TW200932254A - Periodontal bacterial growth inhibitor, oral hygiene product, and food and drink - Google Patents
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Description
200932254 六、發明說明: 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種牙周病菌增殖抑制劑及含有其之口 腔衛生品及飲食品。 ” 【先前技術】 因牙周病菌之感染所發病之牙周病與牙齦炎、牙周炎 及咬合性外傷有極大不同。近來已知有牙周病之慢性病 化所導致之,吸器疾病、心疾病、糖尿病、早產等起因 為牙周病菌之感染症。 作為對抗牙周病囷之抗菌劑,已知可使用可可膏 (Cacao mass)中所含之可可亞(cocoa)成分作為有效成分 (參專利文獻1)。然而’以可可亞作為有效成分之抗菌劑 之製造過程中,為獲得可可膏原料,須經過烘烤可可亞 豆等繁雜之原料前處理步驟。 另一方面,如專利文獻2所載,屬大戟科 (Euphorbiaceae)jk桐屬(Macaranga)之抽取物係有抗菌作 用。然而’血桐抽取物對抗牙周病菌之作用至今仍不 〇 明’於專利文獻2中亦無記載。 專利文獻1:國際專利公開第2003/99304號 專利文獻2:曰本專利特開2007-45754號公報 【發明内容】 本發明係根據發明者們發現血桐抽取物具有抑制牙 周病菌增殖之作用之研究成果而完成,其目的為無須經 過繁雜之原料前處理即可製造之牙周病菌增殖抑制 劑’及含有其之口腔衛生品及飲食品。 為達成上述目的,本發明之第一實施態樣係提供了一 種使用至少含有有機溶媒之抽取溶媒,以自血桐抽取之 200932254 血桐抽取物作為有效成分之牙周病菌增殖抑制劑。 本發明之第二實施態樣係提供了含有選自寧番醇 A、寧番醇寧番醇c中至少一種作為有效成分之牙 周病菌增殖抑制劑。 一本,,之第三實施態樣係提供了含有前述第一或第 一實知*態樣之牙周病菌增殖抑制劑中任一種之口腔衛 生品。 本發明之第四實施態樣係提供了含有前述第一或第 一實施態樣之牙周病菌增殖抑制劑中任一種之飲食品。 【實施方式】 以下將詳細說明本發明具體化之實施態樣。 本實施態樣之牙周病菌增殖抑制劑係含有有機溶媒 =由取溶媒,以自血桐抽取之血桐抽取物作為有效成 η金桐亦稱為Macaranga tanarius,其係屬大戟科 i^horbiaceae)血桐屬(Macaranga)之雌雄同株之常綠 ^ ^桐知'生長於沖繩(日本南部)、台灣、中國南 二?來半島、菲律賓、馬來西亞、印尼、泰國等東南 荒廢:地等。均於樹木之中成長迅速,於 器 器 取溶媒中之抽取原料,可使用血桐之所有 官:戈其成i素。抽取原料可使用血桐之單獨 5素’亦可混合使用兩種以上之金桐器官 h抑制作用。為提升所獲得之血桐抽取物之牙周病菌 3殖二制丄”’以使用含有血桐之果實、種國 有效地 體之比例,幹、根懸以卜右比权各1^占血桐整 易處理之血楠葉所占之比例較高。因此,使用較 〃身作為抽取原料可容易地確保原料來 200932254 源,於工業上較有利。 碎ΐίίίΐΐ持後ί狀態’或採取後粉碎、破 :义厲碎之狀態,或採取及乾燥後粉碎、破碎或磨碎, =取後粉碎、破碎或磨碎後使其乾社㈣以供 刼作。為使抽取有效地進行,抽取原料以破碎狀為佳。 ,,抽取原料破碎,可使用例如剪裁機(cutter)、 或疋碎料機(crusher)進行。破碎後之抽取原料之形狀並 無特別限定,例如三角形、四角形等多角形皆可^ ❹ 碎後之抽取原料為多角形,以一邊之長度為lcm左右為 佳。