JP5268250B2 - 炎症性サイトカイン産生を抑制するフィルター材、装置、および方法 - Google Patents

Description

本発明は、炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材、フィルター装置、および炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得る方法に関する。

腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ：ＴＮＦ）はｉｎ ｖｉｔｒｏ で腫瘍細胞を傷害する因子としてＣａｒｓｗｅｌｌらによって初めて報告され（非特許文献１）、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ−α）、Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ−βの3種が知られている。ＴＮＦ−αは単球／マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ケラチノサイトなどから産生されるが、感染性疾患、免疫障害、自己免疫病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、腫瘍形成等と関連があることが実証されてきている（非特許文献２）。特にＴＮＦ−αの産生はグラム陰性敗血症、内毒性ショック、クローン病、および関節リウマチにおいて劇的に誘導されている。このような広く様々な徴候にＴＮＦ−αが関係することから、この炎症性サイトカインを標的とする治療は重要である。

一方、インターロイキン６（以下、「ＩＬ−６」と略記する）は、Ｂ細胞刺激因子としてクローニングされた２６ｋＤの糖蛋白であり、Ｔ細胞やＢ細胞、単球、繊維芽細胞、皮膚ケラチノサイト、血管内皮細胞、腎メサンギウム細胞、脳アストロサイト、骨芽細胞で産生されるが、心筋症、心肥大、心筋梗塞、狭心症などの心疾患、関節リウマチ、全身性エリスマトーデス、全身性強皮症、リウマチ熱、多発性筋炎、結節性動脈周囲炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病、キャッスルマン病および自己免疫性溶血性貧血など各種自己免疫疾患、メサンギウム増殖性腎炎、ＩｇＡ腎炎、ループス腎炎、骨粗鬆症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、胸膜炎、潰瘍性大腸炎、アテローム硬化症、活動性慢性肝炎、アルコール性肝硬変症、痛風、および各種脳炎など炎症疾患、多発性骨髄腫、心房内粘膜腫、腎癌、肺腺癌、悪性中皮腫、卵巣癌および癌悪液質など肉芽腫を伴う疾患との関係が明らかになってきている。

関節リウマチは関節滑膜を病変の主座とする原因不明の炎症性疾患である。その関節腔内ではＴＮＦ−α、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインが過剰に産生され、リンパ球浸潤、滑膜増殖、破骨細胞による軟骨組織破壊といった関節病変形成に関与していることが明らかとなった（非特許文献３）。これらサイトカインなどによってドライブされた炎症細胞や滑膜細胞は、さまざまなシグナル伝達分子を介して持続的な活性化、細胞増殖を引き起こす（非特許文献４）。ＴＮＦ−αを過剰発現させたモデル動物では関節炎が惹起され、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体による中和によって関節炎の改善が認められており（非特許文献５）、また抗ＩＬ−６抗体の投与によっても症状の改善が認められている（非特許文献６）。

抗ＴＮＦ−α抗体をはじめとするＴＮＦ阻害剤は、関節リウマチの他、クローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、血管炎、成人発症スティル病、ベーチェット病、関節リウマチに合併する肺線維症、２次性アミロイド症、そしてサルコイドーシスなどへの適応拡大に向けた治験が進められている（非特許文献７）。一方、抗ＩＬ−６抗体も、糸球体腎炎、骨粗鬆症に対する効果が報告されている（非特許文献８、９）。以上のことから、ＴＮＦ−αやＩＬ−６などの炎症性サイトカイン活性を減弱させる抗サイトカイン療法は種々の疾患に対し有効である。

これまでにＴＮＦ阻害製剤として、抗ＴＮＦ−α抗体としてインフリキシマブ（レミケード（登録商標））、アダリムマブ（ヒュミラ（登録商標））や、ＴＮＦ−α受容体蛋白としてエタネルセプト（エンブレル（登録商標））が用いられている。しかし、これら製剤は優れた効果を発揮する一方、後述するように多くの問題点がある。インフリキシマブ単回投与後の再燃を克服するために行われた反復投与では抗キメラ抗体（中和抗体）の産生によるものと思われる効果減弱が報告されている。重篤な副作用としては、悪性リンパ腫のリスクが上昇すること、間質性肺炎の発症リスクが高いことが報告されている。また、感染症リスクを高めるとされ、結核の発症リスクを7倍にするほか、カリニ肺炎、真菌症などの細胞内寄生感染症が報告されている。その他、急性反応として、掻痒感、蕁麻疹などの皮膚症状、胸痛、呼吸困難などの心肺症状、アナフィラキシーショックなどが報告されている（非特許文献７）。エタネルセプトにおいてもインフリキシマブ同様悪性リンパ腫の発生頻度が高まることが懸念されており、その他、重篤な感染症として腎盂腎炎、感染性関節炎、肺炎、気管支炎、腹腔内膿瘍、蜂窩織炎、骨髄炎、敗血症などが報告されている。即ち、関節リウマチ等の疾患において、抗ＴＮＦ−α抗体をはじめとする炎症性サイトカイン阻害剤が使用されてきているが、安全性の面では十分といえず、さらに改良された炎症性サイトカイン活性の減弱効果を示す治療方法の開発が望まれている。

一方、不織布などをフィルター材として患者末梢血液から白血球を選択的に除去し、活性化白血球による障害作用を軽減する白血球除去療法が知られており、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ又は悪性関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、クローン病などの治療に用いられている。しかしながら、従来の白血球除去療法には抗サイトカイン療法の効果は認められていなかった。

エチレン−ビニルアルコール共重合体は、親水性、血液適合性を特徴とする高分子化合物として知られ、中空糸の製造方法（特許文献１）或いは不織布の製造方法（特許文献２）が提案されている。また、親水性に優れた特徴から、エチレン−ビニルアルコール共重合体により親水化されたポリスルホン中空糸の製造方法（特許文献３）やエチレン−ビニルアルコール共重合体等の親水性高分子の脱水縮合によって親水化された疎水性材料及びその方法（特許文献４）が提案されている。しかしながら、上述の公知技術にはこれらの材料による炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材、フィルター装置、および炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得る方法に関しては何ら開示されていない。また、エチレン−ビニルアルコール共重合体により被覆された不織布に関する公知技術はこれまで報告されていない。

