JP4901475B2 - 電気泳動用担体 - Google Patents
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Description
n=0〜100000
m=0〜100000であり、
R1、R2、R3、及びR4=水素、ハロゲン、メチル基、又は(枝分れ又は環状構造を含んでいてもよい)非芳香族炭化水素鎖であり、
X、Y=メチレン基、又は(枝分れ又は環状構造を含んでいてもよい)非芳香族炭化水素鎖であり、
Yは、存在しなくてもよい。
ポリプロピレン:R1=CH3、R2=R3=R4=Hであり、二軸延伸ポリプロピレン(BOPP)が最も好ましい。
ポリクロロトリフルオロエチレン(Aclar(商標)とも呼ばれるPCTFE):R1=Cl、R2=R3=R4=F、
ポリシクロオレフィン:
Zeonex(商標):n=0、R5=R6=H
Zeonor(商標)、TOPAS(商標):R1=R2=R3=R4=R5=R6=Hである。
1.遮断/ゲル接着材料(アリルグリシジルアガロース)の合成:
アガロース(10グラム)を、沸騰水490mlに溶解する。溶液を80℃に維持する。1.67gの水素化ホウ素ナトリウムを、14M水酸化ナトリウム10mlに添加し、次いで絶えず撹拌しながら、アガロース溶液に添加した。10分後に、10%水酸化ナトリウム溶液100mlを添加し、続いてアリルグリシジルエーテル25mlを15分間かけて滴下する。1時間後に、さらにアリルグリシジルエーテル25mlを以前と同じようにして加え、さらに1時間反応させる。反応混合物を60℃に冷却し、次いで4M酢酸を添加して中和する。
二軸延伸ポリプロピレン(OPP C58、UCBフィルム)(ガラスコーティング付きと無しの両方)、PET、Aclar 11C(Honeywell)、及びZeonor 1420R(Zeon Chemicals)にコーティングを行った。上記に述べたプラスチックのシートを、Plasma ElectronicのPICCOLO RF駆動反応器を用いて、以下の条件下でプラズマ処理した:RF電力240ワット、酸素流量180sccm、3分。プラズマ処理に続いて、フィルムを、1−%アリルグリシジルアガロース水溶液でコーティングした。コーティングは、渦巻形ロッドアプリケータを使用して、湿潤厚36μmに調製した。
コーティングプロセスを、4つのパラメータを用いた要因実験として行った。テトラメチルジシロキサン(TMDSO)流量、酸素流量、時間。低から高まで変えて評価した。TMDSO流量は、15から20sccmの範囲であり、酸素流量は18から26sccmであり、電力は250から300Wであり、時間は10から30秒であった。
表面の親水性を増大させるために、フィルムをプラズマ反応器中で酸素を流しながら処理して、シラン化用の活性ヒドロキシ部位を実現させた。プラスチックフィルムを、Plasma ElectronicのPICCOLO RF駆動反応器を用いて、以下の条件下でプラズマ処理した:RF電力240ワット、酸素流量180sccm、3分。
プラズマ処理した後、表面の清浄さの指標である水接触角を測定して、表面が所望どおりに親水性であることを確認した。測定は、Rame−Hartの手動接触角ゴニオメーターを用いて行った。
シラン溶液は、エタノール(32ml)、酢酸(4.8ml)、及びBind Silane(γ−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン、Amersham Biosciences)(240μl)をビーカー中で混合することによって調製した。シラン溶液は、使用前の約5分間撹拌したままにした。プラズマ処理前のガラスコーティング付きプラスチックフィルムは、ガラスコーティング付き表面にBind Silane溶液を1枚あたり約1mlで添加し、それを表面全体にKleenexティッシュペーパーで塗布することによって、シラン溶液で処理した。表面を放置して、過剰のエタノールを約20分間蒸発させ、最後に表面をエタノールで湿らせたKleenexティッシュペーパーで磨いて、表面に共有結合しなかった過剰のBind Silaneを除去した。
キャスティング装置は、ガラス板(8.5×8.5cm)からなる。コーティング付きのプラスチックは、アリルグリシジル−アガロースフィルムを含む親水性側面を外側に向けて、ガラス板の上に載せた。1mm厚のU字型スペーサを、ガラスを担体とするアリルグリシジルアガロースコーティング付きプラスチックと、別のガラス板の間に配置した。このカセットを4個のクランプで適切な位置に保持し、垂直な位置に配置した。
