JP5116476B2 - ２−アミノ−１，３−プロパンジオール誘導体を有効成分とする肝臓疾患治療剤および肝臓疾患治療方法 - Google Patents

Description

本発明はスフィンゴシン−１−燐酸受容体アゴニストである２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体又は薬学的に許容されるその塩ならびに水和物を有効成分とする新規な肝臓疾患治療剤に関する。

肝障害の一つである肝炎は主に、ウイルス、アルコール、および薬物によって引き起こされるが、その中で最も多いのは、ウイルスを原因とするウイルス性肝炎である。このウイルス性肝炎は肝臓に肝炎ウイルスが住み着くことによって引き起こされ、特にＢ型肝炎とＣ型肝炎は、急性肝障害のみならず肝硬変や肝臓癌への移行率が極めて高いことが知られている（非特許文献１及び２）。わが国の肝癌ならびに肝硬変による死亡は年間４万人を超えているが、このうち約７割にＣ型肝炎ウイルス、約２割にＢ型肝炎ウイルス感染を認めている（非特許文献３）。

近年、Ｂ型Ｃ型肝炎ウイルスの治療薬の開発が進んでいる。しかし、最も期待されるＢ型肝炎治療薬の一つであるラミブジンであっても、すべての患者からＨＶＢを除去することはできない（非特許文献４）。ＨＶＣに対する最近の治療の進歩はインターフェロン（ＩＦＮ）の導入によってもたらされが、ＩＦＮ製剤とリバビリンなどとの併用による効果も十分満足のいくものではない（非特許文献５）。これまでの治療薬の進歩にもかかわらず、ウイルスの持続感染をしている大勢の人々の治療がさらに必要である。何故なら、持続的な肝炎は肝硬変から最終的に肝細胞癌の発現につながるからである。

近年、ウイルス性肝炎はウイルスの消失を伴わない宿主とウイルスとの不完全な免疫学的相互作用として認識されている（非特許文献６）。ウイルスによる肝細胞障害は、ウイルス自身が直接肝細胞を障害するというよりも、患者自身の細胞障害性Ｔ細胞などの免疫細胞がウイルス感染肝細胞を排除するために肝細胞を破壊する、という免疫応答の結果生じるとされている。もちろん、ウイルス肝炎に対する望まれる理想的な治療はウイルスの排除である。ウイルス量はＣ型肝炎同様Ｂ型肝炎においてもその炎症の程度と必然的に相関するものではない。

無症候性のＨＶＢ保有者は高いウイルス量であるにも関わらず肝炎は見られない。肝炎ウイルスを排除できない場合、肝炎ウイルスを持った患者にする別な求める状態として、無症候性ＨＶＢ保有者の状態が存在する。それは、炎症を伴わないウイルスとの共生である。本発明は、肝炎の誘発を抑制する具体的な方法として、Ｔ細胞活性化を抑制する化合物を提供することにある。

なお、本願に記載する２−アミノ−１，３−プロパンジオール誘導体は、既に開示されている化合物（特許文献１及び２）で免疫抑制剤として有用であることが知られている。しかし具体的な疾患として肝臓疾患については何ら記載されてはおらず、また肝炎等に有効であるとの示唆もない。
Annu. Rev. Biochem, 56: 651 (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6547 (1990) 総合臨床， ５４： ４４９ （２００５）． N. Engl. J. Med., 348:848 (2003) N. Engl. J. Med., 347: 975 (2002) J. Clin. Invest., 99: 1472 (1997) ＷＯ２００３／０２９１８４パンフレット ＷＯ２００３／０２９２０５パンフレット

本発明の目的は、スフィンゴシン−１−燐酸受容体アゴニストである２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物を有効成分とする臓器疾患治療薬、特に肝臓疾患治療剤を提供することにある。

本発明者らは、スフィンゴシン−１−燐酸受容体アゴニストである２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物が、優れた臓器疾患治療薬、特に肝臓疾患治療剤であることを見出し、本発明を完成したものである。

