspirina por esterasas humanas especialmente BuChE y CE-2. En este aspecto, el portador puede i tener la estructura general como se muestra en la fórmula general (II) 1 en donde Y es un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o ¡ un cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato, nicotihato, i I oxazoleoato, isoxazoleato, tiadiazoleoato insustituido o sustituido, que puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, be cilo, i un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, ÷NH2, -N02, -ON02, (CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]cic,icoON02, -OCOArÓN02, -OCOAr (CH2)nONOz o un haloalquiléster de 1 a 5 átómo's de j carbono, en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m = 3-10 y X esj la j molécula de fármaco. j Adecuadamente, los portadores de la invención dirigénj la hidrólisis al punto correcto debido a su complementariedad conjlos sitios activos de esterasas humanas. ¡ í En una modalidad particularmente preferida, el portador dé la I invención puede tener la estructura general como se muestra en la fórmula general (II) j en donde Y es j i un cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono, que puede ser i insustituido o sustituido con ON02; o j un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, ¡ que puede sustituir por lo menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi dé 1 a i 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -0;NO2, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]cíci¡coON02, -OCOArON02, -OCOAr (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, ¡ en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m = 3-10. ! i En los compuestos preferidos que comprenden un grupo i funcional de haloalquiléster, el sustituyente puede ser Cl, Br ójF, no obst sele en donde X es la molécula de fármaco que se llevará en la forma de profármaco. ¡ En otro aspecto de la invención , se proporciona un com puesto de fármaco q ue comprende el compuesto de portador como se í describe en la presente. ¡ j En todavía otro aspecto, la invención proporciona u na composición farmacéutica que comprende un compuesto com o se define antes y por lo menos un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable . ¡ I En un aspecto particular, los compuestos y/o composiciojnes de I la invención pueden utilizarse in vivo o in vitro para reducir la j expresión de glicol-proteína de plaqueta constitutiva en un nivel donde la aspirina no tiene efecto.

Los compuestos y/o composiciones de la invención pue¡den también utilizarse in vivo o in vitro para inducir una aspirina como I efecto . La aspirina tiene u n efecto similar, por ejemplo, es luna i reducción en actividad antiplaquetaria o la inhibición de productos de COX tal como tromboxano A2 o malondialdeh ído . Ventajosamente, j los compuestos preferidos de la invención son más potentes que la í aspirina por sí misma y son mayores inhibidores de agregación de i plaquetas humanas y mayores inhibidores de los productos corrijente abajo de COX (tal como trom boxano A2 y malondialdeh ído) así como expresión de glicoproteína de plaqueta constitutiva. i I En otro aspecto los compuestos de la invención pueden utilizarse en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de f enfermedades o condiciones o síntomas incl uyendo trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, dolor, pirético, inflamación , cáncer, enfermedad de Alzhei mer o demencia . ¡ La aspirina causa sang rado gástrico qu ímicamente irritand!o las i células de la pared intestinal durante la absorción e interfiriendo con la secreción de su barrera p rotectora. La solución a este problema es hacer la aspirina temporalmente inerte qu ímicamente atando un I grupo enmascarante que se elimine más adelante en el proceso de absorción , lejos de la superfi cie vulnerable del tracto Gl . El desafío clave en desarrollar esta tecnolog ía fue encontrar un enmascarante que se elimine fiable y exactamente en la sangre,! un obstáculo que nadie había podido superar. Esencialmentei la I invención proporciona una forma inerte de aspirina que es activada por el cuerpo . j En un refinamiento adicional al diseño, un precursor de óxido n ítrico se incorporó en el grupo de portador para proporcionar otros isosorbida. La interpretación directa de sus datos de produccióln de aspiri na fue que uno de los dos ésteres de aspi rinato en las posiciones 2 ó 5 es separad o por las esterasas directamente de la aspiri na que libera ISDA. Es en parte verdadero pero el verdadero mecanismo resulto ser ser más i nteresante e inesperado. Los cjuatro > . i grupos de éster en ISDA son susceptibles a hid rólisis por esterasas con un arreglo potencialmente complejo de metabilitos de éster. En última instancia todos éstos se hidrolizan abajo a isosorbida y ácido salicílico. La cascada de hidrólisis puede seguirse ipor cromatografía, que permite la separación y medida de cada uncj de i los metabilitos mientras se desarrollan y decaen. Mucjhos experimentos se condujeron en los cuales ISDA se introdujo! en medios biológicos, la reacción se detuvo en puntos de tiempo i sucesivos y la mezcla de metabolito se midió por HPLC. El diagrama de estos datos sobre un curso de tiempo se denominó una curva de progreso de hidrólisis. , Las curvas de progreso para ISD ! se presentan en las Figuras 3? y 3B. Las curvas muestrarji la desaparición de ISDA y el aspecto de aspirina con el tiempo, j Un I examen cuidadoso de estas curvas revela dos cosas; la í concentración de aspirina continuó elevándose después dé ¦ i I que hubiera desaparecido el ISDA madre y en segundo lugar su ¡pico I siguió la subida y desaparición de otro metabolito. Este fuje un hallazgo asombroso y altamente significativo que indica que la aspirina que aparece después de ISDA que se agrega al plasma humano no podrá liberarse de ISDA por sí mismo, pero si d ie un metabolito de ISDA. Así, todos los metabilitos potenciales de ¡ISDA se sintetizaron y evaluaron independiente por HPLC jcomo profármacos de aspirina incubándose en plasma y seguido ele su hidrólisis por HPLC. Uno de éstos, isosorbida-2-aspirináto-5-salicilato (ISAS, 2), resultó ser el profármaco más eficaz conocido ! hasta la fecha en el modelo de plasma humano clave (Figuras' 4A y B). En plasma humano se convierte en gran parte a la aspirina' junto ¦ con el portador isosorbida-5-salicilato . Se hid roliza cjasi I I exclusivamente a lo largo de esta trayectoria en solución de BuGh E purificada (Figura 4B). j Los resultados totales i ndicaron que el isosorbida-di-aspirin'ato (IS DA, 1 6) actúa como un precursor a un profármaco de aspi rina verdadero , su isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato de metabolito (I SAS , 2). | Se ha encontrado que el primer B uCh E de plasma humano selectivamente elimina el gru po acetilo del aspi rinato del isosorbjida-di-aspirinato (ISAS), que se une en la posición-5 , así generandb el isosorbida-2-aspirínato-5-salicilato ( I SAS). BuChE humano entonces eficientemente separa la aspirina del isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS). IS DA experimenta la hidrólisis a lo largo de otras rutas paralelas (Figura 5 es una versión simplificada de esto ¡para mayor claridad) y no se metaboliza eficientemente a aspirina conio el isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato ( ISAS), ni se ha encontrado ¡para -\ I sea tan potente en ensayos biológicos. ISAS tiene una proporción de liberación de aspirina del 85% en plasma (ti/2 2 minutos) mientras que ISDA se hid roliza alrededor del 60% a lo largo de la trayectoria de aspi rina con 40% restante que procede a lo largo de la trayectoria de salicilato improductiva: De hecho debido a que I SDA tiene dos moléculas de aspirina unidas su rendimiento total en el sentido estricto es 30% . Utilizando inhibidores enzimáticos específicos y soluciones de enzima purificadas pod íamos establecer inequ ívocamente la enzima en plasma humano responsable ¡de la activación exacta únicamente de ISAS como butilcolinesterasa |(ver también Figura 5).

El isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS) no se describe en la Publicación Internacional No. W09817673. Aunque sea un metabolito potencial nadie habría podido anticipar que sería un i i profármaco. Otros metabolitos actuales o potenciales de ISDA¡(por | ejemplo los 5-aspirinato, 2-aspirinato o 2-salicilato-5-aspirinato) cada I uno se sintetizó y caracterizó. Ninguno de éstos actuó como i profármacos de aspirina en plasma humano. 1 Ventajosamente, ISAS (2) es significativamente más potente que la aspirina como un inhibidor de agregación de plaqueta humana inducida por colágeno (Figura 6), ADP y ácido araquidónico yj esta COX por consiguiente inhibe los productos corriente abajo i incluyendo tromboxano A2 y malondialdehído. También humedece la expresión glicoproteína de plaqueta constitutiva a concentraciones en las cuales la aspirina no tiene efecto. La mayor potencjia de isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS) que la aspirina, aunque es deseable desde un punto de vista de desarrollo de fármac'o, es incomprensible y el objetivo de investigaciones está en desarrollo. También se ha mostrado que el isosorbida-2-aspirinato-5-sal:icilato (ISAS) necesita activarse por esterasas para ejercer sus efectos i farmacológicos: no tiene actividad biológica intrínseca y es ¡por lo i tanto un profármaco. Mientras que ISAS experimenta la hidrólisis en sangre humana con una vida promedio de <2 minutos, es est ble en presencia de proteasas digestivas normales y hacia estjerasas encontradas en células CACO-2. Inhibe la agregación plaqueta hacia el ácido araquidónico en sangre entera humana (métodoj de impedancia) con un Cl50 de 1 7 µ? . El C l50 de aspiri na en este modelo es 25 µ ? . ISAS es también eficaz en preveni r la síntesis de TXA2 in vivo (TXB2/sangre entera) y síntesis de DA por plaquetas lavadas. ! Los estudios enzimáticos muestran que isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato ( ISAS ) es activado específicamente por dos enzimas humanas: BuCh E en plasma humano, y menos rápido , pero coh la misma proporción de trayectoria A/B por carbox¡lesterasa-2 humano i (CE-2) presente en microsomas epiteliales intestinales. ¡ La i observación que dos enzimas pueden liberar aspirina de isosor^ida-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS) es clínicamente relevante y ventajosa: si un paciente tiene función de enzima aberrante j con respecto a uno, el otro es probable para compensar y l iberar la aspiri na . Otra ventaja al diseño es que el compuesto es estable jbajo ¡ condiciones encontradas en el lumen y tracto G l pero desintegrado i rápidamente después de la absorción a metabolitos bien-caracterizados: ácido salicílico, isosorbida, y por supuesto , aspirina. (La semejanza de preferencia de sustrato a este respecto por CE-2 y BuCh E es muy sorpresiva). Otra ventaja al compuesto es que su i portador está metabolizado eventual mente al ácido salicílico e isosorbida , los compuestos q ue son inofensivos o farmacéuticanjiente bien caracterizados . Aunque ISAS tiene un significado farmacéutico que merece en sí mismo su descubrimiento señala ! algo generalmente más valioso. El descubrimiento de ISAS y los modelos ¡ cinéticos para su producción y liberación de aspirina en plasma se describen en nuestro documento reciente (Moriarty y colaboradores 2008). 1 El isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS) actúa como! u n i profármaco de aspirina porque la porción del isosorbida-5-salicMato de la molécula de profármaco tiene un alto nivel i de complementariedad al sitio activo de l as carboxilesterasas humanas. Esto es debido a que experimenta hid rólisis muy rápida . La porción del de isosorbida-5-salicilato o grupo de portador de ISAS prom úeve exitosamente su propia separación de aspirina mientras qué al i mismo tiempo suprime la hidrólisis del grupo acetilo de aspijrina. Introd uce un nuevo y tipo portador d e alta eficacia para aspirina y potencialmente para otros fármacos del ácido carboxílico. Esto es i una penetración importante para la invención. | I es fa co el de aspirina debido a que ISM NA (en donde el se sustituye por un nitrato) no es un profármaco de aspirina en pl a.sma humano. La concl usión es que un nitrato-5 no es compatible co'n la unión de esterása humana productiva . Aproximadamente ! 25 compuestos se prepararon en los cuales la posición 5 se cambió sistemáticamente para probar la infl uencia de los 5 grupos en la aspirina que liberaba características del g rupo de portador (Fig ura 7 y Tabla 2). Los ésteres de aspi rina de novedad se probiaron j incubándolos en la solución de plasma humano y midió la cantidad de aspirina producida con rel ación a la cantidad molar de compuesto agregada a la solución de plasma. > Los ésteres experimentaron ! característicamente hidrólisis rápida a diferentes grados a lo largo de las rutas A y B algunas con velocidades de liberación que se acercan a la productividad de ISAS (Tabla 2 y Figura 7 ).

Las características de liberación de aspi rina de una intervalo de 25 ésteres se muestran en la Tabla 2 junto con algunos ejemplos seleccionados como las fórmulas estructurales con porcentaj e de liberación de aspirina en la Figura 7. Se ha mostrado que el grupo en la posición 5 infl uencia marcadamente la di rección de la hidrjól isis (Figura 8 y ejemplos en el Figura 9). ! El compuesto insustituido (isosorbida-2-aspirinato, 17) no es un profármaco de aspirina que indica que la sustitución 5 se requiere para la liberación de aspirina. En general se encontró que la liberación de aspirina significativa ocurre con ésteres de 5-benzfoato y nicotinato. El sitio de hidrólisis clave en el caso de compuestos sustituidos con ésteres alifáticos fue en el éster de acetilo normal (ver compuestos 4, 5, 23 en la Tabal 2). También se encontró- que los ésteres de arilo en los cuales el grupo fenilo se sustituyó eh las i posiciones 2 y 3 fueron más productivos. Por ejemplo, el compuesto 1 experimenta hidrólisis a lo largo de la trayectoria de aspirina productiva de alrededor de 60%.

El compuesto más eficiente encontrado es ISASj que experimenta la conversión casi completa a aspirina en presencia de i butilcolinesterasa purificado y alrededor del 80% en-sangre humana. i El isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS, 2) el metábolito de ISDA pertenece a una nueva familia de compuestos de éstejres 5-aromaticos sustituidos que actúan como profármacos de aspirina en ? presencia de esterasas humanas. No se sabe porqué los I compuestos de benzoato adicionalmente sustituidos en la posición orto o meta son tan acertados, pero es probable sea debido a un arreglo favorable en el sitio activo de la enzima. Esta clase de control remoto de la posición del ataque a enzima es i nusual .

Así, se ha encontrado que ciertos grupos de portador basados en isosorbida promueven la hidrólisis en el punto correcto, llevando a ! la 'liberación de aspirina en l a sangre humana (b anterior). Ci ertos compuestos de isosorbida sustituidos liberan aspirina en cantidjades significativas cuando se incu ban en sangre humana. La hidróli sis selectiva es causada por una interacción altamente específica entre el grupo de portador y la butilcolinesterasa humana presentes en plasma y con CE-2 en el epitelio intestinal. ' El reconocimiento que los ésteres de isosorbida de aspirina pueden actuar como profármacos de aspirina a cond ición de q ue la posición 5 se sustituya apropiadamente es crucial a la invención . Los sustituyentes más eficaces son ésteres de 5-arilo que se sustituyen además en la posición -2 ó -3 del anillo de ben'ceno. Tales grupos promueven la li beración de aspiri na en la posición 2 de isosorbida remota mejor que la hidrólisis del grupo acetiloi. El I compuesto 2 es el más eficaz y estudiados más de los profármacos y lleva a la identificación de una nueva clase de portador eficiente para profármacos de aspi rina . Si n embargo la i nvención i ncluye y antici pa otros compuestos sustituidos diferentemente en la posición 5 pero convertidos igualmente de manera eficiente a aspirina j en I presencia de enzimas del plasma de sangre . En particular, existe i nterés comercial y académico fuerte en un dispositivo de profármáco capaz de liberar la aspiri na y óxido nítrico , NO . i Puesto que los requerimientos estructurales para la hidrólisis prod uctiva (o manejo dentro del sitio de estearasa) se identificaron , I el desafío de diseñar un profármaco de ambo la aspiri na y óxido nítrico se continúa. El SAR sugirió que un grupo de portador de isosorbida-5-benzoáto pudiera tolerar la sustitución adicional coiji un nitrato en el anillo benceno sin afectar sus características! de dirección de hidróli sis. Desafortunadamente los nitratos aromáticos son ésteres de nitrato inestables de fenol desproporcionados fácilmente al fenol de orto-nitro . En lugar un número de derivados í de nitroximetilo de isosorbida-2-aspirinato-5-benzoato se hizo quje se adapte al patrón a conti nuación: Estos incluyen los compuestos 20- 23 en la Tabla 2. j i Éstos se probaron en el modelo de hidrólisis de plasma ¡ humano clave para capacidad de producir aspi rina en plasma humano. Constante con el patrón anterior, se encontró que i el i i compuesto de nitroximetilo orto y meta- sustituido liberó aspirina ! en plasma humano . No hubo liberación de aspirina del compuesto para-sustituido . Los compuestos acertados también liberan cantid ac.es I significativas de aspirina en presencia de microsomas intesti nales humanos, aparentemente mediadas por la enzima CE-2, y siguiendo el mismo patrón como el ISAS conducido (Figura 9). Una ventaja de ! esto es que donde un paciente tiene actividad baja de BuChE , CE-2 podría liberar aspi rina junto con el radical donante de óxido nítrico . El compuesto 20 se ha probado en la agregación de plaqueta inducida por colágeno in vitro y se ha encontrado por ser jmás potente que la aspirina en in hibición de agregación . Es también un inhibidor más potente de ag regación de plaqueta inducida por ADP í en PRP. Sin embargo , debido a que también libera NO se esjpera que i nhiba la agregación a estímulos patológicos done la aspirina no tiene efecto de N O. La aspirina inhibe solamente la agregación dependiente de tromboxano es decir la agregación de plaqueta a solamente un estímulo . Tiene poco efecto en la agregacióiji del colágeno de alta dosis o en la agregación a ADP . El óxido nítrico se ha mostrado para aten uar la toxicidad gástrica de aspirina y¡ para promover la cura de úlcera . Los compuestos capaces de liberar aspirina y óxido n ítrico tienen potencial significativo en la prevención de cáncer, terapia y en el tratamiento de enfermedad cardiovascular.

