JP5122050B2

JP5122050B2 - 新規脂肪酸類似体

Info

Publication number: JP5122050B2
Application number: JP2001567680A
Authority: JP
Inventors: ロルフ、ベルゲ; レイブ、ケー．シドネス; ヨン、ソングスタード
Original assignee: Thia Medica AS
Current assignee: Thia Medica AS
Priority date: 2000-03-03
Filing date: 2001-03-02
Publication date: 2013-01-16
Anticipated expiration: 2021-03-02
Also published as: CA2401757C; JP2003527364A; MX236472B; DE60113663T2; NO20001123L; HK1050182A1; KR100857626B1; KR20020077931A; KR100982228B1; KR20090108135A; US20040213442A1; NO20001123D0; ES2250360T3; KR20080046747A; NO328803B1; WO2001068582A1; CN1283611C; EP1265838B1; RU2002123590A; CA2401757A1

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は新規脂肪酸類似体に関する。さらに、本発明はＸ症候群、肥満、高血圧症、脂肪肝、糖尿病、高血糖症、高インスリン症および狭窄の治療および／または予防に向けた新規脂肪酸類似体の使用に関する。本発明はまた、新規脂肪酸類似体の製造方法に関する。
【０００２】
発明の背景
欧州特許ＥＰ３４５．０３８では、高脂肪血症の治療ならびに哺乳類の血中コレステロールおよびトリグリセリド濃度を低下させることに向けた式：
アルキル−Ｘ−ＣＨ_２ＣＯＯＲ
（式中、アルキルは炭素原子８〜２２個の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ_２を表し、かつＲは水素またはＣ_１−Ｃ_４アルキル基である）の非β酸化脂肪酸類似体の使用について記載されている。
【０００３】
ＰＣＴ／ＮＯ９５／００１９５では、ＬＤＬの酸化的修飾の抑制に向けたアルキル−Ｓ−ＣＨ_２ＣＯＯＲおよびアルキル−Ｓｅ−ＣＨ_２ＣＯＯＲについて記載されている。さらに、この出願では、高脂肪血症の治療ならびにコレステロールおよびトリグリセリド濃度を低下させることに向けたセレン化合物の使用について記載されている。
【０００４】
ＰＣＴ国際特許出願ＰＣＴ／ＮＯ９９／００１３５、ＰＣＴ／ＮＯ９９／００１３６およびＰＣＴ／ＮＯ９９／００１４９では、式（Ｉ）：
ＣＨ_３−［ＣＨ_２］_ｍ−［Ｘ_ｉ−ＣＨ_２］_ｎ−ＣＯＯＲ
（式中、
ｎは１〜１２の整数であり、かつ
ｍは０〜２３の整数であり、かつ
ｉはＣＯＯＲに関する位置を示す奇数であり、かつ
Ｘ_ｉは互いに独立にＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳｅおよびＣＨ_２からなる群から選択され、かつ
Ｒは水素またはＣ_１−Ｃ_４アルキルを表す、
ただし、少なくとも１つのＸ_ｉがＣＨ_２ではない）
の脂肪酸類似体、またはその塩、プロドラッグもしくは複合体について記載されている。
【０００５】
この式は３、５、７、９位、他の位置に１つまたはいくつかのＸ基（好ましくはセレンおよび硫黄）を含んでなる。
【０００６】
さらに、これらのＰＣＴ出願では、いくつかの医薬および栄養適用についても記載されている。
【０００７】
ＰＣＴ／ＮＯ９９／００１３５では、肥満、高血圧症、脂肪肝および《代謝症候群》またはＸ症候群とよばれる多代謝症候群の治療および／または予防に向けた脂肪酸類似体の使用について記載されている。さらに、この出願では、肥満または体重超過状態の治療または予防法、およびヒトまたは非ヒト動物の体重減量または脂肪量の減少をもたらす方法についても記載されている。この出願ではまた、ヒトまたは非ヒト動物の全体重または体脂肪量を減少させるまたはその増加を防ぐのに有効な栄養組成物、ならびに食肉または牛乳および卵のような産物の品質を向上させるための動物の脂肪分布および含有量の改変に向けた方法についても記載されている。
【０００８】
ＰＣＴ／ＮＯ９９／００１３６では、糖尿病（ＩおよびII型の両方）の治療および／または予防に向けた脂肪酸類似体の使用、ならびに高血糖症、高インスリン血症およびインスリン機能低下の治療または予防方法について記載されている。ヒトまたは非ヒト動物の血中グルコース濃度を低下させるまたはその高まりを防ぐのに有効な栄養組成物についても開示されており、これはヒトまたは非ヒト動物の血中グルコース濃度を低下させる方法のようである。
【０００９】
ＰＣＴ／ＮＯ９９／００１４９では、一次狭窄および／もしくは二次狭窄、ならびに／または処置上の血管外傷および／もしくは平滑筋細胞の異常増殖、および／もしくは血漿ホモシステインレベルの高まりが原因で起こる疾患の治療ならびに／または予防に向けた脂肪酸類似体の使用について記載されている。
【００１０】
