JP5114692B2 - 抗アレルゲン組成物およびアレルゲン低減化方法 - Google Patents
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(抗アレルゲン組成物実施例)
下記、表1に示す組成のものを、充分攪拌することにより、均一な溶液を得た。なお、表に示した配合比率はすべて重量%である。
標準ハウスダストに含まれるダニアレルゲン Derf2 約1μg/1mL{リン酸緩衝液(pH7.2)}に対し、実施例1〜3と対照として蒸留水をそれぞれ200μL反応させた。これら試料について Derf2酵素免疫測定法(ELISA)のサンドイッチ法にてダニアレルゲン低減化効果の測定を行った。まず、リン酸緩衝液(pH7.4)で1.25μg/mLに希釈した抗Derf2 モノクローナル抗体15E11を、F16 MAXISORP NUNC−IMMUNO MODULEプレート(NUNC社製)の1ウェルあたり100μLずつ添加し、4℃にて3日以上感作させた。感作後、液を捨て、ブロッキング試薬{1重量%牛血清アルブミン+リン酸緩衝液(pH7.2)}を1ウェルあたり200μLずつ添加し、37℃、60分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液(pH7.2)にてプレートを洗浄した。次に、ダニアレルゲンと上記組成物を反応させて得られた抽出液を1ウェルあたり100μLずつ滴下し、37℃、60分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液(pH7.2)にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識した抗Derf2モノクローナル抗体をリン酸緩衝液{pH7.2、1重量%牛血清アルブミン及び0.05重量%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート含有}で200μg/mLに溶解し、それをリン酸緩衝液(pH7.2、1重量%牛血清アルブミン及び0.05重量%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート含有}で1200倍希釈した液を、1ウェルあたり100μLずつ添加した。37℃、60分間反応させた後、先ずリン酸緩衝液(pH7.2)でプレートを洗浄した。0.1mol/Lリン酸緩衝液(pH6.2)6.5mLにオルト−フェニレンジアミンジヒドロクロライド(13mg Tablet、和光純薬工業株式会社製)一錠と30%過酸化水素水6.5μLを加えたものを1ウェルあたり100μLずつ添加し、37℃、3分間反応させた。その後直ちに、1mol/L H2SO4を50μLずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計(Bio−Rad Laboratories Inc.製)で吸光度(OD490nm)を測定した。結果を表2に示した。
標準スギ花粉アレルゲン Cryj1(株式会社林原生物化学研究所製) 約20ng/1mL{リン酸緩衝液(pH7.2)}に対し、実施例1または3を200μL反応させた。これら試料について Cryj1酵素免疫測定法(ELISA)のサンドイッチ法にてスギ花粉に対する抗アレルゲン効果の測定を行った。まず、リン酸緩衝液(pH7.4)で2μg/mLに希釈した抗Cryj1モノクローナル抗体013を、F16 MAXISORP NUNC−IMMUNO MODULEプレート(NUNC社製)の1ウェルあたり100μLずつ添加し、4℃にて3日以上感作させた。感作後、液を捨て、ブロッキング試薬{1重量%牛血清アルブミン+リン酸緩衝液(pH7.2)を1ウェルあたり200μLずつ添加し、37℃、60分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液(pH7.2)にてプレートを洗浄した。次に、スギ花粉アレルゲンと上記組成物を反応させて得られた抽出液を1ウェルあたり100μLずつ滴下し、37℃、60分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液(pH7.2)にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識した抗Cryj1モノクローナル抗体053をリン酸緩衝液{pH7.2、1重量%牛血清アルブミン及び0.05重量%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート含有}で100μg/mLに溶解し、それをリン酸緩衝液{pH7.2、1重量%牛血清アルブミン及び0.05重量%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート含有}で1200倍希釈した液を、1ウェルあたり100μLずつ添加した。37℃、60分間反応させた後、先ずリン酸緩衝液(pH7.2)でプレートを洗浄した。0.1mol/Lリン酸緩衝液(pH6.2)6.5mLにオルト−フェニレンジアミンジヒドロクロライド(13mg Tablet、和光純薬工業株式会社製)一錠と30%過酸化水素水6.5μLを加えたものを1ウェルあたり100μLずつ添加し、37℃、7分間反応させた。その後直ちに、1mol/L H2SO4を50μLずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計(Bio−Rad Laboratories Inc.製)で吸光度(OD490nm)を測定した。結果を表3に示した。
綿ブロード布(白色)またはナイロン布(白色)に実施例4または比較例としてタンニン酸の3%水溶液(特開昭61−44821号該当品)を2.0%o.w.fで25℃において20分間浸漬し、しぼり率100%で処理後、105℃で乾燥させた。これらの生地について抗アレルゲン試験を行った。
生地(5cm×5cm)に標準ハウスダスト0.005gを付着させ、1時間後にチャック付きポリ袋に投入し、リン酸緩衝液{pH7.2、1重量%牛血清アルブミン及び0.05重量%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート含有}10mLを用いて抽出した。遠心分離後のこれら試料について Derf2酵素免疫測定法(ELISA)のサンドイッチ法にてダニアレルゲン低減化効果の測定を行った。まず、リン酸緩衝液(pH7.4)で1.25μg/mLに希釈した抗Derf2 モノクローナル抗体15E11を、F16 MAXISORP NUNC−IMMUNO MODULEプレート(NUNC社製)の1ウェルあたり100μLずつ添加し、4℃にて3日以上感作させた。感作後、液を捨て、ブロッキング試薬{1重量%牛血清アルブミン+リン酸緩衝液(pH7.2)}を1ウェルあたり200μLずつ添加し、37℃、60分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液(pH7.2)にてプレートを洗浄した。次に、ダニアレルゲンと上記組成物を反応させて得られた抽出液を1ウェルあたり100μLずつ滴下し、37℃、60分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液(pH7.2)にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識した抗Derf2モノクローナル抗体を蒸留水で200μg/mLに溶解し、それをリン酸緩衝液{pH7.2、1重量%牛血清アルブミン及び0.05重量%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート含有}で1200倍希釈した液を、1ウェルあたり100μLずつ添加した。37℃、60分間反応させた後、先ずリン酸緩衝液(pH7.2)でプレートを洗浄した。0.1mol/Lリン酸緩衝液(pH6.2)6.5mLにオルト−フェニレンジアミンジヒドロクロライド(13mg Tablet、和光純薬工業株式会社製)一錠と30%過酸化水素水6.5μLを加えたものを1ウェルあたり100μLずつ添加し、37℃、3分間反応させた。その後直ちに、1mol/L H2SO4を50μLずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計(Bio−Rad Laboratories Inc.製)で吸光度(OD490nm)を測定した。また外観を観察し、変色の有無を確認した。結果を表4に示した。
Claims (2)
- 1,4−ビス(3,3’−(1−デシルピリジニウム)メチルオキシ)ブタンジブロミドを含有することを特徴とする抗アレルゲン組成物。
- 請求項1に記載の抗アレルゲン組成物を環境中に散布することによってアレルゲンを除去するアレルゲン低減化方法。
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