JP4268905B2 - フラバノン化合物の製造方法 - Google Patents
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Description
本発明は、フラバノン化合物の製造方法に関するものである。より詳しくは、プロポリンＡ（propolin A）、ニムフェオール（nymphaeol）−Ａ及びＢ並びにイソニムフェオール−Ｂ（isonymphaeol-B）の製造方法に関するものである。
従来より、非特許文献１及び２には、プロポリス又はオオバギを原料として、フラバノン化合物の一種であるプロポリンＡやニムフェオール−Ｃが得られていることが開示されている。
C.N,Chen, C.L.Wu, H.S.Shy, J.K.Lin、台湾産プロポリス由来の細胞毒性を有するプレニルフラバノン類（Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis）、J.Nat.Prod., 66, 503-506, 2003. M.H.Tseng, C.H.Chou, Y.M.Chen and Y.H.Kuo、マハング落葉由来のアレロパシー作用を有するプレニルフラバノン類（Allelopathic prenylflavanones from the fallen leaves of Macaranga tanarius）、J.Nat.Prod., 64, 827-828, 2001.
C.N,Chen, C.L.Wu, H.S.Shy, J.K.Lin、台湾産プロポリス由来の細胞毒性を有するプレニルフラバノン類（Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis）、J.Nat.Prod., 66, 503-506, 2003. M.H.Tseng, C.H.Chou, Y.M.Chen and Y.H.Kuo、マハング落葉由来のアレロパシー作用を有するプレニルフラバノン類（Allelopathic prenylflavanones from the fallen leaves of Macaranga tanarius）、J.Nat.Prod., 64, 827-828, 2001.
この発明は、本発明者らによる鋭意研究の結果、オオバギが従来報告されているフラバノン化合物以外のフラバノン化合物を含有していることを見出したことによりなされたものである。その目的とするところは、フラバノン化合物の製造が容易なフラバノン化合物の製造方法を提供することにある。
前記の目的を達成するために、請求項１に記載のフラバノン化合物の製造方法は、下記化１、化２、化３又は化４に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギを原料として前記フラバノン化合物を精製することを要旨とする。
請求項３に記載の発明のフラバノン化合物の製造方法は、請求項２に記載の発明において、前記分離工程は、疎水性担体を用いた逆相クロマトグラフィーによりエタノール抽出物からフラバノン化合物を分離する工程であることを要旨とする。
本発明のフラバノン化合物の製造方法によれば、フラバノン化合物の製造が容易である。
実施形態の第１のフラバノン化合物は、下記化５に示される構造を有するプロポリンＡ（5,7,3',4'-tetrahydroxy-2'-(7''-hydroxy-3'',7''-dimethyl-oct-2''-enyl)-flavanone）である。
実施形態の第２のフラバノン化合物は、下記化６に示される構造を有するニムフェオール−Ｂ（5,7,3',4'-tetrahydroxy-2'-geranylflavanone）である。
実施形態の第３のフラバノン化合物は、下記化７に示される構造を有するイソニムフェオール−Ｂ（5,7,3',4'-tetrahydroxy-5'-geranylflavanone）である。
実施形態の第４のフラバノン化合物は、下記化８に示される構造を有するニムフェオール−Ａ（5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-geranylflavanone）である。
これら第１から第４のフラバノン化合物は高い抗酸化作用、抗菌作用及び抗腫瘍作用を有しており、飲食品や医薬品を始めとする様々な用途に利用することができる。さらに、各フラバノン化合物は、エリオディクティオールやナリンゲニンと同様な用途に利用される他、エリオディクティオールやナリンゲニンよりも親油性が高いことを利用した様々な用途に利用される。
第１から第４のフラバノン化合物はいずれもオオバギの植物個体内に含まれている。このため、第１から第４のフラバノン化合物は、オオバギを原料としてフラバノン化合物を精製することにより得られる。即ち、第１から第４のフラバノン化合物はオオバギを原料とし、該原料からフラバノン化合物を含む抽出物を抽出する抽出工程を行った後、この抽出物からフラバノン化合物を分離する分離工程を行うことにより得られる。オオバギはマカランガ タナリウス（Macaranga tanarius）とも呼ばれ、トウダイグサ科オオバギ属に属する常緑広葉樹（雌雄異株）である。オオバギは沖縄、台湾、中国南部、マレー半島、フィリピン、マレーシア、インドネシア、タイ等の東南アジア、オーストラリア北部等に生育している。原料は、オオバギの器官やその構成成分から構成されている。原料は、単独の器官又は構成成分から構成されてもよいし二種以上の器官や構成成分から構成されてもよいが、各フラバノン化合物の含有量が高いために、葉、茎、幹又は実を含むのが好ましい。