以上述べたように、現在までのところ、炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材、装置、および方法は知られていない。
Ｃａｒｓｗｅｌｌ ＥＡ，ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７２，３６６６−３６７０，１９７５ Ｆｅｌｄｍａｎｎ Ｍ， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２，３６４，２００２ Ｂｒｅｎｎａｎ ＦＭ，Ｂｒ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，３１，２９３−２９８，１９９２ Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｔ ａｎｄ Ａｂｅ Ｔ，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７，３６５−３８１，１９９８ Ｆｅｌｄｍａｎｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８３−３５０，１９９７ Ｗｅｎｄｌｉｎｇ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２０，２，２５９−２６２，１９９３ Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，１，７−１５，２００４ 日本臨床、第５０巻、２８４０−２８４１頁（１９９２年） Ｊｉｌｋａ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５７，８８−９１，１９９２ 特許第３２０３０４７号公報 特公平６−７２３５０号公報 特許第３３０５７７８号公報 特開２００４−３３２１３８号公報

本発明は、抗サイトカイン療法に用いられる炎症性サイトカイン阻害剤の副作用の問題点に鑑み、炎症性サイトカインの産生が抑制された安全な白血球含有液を取得することのできるフィルター材、フィルター装置、および炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得る方法を提供することにある。

本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意検討したところ、白血球の少なくとも一部を除去するフィルター担体の表面が、エチレン−ビニルアルコール共重合体により被覆されているフィルター材に白血球含有液を流すと、該フィルター材で濾過された白血球含有液は、フィルター材を通過する前の白血球含有液に比べて炎症性サイトカインの産生能が著しく抑制されていることを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち本発明は以下のような構成からなる。
（１）白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、前記フィルターは、フィルター担体の表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆されており、該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２０ｍｏｌ％以上７０ｍｏｌ％以下であり、前記フィルターにより濾過され前記フィルターと接触した単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制される炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（２）前記フィルターのエチレン−ビニルアルコール共重合体の被覆量が単位表面積あたり０．２ｍｇ／ｍ²以上２００ｍｇ／ｍ²以下である（１）記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（３）前記フィルター担体が織布または／および不織布である（１）または（２）記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（４）前記織布または／および不織布のモノフィラメントの平均繊維直径が０．５μｍ以上５０μｍ以下であり、且つ嵩密度が０．０５ｇ／ｃｍ³以上０．５ｇ／ｃｍ³以下である（３）記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（５）前記フィルター担体が粒子集合体である（１）または（２）記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（６）前記粒子の球相当直径が０．１ｍｍ以上５ｍｍ以下である（５）記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（７）白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、前記フィルターは、エチレン−ビニルアルコール共重合体不織布および／またはエチレン−ビニルアルコール共重合体粒子からなり、該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２０ｍｏｌ％以上７０ｍｏｌ％以下であり、前記フィルターにより濾過され前記フィルターと接触する単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制される炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（８）少なくとも入口と出口とを有する容器に、該容器内を入口側空間と出口側空間に隔てるように（１）乃至（７）の何れかに記載のフィルターを充填してなる、単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター装置。
（９）白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、前記フィルターは、表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体であり、該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２０ｍｏｌ％以上７０ｍｏｌ％以下であるフィルターに、単核球を含む白血球含有液を接触させることにより該単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得る方法。
（１０）前記フィルターが（１）乃至（７）の何れかに記載のフィルターである（９）記載の単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得る方法。
（１１）白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、前記フィルターは、フィルター担体の表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆されており、該エチレン−ビニルアルコール共重合体の被覆量が単位表面積あたり０．１ｍｇ／ｍ²以上１８０ｍｇ／ｍ²以下であり、かつ該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２５ｍｏｌ％以上４４ｍｏｌ％以下であり、前記フィルターにより濾過され前記フィルターと接触した単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制される
炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
（１２）白血球を含む液体を（１）〜（７）、（１１）の何れかに記載のフィルターで濾過し前記フィルターと接触した、炎症性サイトカイン産生が抑制された単核球を含む白血球含有液。

本発明の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材、フィルター装置、および方法を用いることにより、炎症性サイトカイン阻害剤を用いなくても、炎症性サイトカインの産生が抑制された白血球含有液を得ることができるので、安全で、副作用の少ない、抗サイトカイン療法の新たな方法が提供できる。
本発明の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材、フィルター装置、および方法を用いることにより、炎症性サイトカインに起因した疾患、または炎症性サイトカインにより増悪する疾患、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、クローン病、シェーグレン症候群、ベーチェット病、キャッスルマン病などの自己免疫疾患、細菌感染症、細菌感染に伴う敗血症などに対し、予防効果若しくは治療効果が期待される。

本発明について、以下具体的に説明する。
本発明で言う白血球の少なくとも一部を除去するフィルター担体とは、織布、不織布、綿状繊維集合体、粒子集合体、スポンジ状多孔体等の形態を持ち、これらのフィルター担体の持つ空間に白血球含有液を流したときに、白血球がこれらの素材表面に接触し、白血球の少なくとも一部がフィルター担体の表面や物理的な孔構造の一部に粘着、吸着などの機序で捕捉されるものであって、その表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体によって被覆処理されていないものをいう。フィルター担体の詳細については、後述する。

本発明で言うエチレン−ビニルアルコール共重合体とは、エチレンとビニルアルコールの共重合体であるが、一般的には酢酸ビニルモノマーとエチレンを共重合させて得られるエチレン−酢酸ビニル共重合体を鹸化して製造される。
エチレン−ビニルアルコール系共重合体は、ランダム、ブロック、グラフト等いずれのタイプの共重合体であっても良いが、該共重合体のエチレン含量は２０ｍｏｌ％以上７０ｍｏｌ％以下の範囲にある必要がある。疎水的な性質を持つエチレン含量が２０ｍｏｌ％未満では、フィルター担体に対する接着性が低くなる傾向にあり、フィルター担体とエチレン−ビニルアルコール共重合体被覆層の剥離が起こる危険性が高まる。又、７０ｍｏｌ％を越えると被覆層の親水性が失われる傾向にあり、非選択的な吸着が増加するなど好ましくない性質を示す。接着性と親水性のバランスから更に好ましいのは２５〜５０ｍｏｌ％であり、２９〜４４ｍｏｌ％が最も好ましい。

