JP5449730B2 - 更年期障害改善剤及び栄養補助食品 - Google Patents
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Description
細胞:正常ヒト皮膚線維芽細胞(以下、NB1RGBと称す。 理研Cell Bank)
細胞ストレイン番号−RCB0222
培地:10%牛胎仔血清含有イーグルMEM培地
基礎培地イーグルMEMに牛胎仔血清を10%になるように添加。
細胞評価:コラーゲンステインキット(コスモバイオ社)
陽性対象:アスコルビン酸(以下、APMgと称す。)(和光純薬工業)
細胞評価:MTT(同仁化学)
被験品1:鮭の卵巣外皮由来ペプチド(以下、Sample A)
被験品2:コラーゲン+ヒアルロン酸(コラーゲン:ヒアルロン酸=90:10、質量比)(以下、Sample B)
被験品3:鮭の卵巣外皮由来ペプチド+コラーゲン+ヒアルロン酸(卵巣外皮由来ペプチド:コラーゲン:ヒアルロン酸=50:45:5、質量比)(以下、Sample C)
Sample
A〜Sample Cについては、10%牛胎仔血清含有イーグルMEM培地にて以下のように溶解した。
Sample
A〜Sample C(0.5%、1%、2%)3段階
NB1RGBの培養
NB1RGBを96穴マイクロタイタープレートに2.0×104 cell/wellになるように播種(100μl)して24hr前培養したのち、基本培地または各濃度に調製した被験品(Sample A〜Sample C)を100μl添加して、CO2インキュベーター(37℃,5%CO2)内で48hr培養した。
基本培養後、培地成分を除去するためPBS(-)を用いて各ウェルを100μlで2回洗浄し、キット染色液(シリウスレッド+ファーストグリーン含有)を50μl 添加後、室温(23℃±1℃)・暗所にて30min静置させた。
被験品のNB1RGBに対する細胞増殖性への影響については、MTT還元法で確認した。
基本培養後、0.5% MTT水溶液を各ウェルに20 μl 添加して37℃で2hrインキュベーションを行った。インキュベーション後の培地成分を除去するために,各ウェルをHEPES緩衝液でそれぞれ100μlずつ2回洗浄した後,100 μlの0.04M 塩酸含有イソプロパノール溶液を分注してさらに1hrインキュベーションを行い,生成したフォルマザンを抽出した。これをマイクロプレートリーダーにより570 - 655 nm の吸光度を測定し、その値を細胞増殖性の指標とした。
NB1RGBのコラーゲン合成能、に与えるSample A〜Sample Cの影響についてそれぞれ図1から図3に示す。Sample Aについては、図1の斜線を付したグラフに示すように、各濃度(0.5〜2%)ともに陽性対照であるAPMgと比べるとコラーゲン量は低かったものの、未処理(non treatment)と比較するとコラーゲン量は高かった。
treatment)と同様であった。
Sample
A〜Sample CのNB1RGBに対する細胞増殖性への影響について図4〜図6に示す。図示するように、Sample A〜Sample Cの全ての濃度において、未処理(non treatment)とほぼ同様であったことから、本被験品の細胞毒性は見られず安全性が確認された。
Claims (2)
- 鮭の卵巣外皮を蛋白分解酵素で処理して成るペプチドを主成分とし、イソフラボン及び高麗人参またはその抽出物を含むとともに、シャンピニオンエキスとクエン酸及を含む清涼飲料であることを特徴とする栄養補助食品。
- 鮭の卵巣外皮を、蛋白分解酵素で処理して成るペプチドを主成分とし、コラーゲン及びヒアルロン酸を含むとともに、シルク加水分解物、サメ軟骨抽出物、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB6、ビタミンB12、及びビタミンCを含むことを特徴とする栄養補助食品。
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