スパチュラ試験
スパチュラ試験は、支持体に対するゲルの接着を評価する第1の試験であった。この試験は、ゲルをスパチュラで引っ掻き、ゲルが表面に接着したかどうかを目視で判断することによって実施した。接着が良好に見える場合、フィルムはこの試験を通過して、さらに真空試験に進んだ。
真空試験では、真空装置を使用して、吸引による支持体を評価することによって、ゲルの支持体への接着を評価した。吸引ノズルは、ゲルにノズルを突き通すことによって支持体上に配置し、圧力を20〜30mbarにまで下げ、次いでノズルを表面からまっすぐに引き抜くことによって慎重に外した。
シラン化表面
ガラスコーティングしシラン化したUCB社製OPPフィルムは、良好な接着を示し、5か所のうちの4か所の平均値は、表面にしっかりと接着していた。
アリルグリシジルアガロースコーティングした表面
ガラスコーティングしていないOPP、Aclar、及びZeonor上のアリルグリシジルコーティングはそれぞれすべて、参照として使用したGelBond PAG(Cambrex社製PET系支持体フィルム)に比べて、真空試験で良好な接着結果を示した。
本発明によるコーティング付きフィルムは、特に2D電気泳動の二次元目に適している。この実施例では、一次元目、すなわち等電点電気泳動を、Immobiline Dry Strip(商標)で行う。二次元目では、ストリップを、ジチオトレイトール(DTT)で平衡にし、ゲルの上に載せ、封入溶液で封入した。タンパク質を、一定電力(2.5W/ゲル)で15〜30分間ゲルに入らせ、次いで分離を17W/ゲル(最大200W)で、色素先端がゲルの底部に到達するまで行った。温度は、25℃に設定した。
Claims (13)
- スラブゲル電気泳動向けの電気泳動用ヒドロゲルの低蛍光性担体フィルムであって、ヘイズ値が3%未満の二軸延伸ポリプロピレン、ポリクロロトリフルオロエチレン(PCTFE)又は次式のポリシクロオレフィンから選択されるポリマーを含む低蛍光性担体フィルム。
n=0、0<m<100000であって、R5及びR6がHであるか、
或いは
0<n≦100000、0<m≦100000であって、R1、R2、R3、R4、R5及びR6がHである。 - 前記ヒドロゲルが、電気泳動用のアガロース、アクリルアミド又はアクリルアミド誘導体である、請求項1記載の低蛍光性担体フィルム。
- 2D電気泳動の二次元目のための、請求項1又は請求項2記載の低蛍光性担体フィルム。
- 低蛍光性担体フィルムに、酸素バリア層及びゲル接着剤として機能する材料の上層が設けられているか、又は積層されており、該上層がフィルムとヒドロゲルの間に設けられている、請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載の低蛍光性担体フィルム。
- 前記材料がアリルグリシジルアガロースである、請求項4記載の低蛍光性担体フィルム。
- 前記担体に2層が設けられ又は積層されており、該2層がフィルムとヒドロゲルの間にあり、そのうち一方の層が酸素バリア材料であり、他方の層がゲル接着材料である、請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載の低蛍光性担体フィルム。
- 前記2層がそれぞれガラス及びシランからなる、請求項6記載の低蛍光性担体フィルム。
- 前記ポリマーが二軸延伸ポリプロピレン(BOPP)であり、前記上層がアリルグリシジルアガロースであり、前記ヒドロゲルがアクリルアミドである、請求項4記載の低蛍光性担体フィルム。
- 請求項1乃至請求項8のいずれか1項記載の担体フィルムとヒドロゲルとを含む複合材料。
- 二軸延伸ポリプロピレン(BOPP)の担体ポリマーフィルムと、アリルグリシジルアガロースのバリア層/接着層と、ポリアクリルアミドのヒドロゲルとを含んでいて、前記バリア層/接着層が前記担体ポリマーフィルムと前記ヒドロゲルとの間に設けられている、請求項9記載の複合材料。
- BOPPフィルムの厚さが85μmを超える、請求項10記載の複合材料。
- 2D電気泳動用のキットであって、二次元目用の請求項10又は請求項11記載の複合材料と、一次元目用のImmobilibe Dry strip(商標)とを含む2D電気泳動用キット。
- 前記ヒドロゲルが予め膨潤されており、当該キットがPPA緩衝剤をさらに含む、請求項12記載のキット。
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