JP4955659B2

JP4955659B2 - 糖及びその類似体を骨格とする分子輸送体並びにその製造方法

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Publication number: JP4955659B2
Application number: JP2008508732A
Authority: JP
Inventors: チュン、スン−ケ; マイティ、カウスタブ・クマー; リ、ウ・シール; ジョン、オック−ユム; ユ、ソク−ホ
Original assignee: Academy Industry Foundation of POSTECH
Current assignee: Academy Industry Foundation of POSTECH
Priority date: 2005-04-28
Filing date: 2005-06-29
Publication date: 2012-06-20
Anticipated expiration: 2025-06-29
Also published as: KR20060112791A; US8048996B2; US8058413B2; US7846975B2; US20080249296A1; EP1885735B1; KR100699279B1; EP1885735A4; US20100330671A1; US20100330608A1; JP2008539226A; WO2006115312A1; EP1885735A1

Description

本発明は、多数のグアニジン残基及び糖骨格またはその類似体からなる、改善された生体膜透過性を有する分子輸送体、並びにその製造方法に関する。

細胞の細胞膜（ｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅ）は、細胞の細胞質（ｃｙｔｏｐｌａｓｍ）を外部環境から分離しており、これは、主に、リン脂質二重層と、この二重層の内部に埋め込まれ又は表面に結合するタンパク質から成っている。一般的に細胞膜は必須物質の細胞内外への出入りを制御する門番役（ｇａｔｅｋｅｅｐｅｒ）としての役目をする。しかし、この細胞膜は、透過性障壁としても作用し、様々な有用な治療製剤の通過を遮断する。一般的に、親水性分子、高電荷分子、核酸または遺伝子のような巨大分子などは細胞膜を通り難い。従って、薬物及び巨大分子を細胞内に輸送するための確かな手段が求められている。

従来、数多くの輸送体分子、例えば脂質、重合体及びデンドリマーが、生体膜を通して物質を輸送するために提案されたが、これらはしばしば、細胞内で不溶性を示すかまたは生分解されず、そのため沈殿を形成して毒性を誘発する問題点があった。

タンパク質の細胞膜透過を可能とするタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ，ｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｄｏｍａｉｎ）を有するタンパク質としては、表１に示すように、ＨＩＶ−１Ｔａｔペプチド、アンテナペディアホメオドメインタンパク質（Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ（Ａｎｔｐ）ｈｏｍｅｏｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ）、単純ヘルペスウイルスタンパク質ＶＰ２２、ＮＬＳ（ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌｓｅｑｕｅｎｃｅ）配列などが含まれる。

前記タンパク質は、細胞に結合する何れかの特定の輸送体または受容体に頼ることなく、生体膜を透過できるようである。さらに、これらはアルギニン及びリジンのような塩基性アミノ酸を高い比率で含有する。ＨＩＶウイルス再生産に必要なＴａｔ（ｔｒａｎｓａｃｔｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｏｒ）タンパク質の塩基性領域（つまり、４９−５７アミノ酸）は、タンパク質の細胞膜の透過過程において重要な役割を持つことが報告された。多数のアルギニンのユニットを有する多様なオリゴペプチドを合成し、これらを分子輸送体として活用するための多くの研究が報告されてきた。

これらの研究から、８〜９個のアルギニン残基を有するオリゴマーが最も高い透過性を示し、またそれに結合した分子の生体膜を介す輸送の機能の向上において最も効果的であることが分かった。このことは、アルギニンのグアニジン基が、それに結合した分子の生体膜を介す輸送に重要な役割をすることを示唆する。

ウェンダー（Ｗｅｎｄｅｒ）らは、ペプチドの生体膜透過性がペプチド内におけるグアニジン基の個数、リンカー鎖（ｌｉｎｋｅｒｃｈａｉｎ）の長さ及びキラリティー等に依存するという事実に基づいて、ペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）分子輸送体を作製した。Ｊｕｒｋａｔ細胞に対するＦＡＣＳ分析によって、Ｌ−アルギニン９量体がＴａｔタンパク質（４９−５７アミノ酸）よりも生体膜透過輸送において２０倍効果的であり、Ｄ−アルギニン９量体もまた、一層効果的な透過輸送効率を示すことが確認された（Ｐ．Ａ．Ｗｅｎｄｅｒ，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７：１３００３，２０００）。これらの結果は、特定数のグアニジン基を有するペプチドの透過性が、アミノ酸のキラリティーによりあまり影響を受けないことを示唆する（米国特許第６，４９５，６６３号、韓国公開特許公報第２００１−１２８０９号）。

しかし、このようなポリアルギニンペプチドまたは関連するペプトイド分子は生体内で毒性を示すのみならず、早い速度で代謝された後に肝臓と腎臓で速やかに除去されるという問題点がある。さらに、多数のグアニジン基を有するペプチドまたはペプトイドが塩基性環境でのみ螺旋構造を有するということは、これらの細胞膜透過性が、その２次元または３次元構造よりも、陽性に荷電したグアニジン基に主に影響を受けることを示す。

本発明者らは、陽性荷電されたグアニジン基を糖または糖類似体に導入することで高密度の官能性を有した直鎖状または分枝状の分子輸送体を開発し、そのような分子輸送体が、これらに共有的またはイオン的に結合した様々な生理活性分子の生体膜輸送を顕著に向上させることを確認することによって本発明を完成するに至った。
米国特許第６，４９５，６６３号韓国公開特許第２００１−１２８０９号Ｐ．Ａ．Ｗｅｎｄｅｒ，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７：１３００３，２０００

従って、本発明の目的は、改善された生体膜透過性を有し、生理活性分子の生体膜輸送に効果的な糖またはその類似体を骨格とする分子輸送体、ならびにその製造方法を提供することである。

本発明の他の目的は、前記糖またはその類似体を骨格とする分子輸送体を含む、細胞内へ生理活性分子を送達するための組成物を提供する。

本発明のまた他の目的は、前記糖またはその類似体を骨格とする分子輸送体を用いて細胞内へ生理活性分子を送達する方法を提供することである。

本発明の一側面に関して、下記の式１から５で表される、直鎖状または分枝状のグアニジン基を有する、糖または糖類似体を骨格とする分子輸送体化合物が提供される。

式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＲ’、−（ＣＨ_２）_ｌＣＯ_２Ｒ’’、−ＣＯＲ’’’、−ＳＯ_２Ｒ’’’’または生理活性分子であり；Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’はそれぞれ独立に、水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキルまたは生理活性分子であり；ｍは２から５の整数；およびｌは１から５の整数であり；
Ｒ_３は、

であり、ｎは１から１２の整数である。

式中、
Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に、水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＲ’、−（ＣＨ_２）_ｌＣＯ_２Ｒ’’、−ＣＯＲ’’’、−ＳＯ_２Ｒ’’’’または生理活性分子であり；Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキルまたは生理活性分子であり；ｍは２から５の整数；およびｌは１から５の整数であり；
Ｒ_３は、

であり、ここで、ｎは１から１２の整数である。

式中、
Ｘは、

であり、
Ｒ_１は−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＲ’であり、ここで、ｍは２から９の整数であり、Ｒ’は水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキルまたは生理活性分子であり；
Ｒ_２は、

であり、ここで、ｎは１から１２の整数である。

式中、
Ｒ_１は、

であり、ここでｎは１から１２の整数である。

前記式中、
Ｒ_１は、

であり、ここでｎは１から１２の整数である。

本発明による式１及び２の化合物は、糖誘導体のヒドロキシル末端に８つのグアニジン基が導入された分子輸送体であり、これは、ここに分枝鎖が導入される場合、骨格中の標的官能基を高い密度に維持することが可能なものである。式１の化合物は、ソルビトール、マンニトールまたはガラクチトールの骨格を有するアルジトール（ａｌｄｉｔｏｌ）誘導体及びその塩を含み、例えば、下式６のソルビトール誘導体が挙げられる。また、式２の化合物は、ｍｙｏ−イノシトール（ｉｎｏｓｉｔｏｌ）またはｓｃｙｌｌｏ−イノシトールの骨格を有するイノシトール誘導体及びその塩を含み、例えば、下式７から９の化合物が挙げられる。

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は式１及び２にて定義される通りである。

さらに、式３の分子輸送体化合物は、側鎖に７つのグアニジン基を有した二糖類（ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）骨格を有し、その好適な例として下式１０及び１１の化合物並びにこれらの塩が挙げられる。

式中、Ｒ_１及びＲ_２は式３に定義される通りである。

式１０及び１１の化合物は二糖類誘導体であり、ここにおいて、式１０の化合物はスクロースの骨格を、式１１の化合物はα−ラクトース、β−ラクトースまたはマルトースの骨格を有する。

前記式４及び５の化合物は、糖誘導体に６つのグアニジン基が導入された分子輸送体である。前記式４の化合物は、ソルビトール、マンニトール、またはガラクチトールの骨格を有するアルジトール誘導体及びその塩を含み、例えば、式１２の化合物であるソルビトール誘導体及びその塩が挙げられる。さらに、前記式５の化合物は、ｍｙｏ−イノシトールまたはｓｃｙｌｌｏ−イノシトールの骨格を有するイノシトール誘導体及びその塩を含み、例えば、下式１３及び１４の化合物並びにこれらの塩が挙げられる。