La activación del receptor de integrina de glicoproteína G PI I b/ll l¡a es crucial para que la agregación de plaqueta ocurra . Además los desplazamientos de P-selectina de a-gránulos a la membjrana superficial de plaqueta sustenta la adhesión de plaq ueta , respectivamente. Hemos medido estos receptores sobré la agregación con diferente concentración de los compuestos, j La i Figura 32-36 muestra que pro-asa y nitro-asa disminuyeron significativamente la activaci ón de GPI Ib/l l la y el desplazamiento de P-selectina . La activación de GPI Ib/l l la es la interacción diná mica controlada de la trayectoria que estimula o inhibe la agregación . El óxido n ítrico media la trayectoria de inhibidor principal y regu la la función de GPI Ib/l l la. La aspirina no pudo inhibir la activación de plaquetas en la misma concentración como ISAS (2) o y compuestos de nitrato 31 -32. j La invención también p roporciona composiciones farmacéuticas ¦ i que comprenden un compuesto de la invención que puede adaptarse i para la administración oral como una cápsula o tableta o, para administración percutánea, por ejemplo en la forma de un parche transdérmico. La composición puede también estar en la forma de un supositorio o formulación con base acuosa . ' La invención también proporciona el uso del compuesto para alcanzar la actividad antiplaquetaria y/u otras actividades tipo aspirina tal como actividad anti-pi rética y/o antiinflamatoria. ¡ i En una modalidad particularmente preferida de la invención la composición incluye otra entidad farmacéutica, especialmente un I ! I aceite terapéutico, normalmente un aceite de pescados tal co¡mo i aceite de hígado de bacalao, o un aceite vegetal tal como aceitej de hierba de asno (onagra). En este caso la composición puede estar en la forma de cápsula que tiene una cubierta d e retención que contiene un relleno que incluye los ingredientes activos . El relleno puede incluir un agente de suspensión tal como uno seleccionado de uno o más de dióxido d e silicio coloidal , aceites vegetales hidrogenados (opcionalmente en combinación con cera de abejas), I glicéridos parciales de punto de fusión elevada, y/o lecitinas. ¡ El relleno puede también incluir un antioxidante tal como ¡uno I seleccionado de uno o más de D-alfa tocoferol, acetato de D-jalfa tocoferol , tocoferoles mezclados y ácido ascórbico. La cubierta I puede ser una cubierta de gelatina. | ¦ i Breve Descri pción de los Di bu jos i Figura 1 : Teoría del Eliminación de Toxicidad de Aspirina : j Figura 2: Un profármaco de aspirina acertado áebe experimentar hidrólisis en el éster B a una mayor proporción que en grupo de O-acetilo A. . i Figura 3A y 3B : Curva de progreso para la hidrólisis de IS DA en 10% de . plasma humano (pH 7.4, 37°C): muestra la concentración madre y algo de sus metabolitos como se midió por HPLC a punto de tiempo sucesivo: ISDA (·) . aspirina ( ), ácido salicílico ; (o ), í isosorbida-2/5-aspirinato-2/5-salicilato (a) , disalicilato de isoso|rbida (0) e isosorbida-5-salicilato (?) . La aspirina máxima se retrasa con respecto a la desaparición del ISDA madre que indica q un metabolito es responsable de su producción. El diagrama ejstá rediseñado con la curva de ISDA omitida.

Figura 4A: Curva de progreso para la hidrólisis de ISAsJ de isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (2) en 50% de plasma humano (pH 7.4) a 37°C: ISAS (d), disalicilato de isosorbida (0), isosorbida-5-salicilato (?), aspirina ( ) y ácido salicílico (o). ! Figura 4B: Curva de progresión para la hidrólisis de ISAS de isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato con suero humano purificado i BuChE a pH 7.4 y 37°C: lsosorbida-2-aspirinato-5-salicilato :(?), isosorbida-5-salicilato (?), aspirina ( ), ácido salicílico (o|) y disalicilato de la isosorbida (0). i < i Figura 5: ISDA primero experimenta la hidrólisis en el grupo i acetilo del 5-aspirinato (70%) que libera ISAS (2) que experimenta la. · ! i hidrólisis predominantemente a aspirina e isosorbida-5-salici^ato.

Los puntos importantes de intervención productiva por colinestejrasa de plasma (BuChE) se indican en red. Observar que esto es relativamente estable hacia esterasas. La hidrólisis de ISDA también procede (30%) a lo largo de un trayectoria improductiva paralela que i no libera aspirina sino isosorbida y ácido salicílico en lugar de otro.

Figura 6: Las curvas de respuesta a concentración mostraron la inhibición de la agregación de plaqueta humana inducida!, por i colágeno in vitro por ISAS (2) y aspirina (ASA). Las concentraciones i de fármacos que 'inhiben la agregación por 50% (Cl50l) también se muestran. ISAS es significativamente más potente que ASA en agregación (los datos significan ±S, D p<0.01, n=4). 6B muestra las curvas de inhibición los profármacos 31 , de PRP después de aspirina. Esta figura muestra el por ciento de agregació n al colágeno mejor que el por ciento de inhibición de agregación al i colágeno en tres diferentes concentraciones para cinco compuestos , aspiri na, ISAS y los tres nitratos isoméricos, 31 , 32, 33. (*** P<0.!05).

¡ Figura 7: Los ejemplos de 5-ésteres alternativos incubados en solución de plasma humano de la Figura 2. El % de val ores representan la cantidad de hidrólisis que ocurre en los sitios A, liberación de éster de salicil ato, y sitio B que libera aspirina. lEsta figura ilustra la dependencia de liberación de aspirina en la pos'i ción 2 en la estructura del éster en la posición remota 5.

Figura 8: El 5-sustituyente ' R' decisivamente infl uenci a la trayectoria de hidrólisis | Figura 9: M uestra la desaparición de isosorbida-2-aspirinato-5-(3-nitroximetil )-benzoato des pués de la incubación en presenci a de microsomas del epitelio intestinal humano y la liberación de aspi rina , I ácido salicílico y el portador de isosorbida sustituida con nitrato; Figura 1 0: La síntesis d e ISAS 2 de ISM N acoplándose al jácido salicílico protegido seguido por la des-bencilación . | Figura 1 1 : Ruta si ntética para la preparación de l s-2-aspiri nato- j 5-(3-nitrooxi-metil)benzoato 21 . i Figura 1 2: Ruta si ntética para la preparación de cloruro de clorometilbenzoilo, ¡ Figura 13: Síntesis directa del 5-éster sustituido con nitrato.

Figura 14: Síntesis del éster de 3-nitroxibenzoato jde isosorbida-2-aspirinato la esterificación con un benzoato i de I clorometilo e intercambio de haluro con nitrato de plata. i Figura 15: ls-2-aspirinate-5-salicilato (ISAS, 2) en HLM.9.4 ?µ? de aspirina producida. ! i Figura 16: ls-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS, 2) ( .04x10"4 ) en HIM.27 µ? de aspirina producida. ! Figura 17: HLM incubado por cinco minutos con un inhibidor de I BChE potente antes de agregar ls-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS,! 2). 16 µ? de aspirina producida. ¦ i i Figura 18: ls-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS, 2) (1.1X10"4M) en i HLM con iso-OMPA (10 µ?). 8.5 µ? de aspirina producida. i I Figura 19: ls-2-aspirinato-5-salicilato (ISAS, 2) (1.04x10"4MI) en HIM con BNPP (14 µ?). ¡ Figura 20: ls-2-aspirinato-5-(3-nitrooxi-metil)benzoato ¡(21) ! (2.5x10"4M) en 50% de plasma humano. 26 µ? de aspirina ' j producida. ; Figura 21: ls-2-aspirinato-5-(3-nitrooxi-metil)benzoato í(21) I (1x10" M) en 80% de plasma humano. 21 µ? de aspirina producida. i Figura 22: ls-2-aspirinato-5-(3-nitrooxi-metil)benzoato j(21) (1x10~4M) en HLM con ISO-OMPA (14.4 µ?). 1.4 µ? de aspirina producida. ¡ ¡ : i Figura 23: ls-2-aspirinato-5-(3-nitrooxi-metil)benzoato ¡ (21 ) (1.05xlO"4M) en HIM.20 µ? de aspirina producida. ¡ I i i I Figura 24: ls-2-asp'irinato-5-(3-nitrooxi-metil)benzoato (21) i I (1.1x10-4M) en HIM con iso-OMPA (14 µ ). 12.7 µ? de aspi'rina ? producida. j ? Figura 25: ls-2-aspirinato-5-(2-nitrooxi-metil)benzoato (20) " . ? (1x10"4M) en 50% de plasma humano. 10.3 µ de aspirina producida.

Figura 26: ls-2-aspirinato-5-(2-nitrooxi-metil)benzoato ¡(20) (1x10~ M) en HIM.21.7 µ? de aspirina producida. j Figura 27: ls-2-aspirinato-5-(4-nitrooxi-metil)benzoato (22) (1x10~4M) en 50% de plasma humano.2 µ? de aspirina producida1.

Figura 28: ls-2-aspirinato-5-(4-nitrooxi-metil)benzoato '(22) (1x10"4M) en HIM.9.97 µ? de aspirina producida.

: I Figura 29: Feniléster del ácido 2-acetoxibenzoico (fenoléster ! ' . i de aspirina) (1.09 x 10 M) en HIM (40 µ?/G??). 7.7 µ? de aspirina | producida. ; Figura 30: Feniléster del ácido 2-acetoxibenzoico (1.09 x 10" 4M) en HIM (20 µg ml).5.3 µ? de aspirina producida. j Figura 31: Inhibición de la agregación de plaqueta en respuesta a ADP in vitro por los cinco compuestos de prueba en tres diferentes i concentraciones. La concentración cero es la inhibición po tr el vehículo, DMSO. ' Figura 32: La expresión de PAC-1 en respuesta al colágeno en plaqueta lavada tratadas con los compuestos de prueba 2, 31-33, i aspirina. Esta figura muestra la expresión del por ciento de glicoproteína PAC-1 en plaquetas lavadas. Hay poca esterasja en esta preparación así que los datos ilustran que la activación de esterasa de los profármacos de la invención es requerida antes de la j inhibición de la función de plaqueta in vitro. ¡ Figura 33: La expresión de PAC-1 en respuesta al colágeno' en i plasma rico en plaqueta con los compuestos de prueba 2, 31 -33, aspiri na. Esta figura muestra el grado de expresión de glicoproteína en plasma rico en plaqueta . La expresión de glicoproteína! se i requiere para cruzar el enlace de plaquetas en agregación com pleta y los datos muestran que los compuestos de la invención son más j potentes que la aspirina en supresión de esta expresión en la í preparación de plasma . j i Figura 34: La expresión de P-selecti na a colágeno en plasma rico en plaqueta con los compuestos de prueba 2, 31 -33, aspi rina . i La P-selectina es otra glicoproteína cuya expresión se correlaciona I con la activación de plaqueta. Los compuestos de la invención' son ,l mucho más potentes que la aspirina en activación de inhibició n de plaqueta en preparaciones de plasma. ¡ Figura 35: La expresión de P-selectina a colágeno en plaquetas lavadas con compuestos de prueba 2, 31 -33, aspirina. Aqu í en i plaquetas lavadas hay otra vez un cierto humedecimiento ele la expresión de glicoproteína (diferencia significativa con colágeno (*** P<0.001 ). Sin em bargo en suspensiones de plaqueta lavada q ue carecen de esterasas los compuestos no son tan eficaces como la aspirina.

- Descripción Detal l ad a de la Invención Procesos Experimentales Generales : Materiales . ! 5-IS N se obtuvo de Sifa Ltd. La butilcolinesterasa de sujero humano purificado (EC 3.1.1.8), carboxilesterasa de hígado j de ' : i conejo (EC 3.1.1.1), BNPP (bis-4-nitrofenilfosfato), iso-O PA I (tetraisopropilpirofosforamida), microsomas de hígado humano combinadas, cloruro de 3-clorometilbenzoilo, cloruro de : 4-clorometilbenzoilo, nitrato de plata, ftálida, diclorotrifenilfosforario y solventes grado de HPLC se obtuvieron de Sigma-Aldrich. j El colágeno y ADP se obtuvieron de Chronolog (Havertown, ÍPA, U.S. A.). El anticuerpo monoclonal conjugado con ' aloficociahiná i contra alta-afinidad GPIIb/llla (PAC-1-APC) y anticuerpo monoclonal conjugado - con APC P selectina humana de plaqueta (CD62P) se adquirieron de BD Biosciences (Oxford, Reino Unido). \ I Todos los otros solventes y reactivos fueron analíticamjente grado. Las microsomas intestinales humanos combinadas' se I í obtuvieron de BD Gentest en el Reino Unido. j i Los compuestos de la invención se prepararon fácilmente de aspirinato de isosorbida-mono-nitrato, por sí mismo preparado por esterificación de isosorbida-mono-nitrato (ISMN) con y cloruro de salicoilo de acetilo de acuerdo con Gilmer y colaboradores 2001. El nitrato es eliminado selectivamente por el tratamiento con paladio en ! carbono bajo una atmósfera de hidrógeno que genera el Lsosorbida- 2-aspirinato del intermediario clave. Los compuestos también pueden obtenerse por 5-esterificación selectiva de isoso'rbida seguido por unión del grupo aspirinato en la posición-2 (La posición 5 en isosorbida a pesar de ser endo es más reactiva hacia la i acilación que la posición 2-exo dividido a que 5-OH es activado i por un enlace H intramolecular). J ? En el caso de la acilación directa de isosorbida-2-aspirinatp-5-salicilato (I SAS) con ácido salicílico sería complicada por la competición entre el salicilato-OH y la isosorbida-OH . Por lo tanto un ácido salicílico protegido con bencil-éter se introd uce pri mero utilizando procedimiento de acoplamiento de DCC estándares ly la protección de bencilo eliminado bajo condiciones reductivas (Figu ra 1 0). ; Otros compuestos de éster de la invención pueden prepararse j por la acilación dirigida usando el acoplamiento de DCC oj por tratamiento con el cloruro ácido apropiado en presencia de una base I terciari a tal como trietilamina. Los ésteres sustituidos con nitroxi ! pueden prepararse ligando directamente a los ácidos apropiadamente sustituidos . Alternativamente, los compuestos sustituidos con nitroxi pueden obtenerse primero esterificandó con un ácido que lleva un cloruro o bromuro que puedan posteriormente desplazarse por nitrato por tratamiento con AgN03 en acetonitriló .

Ejem plos experimentales : síntesis de isosorbi da-2-aspi rinato-5-esters : Las fórm ulas moleculares aparecen en la Fig u ra 2. j lsosorbida-2-aspirinato-5-[2-metilbenzoato] 1 i i A una solución de isosorbida-2-aspirinato 1 7 (0.2 g, 0.65 m mol) en diclorometano ( 1 5 mi) se agregó trietilamina (0.1 1 mi , 0.98 rn mol) y cloruro de 2-tol uoilo (0.09 mi , 0.72 mmol ). La mezcla de rea icción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas y después se lavó con agua (2 x 25 mi), HCI (1 m, 25 mi) y NaHC03 acuoso , saturado antes de secarse sobre MgS04 anhidro. El solvente se elimino in vacuo para dar 0.41 g del producto crudo como un aceite de c¡olor marrón. La purificación por cromatografía en columna utilizó hexano i y acetato de etilo (2:1) como eluyente dando el producto como un aceite de color amarillo. Este se recristalizó en etanol ara proporcionar el compuesto 1 como un sólido de color blanco (0.1>1 g, 39.6%) punto de fusión 104 -106°C. IRvmax (KBr): 2987.1 y 2922. ß' (C- . i H estiramiento), 1762.0 y 1718.1 (C=0), 1259.5 y 1199.8 (C(0¡)OR aromático), 1072.4 (C-O-C) cm"1. HREM: Requiere: 449.1212 ' í (M+ + 23), Encontrado: 449.1238 (M + + 23), H RMN d (CDCI3): ¿.38 (3H, s, OCOCH3), 2.65 (3H,-s, ArCH3), 4.01 (1H, dd, J = 5.52, y ls.52 Hz, IS6-H [a]), 4.12 (3H, m, IS1H [aß] e IS6H [ß]), 4.66 (1H, d,j J = 4.52 Hz, ISH-3), 5.04 (1H, t, J = 5.04 y 5.0 Hz, ISH-4), 5.41 (1H q, J = 5.52, 5.52 y 5.52 Hz, ISH-5), 5.47 (1H, d, J = 2.0 Hz, ISH-2), 7.13 (1H, dd, J = 1.0 y 1.0 Hz, ArH-4), 7.33 (1H, t, J = 7.0 y 6.52 Hz, ¡ArH-2), 7.59 (1H, t, J = 6.52 y 6.52 Hz, ArH-3), 8.02 (1H, dd, J = 1.52 y 2.0 Hz, ArH- ). 13C RMN ppm' (CDCI3): 20.43 (Ar-CH3), 21.12 (OCOCH3), 70.29 (ISC-1), 72.72 (ISC-6), 73.81 (OC(O)Ar), 7^.22 i (ISC-4), 80.52 (ISC-2), 85.63 (ISC-3), 122.32 (AnC-1), 1¿3.38 (AnCI), 125.58 (AnCI y Ar2C-4), 128.46 (Ar2C-2 y Ar2C-5), 130.19 ¦ ¦ ¦ I (Ar2C-3), 133.78 (A^C-S), 140.08 (Ar2C-1), 150 26 (AnC-S), 163.12 (ArOCOMe), 169.15 (ArCOOR). lsosorbida-2-aspirinato-5-salicilato, ISAS, 2 Se disolvió ácido 2-benciloxibenzoic (364.8 mg = 1.6 mmpl) en i ¦ I " ' ' I DCM seco (20 mis) y se agitó. Se agregaron ls-2-asp-5-OH (500 hng i = 1.6 mmol) y 10% de DMAP. El matraz se enfrió a 0°C y se agregó í DCC (340 mg, 1.6 mmol). La agitación se continuó por cinco minutos y la temperatura se dejó llegar a temperatura ambiente donde] se agitó durante la noche. La reacción se filtró y el filtrado se lavó con i i HCI 0.1 M, 5% de NaHC03 y agua. Secó sobre sulfato de sodio y evaporó a un aceite. Este se purificó mediante hexano/acetato; de etilo de cromatografía en columna (2:1) para dar.un producto! de ' i color blanco (Rf = 0.4, 228 mg). Este se disolvió en metanol/acetato i de etilo (1:1). Se agregó Pd/C y la reacción se agitó bajo hidrógeno i durante la noche. Se filtró la reacción y concentró. Se purifico el aceite mediante cromatografía en columna utilizando hexano/acetato i de etilo (1:1) para proporcionar un sólido de color blanco (107 mg de Rf = 0.67).). H RMN d (CDC ) 400 Hz: 2.38 (3H, s, OCOCH3), 4.02 (4H, m, ISH-1, ISH-1', ISH-6 e ISH-6"), 4.63 (1H, d, ISH-3), 5.03 [iH, i t, ISH-4), 5.43 (2H, dd, ISH-2, ISH-5), 6.91 (1H, t, Ar-H), 7.01 (1W, d, Ar-H), 7.1 (1H, d, Ar-H), 7.28 (1H, t, Ar-H), 7.48 (1H, t, Ar-H), ;7.53 (1H, t, Ar-H), 7.89 (1H, d, ArH), 8.00 (1H, d, ArH), 10.61 (1H, s, OH). 13C RMN ppm (CDCI 400 MHz: 20.51 (OCOCH3), 70.46 (ISC-1), 72.78 (ISC-6), 74.31 (ISC-5), 77.91 (ISC-2), 80.69 (ISC-4), 8,5.70 (ISC-3), 117.30 (Ar2 C-1), 118.90, 123.41, 125.65, 129.47, 131.42, 133.94, 135.65, 150.24 (AnCI), 163.12 (ArOCOCH3), 168.87 (ArC(O)OR). ! I lsosorbida-2-aspirinato-5-[3-metilbenzoato] 3 \ Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.2 g, 0.65 mmoj) en tolueno (15 mi) a 0°C, al cual se agregó DCC (0.13 g, 0.65 mmól) y DMAP (0.08 g, 0.07 mmol). Después de 10 minutos el recipientej de i reacción se agitó a temperatura ambiente y se agregó ácido| 3- i I toluídico (0.09 g) y se dejó agitar durante 24 horas. Después de i lavarse con HCI (30 mi, 1M), NaHC03 acuoso saturado (30 mi), í solución de salmuera saturada (30 mi) y agua (3 x 30 mi) la mezcla de reacción se secó sobre Na2S04 anhidro y el solvente se eliminó ¡n vacuo para proporcionar el producto crudo como un aceite claro. i La purificación mediante cromatografía en columna utilizó hexano y acetato de etilo (3:2) como eluyente proporcionando el compuesto 3 como cristales de color blanco (0.12 g, 43.2%): punto de fusión196-98°C. IRvmax (KBr): 2987.1 y 2922.8 (C-H estiramiento), 1762|.0 y 1718.1 (C=0), 1259.5 y 1199.8 (C(O)OR, aromático), 1072.4 (C-O-C) cm"1. HREM: Requiere: 449.1212 (M++23), Encontrado: 449. jl 234 (M + + 23), 1H RMN d (CDCI3): 2.36 (3H, s, OCOCH3), 2.43 3H, s, ArCH3), 4.09 (4H, m, IS1-H2[a + p] e IS6-H2[ct + 3]), 4.65 (1H, d, J ¿= 5.0 Hz, ISH-3), 5.04 (1H, t, J = 5.04 y 5.0 Hz, ISH-4), 5.43 (2H, m, ljSH-5 e ISH-2), 7.12 (1H, d, J = 8.0 Hz, ArH-4), 7.35 (3H, m, ArH-2),¡7.58 (1H, q, J = 1.0, 6.56 y 1.48 Hz, ArH-3), 8.01 (1H, dd, J = 1.0 y¡ 1.52 i Hz, ArH-1 ). 13C RMN ppm (CDCI3): 20.42 (ArCH3), 20.79 (OCOpH3), 70.39 (ISC-1), 72.77 (ISC-6), 73.92 (ISC-5), 78.19 (ISC-4), 80.66 i (ISC-2), 85.66 (ISC-3), 122.35 (AnC-1), 123.39 (AnCI). 125.57 (AnC-O), 126.45 (AnCI), 12.89 (Ar2C-4), 129.80 (Ar2C-5), t'31.37 (Ar2C-3), 133.77 (Ar2C-1), 150.25 (AnC-S), 163.15 (ArOCC-CH3), 165.58 (ISOCOAr), 169.12 (ArOCO). i I lsosorbida-2-aspirinato-5-acetato 4 j A una solución de isosorbida-2-aspirinato 17 (0.2 g, 0.65 mmol) en diclorometano (20 mi) se agregó trietilamina (0.09 mi, 0.65 mmol) y anhídrido acético (0.06 mi, 0.65 mmol). El recipiente de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas antes del layado j i con agua (2 x 20 mi), HCI (IM, 30 mi), NaHC03 acuoso saturado' (30 mi) y se secó sobre MgS04. El solvente se eliminó mediante evaporación giratoria para proporcionar 0.52 g del producto crudo.