即ち、本発明は
１）一般式（１）

［式中、Ｒ_１はハロゲン原子、トリハロメチル基、ヒドロキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、置換基を有しても良いフェニル基、アラルキル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、トリフルオロメチルオキシ基、フェノキシ基、シクロヘキシルメチルオキシ基、置換基を有しても良いアラルキルオキシ基、ピリジルメチルオキシ基、シンナミルオキシ基、ナフチルメチルオキシ基、フェノキシメチル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、炭素数１〜４の低級アルキルチオ基、炭素数１〜４の低級アルキルスルフィニル基、炭素数１〜４の低級アルキルスルホニル基、ベンジルチオ基、アセチル基、ニトロ基又はシアノ基を示し、Ｒ_２は水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、フェネチル基又はベンジルオキシ基を示し、Ｒ_３は水素原子、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、ベンジルオキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、フェニル基、炭素数１〜４の低級アルコキシメチル基又は炭素数１〜４の低級アルキルチオ基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ_２を示し、ｎは１〜４の整数を示す］で表される２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物を有効成分とする肝臓疾患治療剤、
２）前記一般式（１）で表される誘導体が２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］エチル−１，３−プロパンジオール及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物を有効成分とすることを特徴とする１）に記載の肝臓疾患治療剤、
３）前記一般式（１）で表される化合物が２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］エチル−１，３−プロパンジオール塩酸塩ならびにその水和物を有効成分とすることを特徴とする１）に記載の肝臓疾患治療剤、
４）肝臓疾患が、肝炎、脂肪肝、中毒性肝障害、肝硬変又は糖尿病由来の肝臓疾患である上記１）〜３）に記載の肝臓疾患治療剤。
５）一般式（１）

［式中、Ｒ_１はハロゲン原子、トリハロメチル基、ヒドロキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、置換基を有しても良いフェニル基、アラルキル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、トリフルオロメチルオキシ基、フェノキシ基、シクロヘキシルメチルオキシ基、置換基を有しても良いアラルキルオキシ基、ピリジルメチルオキシ基、シンナミルオキシ基、ナフチルメチルオキシ基、フェノキシメチル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、炭素数１〜４の低級アルキルチオ基、炭素数１〜４の低級アルキルスルフィニル基、炭素数１〜４の低級アルキルスルホニル基、ベンジルチオ基、アセチル基、ニトロ基又はシアノ基を示し、Ｒ_２は水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、フェネチル基又はベンジルオキシ基を示し、Ｒ_３は水素原子、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、ベンジルオキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、フェニル基、炭素数１〜４の低級アルコキシメチル基又は炭素数１〜４の低級アルキルチオ基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ_２を示し、ｎは１〜４の整数を示す］で表される２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物を有効成分として用いることを特徴とする肝臓疾患の治療方法、
６）肝臓疾患が、肝炎、脂肪肝、中毒性肝障害、肝硬変又は糖尿病由来の肝臓疾患である上記５）に記載の肝臓疾患の治療方法、に関するものである。

本発明はスフィンゴシン−１−燐酸受容体アゴニストである２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物を有効成分とする臓器疾患治療薬、特に肝臓疾患治療剤を提供する。本発明によって肝炎、脂肪肝、中毒性肝障害、肝硬変又は糖尿病由来の肝臓疾患等の有効な治療方法が提供される。

Ｃｏｎ ＡによるＡＬＴ上昇に対するＫＲＰ−２０３の抑制効果を示すグラフ（p: Fisher’s PLSD検定値）。 Ｃｏｎ Ａで誘発される肝臓への炎症細胞浸潤および肝細胞壊死に対するＫＲＰ−２０３の抑制作用（ヘマトキシリン-エオジン染色、100倍）を示す顕微鏡写真。図中、Aはコントロール、BはKRP-203 1mg/kg投与を示す。 Ｃｏｎ Ａで誘発される肝臓へのＣＤ４^＋ Ｔ細胞浸潤に対するＫＲＰ−２０３の抑制作用（抗CD4抗体による免疫染色、200倍）を示す顕微鏡写真。図中、A：コントロール、B：KRP-203 1mg/kg投与を示す。

本発明の新規なスフィンゴシン−１−燐酸受容体アゴニストである２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体としては下記一般式（１）

［式中、Ｒ_１はハロゲン原子、トリハロメチル基、ヒドロキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、置換基を有しても良いフェニル基、アラルキル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、トリフルオロメチルオキシ基、フェノキシ基、シクロヘキシルメチルオキシ基、置換基を有しても良いアラルキルオキシ基、ピリジルメチルオキシ基、シンナミルオキシ基、ナフチルメチルオキシ基、フェノキシメチル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、炭素数１〜４の低級アルキルチオ基、炭素数１〜４の低級アルキルスルフィニル基、炭素数１〜４の低級アルキルスルホニル基、ベンジルチオ基、アセチル基、ニトロ基又はシアノ基を示し、Ｒ_２は水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、フェネチル基又はベンジルオキシ基を示し、Ｒ_３は水素原子、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、ベンジルオキシ基、炭素数１〜７の低級アルキル基、フェニル基、炭素数１〜４の低級アルコキシメチル基又は炭素数１〜４の低級アルキルチオ基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ_２を示し、ｎは１〜４の整数を示す］で表される化合物又は薬学的に許容される塩ならびに水和物である。