式中、Ｒ_１は前記式４及び５に定義される通りである。

前記式１から５、さらに具体的には式６から１４の分子輸送体化合物は、生理活性分子に結合できる官能基を有しており、これにより、そこに結合した標的分子の生体膜を通した輸送を容易に行うことができる。ここで、生理活性分子とは、生物体における好ましくない既存の症状の診断、予防または治療のために生理的過程の調節に利用できるものであって、当該分野で公知である天然の、合成のまたは遺伝子操作による化学的または生物学的化合物をいう。好ましくは、本発明による分子輸送体化合物に結合することで細胞内に送達される生理活性分子には、分子量が１００〜１，５００ｇ／ｍｏｌの有機化合物、高分子化合物（例えば、ペプチド及び核酸）および診断試薬などが含まれる。本発明による分子輸送体化合物は、前記式６から１４に示したように、様々な鎖長の直鎖または分枝鎖を介してグアニジン基を保持した糖または糖類似体の骨格を有し、これによって優れた水溶性及び生体膜透過性を示す。従って、本発明による分子輸送体化合物は、医薬品、診断試薬または蛍光物質のような生理活性分子に共有結合またはイオン結合によって結合することができ、生体膜、例えば細胞膜、核膜または血液脳関門（ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ）を容易に通過することができる。

また、本発明は、以下の段階を含む、本発明に関する分子輸送体化合物を製造する方法を提供する：
１）ヒドロキシル基のアシル化反応を通じてアミノ酸側鎖を導入して中間体化合物を得る段階；
２）段階１）で得た化合物のアミノ酸側鎖の末端アミノ基に、保護されたグアニジン基を導入する段階；及び
３）段階２）で得た化合物からグアニジン基の保護基を除去し、分子輸送体化合物を提供する段階。

この時、前記製造方法において段階１）及び２）の代りに、最初に、保護されたグアニジン基を有した末端アミノ酸側鎖を作製し、その後、アシル化反応により、保護された中間体化合物のヒドロキシ基に予め作製した側鎖を導入することも可能である。

より具体的には、本発明による分子輸送体の製造方法は、糖またはその類似体の骨格の種類に応じて、以下のように説明され得る。

式１及び２、好ましくは式６から９の分子輸送体化合物は、それぞれ、下式１５から１８の中間体化合物を出発原料として用いて、以下の段階によって作製される：
１）保護された中間体のヒドロキシル基にアシル化反応によってアミノ酸側鎖を導入する段階；
２）前記末端アミノ酸側鎖から保護基を除去する段階；
３）前記アミノ酸側鎖の末端アミノ基にグアニジン基を導入する段階；
４）前記段階３）で得た化合物のヒドロキシル基から保護基を除去し、生理活性分子に結合させる段階；及び
５）前記段階４）で得た化合物のグアニジン基からアミノ保護基を除去する段階。

式中、Ｒ_１及びＲ_２は式１及び２に定義される通りである。

前記式６の化合物を製造するための鍵となる中間体である式１５の化合物は、Ｄ−グルコースといったＤ−アルドヘキソース（ａｌｄｏｈｅｘｏｓｅ）の１，６−ＯＨ位に位置選択的に保護基が導入されたアルジトール誘導体であって、下記反応式１で表される過程により製造することができる。

例としてＤ−グルコースを出発原料として用いた前記反応式１によれば、まず、Ｄ−グルコースの６−ＯＨに選択的にトリチル（Ｔｒ）保護基を導入し；還元剤、例えば、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）による還元反応を通じて直鎖の形態であるＤ−ソルビトールを製造し；および、その１−ＯＨに選択的にｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）基を導入することで、式１５（Ｒ_１＝ＴＢＤＰＳ，Ｒ_２＝Ｔｒ）の中間体を製造することができる。

また、式７の化合物の製造のための式１６の中間体は、ｍｙｏ−イノシトールを出発原料として２，３：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−ｍｙｏ−イノシトールを合成し；その１−ＯＨまたは４−ＯＨに位置選択的に、異なる保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）またはベンジル（Ｂｎ）保護基を導入することで製造することができる。

式８の化合物の製造のための式１７の中間体は、ｍｙｏ−イノシトールを出発原料として１，６：３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−ｍｙｏ−イノシトールを製造し；その２−ＯＨまたは５−ＯＨに位置選択的に、異なる保護基、例えばｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）またはベンジル（Ｂｎ）保護基を導入することで製造することができる。

また、式９の化合物の製造のための式１８の中間体は、ミツノブ反応（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕｒｅａｃｔｉｏｎ）を用いてｍｙｏ−イノシトールの２−ＯＨの立体化学を反転させ；それをもとに１，６：２，４−ジ−Ｏ−イソプロピレン−ｓｃｙｌｌｏ−イノシトールを製造し；及び、その２−ＯＨまたは５−ＯＨに位置選択的に、異なる保護基、例えばＰＭＢ、ベンゾイル（Ｂｚ）またはＢｎ保護基を導入することで製造することができる。

段階１）において、前述のように、様々な長さのアミノ酸側鎖が、アシル化反応によって保護された中間体に導入される。式１６から１８の中間体（式１５の中間体を除く）は、アシル化反応の前に、アセトニド保護基の脱保護に供される。アシル化反応は、各中間体化合物を、縮合剤（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇａｇｅｎｔ）、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩の存在下で、アミノ保護基、例えば、カルボベンゾキシ（ｃａｒｂｏｂｅｎｚｏｘｙ）（Ｃｂｚ）基で保護された様々な側鎖長を有するアミノ酸と反応させることで行われる。本発明に用いられる様々な側鎖長を有するアミノ酸は、市販のω（ｏｍｅｇａ）−アミノ酸から得ることができ、例えば末端のアミノ基が適切な保護基で保護されたＮ，Ｎ−ジ−アミノプロピルアミノカプロン酸（ａｍｉｎｏｃａｐｒｏｉｃａｃｉｄ）の誘導体が好ましい。

前記アシル化反応は、それぞれの中間体の官能基１当量当たり、様々な側鎖長を有するアミノ酸を１．５から２．５当量を加えて２５から４０℃の温度で１６から７２時間行うことができる。

段階２）において、アミノ保護基は、側鎖の末端アミノ基から除去される。脱保護は、触媒（例えばパラジウム（Ｐｄ）、ニッケル、または白金）を段階１）で得られる化合物に添加し、水素雰囲気下で混合物を撹拌後、濾過して行うことができる。

段階３）において、前記段階２）で得られた化合物の脱保護されたアミノ基は、有機溶媒中、塩基存在下で、前記化合物とＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（Ｎ，Ｎ’−ｄｉ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−ｔｒｉｆｌｙｌｇｕａｎｉｄｉｎｅ）またはＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｓ−メチルイソチオ尿素（Ｎ，Ｎ’−ｄｉ−Ｂｏｃ−Ｓ−ｍｅｔｈｙｌｉｓｏｔｈｉｏｕｒｅａ）とを反応させ、グアニジン基に変換される（Ｔ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６５：９０５４，２０００；Ａ．Ｅ．Ｍｉｌｌｅｒ及びＪ．Ｊ．Ｂｉｓｃｈｏｆｆ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ７７７，１９８６）。この時、側鎖の末端アミン残基にグアニジン基を導入し、その後、グアニジン基を有した側鎖を、アシル化反応によって中間体骨格に直接導入することができる。前記段階で用いられる有機溶媒の例は、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、クロロホルム、酢酸エチル、１，４−ジオキサンなどが挙げられ、塩基としては、トリエチルアミンなどが挙げられる。前記反応は、２５〜４０℃の温度で１６〜７２時間行うことができる。

段階４）において、前記段階３）で得た化合物から保護基を除去し、露出したヒドロキシル基を、生理活性分子またはその誘導体との結合に使用してよい。また、グアニジン基を有する化合物から保護基の１つを選択的に除去し、蛍光物質、例えばダンシル（ｄａｎｓｙｌ；５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホニル）、ＦＩＴＣ（フルオレセイン）、ローダミン（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）を前記化合物に結合させることで導入することができる。

最後に、前記段階４）で得た化合物のグアニジン基から保護基を除去して、本発明による式６から９の分子輸送体化合物が得られる。

下記反応式２は式１５の中間体から式６の分子輸送体化合物を製造する過程を例示したものである。

また、二糖類骨格を有する分子輸送体の代表的な例として用いられた式１０及び１１の化合物は、それぞれ下式１９及び２０の中間体から、前記反応式２に示される方法と同様に製造することができる。

式１９及び２０の中間体は、それぞれスクロースおよびラクトースの１’−ＯＨまたは１−ＯＨ位に位置選択的に側鎖を導入することで、式１０及び１１の化合物の製造に使用してよい。より具体的には、式１９の中間体は、プロテイナーゼＮ（ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＮ）といった酵素を用いて、スクロースの１’−ＯＨ位に予め作製した側鎖を選択的に導入することによって製造され；式２０の中間体は、ラクトースのベンゾイル化反応を行い、その１−ＯＨ位からベンゾエート保護基を選択的に除去し、その後、側鎖アルコールを有する糖誘導体のグリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）によって製造される。

式１０の化合物は、式１９の中間体に、Ｎ−Ｂｏｃ（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルロキシカルボニル）で保護された多様な側鎖長を有するオメガアミノ酸（ω−ａｍｉｎｏａｃｉｄ）、例えば４−アミノブタン酸、６−アミノカプロン酸または８−アミノカプリル酸とアシル化反応させ；そのアミン末端残基から保護基を除去し；そこにグアニジン基を導入することで製造される。このように製造された式１０の化合物のアジド官能基を、パラジウム触媒および水素雰囲気下で、アミンに還元させれば、医薬品、蛍光物質及び診断試薬のような生理活性分子をアミノ基に結合させることができる。

式１１の化合物は、上述する式１０の化合物の製造と同様な方法によって、式２０の中間体からベンゾエート保護基を除去し；そこに、アシル化反応によって様々な側鎖長のωアミノ酸を導入し；その末端アミン残基から保護基を除去し；および、そこにグアニジン基を導入して製造することができる。