本発明で用いるエチレン−ビニルアルコール共重合体の重量平均分子量（Ｍｗ）の範囲としては１万以上３００万以下であることが好ましい。Ｍｗが１万未満の場合、滅菌処理、特に放射線滅菌処理を実施した際にポリマーの分子量が低下し、水に対する溶出量が増加するため好ましくない。またＭｗが３００万を超えると、コーティングする際の溶剤への溶解度が低下する、また重合の際、安定して製造できないなどの懸念があり好ましくない。より好ましくは２万以上２００万以下である。なお、Ｍｗは種々の公知の方法により求められるが、本発明においてはポリエチレンオキサイドを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（以下、「ＧＰＣ」と略す）による測定を採用している。

本発明のフィルター材は、白血球含有液を濾過し得る細孔を有し、白血球の少なくとも一部を除去するフィルター担体にエチレン−ビニルアルコール共重合体を被覆しているものである。また、本発明に係る炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得る方法で使用するフィルター材は、白血球の少なくとも一部を除去する性能を有するフィルター材の表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体であればどのようなフィルター材であっても良く、例えば、フィルター担体の表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆されたフィルター材の他、フィルター材そのものがエチレン−ビニルアルコール共重合体から成る不織布または粒子なども含まれる。

本発明のエチレン−ビニルアルコール共重合体をフィルター担体に被覆する方法は、フィルター担体の細孔を著しく閉塞させることなく、かつフィルター担体表面が著しく露出することなく均一に被覆できる方法であれば特に制限はなく各種の方法を用いることができる。例えば、エチレン−ビニルアルコール共重合体を溶解した溶液にフィルター担体を含浸させる方法、エチレン−ビニルアルコール共重合体を溶解した溶液をフィルター担体に吹き付ける方法、モノマーをフィルター担体表面にグラフト重合させる方法などが挙げられる。この中でもエチレン−ビニルアルコール共重合体を溶解した溶液にフィルター担体を含浸させる方法は、コーティング層を均一にでき、コストも低いことより好ましい方法である。即ち、フィルター担体を、水混和性有機溶剤単独又は、水混和性有機溶剤と水との混合溶剤に溶解したエチレン−ビニルアルコール共重合体溶液にフィルター担体を浸漬し、その後フィルター担体から余分な溶液を除去した後、乾燥する方法である。

エチレン−ビニルアルコール共重合体を溶解させる有機溶剤は水混和性有機溶剤であり、該溶剤の沸点以下の温度で水に対する溶解度が２０重量％以上を示し、かつヒルデブランドの溶解度パラメーターが９．５（ｃａｌ・ｃｍ^-3）^1/2以上の有機溶剤が好ましい。ここでヒルデブランドの溶解度パラメーターとは、Ｊ．Ｈ．Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ，Ｒ．Ｌ．Ｓｃｏｔｔ“Ｔｈｅ Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｎｏｎｅｌｅｃｔｒｏｙｔｅｓ，３ｒｄ Ｅｄ．”（Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記載されているδ値をいい、（１）式により算出できる。

σ ＝ （Ｅ／Ｖ） ^1/2 ・・・（１）

ここで、Ｅは凝集エネルギー（ｃａｌ ｍｏｌ^-1）であり、Ｖはモル体積（ｃｍ³ ｍｏｌ^-1）である。

好ましい有機溶剤の例としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、シクロヘキサノール等のアルコール類、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、ホルムアミド、エチレンクロルヒドリン等が挙げられる。これらの中でもn−プロパノール、エタノール、及びジメチルスルホキシドはエチレン−ビニルアルコール共重合体の溶解性も良く、低毒性であることから特に好ましい。

これらの有機溶剤は単独でも用いられるが、混和溶剤系でも用いることができ、特に水との混和溶剤系は好ましい。エチレン−ビニルアルコール共重合体は非極性で疎水性を示すエチレン部分と、極性で親水性のビニルアルコール部分とで構成されている。極性の強い溶剤系に溶解させ、例えば非極性で疎水性のフィルター担体に被覆した場合、非極性のエチレン部分がフィルター担体側に局在し、極性のビニルアルコール部分が表面側に局在しやすいと考えられる。この現象は被覆層とフィルター担体の接着性が向上し、かつ被覆層表面の親水性が向上することから好ましい現象である。上記の有機溶剤に水を加え混合溶剤系とすることは溶剤の極性をより強くすることになり、上記現象が促進され好ましい。加える水の割合はエチレン−ビニルアルコール共重合体の溶解性を阻止しない範囲内で大きい方が好ましく、エチレン−ビニルアルコール系共重合体のエチレン含量、溶液の温度等によりその割合は異なるが、例えば５〜６０重量％が好ましい範囲として挙げられる。

被覆に用いるエチレン−ビニルアルコール共重合体濃度は被覆に適した任意の濃度を選択できるが、例えば０．００５〜１０重量％程度の濃度が適している。溶液濃度が０．００５重量％未満であると表面に被覆されるポリマーが少なくなるため好ましくない。一方１０重量％以上の場合、溶液粘度が高くなり取り扱い性が低下するため好ましくない。上記の観点より、さらに好ましくは、溶液濃度は０．０２重量％以上５重量％未満である。

被覆に用いるエチレン−ビニルアルコール共重合体溶液の温度は特に限定されるものではないが、一般に高温の方がエチレン−ビニルアルコール共重合体の溶解性は良く、溶液の粘度も低下するため好ましく、室温から１００℃までの範囲が好ましい。

被覆処理はフィルター担体を一定の形状に切断してバッチ式に処理することもできるが、連続したフィルター担体を長手方向に走行させ連続的に処理することもでき、後者は生産性に優れた好ましい方法である。被覆処理は一回の処理で完結しても良いが、比較的低濃度で数回の処理を繰り返すこともできる。