La purificación mee cromatografía en columna utilizó hexario y i acetato de etilo (3:2) como eluyente proporcionado el compuesto 4 \ ¡ como un material cristalino de color blanco (0.1 g, 43.8%). punt de i fusión 96 - 98°C. IRVmax (KBr): 2966.9 y 2928.6 (C-H estiramiento), 1751.6 y 1734.0 (C=0), 1607.8 (C=C estiramiento), 1262.0 y 11¡93.9 i (C(O)OR aromático), 1082.5 (C-O-C) cm"1. HREM: Requiere: Í 373.0899 (M++23), Encontrado: 373.0877 (M++23), 1H RIvVN d (CDCI3): 2.13 (3H, s, IS-OCOCH3), 2.37 (3H, s, Ar-OCOCH3), j 3.85 (1H, q, J = 5.52, 4.52 y 4.96 Hz, IS6Q-H), 3.99 (1H, q, j = 6.0, 3¡.52 y 6.04 Hz, IS6P-H), 4.10 (2H, t, J = 3.52 y 2.0 Hz, IS1 ?2[a+ß]), 14.59 (1H, d, J = 4.52 Hz, ISH-3), 4.90 (1H, t, J = 5.0 y 5.04 Hz, ISH-4), 5.19 (1H, d, J = 5.52 Hz, ISH-5), 5.44 (1H, d, J = 5.52 Hz, ISH-2), 7.12 (1H, d, J = 8.04 Hz, ArH-4), 7.33 (1H, t, J = 7.52 y 7.56 Hz,¡ArH- 2), 7.59 (1H, m, ArH-3), 8.01 (1H, dd, J = 6.04 Hz, ArH-1). 13C;ÍRMN ppm (CDCI3): 20.43 (ArOCOCH3), 20.18 (IS-OCOCH3), 69.91 (IS(C-2), 72.78 (ISC-6), 73.52 (ISC-5), 78345 (ISC-3), 80.32 (ISC-1), 1^2.29 (ArC-5), 123.39 (ArC-1), 125.58 (ArC-3), 131.36 (ArC-2), 1|33.81 1 i (ArC-4), 154.32 (ArC-6), 167.15 (OCOAr), 168.48 (ArQCOGH3), ?71.27 (OCOCH3). ! lsosorb¡da-2-aspirinato-5-propr¡onato 5 ¡ Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.3 g, 0.98 mmol) en diclorometano (20 mi) al cual se agregó anhídrido propriónico (Ó.14 mi, 1.07 mmol) y trietilamina (0.09 ml?~1.07 mmol). Este se dejó agitar a temperatura ambiente durante 24 horas antes de lavarse ¡con HCI (30 mi, 1M), NaHC03 acuoso saturado (30 mi) y agua (2 x 30 mi). La reacción se secó sobre Na2S04 anhidro y el solventé se eliminó in vacuo para proporcionar el producto crudo como un aceite ¡ de color amarillo (0.19 g). La purificación mediante cromatografía en columna utilizó hexano y acetato de etilo (5:2) como eluyente i proporcionando el producto como cristales de color blanco (0.3 g, 84.3%): punto de fusión 54-56°C. IRVmax (KBr): 2989.0 y 2933.0 (C-H í estiramiento), 1764.0 y 1734.5 (C=0), 1606.3 (C=C estiramiento), 1254.3 y 1193.6 (C(O)OR, aromático), 1080.6 (C-O-C) cm \ HREM: Requiere: 387.1056 (M++23), Encontrado: 387.1069 (M++23). 1H RMN d (CDCI3): 1.19 (3H, t, J = 8.04 y 7.52 Hz, CH3), 2.37 (3H, s, OCOCH3), 2.44 (2H, q, J = 7.52, 8.04 y 7.52 Hz, OCH2), 3.86 (1H, q, J = 5.52, 4.52 y 5.04 Hz, IS6a-H), 3.98 (1H, q, J = 5.52, 4.04 y 6.0 ??,?ßßß-?), 4.08 (2H, m, IS1H2[a + p]), 4.59 (1H, d, J = 4.52 Hz, !ISH- 3), 4.91 (1H, t, J = 5.0 y 5.04, ISH-4), 5.20 (1H, q, J = 5.04, 6.0 y 5.52 Hz, ISH-5), 5.43 (1H, d, J = 3.0 Hz, ISH-2), 7.12 (1H, dd, J 1.0 y 1.0 Hz, ArH-4), 7.33 (1H, t, J = 1.0, 6.56 y 8.0 Hz, ArH-2),¡7.59 (1H, t, J = 6.0 y 6.52 Hz, ArH-3), 8.01 (1H, dd, J = 1.48 and 2.0 Hz, , I ArH-1 ). 13C RMN ppm (CDCI3): 8.62 (CH2CH3), 20.49 (COCH3), 26|.84 Í (OCOCH2), 70.08 (ISC-2) 72.72 (ISC-6), 73.32 (ISC-5), 78.12 (ISC- 3), 80.37 (ISC-1), 85.45 (ISC-4), 122.22 (ArC-5), 123.41 (ArC^1 ), 125.64 (ArC-3), 131.41 (ArC-2), 133.89 (ArC-4), 150.24 (ArC;-6), 163.09 (OCOAr), 169.28 (OCOCH3), 173.40 (OCOCH2). ¦ i lsosorbida-2-aspirinato-5-benzoato 6 I A una solución de lsosorbida-2-aspirinato 17 (1.0 g, 3.25 mmol) en diclorometano (20 mi) se agregó ácido benzoico (0.59 g, 4.88 mmol), DCC (1.34g, 6.49 mmol) y DMAP (0.38 g, 3.11 mmol)! La I , mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante tres horas antes de filtrar el precipitado y se lavó el filtrado conjHCI (30 mi, 1M), Na2HC03 acuoso saturado (30 mi) y agua (3 x 30iml). Se secó sobre Na2S04 anhidro y el solvente se eliminó in vacuo ¡para dar el aceite incoloro, que se recristalizó en etanol para producir el producto como cristales de color blanco (1.13 g, 84.3%): punto de fusión 80-82°C. IRvmax (KBr): 2991.1 y 2932.9 (C-H, estiramiento), 1762.9 y 1720.6 (C=0), 1275.5 y 1199.1 (C(O)OR aromático), 1078.4 (C-O-C) crn"1. HRE : Requiere: 435.1056 (M++23), Encontrado: 435.1043 (M + + 23). H RMN d (CDCI3): 2.37 (3H, s, OCOCH3),i 4.07 i (1H, m, IS1a-H), 4.11 (3H, m, IS6H[a + ] e ISIp-H), 4.65 (1H, d, J = 5.0 Hz, ISH-5), 5.05 (1H, t, J = 5.5 y 5.0 Hz, ISH-3), 5:56 (1H, m, ISH-4), 7.13 (1H, d, J = 8.04 Hz, Ar-? H-S y ?G??-3), 7.27 (1H, ¡t, J = 1 I 8.04 y 6.52 Hz, Ar2H- y Ar2H-5), 7.33 (1H, d, J = 7.56 -Hz,( Ar¾ H-4), 7.49 (2H, t, J = 7.52 y 7.56 Hz, Ar2H-5), 8.01 (1H, d, J = 7.56 Hz, AnH-2), 8.12 (2H, d, J = 7.52 Hz, Ar2H-2 y Ar2H-6). 13C RMN ppm i (CDCI3): 20.44 (OCOCH3), 70.42 (ISC-1), 72.79 (ISC-6), 73.97 (¡SC- 5) 78.16 ISC-2), 80.67 (ISC-4), 85.67 (ISC-3), 123.39 (Antí-S), ¡ 125.58 (AR1C-I), 128.00 (AnC-S), 129.31 (Ar2C-3 y Ar2C-5), 13,1.39 (AnC-2 y Ar2C-6), 132.82 (Ar2C-2 y Ar2C-1), 133.79 (Ar2C-4), 13.4.81 (Ar d), 154.32 (AnC-O), 167.10 (OCOCH3), 168.2 (OCOAr, y OCOAr2). " ¡ lsosorbida-2-aspirinato-5-nicotinato 7 ; Se gaitó lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.3 g, 0.98 mmol), en diclorometano (20 mi) a 0°C durante 10 mins en presencia de ¡DCC (0.2 g, 0.98 mmol) y DMAP (0.12 g, 0.98 mmol). El recipiente de reacción se agitó a temperatura ambiente, se agregó ácido nicptínico (0.12 g, 0.98 mmol) y dejó agitar durante 24 horas. La mezcjla de reacción se lavó con HCI (20 mi, 1M), NaHC03 acuoso saturado (20 mi), agua (3 x 20 mi), secó sobre Na2S04 anhidro y el solvé te se eliminó in vacuo para dar el producto como un aceite crudo (0.95 g). La purificación mediante cromatografía en columna sobre g!el de sílice utilizó diclorometano y acetato de etilo (95:5) como eluyente proporcionando el compuesto 7 como cristales de color blanco! (0.12 g, 29.7%): punto de fusión 94-96°C. IRvmax (KBr): 3327.6 (N=C), 2929.6 (C-H estiramiento), 1731.7 y 1718.7 (C=0), 1654.4; (C=C estiramiento), 180.7 y 1195.9 (C(O)OR aromático), 1090.4 (Ó-O-C) cm"1. HREM: Requiere: 436.1008 (M++23), Encontrado: 436.1011 (M + + 23).1H R N d (CDCI3): 2.36 (3H, s, OCOCH3), 4.11 (9H, rfi, IS1- i ?2[a+ß] e IS6-H2[a + 3]), 6.64 (1H, d, J = 4.52 Hz, ISH-3), 5.05 ¡(1H, t, J = 5.04 y 5.52 Hz, ISH-4), 5.46 (2H, dd, J = 2.0 y 2.52 Hz, l$H-5 e j . - , ¦ i . i 4.52 Hz, ISH-3), 5.05 (1H, t, J = 5.52 y 5.04 Hz, ISH-4), 5.46 (2H,¡dd, J = 5.52 y 5.04 Hz, ISH-5 e ISH-2), 7.12 (1H, d, J = 7.04 Hz, AhH-2), 7.33 (1H, m, AnH-S), 7.59 (2H, t, J = 6.04 y 6.04 Hz, AnH-S y Ar,H-4), 7.90 (1H, d, J = 5.04 Hz, Ar2H-6), 8.01 (H, dd, J = 2.0 y 1.52'Hz, Ar2H-2), 8.84 (1H, s, Ar2H-5), 8.98 (1H, s, Ar2H-3). | Benzoato de ¡sosorbida-2-aspirinato-5-benc¡loxi 9 j A una solución de isosorbida-2-aspirinato 17 (0.27 g, Ó.87 mmol) en diclórometano (20 mi) se agregó ácido benciloxibenzoico (0.20 g, 0.87 mmol), DCC (0.18 g, 0.87 mmol) y DMAP (0.01 g, -09 mmol). El recipiente de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas antes de filtrar y lavar el filtrado con HCI (30 mi, 0.1 M), NaHC03 acuoso saturado (30 mi) y agua (2 x 30 j mi). Después de secar sobre Na2S04 anhidro, el diclórometano se eliminó in vacuo para dar 0.7 g del producto crudo como un aceite incojloro. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (3:1) como el eluvfente ¦ I proporcionando 0.19 g del compuesto 9 como cristales de color blanco (41.5%): punto de fusión 76-78°C. IRvmax (KBr): 1772.7 y 1726.2 (C=0), 1276.6 (C(O)OR aromático), 1078.1 (C-O-C) em"1. HREM: Requiere: 541.1475 (M++23), Encontrado: 541.1460 (M 23). 1H RMN d (CDCI3): 2.05 (2H, s, ArOCH2Ar), 2.36 (3H, s, OCOÓH3), 3.92 (1H, q, J = 5.0, 5.04 y 5.0 Hz, IS6a-H), 4.02 (3H, m, IS1 ?[ + ß]). 4.13 (1H, q, J = 7.04, 7.0 y 7.56 Hz, IS6H-P), 4.62 (1H, d, J = 5.p Hz, ISH-3), 5.02 (1H^t, J = 5.04 y 5.0 Hz, ISH-4), 5.19 (2H, s, l¾H-5), 5.39 (2H, m, ISH-5), 7.03 (2H, m, 2 x Ar-H) 7.11 (1H, d, J = 7.5ß Hz, Ar-H) 7.33 (2H, m, Ar-H), 7.41 (2H, t, J = 6.04 y 7.04 Hz, Ar-H), 7.48 (3H, m, Ar-H) 7.58 (1H, m, Ar-H), 7.92 (1H, dd, J = 1.52 y 2.0 Hz,¡Ar- I H) 8.01 (1H, dd, J = 1.48 and 2.0 Hz, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCI3): 20.49 (OCOCH3), 70.12 (ISC-6), 70.19 (ISC-2), 72.59 (ISC-5), 73.84 (ISC-3), 78.28 (ArOCH2), 80.48 (ISC-1), 85.59 (ISC-4), 113.18 (A;r2C-5), 119:29 (Ar2C-1). 120.10 (Ar2C-3), 122.30 (AnC-S), 123.41 (A¡rn C- I) , 125.64 (AnC-S), 126.78 (Ar3C-2 y Ar3C-6), 127.51 (Ar3C-4), 128.08 (Ar3C-3 y Ar3C-6), 128.13 (AnCI), 131.44 (Ar2C-2), 13¡1.81 (A C-1) 133.44 (Ar2C-4), 136.09 (Ar3C-1), 150.21 (AnC-6), 15*7.95 (Ar2C-6), 163.16 (ArOC(O)Me), 165.20 (ArC(O)OR), 169.28 (ArC(O)OR). ! I lsosorbida-2-aspirinato-5-(2-aminobenzoato) 10 ! Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.69g, 2.2 mmol) en l DCM (20 mis) al cual se agregó DCC (0.44g, 2.2 mmol) y DMAP (0.05 g, 0.22 mmol) y el recipiente de reacción se agitó a 0°C durante 10 i minutos. Después de regresar a la temperatura ambiente, se agregó ácido antranílico (0.29g, 2.2 mmol) se dejó agitar durante 3 horas. La mezcla de reacción se lavó con HCI (20 mi, 1M), NaHC03 acuoso saturado (20 mi), solución de salmuera saturada (20 mi) y agua (2 x 20 mi), se secó sobre Na2S04 anhidro y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el producto como un aceite de color amarillo crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (4:1) como eluyente proporcionando el compuesto 10 como un sólido de color amarillo (0.39 g, 41.5%). El producto se almacenó a 0-4°C hasta que se requirió para la prueba, punto de fusión 150-152°C. IRvmax (KBr): 3443.4 (N-H estiramiento), 2920.5 (C-H estiramiento), 1742.7 (C=0), 1548.0 (N-H flexión), 1220.9 y 1158.6 (C(O)OR, aromático), 10/17.4 (C-O-C) cm'1. H RMN d (CDCI3): 2.07 (3H, s, OCOCH3), 4.04 (2H, m, NH2), 3.88 (1H, q, J = 5.52, 4.52 y 5.0 Hz, ISH-1), 4.16 (2H, m, ISH-2 i y ISH-5), 4.69 (2H, dd, J = 4.52 y 4.52, ISH-1 e ISH-3), 4.95 (1H| t, J = 5.04 y 5.0 Hz, ISH-4), 6.69 (1H, t, J = 57.52 y 7.52 Hz, Ar2M-5), 6.91 (1H, t, J = 8.0 y 7.04, Ar2H-3), 7.01 (2H, d, J = 8.52, AnH-S y AnH-S), 7.31 (1H, m, Ar2H-4), 7.51 (1H, m, AnH-4), 7.82 (1H, dd', J = 2.0 y 2.0 Hz, Ar2H-2), 7.92 (1H, d, J = 7.04, 13C RMN [ ppm (CDCI3): 20.13 (ArOCOCH3), 69.82 (ISC- ), 70.02 (ISC-5), 75.01 (ISC-2), 75.03 (ISC-6), 79.29 (ISC-3), 81.86 (ISC-4), 115.02 5), 117.49 (Ar2C-1), 119.32 (Ar2C-3), 121.63 (AnC-S), 123.59 1), 125.42 (AnC-3), 130.23 (AnC-2), 130.59 (Ar2C-2), 133.27 4), 133.36 (Ar2G-4), 147.99 (Ar2C-6), 154.32 .(Ar,C-6), (OCOAr), 167.06 (OCOAr), 168.92 (OCOCH3). lsosorbida-2-aspirinato-5-[2'-metoxi]-benzoato 11 j Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.2 g, 0.65 mmol) en tolueno (15 mi) a 0°C al cual se agregó DMAP (0.08 g, 0.65 mmol) y DCC (0.13 g, 0.65 mmol). Después de 10 minutos el recipiente de i reacción se agitó a temperatura ambiente, se agregó ácido anísico 2 (ácido 2-metoxibenzoico, 0.10 g, 0.65 mmol) y se dejó agitar dorante 12 horas. La mezcla de reacción se lavó con HCI (20 mi,! 1M), NaHC03 acuoso saturado (20 mi), solución de salmuera saturada (20 mi) y agua (3 x 20 mi), se secó sobre Na2S04 anhidro y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el producto como un aceite crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobíej gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (3: 1) como el elüyente proporcionando el compuesto 11 como cristales de color blanco (0.23 g, 79.8%): punto de fusión 132-134°C. IRvmax (KBr): 2920.5 (C-H i estiramiento), 1764.9 y 1720.4 (C=0), 1253.2 (C(O)OR, aromático), 1075.2 (C-O-C) crn"1. HREM: Requiere: 465.1162 (M++|23), Encontrado: 465.1131 (??G+23), 1H RMN d (CDCI3): 2.89 (3H, s, OCOCH3) 3.95 (3H, m, ArOCH3, 4.06 (1H, m, IS6-Ha), 4.14 (3H, m, ?e -?2[a+ß] e ?ßß-?ß), 4.64 (1H, d, J = 5.0 Hz, ISH-3), 5.03 (1Hj t, J = 5.04 y 5.52 Hz, ISH-4), 5.40 (1H, t, J = 5.0 y 5.52 Hz, ISH-5), 5.45 (1H, d, J = 2.0 Hz, ISH-2), 7.01 (2H, q, J = 4.52, 2.52 y 6.0 Hz, Ar2H-3 y Ar2H-5), 7.11 (1H, d, J = 8.04 Hz, Ar1H-2), 7.31 (1H, m, AriH-3), 7.50 (1H, m, ?G,?-4), 7.58 (1H, m, ?G,?-5), 7.88 (1H, dd, J = 2.04 y ! j 1.52 Hz, Ar2H-4), 8.01 (1H, dd, J = 1.52 y 1.48 Hz, Ar2H-6). 13C RMN I ppm (CDCI3): 20.42 (ArOCOCH3), 55.52 (ArOCH3), 70.41 (ISC-1), I 72.66 (ISC-6), 73.69 (ISOCOAr), 76.58 (ISC-5).78.25 (ISC-4), 80.56 i (ISC-2), 85.64 (ISC-3), 111.74 (Ar2C-3) 118.83 (Ar2C-1), 122.39 (Ar2C-5), 122.91 (AnC-5), 123.38 (AnC-1), 125.42 (AnC-3), 125.56 i (AriC-2,), 131.38 (Ar2C-6), 133.45 (AnC-4), 133.75 (Ar2C-4), 150.24 I (AriC-6), 159.09 (Ar2C-6), 164.79 (ArCOOR), 169.13 (ArOC(0)GH3). lsosorbida-2-aspirinato-5-[3'-metoxi]-benzoato 12 Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.2 g, 0. en tolueno (15 mi) a 0°C al cual se agregó DMAP (0.08 g, l) y DCC (0.13 g, 0.65 mmol). Después de 10 minutos el de reacción se agitó a temperatura ambiente, se agregó ácido 3-anísico (ácido 3-metoxibenzoic) (0.10 g, 0.65 mmol) y dejó agitar durante 12 ¡ horas. La mezcla de reacción se lavó con HCI (20 mi, 1M), NaHC03 acuoso saturado (20 mi), solución de salmuera saturada (20 mi) y agua (3 x 20 mi), se secó sobre Na2S04 anhidro y el solventé se eliminó in vacuo para proporcionar el producto como un aceite crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (3:1) como eluyente proporcionando el compuesto 12 como cristales de color blanco (0.23 g, 79.8%): punto de fusión 125-128°C. IRvmax (KBr): 2980.9 (C-H estiramiento), 1768.3 y 1723.8 (C=0), 1298.5 y 1253.5 (C(O)OR, aromático), 1075.9 (C-O-C) cm"1. HREM: Requiere: 465.1162 (M++23), Encontrado: 465.1168 (M++23), H RM d (CDCI3): '2.36 (3H, s, OCOCH3) 3.87 (3H, s, ArOCH3), 4.05 (1H, d, J = 50 Hz,|lS6-Ha), 4.09 (2H, t, J = 3.0 y 2.52 Hz, IS1 -?2[a+ß]), 4.14 (2H, d,! J = 7.52 Hz, IS6-HP), 4.64 (1H, d, J = 5.04 Hz, ISH-3), 5.03 (1H, t', J = 5.04 y 5.52 Hz, ISH-4), 5.43 (1H, q, J = 5.0, 5.52 y 5.52 Hz, ISH-5), 5.47 (1H, s, ISH-2), 7.13 (2H, q, J = 4.52, 2.52 y 6.0 Hz, Ar2^-3 y Ar2H-5), 7.33 (2H, m, Ar-? H-4 y AnH-3), 7.58 (2H, m, AnH-4 y AnH-5), 7.69 (1H, d, J = 7.52 Hz, Ar2H-4), 8.01 (1H, dd, J = 1.52 y! 1.52 Hz, Ar2H-6). 13C RMN ppm (CDCI3): 20.41 (ArOCOCH3), 54.99 (ArOCH3), 70.43 (ISC-1), 72.74 (ISC-6), 74.05 (ISOCOAr), 76.58 (ISC-5), 78.17 (ISC-4), 80.49 (ISC-2), 85.67 (ISC-3), 113.96 (Ár2C- 2), 119.21 (Ar2C-4), 121.67 (AnC-5), 122.34 (Ar2C-6), 123.38 (AnC- 1), 125.56 (AnC-3), 129.03 (Ar2C-5), 130.39 (AnC-2), 131.36 (Ar2C- ? 1), 133.77 (AnC-4), 150.24 (AhC-6), 159.20 (Ar2C-3), 163j.14 (ArCOOR), 169.11 (ArOCOCH3). ¡ lsosorbida-2-aspirinato-5-[4-metoxi]-benzoato 13 j Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.2 g, 0.65 mmol)' en tolueno (15 mi) a 0°C al cual se agregó DMAP (0.08 g, 0.65 mmol) y DCC (0.13 g, 0.65 mmol). Después de 10 minutos el recipiente de reacción se agitó a temperatura ambiente, se agregó ácido 4-aníjsico (ácido 4-metoxibenzoico) (0.10 g, 0.65 mmol) y se dejó agitar I durante 12 horas. La mezcla de se lavó con HCI (20 mi, ^M), i NaHC03 acuoso saturado (20 mi), solución de salmuera saturada (20 I mi) y agua (3 x 20 mi), se secó sobre Na2S04 anhidro y el solviente se eliminó in. vacuo para proporcionar el producto como un aceite crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobré gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (2:1) como elüyente proporcionando el producto como cristales de color blanco (0.17 g, 58.9%): punto de fusión 141-144°C. IRvmax (KBr): 2994.1 y 2936.7 (C-H estiramiento), 1764 y 724.9 (C=)), 1605.8 (C=C estiramiento), 1260.5 (C(O)OR, aromático), 1078.6 (C-O-C) cm'1. HREM: Reqúiere: 465.1162 (M++23), Encontrado: 465.1157 (M++23).1H RMN d (Cd)CI3): 2.32 (3H, s, OCOCH3), 3.84 (3H, s, ArOCH3, 3.99 (1H, m, IS6-Ha), 4.07 (6H, m, IS1-H2[a+p] e IS6-Hp), 4.59 (1H, d, J = 4.52 Hz, ISH-3), 4.98 (1H, t, J = 5.52 y 5.0 Hz, ISH-4), 5.38 (1H, t, J = 5.0 y 5.5j2 Hz, ISH-5), 5.43 (1H, d, J = 2.0 Hz, ISH-2), 6.91 (2H, d, J = 8.5Í2 Hz, Ar2H-3 y Ar2H-5), 7.08 (1H, d, J = 8.0 Hz, AnH-4), 7.28 (1H, ¡t, J = 7.56 y 9.52 Hz, A-nH-2), 7.54 (1H, t, J = 8.0 y 7.52 Hz, AnH-3)í., 7.99 (3H, q, J = 9.0, 7.04 y 8.04 Hz, ?G,?-1, Ar2H-2 y Ar2H-6). 13C RMN ppm (CDCI3): 20.48 (ArOCOCH3), 59.83 (ArOCH3), 70.41 (ISC-1), 72.82 (ISC-6), 73.58 (ISOCOAr), 76.58 (ISC-5). 78.26 (ISC-4), 80.47 (ISC-2), 85.46 (ISC-3), 113.33 (Ar2C-3 y Ar2C-5), 121.46 (AnC-5), 122.35 (Ar2C-1), 123.36 (AnC-l), 125.54 (AnC-3), 131.35 (AnC-2), 133.73 (Ar2C-2 y Ar2C-6), 133.76 (AnC-4), 150.23 (Ar.,C-6), 16:3.12 (ArOCH3 y Ar2C-4), 165.09 (ArCOOR), 169.08 (ArCOOR), 170.52 (ArOCOCH3). ' i lsosorbida-2-aspirinato-5- [4-metilbenzoato] 14 Una solución de isosorbida-2-asplrinato 17 (0.2 g, 0.65 mmol) I se disolvió en tolueno a 0°C al cual se agregó trietilamina (0.13' mis, 0.98 mmol) y cloruro de 4-toluoilo (0.93 mi, 0.78 mmol). j El I recipiente de reacción se agitó a temperatura ambiente y sel dejó agitar durante 10 horas, después se lavó con HCI (30 mi, ¡1M), NaHC03 acuoso saturado (30 mi), agua (3 x 30 mi) y solución de i NaCI saturado (30 mi). La reacción se secó con Na2S04 anhidro y el solvente se eliminó in vacuo utilizando acetato de etilo corrió co^ solvente para dar el producto crudo. La purificación mediante cromatografía en columna utilizó hexano y acetato de etilo |(9:1) como eluyente dando el compuesto 14 como cristales de color b|lanco í (0.1 g, 35.99%): punto de fusión 102-104°C. IRvmax (KBr): 298,2.7 y 2923.6 (C-H estiramiento), 1763.9 y 1717.8 (C=0), 1608.5 (C=C), 1275.4 y 1202.0 (C(O)OR), 1100.3 (C-O-C)) cnV1.- HREM: Requiere: i 449.1212 (M++23), Encontrado: 449.1229 (??G+23), 1H RIvIN d (CDCI3): 2.19 (3H, s, OCOCH3), 2.43 (3H, s, Ar-CH3), 4.05 (2H d, J = 5.0 Hz, IS1H2[a+ ] e IS6H2[a+ ]), 4.09 (2H, t, J = 4.04 y 3.52 Hz, ISH- I 6), 4.14 (1?, t, J = 7.04 y 7.52 Hz, ISH-5), 4.63 (1H, d, J = 5;0 Hz, ISH-3), 5.03 (1H, t, J = 4.8 and 5.0, ISH-4), 5.44 (2H, m, ISH-2), 7j.11 i (1H, d, J = 8.04 Hz, Ar-H), 7.27 (2H, d, J = 8.56 Hz, Ar-H), 7.33 (;1H, t, J = 7.52 y 7.52 Hz, Ar-H), 7.55 (1H, t, J = 1.52 y 6.04 Hz, ArlH), 8.00 (3?, m, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCI3): 13.71 (ArCH3), 20.54 (OCOCH3), 70.49 (ISC-1), 72.75 (ISC-6), 73.78 (ISC-5), 78.13 (l$C- I 4), 80.72 (ISC-2), 85.62 (ISC-3), 122.25 (AnC-1), 123.38 (AnC-4), Í25.64 (AriC-6), 126.26 (AnC-2 y Ar2C-4), 128.74 (Ar2C-2 y Ar2C;-5), 129.36 (Ar2C-6), 131.42 (Ar2C-3), 133.87 (AnC-3), 143.62 (Ar2Cj-1), 150.22 (AnC-5), 163.15 (ArOCOCH3), 165.48 (IS-OCOAr), 169.27 i (ArCOO). j lsosorbida-2-aspirinato-5-(4-nitrobenzoato) 15 j (Observar por favor un compuesto 16 no se incluye en esta i descripción) ! Se disolvió lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.2 g, 0.65 mmol) en i DC' (10 mis) a temperatura ambiente. Al recipiente de reacción se agregó nitrobenzoilcloruro 4 (0.15 g, 0.78 mmol) y trietilamina ( 1.12 mi, 0.78 mmol). La reacción se dejó agitar a temperatura ambijente durante 48 horas antes de lavarse con HCI (20 mi, 1M), NaHC03 acuoso saturado (25 mi), solución de salmuera saturada (20 rtil) y agua (2 x 20 mi), se secó sobre Na2S0 anhidro y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el producto como un aceite de color amarillo crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (3:2) como eluyente proporcionando el compuesto 15 como un aceite incoloro que cuando se recristalizó en etanol produjo el producto como cristales de color blanco (0.15 g, 50.5%). punto de fusión 66- i 68°C. IRvmax (KBr): 1772.7 y 1726.2 (C=0), 1276.6 (C(O)OR, aromático), 1078.1 (C-O-C) cm"1. HRE : Requiere: 480.(3907 (M++23), Encontrado: 480.0922 (M++23), H RMN d (CDCI3): 12.34 I (3H, s, OCOCH3), 4.07 (4H, m, ISH-3), 4.64 (1H, d, J = 4.52 Hz, jlSH-1 e ISH-4), 5.04 (1H, t, J = 5.04 y 5.0 Hz, ISH-5), 5.45 (2H, m, ISH-2 y ISH-6), 7.10 (1H, dd, J = 1.0 y 1.0 Hz, AnH-2), 7.31 (1H, m, ^nH-3), 7.53 (1H, m, AnH-4), 7.99 (1*H, dd, J = 2.04 y 1.52 Hz, AhH-5), 8.25 (4H, dd, J = 2.0 y 2.04 Hz, Ar2H-2 y Ar2H-6), 8.31 (2H, dd, J = 2.0 y 2.04 Hz, Ar2H-3 y Ar2H-5). 3C RMN ppm (CDCI3): 20.41 (ArOCOCHs), 70.26 (ISC-1), 72.76 (ISC-5), 74.88 (ISC-2 y IS|C-6), 80.52 (ISC-4), 85.68 (ISC-3), 123.16 (AnC-5), 123.36 (Anjc-1), 125.58 (Ar2C-3 y Ar2C-5), 130.39 (AnC-2), 131.32 (Ar2C-2 y ArJc-6), I 133.87 (AnC-4), 150.32 (Ar2C-4), 163.07 (OCOAr), 163.53 (OCpAr), 169.09 (OCOCH3). · ' lsosorbida-2-aspirinato-5-OH 17 : Una solución agitada de cloruro de acetilsaliciloilo (m.p. 198.60 g/mol, 10.9 g = 54.9 mmol) en diclorometano (160 mi) se trato con trietilamina (m.p. 101.19' g/mol, -d=0.726 g/ml, 9.1 mi = 65.4 nrimol). La mezcla se enfrió a 0°C y se agregó 5-ISMN (m.p.191.12 g/mbl, 10 g = 52.3 mmol). El frasco se agitó a temperatura ambiente durante la noche y protegido contra luz. La mezcla se lavó con HCI (2M), 5% i de NaHC03 y agua, se secó sobre sulfato de sodio y concentró a un 'i aceite. Este se recristalizó utilizando etanol caliente j (la cristalización puede ser absolutamente lenta) para dar 10 g de cristales de color amarillos. Estos se disolvieron en metanol/acetato de etilo (1: 1), se agregó Pd/C y un globo de hidrógeno se unió.1 Se agitó durante la noche y supervisó mediante TLC (hexano/acetat'o de etilo 2:1) para determinar la terminación de la reacción. La mezcla se filtró y el solvente se eliminó. Un poco de diclorometanó se agregó y concentró, se agregó dietiléter, se dejó reposar duranté 10-15 minutos y concentró a cristales de color blanco (7.4 g). 1H RMN d (CDC ) 400 MHz: 2.37 (3H, s, OCOCH3), 3.6 (1H, m, ISH-6), 3-.9¡(1H, m ISH-6"), 4.07 (2H, 2xdd, ISH-1/H-1'), 4.3 (1H, q, ISH-3), 4.58¡ (1H, d, ISH-4), 4.69 (1H, m, ISH-2), 5.45 (1H, d, ISH-5), 7.11 (1H, d, Ar-H), 7.28 (1H, t, Ar-H), 7.57 (1H, t, Ar-H), 8.00 (1H, dd, Ar-Hj. ^C RMN ppm (CDCh) 400MHz: 20.48 (OCOCH3), 71.56 (ISC-1), 72.91 (ISC-6), 73.11 (ISC-5), 78.44 (ISC-2), 81.56 (ISC-4), 85.09 (lSC-3), 122.18 (Ar2 C-2/C-6), 123.42, 125.66 (Ar2 C-4),131.37 (An ¡C-4), 133.95, 150.23 (Ar2OCO), 163.03 (OCOArCH2ON02), 169.27 (ArC(O)OR). ! lsosorbida-2-aspirinato-5-(3-(2-bromo-acetoxi))-benzoato ? 8 A una solución de isosorbida-2-aspirinato-5-salicilato (0:15 g, 0.35 mmol) y DBU (0.052 mi, 0.35 mmol) en diclorometano (5 mi) se agregó cloruro de bromoacetilo (0.03 mi, 0.35 mmol) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante la noche. La reacción se layó con agua (2 x 5 mi) y se eliminaron los solventes in vacuo para proporcionar el compuesto 18 como un aceite incoloro (0.;13 g).