上記の脂肪酸類似体の炭素鎖で置換されているＸ−原子（最も好ましくは硫黄またはセレン）により、これらの化合物はミトコンドリアではこの位置でしかβ酸化されない。よって、これらの分子の減成は脂肪酸のメチル末端からはじまるかなりゆっくりとした代謝プロセスである。これらの脂肪酸類似体の異化作用には、ω酸化およびペルオキシソームによるジカルボン酸の短鎖化が含まれる。小胞体の酵素はωヒドロキシル化を行い、さらにヒドロキシル化された脂肪酸をジカルボン酸へと酸化する。次いで、この酸はペルオキシソームでβ酸化による短鎖化を受ける。ラットでの試験では、５０％の類似ＴＴＡが投与２４時間以内に短鎖スルホキシジカルボン酸として尿排泄された。同様の試験でＴＴＡ非飽和産物がin vivoで形成されることが見いだされた。これは飽和脂肪酸の９位に二重結合を導入するミクロソーム酵素Δ^９−デサチュラーゼによって起こる。
【００１１】
この非飽和産物は同様な効果を有し、および／または飽和脂肪酸類似体の生体効果を媒介すると考えられる。また、脂肪酸類似体の生体効果はそれらの異化作用を減速することにより増強されるようである。これは脂肪酸のメチル末端近くに二重および／もしくは三重結合を導入し、さらに／またはこの分子対にアルキル基またはハロゲンを組み込むことによりなし遂げられる。かかる分子、すなわち本発明の化合物は関連ミクロソーム酵素の基質ではない。
【００１２】
肥満および関連疾患
肥満は現代社会ではかなり一般的なものとなった慢性疾患であり、社会風潮となっているだけでなく、寿命の低下、ならびに有害な心理発達、多嚢胞性卵巣疾患のような生殖障害、感染、拡張蛇行静脈、黒色表皮腫および湿疹のような皮膚科障害、運動不耐性、真性糖尿病、インスリン抵抗性、高血圧症、高コレステロール血症、胆石症、骨関節症、整形外科的損傷、血栓塞栓症、癌ならびに冠状動脈硬化性心疾患をはじめとする数多くの医療上の問題とも関係がある。
【００１３】
よって、本発明の目的は、肥満被験体の体重を正常な理想体重に戻すのに有用な治療計画を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、長期間低体重を維持するための肥満治療を提供することである。さらに、高脂肪食によって一般に生じる体重増加を低減または抑制することも目的である。
【００１５】
本発明のさらに別の目的は、肥満を予防すること、さらに一度治療を開始して肥満の結果としてまたは二次的に生じる高血圧症および脂肪肝のような疾患の進行を止めるまたは発症を予防することである。これらおよびその他の目的については当業者には明らかなことであろう。
【００１６】
本明細書における肥満は遺伝または環境のいずれかが原因として起こるものである。結果として肥満を生じるまたは肥満の原因と考えられる障害の例としては、過食および神経性食欲昂進症、多嚢胞性卵巣疾患、頭蓋咽頭腫、プラダー・ウィリー症候群、フレーリッヒ症候群、糖尿病II型、ＧＨ−欠損症、正常変異型低身長、ターナー症候群および代謝活性の低下を示すその他の病態が挙げられる。
【００１７】
また、本発明の目的は、血圧を低下させるのに有用な治療計画を提供することである。
【００１８】
さらに、本発明の目的は、肝臓のトリアシルグリセロール濃度を低下させるのに有用な治療計画を提供することである。かかる計画によって脂肪肝病態発現に対する抑制効果が提供され、現れた疾患の治療法としても好適であると考えられる。
【００１９】
本発明の化合物はβ酸化を活性化し、さらに肝臓のトリグリセリド濃度も低下させると思われる。
【００２０】
「代謝症候群」とは、特に高インスリン血症、インスリン抵抗性、肥満、グルコース不耐性、真性糖尿病２型、脂質代謝異常および高血圧症を特徴とする多代謝症候群の記述に使用する。
【００２１】
上記に示すように、本発明の化合物が、すなわちグルコースおよび脂質ホメオスタシスの両方を制御することにより、上記の総ての病気に対してプラス効果をもたらすと考えられていることから、本発明の化合物は上記の代謝疾患（Ｘ症候群ともよばれる）の制御に好適な薬剤であると考えられる。
【００２２】
糖尿病
真性糖尿病には２つの主要なタイプがある。１つはインスリン依存型真性糖尿病（ＩＤＤＭ）としても知られる糖尿病Ｉ型であり、もう１つは非インスリン依存型真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）としても知られる糖尿病II型である。ほとんどのＩＤＤＭ患者は、インスリン生成膵臓β細胞のほぼ総てが消滅することにより高血糖症が生じるという共通した病像を有する。
【００２３】
ほとんどのＩＤＤＭが長年にわたる無症候性期間の進行性β細胞破壊の結果として起こることを示す重要な証拠事実が累積してきた。糖尿病前症期間は循環する膵島細胞自己抗体およびインスリン自己抗体の検出により明確に認識することができる。
【００２４】
臨床ＩＤＤＭおよびＮＩＤＤＭを予防し、さらに無毒性でありかつ副作用がない化合物が必要である。
【００２５】
糖尿病Ｉ型：低血漿インスリンレベル、煩渇多飲、多尿、食欲増進、体重減少および一時的ケトアシドーシスを特徴とする成人期前の突発的な発症が常である重篤な真性糖尿病、ＩＤＤＭともよばれる。
【００２６】
糖尿病II型：血漿グルコースレベルが比較的低い、正常〜高い絶対的血漿インスリンレベルを特徴とする、一般に成人の漸進的な発症が多くの起こる軽度の真性糖尿病、ＮＩＤＤＭともよばれる。
【００２７】
糖尿病ＩおよびII型は病因論学上の分類に従うものであり、各々が「一次」糖尿病と考えられる。
【００２８】
「二次」糖尿病として、膵臓、膵臓外／内分泌物または薬剤性糖尿病を含む。さらに、ある種の糖尿病は例外型として分類される。これらには、脂肪萎縮性、筋無緊張糖尿病およびインスリン受容体障害によって起こる糖尿病の一種が挙げられる。