被覆処理に用いるエチレン−ビニルアルコール共重合体溶液の乾燥方法は通常の乾燥方法、例えば真空乾燥、熱風乾燥等を使用することができ、連続したフィルター担体を走行状態で連続的に乾燥することもできる。乾燥温度は特に限定されるものではないが、支持体が熱により変形を受けない温度であれば良い。

また、被覆処理の前に、エチレン−ビニルアルコール共重合体とフィルター担体との接着性をより高めるため、フィルター担体の表面を酸、アルカリなどの適当な薬品で処理したり、プラズマを照射したりすることもできる。更に、エチレン−ビニルアルコール共重合体の被覆処理後に１００℃以上の熱を加える熱処理や、１００Ｇｙ以上のγ線、電子線などの放射線を照射する後加工を施し、フィルター担体とエチレン−ビニルアルコール共重合体との接着性を更に強化することもできる。

このようにして被覆したフィルター担体表面の被覆層の平均厚みは４０オングストローム以上１μｍ以下が好ましく、被覆量はフィルター担体の単位表面積あたり０．２ｍｇ／ｍ²以上２００ｍｇ／ｍ² 以下であることが好ましい。平均厚みが４０オングストローム未満、或いは被覆量が０．２ｍｇ／ｃｍ²未満では炎症性サイトカイン産生が抑制されなくなる傾向にあるので好ましくない。平均厚みが１μｍを超える、或いは被覆量が２００ｍｇ／ｍ² を超えるとフィルター担体の細孔が閉塞してしまう部分が生じたり、コストが高くなったりするため好ましくない。被覆層の平均厚みは４０〜８００オングストローム、被覆量は０．５ｍｇ〜１００ｍｇ／ｍ²であることがより好ましく、更に、被覆層の平均厚みは４０〜６００オングストローム、被覆量は０．７ｍｇ〜５０ｍｇ／ｍ²であることが更に好ましく、平均厚みは４０〜６００オングストローム、被覆量は１ｍｇ〜２０ｍｇ／ｍ²であることが最も望ましい。被覆層の平均厚みは、オージェ電子分光法（ＡＥＳ）、二次イオン質量分析法（ＳＩＭＳ）、電子プローブ微小部分析法（ＥＰＭＡ）、Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）、多重全反射赤外線分光計を用いる赤外線吸光光度法（ＡＴＲ−ＩＲ）などの表面分析方法によって測定することができる。

本発明の被覆量は次のように測定する。即ち、前述した方法で被覆された不織布から任意の円形状に切り抜いたフィルターの重量を電子天秤で秤量する。次いで秤量後のフィルター材を評価ポリマーの良溶媒約１００ｍＬ中に浸漬させ、６０〜７０℃の恒温槽中で１〜２時間振蕩する。浸漬処理後、取り出したフィルター材を６０〜７０℃の乾燥機中で２時間程度、恒量になるまで乾燥する。なお、この処理によりフィルター材に評価ポリマーが残っていないことをＮＭＲ測定等で確認することもできる。乾燥後のフィルター材を電子天秤で秤量することにより被覆に用いられたエチレン−ビニルアルコール共重合体量が算出できる。次いで、フィルター担体の表面積の測定を行う。単位面積あたりのフィルター担体の表面積はＢＥＴ法、Ｌａｎｇｍｕｒｉ法等公知の方法を用いて測定することができる。フィルター担体が繊維の場合は平均繊維径値及び繊維比重値等を用いて計算により求めることも可能である。これらの数値をもとに、（２）式に従い評価試料の被覆量を算出することができる。

被覆量（ｍｇ／ｍ²）＝（浸漬処理前フィルター材の重量（ｍｇ）−浸漬処理後乾燥済フィルター材の重量（ｍｇ））／〔（浸漬処理後乾燥済フィルター材の重量（ｇ））×（フィルター担体１ｇ当たりの全表面積（ｍ²／ｇ））〕・・・（２）

また、被覆処理されていない不織布について同様に被覆量の算出を行い、そこで得られた値を（１）の被覆量から差し引くことにより、より精密に測定を行うことが可能である。

本発明のフィルター担体とは、白血球含有液を濾過し得る細孔を有し、白血球の少なくとも一部を除去するものであれば特に限定はなく、何れの形態を有する物も含まれるが、以下に代表例を説明する。

不織布、織布、綿状繊維集合体などの繊維状媒体をフィルター担体とする場合、平均繊維直径は０．５μｍ以上５０μｍ以下が好ましく、より好ましくは０．５μｍ以上２０μｍ以下である。また、平均孔径は２μｍ以上２００μｍ以下が好ましく、より好ましくは２μｍ以上１００μｍ以下である。更に嵩密度は０．０５ｇ／ｃｍ³以上０．５ｇ／ｃｍ³以下であることが好ましく、より好ましくは０．０７ｇ／ｃｍ³以上０．２５ｇ／ｃｍ³以下である。平均繊維直径が０．５μｍ未満、平均孔径が２μｍ未満、嵩密度が０．５ｇ／ｃｍ³ を超えると血球の目詰まりや圧力損失の増大を引き起こし易くなる傾向があり、好ましくない。また、平均繊維直径が５０μｍを超え、平均孔径が２００μｍを超え、嵩密度が０．０５ｇ／ｃｍ³未満になると白血球を捕捉できなくなる傾向にあるため好ましくない。

なお、本発明における平均繊維直径とは、以下の方法に従って求められる値をいう。即ち、フィルター支持体を構成する繊維状媒体から実質的に均一と認められる部分をサンプリングし、走査電子顕微鏡などを用いて、写真に撮る。サンプリングに際しては、繊維体の有効濾過断面部分を、一辺が０．５ｃｍの正方形によって区分し、その中から６ケ所をランダムサンプリングする。ランダムサンプリングするには、例えば上記各部分に番地を指定した後、乱数表を使うなどの方法で、必要箇所の区分を選べば良い。またサンプリングした各区分について、３ケ所以上好ましくは５ケ所以上を拡大倍率２５００倍で写真に撮る。サンプリングした各区分について中央部分及びその近傍の箇所の写真を撮っていき、その写真に撮られた繊維の合計本数が１００本を超えるまで写真を撮る。ここで直径とは、繊維軸に対して直角方向の繊維の幅をいう。測定した全ての繊維の直径の和を、繊維の数で割った値を平均繊維直径とする。但し、複数の繊維が重なり合っており、他の繊維の陰になってその幅が測定できない場合、また複数の繊維が溶融するなどして、太い繊維になっている場合、更に著しく直径の異なる繊維が混在している場合、等の場合には、これらのデータは削除する。

