JP7116950B2

JP7116950B2 - 海洋性プラセンタとコラーゲンによるメラニン産生抑制剤

Info

Publication number: JP7116950B2
Application number: JP2018065182A
Authority: JP
Inventors: 公次中溝; 昌也竹内; 秀吾竹内
Original assignee: 株式会社ヴェントゥーノ; 株式会社かねふく; 株式会社カメリカフーズ
Priority date: 2018-03-29
Filing date: 2018-03-29
Publication date: 2022-08-12
Anticipated expiration: 2038-03-29
Also published as: JP2019172638A

Description

本発明は、海洋性プラセンタとコラーゲンによるメラニン産生抑制剤に関するものである。

メラニン産生抑制剤にプラセンタとコラーゲンを配合することは、例えば、特許文献１（特開２００３－１７１３００号公報）の実施例１（段落００８５）に、プラセンタエキスを１０（重量％）及びコラーゲンを２０（重量％）配合する点が記載され、特許文献２（特許第４９０２９６７号公報）の処方例５（段落００５６）に、同じくプラセンタエキスを１０（重量％）及びコラーゲンを２０（重量％）配合する点が記載されているように、従来知られている。

また、特許文献３（特開２００３－１７６２１９号公報）には、美白乳液用の処方例として、サメ由来コラーゲンペプチド３．０（質量％）及び豚プラセンタ水抽出エキス１．０（質量％）を配合したものや、エモリエントクリームの処方例として、サメ由来コラーゲンペプチド３．０（質量％）及び豚プラセンタ酵素分解溶液１．０（質量％）を配合したものが記載され（段落０１０３及び０１１２を参照）、特許文献４（特開２０１２－６７０２６号公報）には、各種化粧料及び飲食品の成分として、プラセンタやコラーゲンを配合する点が記載されている（段落００６７～００７８を参照）。
しかし、プラセンタとコラーゲンの配合量及び配合率は固定的で、特にプラセンタとコラーゲンの配合率が投与後の生細胞数やメラニン産生量に大きな影響を与えることは知られていなかった。

特開２００３－１７１３００号公報特許第４９０２９６７号公報特開２００３－１７６２１９号公報特開２０１２－６７０２６号公報

本発明者らは、海洋性プラセンタとコラーゲンの配合量を変化させた培養液を用いて正常ヒトメラノサイトを培養した後における生細胞数を測定した結果に基づき、それらの配合量の範囲を特定した上で、海洋性プラセンタとコラーゲンの配合量及び配合率を変化させた試験培養液を作成し、生細胞数及びメラニン産生量に良い結果を及ぼすことのできる最適な組み合わせを見出す実験を行った。

そして、海洋性プラセンタとコラーゲンの配合量及び配合率を最適化することにより、培養後の生細胞数を減少させず、かつ、メラニン産生量を減少させることができるメラニン産生抑制剤が得られることを突き止めるに至った。
すなわち、本発明は、メラニン産生量を抑制できるだけでなく細胞にも優しいメラニン産生抑制剤の提供を目的とするものである。

請求項１に係る発明は、海洋性プラセンタを基材に対して０．０５～０．１５重量％、コラーゲンを前記海洋性プラセンタに対して１～１０重量％配合したことを特徴とするメラニン産生抑制剤である。

請求項２に係る発明は、請求項１に記載のメラニン産生抑制剤であって、コラーゲンを前記海洋性プラセンタに対して５～１０重量％配合したことを特徴とする。

請求項１又は２に係る発明のメラニン産生抑制剤によれば、メラニン産生抑制作用の強いフェニルチオ尿素（Ｐｈｅｎｙｌｔｈｉｏｕｒｅａ、ＰＴＵ）に匹敵するメラニン産生抑制作用を有するだけでなく、投与後の生細胞数を減少させることなく、すなわち細胞に優しいメラニン産生抑制剤を提供することができる。

プラセンタ量と生細胞数の関係を評価する予備試験結果の表とグラフ。コラーゲン量と生細胞数の関係を評価する予備試験結果の表とグラフ。各種試験培養液と生細胞数の関係を示す表とグラフ。各種試験培養液とメラニン産生量の関係を示す表とグラフ。各種試験培養液と細胞当たりメラニン産生量の関係を示す表とグラフ。本試験により得られた各種試料の顕微鏡写真。