為使抽取原料粉碎,可使用珠磨機(mill)、碎機 (cmsher)或研磨機(grinder)進行。為使抽取原料磨碎, 使用捏合機(kneader)或乳钵進行。 作為自抽取原料中抽取也桐抽取物之際所使用之抽 取溶媒,可使用如水與有機溶媒之混合溶媒,例如可列 舉低級醇、二甲基亞砜(dimethyl sulf〇xide)、乙猜 (acetonitrile)、丙酮、醋酸乙酯、己烷、丙三醇(glycerin/ 丙烯乙二醇(propylene glycol)等有機溶媒。作為可使用 之低級醇,可列舉曱醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇等。 有機溶媒可單獨使用一種類之溶媒,亦可混合使用複數 種類之溶媒。丙三醇及丙烯乙二醇以往已有作為溶劑或 濕潤劑而用於牙膏或漱口水等口腔衛生品中。因此,於 使用丙二醇或丙稀乙一醇作為抽除溶媒而獲得之血桐 抽取液之情況下,可省略需進一步加入丙三醇或丙烯乙 一醇作為溶劑或濕潤劑之步驟。因此,在將血桐抽取液 混入口腔衛生品而使用之情況下,抽取溶媒以含有丙三 醇或丙烯乙二醇為佳。以水與有機溶劑之混合溶媒作為 混合溶媒之情況下,混合溶媒中有機溶媒之含量以體積 50%以上為佳,以體積80%以上為更佳。於混合溶媒中 有機溶媒之含量為體積50%以上時,可更有效率地抽取 血桐中所含之有效成分。有機溶媒以低級醇為佳,其中 200932254 以乙醇為更佳。 、無機鹽、緩衝劑 於抽取溶媒中,亦可溶解有有機鹽 乳化劑、糊精(dextrin)等。 胤 ϋ係藉由使抽取原料於抽取溶媒中浸潰既定之時 二—碑=。於抽取之際為提升抽取效率,應需求亦可 =仃攪拌、加溫或同時進行兩者。此外,為減少 自抽取 =媒中抽取不必要之雜質,於使用抽取溶媒進行抽取之 刚,亦可準備預先經水抽取或熱水抽取,並除去抽取水 之=取原料。被視為具有抑制牙周病菌增殖作用之血桐 所含之成分為寧番醇(nymphaeol)類。寧番醇類不溶於 水,因此,藉由將金桐於例如熱水中煮沸,可有效地將 寧番醇類以外之雜質移至抽取水中並予以去除。 自抽取原料中所抽取之血桐抽取物,為分離去除抽取 原料之殘渣,將經過固液分離處理。固液分離可藉由過 滤、離心分離等公知之方法進行。 藉由應需求去除液體狀之it桐抽取物所含之抽取溶 媒,可獲得固體狀之血桐抽取物。去除液體狀之血桐抽 取物所含之抽取溶媒可藉由例如於減壓下加熱而進 行’亦可藉由冷凍乾燥而進行。 ❹ 於使用至少含有有機溶媒之抽取溶媒自血桐抽取出 之血桐抽取物中’係含有選自寧番醇A (別名5,7,3,4,-四羥_ -6- 香葉草 醋黃院 , 5,7,3’4,-tetrahydroxy-6-geranylflavanone)、寧番醇 b(別 名5,7,3’4’-四經-2’-香葉草醋黃燒_ , 5,7,3,,4,-tetrahydroxy-2’-geranylflavanone)及寧番醇 C(別名,,了一’斗’-四羥各^’”^”’-二曱基丙烯基^^’-香葉 卓醋 黃烧綱 , 5,7,3’,4’-tetrahydroxy-6-(3’’,,3’’’-dimethylallyl)-2,-geran ylflavanone)中至少其中一種。被推測為具有抑制牙周病 菌增殖作用之血桐抽取物之主要成分係選自寧番醇A、 200932254 寧番醇Β及寧番醇C中至少其中一種,亦即寧番醇類。 血桐抽取物中亦進一步含有蜂膠素A(propolin A,別 名 5,7,3’4’-四幾-2’-(7’’-經基-3’’,7’’-二甲基 _2,,_ 辛稀 基 )-2’- 黃燒嗣 5,7,3 4 -tetrahydroxy-2 -(7 -hydroxy-3’’,7’’-dinietliyl-2’’ -octenyl)-flavanone)。