下記の反応式３は、式１９の中間体から式１０の化合物を製造する過程を例示したものである。

また、６つのグアニジン基を有する式４及び５の化合物、より具体的には式１２〜１４の化合物は、下記の式２１のＤ−ソルビトールを含むアルジトール類（Ｊ．Ｓ．Ｂｒｉｍａｃｏｍｂｅ，及びＪ．Ｍ．Ｗｅｂｂｅｒｉｎ「ＴｈｅＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ：ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｅｄ．Ｗ．Ｐｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｈｏｒｔｏｎ，２ｎｄＥｄ．１Ａ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９７２）、および式２２及び２３のｍｙｏ−及びｓｃｙｌｌｏ−イノシトールを含む何れかのイノシトールの立体異性体（Ｙ．Ｕ．Ｋｗｏｎ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：３３２７，２００２）を中間体として用いて製造することができる。

下記の反応式４に示すように、式２２のｍｙｏ−イノシトールの全てのヒドロキシ基それぞれに、アシル化反応によって、Ｎ−Ｂｏｃで保護された多様な鎖長のアミノ酸側鎖を導入する。Ｎ−Ｂｏｃ保護基を除去し、グアニジン基を導入した後、保護基をＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）またはＨＣｌガスで除去して式１３の化合物を合成する。式１２及び１４の化合物も、前記の方法と同様に、それぞれ式２１及び２３の中間体から製造される。

本発明による分子輸送体化合物は、６から８つのグアニジン基を有する糖または糖類似体の誘導体であり、および、医薬品または診断試薬といった生理活性分子と共有結合またはイオン結合により結合してよい。このように作製した結合体は、細胞への取り込みが有意に増強されており、このことは、細胞膜、核膜及び血液脳関門といった生物学的障壁を克服したことを示している。

これにより、本発明による分子輸送体化合物は、医薬品及び診断試薬のような多様な治療用分子のみならず、ペプチド及び核酸のような高分子を細胞内に輸送するのに有用である。

従って、本発明は、前記式１から５の分子輸送体化合物の１つを含む、生体膜を透過して細胞内に生理活性分子を送達するための組成物を提供する。さらに、本発明は、前記式１から５の分子輸送体化合物の１つを用いて、生体膜を通して生理活性分子を細胞内に送達させる方法を提供する。

本発明による分子輸送体に結合し細胞内へ送達され得る生理活性分子としては、分子量が１００〜１５００ｇ／ｍｏｌである有機化合物、ならびにペプチド及び核酸といった高分子化合物が含まれる。式１から５の分子輸送体化合物は、イオン結合によってイオン複合体（ｉｏｎｉｃｃｏｍｐｌｅｘ）を形成することにより生理活性物質を細胞内に送達し、特に、式１から３の分子輸送体化合物はそれぞれ、共有結合ならびにイオン結合により、生理活性分子との結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成することができる。

本発明による分子輸送体化合物は、糖または糖類似体の骨格構造にグアニジン基を導入して製造されたものであって、例えば細胞膜、核膜、血液脳関門などの生体膜を容易に透過でき、これにより、従来生体膜通過が困難であるため医薬品として開発し難かった治療用または診断用化合物や遺伝子またはタンパク質などのような巨大分子を対象細胞、組職または臓器内へ輸送するのに有用である。

以下、本発明を実施例により詳細に説明する。ただし、本発明は下記の実施例により制限されることはない。

製造例１：保護基を有するソルビトールの製造
＜１−１＞α−Ｄ−グルコースへのトリチル保護基の導入

α−Ｄ−グルコース（１０ｇ、５５．５ｍｇ）を無水ピリジン（１２０ｍｌ）に溶解し、そこにトリエチルアミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）（３８．７ｍｌ、２７７．５ｍｍｏｌ）を添加した。前記混合物にトリチルクロリド（ｔｒｉｔｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）（１８．３ｇ、６５．５ｍｍｏｌ）を滴加し、室温で１日間撹拌した。反応終了後、前記反応物をジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）（２５０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３００ｍｌ）で洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：３→１：１→３：２）で精製して茶色固体状の標題化合物（１６．８７ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ３．２５−３．３８（ｍ，４Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１１−７．３０（ｍ，９Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，６Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ４４５．２２（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−２＞保護されたα−Ｄ−グルコースからのソルビトールの製造

製造例１−１で得られた化合物（１０ｇ、２３．６６ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍｌ）に溶解し、そこに水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）（２．１８ｇ、５９．１８ｍｍｏｌ）を滴加した後、室温で７時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮した後、水とメタノールの混合溶媒で再結晶して白色固体状の標題化合物（６．６８ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ３．２５−３．３３（ｍ，４Ｈ），３．４７−３．５１（ｍ，２Ｈ），３．８５−３．８７（ｍ，２Ｈ），７．１４−７．２６（ｍ，９Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，６Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ４４７．２９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−３＞ｔ−ブチルジフェニルシリル保護基の導入

前記製造例１−２で得られた化合物（５ｇ、１１．７７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４．９ｍｌ、３５．３３ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（４−（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（２８７．８ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）（５０ｍｌ）に溶解した。前記混合物にｔ−ブチルクロロジフェニルシラン（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｃｈｌｏｒｏｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌａｎｅ）（６．１２ｍｌ、２３．５５ｍｍｏｌ）を１時間にわたって滴加し、室温で１日間撹拌した。反応終了後、前記反応物を酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、水（１５０ｍｌ）と飽和ＮａＣｌ水溶液（２５ｍｌ）で数回洗浄した。得られた水層を、酢酸エチル（５０ｍｌ）で二回抽出し、有機層を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：へキサン＝１：１→３：２）に供して、白色の泡状（ｆｏａｍｙ）固体の標題化合物（５．５ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０６（ｓ，９Ｈ），２．７２（ｂｒｓ，１Ｈ），３．０１（ｂｒｓ，１Ｈ），３．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），３．３５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７３−３．８３（ｍ，６Ｈ），７．２２−７．６５（ｍ，２５Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ６８６．２４（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

製造例２：カルボベンゾキシ保護基を有するアミノカプロン酸の誘導体の製造Ｉ
＜２−１＞Ｎ−ジ−シアノエチル化６−アミノカプロン酸の製造

６−アミノカプロン酸（６−ａｍｉｎｏｃａｐｒｏｉｃａｃｉｄ）（２．５ｇ、０．０１９ｍｏｌ）に過量のアクリロニトリル（ａｃｒｙｌｏｎｉｔｒｉｌｅ）（９４．１ｍｌ、１．４３ｍｏｌ）及び氷酢酸（２１．８ｍｌ、０．３８１ｍｏｌ）を滴加し、３０時間還流した。反応に用いられて残った過量のアクリロニトリルは、減圧蒸発させて除去し、酢酸はトルエンと共に減圧蒸発させて除去した。得られた反応物を酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、水で数回洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：へキサン＝４：１）で精製して粘着性のある茶色シロップ（ｂｒｏｗｎｉｓｈｓｙｒｕｐ）の標題化合物（３．５ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．３５−１．４９（ｍ，４Ｈ），１．６５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．４６−２．８４（ｍ，６Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ），１０．３５（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ２３８．０８（Ｍ^＋＋Ｈ）。

＜２−２＞シアノ基のアミノ基への変換

前記製造例２−１で得た化合物（２．２ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を９５％のエタノール（４５ｍｌ）に溶解し、そこに１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１５ｍｌ）及びラネーニッケル（Ｒａｎｅｙｎｉｃｋｅｌ）触媒（４ｇ）を加えた後、Ｈ_２（５０ｐｓｉ）雰囲気下で２４時間反応させた。反応終了後、セライトで前記反応物から触媒を除去し、９５％のエタノールで洗浄した。得られた濾液を減圧濃縮し粘着性のある白色固体状の標題化合物（２．２５ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．３１−１．６８（ｍ，６Ｈ），１．８９（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．７１−２．７６（ｍ，６Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ２４６．１５（Ｍ^＋＋Ｈ）。

＜２−３＞カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）基によるアミノ基の保護

前記製造例２−２で得た化合物（１．１ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１，４−ｄｉｏｘａｎｅ）と水との混合液（２：１）（４５ｍｌ）に溶解し、重炭酸ナトリウム（２．５６ｇ、３０．５７ｍｍｏｌ）を添加した後、カルボベンゾキシクロリド（Ｃｂｚ−Ｃｌ）（２．７ｍｌ、１８．３４ｍｍｏｌ）を０℃で３０分かけてゆっくりと滴加した。室温で１５時間撹拌した後、反応物を濃縮し、水（２０ｍｌ）を添加した。そこに１０％のＨＣｌを加えてｐＨを２に調節し、その後酢酸エチルで抽出した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製して白色泡状固体の標題化合物（１．４ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．３３−１．６１（ｍ，６Ｈ），１．９４（ｂｒｓ，４Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．９３（ｂｒｓ，６Ｈ），３．２０−３．２２（ｍ，４Ｈ），５．０１（ｓ，４Ｈ），５．６５（ｂｒｓ，２Ｈ），７．３１（ｂｒｓ，１０Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ５１４．２１（Ｍ^＋＋Ｈ）。