以下、予備試験、本試験及び実施例を挙げて本発明を詳しく説明する。

[予備試験]
予備試験においては、まず、プラセンタ量と生細胞数の関係を評価するため、正常ヒトメラノサイトを２４時間培養した後、海洋性プラセンタ（以下、単に「プラセンタ」という）の添加量が異なる培養液（Ｍｅｄｉｕｍ２５４）に交換して３日間培養した。
プラセンタの添加量が異なる培養液としては、プラセンタを添加しないもの、プラセンタを培養液１ｍｌ当たり１×１０^-5ｍｇ添加したもの、同じく１×１０^-4ｍｇ添加したもの、同じく１×１０^-3ｍｇ添加したもの、同じく０．０１ｍｇ添加したもの、同じく０．１ｍｇ添加したもの、同じく１ｍｇ添加したもの、同じく１０ｍｇ添加したものの８種類を用意し、それぞれの培養液を３箇所に添加した。
正常ヒトメラノサイトを３日間培養した後、細胞増殖能をＷＳＴ－８法にて測定（具体的には試料の吸光度を測定）し、同じ種類の培養液によって３箇所の培地で培養した試料の測定値の平均値を算出した。
図１は、プラセンタ量と生細胞数の関係を評価する予備試験結果の表とグラフ、すなわち、予備試験により得られた測定値、平均値及び相対生細胞数（プラセンタを添加しないものに対する比率）等を示す表と、相対生細胞数のグラフである。
図１によると、プラセンタを１ｍｇ／ｍｌ添加したものでは相対生細胞数が無添加のものと比べて大きな変化がないことが分かる。

次に、コラーゲン量と生細胞数の関係を評価するため、正常ヒトメラノサイトを２４時間培養した後、コラーゲンの添加量が異なる培養液を添加した培地に交換して３日間培養した。
コラーゲンの添加量が異なる培養液としては、コラーゲンを添加しないもの、コラーゲンを培養液１ｍｌ当たり１×１０^-5ｍｇ添加したもの、同じく１×１０^-4ｍｇ添加したもの、同じく１×１０^-3ｍｇ添加したもの、同じく０．０１ｍｇ添加したもの、同じく０．１ｍｇ添加したもの、同じく１ｍｇ添加したもの、同じく１０ｍｇ添加したものの８種類を用意し、各種類の培養液を３箇所に添加した。
正常ヒトメラノサイトを３日間培養した後、細胞増殖能をＷＳＴ－８法にて測定し、同じ種類の培養液によって３箇所の培地で培養した試料の測定値の平均値を算出した。
図２は、コラーゲン量と生細胞数の関係を評価する予備試験結果の表とグラフ、すなわち、予備試験により得られた測定値、平均値及び相対生細胞数（コラーゲンを添加しないものに対する比率）等を示す表と、相対生細胞数のグラフである。
図２によると、コラーゲンの添加量を増やすほど相対生細胞数が減少することが分かる。

[本試験]
以上の予備試験結果から、プラセンタ及びコラーゲンの添加量は０．０１～１ｍｇ／ｍｌ程度が良いことが分かったので、プラセンタ及びコラーゲンを０．０１ｍｇ／ｍｌ添加した培養液（以下「プラセンタ0.01」及び「コラーゲン0.01」という）、プラセンタ及びコラーゲンを０．１ｍｇ／ｍｌ添加した培養液（以下「プラセンタ0.1」及び「コラーゲン0.1」という）並びにプラセンタ及びコラーゲンを１ｍｇ／ｍｌ添加した培養液（以下「プラセンタ１」及び「コラーゲン１」という）を用いて、予備試験と同様に正常ヒトメラノサイトを培養した。
また、生細胞数やメラニン産生量の参考値を得るため、プラセンタ及びコラーゲンを添加しない培養液（以下「無添加液」という）、細胞やメラニン産生に影響を与えない物質であるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を０．１ｍｇ／ｍｌ添加した培養液（以下「ＤＭＳＯ液」という）、メラニン産生抑制作用の強い物質であるＰＴＵを４００μＭ添加した培養液（以下「ＰＴＵ液」という）を用いて、同様に正常ヒトメラノサイトを培養した。
さらに、プラセンタとコラーゲンの配合量及び配合率を変化させて添加した培養液（以下「混合サンプル」という）を用いて、同様に正常ヒトメラノサイトを培養した。

混合サンプルとしては、以下の７種類を用意した。
・混合サンプル１：プラセンタ０．０１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン１ｍｇ／ｍｌ添加
・混合サンプル２：プラセンタ０．１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン０．０１ｍｇ／ｍｌ添加
・混合サンプル３：プラセンタ０．１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン０．１ｍｇ／ｍｌ添加
・混合サンプル４：プラセンタ０．１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン１ｍｇ／ｍｌ添加
・混合サンプル５：プラセンタ１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン０．０１ｍｇ／ｍｌ添加
・混合サンプル６：プラセンタ１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン０．１ｍｇ／ｍｌ添加
・混合サンプル７：プラセンタ１ｍｇ／ｍｌ、コラーゲン１ｍｇ／ｍｌ添加
なお、本試験では、同じ種類の培養液によって５箇所の培地で培養した試料について、予備試験と同様にＷＳＴ－８法による測定とメラニン産生量の測定を行い、それぞれ平均値等を算出した。
そして、図３は、本試験により得られた各種試験培養液と生細胞数の関係を示す表とグラフ、図４は、本試験により得られた各種試験培養液とメラニン産生量の関係を示す表とグラフ、図５は、本試験により得られた各種試験培養液と細胞当たりのメラニン産生量の関係を示す表とグラフである。
また、図６は、本試験により得られた各種試料の顕微鏡写真である。

