JP2007256037A - 二次元電気泳動システムにおける等電点電気泳動用ゲル - Google Patents
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Abstract
【課 題】従来の二次元電気泳動システムにおいて、等電点電気泳動操作が長時間かかり、さらに高分子量タンパク質への適用が困難であるという課題を克服する。なおかつ、技術的に熟練が必要である従来の二次元電気泳動システムにかわり、取扱いが容易で、試料の損失や失敗の少ない二次元電気泳動システムを構築する。
【解決手段】二次元電気泳動システムにおける等電点電気泳動操作において、ゲルの支持体として親水性フィルターを用いることによって、ゲルの低濃度化を可能にし、泳動時間の短縮と、高分子量タンパク質への適用を実現する。さらに、親水性フィルターは物理的強度も大きく、自重で垂れ下がることがないので、ゲルの低濃度化による崩壊を防ぐだけではなく、取扱いも容易になる。
【選択図】なし
Description
acrylamide gel electrophoresis、以下SDS-PAGEと記述する)へ移行する際の平衡化処理やSDS-PAGEシステムに棒状ゲルを設置する際の取扱いが難しく、もともと低濃度アクリルアミドゲルで構成されているゲルが崩壊しやすいという問題点もあった。
また、試料を注入するために親水性フィルター部分の一カ所に穴を空け、試料の注入口を設けた。
親水性フィルターを用いた棒状ゲルの作製
まず、図2、図3に示したゲル作製用の装置を組み立てた。この装置は特許文献1の図2に示されているゲル作製用の装置に改良を加えたものである。具体的には、ゲルを一度流入させれば様々な太さの棒状ゲルの作製が可能となるように、溝の幅および深さが一定距離ごとに変化するようになっている。
1時間以上静置させ、重合させた。
C(分子量13kDa, pI9.6)の3種類のタンパク質を用いた。これらのタンパク質は、泳動分離後、染色することなく検出が可能である色素タンパク質であり、なおかつ、幅広い分子量(13kDa〜264kDa)とpI(4.3〜9.6)を網羅している。
(Isoelectric focusing electrophoresis) 手法では、電気泳動操作に要する時間は、いくつかのパラメーター、例えばゲルの性質、ゲルマトリックスの編み目の度合い、pH勾配の様態、印加電圧そして試料サンプルなどに依存する。一般的に、試料のロード操作にかかる時間を含めて、現在のIEF手法において、タンパク質の分離にかかる時間は10時間以上必要であるとされている。
Claims (6)
- 二次元ゲル電気泳動システムにおける等電点分離系において、ゲルの支持体として親水性多孔質体を用い、その親水性多孔質体にアクリルアミドゲルもしくはアガロースゲルを含浸させたことを特徴とするタンパク質分離用高速二次元電気泳動システム。
- 二次元ゲル電気泳動システムにおける等電点分離系において、従来用いられてきたゲルの代わりに親水性フィルターを用いたことを特徴とするタンパク質分離用高速二次元電気泳動システム。
- 二次元ゲル電気泳動システムにおける等電点分離系に用いる親水性フィルターの形状が棒状であることを特徴とする請求項1ないし2のいずれかに記載のタンパク質分離用高速二次元電気泳動システム。
- 二次元ゲル電気泳動システムにおける等電点分離系に用いる親水性フィルターに試料の注入口を設け、一度に電気泳動が行うことのできる試料量を増加させたことを特徴とする請求項1ないし2のいずれかに記載のタンパク質分離用高速二次元電気泳動システム。
- 等電点分離系に用いる親水性フィルターの素材が、ポリプロピレン、ポリエチレン、ニトロセルロース、ポリビニリデンフルオライド、エチレンビニルアセテート、スチレンアクリロニトリル、ポリテトラフルオロエチレンのいずれかを少なくとも一部分含む素材である請求項1ないし2のいずれかに記載のタンパク質分離用高速二次元電気泳動システム。
- 等電点分離系で用いる親水性フィルターに含浸させるアクリルアミドゲルの濃度が1.8%Tまでの低濃度範囲にあることを特徴とする請求項1に記載の棒状ゲル。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2010060510A (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-18 | Japan Atomic Energy Agency | 電気泳動用低濃度ゲル及びその製造方法 |
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2006
- 2006-03-23 JP JP2006079986A patent/JP2007256037A/ja active Pending
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