【００２９】
我々の社会における糖尿病罹患率の高さおよび上記のようなそれに関連した重大な結果から考えて、この疾患の治療および予防に有用であり得るいずれもの治療薬がそれらの健康に十分な有益な効果をもたらす可能性がある。当技術分野では重大な副作用なく、糖尿病被験体の血中グルコース濃度を低下させる薬剤を必要としている。
【００３０】
よって、本発明の目的は血中グルコース濃度を低下させるのに有用な治療計画を提供し、糖尿病を治療することである。
【００３１】
本発明のさらに別の目的は血中インスリン濃度を低下させるのに有用な治療計画を提供し、残留インスリンの効果を高めることである。
【００３２】
狭窄
数多くの病状が平滑筋細胞増殖と関係していることがわかってきた。かかる病気としては、再狭窄、動脈硬化症、冠状動脈硬化性心疾患、血栓症、心筋梗塞、発作、内臓および子宮の平滑筋腫および平滑筋肉腫ならびに子宮筋腫または繊維腫のような平滑筋腫瘍が挙げられる。
【００３３】
各年、５００，０００を超えるインターベンショナル血管内処置が行われている。かかる侵襲的処置は時とともに改良され続けてきたが、各年に行われる３０〜５０％ほどは再狭窄、すなわち二次狭窄の形成の結果、不成功に終わっている。そのため、再狭窄の減少が血管形成術、アテローム切除術、ならびにステントおよびレーザーテクノロジーを用いた処置のようなインターベンショナル血管内処置を利用した心血管疾患の治療実現の成功率が高める最も重大な因子として挙げられていることが多い。
【００３４】
バルーン血管形成術、例えば経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）では、患者の脚部または腕の動脈を小さく切開し、ガイドカテーテルとよばれる長い中空管を動脈に挿入する。次いで、太いガイドワイヤーおよび脱気したバルーン付きカテーテルをガイドカテーテルに挿入し、Ｘ線可視化により慎重に患者の血管に通す。脱気したバルーンが管腔の狭窄部位に達するまでそれを進め、その地点で医師がバルーンを約４〜６ａｔｍの圧力で約６０秒間、１回以上膨張させる。膨張した際、バルーンがプラークに亀裂を入れて破砕し、その全リコイル能力を上回って動脈壁の筋繊維を拡張する。
【００３５】
この処置ではプラークは除去されないが、プラークを破砕し、さらに動脈壁を拡張することで血管腔が広がり、それによって血流を増やすことが可能である。
【００３６】
かかる処置を伴う再狭窄は、血小板凝集および付着、平滑筋細胞増殖、血管腔の狭窄、制限的血管拡張、ならびに血圧上昇を特徴とするものである。動脈内膜の平滑筋細胞では、これらの処置の約２〜３日以内に増殖サイクルに入り、その後、数日間増殖することが報告されている（血管内膜肥厚）。
【００３７】
in vitro平滑筋増殖を抑制するといわれる化合物は、in vivo使用すると望ましくない薬理学的副作用が起こる。ヘパリンはかかる化合物の一例であり、in vitroで平滑筋細胞増殖を抑制するといわれているが、in vivo使用では凝固を妨げるという不都合な副作用が起こる可能性がある。
【００３８】
上記のことからわかるように、平滑筋細胞動員および増殖を有効に治療する抑制薬の使用には解決すべき数多くの問題が残っている。狭窄、再狭窄、または、例えば血管手術中にもたらされた血管の外傷性損傷の結果として起こる血管平滑筋細胞増殖および動員による関連障害を抑制する新規組成物または方法を開発することは非常に有利であろう。
【００３９】
本発明の化合物がこれらの疾患の治療に有効であると考えられる。
【００４０】
発明の具体的な説明
本発明は、一般式（Ｉ）：
Ｒ_１−［Ｘ_ｉ−ＣＨ_２］_ｎ−ＣＯＯＲ_２（Ｉ）
（式中、
Ｒ_１は；
１つ以上の二重結合および／もしくは１つ以上の三重結合を有するＣ_６−Ｃ_２４アルケン、ならびに／または
Ｃ_６−Ｃ_２４アルキン、ならびに／または
１つまたはいくつかの位置がフッ素、塩素、ヒドロキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルキルチオ、Ｃ_２−Ｃ_５アシルオキシもしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルからなる群から選択される１つ以上の化合物で置換されたＣ_６−Ｃ_２４アルキル
であり、かつ
Ｒ_２は水素またはＣ_１−Ｃ_４アルキルを表し、かつ
ｎは１〜１２の整数であり、かつ
ｉは奇数であり、ＣＯＯＲ_２に関する位置を示し、かつ
Ｘ_ｉは互いに独立にＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳｅおよびＣＨ_２からなる群から選択される、
ただし、少なくとも１つのＸ_ｉがＣＨ_２ではなく、さらに
ただし、Ｒ_１がアルキンである場合、炭素−炭素三重結合が（ω−１）炭素と（ω−２）炭素間、もしくは（ω−２）炭素と（ω−３）炭素間、もしくは（ω−３）炭素と（ω−４）炭素間にある）
の新規脂肪酸類似体、またはその塩、プロドラッグもしくは複合体に関する。
【００４１】
本発明の別の態様では、Ｒ部分が１つの炭素−炭素二重結合を含んでなる新規脂肪酸類似体に関する。好ましい具体例では、炭素−炭素二重結合が９位にあり、かつシス配置である脂肪酸類似体に関する。
【００４２】
本発明の最も好ましい具体例では、硫黄またはセレンが３位に配置された式（Ｉ）の化合物に関する。
【００４３】