また、本発明におけるフィルター担体の平均孔径とは、水銀ポロシメーター（島津製作所、ポアサイザ９３２０または同等の装置）で測定した値であり、水銀がフィルター担体の細孔に全く入っていない状態を水銀圧入量０％、フィルター担体の全ての細孔に入っている状態を水銀圧入量１００％とした時、水銀圧入量５０％にあたる点が本発明でいう平均孔径である。尚、水銀ポロシメーターでの測定は１〜２６５０ｐｓｉａの圧力範囲で測定する。

また、本発明のおける嵩密度とは、繊維重量（ｇ）を繊維のかたまりが占める体積（ｃｍ³）で割った値（ｇ／ｃｍ³）である。

連続孔を有するスポンジ状多孔体をフィルター担体とする場合には、２μｍ以上２００μｍ以下の平均孔径を有することが好ましく、２μｍ以上１００μｍ以下の平均孔径を有することが更に好ましい。平均孔径が２μｍ未満であると血球目詰まりや圧力損失の増大を引き起こし好ましくない。また、平均孔径が２００μｍを超えると白血球を捕捉できなくなる傾向にあるため好ましくない。

粒子集合体をフィルター担体とする場合には、粒子は０．１ｍｍ以上５ｍｍ以下の球相当直径を有することが好ましく、０．５ｍｍ以上３ｍｍ以下の球相当直径を有することが更に好ましい。ここで粒子の球相当直径とは、体積が同一の球を想定したときのその球の直径をいう。粒子の球相当直径が０．１ｍｍ未満であると白血球含有液の移送に高い圧力を要し、それにより溶血を引き起こす傾向にある。また、血栓の生成による目詰まりを引き起こす可能性が高くなるため好ましくない。一方、粒子の球相当直径が５ｍｍより大きいと単位体積あたりの表面積が減少するので処理効率が低下する傾向になるため好ましくない。粒子径は、ふるい法、遠心沈降法、レーザー回折散乱法、動的光散乱法、画像処理、細孔電気抵抗法等の方法によって測定することができる。例えば細孔電気抵抗法は以下のようにして測定する方法である。即ち、電解質溶液（電解質の溶けた水溶液または有機溶剤）中の小さな径の細孔（アパチャー）に一定の電流を流し、その系の電気抵抗を計測する。電解質溶液中に粒子を均一に懸濁させ、陰圧により粒子が細孔を通過するようにする。粒子が細孔を通過することによって排除された電解液の体積により変化する細孔の電気抵抗（インピーダンス）が電圧パルスの変化によって計測される。この電圧パルス高を計測処理して、粒子の体積分布ヒストグラムを得ることができる。

本発明のフィルター担体の材質としては、血球にダメージを与えにくいものであれば特に限定はなく各種のものを用いることができ、有機高分子、無機物、金属等が例として挙げられる。その中でも有機高分子は切断等の加工性に優れるため好ましい素材である。有機高分子としては、例えば、ポリウレタン、ポリアクリロニトリル、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリスチレン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、セルロース、セルロースアセテート、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリフッ化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ナイロン、ポリトリフルオロエチレン、ポリトリフルオロクロロビニル、フッ化ビニリデン−テトラフルオロエチレン共重合体、ポリ（メタ）アクリレート、ブタジエン−アクリロニトリルコポリマー、ポリエーテル−ポリアミドブロック共重合体等が挙げられるが、本発明のフィルター担体は上記例示に限定されるものではない。

また、本発明のエチレン−ビニルアルコール不織布、および／または粒子とは、エチレン−ビニルアルコール共重合体よりなる不織布および／または粒子のことで、フィルター材そのものがエチレン−ビニルアルコール共重合体からなるから被覆処理する必要がなく、そのままで炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材として好適に用いることができる。

上述した炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター材を、入口と出口とを有する適当な大きさの容器に充填することにより、炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター装置とすることができる。容器形状としては、入口と出口を有する容器であれば特に限定はないが、フィルター材の形状に応じた形状であることが好ましい。例えば、フィルター材が平板状の場合には、四角形、六角形などの多角形や、円形、楕円形などの曲線からなる扁平形状であればよい。より詳細には、容器は入口側容器と出口側容器から構成され、両者がフィルター材を直接あるいは支持体を介して挟み込むことによりフィルター内部を二室に分け、扁平状のフィルター装置を形成するような形状であれば好ましい。また、別の例として、フィルター材が円筒状の場合には、容器も同様に円筒状であることが好ましい。より詳細には、容器は、フィルター材を収容する筒状胴部と入口を有する入口側ヘッダーおよび出口を有する出口側ヘッダーから構成され、ポッティング加工により、容器内部が入口から導入された白血球含有液が円筒状のフィルター材の外周部から内周部（または内周部から外周部）に流れるように二室に分け、円筒状のフィルター装置を形成するような形状であれば好ましい。

前記容器の材質は、硬質性樹脂や可撓性樹脂の何れでも良く、硬質性樹脂の場合、素材はフェノール樹脂、アクリル樹脂、エポキシ樹脂、ホルムアルデヒド樹脂、尿素樹脂、ケイ素樹脂、ＡＢＳ樹脂、ポリアミド、ポリウレタン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスルホン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、スチレン−ブタジエン共重合体等が挙げられる。可撓性樹脂の場合、可撓性の合成樹脂製のシート状または円筒状成型物から形成されるのが好ましく、素材は軟質ポリ塩化ビニル、ポリウレタン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリエチレンやポリプロピレンのようなポリオレフィン、スチレン−ブタジエン−スチレン共重合体の水添物、スチレン−イソプレン−スチレン共重合体またはその水添物等の熱可塑性エラストマー、および熱可塑性エラストマーとポリオレフィン、エチレン−エチルアクリレート等の軟化剤との混合物等が好適な材料として挙げられる。