製造例３：カルボベンゾキシ保護基を有するアミノカプロン酸誘導体の製造ＩＩ
＜３−１＞Ｎ−ジ−メチルアクリル化６−アミノカプロン酸の製造

６−アミノカプロン酸（１．５ｇ、０．０１１４ｍｏｌ）に、過量のメチルアクリレート（ｍｅｔｈｙｌａｃｒｙｌａｔｅ）（７７．３ｍｌ、０．８５７ｍｏｌ）及び氷酢酸（１３．１ｍｌ、０．２２８ｍｏｌ）を滴加し、３０時間還流した。反応に用いられて残った過量のメチルアクリレートおよび酢酸は、減圧蒸発して除去した。得られた反応物を酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、水で数回洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：へキサン＝４：１）で精製して粘着性の茶色シロップの標題化合物（１．８５ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．３０−１．６２（ｍ，６Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．５０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），２．８０−２．８６（ｍ，４Ｈ），３．６６（ｓ，６Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ３０４．１８（Ｍ^＋＋Ｈ）。

＜３−２＞メチルアクリレートとエチレンジアミンとの反応

前記製造例３−１で得られた化合物（１．２ｇ、３．９５ｍｍｏｌ）及びエチレンジアミン（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）（１６ｍｌ、２３７．３ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解し、室温で７２時間撹拌した。反応後に残った過量のエチレンジアミンを減圧蒸発して除去した後、明るい茶色シロップ状の標題化合物（１．４ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．２６−１．６４（ｍ，６Ｈ），２．１６−２．２２（ｍ，２Ｈ），２．２７−２．５６（ｍ，６Ｈ），２．７１−２．８８（ｍ，８Ｈ），３．２９−３．３１（ｍ，４Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ３８２．１９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜３−３＞カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）基によるアミノ基の保護

前記製造例３−２で得た化合物（９３０ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサンと水との混合液（２．５：１）（２０ｍｌ）に溶解し、そこに重炭酸ナトリウム（１．５２ｇ、１８．１１ｍｍｏｌ）を添加した後、徐々にカルボベンゾキシクロリド（１．４ｍｌ、１０．３４ｍｍｏｌ）を０℃で３０分間滴加した。室温で１５時間撹拌した後、反応物を濃縮し、水（２０ｍｌ）で希釈し、１０％のＨＣｌを添加してｐＨを２に調節した後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥した後に減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製して白色固体状の化合物（１．２ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．２３−１．７１（ｍ，６Ｈ），２．１３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３０−２．４８（ｍ，６Ｈ），２．６９（ｂｒｓ，４Ｈ），３．２１−３．２６（ｍ，８Ｈ），５．０４（ｓ，４Ｈ），７．３１−７．３２（ｍ，１０Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ６５０．１９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜３−４＞アミノ基のＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基への変換

前記製造例３−２で得た化合物（５００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（０．７ｍｌ、４．８６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（１．３６ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物をジクロロメタン（１００ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＣｌ水溶液及び水で数回洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥した後に減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製して白色泡状固体の標題化合物（８００ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．４５−１．６６（ｍ，４２Ｈ），２．４１−２．４４（ｍ，６Ｈ），２．８４（ｂｒｓ，４Ｈ），３．４０−３．５４（ｍ，１０Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，２Ｈ），８．６４（ｂｒｓ，２Ｈ），１１．４４（ｂｒｓ，２Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ８４４．３３（Ｍ^＋＋Ｈ）。

製造例４：２，２，２−トリフルオロエチル−３−アジドプロピン酸の製造
＜４−１＞２，２，２−トリフルオロエチル−３−ブロモプロピオン酸の製造

２，２，２−トリフルオロエタノール（１５ｍｌ、０．１５ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．５ｍｌ、３２．１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）に加え、温度を０℃に下げた。１０分後、３−ブロモプロピオニルクロリド（２．９４ｍｌ、２９．２ｍｍｏｌ）を徐々に滴加した。前記混合液を室温まで温め、５時間撹拌した。水を加えて反応を停止し、混合物を酢酸エチルで抽出し、溶媒を減圧蒸発した。固体状の不純物を濾過して液体状の標題化合物（３．５３ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ３．０５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）。

＜４−２＞２，２，２−トリフルオロエチル−３−アジドプロピン酸の製造

前記製造例４−１で得た化合物（３．７１ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）に溶解し、アジ化ナトリウム（２．７２ｇ、６３．２ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（０．６９ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１２時間撹拌した。水を加えることで反応を停止させ、反応混合物を塩水で洗浄した後、溶媒を減圧蒸発した。固体状の不純物を濾過して黄色の液体状の標題化合物（２．７６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ２．７０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）。

製造例５：ラクトース誘導体の製造
＜５−１＞オクタ−Ｏ−ベンゾイル−α−ラクトースの製造

α−ラクトース（２．３ｇ、６．３８ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（３０ｍｌ）に溶解し、０℃でベンゾイルクロリド（ｂｅｎｚｏｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）（８．９ｍｌ、７６．６ｍｍｏｌ）を添加して撹拌した。その後、室温に昇温してさらに８時間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物を酢酸エチルで抽出し、１ＮＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３及び塩水で洗浄した。前記抽出物をさらにＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮させた後、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製して白色固体状の化合物（７．１９ｇ）を得た。
ｍ．ｐ＝１２４〜１２６℃
［α］_Ｄ＝＋１１３（ｃ０．８、クロロホルム）
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ３．７３−３．８６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４＆Ｈ−５’），３．９４（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），４．３２−４．４７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６’），４．６０（ｓ，２Ｈ，Ｈ−６），４．９９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’），５．６６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２），５．７８−５．８４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’＆Ｈ−４’），６．２５（ｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），６．７９（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１），７．２０−８．１６（ｍ，４０Ｈ，ａｒｏｍ）。

＜５−２＞２，３，６，２’，３’，４’，６’−ヘプタ−Ｏ−ベンゾイルラクトースの製造

前記製造例５−１で得た化合物（１ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をメタノール：テトラヒドロフラン（３：７）（１０ｍｌ）に溶解させ、０℃でアンモニアガスを１０分間流した。反応混合液を室温まで温め、１２時間撹拌した。反応終了後、前記反応物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で精製して白色泡状固体の標題化合物（６８５．８ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ３．７３−３．８６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４＆Ｈ−５’），４．０７−４．１１（ｍ，Ｈ−５’α＆Ｈ−５’β），４．２３−４．３７（ｍ，Ｈ−６’），４．４４−４．５６（ｍ，Ｈ−６），４．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−１’β），４．９４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’α），５．２６（ｄｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，３．５Ｈｚ，Ｈ−３’α＆Ｈ−３’β），５．３４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｈ−１β），５．４１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３．１Ｈｚ，Ｈ−２α＆Ｈ−２β），５．６４（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１α），５．７０−５．７６（ｍ，Ｈ−４’α ａｎｄＨ−２’α），５．８１（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３β），６．１８（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３α），７．１６−７．９８（ｍ，３５Ｈ，ａｒｏｍ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ１０９３．２７（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

製造例６：Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基を有するアミノカプロン酸の製造

６−アミノカプロン酸（０．５３ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１．１４ｍｌ、８．１６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（１．２３ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）を添加して、室温で２４時間撹拌した。２ＭＮａＨＳＯ_４および水で洗浄し、得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製し、白色固体状の標題化合物（０．８２ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．４８（ｓ、２４Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．３８（ｂｒｓ、２Ｈ）、８．３６（ｂｒｓ、１Ｈ、ＮＨ）、８．６−１０．７（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ、ＯＨ）。

実施例１：８つのグアニジン基を有するアルジトール誘導体の製造Ｉ
＜１−１＞アシル化によるソルビトールへの側鎖の導入

前記製造例１で得た１，６−ＯＨが保護されたソルビトール化合物（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、前記製造例２で得た化合物（７５７．５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（２７．６ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）に溶解し、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩（２３１．３ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１日間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で抽出し、抽出物を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３０ｍｌ）と水で数回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製して、骨格構造に４つの側鎖が導入された白色泡状固体の標題化合物（２６３ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０１（ｓ，９Ｈ），１．１７−１．５１（ｍ，４０Ｈ），１．８６−２．３２（ｍ，３２Ｈ），３．３１（ｂｒｓ，１６Ｈ），３．６０−３．８８（ｍ，２Ｈ），３．９３−４．１２（ｍ，２Ｈ），４．７９−４．９２（ｍ，２Ｈ），４．９８（ｓ，１６Ｈ），５．５９（ｂｒｓ，８Ｈ），５．６１−５．８８（ｍ，２Ｈ），７．１３−７．５９（ｍ，６５Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ２６６８．４０（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−２＞側鎖の末端アミノ残基からカルボベンゾキシ基の除去

前記実施例１−１で得た化合物（１５０ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）をメタノール（４ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を添加した。前記混合物を室温で１５時間に亘ってＨ_２（５０ｐｓｉ）ガス雰囲気下で撹拌し、その後、セライトで濾過してＰｄ／Ｃを除去した。得られた濾液を減圧濃縮して粘着性のある白色固体状の標題化合物（８７ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．０２（ｓ，９Ｈ），１．１６−１．８２（ｍ，２４Ｈ），２．０７−２．３８（ｍ，２４Ｈ），３．０３−３．２８（ｍ，４０Ｈ），３．５６−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．９１−４．１３（ｍ，２Ｈ），４．８７−５．１３（ｍ，２Ｈ，ｍｅｒｇｅｄｗｉｔｈＣＤ３ＯＤｐｅａｋ），５．８８（ｄｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，１．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２４−７．６８（ｍ，２５Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ１５９３．８９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−３＞アミノ基のＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基への変換