さらに、本発明は実施例１に記載するように製造される式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。
【００４４】
また、本発明は医薬品および／または栄養薬としての式（Ｉ）の化合物の使用に関する。本化合物は上記の先行技術化合物と実質的に同じ生体活性を示すと考えられることから、本発明は記した公報に記載された適用に向けた式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
よって、本発明はＸ症候群、肥満、高血圧症、脂肪肝、糖尿病、高血糖症、高インスリン症および狭窄からなる群から選択される病気の治療および／または予防に向けた医薬組成物の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００４５】
さらに、本発明は；
哺乳類の血中コレステロールおよびトリグリセリド濃度を低下させ、
低密度リポタンパク質の酸化的修飾を抑制する
ことに向けた式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００４６】
本発明はヒトまたは非ヒト動物の全体重または体脂肪量を減少させるまたはその増加を防ぐのに有効な、式（Ｉ）の栄養組成物、およびそれを必要とするヒトまたは非ヒト動物の体重減量または脂肪量の減少をもたらす方法に関する。
【００４７】
本発明の化合物の投与
本発明の化合物を医薬品として直接動物に、非経口、経鼻、経口、または経皮などのいずれかの好適な技術により投与してもよい。それらは局部または全身に投与することができる。各薬剤の投与経路の特定は、例えば動物の病歴に応じて行う。
【００４８】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、それらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００４９】
実施例
方法
以下に記載する方法は先行技術で記載した化合物の試験系として使用したものであるが、本化合物の生体効果の調査にも使用する。
【００５０】
肥満 Zucker(fa/fa) ラット
この調査に使用した肥満Zucker(fa/fa)ラットは、Harriet G. Bird Laboratory(Stow, MA, USA)により提供された一つがいからＵ４６５ＩＮＳＥＲＭ動物実験施設で繁殖させたものであった。特に断りのない限り、動物は一定した明暗サイクル（午前７：００〜午後７：００を明期とする）下、２１±１℃で維持し、食物および水を自由に入手させた。ゲージ当たり３ラットを収容した。体重の増加を毎日記録した。
【００５１】
Wistar ラット
体重２８０〜３５８の雄Wistar Charles RiverラットをAnLab Ltd.(Prague, Czech Republic)より購入し、温度（２２±１℃）および光制御（午前７：００〜午後７：００を明期とする）室にあるワイヤーメッシュケージに収容した。それらには食物および水を自由に入手させた。ゲージ当たり３ラットを収容した。体重の増加および食物摂取量を毎日記録した。
【００５２】
静脈グルコース負荷試験
雄Zucker(fa/fa)ラット（５週齢）を５時間断食させた後、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ）の腹膜注射により麻酔をかけた。ラットの伏在静脈にグルコース（０．５５ｇ／ｋｇ）を注射し、グルコース注入から０、５、１０、１５、２０および３０分後に尾部静脈から血液サンプルをヘパリン処理チューブに採取した。サンプルを氷上に維持し、遠心分離し、さらに血漿を解析まで−２０℃で保存した。
【００５３】
グルコースクランプ法
それぞれの食餌療法（上記）２１日後、ラットに塩酸キシラジン(Rometar SPOFA, Prague, Czech Republic；１０ｍｇ／ｍｌ)および塩酸ケタミン(Narkamon SPOFA, Prague, Czech republic；７５ｍｇ／ｍｌ)注射により麻酔をかけ、Koopmans et al.(Koopmans, S. J., et al., Biochim Biophys Acta, 1115, 2130-2138 1992)で記載されるように長期頸動脈および頚静脈カニューレを挿入した。カニューレを挿入したラットは術後２日間回復させた後、Kraegen et al.(Kraegen, E. W., et al., Am J Physiol, 248, E353-E362 1983)に従ってクランピング調査を行った。このように、術後３日目に非拘束・無麻酔ラットにブタインスリン(Actrapid, Novo Nordisk, Denmark)を６．４ｍＵ／ｋｇ／分の用量で持続注入して生理学的上限にある血漿インスリンレベルを達成させた。動脈血グルコース濃度を３０％ｗ／ｖグルコース溶液(Leciva, Prague, Czech Republic)の可変注入により基礎空腹時レベルでクランプした。グルコース注入開始から１５分ごとに血漿グルコースおよびインスリン濃度測定用の血液サンプルを得た。９０分後、ラットへの注入を止め、直ちに断頭し、血漿分離用の血液を採取し、肝臓および精巣上体脂肪組織パッドを切開し、重量を測定した。
【００５４】
血漿パラメーターの測定