さらに、原料は、第１のフラバノン化合物を製造するときにはその含有量が特に高いために葉柄又は茎の先端部から構成されるのが好ましく、第２又は第４のフラバノン化合物を製造するときには葉身、葉柄又は茎の先端部から構成されるのが好ましい。さらに、原料は、第３のフラバノン化合物を製造するときには葉身から構成されるのが好ましい。茎の先端部は茎の成長点及び葉芽を含んでおり、葉身に比べて柔らかい。原料の形態は、採取された状態、採取された後に粉砕、破砕又はすり潰された状態等が挙げられるが、抽出物の抽出効率が高いために、採取された後にすり潰された状態が好ましい。
抽出工程は、抽出物の抽出が容易なために、エタノール抽出により行われるのが好ましい。エタノール抽出では、原料からエタノールに対する溶解性を示すものがエタノール抽出物として抽出される。エタノール抽出では、原料からエタノール抽出物をエタノール中に抽出した後、原料とエタノールとを分離する固液分離が行われる。この固液分離により、エタノール抽出物はエタノールに溶解された状態、即ちエタノール抽出液として得られる。固液分離は膜分離や遠心分離等により行われるのが好ましい。分離工程は、エタノール抽出物からのフラバノン化合物の分離が容易なために、疎水性担体を用いた逆相クロマトグラフィーにより行われるのが好ましい。
従って、実施形態の第１から第４のフラバノン化合物の製造方法は、それらを含有し、かつプロポリスに比べて調達が容易なオオバギを原料としているために、プロポリスを用いたときに比べて原料を容易に調達することができる。さらに、オオバギは、起源植物の種類等の変化に伴いフラバノン化合物の含有量が大きく変化するプロポリスに比べて、原料中のフラバノン化合物の含有量を容易に安定させることができる。このため、第１から第４のフラバノン化合物の製造方法は、フラバノン化合物の製造が容易である。
次に、実施例を挙げて前記実施形態をさらに具体的に説明する。
＜フラバノン化合物の単離＞
沖縄産プロポリス原体５０ｇにエタノール５００ｍｌを加え、数分間超音波処理を行い一晩室温（２５℃）で撹拌した後、ろ過を行って残留物を取除いた。ここで、前記沖縄産プロポリス原体としては、沖縄県那覇市を産地とするものを用いた。次に、得られたエタノール抽出液を減圧濃縮することにより、沖縄産プロポリス原体のエタノール抽出物（以下、ＰＥＥＰという。）３９．７３ｇを得た。続いて、前記ＰＥＥＰを以下の条件のカラムクロマトグラフィーにて（１）〜（１１）の画分に分画した。
＜フラバノン化合物の単離＞
沖縄産プロポリス原体５０ｇにエタノール５００ｍｌを加え、数分間超音波処理を行い一晩室温（２５℃）で撹拌した後、ろ過を行って残留物を取除いた。ここで、前記沖縄産プロポリス原体としては、沖縄県那覇市を産地とするものを用いた。次に、得られたエタノール抽出液を減圧濃縮することにより、沖縄産プロポリス原体のエタノール抽出物（以下、ＰＥＥＰという。）３９．７３ｇを得た。続いて、前記ＰＥＥＰを以下の条件のカラムクロマトグラフィーにて（１）〜（１１）の画分に分画した。
カラム管：ガラスカラム ５．０×４５ｃｍ
充填材：シリカゲル 約５９０ｃｍ3
溶出溶媒： （１） ヘキサン：酢酸エチル＝90：10（ 350ml）
（２） ヘキサン：酢酸エチル＝80：20（ 220ml）
（３） ヘキサン：酢酸エチル＝70：30（ 250ml）
（４） ヘキサン：酢酸エチル＝60：40（1000ml）
（５） ヘキサン：酢酸エチル＝50：50（ 200ml）
（６） ヘキサン：酢酸エチル＝40：60（ 100ml）
（７） ヘキサン：酢酸エチル＝30：70（ 100ml）
（８） ヘキサン：酢酸エチル＝20：80（ 100ml）
（９） ヘキサン：酢酸エチル＝10：90（ 100ml）
（10） 酢酸エチル（200ml）
（11） メタノール（700ml）
次に、各画分を下記ＨＰＬＣ条件１で分析したところ、（４）及び（６）〜（９）の画分に合計９つの主要成分が含まれていることが確認された。
充填材：シリカゲル 約５９０ｃｍ3
溶出溶媒： （１） ヘキサン：酢酸エチル＝90：10（ 350ml）
（２） ヘキサン：酢酸エチル＝80：20（ 220ml）
（３） ヘキサン：酢酸エチル＝70：30（ 250ml）
（４） ヘキサン：酢酸エチル＝60：40（1000ml）
（５） ヘキサン：酢酸エチル＝50：50（ 200ml）
（６） ヘキサン：酢酸エチル＝40：60（ 100ml）
（７） ヘキサン：酢酸エチル＝30：70（ 100ml）
（８） ヘキサン：酢酸エチル＝20：80（ 100ml）
（９） ヘキサン：酢酸エチル＝10：90（ 100ml）
（10） 酢酸エチル（200ml）
（11） メタノール（700ml）
次に、各画分を下記ＨＰＬＣ条件１で分析したところ、（４）及び（６）〜（９）の画分に合計９つの主要成分が含まれていることが確認された。
ＨＰＬＣ条件１
カラム ： Shiseido Capcell Pak ODS UG-120 (4.6×150mm)