I ? ' i j I Rvmax (película) cm"1: 1765.6 y 1724.3 (C=0), 1608.1 (C=Q), 1288.4 y 1251.4 (C(O)OR), 1196.9 y 1135.6 (C-O-C), 732.6 (C-Br). HREM: Requiere: 531.1013 (M + ); Encontrado: 570.4453 (M++23). j d? (400MHz; CDCI3): 2.37 (3H, s, OCOCH3), 4.07 (4H, m, ISI, 6-H), 4.48 (2H, s, CH2), -4.63 (1H, m, IS4-H), 4.98 (1H, m, IS3-H), 5.40 (2H;, m, IS2, 5-H), 7.11 (1H, d, J8.0 y 7.5 Hz, Ar-H), 7.60 (2H, m, 2 x ArH), 8.11 (1H, d, J = 1.5 Hz, Ar-H), 8.12 (1H, d, J = 1.5 Hz, Ar-H); 513C (100 MHz; CDCI3): 20.86 (OCOCH3), 40.99 (CH2), 70.47 (IS-C), 7:3.24 (IS6-C), 74.69 (IS4-C), 78.40 (IS3-C), 81.09 (IS5-C), 86.07 (IS2-C), i 123.61, 123.83, 126.01, 126.65 y 131.78, 132.21, 134.26, 134.42, agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se lavó con HGI 2M (10 mi), 5% de NaHC03 (10 mi) y agua (10 mi). Se secó pobre sulfato de sodio y concentró. Se purificó mediante cromatografía en i columna (hexano/acetato de etilo 2:1) Rf = 0.3 para dar 396 mg de un aceite. 1H RMN d (CDCI 400 Hz: 0.9-1.18 (2xdd y , 4H, i 2xCH2), 2.32 (3H, s, OCOCH3), 3.78 (m, IH, lsH-1), 3.9 (m, 1 hí, IsH- 6), 4.06 (2H, d, ISH-1'e ISH-6'), 4.5 (1H, d, ISH-3), 4.83 (1H, Ú ISH- 4), 5.12 (1H, q, lsH-2), 5.38 (1H, s.H-5), 7.06 (1H, d, Ar-H), 7.26 (1H, t, Ar-H), 7.52 (1H, t, Ar-H), 7.95 (1H, d, Ar-H). 3C RMN ppm fCDCU) ! 400 MHz: 9 y 10 (2xCH2), 12.15 (CH), 20.43 (OCOCH3), 69.96 (ijsC-1), 72.71 (ISC-6), 73.40 (ISC-5), 78.14 (ISC-2), 80.39 (ISC-4), 85.35 (ISC-3), 122.20 (ArC-6), 123.37 (ArC-2), 125.59 (ArC-4), 131.36 (ArC-3), 133.86 (ArC-5), 150119 (ArC-1), 163.05 (Ar2OCO), 10Í.18 (CH3OCOAr), 173.78 (OCOciclopropano). | lsosorbida-2-aspirinato-5-(p-cianobenzoato) 20 Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mg,; 0.6 i mmol) y 4-ci<anobenzoilcloruro (120 mg, 0.72 mmol) juntos de i acuerdo con GP2 para dar 213 mg (81%) de un aceite de color amarillo después de cromatografía instantánea con EtOac: Hex ¡1:4. i 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.2 (2H, d, J = 8.5 Hz), 8.0 (1H, dd,j J = 8 Hz, 1.5 Hz), 7.8 (2H, d, J = 10 Hz), 7.6 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5 ¡Hz), 7.35 (1H, dt, J = 6.5 Hz, 1 Hz), 7.1 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.45 (2H, m), I 5.05 (1H, t, J = 5 Hz), 4.65 (1H, d, J = 5 Hz), 4.1 (4H, m), 2.4 (3H, s). 3C RMN (CDCI3, 400 MHz) d 169.3, 163.8, 163.1, 150.3, 133.9, 132.8, 131.9, 131.4, 129.8, 125.7, 123.4, 122.1, 117.4, 116.3, 85.7, 80.7, 80.5, 77.9, 76.8 74.8, 7,2.7, 70.3, 20.5. HREM (El) ?23?1908?, [M + H]+ requiere 438.4068, encontrado 438.4183. Anal. C23H19:08N requiere C: 63.16, H: 4.38, N: 3.20, encontrado C: 63.46, H: 4.51, N: 2.97. ! ¦ 1 lsosorbida-2-aspirnato-5-(p-fenilbenzoato) 21 i i Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mgj 0.6 mmol) y 4-fenilbenzoilcloruro (156 mg, 0.72 mmol) juntos para dar 185 mg (65%) de un -aceite incoloro después de cromatog|rafía instantánea con EtOac : Hex 1:4. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.2 (2?, d, J = 8.5 Hz), 8.0 (1H, dd, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 7.7 (2H, d, J †8.5 Hz), 7.65 (2H, d, J =7Hz), 7.6 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 7.5 (2H;jt, J i = 7.5 Hz), 7.45 (1H, t, J =8 Hz), 7.35 (1H, dt, J =6.5 Hz, 1 Hz),¡7.1 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.45 (2H, m), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz), 4.65 (1H, d, J = 5 Hz), 4.1 (4H, m), 2.4 (3H, s). 13C RMN (CDCI3 400 MHz) d 169.3, 165,3, 163.1, 150.3, 145.6, 139.5, 133.9, 131.4, 129,8, 128.5, 127.8, 127.7, 126.8, 126.7 125.7, 123.4, 122.1, 85.7, 80.7, 78.12, 77.2, 76.8 73.9, 72.7, 70.5, 20.5. HREM (El) C28H2408, [Mj+H]+ requieres 489.4933, encontrado 489.5021. Anal. C28H2408 requiere C: 68.85, H: 4.95, encontrado C: 68.88, H; 5.08. ¡ lsosorbida-2-aspirinato-5-(6-cloronicotinato) 22 ,' Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (250 mg; 0.8 i mmol) y 6-cloronicotinoilcloruro (230 mg, 0.9 mmol) juntos de acuerdo con' GP2 para dar 256 mg (70%) de un sólido de color blanco después de cromatografía instantánea con EtOac : Hex 3:7. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 9.3 (1H s) 8.9 (1H, s), 8.3 (2H, dj, J = 8.5 Hz), 8.0 (1H, dd, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 7.6 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5; Hz), 7.45 (1H, t, J = IHz) 7.35 (1H, dt, J =6.5 Hz, 1 Hz), 7.1 (1H, d', J = 8.5 Hz), 5.45 (2H, m), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz), 4.65 (1H, d, J = 5 Hz), 4.1 (4H, m), 2.4 (3H, s). 13C RMN (CDCI3400 MHz) d 169.3, 1,64.2, 163.1, 153.3, 150.5, 150.2, 136.8, 133.9, 131.4, 125.7, 123.4, 123.0, 122.2, 85.7, 80.6, 77.9, 76.8, 74.4, 72.8, 70.4, 20.5. HREM (El) C2iH18CIN08, [M + H]+ requiere 448.8304, encontrado 448.8295. ¡Anal. í C2iH18CIN08 requiere C: 56.32, H: 4.05, N: 3.13 encontrado C: 56.20, H: 4.21, N: 3.02. ; lsosorbida-2-aspirinato-5-(-2-cloro-6-metil-piridina-4-oato) 23 Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (250 mg 0.8 mmol) y 2-cloro-6-metilpiridina-4-carbamoilcloruro (247 mg, 0.9 mmol) juntos de acuerdo con GP2 para dar 196 mg (53%) de ¡una i espuma de color blanco después cromatografía instantánea j con EtOac : Hex 2:6. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.0 (1H, dd, J = Ú Hz, 1.5 Hz), 7.74 (1H, s), 7.68 (1 H, s) 7.6 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5 Hz), |7.45 (1H, t, J = IHz) 7.35 (1H, dt, J =6.5 Hz, 1 Hz), 7.1 (1H, d, J = 8.5ÍHz), i 5.45 (2H, m), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz), 4.65 (1H, d, J = 5 Hz), 4.1 '(4H, m), 2.65 (3H, s), 2.4 (3H, s). 13C RMN (CDCI3 400 MHz) d 169.3, 163.1, 151.1, 150.2, 139.3, 134.0, 131.4, 125.7, 123.4, 122.1, 120.8, 120.4, 85.7, 80.4, 77.8, 77.6, 75.1, 72.8, 70.2, 23.8, 20.5. HREM (El) C 2oCIN08, [M + H]+ requiere 462.8570, encontrado 462.8601. ¡Anal.