グルコース(GLU, Boehringer Mannheim, Germany)、遊離脂肪酸(NEFA, C ACS-ACOD kit; Wako Chemicals, Dalton, USA)およびb-ヒドロキシブチレート(310-A kit; Sigma Diagnostics Inc., St. Louis, USA)濃度を酵素法により測定した。インスリン濃度は、標準としてZuckerラットのラットインスリンを使用するラジオイムノアッセイにより決定した(CIS bio International, Gif sur Yvette, France)。Wistar Charles Riverラットでは、血漿グルコース濃度をBeckman Glucose Analyzer(Fullerton, CA, USA)により測定した。血漿インスリンレベルは、Linco Research Inc.(St. Charles, MO, USA)のRIA kitにより測定した。燐脂質は、トリアシルグリセロール(Technicon Method no. SA4-0324L90, USA)およびコレステロール(Technicon Method no. SA4-0305L90, USA)に関するbioMerieux, Marcy-1 Etoile, Franceの酵素法により測定した。
【００５５】
ポスト核およびミトコンドリア画分の調製および酵素活性の測定
老年期Zuckerラット各々の新鮮な単離肝臓を氷冷スクロースバッファー（０．２５Ｍスクロース、１０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および２ｍＭＥＤＴＡ）でホモジナイズした。DeDuve et al. (DeDuve, C., et al., Biochem. J., 60, 604-617 1955)に従い、分取示差遠心分離によりポスト核およびミトコンドリア画分を調製した。改変、純度および収率はこれまでに記載された通りであった。酸溶解産物はこれまでに記載された(Willumsen, N., et al., J. Lipid Res., 34, 13-22 1993)ように［１−^１４Ｃ］−パルミトイル−ＣｏＡおよび［１−^１４Ｃ］−パルミトイル−Ｌ−カルニチン(Radio-chemical Centre, Amersham, England)を基質として使用してポスト核およびミトコンドリアが多く含まれる画分で測定した。カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−Ｉおよび−II活性は、実質的にはBremer(Bremer, J., Biochim. Biophys. Acta, 665, 628-631 1981)により記載されるようにポスト核およびミトコンドリア画分で測定し、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡシンターゼは、Clinkenbeard et al. (Clinkenbeard, K. D., et al., J. Biol. Chem, 250, 3108-3116 1975)に従い、ミトコンドリア画分で測定した。
【００５６】
ＲＮＡ解析
ＲＮＡ抽出(Chomezynski, P., et al., Anal. Biochem., 162, 156-159 1987)、ＲＮＡのナイロンフィルターでのノーザンブロット解析およびスロットブロット、ならびに固定化ＲＮＡとのハイブリダイゼーションはこれまでに記載された(Vaagenes, H., et al., Biochem. Pharmacol., 56, 1571-1582 1998)ように行った。以下のｃＤＮＡ断片：ＣＰＴ−Ｉ(Esser, V. et al., J. Biol. Chem., 268, 5817-5822 1993)、ＣＰＴ−II(Woeltje, K. F., et al., J. Biol. Chem., 265, 10720-10725 1990)、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡシンターゼ(Ayte, J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 87, 3874-3878 1990)、およびホルモン感受性リパーゼ(Holm, C., et al., Biochim. Biophys. Acta, 1006, 193-197 1989)をプローブとして使用した。ＲＮＡ発現の相対レベルを対応するレベルの２８ＳｒＲＮＡとハイブリダイズした放射性プローブ量として算出した。
【００５７】
結果
実施例１．新規脂肪酸化合物の合成
Ａ）炭素−炭素二重結合を有する非β酸化脂肪酸類似体
本発明の化合物の合成については、典型的にはチア−ヘプタデカ−９−エン酸；
（Ｚ）ＨＯ（Ｏ）Ｃ−ＣＨ_２−Ｓ−（ＣＨ_２）_５−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ_７Ｈ_１５
（Ｚ）はシス配置を示す。
の合成で詳述する。
【００５８】
１．１−ブロモ−５−ヒドロキシ−ペンタンの製造
ペンタン−１，５−ジオール、ＨＯ−（ＣＨ_２）_５−ＯＨをベンゼン中のＨＢｒで処理し、２４時間還流した。生成混合物をまず８５：１５ヘキサン−ジエチルエーテル混合物でのクロマトグラフィーに付し、二臭化物を除去し、次いで７０：３０混合物により行った。１−ブロモ−５−ヒドロキシ−ペンタンの収率、８０％。
¹H-NMR: 1,81 (-CH₂-CH₂OH), 1,44 (-CH₂-), 3,35 (-CH₂-Br), 3,55 (-CH₂-OH), 3,32 (-OH), 1,51 (-CH₂-CH₂Br).