前記実施例１−２で得た化合物（７５ｍｇ、０．００４７ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（０．２４ｍｌ、０．１６６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（４１０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２日間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物をジクロロメタン（６０ｍｌ）で希釈し、塩水と水で数回洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で精製し、８つのグアニジン基が導入された白色泡状固体の標題化合物（１０４ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０３（ｓ，９Ｈ），１．１８−１．５４（ｍ，１６８Ｈ），２．２８−２．６４（ｍ，２４Ｈ），２．７８−３．２８（ｍ，２４Ｈ），３．５９（ｂｒｓ，１６Ｈ），３．８９−４．２１（ｍ，４Ｈ），４．８２（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１１（ｂｒｓ，１Ｈ），５．６３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２６−７．６７（ｍ，２５Ｈ），８．３９（ｂｒｓ，８Ｈ），１１．３５（ｂｒｓ，８Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ３５３３．３４（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−４＞６−Ｏ−トリチル保護基の除去

前記実施例１−３で得た化合物（１００ｍｇ、０．００２８ｍｍｏｌ）をメタノール：ジクロロメタンの混合液（３：１）（５ｍｌ）に溶解し、触媒量の塩化アセチルを滴加した後、室温で４時間撹拌した。反応終了後、過量の酸を中和させるためにＮａＨＣＯ_３（６０ｍｇ）を添加し、３０分間撹拌した。反応物を濃縮させてジクロロメタン（３０ｍｌ）で希釈した後、水で数回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製して粘着性のある白色固体状の標題化合物（８０ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０１（ｓ，９Ｈ），１．１２−１．５９（ｍ，１６８Ｈ），２．２２−２．６０（ｍ，２４Ｈ），２．７７−３．３３（ｍ，２４Ｈ），３．５７（ｂｒｓ，１６Ｈ），３．８８−４．２１（ｍ，４Ｈ），４．８０（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．６６（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２５−７．６８（ｍ，１０Ｈ），８．３３（ｂｒｓ，８Ｈ），１１．４２（ｂｒｓ，８Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ３２９１．１３（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−５＞蛍光物質の導入

前記実施例１−４で得た化合物（８０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（７．５ｍｇ、０．００６１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３ｍｌ）に溶解し、５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホニルクロリド（８．５ｍｇ、０．００３２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１５時間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物に飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍｌ）を加えて中和させ、酢酸エチルで抽出し、塩水及び水で洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１５：１〜１０：１）で精製し、蛍光物質が導入された粘着性のある黄色固体状の標題化合物（８０ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０２（ｓ，９Ｈ），１．１３−１．６１（ｍ，１６８Ｈ），２．１１−２．４５（ｍ，２４Ｈ），２．８８（ｂｒｓ，６Ｈ），３．０６−３．３６（ｍ，２４Ｈ），３．５７（ｂｒｓ，１６Ｈ），３．８８−４．２１（ｍ，４Ｈ），４．８０（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．６６（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２２−７．７８（ｍ，２７Ｈ），８．１６−８．１９（ｍ，２Ｈ），８．３９（ｂｒｓ，８Ｈ），１１．４５（ｂｒｓ，８Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ３５２３．４４（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜１−６＞Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例１−５で得た化合物（５５ｍｇ、０．００１５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタンの混合液（１：１）（２ｍｌ）に溶解し、室温で４時間撹拌した。反応終了後、前記反応物をトルエン（３ｍｌ）と共に二回減圧蒸発してトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を除去した。これを再び２時間に亘って高真空下で蒸発させた後、水（２ｍｌ）に溶解して凍結乾燥させ、末端グアニジン基のＮ−Ｂｏｃ保護基が除去された白色泡状固体の標題化合物（４３ｍｇ）

を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．０１（ｓ，９Ｈ），１．２３−１．８１（ｍ，４０Ｈ），１．９８（ｂｒｓ，１６Ｈ），２．２７（ｂｒｓ，８Ｈ），２．８１（ｓ，６Ｈ），３．１９−３．２５（ｍ，２４Ｈ），３．８８−４．２１（ｍ，４Ｈ），４．８４（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．６０（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１３−７．７８（ｍ，１３Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，２Ｈ），８．４４（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ１９２２．５２（Ｍ^＋＋Ｎａ）
ＵＶλ_ｍａｘ（Ｈ_２Ｏ，２５℃）３３４ｎｍ。

実施例２：８つのグアニジン基を有するアルジトール誘導体の製造ＩＩ
＜２−１＞アシル化によるソルビトールへの側鎖の導入

前記製造例１で得た１，６−ＯＨ位置が保護されたソルビトール化合物（７５ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）、製造例３で得た化合物（７６３ｍｇ、０．９０５ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（２０．７ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶解し、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩（１７３．５ｍｇ、０．９０５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１日間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物をジクロロメタン（６０ｍｌ）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液と水で数回洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製し、骨格構造に４つの側鎖が導入された白色泡状固体の標題化合物（２７８ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０１（ｓ，９Ｈ），１．４０−１．５３（ｍ，１６８Ｈ），２．１９−２．２７（ｍ，３２Ｈ），２．６６（ｂｒｓ．，１６Ｈ），３．３１−３．５８（ｍ，３２Ｈ），３．６３−３．９２（ｍ，２Ｈ），４．０１（ｂｒｓ．，２Ｈ），４．２３（ｂｒｓ．，１Ｈ），４．８８−５．１２（ｍ，２Ｈ），５．４８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．７３（ｂｒｓ，１Ｈ）７．１６−７．５８（ｍ，２５Ｈ），７．９４（ｂｒｓ．，８Ｈ），８．５１（ｂｒｓ．，８Ｈ），１１．３５（ｂｒｓ．，８Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ３９８９．８４（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜２−２＞６−Ｏ−トリチル保護基の除去

前記実施例２−１で得た化合物（１５０ｍｇ、０．００３７ｍｍｏｌ）をメタノール：ジクロロメタンの混合液（３：１）（５ｍｌ）に溶解し、触媒量の塩化アセチルを滴加した後、室温で４時間撹拌した。過量の酸を中和させるためにＮａＨＣＯ_３（７０ｍｇ）を添加して３０分間撹拌した。反応物を濃縮させてジクロロメタン（３０ｍｌ）で希釈した後、水で数回洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥した後に減圧濃縮してカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）で精製し、粘着性のある白色固体状の標題化合物（１０７ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０２（ｓ，９Ｈ），１．３３−１．５５（ｍ，１６８Ｈ），２．１０−２．２３（ｍ，３２Ｈ），２．６８（ｂｒｓ，１６Ｈ），３．２８−３．５５（ｍ，３２Ｈ），３．６０−３．８２（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．２０（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７７−５．０９（ｍ，２Ｈ），５．３３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．７８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２６−７．６２（ｍ，１０Ｈ），７．９２（ｂｒｓ，８Ｈ），８．３６（ｂｒｓ，８Ｈ），１１．４５（ｂｒｓ，８Ｈ）。

＜２−３＞蛍光物質の導入

前記実施例２−２で得た化合物（１００ｍｇ、０．００２６ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（８．２ｍｇ、０．００６７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３ｍｌ）に溶解し、５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホニルクロリド（９．４ｍｇ、０．００３５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１６時間撹拌した。反応終了後、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍｌ）を加えて反応物を中和させた後に酢酸エチルで抽出し、塩水で洗浄した。得られた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後にカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１〜１０：１）で精製し、蛍光物質が導入された粘着性のある黄色固体状の標題化合物（６８ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．０９（ｓ，９Ｈ），１．４４−１．５６（ｍ，１６８Ｈ），２．２３（ｂｒｓ，３２Ｈ），２．７１（ｂｒｓ，１６Ｈ），２．８６（ｓ，６Ｈ），３．３７−３．５２（ｍ，３２Ｈ），３．６０−３．８４（ｍ，２Ｈ），４．０１（ｂｒｓ，１Ｈ），４．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７７−５．１１（ｍ，２Ｈ），５．４０（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２２−７．７３（ｍ，１２Ｈ），７．８９−８．１４（ｍ，１０Ｈ），８．３６（ｂｒｓ，９Ｈ），１１．４２（ｂｒｓ，８Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ１４８３．９９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜２−４＞Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例２−３で得た化合物（５０ｍｇ、０．００１２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタンの混合液（１：１）（２ｍｌ）に溶解し、室温で４時間撹拌した。反応終了後、前記反応混合物をトルエンと共に二回減圧蒸発してトリフルオロ酢酸を除去した。２時間に亘って高真空下で蒸発させた後、水（２ｍｌ）に溶解して凍結乾燥させ、末端グアニジン基のＮ−Ｂｏｃ保護基が除去された白色泡状固体の標題化合物（４１ｍｇ）

を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．０１（ｓ，９Ｈ），１．２６−１．８８（ｍ，３２Ｈ），２．１１−２．３２（ｍ，１６Ｈ），２．７２（ｂｒｓ，１６Ｈ），２．８８（ｓ，６Ｈ），３．２７（ｂｒｓ，４０Ｈ），３．６６−３．９３（ｍ，４Ｈ），４．８９−５．１１（ｍ，２Ｈ），５．５６（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１５−７．７４（ｍ，１３Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，２Ｈ），８．４８（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ２１４５．３５（（Ｍ−Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２Ｓ）^＋＋Ｎａ）
ＵＶλ_ｍａｘ（Ｈ_２Ｏ，２５℃）３３６ｎｍ。

実施例３：８つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体の製造Ｉ
式１６の中間体ｍｙｏ−イノシトールからアセトニド保護基を除去した後、前記実施例１−１〜１−６に記載された方法と同様に、脱保護した中間体をアシル化反応に供し、そこに側鎖を導入し、導入された側鎖のアミノ基をグアニジン基に変換させることによって８つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体化合物（式７）を製造した。

実施例４：８つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体の製造ＩＩ
式１７の中間体ｍｙｏ−イノシトールからアセトニド保護基を除去した後、前記実施例１−１〜１−６に記載された方法と同様に、脱保護した中間体をアシル化反応に供し、そこに側鎖を導入し、導入された側鎖のアミノ基をグアニジン基に変換させ、８つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体化合物（式８）を製造した。