作為包含於血桐抽取物中之其他微 量成分’可含有例如5,7,3,,4,-四羥-5,-香葉草酯黃烷酮 (5,7,3’,4’-tetrahydroxy-5,-geranylflavanone,別名異寧番 醇 B (isonymphaeol-B))、5,7,3,,4,-四羥-5,- (7,,-四經 -3,7’’-二曱基-2’’-辛烯基)黃烷酮 (5,7,3,,4 ’ _tetrahydroxy-5,-(7--hydroxy-3-,7--dimethyl-2--.〇ctenyl)-flavanone)、 5,7,3’,4’·四羥-6·(7”-四羥_3,7”_二曱基_2”_辛烯基)黃 烧 、 嗣 (5,7,3,4 ·ί6ίΓΗΐιγ(ΐΓ〇χγ-6-(7’’-1^(ΐΓ〇χγ-3,,,7,’-(ϋιη6ί1^1·2, H _一甲基·2”_辛烯基)黃烧鋼(5,7,4,々_1'〇^-3,_ 7 ’droxy_3,,,7,,_dimethyl_2,、〇e 如谓 、 5,7,4’-三經-3\香 二廿」
Γ5 7 4» f a 〇 督葉草S日!炫酿I (5,7,4 •tnhydroxe’-geranymava^ 。 實所艾由取之抽取液中,自含有樹蠟之果 異寧番醇Β。特3有兩濃度之寧番醇A、B、C及 牙周病菌增殖抑制劑於 作用之情況下,村害其牙周病㈣殖抑制 可包含於牙周病菌增殖1 S:取物之外之成分。作為 分,可列舉例如賦形劑=劑之血桐抽取物之外之成 甜味料等。 ]基4、孔化劑、安定劑、香料、 牙周病菌增殖抑制劑可為 病菌增殖抑·之劑ϋϋ,亦可為固體狀。牙周 玉难無特別限定’可使用例如散 200932254 劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、膠囊、藥丸、注射劑等。 因牙周病菌之感染而發病之牙周病與牙齦炎、牙周炎 及咬合性外傷有極大不同。本實施態樣之牙周病菌抑制 增殖劑係藉由抑制牙周病菌之增殖,而使用於牙周病之 治療及預防。 作為牙周病菌,已知有放線桿菌屬(Actinobacillus)、 視眾早胞菌屬(p0rphyromonas)、普雷沃氏菌屬(prevotella) 或=梭細菌屬(fus〇bacterium)等細菌。作為放線桿菌屬 細菌之例’可列舉如伴放線桿菌(Actin〇bacillus φ actin〇myCetemcomitans)等。作為視紫單胞菌屬細菌之 例可列舉如〇卜琳單胞菌(p〇rphyr〇m〇nas gingivaHs)、非 解糖外琳單胞菌(Porphyromonas asaccharolytica)及牙髓 口卜琳單胞菌(Porphyromonas endodontalis)。作為普雷沃 氏菌屬細菌之例’可列舉如中間普雷沃菌(Prev〇tella intermedia)、變黑普雷沃菌(prev〇tei〗a nigrescens)、產黑 色普雷沃菌(Prevotella melaninogenica)等。作為細梭細 菌屬細菌之例,可列舉如具核梭桿菌(Fus〇bacterium nucleatum)、具核梭桿菌(Fusobacterium necrophorum)、 舟型梭杆菌(Fusobacterium naviforme)等。 ❹ 於此等牙周病菌中,以放線桿菌屬及視紫單胞菌屬之 牙周,菌被視為牙周病之主要病源菌。本實施態樣之牙 周病菌增殖抑制劑係藉由抑制放線桿菌屬或視紫單胞 菌屬之牙周病菌之至少一方之增殖,以發揮優良之牙周 病預防及治療之效果。 牙周病菌增殖抑制劑可作為口腔衛生品、飲食品、醫 藥品、外用醫藥品而使用。