JP5248148B2 - 抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤、及び抗バンコマイシン耐性腸球菌剤 - Google Patents
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Description
以下、本発明の抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤を具体化した第1の実施形態を詳細に説明する。
抽出操作としては、抽出溶媒中に上記原料を所定時間浸漬させる。こうした抽出操作においては、抽出効率を高めるべく、必要に応じて攪拌操作、加温等を行ってもよい。また、原料から抽出される夾雑物を削減すべく、抽出操作に先だって、別途水抽出操作又は熱水抽出操作を行ってもよい。メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に対して有効に抗菌作用を発揮する成分は、オオバギに含まれるニムフェオール類である。ニムフェオール類は、水のみに対して不溶の成分であるため、オオバギを例えば熱湯で煮沸することで、ニムフェオール類以外の不必要な侠雑物を効率的に除去することができる。
(1)抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤は、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有している。そして本研究者らは、こうしたオオバギ抽出物に含まれるニムフェオール類がMRSAに対して抗菌活性を有することを見出している。こうした抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤は、オオバギ抽出物の新規な用途を提供するものであり、MRSAの過剰な増殖を要因とする感染を予防することができる。
(第2の実施形態)
本発明の抗バンコマイシン耐性腸球菌剤を具体化した第2の実施形態について、上記第1の実施形態との相違点を中心に説明する。
(3)抗バンコマイシン耐性腸球菌剤は、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有している。そして本研究者らは、こうしたオオバギ抽出物に含まれるニムフェオール類がVREに対して抗菌活性を有することを見出している。こうした抗バンコマイシン耐性腸球菌剤は、オオバギ抽出物の新規な用途を提供するものであり、VREの過剰な増殖を要因とする感染を予防することができる。
・前記抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤、又は、抗バンコマイシン耐性腸球菌剤は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cから選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有した構成としてもよい。すなわち、MRSA又はVREに対して抗菌活性を有する有効成分は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cから選ばれる少なくとも一種であるため、その有効成分は、オオバギ抽出物を由来とする以外に、例えば化学合成により得られるものであってもよい。
・ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cを有効成分として含有する抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤。
・ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cを有効成分として含有する抗バンコマイシン耐性腸球菌剤。
(実施例1)
<オオバギ抽出物の調製1>
沖縄県で採集して冷凍したオオバギの生葉を解凍した後に、はさみでその生葉を細かくカットした。カットした生葉30gと、溶媒100mlとをチューブ内に入れ、室温で2週間浸漬させて溶媒抽出を行った後に、ろ過することにより、ろ液としてオオバギ抽出液を採取した。なお、前記溶媒抽出には、エタノールと水とを体積比率でエタノール:水=90:10とした混合溶媒を使用した。次に、オオバギ抽出液を凍結乾燥することにより、オオバギ抽出液に含まれる固形分の粉末であるオオバギ抽出物を調製した。このオオバギ抽出物中に含まれるニムフェオールの濃度を、HPLC条件で分析して得られたクロマトグラムから算出した結果、50質量%であった。なお、このニムフェオールの濃度は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B、及びニムフェオール−Cを合計した濃度を示している。以下においても、ニムフェオールの量は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B、及びニムフェオール−Cの合計量を示している。
システム: PDA−HPLCシステム(島津製作所)、LC10ADvpシリーズ、UV;SPD−10Avp、PDA;SPD−M10Avp
カラム : Luna C18 (2.0×250mm)(島津GLC)
溶媒 : A:水(5%酢酸)、B:アセトニトリル(5%酢酸)
溶出条件: 0−20min
(グラジエント溶出;A:B=80:20→A:B=30:70)
20−50min
(グラジエント溶出;A:B=30:70→A:B=0:100)
50−60min(A:B=0:100)
60−75min(A:B=80:20)
流速 : 0.2ml/min
PDA検出:UV190−370nm
UV検出: UV287nm
注入量 : 20μl
温度 : 40℃
この50質量%のサンプルのクロマトグラムを図1に示す。
MRSAの菌株(Methicillin-resistant Stapylococcus aureus ATCC 33591株)をスタフィロコッカスNo.110寒天平板培地(株式会社日本生物材料センター製)に白金耳にて接種し、37℃で48時間培養した。増殖したコロニーを白金耳で採取し、生理食塩水1mlに溶解して菌液を調整した。調整した菌液を滅菌PBS及びミューラー・ヒントン液体培地(株式会社日本生物材料センター製)にて希釈し、1×104、1×106、1×108cfu/ml接種菌液を得た。
VREの菌株(Enterococcus faecium NCTC 12204株)を増殖用培地としてミューラー・ヒントン・ブロス培地(Difco社製)に接種し、37℃で18〜20時間培養後、菌数が約1×106cfu/mlになるように増殖用培地にて希釈することにより接種用菌液を得た。
<オオバギ抽出物の調製2>
カットした生葉30gをまず水(95℃)で30分浸漬し、これを濾過した。濾過した後の残った葉に100%エタノールを添加し、3日間浸漬させて溶媒抽出を行った。この抽出液をろ過してオオバギ抽出液を採取した後、そのオオバギ抽出液を凍結乾燥することにより、オオバギ抽出液に含まれる固形分の粉末であるオオバギ抽出物を調製した。
この40質量%のサンプルのクロマトグラムを図2に示す。
実施例1と同様に抗菌活性試験を実施した結果、実施例2で調製したオオバギ抽出物においても同様の抗菌活性を示した。
Claims (2)
- 少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤。
- 少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗バンコマイシン耐性腸球菌剤。
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