実施例５：８つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体の製造ＩＩＩ
式１８の中間体ｍｙｏ−イノシトールからアセトニド保護基を除去した後、前記実施例１−１〜１−６に記載された方法と同様に、脱保護した中間体をアシル化反応に供し、そこに側鎖を導入し、導入された側鎖のアミノ基をグアニジン基に変換させ、８つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体化合物（式９）を製造した。

実施例６：７つのグアニジン基を有する二糖類誘導体の製造Ｉ
＜６−１＞１’−Ｏ−（３−アジドプロピオニル）スクロースの製造

プロテイナーゼＮ（ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＮ）（１．００ｇ、５．６Ｕ／ｍｇ、Ｆｌｕｋａ社製）を３次蒸留水（２００ｍｌ）に５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、０．１ＭＫＯＨで酵素溶液のｐＨを７．８に合わせた。液体窒素で酵素溶液を急速冷却した後、４８時間凍結乾燥させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド：水の混合液（９３：７）（１１．６ｍｌ）にスクロース（４．７ｇ、３．７３ｍｍｏｌ）を溶解し、そこに活性化されたプロテイナーゼＮ（６９１ｍｇ）を添加した。製造例４で得た化合物（０．９０ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）を添加して４５℃で３日間撹拌した。反応終了後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで反応物を洗浄して濾過した。得られた濾液を減圧蒸発した後にカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン：メタノール：水＝１４：５：５：１）で精製して黄色泡状固体の標題化合物（１．２５ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ２．６５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ），３．３０−３．４３（ｍ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ４），３．５９（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈα），３．６５−３．８３（ｍ，７Ｈ，Ｈ５，Ｈ６α，Ｈ６’α，Ｈ’５，Ｈ６β，Ｈ３，Ｈ６’β），４．０２−４．０９（ｍ，２Ｈ，Ｈ３’，Ｈ４’），４．２１（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ１’β），４．４１（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，Ｈ１’α），５．４０（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ１）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ４６２．０９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜６−２＞アシル化による側鎖の導入

前記実施例６−１で得た化合物（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（８４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）に溶解し、６−（Ｂｏｃ−アミノ）カプロン酸（６−Ｂｏｃ−ａｍｉｎｏｃａｐｒｏｉｃａｃｉｄ）（２．０５ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．７５ｇ、９．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。反応終了後、前記反応物をジクロロメタンで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ_３と水で数回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後にカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：へキサン＝１：１）で精製して無色泡状固体の標題化合物（４５９ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．４３（ｓ，６３Ｈ，７ｘｔ−Ｂｕ），１．７２−１．８７（ｍ，１４Ｈ），２．２８−２．４９（ｍ，１４Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈβ），３．１１−３．１５（ｍ，１４Ｈ），３．６２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈα），４．１６−４．３４（ｍ，８Ｈ），５．０２−５．１４（ｍ，２Ｈ），５．３７−５．４６（ｍ，３Ｈ），５．６５（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ１９５４．５８（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜６−３＞側鎖の末端アミノ基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例＜６−２＞で得た化合物（５０．６ｍｇ、２８．９８μｍｏｌ）を、ＨＣｌガスを飽和させた酢酸エチル（１．５ｍｌ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。混合物を減圧蒸発して白色固体状の標題化合物（４５ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．４４−１．７２（ｍ，４２Ｈ），２．４４（ｂｒｓ，１４Ｈ），２．７０（ｂｒｓ，２Ｈ），２．９６（ｂｒｓ，１４Ｈ），３．６２（ｍ，２Ｈ），４．２３−４．３３（ｍ，９Ｈ），５．１２（ｂｒｓ，１Ｈ），５．３８５．６１（ｍ，３Ｈ），５．７２（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ１２３１．９４（Ｍ^＋＋Ｈ）。

＜６−４＞アミノ基のＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基への変換

前記実施例６−３で得た化合物（２０ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（０．０５６ｍｌ、０．４０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（０．１１ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。反応終了後、有機層を２ＭＮａＨＳＯ_４及び塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮した後にカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２）で精製し、白色泡状固体の標題化合物（２４．２ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．４９（ｍ，１６８Ｈ），２．２３−２．４２（ｍ，１４Ｈ），２．６３−２．６７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４０−３．４１（ｍ，１４Ｈ），３．５９−３．６３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．２２−４．３３（ｍ，６Ｈ），４．９１（ｍ，１Ｈ），５．０８（ｍ，１Ｈ），５．３３−５．４７（ｍ，３Ｈ），５．６２−５．６３（ｍ，１Ｈ），８．３１（ｓ，７Ｈ），１１．５０（ｓ，７Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ２９４８．７５（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜６−５＞アシル化によるＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基含有側鎖の導入

前記実施例６−１で得た化合物（４６．９ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）に溶解し、製造例６で得た化合物（０．７４ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．４１ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。反応終了後、前記反応物をジクロロメタンで抽出し、２ＮＮａＨＳＯ_４及び塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２）で精製して、実施例６−４と同様の白色泡状固体の標題化合物（２２９．１ｍｇ）を得た。

＜６−６＞アジド基のアミノ官能基への変換

前記実施例６−４または６−５で得た化合物（３９．１ｍｇ、０．０１３４ｍｍｏｌ）をエタノールに溶解し、Ｐｄ／Ｃ触媒（６０ｍｇ）を添加して室温でＨ_２（３０ｐｓｉ）ガス雰囲気下で２時間撹拌した。反応終了後、反応混合物をセライトで濾過してＰｄ／Ｃ触媒を除去し、減圧濃縮して白色固体状の標題化合物（３６．２ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．３８−１．７０（ｍ，１６８Ｈ），２．２３−２．３６（ｍ，１４Ｈ），２．７５−２．８９（ｍ，４Ｈ），３．０４（ｂｒｓ，２Ｈ），３．４０（ｓ，１４Ｈ），４．１７−４．３２（ｍ，６Ｈ），４．９２（ｄ，１Ｈ），５．０４−５．１１（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３４−５．４６（ｍ，３Ｈ），５．６２（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，７Ｈ），１１．５０（ｓ，７Ｈ）。

＜６−７＞蛍光物質の導入

前記実施例６−６で得た化合物（１３．５ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．４μｌ、０．００９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍｌ）に溶解し、１０℃に冷却した。その混合物に、５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホニルクロリド（１．７ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１日間撹拌した。反応終了後、反応混合物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１５０：１）に供し、黄色のシロップ状の化合物（１２．８ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．４５−１．５９（ｍ，１６８Ｈ），２．２９−２．３８（ｍ，１４Ｈ），２．６０−２．７０（ｂｒｓ，２Ｈ），２．８９（ｓ，６Ｈ），３．３０−３．５０（ｂｒｓ，１４Ｈ），３．６０−３．７０（ｂｒｓ，２Ｈ），４．２１−４．３１（ｍ，６Ｈ），５．００−５．１５（ｂｒｓ，２Ｈ），５．３５−５．４８（ｍ，４Ｈ），５．６４（ｓ，１Ｈ），７．１８−７．２０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５２−７．５５（ｍ，２Ｈ），８．２２８．５５（ｍ，２Ｈ），８．３１（ｓ，７Ｈ），８．５３−８．５５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），１１．５０（ｓ，７Ｈ）。

＜６−８＞Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例６−７で得た化合物（６．５ｍｇ、０．００２１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１．３ｍｌ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．６ｍｌ）を加えて室温で５時間撹拌した。反応終了後、反応混合物にトルエンを数回繰り返して添加して減圧蒸発した。その後、３次蒸留水に溶解し、水層を濾過して凍結乾燥させ、白色泡状固体の標題化合物（４．７ｍｇ）（式１０、スクロース骨格）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．２７−１．５５（ｍ，４２Ｈ），２．２４−２．４４（ｍ，１６Ｈ），２．８０（ｓ，６Ｈ），３．０７（ｂｒｓ，１４Ｈ），３．４０（ｂｒｓ，１Ｈ），３．５５（ｂｒｓ，２Ｈ），４．１２−４．２４（ｍ，６Ｈ），５．３１−５．４１（ｍ，３Ｈ），５．５８−５．６３（ｍ，１Ｈ），７．１８−７．２０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．５３（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），８．１０−８．１３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１９−８．２２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４７−８．５０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ１７３３．０７（Ｍ^＋＋Ｈ）
ＵＶλ_ｍａｘ（Ｈ_２Ｏ，２５℃）３１８ｎｍ。

実施例７：７つのグアニジン基を有する二糖類誘導体の製造ＩＩ
前記実施例６に記載された方法と同様に、製造例５で得た化合物にアシル化反応によってアミノ酸側鎖を導入し、側鎖のＮ末端にグアニジン基を導入し、７つのグアニジン基を有する二糖類誘導体化合物（式１１、ラクトース骨格）を得た。