C22H2oCI 08 requiere C: 57.21, H: 4.36, N: 3.03 encontrado C: 56.91 , H: 4.38, N: 2.94. lsosorbida-2-aspirinato-5-(-3,5-etoxibenzoato) 24 Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mg^ 0.65 mmol) y cloruro de 3,5-etoxibenzoilo (157 mg, 0.72 mmol) juntos de acuerdo con GP2 para dar 296 mg (74%) de un aceite delcolor amarillo viscoso después cromatografía instantánea con EtOac;: Hex 1:4. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.1 (1H, d, J = 8Hz, Asp H5), 7.6 (1H, dt, J = 8Hz, 1.5Hz, Asp H4), 7.35 (1H, t, J = IHz, Asp H3), 7.2(2H, d, 1Hz, Benz H2 + 6), 7.1 (1H, d, 8.5 Hz, Asp H2>, 6.7 (1H, t, J = 2.25 Hz, Benz H4), 5.45 (2?G???, IS H5 + H2), 5.05 (1H, t, J =\ 5 Hz, IS H4), 4.65 (1H, d, J =5.5 Hz, IS H3), 4.05 (8H, m, IS1- l IS6-H2 [a+ß], etoxi-CH2), 2.4 (3H, s, Acet-CH3), 1.45 (6H, t, J ¡=3.5 Hz, EtO-CH3). 13C RMN (CDCI3 400 MHz) d 169.8, 165.8, 163.6, 160.0, 150.7, 134.3, 131.9, 131.1, 126.1, 123.8, 122.7, 107.9, 106.6, I 86.1, 81.1, 78.6, 76.7, 74.5, 73.2, 71.0, 63.8, 61.2, 20.9, 14.8. HREM (El) CzsHaeCho, [M + H]+ requiere 500.4945, encontrado .500.4932. Anal. C25H28O10 requiere C: 62.39, H: 5.64, encontrado C: 62.45, H: 5.79. ' lsosorbida-2-aspirinato-5-(-3-metil-isoxazol-4-oato) 25 ! Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mg, ¡0.65 I mmol) y ácido 3-metilo-isoxazol-4-carboxílico (127 mg, 0.72 rnmol) i juntos de acuerdo con GPI para dar 228 mg (83%) de una espuma de | color blanco después cromatografía instantánea con EtOac : Hex 1:3. i 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.55 (1H, s, isox), 8.0 (1H, d, J =¡8Hz, ! Asp H5), 7.65 (1H, dt, J = 8Hz, 1.5Hz, Asp H4), 7.3 (1H, t, J =¡1Hz, i Asp H3), 7.1 (1H, d, 8.5 Hz, Asp H2), 5.4 (2H, m, IS H5 + H2), 5.0 (1H, t, J = 5 Hz, IS H4), 4.6 (1H, d, J =5.5 Hz, IS H3), 4.1 (4H, m, IS1-H2 [a+ß], IS6-H2 [a+ß]), 3.8 (3H, s, isox-CH3), 2.35 (3H, s,¡Asp-acet-CH3). 3C RMN (CDCI3 400 MHz) d 169.2, 163.0, 160.4, 1150.2, 149.6, 133.9, 131.4, 125.6, 123.4, 122.1, 85.6, 80.5, 73.9, 72.7, ¡70.2, 33.5, 24.5, 20.5, 12.3. ; . lsosorbida-2-aspirinato-5-(-4-metil-1 ,2,3-tiadiazol-5-oat) 26 Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mg; 0.65 mmol) y ácido 4-metil-1 ,2,3-tiadiazol-5-carboxílico juntos para dar 228 mg (83%) de una espuma de color rosa pálido después cromatografía instantánea con EtOac : Hex 1:3. H RMN (CDCI3, 400 ' i MHz) d 8.1 (1H, d, J = 8Hz, Asp H5), 7.7 (1H, dt, J = 8Hz, 1.5Hz, Asp ¡ H4), 7.35 (1H, t, J = IHz, Asp H3), 7.15 (1H, d, 8.5 Hz, Asp. H2), ¡5.5 (2H, m, IS H5 + H2), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz, IS H4), 4.65 (1H, d, J =|5.5 Hz, IS H3), 4.1 (4H, m, IS1-H2 [a+ß], IS6-H2 [a+ß]), 3.05(3H, s, tiad-CH3), 2.4 (3H, s, Asp-acet-CHs)! 13C RMN (CDCI3400 MHz) d 169.7, 163.5, 162.9, 159.1, 150.7, 134.4, 131.8, 126.1, 123.8, 122.5, 8,6.2, 80.9, 78.2, 75.9, 73.2, 70.8, 21.0, 14.1. i lsosorb¡da-2-aspirinato-5-(N-Boc-isonipecotato) 27 Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mg, 0.65 mmol) y ácido 4N-Boc-isonipecótico (162 mg, 0.72 mmol) juntos para i dar 166 mg (49%) de un aceite blancuzco después cromatografía I instantánea con MeOH: DCM 3:97. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.1 (1H, d, J = 8 Hz, Asp H5), 7.7 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5 Hz, Asp !H4), 7.35 (1H, t, J = 1 Hz, Asp H3), 7.15 (1H, d, 8.5 Hz, Asp H2), 5.5 |(1H, d, J = 1.5 Hz IS H2), 5.5, (1H, dd, J =5 Hz, 1 Hz) 4.95 (1H, t, j = 5 Hz, IS H4), 4.65 (1H, d, J =5.5 Hz, IS H3), 4.1 (8H, m, IS1-H2 [q + ß], IS6-H2 [a + ß], 4 nip H), 2.6 (1H, m, nip-metina-H), 2.4 (3H, s, ;Asp-Acet-CH3), 1.7 (4H, m, 4 nip H), 1.5, (9H, s, t-Bu). 13C RMN (CDCI3 400 MHz) d 173.9, 169.8, 163.5, 154.7, 150.7, 134.4, 131.9, 126.1, 123.9, 122.6, 85.9, 80.7, 79.6, 78.5, 77.2, 76.5, 73.9, 73.0, 70.7, 42.9, 40.9, 28.4, 28.1, 27.9, 20.9. HREM (El) C25H33O10N, [M + H]+ requiere 520.4616, encontrado 520.4631. Anal. C25H33O10N requiere C: 60.11, H: 6.40, N: 2.69 encontrado C: 60.15, H: 6.79, N: 2.76J lsosorbida-2-aspirinato-5-(m-acetamidobenzoato) 28 ! ! Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (200 mg,¡ 0.65 mmol) y ácido m-acetamidobenzoico (128 mg, 0.72 mmol) juntos para I dar 202 mg (66%) de un sólido de color blanco después J de cromatografía instantánea con MeOH: DCM 3:97. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.0 (3H, m, Asp H5, Ar H2+4), 7.85 (1H, d, J = 8 Hzj Ar H6), 7.6 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5 Hz, Asp H4), 7.45 (1H, t, J =7.5 Hz', Ar H5), 7.35 (1H, t, J = 1 Hz, Asp H3), 7.15 (1H, d, 8.5 Hz, Asp H2),¡5.5 (2H, m, IS H5 + H2), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz, IS H4), 4.65 (1H, d, J =5.5 Hz, IS H3), 4.1 (4H, m, IS1-H2 [a + ß], IS6-H2 [a + ß]), 2.4 (3H, s, /^sp-Acet-CH3), 2.2 (3H, Ar-acet-CH3). 13C RMN (CDCI3400 MHz) d 169.3, 168.0, 165.0, 163.1, 150.2, 137.7, 133.9, 131.4, 129.7, 128.9, 125.6, i 125.0, 124.4, 123.4, 122.2, 120.2, 85.7, m 80.7, 78.1, 74.12, 72.8, 70.4, 60.0, 24.2, 20.5, 13.8. HREM (El) C24H2309N, [M + H]+ reqiiiere I 470.4392, encontrado 470.4403. Anal. C24H2309N requiere C: 61.41, H: 4.93, N: 2.98 encontrado C: 61.52, H: 5.09, N: 2.86. j lsosorbida-2-aspirinato-5-(m-benc¡loxibenzoato) 29 j i Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato 17 (250 mg1, 0.8 mmol) y ácido m-benciloxibenzoico (182 mg, 0.88 mmol) juntos de acuerdo con GPI para dar 346 mg (85%) de un sólido de color blanco después de cromatografía instantánea con EtOacHex 1:2. 1H ¡RMN (CDCI3, 400 MHz) d 8.0 (1H, d, J = 8 Hz, Asp H5), 7.7 (3H, m; Asp H4, Ar2H), 7.35 (2H, m, Asp H3, ArH), 7.1 (2H, m, Asp H2, ArH'),j 7.25 (5H, m, BnH), 5.5 (3H, m, IS H2, Bn-CH2), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz, IS H4), 4.65 (1H, d, J =5.5 Hz, IS H3), 4.1 (4H, m, IS1-H2 [a + ß], IS6-H2 [a + ß]), 2.4 (3H, s, Asp-Acet-CH3). 13C RMN (CDCI3 400 MHz) d 169.76, 165.2, 163.6, 150.7, 135.8, 134.4, 133.7, 132.9, 131.9, 130.8, 130.3, 130.2, 129.2, 126.1, 123.9, 122.7, 97.7, 86.1, 8(1.1, ! 78.5, 74.7, 73.2, 70.8, 43.9, 20.9. HREM (El) C29H2509, [M + H]+ i requiere 518.4344, encontrado 518.4357. Anal. C29H25O9 requiere C: 67.19, H: 5.05 encontrado C: 67.28, H: 5.09. j lsosorbida-2-aspirinato-5-(p-benciloxibenzoato) 30 ! Se hicieron reaccionar lsosrbida-2-aspirinato (250 mg, : 0.8 mmol) y ácido m-benciloxibenzoico (182 mg, 0.88 mmol) juntos de acuerdo con GPI para dar 346 mg (85%) de un sólido de color blanco después de cromatografía instantánea con EtOacHex 1:2. 1H l¾MN (CDCI3, 400 MHz) d 8.0 (1H, d, J = 8 Hz, Asp H5), 7.7 (1H, dt, J = 8 Hz, 1.5 Hz, Asp H4),7.45 (m, 4H, ArH), 7.35 (1H, t, J = 1 Hz,|Asp H3), 7.25 (5H, .m, BnH) 7.1 (1H, d, 8.5 Hz, Asp H2),, 5.5 (3H, m, IS H2, Bn-CH2), 5.05 (1H, t, J = 5 Hz, IS H4), 4.65 (1H, d, J =5.5 Hz, IS H3), 4.1 (4H, m, IS1-H2 [a+ß], IS6-H2 [a+ß]), 2.4 (3H, s, Asp-Ácet-CH3). 13C RMN (CDCI3 400 MHz) d 169.76, 165.2, 163.6, 1$0.7, 136.9, 135.2, 133.0, 132.2, 131.9, 130.8, 130.3, 130.2, 129.2, 126.1, 123.9, 122.7, 97.7, 86.1, 81.1, 78.5, 74.7, 73.2, 70.8, 43.9, 20.9. HREM (El) C29H 250g, [M+H]+ requiere 518.4344, encontrado 518.4338. Anal. C29H25O9 requiere C: 67.19, H: 5.05 encontrado C: I 67.35, H: 5.18. j lsososrbida-2-aspirinato-5-(2-nitrooxi-metil)benzoato 31 ¡ Se calentaron ftálido (m.p. 134.13g/mol, 5.03g = 37 mrrol) y diclorotrifenilfosforano (m.p. 333.19 g/mol, 12.3g = 38 mmol) a í 80°C durante 4 hrs con agitación131. El cambio de color de verde a marrón se consideró durante el curso de 4 horas. TLC (hexano/acet to de etilo 2:1) mostró que 3 puntos y RMN determinaron que el pujnto superior (Rf 0.77) fue que de cloruro de 2-clorometilbenzoilo,J el segundo punto (Rf 0.57) fue ftálido y el punto inferior (Rf 0.14) |fue trifenilfósforo. Una gran cantidad de ftálido fue sin reaccionar. Cloruro de 2-clorometilbenzoilo (Figura 12) (m.p. 189.04 g/mol, 600 pl) se disolvió en diclorometano (10 mi). Se agregó trietilamina (m.p. í 101.19 g/mol, d=0.726 g/ml, 600µ? = 4.3 mmol) y la mezcla se enfrió i a 0°C. se agregó el compuesto 17 (m.p. 308.14 g/mol, 0.5298 ,g = 1.7 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la i noche mientras se protegió contra luz. La mezcla (color verde) se lavó con HCI (2M, 10 mi), 5% de NaHC03 (10 mi) y agua destilada i (10 mi) y se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se concentró i produciendo 769.5 mg de un aceite de color marrón/verde. Este se i cromatografió utilizando hexano/acetato de etilo (2:1) dando por resultado 419.4 mg de un sólido de color marrón (Rf 0.38). 1H RMN d i (CDCI 400 Hz: 2.38 (3H, s, OCOCH3), 4.03 (4H, m, ISH-1, ISH-V, ISH-6 e ISH-6'), 4.66 (1H, d, ISH-3), 5.04 (2H, m, CH2CI), 5.10 ,(1H, ss, ISH-4), 5.42 (2H, m, ISH-2/H-5), 7.12 (1H, d, Ar-H), 7.28 (1h, m, Ar-H), 7.42 (1H, m, Ar-H), 7.6 (3H, m, Ar-H), 8.01 (2H, dd, Ar-H). C RMN ppm (CDCh) 400 MHz: 20.51 (OCOCH3), 43.95 (CH2CI), 7¡0. 5 i (ISC-1), 72.78 (ISC-6), 74.33 (ISC-5), 78.11 (ISC-2), 80.52 (ISC-4), 85.58 (ISC-3), 122.21 (Ar2C-2/C-6), 123.42, 125.65 (Ar2C-4), 128.03 (Ar1C-6),128.07 (AnC-2), 130.60 (AnC-5), 130.73 (AnC-1), 131.43 (AnC-4), 133.45 (Ar2 C-5), 133.92, 138.54, 150.25 (Ar2OCO), 163.12 (OCOArCH2ON02), 165.47 (ArOCOCH3), 169.29 (ArC(O)OR). 40¡0 mg se disolvió en CH3CN/THF (6 mi, 4/2 v/v) y se trató con AgN03 (m.p. i 169.87 g/mol, 0.30 g = 1.7 mmdl) y se sometió a reflujo durantje 4 ; i horas antes de agitarse durante la noche a temperatura ambiente mientras se protegía contra la luz. La mezcla se filtró y concentró. Esta se reconstituyó en acetato de etilo (10 mi) y agua (2 mi). ¡ La fase orgánica se lavó con agua (3 x 2 mi), salmuera (2 mi) y se secó Í sobre sulfato de sodio. El concentrado, produjo un aceite que se cromatografió utilizando hexano/acetato de etilo (2:1) dando ¡ por resultado 95 mg de del material similar a cera de color amarillo.; H R N d (CDCUÍ 400 MHz: 2.38 (3H, s, OCOCH3), 4.01 (4H, m, ISH-1 , ISH-1', ISH-6 e ISH-6"), 4.65 (1H, d, ISH-3), 5.02 (1H, t, ISH-4), 5.41 (2H, m, CJH2), 5.86 (2H, ss, ISH-2/H-5), 7.11 (1H, d, Ar-H), 7.28 (1H, t, Ar-H), 7.49 (2H, q, Ar-H), 7.61 (2H, q, Ar-H), 8.01 (1H, d, A|-H), 8.10 (1H, d, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCI?) 400 MHz: 20.51 (OCOS.H3), 70.37 (CH2ON02), 72.78 (ISC-1), 73.46 (ISC-6), 74.30 (ISC-5), |ß .01 í (ISC-2), 80.61 (ISC-4), 85.64 (ISC-3), 122.19 (Ar2 C-2/C-6), 123.40, 125.66 (Ar2C-4), 128.76 (An C-6), 129.77 (AnC-2), 129.85 (?G,?-d), 130.30 (AnC-1), 131.41 (AhC-4), 132.44 (Ar2C-5), 133.25, 133.93, 150.23 (Ar2OCO), 163.12 (OCOArCH2ON02), 164.71 (ArOCOCH3), 169.28 (ArC(O)OR). ¦ ' lsososrbida-2-aspirinato-5-(3-nitrooxi-metil)benzoato 32 ? Se disolvió cloruro de 3-clorometilbenzoilo (m.p. 189.04 g/mol, d = 1.33 g/ml, 500 µ? = 3.5 mmol) en diclorometano (10 ml)J Se agregó trietilamina (m.p. 101.19 g/mol, d=0.726 g/ml, 600 µ? 4.3 í mmol) y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó el compuesto 17¡(m.p.