溶媒 ： Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件： 0-60min（グラジエント溶出；A:B＝80:20 → A:B＝20:80）
流速 ： １ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
次に、（６）〜（９）の各画分を用いて下記ＨＰＬＣ条件２にて分取を行い、化合物１、２、３及び４を単離した。さらに、化合物１及び２については下記ＨＰＬＣ条件３にて精製を行い、化合物３及び４については下記ＨＰＬＣ条件４にて精製を行った。
カラム ： Shiseido Capcell Pak ODS UG-120 (4.6×150mm)
溶媒 ： Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件： 0-60min（グラジエント溶出；A:B＝80:20 → A:B＝20:80）
流速 ： １ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
次に、（６）〜（９）の各画分を用いて下記ＨＰＬＣ条件２にて分取を行い、化合物１、２、３及び４を単離した。さらに、化合物１及び２については下記ＨＰＬＣ条件３にて精製を行い、化合物３及び４については下記ＨＰＬＣ条件４にて精製を行った。
ＨＰＬＣ条件２
カラム： YMC-Pack R&D ODS (20×250mm)
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝45：55
流速 ： ９ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
ＨＰＬＣ条件３（ＨＰＬＣ条件２と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝50：50
流速 ： ８ml/min
ＨＰＬＣ条件４（ＨＰＬＣ条件２と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝40：60
また、画分（４）を用いて下記ＨＰＬＣ条件５にて分取を行い、化合物５、６、７、８及び９を単離した。さらに、化合物５及び６については下記ＨＰＬＣ条件６にて精製を行い、化合物７及び８については下記ＨＰＬＣ条件７にて精製を行い、化合物９については下記ＨＰＬＣ条件８にて精製を行った。
カラム： YMC-Pack R&D ODS (20×250mm)
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝45：55
流速 ： ９ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
ＨＰＬＣ条件３（ＨＰＬＣ条件２と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝50：50
流速 ： ８ml/min
ＨＰＬＣ条件４（ＨＰＬＣ条件２と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝40：60
また、画分（４）を用いて下記ＨＰＬＣ条件５にて分取を行い、化合物５、６、７、８及び９を単離した。さらに、化合物５及び６については下記ＨＰＬＣ条件６にて精製を行い、化合物７及び８については下記ＨＰＬＣ条件７にて精製を行い、化合物９については下記ＨＰＬＣ条件８にて精製を行った。
ＨＰＬＣ条件５
カラム： YMC-Pack R&D ODS (20×250mm)
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝40：60
流速 ： ９ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
ＨＰＬＣ条件６（ＨＰＬＣ条件５と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝35：65
ＨＰＬＣ条件７（ＨＰＬＣ条件５と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝35：65
流速 ： ８ml/min
ＨＰＬＣ条件８（ＨＰＬＣ条件５と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝20：80
＜各化合物の同定＞
前記化合物１〜９のそれぞれについて、1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＭＳ、ＩＲ、ＵＶスペクトル等を測定することにより構造解析を行った。その結果、化合物１はプロポリンＡであり、化合物２は5,7,3',4'-tetrahydroxy-5'-(7''-hydroxy-3'',7''-dimethyl-oct-2''-enyl)-flavanoneであり、化合物３は5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-(7''-hydroxy-3'',7''-dimethyl-oct-2''-enyl)-flavanoneであることが判明した。さらに、化合物４は5,7,4'-trihydroxy-3'-(7''-hydroxy-3'',7''-dimetyl-oct-2''-enyl)-flavanoneであり、化合物５はニムフェオール−Ｂであり、化合物６はイソニムフェオール−Ｂであることが判明した。加えて、化合物７はニムフェオール−Ａであり、化合物８は5,7,4'-trihydroxy-3'-geranylflavanoneであり、化合物９はニムフェオール−Ｃ（5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-(3''',3'''-dimethylallyl)-2'-geranylflavanone）であることが判明した。