実施例８：６つのグアニジン基を有するアルジトール誘導体の製造Ｉ
＜８−１＞アシル化によるＤ−ソルビトールへの側鎖の導入

Ｄ−ソルビトール（７５ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）、６−（Ｂｏｃ−アミノ）カプロン酸（９５２ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１１０ｍｇ、０．９０５ｍｍｏｌ）及び１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩（７８９ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍｌ）に溶解し、１６時間還流させた。反応終了後、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液と水で数回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝２：３〜１：１）で精製してＤ−ソルビトールに６つの側鎖が導入された白色固体状の標題化合物（５４７ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．２８−１．６０（ｍ，９０Ｈ），２．２０−２．３２（ｍ，１２Ｈ），３．０２（ｂｒｓ，１２Ｈ），４．０４−４．１１（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６６（ｂｒｓ，６Ｈ），４．９３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），５．３１−５．４２（ｍ，２Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ１４８３．９９（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜８−２＞側鎖の末端アミノ基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例８−１で得た化合物（２５０ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ）をＨＣｌガスで飽和させた酢酸エチル（１２ｍｌ）に溶解し、室温で３時間撹拌し、反応混合物を減圧濃縮して、側鎖の末端アミノ基のＮ−Ｂｏｃ保護基が除去された白色固体状の標題化合物（１８４ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．３８−１．４０（ｍ，１２Ｈ），１．５９−１．６３（ｍ，２４Ｈ），２．３３（ｂｒｓ，１２Ｈ），２．８６（ｂｒｓ，１２Ｈ），４．０２−４．１４（ｍ，２），４．３３−４．４８（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｂｒｓ，１Ｈ），５．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．４４（ｂｒｓ，２Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ８６１．８０（Ｍ^＋＋Ｈ）。

＜８−３＞アミノ基のＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基への変換

前記実施例８−２で得た化合物（１８０ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）を１、４−ジオキサン：水の混合液（５：１）（５ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（０．４２ｍｌ、３．０ｍｍｏｌ）を添加して１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（１．１７ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで抽出し、水と飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した後、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。これをさらに減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝２：３〜１：１）で精製して６つのグアニジン基が導入された白色泡状固体の標題化合物（３１０ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．１３−１．５５（ｍ，９０Ｈ），２．２３−２．２６（ｍ，１２Ｈ），３．３１−３．３８（ｍ，１２Ｈ），４．０４−４．０６（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，２Ｈ），４．９５（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１５（ｂｒｓ，１Ｈ），５．３３−５．３５（ｍ，２Ｈ），８．２６（ｂｒｓ，６Ｈ），１１．４５（ｂｒｓ，６Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ２３３６．５２（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜８−４＞Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基からのＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例＜８−３＞で得た化合物（２５５ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）をＨＣｌガスで飽和させた酢酸エチル（１６ｍｌ）に溶解し、室温で２０時間撹拌した。反応混合物を減圧蒸発し、メタノールに溶解し蒸発させる操作を３回繰り返し、末端グアニジン基のＮ−Ｂｏｃ保護基が除去された白色泡状固体の標題化合物（１４６ｍｇ）（化１２）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．５７（ｂｒｓ，３６Ｈ），２．２６（ｂｒｓ，１２Ｈ），３．２７（ｂｒｓ，１２Ｈ），４．０２−４．３４（ｍ，４Ｈ），５．０９−５．３３（ｍ，４Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ１１１３．７７（Ｍ^＋＋Ｈ）。

実施例９：６つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体の製造Ｉ
＜９−１＞アシル化によるｍｙｏ−イノシトールへの側鎖の導入

ｍｙｏ−イノシトール（３３．３ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）、６−（Ｂｏｃ−アミノ）カプロン酸（３６２ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（６７．７ｍｇ、０．５５４ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍｌ）に溶解し、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−エチルカルボジイミド塩酸塩（２６０．８ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を加えて、２１時間還流させた。反応混合物を室温に冷却した後、過量の酢酸エチルで希釈させ、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。得られた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した後、濃縮させてカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝２：３〜１：１）で精製してｍｙｏ−イノシトールに６つの側鎖が導入された無色オイル状の標題化合物（２０６ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．１−１．７（ｍ，９０Ｈ），２．１７（ａｐｐｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１０Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｍ，１２Ｈ），４．８１（ｂｒｏａｄｓ，６Ｈ，６ｘＮＨ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２．５Ｈｚ，２Ｈ），５．１６（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，２Ｈ），５．５４（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ１４８１．９８（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜９−２＞側鎖の末端アミノ基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例９−１で得た化合物（１５０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）をＨＣｌガスで飽和させた酢酸エチル（７ｍｌ）に溶解し、室温で１７時間撹拌した。反応混合物を減圧蒸発し、トルエンに溶解し濃縮する工程を３回繰り返して、末端アミノ基のＮ−Ｂｏｃ保護基が除去された淡黄色泡状固体の標題化合物（１１７ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．３−１．９（ｍ，３６Ｈ），２．２１（ｂｒｓ，１０Ｈ），２．５７（ｂｒｓ，２Ｈ），２．９４（ｂｒｓ，１２Ｈ），５．３−５．６（ｍ，５Ｈ），５．６８（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ８８１．５３（Ｍ^＋＋Ｎａ）。

＜９−３＞アミノ基のＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基への変換

前記実施例９−２で得た化合物（９９．２ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン：水の混合液（５：１）（６ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（０．２３７ｍｌ、１．７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−Ｎ’’−トリフリルグアニジン（６６３ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を加えて室温で３日間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、酢酸エチルで希釈させた後、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮してカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：４〜１：１）で精製してｍｙｏ−イノシトールに６つのグアニジン基が導入された泡状の標題化合物（１５８ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．１−１．７（ｍ，１４４Ｈ），２．２１（ａｐｐｄｄ，Ｊ＝１１．４，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１０Ｈ），２．４８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ａｐｐｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１２Ｈ），５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），５．１８（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，２Ｈ），５．５７（ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，６Ｈ，ＮＨ），１１．５（ｓ，６Ｈ，ＮＨＢｏｃ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ２３１２．３４（Ｍ^＋＋Ｈ）。

＜９−４＞Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｂｏｃ−グアニジン基からＮ−Ｂｏｃ保護基の除去

前記実施例９−３で得た化合物（１００ｍｇ）をＨＣｌガスで飽和させた酢酸エチル（１５ｍｌ）に溶解し、室温で２日間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、メタノールに溶解して蒸発させる操作を３回繰り返し、末端グアニジン基からＮ−Ｂｏｃ保護基が除去された白色泡状固体の標題化合物（５７ｍｇ）（式１３）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．１−２．８（ｍ，４８Ｈ），３．０（ｍ，１２Ｈ），５．２３（ｍ，６Ｈ）
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ１１１１．５８（Ｍ^＋＋Ｈ）。

実施例１０：６つのグアニジン基を有するアルジトール及びイノシトール誘導体の製造ＩＩ
中間体としてＤ−アルジトール及びｍｙｏ−イノシトール異性体をそれぞれ適用することを除いて、製造例６に記載の側鎖化合物を用いて、実施例６−５と同様の方法によって、実施例８−３及び実施例９−３で得たものと同様の６つのグアニジン基を有するアルジトール及びイノシトール誘導体化合物（式１２及び１３）を製造した。

実施例１１：６つのグアニジン基を有するイノシトール誘導体の製造ＩＩＩ

実施例６−５および９−１〜９−４に記載された方法と同様に、ｓｃｙｌｌｏ−イノシトールを中間体として用いて、白色固体状の標題化合物（４５．２ｍｇ）（式１４）を製造した。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１．３１−１．５６（ｍ，３６Ｈ），２．３４（ｓ，１２Ｈ），３．１５（ｓ，１２Ｈ），５．６２（ｓ，６Ｈ）
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ１１１１．７７（Ｍ^＋＋Ｈ）。

試験例１：膜透過性の測定
前記実施例で製造された、ダンシル（ｄａｎｓｙｌ）蛍光物質を有するそれぞれの化合物に対する細胞膜及び核膜の透過性を測定し、効率的に生体膜を透過することが知られるアルギニン９量体（ｄ−Ａｒｇ_９、ｄａｎｓｙｌ−Ａｒｇ_９；Ｐｅｐｔｒｏｎ社製）と、またグアニジン基を有しない中間体と比較した。

培養皿（ｄｉｓｈｐｌａｔｅ）にカバーグラスを置き、でマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７（ＡＴＣＣＴ１Ｂ−７１）をその上で培養した。細胞を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓｍｅｄｉｕｍ）で２４時間安定化させた後、無血清培地（ｓｅｒｕｍｆｒｅｅｍｅｄｉｕｍ）で２４時間培養し、細胞を飢餓（ｓｔａｒｖｅ）状態にさせた。その後、前記細胞を、ｄ−Ａｒｇ_９、製造例１−２で製造された中間体、ならびに実施例１、２及び６で製造された化合物のいずれかで、７μＭの濃度、一定温度（２３〜２５℃）で３分間処理した。細胞をＲＮａｓｅ（１００μｇ／ｍｌ）で処理した後、一定温度（２３〜２５℃）で５分間、ヨウ化プロピジウム（２μｇ／ｍｌ）で処理して核を染色した後、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒＳｏｌｕｔｉｏｎ）で３回洗浄した。細胞をエタノールで１日固定し、Ａｒレーザー（波長４５８ｎｍ）を用いて共焦点顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）で収束面の断面を観察し、４００倍の倍率で蛍光シグナルを検出した。その結果を図１に示す。

図１において、（１）は、ｄ−Ａｒｇ_９で処理したＲＡＷ２６４．７細胞の蛍光イメージであり；（２）は、グアニジン基がない製造例１−２の中間体化合物で処理した蛍光イメージであり；（３）及び（４）は、本発明による、それぞれ８つ及び７つのグアニジン基を有する実施例１及び６の化合物で処理した蛍光イメージである。カラムＡの緑色は、細胞内部で輸送体化合物によって放出された蛍光の強さを示し、カラムＢの赤色は、ヨウ化プロピジウムで染色した核を示し、カラムＣは、赤色および緑色の重ね合わせを示しており、黄色が強いほど、輸送体化合物が核内に存在することを意味する。

図１から明らかなように、実施例１及び６の化合物が、ｄ−Ａｒｇ_９よりも、および細胞内に透過しそこなったグアニジン基を含まない中間体よりも、優れた核内への取り込みを示すことが示される。