本発明のフィルター材または／およびフィルター装置は、照射滅菌、湿熱滅菌、薬剤滅菌、ガス滅菌、乾熱滅菌等公知の方法で滅菌できるが、プライミング操作が簡便に実施できる点より充填液でフィルター材を飽和含水率以上の湿潤状態に保持し、滅菌することが好ましい。更に好ましくはガンマ線、電子線等の放射線を照射する照射滅菌または高圧蒸気滅菌等の湿熱滅菌により良好に滅菌できる。充填液は、ポリマーの劣化を起こさない液ならば何れの液体も良好に用いられるが、水または生体にとって害の少ない水溶性物質の水溶液であることが望ましい。

生体にとって害の少ない水溶性物質とは、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム等の塩類、グリセリン、クエン酸ナトリウム、ゼラチン、カゼイン等の水溶性有機化合物の様に水に溶ける物質で、しかも生体にとって害の少ない物質であり、多量の場合には生体にとって有害な物質であってもプライミング操作程度の簡単な洗浄操作により、フィルター外に該物質を洗い流す事ができ、少量の残存であれば生体にとって害の少ない物質も含まれる。また、水に溶解させる事によって等張溶液を作り易い物質は特に好ましく用いられる。これらの物質は単独で用いても良く、混合して用いても良い。好ましい水溶性物質の例としては、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウムであり、最も好ましくは塩化ナトリウムである。飽和含水率以上の湿潤状態とは、フィルター担体が完全に水または生体にとって害の少ない水溶性物質の水溶液に浸漬された状態でも良いし、フィルター担体を前もって充分加湿し、担体自身の飽和含水量以上の湿潤状態にするだけでも良い。要は、少なくともフィルター担体がフィルター担体の飽和含水量と同等かそれよりも余計な水分にさらされていれば良いのであって、その程度は問わない。

好ましい水溶性物質の濃度としては、０重量％以上５．０重量％以下である。濃度が５．０重量％より大きくなると、プライミング操作によって水溶性物質を除去し難くなるため好ましくない。また、濃度が０．０１重量％以上のときポリマーの溶出をより抑制できることから、より好ましくは０．０１重量％以上４．０重量％以下、更に好ましくは０．１重量％以上３．０重量％以下である。

上述した炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター装置に、少なくとも単核球を含む白血球含有液を流し、炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得ることができる。

本発明でいう白血球含有液とは、例示すると、全血液、赤血球濃厚液、血小板濃厚液、血漿、或いはこれらを、血液を変性させない緩衝液で希釈した液体等が挙げられる。白血球含有液には、抗凝固剤を添加することができる。抗凝固剤の種類としては、ヘパリンナトリウム、ヘパリンカルシウム、ダルテパリンナトリウム等のヘパリン、あるいは、メシル酸ナファモスタットやメシル酸ガベキサート等の蛋白分解酵素阻害剤、及びクエン酸ナトリウム液、ＡＣＤ−Ａ、ＡＣＤ−Ｂ、ＣＰＤ、等のクエン酸系抗凝固剤等が好適に用いられる。

白血球含有液１Ｌに対する抗凝固剤の注入量としては、例えばヘパリンや低分子量ヘパリンの場合、１００単位以上２０００単位以下、より好ましくは３００単位以上１５００単位以下である。また、メシル酸ナファモスタットの場合、２ｍｇ以上４０ｍｇ以下、より好ましくは６ｍｇ以上３０ｍｇ以下である。また、ＡＣＤ−Ａ、ＡＣＤ−Ｂ液の場合、２０ｍＬ以上１６０ｍＬ以下、より好ましくは３０ｍＬ以上１２５ｍＬ以下の範囲で有効に使用できる。

本発明のフィルター装置に白血球含有液を流す方法としては、例えば、ポンプ等を用いたあらゆる公知の手段を用いることができる。ポンプは、構造としてはローラーポンプ、フィンガーポンプ等が有用に用いられるが、特に本発明では５ｍＬ／ｍｉｎ〜５００ｍＬ／ｍｉｎの流量範囲で精度よく送液できるものが好ましい。白血球含有液の流量範囲としては１０ｍＬ／ｍｉｎ以上２００ｍＬ／ｍｉｎ以下であることがより好ましい。流量が１０ｍＬ／ｍｉｎ未満の場合、フィルター装置内での血球の滞留が起こりやすくなるためあまり好ましくない。一方、２００ｍＬ／ｍｉｎより早い場合、高いずり応力が働くため白血球の活性化等の問題があるため好ましくない。以上の観点より、血液流量の更に好ましい範囲は１５ｍＬ／ｍｉｎ以上１５０ｍＬ／ｍｉｎ以下、最も好ましくは２０ｍＬ／ｍｉｎ以上１００ｍＬ／ｍｉｎ以下である。

本発明の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター装置は白血球含有液から白血球の少なくとも一部を除去することを特徴とする。除去される白血球としては単球、リンパ球等の単核球があげられるが特に限定されない。本発明のフィルター装置の白血球の除去能力については、単核球除去率が２０％〜９０％の範囲であることが望ましい。本発明でいう単核球除去率とは、フィルター装置入口に導入される白血球含有液の単核球濃度と、フィルター装置出口から導出される白血球含有液の単核球濃度より下式（３）により求められる。

単核球除去率（％）＝（１−出口側血液の単核球濃度／入口側血液の単核球濃度）×１００・・・（３）

単核球除去率が２０％未満の場合、炎症性サイトカイン産生細胞の除去量が十分でなく、炎症性サイトカイン産生能の抑制効果が小さくなるため好ましくない。単核球除去率が９０％を超えると、炎症性サイトカインを産生しない細胞まで除去してしまうため、細胞あたりの炎症性サイトカイン産生能の抑制効果が小さくなるため好ましくない。より好ましくは単核球除去率３０％〜８５％、更に好ましくは単核球除去率４０〜８０％である。