¹³C-NMR: 31,43-32,30 (C₂,C₄), 24,24 (C₃), 33,64 (C₅), 62,11 (C₁).
【００５９】
２．５−（テトラヒドロピラニルオキシ）−１−ブロモペンタンの製造
この化合物を０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２中の３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピランと反応させた。濃ＨＣｌ２滴を触媒として使用した。溶媒除去後、反応生成物を９５：５ヘキサン−ジエチルエーテルでのクロマトグラフィーに付した。５−（テトラヒドロピラニルオキシ）−１−ブロモペンタンの収率は７７％であった。
¹H-NMR: 1,45-1,63 (-CH₂-), 1,83 (-CH₂-CH₂O-), 3,38 (-CH₂-Br), 3,27-3,79 (-CH₂-O-), 4,52 (-O-CH-O).
¹³C-NMR: 24,9-32,92 (C₂-C₄), 33,61 (C₅), 62,26 (C₆), 98,83 (THP中C₁).
【００６０】
３．７−（テトラヒドロピラニルオキシ）−１−ヘプチンの製造
工程２の生成物をアルゴン下、０℃で乾燥ジメチルスルホキシド中のＬｉ−アセチリドのＥＤＡ錯体で処理した。室温で４時間後、反応混合物を水で加水分解し、有機生成物をジエチルエーテルで抽出した。エーテル除去後の残渣を９７：３ヘキサン−ジエチルエーテルでのクロマトグラフィーに付し、７−（テトラヒドロピラニルオキシ）−１−ヘプチンが６２％の収率で得られた。
¹H-NMR: 1,45-1,66 (-CH₂-), 3,45-3,82 (-CH₂-O), 2,16 (-CH₂-C≡), 1,90 (HC≡C-), 4,53 (-O-CH-O-).
¹³C-NMR: 18,27-30,66 (C₃-C₆), 62,21 (C₇), 68,14 (C₁), 84,40 (C₂).
【００６１】
４．１−（テトラヒドロピラニルオキシ）−テトラデカ−６−インの製造
アルゴン下、０℃でＴＨＦに溶解したヘキサン中の１．６ＭＢｕＬｉ溶液および３の生成物に、１−ブロモヘプタンおよびＮ，Ｎ−ジメチルプロピレン尿素の混合物を加えた。加水分解、抽出およびクロマトグラフィーの後、１−（テトラヒドロピラニルオキシ）−テトラデカ−６−インが６９％の収率で単離された。
¹H-NMR: 0,85 (CH₃-), 1,22-1,57 (-CH₂-), 2,10 (-CH₂-C≡), 3,30-3,84 (-CH₂O-), 4,55 (-O-CH-O-).
¹³C-NMR: 14,02 (C₁₄), 22,60-31,73 (C₂-C₁₃), 18,69-18,71 (C₅ および C₈), 62,23 (C₁), 79,91-80,32 (C₆ および C₇).
【００６２】
５．１（テトラヒドロピラニルオキシ）−テトラデカ−６−エンの製造
工程４の置換テトラデカ−６−インをエタノール中Ｌｉｎｄｌａｒ触媒存在下、水素で還元した。還元は４時間続けた。クロマトグラフィー後、１（テトラヒドロピラニルオキシ）−テトラデカ−６−エンが８９％の収率で単離されたが、さらなる精製を行わずとも工程６に向けて十分に純粋であると思われた。
¹H-NMR: 0,90 (CH₃-), 1,27-1,61 (-CH₂-), 3,39-3,89 (-CH₂-O), 2,04 (-CH₂-C=), 4,59 (-O-CH-O-), 5,37 (-HC=CH-).
¹³C-NMR: 14,07 (C₁₄), 22,65-31,85 (C₂-C₁₃), 62,27 (C₁), 27,13, 27,19 (C₅ および C₈), 129,60-130,04 (C₆ および C₇).
【００６３】
６．１−ブロモテトラデカ−６−エンの製造
工程５の生成物をＰｈ_３Ｐ存在下、０℃でジクロロメタン中、ＣＢｒ_４で臭素化した。反応混合物を一晩攪拌した。１−ブロモテトラデカ−６−エンの収量は計量可能であった。
¹H-NMR: 0,87 (CH₃-), 1,27-1,52 (-CH₂-), 2,01 (-CH₂-C=), 3,39 (-CH₂-Br), 1,45 (-CH₂-CH₂-Br), 1,85 (-CH₂-CH₂C=), 5,34 (-HC=CH-).