I ¡ 308.14 g/mol, 0.511g = 1.6 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche mientras se protegía de la luz. La me;zcla i se lavó con HCI (2M, 10 mi), 5% de NaHC03 (10 mi) y agua destilada i . (10 mi) y se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se concentró produciendo 1.18 g de un aceite. Este se cromátografió utilizando hexano/acetato de etilo (3:1) dando por resultado en 903.4 mg d,e un i aceite (Rf 0.2). H RMN d (CDCI 400 MHz: 2.37 (3H, s, OCOGH3), 4.06 (4H, m, ISH-1, ISH-V, ISH-6 e ISH-6'), 4.65 (3H, ds, ISH-3 y CH2CI), 5.03 (1H, t, ISH-4), 5.43 (2H, dd, ISH-2, ISH-5), 7.10 (1H, d, Ar-H), 7.32 (1H, t, Ar-H), 7.47 (1H, t, Ar-H), 7.57 (2H, m, Ar-H), ¡8.00 (2H, m, Ar-H), 8.10 (1H, s, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCh) 400 MHz: 20.49 (OCOCH3), 45.01 (CH2CI), 70.41 (ISC-1), 72.76 (ISC-6), 74.20 (ISC-5), 78.04 (ISC-2), 80.64 (ISC-4), 85.63 (ISC-3), 122.18 (Ar2C-2/C-6), 123.39, 125.67 (Ar2C-4), 128.61 (???-?),^^ (Ari;C-2), 129.36 (AnC-5), 129.52 (AnC-1), 131.41 (AnC-4), 133.02 (Ar2C-5), i 133.93, 137.57, 150.20 (Ar2OCO), 163.16 (OCOArCH2ON02), 164.94 (ArOCOCH3), 169.37 (ArC(O)OR). ' Esto se disolvió en CH3CN/THF (6 mi, 4/2 v/v) y se trató con AgN03 (m.p. 169.87 g/mol, 0.67 g ;= 3.9 mmol) y se sometió a reflujo durante 4 horas antes de agitación durante la noche a temperatura ambiente mientras se protegíai de la luz. La mezcla se filtró y concentró. Esta se reconstituyó en acetato de etilo (10 mi) y agua (2 mi). La fase orgánica se lavó con agua (3 x 2 mi), salmuera (2 mi) y se secó sobre sulfato de sodio. El concentrado, produjo un aceite el cual se cromátografió utiljzando hexano/acetato de etilo (1:1) dando por resultado en 184.3 mg del I material similar a cera de color amarillo. 1H RMN d (CDC ) 400 KÍHz: " · i 2.38 (3H, s, OCOCH3), 4.09 (4H, m, ISH-1, ISH-1', lsH-6 e ISH-Í6'), 4.65 (1H, d, ISH-3), 5.05 (1H, t, ISH-4), 5.5 (4H, dd, ISH-2, ISH 5 y CH2), 7.12 (1H, d, Ar-H)', 7.29 (1H, t, Ar-H), 7.50 (3H, m, Ar-H), 7.65 (1H, d, Ar-H), 8.01 (2H, s amplio, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCU) 400 i MHz: 20.51 (OCOCH3), 70.37 (CH2ON02), 72.78 (ISC-1), 73.46 (ISC-6), 74.30 (ISC-5), 78.01 (ISC-2), 80.61 (ISC-4), 85.64 (ISd-3), 122.19 (Ar2C-2/C-6), 123.40, 125.66 (Ar2C-4), 128.76 (A C-6), I 129.77 (AnC-2), 129.85 (AhC-5), 130.30 (A C-1 ), 131.41 (Ar,Q-4), 132.44 (Ar2C-5), 133.25, 133.93, 150.23 (Ar?OCO), 163.12 (OCOArCH2ON02), 164.71 (ArOCOCH3)„ 169.28 (ArC(O)OR).

I lsososrbida-2-aspirinato-5-(4-nitrooxi-metil)benzoato 33 ¡ Se disolvió cloruro de 4-clorometilbenzoilo (m.p. 189.04 g/Ímol, ¦ I 650µ?) en diclorometano (10 mi). Se agregó trietilamina (m.p. 1 ?!? .19 g/mol, d = 0.726 g/ml, 600 µ? = 4.3 mmol) y la mezcla se enfrió á ¡0°C. Se agregó el compuesto 17 (m.p. 308.14 g/mol, 0.5320 g = 1.7 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche mientras se protegía de la luz. La mezcla se lavó con HCI (2M, 10 mi), 5% de NaHC03 (10 mi) y agua destilada (10 mi) y se secó sobre I sulfato de sodio. La mezcla se concentró y cromatografió utilizando hexano/acetato de etilo (2:1 ) dando por resultado en 100 mg del material sólido de color blanco. 1H RMN d (CDCI 400. MHz:! 2.35 i (3H, s, OCOCHg), 4.04 (4H, m, ISH-1, ISH-1", lsH-6 e ISH-6'j, 4.6 I (4H, m, ISH-3 y CH2CI, imp), 5.04 (1H, d, ISH-4), 5.42 (2H, t, ??-2, ISH-5), 7,09 (1H, d, Ar-H), 7.26 (1H, t, Ar-H), 7.47 (2H, m, ^r-H), 7.51 (1H, q, Ar-H), 8.00 (1H, d, Ar-H), 8.06 (2H, m, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCU) 400 MHz: 20.51 (OCOCH3), 44.87 (CH2CI), 70.47 (ISC- Í 1), 72.76 (ISC-6), 74.11 (ISC-5), 78.05 (ISC-2), 80.67 (ISC-4), 85.64 (ISC-3), 122.22 (Ar2C-2/C-6), 123.40, 125.65 (Ar2C-4), 128.53 (Ar^G-6), 128.96 (AnC-2), 129.77 (AnC-5), 130.16 (AnC-1), 130.56 (Ar^C-4), 131.43 (Ar2C-5), 139.91, 142.23, 150.23 (Ar2OCO), 163.14 (OCOArCH2ON02), 164.91 (ArOCOCH3), 169.31 (ArC(O)OR). Esto se disolvió en CH3CN/THF (6 mi, 4/2 v/v) y se trató con AgN03 (m.p. i I 169.87 g/mol, 75 mg = 0.4 mmol) y se sometió a reflujo durante 4 I horas antes de agitación durante la noche a temperatura ambiente i mientras se protegía de la luz. La mezcla se filtró y concentró. Esta í I se reconstituyó en acetato de etilo (10 mi) y agua (2 mi). La fase orgánica se lavó con agua (3 x 2 mi), salmuera (2 mi) y se secó sobre sulfato de sodio. El concentrado, produjo un aceite el cual se cromatografió utilizando hexano/acetato de etilo (2:1) dando por resultado en 28.3 mg del sólido blancuzco. 1H RMN d (CDCIa)í400 MHz: 2.35 (3H, s, OCOCH3), 4.04 (4H, m, ISH-1 , ISH-V, ISH-6 e ¡SH- i 6"), 4.62 (1H, d, ISH-3), 5.01 (1H, t, ISH-4), 5.41 (2H, m, CH2), ¡5.48 (2H, s, ISH-2/H-5), 7.09 (1H, d, Ar-H), 7.31 (1H, t, Ar-H), 7.48 (2H, d, Ar-H), 7.55 (1H, t, Ar-H), 8.00 (1H, d, Ar-H), 8.10 (2H, d, Ar-H)| 1 C I RMN ppm (CDCI3) 400 MHz: 20.51 (OCOCH3), 70.44 (CH2ON02), i 72.76 (ISC-1), 73.18 (ISC-6), 74.23 (ISC-5), 78.02 (ISC-2), 80.65 i (ISC-4), 85.65 (ISC-3), 122.19 (Ar2C-2/C-6), 123.41, 125.66 (Ar2C-4), i 128.17 (AnC-6), 129.85 (Ar,C-4), 129.92 (AnC-5), 131.41 (Anp-1), 133.93 (AnC-4), 137.19 (Ar2C-5), 150.24 (Ar2OCO), .163.14 (OCOArCH2ON02), 164.75 (ArOCOCH3), 169.29 (ArC(O)OR). | lsosorbida-2-aspirinato-5-(nitrooxi)-acetato 34 i A una solución de lsosorbida-2-aspirinato 17 (0.49 g, 1.6 mrnol) j en diclorometano (10 mi) se agregó DCC (0.33 g, 1.6 mrnol), DMAP (0.02 g, 0.16 mrnol) y ácido nitrooxiacético (0.19 g, 1.6 mrnol).¦ La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche ante? de i filtrar y lavar el filtrado con HCI (2 x 10 mi, 0.1 M), NaHC03 acuoso I saturado (2 x 10 mi) y agua (2 x 10 mi). Después de secar sobre I Na2S04 anhidro, el diclorometano se eliminó in vacuo para producir el producto como un aceite crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizó hexano y acetato de etilo (5:2) como eluyente proporcionó el compuesto 23 (0.38 g) como el aceite incoloro. IRvmax (película) cm"1: 1759.0 y 17|27.5 (C=0), 1643.6 (N02), 1287.7 (N02), 1256.3 (C(O)OR, aromático), 1193.5 (C-O-C). HREM: Requiere 411.0802 (M+), Encontrado: (M + ). 5H (400 MHz; CDCI3): 2.36 (3H, s, OCOCH3), 2.68 (1H, d, J = 7.52 Hz, IS-H), 3.61 (1H, q, J = 6.04, 3.52 y 6 Hz, IS-H), 3.92 (1H, q¡ J = 6.04, 3.52 y 6 Hz, IS-H), 4.12 (2H, m, IS-H2), 4.33 (1H, M, IS^H2). 4.58 (1H, d, J = 4 Hz, IS-H), 4.67 (1H, t, J = 5 y 5.04 Hz, IS-H)., ¡5.44 i (2H, s, OCH20), 7.11 (1H, d, J = 8.04 Hz, Ar-H), 7.33 (1H, t, J = 8 y 7.52 Hz, Ar-H), 7.59 (1H, t, 7.06 y 8.26 Hz, Ar-H), 8.01 (1H, dj, J = 6.52 Hz, Ar-H). 513C (100 MHz; CDCI3): 20.91 (OCOCH3), (CH2), 72.36 (IS-C), 73.41 (IS-C), 73.69 (IS-C), 78.96 (IS-C), 82.04 (I -C), 85.64 (IS-C), 122.77 (ArC-1), 123.89, 126.07, 131.81 y 134.31 (metina aromática), 150.74 (CO), 163.51 (ArOC(O) e), 1 59 I (ArC(O)OR). j lsosorbida-2-aspirinato-5-mononitrato ISMNA | Í A una solución de IS-5-MN (5 g, 26.65 mmol) en tolueno (100 mi) a 0°C se agregó trietilamina (5.52 mi, 3.96 mmol) y cloruro de acetilsaliciloilo (6.31 g, 31.74 mmol). La reacción se regresó a temperatura ambiente y se dejó agitar durante 6 horas antes de lavarse con agua (2 x 50 mi), HCI (1M, 2 x 50 mi), NaHC03 acuoso saturado (2 x 50 mi) y salmuera (100 mi). La fase orgánica se secó I con Na2S04 y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el i producto como aceite. Este se cristalizó de etanol para proporcionar 5.42 g del producto como cristales blancos. (58.05%): punto de fusión 82-84°C. IRvmax (KBr): 1757.6 y 1733.4 (C=0), 1651.8 ( ?2), 1261.4 (C(O)OR, aromático), 915.5 (ON02) cm"1. HREM: Requiere: 376.0645 (M++23), Encontrado: 376.0640 (M++23). H RMN d ¦ . i (CDCI3): 2.37 (3H, s, OCOCH3), 3.93 (1H, dd, J = 6.0, 11.5 y 6. Ó Hz, IS6a-H), 4.09 (3H, m, IS1H [aß] e IS6H [ß]), 4.58 (1H, d, J = 4.5 Hz, IS3-H), 5.03 (1H, t, J = 5.0 y 5.5 Hz, IS4-H), 5.38 (1H, m, l¾5-H), 5.45 (1H, d, J = 3.0 Hz, IS2-H), 7.12 (1H, d, J = 8.0 Hz, Ar-H)J 7.33 (1H, t, J = 7.5 y 8.0 Hz, Ar-H), 7.60, (1H, t, J = 7.5 y 8.0 Hz, Ar-H), 8.01 (1H, d, J = 7.5 Hz, Ar-H). 13C RMN ppm (CDCI3): 20.40 (OCOCH3), 68.88 y 72.84 (ISC-1 e ISC-6), 77.50 (ISC-5), 80.83 i(ISC-4), 81.08 (ISC-2), 122.19 (ArC-1 ), 123.41, 125.61, 131.37, 133.92 (metina aromática), 150.24 (ArC-2), 163.09 (ArOCO(Me)), l69.17 i (ArC(O)OR). I Método experimental: Estudios de hidrólisis Utilizando soluciones de plasma/enzima i ! Las soluciones plasma/suero recolectadas (4 mi) se prepararon a la resistencia correcta mediante dilución del plasma bon amortiguador de fosfato pH 7.4 (por ejemplo para 10% de una ' i solución de 0.4 mi de plasma/suero se agregó a 3.6 mi j de amortiguador de fosfato pH 7.4). Siguiendo el equilibrio de la muestra de plasma/suero a 37±0.5°C de 100 µ? de una solución de reserva del compuesto de prueba en acetonitrilo (1 x 10~4 M) se agregó y 250 µ? de alícuotas se eliminaron a intervalos de tiempo especificados. Las muestras se transfirieron a tubos Eppendorf de 1.5 mi que contenían 500 µ? de una solución del 2% p/vj de nSO4.7H20 (agua: acetonitrilo, 1:1). Los tubos se sometierojn a vértice durante 2 minutos, después se centrifugaron a 10.000 ¡rpm durante 3 minutos a temperatura ambiente. El sobrenadante se aspiró y analizó mediante HPLC. La concentración del compuesto de prueba y metabolitos se determinó con referencia a las curvas de calibración conducida en este día en el mismo intervaloi de concentración y bajo mismas condiciones experimentales. Para imitar las condiciones durante el primer paso de las fármacos después de que los compuestos seleccionados de absorción intestinal se incubaron en amortiguador de fosfato a 37°C; en presencia de microsomas del hígado humano (HLM) y epitelio intestinal (HIM). El destino metabólico de los ésteres bajo estas i ' condiciones también se determinó mediante RPHPLC midiendo la concentración de fármaco y metabolitos en el medio como ¡ una función de tiempo. La identidad de que participen las enzimas se confirmó usando la enzima purificada en el caso de plasma (BuChE) y repitiendo los experimentos de hidrólisis en presencia inhibidores específicos de esterasa- isoOMPA para BuChE y BNPP para carboxilesterasa. La actividad de BuChE del plasma y muestras microsomales se determinó utilizando el ensayo de Ellman (Ellman y colaboradores, 1964).