本発明の炎症性サイトカインとは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与するサイトカインのことをいい、具体的にはＴＮＦ−αやＩＬ−６、ＩＬ−１、ＩＬ−８などがあげられる。単核球の炎症性サイトカイン産生能は様々な方法によって測定することができるが、例えば以下のような方法がある。
Ａ）白血球含有液から例えばフィコール法により単核球を分離する。
Ｂ）フィトヘマグルチニンを添加して３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで１８〜２４時間培養する。
Ｃ）培養終了後遠心して上清を回収し、
Ｄ）上清中に含まれるＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を市販のＥＬＩＳＡキットを用いて測定する。

次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説明する。

[実施例１〜６、比較例１]
平均繊維直径が１．７μｍのポリエチレンテレフタレートからなる不織布（目付６６ｇ／ｍ²、嵩密度０．１７ｇ／ｃｍ³）をエチレン含量が２９ｍｏｌ％のエチレン−ビニルアルコール共重合体によって被覆した。被覆の方法は、エチレン−ビニルアルコール共重合体を０．００５重量％（実施例１）、０．０１重量％（実施例２）、０．０２５重量％（実施例３）、０．１重量％（実施例４）、０．５重量％（実施例５）、１．０重量％（実施例６）となるように５８％プロパノールに溶解し、この溶液に不織布を浸漬後、取り出した不織布をローラー間に通すことにより余分な溶液を除去し、４０℃〜５０℃の温風により乾燥させることにより行った。

被覆量を測定するために、被覆された不織布から任意に直径２５ｍｍの円形状に切り抜いたフィルター材の重量を電子天秤で秤量した。次いで秤量後のフィルター材を、１ｍｇに対し１ｍｌの割合で５８％ｎ−プロパノール中に浸漬させ、６０〜７０℃の恒温槽中で２時間振蕩した。浸漬処理後、取り出したフィルターを６０〜７０℃の乾燥機中で２時間乾燥した。乾燥後のフィルターを電子天秤で秤量することにより被覆に用いられたエチレン−ビニルアルコール共重合体量を算出した。次いで、フィルター担体の表面積を平均繊維径値及び繊維比重値を用いて計算により求めた。これらの数値をもとに、（２）式に従い評価試料の被覆量を算出した。被覆されていない不織布についても同様に被覆量の算出を行い、得られた値を前記評価試料の被覆量の値から差し引くことにより、最終的な被覆量を算出した。

被覆後の不織布を、直径６．８ｍｍの大きさに裁断後、容量２００ｍＬの容器に不織布１５ｇ、充填液として生理食塩液を充填した状態でガンマ線滅菌（照射線量２５ｋＧｙ）を実施した。滅菌後の不織布１枚を入口と出口を有する容量１ｍＬのポリエチレン製カラムに充填し、実施例１〜６のフィルター装置を作製した。また、エチレン−ビニルアルコール共重合体を被覆しない不織布を充填したフィルター装置（比較例１）もあわせて作製した。

健常人より採取した血液からフィコール法により末梢血単核球を分離した。この単核球をＲＰＭＩ１６４０培地（インビトロジェン社製）に１．２×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍｌで分散させ、５．５ｍｌをシリンジポンプ（テルモ社製）を用いて、上記の方法で作製したフィルター装置に通過させた。通過後の細胞を回収し、１．０×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製後、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）（シグマ社製）を１０μｇ／ｍｌ添加して３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで１８時間培養した。培養終了後遠心して上清を回収した。回収した培養上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて測定した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６の濃度は、比較例１のフィルター装置を通過させた末梢血単核球のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生量を１００％として、実施例１〜６のフィルター装置通過後の末梢血単核球由来のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生量を相対値として表示した。本発明のエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆した不織布を充填したフィルター装置を通過させたヒト単核球のＰＨＡ刺激によるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生は著しく抑制されていた（表１参照）。

[実施例７〜１１、比較例２]
平均繊維直径が２．５μｍのポリエチレンテレフタレートからなる不織布（目付９０ｇ／ｍ²、嵩密度０．２４ｇ／ｃｍ³）をエチレン含量が２５％（実施例７）、２９％（実施例８）、３２％（実施例９）、３８％（実施例１０）、４４％（実施例１１）のエチレン−ビニルアルコール共重合体によって被覆した。被覆の方法は、各エチレン−ビニルアルコール共重合体を０．５重量％となるように５８％プロパノールに溶解し、この溶液に不織布を浸漬後、取り出した不織布をローラー間に通すことにより余分な溶液を除去し、４０℃〜５０℃の温風により乾燥させることにより行った。被覆後の不織布を用いて、実施例１〜６と同様な方法により、被覆量測定、フィルター装置の作製（実施例７〜１１）を行った。また、エチレン−ビニルアルコール共重合体を被覆しない不織布を充填したフィルター装置（比較例２）もあわせて作製した。

上記で作製したフィルター装置を用いて、実施例１〜６と同様な方法によりＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を測定した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６の濃度は、比較例２のフィルター装置を通過させた末梢血単核球のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生量を１００％として、実施例７〜１１のフィルター装置通過後の末梢血単核球由来のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生量を相対値として表示した。本発明のエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆した不織布を充填したフィルター装置を通過させたヒト単核球のＰＨＡ刺激によるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生は著しく抑制されていた（表２参照）。

[実施例１２、比較例３]
平均繊維直径が１０μｍのポリエチレンテレフタレートからなる不織布（目付１００ｇ／ｍ²、嵩密度０．２１ｇ／ｃｍ³）をエチレン含量が２９％のエチレン−ビニルアルコール共重合体によって被覆した。被覆の方法は、エチレン−ビニルアルコール共重合体を０．３重量％となるように５８％プロパノールに溶解し、この溶液に不織布を浸漬後、取り出した不織布をローラー間に通すことにより余分な溶液を除去し、４０℃〜５０℃の温風により乾燥させることにより行った。

被覆後の不織布を、直径６．８ｍｍの大きさに裁断後、容量２００ｍＬの容器に不織布１５ｇ、充填液として生理食塩液を充填した状態でガンマ線滅菌（照射線量２５ｋＧｙ）を実施した。滅菌後の不織布１枚を入口と出口を有する容量１ｍＬのポリエチレン製カラムに充填し、実施例１２のフィルター装置を作製した。また、エチレン−ビニルアルコール共重合体を被覆しない不織布を充填したフィルター装置（比較例３）もあわせて作製した。