カラム： YMC-Pack R&D ODS (20×250mm)
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝40：60
流速 ： ９ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
ＨＰＬＣ条件６（ＨＰＬＣ条件５と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝35：65
ＨＰＬＣ条件７（ＨＰＬＣ条件５と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝35：65
流速 ： ８ml/min
ＨＰＬＣ条件８（ＨＰＬＣ条件５と異なる条件のみを示す。）
溶媒 ： 水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝20：80
＜各化合物の同定＞
前記化合物１〜９のそれぞれについて、1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＭＳ、ＩＲ、ＵＶスペクトル等を測定することにより構造解析を行った。その結果、化合物１はプロポリンＡであり、化合物２は5,7,3',4'-tetrahydroxy-5'-(7''-hydroxy-3'',7''-dimethyl-oct-2''-enyl)-flavanoneであり、化合物３は5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-(7''-hydroxy-3'',7''-dimethyl-oct-2''-enyl)-flavanoneであることが判明した。さらに、化合物４は5,7,4'-trihydroxy-3'-(7''-hydroxy-3'',7''-dimetyl-oct-2''-enyl)-flavanoneであり、化合物５はニムフェオール−Ｂであり、化合物６はイソニムフェオール−Ｂであることが判明した。加えて、化合物７はニムフェオール−Ａであり、化合物８は5,7,4'-trihydroxy-3'-geranylflavanoneであり、化合物９はニムフェオール−Ｃ（5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-(3''',3'''-dimethylallyl)-2'-geranylflavanone）であることが判明した。
＜植物の成分分析＞
沖縄県那覇市首里金城町内において４月にオオバギの葉、茎、幹及び実を採取した後、それらを一つにまとめて細かく刻むとともに乳鉢ですり潰して原料を得た。次いで、原料０．１ｇに対して１ｍｌの割合でエタノールを加えた後、約１週間室温暗所で放置してエタノール抽出を行いエタノール抽出液を得た。続いて、エタノール抽出液を乾固してオオバギのエタノール抽出物（以下、ＯＥＥＰという。）を得た後、エタノールを加えて試料溶液（ＯＥＥＰの濃度：２０ｍｇ／ｍｌ）を調製した。次に、試料溶液をフィルターろ過（フィルターの孔径：０．４５μｍ）して残留物を取除いた後、下記Photo Diode Array-HPLC（ＰＤＡ−ＨＰＬＣ）条件で分析した。一方、前記オオバギの代わりとしてシロバナセンダンソウ（Bidens pilosa L. var. minor Scheff.）、シークワーサー（Citrus depressa Hay）若しくは前記沖縄産プロポリス原体を用い前記と同様にして分析を行った。各ＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。
沖縄県那覇市首里金城町内において４月にオオバギの葉、茎、幹及び実を採取した後、それらを一つにまとめて細かく刻むとともに乳鉢ですり潰して原料を得た。次いで、原料０．１ｇに対して１ｍｌの割合でエタノールを加えた後、約１週間室温暗所で放置してエタノール抽出を行いエタノール抽出液を得た。続いて、エタノール抽出液を乾固してオオバギのエタノール抽出物（以下、ＯＥＥＰという。）を得た後、エタノールを加えて試料溶液（ＯＥＥＰの濃度：２０ｍｇ／ｍｌ）を調製した。次に、試料溶液をフィルターろ過（フィルターの孔径：０．４５μｍ）して残留物を取除いた後、下記Photo Diode Array-HPLC（ＰＤＡ−ＨＰＬＣ）条件で分析した。一方、前記オオバギの代わりとしてシロバナセンダンソウ（Bidens pilosa L. var. minor Scheff.）、シークワーサー（Citrus depressa Hay）若しくは前記沖縄産プロポリス原体を用い前記と同様にして分析を行った。各ＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。