La cromatografía líquida de alto rendimiento se realizó utilizando un sistema que consiste de una bomba y controlador i Waters 600, muestreador automático Waters 717 y un detector de arreglo de fotodiodo Waters 2996 mediante un software Empojwer. Una columna de Hichrom Nucleósiol C18 (4.0 x 250 mm) se utjlizó.

La fase móvil se filtró antes de uso y roció con helio a través del . I ' ensyo. El método de gradiente final usado fue como sigue: ! i Tabla 1: Método de gradiente usado para ensayos de hidrólisis ¡ Tiempo (min) Velocidad de flujo % de amortiguador % de acetonitrilo (ml/min) (pH2.5) 0 1 80 20 ¡ 10 1 20 80 í 15 1 60 40 ' ' 17 1 80 20 ; 20 1 80 20 j I El método se validó para linearidad, precisión y para los metabolitos para LOQ y LOD. ! i Desarrollar un método que de buena separación de aspirina y ácido salicílico fue una tarea muy larga como la elección inici,al de una columna de spherisorb ODS C18 con amortiguador pH 3.1 9 dando la sobreproducción extrema y separación pobre (amortiguador con un pH de 3.1 9 se eligió a sus pKa - aspirina es 3.5 y el ácido salicílico es 2.97[2]). Esto se solucionó eventualmente usando la columna de nucleósilo de hichrom y amortiguador pH 2.5. Como la aspirina es un ácido débil con un pKa de 3.5' que reducen el amortiguador pH debajo de su pKa disminuye Ja retención mientras que el compuesto llega a ser más hidrofóbico . La column a, de nucleósilo dio excelente forma máxima y resolución de los I d os compuestos. I nicialmente las sales de monohid rato se utilizaron ;' que i produjeron un máximo mayor de amortiguador en 1 8 mins. Utilizando ¡ las sales de dihidrato eliminaron el máximo . Aunque se acercaron al final de este trabajo algunos máxi mos de amortiguador grandes comenzaran a aparecer otra vez.

Hay también métodos para medir la inhibición de ág regaciq'n de plaqueta, TXB2, expresión de plaqueta GP2B3A, M DA y datos correspondientes que demuestran que los compuestos clave tienen actividad similar a aspirina. ! Estudios de Agregación d e Sangre Entera . i Una alícuota de 500 µ ? de sa ng re se mezcló con 500 µ? de salina fisiológica y se dejó incubar a 37°C d u rante 1 0 minutos jen el pozo de incubación de un modelo de Agregómetro de sangre entera Chrono-Long 591 /592. La muestra después se transfirió al po¿o de ensayo , la l ínea base se estableció y el volu men apropia reactivo como antes se agregó. La agregación se supervisó d 6 minutos con salida de impedancia registrada en un registrado/ de diagrama. Cuando se probaron los inhibidores la sangre entera se preincubó con concentraciones apropiadas de inhibidor en DMSO a 37°C para una longitud especifica del tiempo antes de agregar el estimulante (10 minutos con agitación). Tres diferentes agentéis de agregación, AA (0.5 mM), ADP (10 µ?) y colágenos (5 pg/mj) se • i utilizaron. Donde no se observó ninguna respuesta de agregación en presencia de un inhibidor un experimento de control se realizó sin ningún inhibidor presente. DMSO en altas concentraciones (¿obre 0.25%) puede inducir un cambio dependiente de concentración en calcio ionizado citoplásmico de plaqueta. Antes de que Icada i experimento a control se realizara se utilizó PRP para obtener ¡ respuestas que agregación normales. Una muestra tambiéjn se incubó durante 10 min a 37°C con 10 pl de DMSO para .asegurarse que no tenía ningún efecto inhibidor en la respuesta de agregación. Dos metabolitos de ISAS, ácido salicílico e isosorbida se examinaron I para determinar si tenían efecto inhibidor en plaquetas. En' este modelo ISAS exhibió potencia significativamente mayor que la aspirina o ISDA en la inhibición de agregación de plaqueta a Itodos ¦ . i los estímulos agregatorios. , Agregación de Plaqueta en Plasma Rica en Plaqueta | La sangre se recolectó de voluntarios sanos que no tornaron ninguno de los fármacos conocidos para efectuar la función de I plaqueta por lo menos 14 días antes del estudio. El plasma rico en plaqueta (PRP) y suspensiones de plaqueta lavadas (2.;5x108 plaquetas/ml ) se prepararon de sangre como se descrjibe previamente. j La agregación de plaqueta se midió por agregometría de luz como se describe previamente. Brevemente, PRP y las muestras1 de plaqueta lavadas (2.5x1 08/ml ) se colocaron en un lumi-agregómetro de calcio ionizado de sangre entera (Chronolog Corp. , Haverto!wn , PA, U .S . A), y (B IO/DATA CORPORATION) e incubaron d urante 1 0 min a 37°C, con agitación a 900 rpm , antes de la adición de agentes de agregación . La agregación se inició por la adición de agonista's, y supervisó por el software Aggro-Link por lo menos 6 mi n . Para: los experimentos se utilizaron inhibidores, la agregación se inició i después de 1 0 min de prei ncubación con estos compuestos. j i Para estudiar la potencia agregatoaria de ADP , las curvas de i concentración-respuesta (0.3-1 0 uM) se generaron. El colágeno en diferentes concentraciones (3-5 ug/ml) también se utilizó para induci r la agregación de plaqueta. Las concentraciones submáximas de agonistas, es decir concentraciones que dieron aproxi madamiente 95% de la agregación máxima se utilizaron para estudiar los efectos de inhibidores de agregación. Los resultados se expresaron en porcentaje de cambios en transmisión de luz máxima, con 1 00% de transmisiones de luz de representación del medio de plaqueta solamente.

In hi bición de la Síntesis de TXB2. i La aspi rina inhibe la agregación de plaqueta atenuando la síntesis mediada de ciclooxigenasa de PGH2 , que es convertida en células al agregador potente TXA2 mediante sintasa de tromboxaino. TXA2 es altamente evanescente e inadecuado para la med ida direjcta pero su metabolito TXB2 se creó generalmente para proporcionar un índice madre útil . El tratamiento de aspirina del tejido in vivo , o in vitro se refleja en una depresión de TXB2. Para comparar l íos compuestos de la invención con aspiri na en este respecto la sangre entera no tratada se dejó coagular en presencia de aspiri na o los compuestos de prueba d u rante el curso de 1 hora a 37°C. Las I muestras después se centrifugaron . El suero se recolectó y TXB¿ se midió uti lizando kits de ensayo inmunosorbente ligado a enzima , ¦ i (ELISA) obtenidos de Cayman Chemicals. Los experimentos^ se realizaron con aspirina en concentración descendente de valores jque dieron inhibición completa de la síntesis de TXB2. En estos ensayos ISAS fue significativamente más potente que la aspiri na como se reflejó en un Cl50 más bajo. ' Citometría de Flujo Para analizar la expresión del receptor en la superficie de plaquetas individuales y minimizar la activación de plaqueta causada por procedimientos de preparación de muestra , no se utilizó ninguna etapa agitación o sometido a vórtice . La abundancia de GPI I b/ljl l a y P-selectina activados en la superficie de plaquetas en presencia y ausencia de inhibidores se midió mediante citometría de flujo. ! Las muestras de plaqueta primero se activaron con agonistas o colágeno o AD P. Cuando la agregación de plaqueta alcanzó 50% de transmisión de luz máxima la reacción se terminó por 1 0 veces de dilusión con salina fisiológica. Las plaquetas latentes se utilizaron . ? como control . En la mayor parte de los experimentos, las plaquetas Í se preincubaron con los inhibidores d u rante 1 0 min antes de la adición de agonistas. Las muestras de plaqueta después1 se incubaron en la obscuridad sin agitación d urante 5 m i ri a temperatura ambiente en presencia de concentraciones de saturación ( 1 0 Mg/ml) de P-selectina (CD62P-APC). Los receptores de plaqueta GP I Ib/l l l a activados se midieron utilizando el anticuerpo monoclonal PAC-1 en la misma concentración como antes. PAC-1 reconoció específicamente un epítope en el complejo de GPI I b/l l l a de álta-afinidad de plaquetas activadas en o cerca de la plaqueta 5.

Después de la incubación , las muestras se diluyeron en fluid o de ¡ flujo FACS y analizaron dentro de 5 min utilizando BD FACSArray ' i (BD Biosciences , Oxford , Reino Unido). La citometría de fluj!o se realizó en muestras de plaqueta manchadas sencillas como se describe antes3. El instrumento se ajustó para medi r el tartaño (dispersión frontal ), granulosidad (dispersión lateral ) y fluorescencia de célula. U na puerta de análisis bidimensional de dispe'rsión delantera y lateral se formula para incluir las plaquetas sol as y excluir plaquetas agregadas y micropartícuias. La uniór^i de anticuerpo se midió analizando las plaquetas individuales med iante fluorescencia. La i ntensidad de fluorescencia promedio se determi nó después de la corrección por autofluorescencia de célula. Paral cada muestra , la fluorescencia se analizó utilizando una escala logarítmica . ¡ Los histogramas de fluorescencia se obtuvieron para 10.000 eventos individuales. Los datos se analizaron utilizando el software Citometer RXP y expresaron como un porcentaje de fluorescencia de control en unidades arbitrarias.

Preparación de m uestras b iológicas para hidrólisis y medición i de liberación de aspirina ! Las muestras de sang re humanas se recolectaron por punción de vanas en tubos de Li-Heparin Sarstedt Monovette (9 mi). Las muestras de plasma se obtuvieron med iante centrifugación de sangre a 10¡.000 rpm por cinco minutos y se congelaron en al ícuotas hasta qué se I requirieron para prueba. Las microsomas de h ígado humano • i combinadas (HLM) se diluyero n a 5 mi con amortiguador de fosfato pH 7.4 (0.1 M) dando una solución de reserva de 2 mg/ml. Las alícuotas se congelaron hasta que se req uirieron para prueba . Los microsomas intestinales humanos combinadas se diluyeron a 5 mi con amortiguador de fosfato pH 7.4 (0.1 M) dando una solución de reserva de 80 u'g/ml. Las al ícuotas se congelaron hasta que se requirieron para prueba. ¡ . Actividad de colinesterasa i La actividad de la buti lcolinesterasa (BChE) en HLM y Hl M se determinó espectrofotométrica mente (405 nm) a 37°C por el método de Ellman (Ellman y colaborado res, 1 964). El yoduro de butiltiocoli na (BTCI) (0.5 mM) se utilizó como el sustrato. La reacción ocurrió e¡n una placa de 96 pozos con un volumen final de 250 µ?. I nicialmerite se mezclaron amortiguador de fosfato pH 8.0 (0. 1 M) y microsorp as e incubaron por 30 minutos. Se agregaron DTNB (0.3 m M) y BTCI y la Resultados de pruebas en plasma de animales de prueba i La investigación de hidrólisis cualitativa de ls-2-aspirinátjo-5L salicilato 2 (0.1 mM) se estudió utilizando plasma de conejillo de : i Indias, hámster, conejo y mono. El propósito de esta prueba se ¡ · determinó para una especie adecuada para prueba biológica y i i desarrollo preclínico. Se esperaba que los resultados también i confirmaran el papel de las enzimas humanas identificadas ya ¡que éstos se distribuyeron variadamente en animales de laboratorio, i 1 . i Tabla 3: Hidrólisis de ls-2-aspirinato-5-salicilato utilizando varias especies ! Conc. de Fuente de plasma Aspirina Tiempo dé profármaco (mM) desapariciónj de fármaco (min) ¡ 0.1 conejillo de Indias (pequeñas presente después cantidades de y) dethrj 0.1 conejo (pequeñas 10 cantidades de ,y) i 0.1 hámster (cantidades grandes) 0.1 mono (cantidades ¦ 5 1 1 grandes) i Uno de un método de gradiente de hidrólisis exitosaniiente desarrollado de 2 en 50% de plasma de conejo se realizó con el del conejo que es un modelo potencial para estudios de agregación de plaqueta. El ensayo de Ellman reveló la actividad de BChE en 1.1 i pmol/l/min. Los resultados sugieren que el hámster y mono pujedne ser candidatos adecuados para la prueba preclínica. Puesto q'ue el plasma de estas especies tiene niveles similares de BuCh E al ¡ de humanos el papel de esta enzima en metabolismo humano también se soporta . j Resultados de h idrólisis para ls-2-aspirinato-5-salicilato, ISAS (2) e n presencia de microsomas intesti nales o de h ígado | Los estudios de hidrólisis en plasma de sangre h umana han I indicado que ISAS (2 ) es un profármaco de aspirina acertado . Este trabajo estado dirigido para ampliar el análisis para incluir preparaciones microsomales intestinal es y de h ígado para determi nar cuánta liberación de aspirina ocurriría en otros tejidos durante la fase de absorción principal mente en el epitelio gástrico y .más i adelante en el hígado . Cuando el fármaco se incubó en presencia de I j microsomas humanos de h ígado y microsomas intestinales hum anas 9 µ ? y 56 µ de aspirina se produjeron (Figura 1 3) y (Figura' 1 4) respectivamente. Esto planteó la pregunta si esto fue debido í a la presencia de BCh E o a un poco de otras enzimas debido a j que mientras que la sangre humana contiene solamente butilcolinesterasa el hígado y el epitel io intestinal también contiene carboxilesterasas (CE)- princi palmente CE-I en el hígado y CE-:2 en el intestino. Las preparaciones microsomales por lo tanto se prei ncubaron con iso-OM PA un inhi bidor de BChE establecido antes de la adición del profármaco para permitir suficiente tiempo ¡ para inhibir cualquier BChE que pudiera haber estado presente en las preparaciones microsomales. Los ensayos de hidrólisis después se realizaron como se - describe previamente para considerar qué efecto eventualmente estuvo en la producción de aspirina. El uso i del inhibidor de BChE específico no disminuyó la producción de aspirina que sugería que un poco de otra enzima está involucrado. El ensayo de Ellman se realizó en ambas preparaciones microsomales para determinar qué niveles de BChE están presentes, eventualmente. Solamente cantidades mínimas se encontraron (Figura 3.1) y no se podrían atribuir a los niveles altos de la producción de aspirina. ¡ Tabla 4: Resultados de actividad de BChE para HLM y HIM ¡ HLM Actividad Actividad HIM Actividad Actividad . i (mg/ml) (pmol/l/min) (µp???/?/p???) (µ????/1/min) ( mol/l/min) sin con sin con sonicación sonicación sonicación sonicación i 0.04 0 16 0.16 o.i;e 0.08 0 32 0.33 0.2 0.93 0.4 2.86 1.68 0.8 .4.93 3.03 Plasma femenino de color blanco = 14.98 pmol/l/min. Plasma que contiene aproximadamente 5 mg/l de BChE[5] = por lo tanto' éste es el equivalente de 0.0125 pg/ml de BChE. ! Utilizando carboxilesterasa del hígado de conejo, la hidrólisis del fármaco se midió y 5.99 µ? de aspirina se produjeron (Figura 18) - niveles similares a HLM. j BNPP un inhibidor de carboxilesterasa conocido se incubó con HIM y HLM por 10 minutos antes de: la adición del fármaco para eliminar la actividad de carboxilesterasa. Una disminución marcada en la producción de aspirina se consideró y después de 60 mins el fármaco no había desaparecido. Puede concluirse que ISAS es un sustrato para CE-1 y CE-2 así como BuChE. Estas enzimas pertenecen a la misma familia pero han marcado diferencia en especificidad del sustrato. Por ejemplo las enzimas de CEj son ineficaces en la hidrólisis de sustratos positivamente cargados tal como los favorecidos por BuChE, incluyendo ésteres de colina. Estas enzimas no se agrupan normalmente juntas. Sorpresivamente en el caso de ISAS, CE-2 presente en preparaciones de HIM exhibe la misma especificidad y eficacia que BuChE y es tan bueno un vector para la liberación de aspirina. El resultado indica que más de una enzima es capaz de liberar aspirina de los compuestos.