牙周病菌增殖抑制劑之有效 成分易於與牙周組織接觸,可充分發揮有效成分之作 用,因此以作為口腔衛生品或飲食品予以利用為佳。 本實施態樣之口腔衛生品係含有前述牙周病菌增殖 抑制劑。作為口腔衛生品之例,可列舉如牙粉、牙膏、 200932254 液狀牙τ、漱口水、牙肉按摩霜、局部塗抹劑、喉糖、 香糖牙線等。含有牙周病菌增瘦抑制劑之口腔 ^因可抑制Π腔内之牙周蘭之增殖,可有效預防及治 ,牙周病。於D腔衛生品中,血姉取物以換算成固 伤而言,以含有0.001〜10重量%為佳,以〇 為更佳。於口腔衛生品中含有血桐 。 固體份而言,若含有隨重量%以上,可特別以 ”,衛生品抑制牙周病菌之增殖。然而, 二血m物之含量以換算成㈣㈣ 重1%,並無法獲得與該高含量成比例之高 果。口腔衛生品除可因應其形 需未含有例如乳化劑、溶劑、安定劑等。 J視 飲食品可為例如健康食品、特定 ί量之血桐抽取物為佳,以含有㈣1〜1 於飲食品中含有企桐抽取物之量 以換具成固體份而言,若含有0 001重以 m由品抑制牙周病菌之增瘦。然而,若口 ❿ ί ΓΛ: t ί 物之含量以換算成固體份而言超 得與該高含量成_之高度牙周 =之效果。飲食品除可因應其形態,亦可視 茜求含有例如乳化劑、溶劑、安定劑等。 本實施態樣可獲得以下之效果。 从iff之牙周病菌增殖抑制劑係含有血桐抽取 物作為有效成分。血桐抽取物藉由使用至少含有有機溶 媒之抽取溶媒抽取血桐,可容易且有效進行。亦 之牙周病菌增殖抑制劑不須繁雜之原料 則處理即可製造。 ,外’血^樹木之中成長迅速,於荒廢土地上亦可 生存’因此,、栽培並不繁瑣。且血桐抽取物因來自植 200932254 物,亦具有南安全性。因此太鲁 殖抑制劑無論從原料之供仏忠施態樣之牙周病菌增 角度均為優良。 、、σ文疋性、生產性、安全性之 本實施態樣之口腔衛生σ 病菌增殖抑制劑,係食品因含有前述牙周 果。 ⑼係、具有與牙周病菌增殖劑相同之效 前述實施態樣亦可變更如下。 之殖ί!制劑亦可以如沖繩產之蜂膠等所含 2來自a桐之選自寧#醇八、寧或寧
物作為有效成分。 Μ進—步添加人血桐抽取 接著舉出實施例以具體說明本發明。 實施例1 <金桐抽取物之調製1> 將採集於沖繩縣且予以冷凍之血桐生葉解凍,以剪刀 予以細細裁斷。將30g裁斷後之生葉於1〇〇mL之9〇體 $份乙醇與10體積份水所組成之混合溶媒中於室溫下 靜置2週。接著過渡並將該過濾、液作為企桐抽取液回 收藉由冷;東乾燦血桐抽取液,以取得血> 桐抽取物中所 ❹ 含之為固體份粉末狀態之血桐抽取物。粉末狀之血桐抽 取物中之寧番醇A、寧番醇B及寧番醇C之合計濃度, 以下述之HPLC條件分析血桐抽取物進行分析,從所獲 得之第一圖所顯示之層析圖計算出之結果為50重量%。 HPLC條件 系統·· PDA-HPLC系統(島津製作所)、LC10Advp系 列、UV ; SPD-lOAvp、PDA ; SPD-MlOAvp。 層析管:Luna Cl8 (2.0x250mm)(島津 GLC) 溶媒:A:水(5%醋酸)、B:乙腈(acetonitrile) 溶出條件:0-20 min (梯度沖提;Α··Β = 80:20 — Α·.Β =30..70) 200932254 20-50 min (梯度沖提;A:B= 30:70 -> A:B =0:100) 50-60 min (A:B =0:100) 60-75 min (A:B = 80:20) 流速:0.2ml/min PDA 檢出:UV 190-370nm UV 檢出:UV 287nm 注入量:20 // 1