これらの結果から、本発明による高い膜透過性を示す化合物が、生理活性分子を細胞内に送達するための分子輸送体として有効に利用可能であることが明らかである。

試験例２：イオン複合体の生体膜透過性の測定
実施例９または１０の化合物と、蛍光標識されたｃＡＭＰまたはオリゴヌクレオチドとのイオン複合体（電荷基準の組成比１：１〜１０：１）を製造し、試験例１と同様な方法で細胞膜透過性の実験を行った。共焦点顕微鏡で観察し、結果を図２に示した。

図２において、（１）は、蛍光標識された陰イオン物質のみで処理したＲＡＷ２６４．７細胞の蛍光イメージであり；（２）は、蛍光標識された陰イオン物質と輸送体化合物とのイオン複合体（電荷基準の組成比１：１）で処理した蛍光イメージであり；（３）は、蛍光標識された陰イオン物質と輸送体化合物とのイオン複合体（電荷基準の組成比１：５）で処理した蛍光イメージである。カラムＡ、Ｂ及びＣの意味は図１と同様である。

図２から、蛍光標識された陰イオン物質と実施例９または１０の化合物とのイオン複合体（電荷基準の組成比１：５）が優れた細胞膜透過性を示すことが分かる。

これらの結果から、本発明による化合物が、イオン複合体の形態にて細胞膜透過性が増大し、これによって、それらが、生理活性分子の送達のための分子輸送体として有用であることが分かる。

図１は、様々な化合物の細胞膜及び核膜透過性の比較を示す：（１）はダンシル−Ａｒｇ_９；（２）はグアニジン基がない製造例１で製造された中間体化合物；（３）及び（４）は、本発明による、それぞれ８つ及び７つのグアニジン基を有する実施例１及び６の輸送体化合物。図２は、様々な化合物の細胞膜及び核膜透過性の比較を示す：（１）は蛍光標識された陰イオン物質のみ；（２）は陰イオン物質と輸送体化合物とのイオン複合体（電荷基準の組成比１：１）；（３）は陰イオン物質と輸送体化合物とのイオン複合体（電荷基準の組成比１：５）。

Claims

式１で表される糖アルコール誘導体：

式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＲ’、−（ＣＨ_２）_ｌＣＯ_２Ｒ’’、−ＣＯＲ’’’、−ＳＯ_２Ｒ’’’’または生理活性分子であり；ここで、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキルまたは生理活性分子であり；ｍは２から５の整数であり；ｌは１から５の整数であり；
Ｒ_３は、

であり、ｎは１から１２の整数である。
ソルビトール、マンニトールまたはガラクチトールの骨格を有するアルジトール誘導体である、請求項１に記載の糖アルコール誘導体、またはその塩。
式２で表される糖アルコール誘導体、またはその塩：

式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＲ’、−（ＣＨ_２）_ｌＣＯ_２Ｒ’’、−ＣＯＲ’’’、−ＳＯ_２Ｒ’’’’または生理活性分子であり；ここで、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキルまたは生理活性分子であり；ｍは２から５の整数であり；および、ｌは１から５の整数であり；
Ｒ_３は、

であり、ここで、ｎは１から１２の整数である。
式７、８または９で表される、請求項３に記載の糖アルコール誘導体、またはその塩：

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は請求項３に定義される通りである。
前記式７から９の化合物が、ｍｙｏ−またはｓｃｙｌｌｏ−イノシトール異性体の骨格を有する、請求項４に記載の糖アルコール誘導体、またはその塩。
式３で表される二糖類誘導体、またはその塩：

式中、
Ｘは、

であり、ここで、Ｒ_１は−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＲ’であり、ｍは２から９の整数であり；Ｒ’は、Ｈ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキルまたは生理活性分子であり；
Ｒ_２は、

であり、ここで、ｎは１から１２の整数である。
式１０または１１で表される、請求項６に記載の二糖類誘導体、またはその塩：

式中、Ｒ_１及びＲ_２は請求項６に定義される通りである。
前記式１０の化合物がスクロースの骨格を有する、請求項７に記載の二糖類誘導体、またはその塩。
前記式１１の化合物がα−ラクトース、β−ラクトースまたはマルトースの骨格を有する、請求項７に記載の二糖類誘導体、またはその塩。
式４で表される糖アルコール誘導体：

式中、
Ｒ_１は

であって、ここでｎは１から１２の整数である。
ソルビトール、マンニトールまたはガラクチトールの骨格を有するアルジトール誘導体である、請求項１０に記載の糖アルコール誘導体、またはその塩。
式５で表される糖アルコール誘導体、またはその塩：

式中、
Ｒ_１は

であって、ここで、ｎは１から１２の整数である。
式１３または１４で表される、請求項１２に記載の糖アルコール誘導体、またはその塩：

式中、Ｒ_１は請求項１２に定義される通りである。
前記式１３または１４の化合物が、ｍｙｏ−またはｓｃｙｌｌｏ−イノシトール異性体の骨格を有する、請求項１３に記載の糖アルコール誘導体、またはその塩。
以下の段階を含む、式１で表される糖アルコール誘導体の製造方法：
１）保護されたアルジトール中間体のヒドロキシル基に、アシル化反応によりアミノ酸側鎖を導入する段階；
２）段階１）で得られた化合物のアミノ酸側鎖の末端アミノ基に、保護されたグアニジン基を導入する段階；及び
３）段階２）で得られた化合物のグアニジン基から保護基を除去する段階；

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は請求項１に定義される通りである。
前記段階１）の中間体が式１５の化合物である、請求項１５に記載の方法：

式中、Ｒ_１及びＲ_２は請求項１に定義される通りである。
以下の段階を含む、式２で表される糖アルコール誘導体の製造方法：
１）保護されたイノシトール中間体のヒドロキシル基に、アシル化反応によりアミノ酸側鎖を導入する段階；
２）段階１）で得られた化合物のアミノ酸側鎖の末端アミノ基に、保護されたグアニジン基を導入する段階；及び
３）段階２）で得られた化合物のグアニジン基から保護基を除去する段階；

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_３は請求項３に定義される通りである。
前記段階１）の中間体が式１６から１８の化合物から成る群から選択される、請求項１７に記載の方法：

式中、Ｒ_１及びＲ_２は請求項３に定義される通りである。
以下の段階を含む、式３で表される糖アルコール誘導体の製造方法：
１）保護された二糖類中間体のヒドロキシル基に、アシル化反応によりアミノ酸側鎖を導入する段階；
２）段階１）で得られた化合物のアミノ酸側鎖の末端アミノ基に、保護されたグアニジン基を導入する段階；及び
３）段階２）で得られた化合物のグアニジン基から保護基を除去する段階；

式中、Ｘ及びＲ_２は請求項６に定義される通りである。
前記段階１）の中間体が、式１９または２０の化合物である、請求項１９に記載の方法。
以下の段階を含む、式４で表される糖アルコール誘導体の製造方法：
１）保護されたアルジトール中間体のヒドロキシル基に、アシル化反応によりアミノ酸側鎖を導入する段階；
２）段階１）で得られた化合物のアミノ酸側鎖の末端アミノ基に、保護されたグアニジン基を導入する段階；及び
３）段階２）で得られた化合物のグアニジン基から保護基を除去する段階；

式中、Ｒ_１は請求項１０に定義される通りである。
請求項１の中間体が式２１の化合物である、請求項２１に記載の方法。
以下の段階を含む、式５で表される糖アルコール誘導体の製造方法：
１）保護されたイノシトール中間体のヒドロキシル基に、アシル化反応によりアミノ酸側鎖を導入する段階；
２）段階１）で得られた化合物のアミノ酸側鎖の末端アミノ基に、保護されたグアニジン基を導入する段階；及び
３）段階２）で得られた化合物のグアニジン基から保護基を除去する段階；

式中、Ｒ_１は請求項１２に定義される通りである。
前記段階１）の中間体が式２２または２３の化合物である、請求項２３に記載の方法。
前記段階１）及び２）が、末端アミノ酸側鎖に保護されたグアニジン基を導入し、および、アシル化反応によって、保護された中間体のヒドロキシル基にグアニジン基を有する側鎖を導入する段階に置き換えられる、請求項１５、１７、１９、２１または２３に記載の方法。
式１から５から成る群から選択される化合物を含む、生体膜を通して細胞内または核内に生理活性分子を送達するための組成物：

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は請求項１に定義される通りである；

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は請求項３に定義される通りである；

式中、Ｘ及びＲ_２は請求項６に定義される通りである；

式中、Ｒ_１は請求項１０に定義される通りである；

式中、Ｒ_１は請求項１２に定義される通りである。
前記生理活性分子が、分子量１００から１５００ｇ／ｍｏｌの有機化合物である、請求項２６に記載の組成物。
前記生理活性分子がペプチドおよび核酸である、請求項２６に記載の組成物。
前記式１、２または３の化合物が、共有結合により前記生理活性分子と共有結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成する、請求項２６に記載の組成物。
前記式１、２または３の化合物が、イオン結合により前記生理活性分子とイオン複合体（ｉｏｎｉｃｃｏｍｐｌｅｘ）を形成する、請求項２６に記載の組成物。
式１から５の化合物から成る群から選択される化合物を分子輸送体として用いる段階を含む、生体膜を通してヒトの細胞を除く細胞内または核内に生理活性分子を送達する方法：

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は請求項１に定義される通りである；

式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は請求項３に定義される通りである；

式中、Ｘ及びＲ_２は請求項６に定義される通りである；

式中、Ｒ_１は請求項１０に定義される通りである；

式中、Ｒ_１は請求項１２に定義される通りである。