本発明の一般式（１）において、「ハロゲン原子」とはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表し、「トリハロメチル基」とはトリフルオロメチル基、トリクロロメチル基を表し、「炭素数１〜７の低級アルキル基」とは、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチルなどの直鎖もしくは分岐した炭素数１〜７の炭化水素が挙げられる。

「置換基を有しても良いフェノキシ基」とは、ベンゼン環上の任意の位置にフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子、トリフルオロメチル基、炭素数１〜４の低級アルキル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基を有するものが挙げられる。「アラルキル基」、「アラルキルオキシ基」の「アラルキル基」とはベンジル基、ジフェニルメチル基、フェネチル基、フェニルプロピル基が挙げられる。また「炭素数１〜４の低級アルコキシ基」、「炭素数１〜４の低級アルキルチオ基」、「炭素数１〜４の低級アルキルスルフィニル基」、「炭素数１〜４の低級アルキルスルホニル基」などの「低級アルキル基」とは、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルなどの直鎖もしくは分岐した炭素数１〜４の炭化水素を表し、「置換基を有しても良いアラルキル基」とは、ベンゼン環上の任意の位置にフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子、トリフルオロメチル基、炭素数１〜４の低級アルキル基、炭素数１〜４の低級アルコキシ基を有するものが挙げられる。

本発明における一般式（１）で表される化合物の薬理学的に許容される塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、メタンスルホン酸塩、クエン酸、酒石酸塩のような酸付加塩が挙げられる。

より具体的には２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］エチル−１，３−プロパンジオール又はその塩酸塩が挙げられる。

一般式（１）で示される本発明化合物は、例えばＷＯ０３／０２９１８４パンフレットおよびＷＯ０３／０２９２０５パンフレットなどで開示されており、これらの公報の方法によって製造することができる。

このようにして得られる本発明化合物及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物は、臓器疾患治療薬、特に肝臓疾患治療剤として有用である。

本発明の治療剤は全身的或いは局所的に、経口若しくは非経口で投与される。化合物の剤形は、化合物の性状に応じて変更可能であるが、経口製剤または非経口製剤として調製可能である。すなわち有効成分を生理学的に許容されうる担体、賦形剤、結合剤、希釈剤などと混合し、顆粒剤、粉剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、座薬、懸濁剤、溶液剤などを調整することができる。

臨床的な投与量としては、使用する用途、体重、年齢、治療を受ける状態により変化するが、通常１回量として一人あたり０．０１〜１００ｍｇ、好ましくは０．１〜５ｍｇ、１日１〜３回が好都合である。

（実施例）
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。本実施例では特に一般式の化合物のうち、２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］エチル−１，３−プロパンジオール塩酸塩（以下、「ＫＲＰ−２０３」と略記する）について述べるが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。

Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ Ａで誘発される肝炎の抑制作用
マウスは日本チャールズリバーから雄性ＢＡＬＢ／ｃ８〜１２週齢のものを購入し使用した。Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ Ａ（以下 Ｃｏｎ Ａ）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解し、マウスの静脈内に４０ｍｇ／ｋｇになるように０．２ｍｌを投与した。ＫＲＰ−２０３は蒸留水に懸濁し、必要用量になるように体重１０ｇ当たりに０．１ｍｇをＣｏｎ Ａ投与２４時間前に経口投与した。マウスをＣｏｎＡ投与２４時間後に屠殺し、血清中のトランスアミナーゼ活性を測定した。また、３０ｍＬの０．１％ ＥＤＴＡ−ＰＢＳで肝臓を還流し、肝浸潤物を回収した（文献、Eur.
J. Immunol., 17: 37,1987）。抹消血中のリンパ球の混入を避けるため、回収されるはじめの０．１％ ＥＤＴＡ−ＰＢＳ ２．５ｍＬは廃棄した。収集された細胞は抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４５／Ｂ２２０抗体、抗ＣＤ１１ｂ抗体、抗Ｌｙ−４９Ｃ抗体で染色しＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒで計数した。