Figura 5: Comparación de producción de aspirina con diferentes muestras biológicas utilizando ISAS | Medio biológico Fármaco Aspirina Acido Desaparición del concentrado (µ?) salicílico fármaco (min) (mM) (µ?) i 50% de Plasma Humano (hembra) 0.1 22 4 10 50% de plasma de conejo 0.1 2.6 25 20 carboxilesterasa (16.4 u/ml) 0.1 5.7 53 5 HIM (80 pg/ml) 0.1 27 9 5 HIM (40 Mg/ml)/BNPP (14 µ?) 0.1 2.2 0 9.4 µ? dejados HLM (0.2mg/ml)) 0.1 9 34 l 0 HML/BNPP (11.6 uM) 0.11 2. 3.0 2.8 µ? dejados HML/iSOOMPA(10 uM) 0.11 8.5 33 !io Figura 6: Comparación de la producción de aspirina utilizando diferentes muestras biológicas con ls-2-aspirinato-5-(3-nitrooxi- metil)benzoato 21. 1 Medio biológico Fármaco Aspirina Acido Desaparición del concentrado (µ?) salicilico fármácoKmin) (mM) (µ?) 50% de HP 0.25 26 18 10,' 50% de HP 0.1 21 9 . io| Suero humano purificado (0.15 mg/ml) 0.12 15 6 o!.

HLM (0.2 mg/ml) 0.13 5 6 10, H UisoOMPA (14.4 µ?) 0.1 0.4 4.5 10 H L/BNPP (10.6 uM) 0.1 0.3 0.9 13 µ dejados HIM (80 Mg/ml)) 0.1 20 4 10, HI /BNPP (11.6 uM) 0.11 0.22 1.3 11 µ dejados HIM/iso-O PA(14.4 u ) 0.11 12.7 7.2 30 Resultados de hidrólisis para ls-2-aspirinato-5-(4-nitr -metil)benzoato 22.

I Tabla 7: Efecto de la posición NO en la producción de aspirina í Fuente biológica 2-nitrooxi (5) 3-nitrooxi (4) 4-nitrooxi (6) (µ??) (pm) (um) 50% de plasma 10.3 26 2 i humano HIM (80 µ9?t??) 21.7 20 9.7 ! Resultados de la hidrólisis de ésteres de aspirina de referencia basados en no-isosorbida La hidrólisis de dos ésteres de aspirina basados eri no-isosorbida es decir, 2-metoxifenil-2-acetoxibenzoato (éster de guaicol) y el feniléster del ácido 2-acetoxibenzoico se evaluó en microsomas intestinales humanos (40 g/ml). Ni unos ni otros de estos ésteres actuaron como profármaco de aspirina en humano es decir la acción de esterasa en plasma humano no causa la liberación de aspirina de estos ésteres. ! Tabla 8 : Producción de aspiri na de ésteres de aspi ri na basados en no-isosorbida en H I M HIM (40 ug/ml) 0.5 (µ?) 7.7 (µ?) HIM (20 pg/ml) 5.3 (µ?) Los aspirinatos de fenilo produjeron cantidades insignificantes de aspirina en contacto con microsomas intestinales humanas, ilustrando que para estos sustratos la preferencia de CE-2 es ligeramente diferente a BuChE, en presencia del cual la hidról isis i ocurre sin la evolución de aspirina. Sin embargo, con relación a ISAS y los análogos de n i r o x i m tilo ^ hubo pequeña producción de aspirina. En otras palabras estos compuestos no son profármacos de aspirina en plasma humano y son profármacos de aspirina ineficaces en presencia de CE-2. ^ Los datos ilustran que la interacción entre CE-2 y los profármacos de la invención es especial en que ocu rre la producción de aspirina eficaz. : Figura 9 : Comparación de cantidades de aspi rina prod ucid a de de ls-2-aspiri n ato-5-sal icilato y ls-2-aspi rinatp-5-(3- nitrooximeti l)benzoato Medio biológico ls-2-aspirinato-5-salicilato ls-2-aspirinato-5-(3-¡ i nitrooximetil)benzoatb 50% de HP 22 21 : HIM (20 g/ml) 9 5 HLM/iso-OMPA(14.4 µ?) 8.5 1-4 HLM/BNPP(10.6 µ?) 2.7 0.3 : HIM (80 g/ml) 27 20 i HIM/BNPP(11.6uM) 2.2 0.22 HIM/isoOMPA (14.14 uM) - 12.7 ; I Referencias Albert, A. 1958. Chemical aspects of selective toxicity. Nature, 182, 421-422 ¡ Burton, D.J. and Koppes, W.M. 1975. Cleavage of carboixylic ·' í acid esters to acid chlorides with dichlorotriphenylphosphorane. J. Org. Chem 40, No 21, 3026-3032.

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Claims (38)

REIVIN DICACIONES

1 . Un compuesto de aspiri nato de isosorbida que tiene estructura general como se muestra en la fórmula general ( ) en donde Y es > un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxiéstjer de 1 a 8 átomos de carbono , un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono , un ariléster, un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbo no o -C(0)ORan i"°, en donde Rani"° es un anillo aromático de 5-miembros o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un heteroatomo sustituido para un carbono del sistema de anillo , que puede ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberació n de óxido n ítrico.

2. Un compuesto de aspirinato de isosorbida que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I ) : en donde Y es un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxiéster ide 1 a 8 átomos de carbono, u n cicloalq uiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono , un ariléster o un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico . j

3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2 , en donde el grupo que libera óxido n ítrico comprende un nitrato éster, un nitrato éster de alquilo de 1 a 8 átomos de carbono , un nitrato éster de cicloalquilo de 3 a 1 0 átomos de carbono o u n n itrato éster de alquilo de 1 a 8 átomos de carbono . i i

4. Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformid ad con la reivindicación 1 , que tiene la estructura general com o se muestra en la fórmula general (I ) en donde Y es un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxi éster de 1 a 8 átomos de carbono , que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o ' · un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono j o un cicloalcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono , que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o ¡ un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato, nicótinato i oxazoleoato, isoxazoleato, tiadiazoleoato insustituido o sustituido, que puede sustituir por al menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bercilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, -???2, -N02, -ON02, -(CH2)nON02, -OC(0)[(CH2)m]cic,icoON02, -OCOArÓN02, -OCOAr (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, i en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n=1-8, m = 3-10. ; i

5. Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformidad con la reivindicación 1 ó 4, que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) en donde Y es un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido í con ON02; o un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato, nicótinato, oxazoleoato, isoxazoleato, tiadiazoleoato insustituido o un sustituido, 1 ! que puede sustituir por al menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, o-benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02l -ON02, -(CH2)nON02, -OC(O)[(CH2)m]cicliC0ONO2, -OCOArON02, -OCOAr(CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1-8, m = 3-10.

6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 4, que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) en donde Y es 1 , un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, que puede sustituir por al menos uno del grupo que comprende hidróxido, -Cl, -Br, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, o-benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -ON02, i -(CH2)nON02l -OCOArON02, -OCOAr (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, ; en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n=1-8, m=3-10.

7. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1;Ó 4, que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) en donde Y es un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituidOj que puede sustituirse por al menos un de hidróxido alquilo, de a 8 i< átomos de carbono, alcoxi de 1 a 8, átomos de carbono, o-benciloxi, - ¦; i (CH2)nON02 (n = 1-8), cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono o r haloalquiléster. ¡

8. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en donde el sustituyente haloaqluiléstérhalo es Cl, Br o F. :

9. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde Y se selecciona del .grupo que consiste de:

10. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 9¡, en donde Y se selecciona del uro que consiste de:

11. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) , ' (I) en donde Y es un grupo benzoato o nicotinato insustituido o I sustituido, que puede sustituirse por al menos un de hidroxido,; -Cl, metilo, o-benciloxi, metoxi, -NHC(0)CH3, -OC(0)CH2Br, -NQ2, -CH2ON02. en donde Y es un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, que puede sustituirse por al menos un de hidroxido,; -Cl, metilo, o-benciloxi, metoxi, -NHC(0)CH3, -OC(0)CH2Br, -N02, -CH2ON02. :

12. Un compuesto de aspirinato de ¡sosorbida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedente, que tiene la estructura como se muestra en la fórmula (II) ;

13. Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que tiene la estrüctura como se muestra en la fórmula (III) 1

14. Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que tiene la estructura como se muestra en la fórmula (IV)

15. Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformidad ? con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que tiene la estructura como se muestra en la fórmula (V) ,

16. Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que tiene la estructura como se muestra en la fórmula (VI)

17. Un compuesto de aspirinato de ¡sosorbida de conformidad I con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que tiene la estructura j como se muestra en la fórmula (VII) 1

18 Un compuesto de aspirinato de isosorbida de conformidad I con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que tienen cualquiera I ¡ de las estructuras seleccionadas del grupo que consiste de: j

19. Un compuesto de portador para un fármaco que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (II) i en donde Y ; es un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxi éster de i 1 a 8 átomos de carbono, u n cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono, un ariléster, un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbono o -C(0)ORa ni"°, en donde Rani l l° es un anillo aromático de 5-miembros o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un heteroátomo sustituido para un carbono del sistema de anillo, que puede ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico, y ¡ i X es la molécula del fármaco. ¡

20. Un compuesto de portador para un fármaco de ¡ i conformidad con. la reivindicación 1 9 , que tiene la estructura general i como se muestra en la fórmula general ( I I ) ' en donde Y es ! un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxiéste'r de 1 a 8 átomos de carbono, un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono, un cicloalcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, un ariléster o un alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con por lo menos un g rupo de liberación de i óxido nítrico, ! y X es la molécula del fármaco. !

21 . Un portador de conformidad con la reivindicación 1 9 ó 20, en donde el grupo que libera óxido nítrico comprende un nitrato éster, un aiquiinitrato éster de 1 a 8 átomos de carbono;, un cicloalquilnitrato éster de 3 a 1 0 átomos de carbono o un aiquiinitrato éster de 1 a 8 átomos de carbono.

22. Un portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 9 - 21 , que tiene la estructura general corrió se muestra en la fórmula general (I I ) . en donde Y es j un alquiléster un 1 a 8 átomos de carbono o un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o ! un cicloalquiléster de 3 a 1 0 átomos de carbono o un cicloalcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o : un grupo ariléster, alquilariléster, benzoato o nicótinato insustituido o sustituido , que puede sustituir por al menos uno del grupo que comprende hidróxido , un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono , ben.cilo , un alcoxi d e 1 a 8 átomos de carbono , behciloxi , -N HC(0)R, -N H2, -N02, -ON02 , -(CH2)nON02, I -OC(O)[(CH2)m]cicl¡C0ONO2, -OCOArON02, -OCOAr(CH2)nON02 oj un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n=1-8, m=3-10; y • / ¦ i X es la molécula del fármaco. '

23. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I) en donde Y es un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser insustituido o sustituido con ON02; o un cicloalquiléster de 3 a 10 átomos de carbono o un cicloalcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, que puede ser l insustituido o sustituido con ON02; o ¦ i un grupo benzoato o nicotinato insustituido o sustituido, que puede sustituir por al menos uno del grupo que comprende hidrpxido, un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, un alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, benciloxi, -NHC(0)R, -NH2, -N02, -ÓN02, -(CH2)nON02, -OC(O)[(CH2)m]c(C|IC0ONO2, -OCOArON02, -O!COAr (CH2)nON02 o un haloalquiléster de 1 a 5 átomos de carbono, en donde R es un grupo alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o ¦¦ I alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, n = 1 -8 , m = 3-10; y X es la molécula del fármaco . 1 I

24. Un portador de conformidad con la reivindicación 22 ó 23, en donde el sustituyente haloalquilésterhalo es Cl , Br o F . ¡

25. U n compuesto de portador de conformidad con la reivindicación 1 9 - 22, en donde el portador se selecciona del grupo que consiste de: en donde X es la molécula del fármaco.

26. Un compuesto de fármaco que comprende el compuesto de portador de conformidad con la reivindicación 1 9-22. i

27. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 a 25 , y por lo menos un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, j

28. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera ; de las reivindicaciones 1 a 25, o una composición de acuerdo con' la reivindicación 27 , para red ucir la expresión glicol-proteína de plaqueta constitutiva en un nivel donde' la aspirina no tiene efecto .

29. El uso de un com puesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25 , o una composición de acuerdo con la reivindicación 27, para inducir una aspirina de efecto similar.

30. Uso de conformidad con la reivindicación 29 , en donde la aspirina efecto similar es una reducción en actividad antiplaquetaria, inhibición de productos de COX. ¡

31 . Uso de conformidad con la reivindicación 29 ó 30:, en I donde los productos de COX inhibidos son tromboxano A2 o i malondialdehído. ;

32. Uso de un compuesto de conformidad con' la reivindicación 1 a 25 , en la fabricación de .un medicamento para el tratamiento de trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, I dolor, pi rético, inflamación, cáncer, enfermedad de Alzeheimer o demencia.

33. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 25, en el grupo isosorbida-2-aspirinato es sustituido con un alquil o ariléster en la posición 5 para promoyer la i hidrólisis del grupo acetilo en la posición 2 para liberar aspirina.

34. Uso de un compuesto que tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I*) : I ¡ en donde Y es un alquiléster un de 1 a 8 átomos de carbono , un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, u n cicloalquiléster de 1 a 1 0 átomos de carbono , un ariléster, un alqu ilariléster de 1 a 8 átomos de carbono o -C(0)OR*9, en donde Ra ni"° es un anillo aromático de 5-miembros o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un heteroát mo sustituido para un carbono del sistema de anillo, que puedej . ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico en el tratamiento de trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, dolor, pirético , inflamación , cáncer, enfermedad de Alzeheimer o demencia.

35. Uso de un compuesto que tiene la estructura general como se muestra en la fórmul a general (I*) en donde Y es i I I un alquiléster de 1 a 8 átomos de carbono, un alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono, un cicloalquiléster de 3 de 1 0 átomos de carbono, un ariléster, un alqui lariléster de 1 a 8 átomos de carbono o -C(0)ORa n i"° , en donde Ra ni l l° es un anillo aromático de 5-miembros o no aromático de 5-miembros que tiene por lo menos un heteroátomo sustituido para un carbono del sistema dé anillo, que puede ' ser insustituido o sustituido con por lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, dolor, pi rético, inflamación , cáncer, enfermedad de Alzhei mér o demencia. i

36. Un compuesto de conformidad con cualquiera de, las I reivindicaciones 1 a 35 ó 33, sustancialmente como se describe en la presente y/o con referente a los ejemplos anexos.

37. Una composición de conformidad con la reivi nd icación 27, sustancialmente como de describe en la presente y/o con referente a los ejemplos anexos.

38. Uso de confo rmidad con cualquiera de : las i. reivindicaciones 28 a 32 ó 34 - 35, sustancialmente como de describe en la presente y/o con referente a los ejemplos anexos .; RESU M EN Se describe la aspirina que es uno de los fármacos niás ampliamente utilizados en el tratamiento de inflamación , dolor y fiebre. Se ha encontrado más recientemente su aplicación en' la prevención de ataques e infarto al corazón y se está estudi ando como un agente quimiopreventivo del cáncer. A pesar de su valor la aspirina continúa sin utilizarse debido a que causa sangrado gástrico. La tecnolog ía bajo desarrollo potencialmente elimina este problema. Se diseña para reducir el contacto entre el fármaco y la mebrana intesti nal . Así , se proporciona un compuesto de profárrrjaco ¡ de aspiri nato de isosorbida. El compuesto tiene la estructura general como se muestra en la fórmula general (I), en donde Y es u n I alquiléster de "1 a 8 átomos de carbono , alcoxiéster de 1 a 8 átomos de carbono , cicloalquiléste.r de 3 a 1 0 átomos de carbono, ariléster, alquilariléster de 1 a 8 átomos de carbono o -C(0)O Ra n¡iio > en dónde Ra nino es un anillo aromático de 5 miembros o no aromático 'de 5 miembros que tiene por lo menos un heteroátomo sustituido por un átomo de carbono del sistema de anillo , que puede estar sin sus | titui r I o sustituido con por lo menos un grupo de liberación de óxido nítrico .