溫度:40°C <對抗牙周病菌之血桐抽取物之抗菌活性試驗> 將牙周病菌株1(伴放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans),JCM8577)及牙周病菌株 2(卟 嚇·單胞菌(Porphyromonas gingivalis),JCM12257)分別以 接種環接種至GAM洋菜培養基,於35°C下培養7天。 藉由培養而增殖之牙周病菌株之菌落使用接種環採 取’並溶解於生理食鹽水中,調製成104cfu/ml之接種 菌液2。 使藉由前述「血桐抽取物之調製丨」所獲得之血桐抽 取物與GAM洋菜培養基混合,調製成平板培養基。, 製血桐抽取物之最終濃度為100ppm之樣品平板培養基 1 ’調製血桐抽取物之最終濃度為25〇ppm之樣品平板块 養基2,調製血桐抽取物之最終濃度為5〇〇ppm之: 平板培養基3。此外將乙醇與GA1V[洋菜培養基混合了 調製成乙醇最終濃度為0.7%之空白對昭平板谇養義〇 ’ 以= 品平板培養基1〜3及空白對照平板培^養基土分別 J分鐘之條件進行滅菌後,將前述接種。 U -茜*t液以接種環塗抹於各平板培養基上。接著, 培養後,於確認平板培養紅有㈣落。&養病7#株 11 200932254 有於空白對照組平板培養紅樣品培養a 1觀察 S 樣品培養基2及樣品培養基 到菌落,但於樣品培養基χ、樣f :培且 培養基3並無觀察到菌落。亦即,牙周 二 桐抽取物之濃度為25〇PPm以上(換算成寧番 知為125ppm以上)時將受到阻礙。而牙周 ❹ ❹
☆於血桐抽取物為10¥以上(換算成寧番^度 ^()Ppm以上)時將受到阻礙。藉由此結果可H 周物f牙周病菌株2增殖之抑制效果較牙 η病菌株1增殖之抑制效果高。 實施例2 <血桐抽取物之調製2> 首,將30g之已裁斷之血桐生葉浸潰於水中3〇分 :错^過濾去除水,將殘餘葉浸潰於100%乙醇中三 #。將其過渡後取過滤液作為血桐抽取液而ί = 藉由來結乾燥,以調製成金桐抽取液所 體末之血桐抽取物。粉末狀之血桐抽取物中 寧番醇6及寧番醇C之合計濃度,亦即寧番 2之農度’以前述之HPLC條件分析血桐抽取液進行 所獲得之第二®關示之層析圖計算出之結果 符刊室篁%。 <對k牙周病菌之血桐抽取物之抗菌活性試驗> 於與實施例1同樣之方式進行抗菌活性試驗時,於 ^例2所調製之金桐抽出物係獲得與實施例丨同樣之結 3"確認於實施例1所調製之血桐抽取物與實施例2 斤调製之血桐抽取物具有同樣之抗菌活性。 【圖式簡單說明】 第—圖為顯示實施例1之血桐抽取物使用高速液體層 12 200932254
❹ 析分析之層析圖。 第二圖為顯示實施例2之血桐抽取物使用高速液體層 析分析之層析圖。 【主要元件符號說明】 無 13
Claims (1)
- 200932254 七、申請專利範圍: 1. 一種牙周病菌增殖抑制劑,其特徵為使用至少含有有 機溶媒之抽取溶液,以自血桐中抽取之血桐抽取物作 為有效成分。 2. 如申請專利範圍第1項所述之牙周病菌增殖抑制劑, f係具備抑制屬放線桿菌屬(Actinobacillus)或屬視紫 單胞菌屬(porphyromonas)之牙周病菌中至少其中任何 一者之增殖作用。 3· —種牙周病菌增殖抑制劑,其特徵為含有選自寧番 4 寧番醇B或寧番醇C中至少一種作為有效成分。 專利範圍第3項所述之牙周病菌增殖抑 ,中則述争番醇A、寧番醇B或寧番醇c中至 係來自血桐抽取物。 檀 5·如申請專利範圍第3項所述之牙周病 其係具備抑制屬放線桿菌屬(A ti 曰1劑, 單胞菌屬(P〇rphy_〇nas)之牙周病菌見紫 一者之增殖之作用。 至乂其中任何 6· 一種口腔衛生品,其特徵為含有如 ο 項至第5項中任一項所述之牙 与範圍第i 項至 7.;種飲食品,其特徵為含有如申請J 劑。 45項中任一項所述之牙周病菌增殖抑=第1 14
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