¹³C-NMR: 14,00 (C₁₄), 22,60-32,68 (C₂-C₁₃), 26,97, 27,24 (C₅ および C₈), 33,75 (C₁), 129,15-130,32 (C₆ および C₇).
【００６４】
７．（Ｚ）チア−ヘプタデカ−９−エン酸の製造
メタノール中の工程６のブロモデセンをアルゴン下、３０分間、メタノール中３当量のＫＯＨおよび１．５当量のＨＳ−ＣＨ_２−Ｃ（Ｏ）ＯＨに加えた。室温で４時間攪拌した後、さらに１２時間還流し、続いて加水分解、ジエチルエーテルで抽出した後、ｐＨ１〜２まで酸性化し、生成物、標題の化合物が粘性のある油状物質として６０％の収率で単離された。
【００６５】
以下の解析：メチルエステルのＩＲ、６００ＭＨｚ１Ｈおよび１３ＣＮＭＲ、ＭＳ、ＧＣ、ＧＣ−ＭＳを行った。ＮＭＲの結果を以下に示している。全データを１００万分の１（ｐｐｍ）で示している。Ｅ−化合物は全く検出することができなかった。
¹H-NMR: 0.86 (CH₃-), 1.16-1.60 (-CH₂-), 1. 99 (-CH₂-C=), 2. 64 (-CH₂-S-), 3.22 (-S-CH₂-C (O)OH), 5. 33 (HC=CH).
¹³C-NMR: 176.63 (C₁), 33.34 (C₂), 32.69 (C₄), 22.63-31.83 (C₅-C₇, C₁₂-C₁₆), 129.32 および 130.24 (C₉, C₁₀), 26.98 および 27.19 (C₈, C₁₁), 14.08 (C₁₇).
【００６６】
Ｂ）炭素−炭素三重結合を有する非β酸化脂肪酸類似体
本発明の化合物の合成については、典型的には図１で示した３−チア−１５−ヘプタデシンの合成で詳述する。
【００６７】
１．１１−ブロモ−１（テトラヒドロ−２−ピラニルオキシ）ウンデカンの製造
ピリジントルエン４−スルホネート（１．０ｇ、４．０ｍｍｏｌ）および１１−ブロモ−１−ウンデカノール（１０．０ｇ、４００ｍｍｏｌ）を周囲温度で乾燥ＣＨ_２ＣＨ_２（２００ｍｌ）に溶解し、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（５．０ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を一晩攪拌した。粗生成物をＣＨ_２ＣＨ_２で溶出するシリカでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。１１−ブロモ−１（テトラヒドロ−２−ピラニルオキシ）ウンデカンの収量は１０．７ｇであった（８０％）。
【００６８】
２．１４−（テトラヒドロ−２−ピラノイル）−２−テトラデシンの製造
プロピンガスをエーテルが確実に還流するよう調整した速度でジエチルエーテル中のＭｅＬｉ溶液（０．８Ｍ、６０ｍｌ、５１．２ｍｍｏｌ）にバブリングさせた。熱が発生しなくなった時点で反応が終了したものと考えた（白色のスラリー）。１１−ブロモ−１（テトラヒドロ−２−ピラニルオキシ）ウンデカン（生成物２）（１３．０ｇ、３８．８ｍｍｏｌ）をこの溶液に２０分間にわたって滴下した。反応混合物を一晩攪拌し、水（５０ｍｌ）を慎重に滴下した。混合物をジエチルエーテルで希釈し、水で洗浄し（５×）、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、さらに溶媒を蒸去した。粗生成物を溶出剤としてＣＨ_２ＣＨ_２を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。１４−（テトラヒドロ−２−ピラノイル）−２−テトラデシンの収量は８．５ｇであった（７４％）。
【００６９】
３．１２−テトラデシン−１−オールの製造
ピリジントルエン４−スルホネート（０．３ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびアルキン（生成物３）をエタノール（２５ｍｌ）に溶解し、５０℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させ、水とＣＨ_２ＣＨ_２とで分液した。水相を水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、さらに溶媒を蒸発させた。粗生成物を溶出剤としてＣＨ_２ＣＨ_２を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。１２−テトラデシン−１−オールの収量は１．５ｇであった（７８％）。
【００７０】
４．１４−ブロモ−２−テトラデシンの製造
１２−テトラデシン−１−オール（５．０ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）をヘキサン（５０ｍｌ）に溶解し、ピリジン１０滴を加えた。この混合物にＰＢｒ_３を加えた。混合物を６０℃で３時間加熱し、冷却し、水を滴下した。混合物を水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、さらに溶媒を蒸発させた。粗生成物を溶出剤としてヘキサン〜ヘキサン中２．５％ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。１４−ブロモ−２−テトラデシンの収量は２．２ｇであった（３４％）。
【００７１】
