JP4796043B2 - 歯周病菌増殖抑制剤 - Google Patents
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Description
請求項3に記載の発明は、請求項1又は請求項2に記載の歯周病菌増殖抑制剤において、前記ポルフィロモナス(Prophyromonas)属に含まれる歯周病菌がポルフィロモナス・ジンジバリスであることを特徴とする。
請求項4に記載の発明は、請求項1から請求項3のいずれか一項に記載の歯周病菌増殖抑制剤において、前記歯周病菌増殖抑制剤は、前記ニムフェオール−A、前記ニムフェオール−B、及び前記ニムフェオール−Cの合計量の濃度が少なくとも50ppmとなるように用いられることを特徴とする。
本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有する。オオバギ抽出物の原料であるオオバギ(大葉木)は、マカランガ・タナリウス(Macaranga tanarius)とも呼ばれる植物であって、トウダイグサ科オオバギ属に属する常緑広葉樹(雌雄異株)である。オオバギは、沖縄、台湾、中国南部、マレー半島、フィリピン、マレーシア、インドネシア、タイなどの東南アジア、オーストラリア北部などに生育している。また、オオバギは、樹木の中でも成長が極めて早く、荒廃地における成長も可能である。
抽出操作としては、抽出溶媒中に上記原料を所定時間浸漬させる。こうした抽出操作においては、抽出効率を高めるべく、必要に応じて攪拌操作、加温等を行ってもよい。また、原料から抽出される夾雑物を削減すべく、抽出操作に先だって、別途水抽出操作又は熱水抽出操作を行ってもよい。歯周病菌の増殖の抑制に対して有効に作用する成分は、オオバギに含まれるニムフェオール類である。ニムフェオール類は、水のみに対して不溶の成分であるため、オオバギを例えば熱湯で煮沸することで、ニムフェオール類以外の不必要な侠雑物を効率的に除去することができる。
さらにオオバギ抽出物には、プロポリンAが含有されている。プロポリンA(propolinA)は、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-2´-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン(5,7,3´,4´-tetrahydroxy-2´-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimethyl-2´´-octenyl)-flavanone)である。オオバギ抽出物には、微量成分として、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-5´-ゲラニルフラバノン(イソニムフェオールB:isonymphaeol−B:5,7,3´,4´-tetrahydroxy-5´-geranylflavanone)、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-5´-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン(5,7,3´,4´-tetrahydroxy-5´-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimethyl-2´´-octenyl)-flavanone)、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-6-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン(5,7,3´,4´-tetrahydroxy-6-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimethyl-2´´-octenyl)-flavanone)、5,7,4´-トリヒドロキシ-3´-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン(5,7,4´-trihydroxy-3´-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimetyl-2´´-octenyl)-flavanone)、5,7,4´-トリヒドロキシ-3´-ゲラニルフラバノン(5,7,4´-trihydroxy-3´-geranylflavanone)等が挙げられる。なお、オオバギの各部位から抽出された抽出液の中でも、実の部位(ワックスを含む)から抽出された抽出液には、ニムフェオールA,B,C及びイソニムフェオールBが高濃度で含有されている。
(1)本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有している。オオバギ抽出物は、オオバギの抽出操作によって容易かつ効率的に得ることができる。そして本研究者らは、こうしたオオバギ抽出物に含まれるニムフェオール類が歯周病菌の増殖を抑制する作用を発揮することを見出している。これにより、本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、前処理の複雑化を回避可能な植物原料から得ることができる。