さらに、組織学的検討を加えるために以下のように標本を作製した。肝臓を１０％ホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、切片を作製した。それをヘモキシリン−エオジン染色し細胞浸潤の様子を観察した。また、液体窒素でＴｉｓｓｕｅ Ｔｅｋ中に凍結し、Ｃｒｙｏｓｔａｔにて凍結切片とし、アセトンで固定した。その切片を抗マウスＣＤ４抗体、ビオチン化抗ラット−ＩｇＧ抗体、ストレプトアビジン−ａｌｅｘａ４８８を用いて免疫染色し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の浸潤を観察した。
（結果）
Ｃｏｎ Ａ誘発肝炎モデルにおけるＡＬＴ活性値を測定した結果を図１に示した。ＫＲＰ−２０３をＣｏｎ Ａ投与２４時間前に経口投与し、Ｃｏｎ Ａ投与２４時間後の血清中ＡＴＬ活性値を図１に示した。Ｃｏｎ Ａにより肝炎が誘発されると肝障害の指標となるＡＴＬが上昇するが、ＫＲＰ−２０３の０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの前投与によってＡＴＬの上昇が有意に抑制された。さらに、０．０１ｍｇ／ｋｇの低投与量群でも抑制する傾向が観察された。
肝臓に浸潤した細胞の種類と数について表１に示した。ＫＲＰ−２０３の投与群では浸潤細胞の総数が約５０％減少した。特にＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋のＴ細胞やＢ２２０^＋のＢ細胞の浸潤は著明に抑制された。ＣＤ８^＋のＴ細胞およびＮＫ−Ｔ細胞の浸潤抑制は軽度であり、ＮＫ細胞や単球の浸潤にはほとんど影響が見られなかった。

組織学的所見を図２および図３に示した。無処置群の肝臓ではＣｏｎ Ａによって単核球や多形核球の浸潤および塊状の壊死性領域が観察された。また、空胞化した肝細胞も見られた（図２Ａ）。ＫＲＰ−２０３を処置したマウスの肝臓では単核球の浸潤や壊死性変化はほとんど観察されなかった（図２Ｂ）。また、免疫染色によりＣＤ４^＋ Ｔ細胞を観察するとコントロール群（図３Ａ）ではＣＤ４^＋ Ｔ細胞の浸潤が認められたが、ＫＲＰ−２０３処置群（図３Ｂ）では認められなかった。

以上のことから、ＫＲＰ−２０３は肝臓へのＴ細胞の浸潤を抑制することで炎症の惹起および伸展を抑制し、肝炎の発症の予防および治療に利用できることが明らかになった。

処方例：カプセル剤（１カプセル中）
組成
化合物（ＫＲＰ−２０３） ０．１ｍｇ
Ｄ−マンニトール ２４７．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２．５ｍｇ
即ち、化合物とＤ−マンニトールを混合し、さらにステアリン酸マグネシウムを混合して混合末を調製した。この混合末をカプセルに充填してカプセル剤を製造した。

上記のように、本発明化合物はＣｏｎ Ａ誘発肝炎モデルにおいて、肝臓へのＴ細胞の浸潤、集積を抑制することで肝炎の発症、伸展を抑制する効果を示すことが明らかとなった。従って、２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物は肝臓疾患治療剤として有用である。

さらに、本願化合物は肝臓疾患以外にも活性化したリンパ球が病態形成に主に関与する臓器疾患に対して本発明化合物は有用である。このような臓器疾患としては、糸球体腎炎・尿細管間質障害当の腎疾患、動脈硬化等の血管障害、その他の自己免疫性の臓器障害（自己免疫性肝炎・原発性胆汁性肝硬変等の肝炎、インスリン依存型糖尿病等の膵炎、バセドウ病・橋本病等の甲状腺宴、腎炎、多発性硬化症、重症筋無力症等）、臓器虚血再還流障害に伴う腎臓・心臓病等の臓器障害が考えられる。さらに、感染症によりリンパ球が活性化されることにより起こる疾患が考えられる。具体的には、ウイルス性心筋炎、ブドウ球菌に関連して起こる腎炎・毒素ショック症候群等、連鎖球菌等に関連して起こる腎炎・毒素ショック様症候群・乾癬等、エルシニア感染症、川崎病等の治療に有用である。

従って、本発明の２−アミノ−１，３−プロパンジオール構造を有するジアリールスルフィド又はジアリールエーテル誘導体及び薬学的に許容されるその塩ならびに水和物は臓器疾患治療薬、特に肝臓疾患治療薬として有用である。

Claims (2)

1. ２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］エチル−１，３−プロパンジオール又は薬学的に許容されるその塩又はそれらの水和物を有効成分とすることを特徴とする肝炎治療剤。
2. ２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］エチル−１，３−プロパンジオール塩酸塩又はその水和物を有効成分とすることを特徴とする請求項１に記載の肝炎治療剤。