上記で作製したフィルター装置を用いて、実施例１〜６と同様な方法によりＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を測定した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６の濃度は、比較例３のフィルター装置を通過させた末梢血単核球のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生量を１００％として、実施例１２のフィルター装置通過後の末梢血単核球由来のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生量を相対値として表示した。本発明のエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆した不織布を充填したフィルター装置を通過させたヒト単核球のＰＨＡ刺激によるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生は著しく抑制されていた（表３参照）。

[実施例１３、比較例４]
実施例１２と同様な方法により、平均繊維直径が１０μｍのポリエチレンテレフタレートからなる不織布（目付１００ｇ／ｍ²、嵩密度０．２１ｇ／ｃｍ³）をエチレン含量が２９％のエチレン−ビニルアルコール共重合体によって被覆した。被覆後の不織布を、直径６．８ｍｍの大きさに裁断後、容量２００ｍＬの容器に不織布１５ｇ、充填液として生理食塩液を充填した状態でガンマ線滅菌（照射線量２５ｋＧｙ）を実施した。滅菌後の不織布１０枚を入口と出口を有する容量１ｍＬのポリエチレン製カラムに充填し、実施例１３のフィルター装置を作製した。また、エチレン−ビニルアルコール共重合体を被覆しない不織布を充填したフィルター装置（比較例４）もあわせて作製した。

健常人より採取した血液５．５ｍｌをシリンジポンプ（テルモ社製）を用いて、上記の方法で作製したカラムに通過させた。通過後の細胞を回収し、フィコール法により末梢血単核球を分離した。この単核球をＲＰＭＩ１６４０培地（インビトロジェン社製）で１．０×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製後、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）（シグマ社製）を１０μｇ／ｍｌ添加して３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで１８時間培養した。培養終了後遠心して上清を回収した。回収した培養上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を実施例１〜６と同様な方法により測定した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６の濃度は、比較例４のＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を１００％として、実施例１３のＴＮＦ−α、ＩＬ−６濃度を相対値として表示した。本発明のエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆した不織布を充填したフィルター装置を通過させたヒト単核球は、ＰＨＡ刺激によるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生が抑制されていた（表４参照）。

[実施例１４、比較例５]
球相当直径が２ｍｍのセルロースジアセテート粒子を、エチレン含量が４４％のエチレン−ビニルアルコール共重合体によって被覆した（実施例１４）。被覆の方法は、エチレン−ビニルアルコール共重合体を０．５重量％となるように５８％プロパノールに溶解し、この溶液に粒子を浸漬後、取り出した粒子をメッシュ上で静置して余分な溶液を除去し、温風により乾燥させることにより行った。必要により、上記被覆操作を数回繰り返した。
被覆後の粒子を、直径６．８ｍｍの入口と出口を有する容量１ｍＬのポリエチレン製カラムに充填し、充填液として生理食塩液を充填して実施例１４のフィルター装置を作製した。また、エチレン−ビニルアルコール共重合体を被覆しない粒子を充填した比較例５のフィルター装置もあわせて作製した。

上記で作製したフィルター装置を用いて、実施例１〜６と同様な方法によりＩＬ−６濃度を測定した。ＩＬ−６の濃度は、比較例５のフィルター装置を通過させた末梢血単核球のＩＬ−６産生量を１００％として、実施例１４のフィルター装置通過後の末梢血単核球由来のＩＬ−６産生量を相対値として表示した。本発明のエチレン−ビニルアルコール共重合体で被覆した不織布を充填したフィルター装置を通過させたヒト単核球のＰＨＡ刺激によるＩＬ−６の産生は抑制されていた（表５参照）。ＴＮＦ−αについても同様な方法で測定することができる。

本発明の炎症性サイトカイン産生が抑制された血液を得るためのフィルター材、フィルター装置および方法は、医療の現場で、抗体を用いない抗サイトカイン療法に応用可能であり、また輸血用血液の炎症性サイトカイン産生抑制にも有用である。

Claims (9)

1. 白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、
   前記フィルターは、フィルター担体の表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体のみで被覆されており、該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２０ｍｏｌ％以上７０ｍｏｌ％以下であり、
   前記フィルターにより濾過され前記フィルターと接触した単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制される炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
2. 前記フィルターのエチレン−ビニルアルコール共重合体の被覆量が単位表面積あたり０．２ｍｇ／ｍ²以上２００ｍｇ／ｍ²以下である請求項１記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
3. 前記フィルター担体が織布または／および不織布である請求項１または２記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
4. 前記織布または／および不織布のモノフィラメントの平均繊維直径が０．５μｍ以上５０μｍ以下であり、且つ嵩密度が０．０５ｇ／ｃｍ³以上０．５ｇ／ｃｍ³以下である請求項３記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
5. 前記フィルター担体が粒子集合体である請求項１または２記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
6. 前記粒子の球相当直径が０．１ｍｍ以上５ｍｍ以下である請求項５記載の炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
7. 白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、
   前記フィルターは、エチレン−ビニルアルコール共重合体のみの不織布および／またはエチレン−ビニルアルコール共重合体のみの粒子からなり、該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２０ｍｏｌ％以上７０ｍｏｌ％以下であり、
   前記フィルターにより濾過され前記フィルターと接触する単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制される炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。
8. 少なくとも入口と出口とを有する容器に、該容器内を入口側空間と出口側空間に隔てるように請求項１乃至７の何れかに記載のフィルターを充填してなる、単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制された白血球含有液を得るためのフィルター装置。
9. 白血球の少なくとも一部を除去するフィルターであって、
   前記フィルターは、フィルター担体の表面がエチレン−ビニルアルコール共重合体のみで被覆されており、該エチレン−ビニルアルコール共重合体の被覆量が単位表面積あたり０．１ｍｇ／ｍ²以上１８０ｍｇ／ｍ²以下であり、かつ該エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン含量が２５ｍｏｌ％以上４４ｍｏｌ％以下であり、前記フィルターにより濾過され前記フィルターと接触した単核球の炎症性サイトカイン産生が抑制される炎症性サイトカイン産生抑制フィルター。