・前記歯周病菌増殖抑制剤は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cから選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有し、歯周病菌の増殖を抑制するように構成することもできる。すなわち、歯周病菌の増殖を抑制する有効成分は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cから選ばれる少なくとも一種であるため、それら有効成分は、オオバギ抽出物を由来とする以外に、例えば沖縄産プロポリス等を由来としてもよい。また例えば、沖縄産プロポリス由来のニムフェオールとオオバギ抽出物由来のニムフェオールとの混合物を有効成分としてもよい。
上記実施形態から把握できる技術的思想について以下に記載する。
(実施例1)
<オオバギ抽出物の調製1>
沖縄県で採集して冷凍したオオバギの生葉を解凍した後に、はさみでその生葉を細かくカットした。カットした生葉30gと、溶媒100mlとをチューブ内に入れ、室温で2週間浸漬させて溶媒抽出を行った後に、ろ過することにより、ろ液としてオオバギ抽出液を採取した。なお、前記溶媒抽出には、エタノールと水とを体積比率でエタノール:水=90:10とした混合溶媒を使用した。次に、オオバギ抽出液を凍結乾燥することにより、オオバギ抽出液に含まれる固形分の粉末であるオオバギ抽出物を調製した。このオオバギ抽出物中に含まれるニムフェオールの濃度を、下記のHPLC条件で分析して得られたクロマトグラムから算出した結果、50質量%であった。なお、このニムフェオールの濃度は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B、及びニムフェオール−Cを合計した濃度を示している。以下においても、ニムフェオールの量は、ニムフェオール−A、ニムフェオール−B、及びニムフェオール−Cの合計量を示している。
システム: PDA−HPLCシステム(島津製作所)、LC10ADvpシリーズ、UV;SPD−10Avp、PDA;SPD−M10Avp
カラム : Luna C18 (2.0×250mm)(島津GLC)
溶媒 : A:水(5%酢酸)、B:アセトニトリル(5%酢酸)
溶出条件: 0−20min
(グラジエント溶出;A:B=80:20→A:B=30:70)
20−50min
(グラジエント溶出;A:B=30:70→A:B=0:100)
50−60min(A:B=0:100)
60−75min(A:B=80:20)
流速 : 0.2ml/min
PDA検出:UV190−370nm
UV検出: UV287nm
注入量 : 20μl
温度 : 40℃
この50質量%のサンプルのクロマトグラムを図1に示す。
以下に示される歯周病菌の菌株1及び菌株2をGAM寒天培地に白金耳を用いて接種した後に、35℃で7日間培養した。
菌株2:ポルフィロモナス・ジンジバリス(JCM12257)
これにより、増殖したコロニーをGAM寒天培地から白金耳を用いて採取した後、生理食塩水に溶解することで104cfu/mlの接種菌液1及び接種菌液2を調製した。
サンプル1:オオバギ抽出物 100ppm
サンプル2:オオバギ抽出物 250ppm
サンプル3:オオバギ抽出物 500ppm
各培地を115℃、15分間の条件で滅菌することにより平板培地を作成した。
<オオバギ抽出物の調製2>
カットした生葉0.2〜0.3gをまず水(95℃)に30分浸漬し、これを濾過した後、溶媒抽出を行った以外は、オオバギ抽出物の調製1と同様の方法にて抽出を行った。
この40質量%のサンプルのクロマトグラムを図2に示す。
実施例1と同様に抗菌活性試験を実施したところ、実施例2で調製したオオバギ抽出物においても同様の抗菌活性を示した。
Claims (4)
- ニムフェオール−A、ニムフェオール−B及びニムフェオール−Cを有効成分として含有し、前記有効成分は、低級アルコールを含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物として含有されることで、ポルフィロモナス(Prophyromonas)属に含まれる歯周病菌の増殖を抑制することを特徴とする歯周病菌増殖抑制剤。
- 前記抽出溶媒は、前記低級アルコールとしてエタノールを含むことを特徴とする請求項1に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
- 前記ポルフィロモナス(Prophyromonas)属に含まれる歯周病菌がポルフィロモナス・ジンジバリスであることを特徴とする請求項1又は請求項2に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
- 前記歯周病菌増殖抑制剤は、前記ニムフェオール−A、前記ニムフェオール−B、及び前記ニムフェオール−Cの合計量の濃度が少なくとも50ppmとなるように用いられることを特徴とする請求項1から請求項3のいずれか一項に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
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