５．３−チア−１５−ヘプタデシンの製造
ＫＯＨ（２．７６ｇ、４９．０ｍｍｏｌ）をメタノール（３０ｍｌ）に溶解し、メタノール（２５ｍｌ）中のチオグリコール酸（２．０４ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）を滴下した。１０分後、１４−ブロモ−２−テトラデシン（５．５ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）を慎重に滴下し、混合物を５０℃で一晩加熱した。混合物を０℃まで冷却し、ＨＣｌ３０ｍｌを加えた（ｐＨ＝１）。沈殿を濾別し、水で洗浄した（２×）。固体物質をクロロホルム（１００ｍｌ）に溶解し、水で洗浄し（１×）、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、さらに溶媒を蒸去した。化合物１４−ブロモ−２−テトラデシンの収量は４．４ｇであった（７７％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 1.26 (10 H, シャープ m), 1.3-1.4 (4 H, m), 1.46 (2 H, ５重項, J = 7.0 Hz, ≡CCH₂CH₂-), 1.60 (2 H, ５重項, J = 7.0 Hz, -CH₂CH₂S-), 1.77 (3 H, t, J = 2.6 Hz, CH₃C≡), 2.10 (2 H, tq, J = 2.6, 7.0 Hz, ≡CCH₂-), 2.65 (2 H, t, J= 7.3 Hz, -CH₂S-), 3.25 (2H, s. -SCH₂COOH), 10.40 (1 H, ブロード s, -COOH).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 3.35 (CH₃C≡), 18.61 (≡CCH₂-), 28.50, 28.78, 28.78, 28.97, 29.04, 29.04, 29.34, 29.38, 29.40, 32.70 (-CH₂CH₂S-), 33.37 (-SCH₂CO), 75.20 (MeC≡C-), 79.31 (MeC≡C-), 176.42 (CO).
【００７２】
Ｃ）１つまたはいくつかの位置が置換された非β酸化脂肪酸類似体
脂肪酸鎖の１つまたはいくつかの水素基がフッ素、塩素、ヒドロキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルキルチオ、Ｃ_２−Ｃ_５アシルオキシもしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルからなる群から選択される１つ以上の化合物で置換されていてもよい。置換基は、例えば上記の工程１〜４で別の基質を選択することにより式（Ｉ）の化合物に組み込まれる。
最後に、上記の工程（Ｃ）で製造された化合物を慣例的な水素添加反応により飽和化合物に変換することで、完全飽和し、さらに１以上の位置で置換されたＲ_１基（すなわち、アルキル）を得てもよい。
【００７３】
実施例２
ＴＴＡの毒性調査
毒性調査および突然変異誘発活性に関する試験をＰＣＴ／ＮＯ９９／００１３５で記載されるように行う。
【００７４】
実施例３
本発明の新規化合物の生体活性を上記の実施例節で記載したように、または上記の公報で開示されるように測定する。
【図面の簡単な説明】
【図１】化合物（Ｚ）３−チア−ヘプタデカ−９−エン酸の合成スキーム。
【図２】３−チア−１５−ヘプタデシンの合成スキーム。

Claims

一般式（Ｉ）：
Ｒ１−［ＣＨ _２ −ＣＨ _２］ｎ−Ｓ−ＣＨ _２ −ＣＯＯＲ _２（Ｉ）
（式中、
Ｒ_１は；
１つ以上の二重結合および／もしくは１つ以上の三重結合を有するＣ_６−Ｃ_２４アルケン、ならびに／または
Ｃ_６−Ｃ_２４アルキンであり、かつ
Ｒ _２は水素またはＣ_１−Ｃ_４アルキルを表し、かつ
ｎは０または１〜１１の整数であり、かつ
ただし、Ｒ１がアルキンである場合、炭素−炭素三重結合の１つが（ω−１）炭素と（ω−２）炭素間、もしくは（ω−２）炭素と（ω−３）炭素間、もしくは（ω−３）炭素と（ω−４）炭素間にあり、
ただし、Ｒ_１がアルケンである場合、炭素−炭素二重結合の１つが（ω−１）炭素と（ω−２）炭素間、もしくは（ω−２）炭素と（ω−３）炭素間にある。）
の新規脂肪酸類似体、またはその塩。
Ｒ部分が１つの炭素−炭素三重結合を含んでなる、請求項１に記載の新規脂肪酸類似体。
Ｒ部分が１つの炭素−炭素二重結合を含んでなる、請求項１に記載の新規脂肪酸類似体。
炭素−炭素二重結合がシス配置である、請求項３に記載の新規脂肪酸類似体。
請求項１に定義された式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
− ブロモアルカノールをヒドロキシルについて保護基を導入することによって保護し、
− 得られた保護されたブロモアルカノールにアセチレン基を導入し、次いで必要に応じて、アセチレン基をアルキル化および／または還元し、
− 順次または同時に保護基および臭素化を除去し、
− 得られた化合物を、式Ｈ［Ｓ−ＣＨ _２］ _ｎ −ＣＯＯＲ _２（ここで、Ｒ _２は請求項１に記載の定義と同じ）の化合物と反応させ、次いで必要に応じて、得られた生成物を水素化する、
ことを含む、方法。