また、前記各試料溶液について、ＵＶスペクトル及び下記ＬＣ／ＭＳ条件１によるＭＳの測定を行った。加えて、前記ＯＥＥＰ１ｍｇ当りの化合物１及び５〜７の含有量（μｇ／ｍｇ）をＡｌＣｌ3法に従って測定した。
ＰＤＡ−ＨＰＬＣ条件
カラム ： Shiseido Capcell Pak ODS UG-120 (4.6×250mm)
溶媒 ： Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件： 0-60min（グラジエント溶出；A:B=80:20→A:B=20:80）
流速 ： １ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
注入量 ： １０μｌ
温度 ： ３０℃
ＬＣ／ＭＳ条件１
・ＬＣ条件
カラム ： Shiseido Capcell Pak C18 UG-120 (4.6×250mm)
溶媒 ： Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件： 0-60min（グラジエント溶出；A:B=80:20→A:B=20:80）
流速 ： ２００μl/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
注入量 ： ５μｌ
温度 ： ３０℃
・ＭＳ条件
走査方式：ＭＳ
イオン源：ＥＳＩ
極性：負
シースガス（sheath gas）：７０ａｒｂ（Ｎ2）
スプレー電圧（spray voltage）：５ｋＶ
キャピラリー温度：２６０℃
キャピラリー電圧：−１０Ｖ
この結果、ＵＶスペクトル及びＭＳのデータは示さないが、図１に示すように、オオバギには化合物１及び５〜９が含有され、シロバナセンダンソウ及びシークワーサーには各化合物が含有されていないことが明らかとなった。さらに前記ＯＥＥＰ１ｍｇ当りの含有量は、化合物１が４８．７μｇ／ｍｇ、化合物５が６２．９μｇ／ｍｇ、化合物６が５．２μｇ／ｍｇ及び化合物７が２０．３μｇ／ｍｇであった。化合物１及び５〜７がオオバギに含有されていることは、本研究において初めて明らかとなった。さらに、分離工程として、前記＜フラバノン化合物の単離＞と同様の方法でＯＥＥＰの分画及び分取を行うことにより、各フラバノン化合物を単離することができた。
カラム ： Shiseido Capcell Pak ODS UG-120 (4.6×250mm)
溶媒 ： Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件： 0-60min（グラジエント溶出；A:B=80:20→A:B=20:80）
流速 ： １ml/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
注入量 ： １０μｌ
温度 ： ３０℃
ＬＣ／ＭＳ条件１
・ＬＣ条件
カラム ： Shiseido Capcell Pak C18 UG-120 (4.6×250mm)
溶媒 ： Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件： 0-60min（グラジエント溶出；A:B=80:20→A:B=20:80）
流速 ： ２００μl/min
検出 ： ＵＶ２８０ｎｍ
注入量 ： ５μｌ
温度 ： ３０℃
・ＭＳ条件
走査方式：ＭＳ
イオン源：ＥＳＩ
極性：負
シースガス（sheath gas）：７０ａｒｂ（Ｎ2）
スプレー電圧（spray voltage）：５ｋＶ
キャピラリー温度：２６０℃
キャピラリー電圧：−１０Ｖ
この結果、ＵＶスペクトル及びＭＳのデータは示さないが、図１に示すように、オオバギには化合物１及び５〜９が含有され、シロバナセンダンソウ及びシークワーサーには各化合物が含有されていないことが明らかとなった。さらに前記ＯＥＥＰ１ｍｇ当りの含有量は、化合物１が４８．７μｇ／ｍｇ、化合物５が６２．９μｇ／ｍｇ、化合物６が５．２μｇ／ｍｇ及び化合物７が２０．３μｇ／ｍｇであった。化合物１及び５〜７がオオバギに含有されていることは、本研究において初めて明らかとなった。さらに、分離工程として、前記＜フラバノン化合物の単離＞と同様の方法でＯＥＥＰの分画及び分取を行うことにより、各フラバノン化合物を単離することができた。
＜オオバギの成分分析＞
沖縄県那覇市首里金城町内において１０月にオオバギの葉身、茎の先端部、葉柄、茎（先端部以外の部分）及び幹を採取した。次いで、茎及び幹を一つにまとめた以外は各構成成分を別々に分けた状態で各々を細かく刻むとともに乳鉢ですり潰し、特定の器官又は構成成分からなる原料を得た。続いて、各原料について、前記＜植物の成分分析＞と同様にしてそれぞれエタノール抽出物を得るとともにその分析を行った。一方、前記各エタノール抽出物の代わりに、前記ＰＥＥＰ又はＯＥＥＰを用い前記と同様にして分析を行った。また、前記分析における各試料液について、ＵＶスペクトル及び下記ＬＣ／ＭＳ条件２によるＭＳの測定を行った。加えて、各エタノール抽出物１ｍｇ当りの化合物５の含有量（μｇ／ｍｇ）をＡｌＣｌ3法に従って測定した。各ＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。尚、図２における各数字は図１と同じ凡例を示す。