図３の表及びグラフによると、混合サンプル５～７で、無添加液、ＤＭＳＯ液、ＰＴＵ液並びにプラセンタのみ又はコラーゲンのみを添加した培養液による生細胞数を超える生細胞数が得られており、混合サンプル５～７が細胞に優しいものであることが分かる。
図４の表及びグラフによると、混合サンプル５～７で、ＰＴＵ液以外の培養液によるメラニン産生量を下回るメラニン産生量となることが見て取れる。
そして、図５の表及びグラフによると、混合サンプル５～７で、ＰＴＵ液以外の培養液による細胞当たりのメラニン産生量を下回るメラニン産生量となることが見て取れ、ＰＴＵ液を除いて細胞当たりのメラニン産生量が最も少ないプラセンタ１（平均値137.9）と比較しても、混合サンプル５及び混合サンプル６では、それぞれ平均値124.7及び117.3と非常に低い値となっており、メラニン産生を抑制する効果が明らかなＰＴＵ液（平均値96.7）に匹敵する値が得られた。

本試験の結果から、プラセンタを基材に対して０．５～１．５ｍｇ／ｍｌ（０．０５～０．１５重量％）、コラーゲンをプラセンタに対して１～１０重量％配合することによって、メラニン産生量を抑制できるだけでなく、細胞にも優しいメラニン産生抑制剤を提供できることが分かる。
また、図５の混合サンプル５～７のグラフからみて、プラセンタを１ｍｇ／ｍｌ配合した混合サンプルにおいては、細胞当たりのメラニン産生量の極小値はサンプル５と６の間で得られるものと推測できるので、コラーゲンをプラセンタに対して５～１０重量％配合することで、より優れたメラニン産生抑制剤を提供することができる。

本発明のメラニン産生抑制剤は、内用剤或いは外用剤として処方することができ、また食品或いは飲料の成分としても使用することができる。
そして、本発明のメラニン産生抑制剤は、細胞に優しく、効果的にメラニンの産生を抑制して、色素の沈着を有効に抑制できる。
また、本発明のメラニン産生抑制剤を適用するにあたっては、必要に応じて、基材に対し無機顔料、紫外線吸収剤、美白成分、チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン色素還元剤、界面活性剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、抗菌剤、保湿剤、香料、着色剤等の添加剤を適宜添加してもよい。

以下、実施例によって本発明のメラニン産生抑制剤の処方例を説明する。
＜処方例１＞化粧水（重量％）
海洋性プラセンタ（０．１）
コラーゲン（０．０１）
ヒアルロン酸（０．０１）
プロテオグリカン（０．０１）
エラスチン（０．０１）
ＢＧ（５）
ステアリン酸（３）
スクワラン（０．０５）
香料（適量）
防腐剤（適量）
精製水（残部）
合計（１００．０）

＜処方例２＞化粧水（重量％）
海洋性プラセンタ（０．１５）
コラーゲン（０．０１５）
ヒアルロン酸（０．０１）
プロテオグリカン（０．０１）
エラスチン（０．０１）
ＢＧ（５）
ステアリン酸（３）
スクワラン（０．０５）
香料（適量）
防腐剤（適量）
精製水（残部）
合計（１００．０）

＜処方例３＞化粧用クリーム（重量％）
海洋性プラセンタ（０．１）
コラーゲン（０．０１）
ヒアルロン酸（０．０１）
プロテオグリカン（０．０１）
エラスチン（０．０１）
スクワラン（０．０５）
ＢＧ（５）
グリセリン（１１）
アルコール（５）
カルボマー（１）
香料（適量）
防腐剤（適量）
精製水（残部）
合計（１００．０）

＜処方例４＞化粧用クリーム（重量％）
海洋性プラセンタ（０．１５）
コラーゲン（０．０１５）
ヒアルロン酸（０．０１）
プロテオグリカン（０．０１）
エラスチン（０．０１）
スクワラン（０．０５）
ＢＧ（５）
グリセリン（１１）
アルコール（５）
カルボマー（１）
香料（適量）
防腐剤（適量）
精製水（残部）
合計（１００．０）

Claims

海洋性プラセンタを基材に対して０．０５～０．１５重量％、コラーゲンを前記海洋性プラセンタに対して１～１０重量％配合した
ことを特徴とするメラニン産生抑制剤。
コラーゲンを前記海洋性プラセンタに対して５～１０重量％配合した
ことを特徴とする請求項１に記載のメラニン産生抑制剤。