沖縄県那覇市首里金城町内において１０月にオオバギの葉身、茎の先端部、葉柄、茎（先端部以外の部分）及び幹を採取した。次いで、茎及び幹を一つにまとめた以外は各構成成分を別々に分けた状態で各々を細かく刻むとともに乳鉢ですり潰し、特定の器官又は構成成分からなる原料を得た。続いて、各原料について、前記＜植物の成分分析＞と同様にしてそれぞれエタノール抽出物を得るとともにその分析を行った。一方、前記各エタノール抽出物の代わりに、前記ＰＥＥＰ又はＯＥＥＰを用い前記と同様にして分析を行った。また、前記分析における各試料液について、ＵＶスペクトル及び下記ＬＣ／ＭＳ条件２によるＭＳの測定を行った。加えて、各エタノール抽出物１ｍｇ当りの化合物５の含有量（μｇ／ｍｇ）をＡｌＣｌ3法に従って測定した。各ＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。尚、図２における各数字は図１と同じ凡例を示す。
ＬＣ／ＭＳ条件２（ＬＣ／ＭＳ条件１と異なる条件のみを示す。）
・ＬＣ条件
溶媒 ： Ａ：水（０．１％ギ酸）、Ｂ：アセトニトリル（０．１％ギ酸）
溶出条件： 0-10min（グラジエント溶出；A:B=70:30→A:B=30:70）
10-40min（グラジエント溶出；A:B=30:70→A:B=10:90）
この結果、図２に示すように、化合物１は茎の先端部及び葉柄に多く含有され、化合物５及び７は葉身、茎の先端部及び葉柄に多く含有されていることが明らかとなった。さらに、化合物６は葉身に多く含有されていることが明らかとなった。また、各エタノール抽出物１ｍｇ当りの化合物５の含有量は、葉身のエタノール抽出物で５９．７μｇ／ｍｇ、茎の先端部のエタノール抽出物で２０．１μｇ／ｍｇ及び葉柄のエタノール抽出物で４．４μｇ／ｍｇであった。
・ＬＣ条件
溶媒 ： Ａ：水（０．１％ギ酸）、Ｂ：アセトニトリル（０．１％ギ酸）
溶出条件： 0-10min（グラジエント溶出；A:B=70:30→A:B=30:70）
10-40min（グラジエント溶出；A:B=30:70→A:B=10:90）
この結果、図２に示すように、化合物１は茎の先端部及び葉柄に多く含有され、化合物５及び７は葉身、茎の先端部及び葉柄に多く含有されていることが明らかとなった。さらに、化合物６は葉身に多く含有されていることが明らかとなった。また、各エタノール抽出物１ｍｇ当りの化合物５の含有量は、葉身のエタノール抽出物で５９．７μｇ／ｍｇ、茎の先端部のエタノール抽出物で２０．１μｇ／ｍｇ及び葉柄のエタノール抽出物で４．４μｇ／ｍｇであった。
さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。
・ 前記化１に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギの葉柄又は茎の先端部を原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。前記化２又は化４に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギの葉身、葉柄又は茎の先端部を原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。前記化３に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギの葉身を原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。
・ 前記化１に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギの葉柄又は茎の先端部を原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。前記化２又は化４に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギの葉身、葉柄又は茎の先端部を原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。前記化３に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギの葉身を原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。
Claims (3)
- 下記化１、化２、化３又は化４に示される構造を有するフラバノン化合物の製造方法であって、オオバギを原料として前記フラバノン化合物を精製することを特徴とするフラバノン化合物の製造方法。
- 前記原料をエタノール抽出する抽出工程と、該抽出工程により得られるエタノール抽出物からフラバノン化合物を分離する分離工程とを備えることを特徴とする請求項１に記載のフラバノン化合物の製造方法。
- 前記分離工程は、疎水性担体を用いた逆相クロマトグラフィーによりエタノール抽出物からフラバノン化合物を分離する工程であることを特徴とする請求項２に記載のフラバノン化合物の製造方法。
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