JP4790333B2 - 脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の試験方法及びその主に化粧用途への使用 - Google Patents

Description

本発明は、脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の試験方法及びその主要な化粧への使用に関するものである。
本発明は、脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の試験方法、このように検出される脂肪分解の分野において作用のある物質、並びに、スリミング・ケアを行うための、血液微小循環を増加させるための、皮膚の外観を向上させるため、及び特にオレンジピールの出現を減少させる為の化粧分野又は医薬分野でのそれらの使用に本質的に関するものである。

スリミング生成物及び脂肪分解に関する従来技術
今日まで研究室内で発展してきた脂肪分解生成物は、実際に有効なスリミング作用がある。
この生成物は、事実、脂肪分解を制御する機構全体を次々考慮してきた戦略の結果である。ようするに、スリミング生成物の発展は、
１）静脈強壮作用生成物；
２）脂肪分解制御に関する機構全体を標的とした脂肪分解作用生成物：
に依拠していたものであることを意味する。

静脈強壮作用生成物は、皮膚血液微小循環に作用する。それは、脚の疲れ（ｈｅａｖｙ ｌｅｇ）及びむくみの処置、又は、毛細血管抵抗性の増加のため及び抗炎症反応に関与する治療に長い間使用されてきた。静脈強壮作用生成物は、１）血液微小循環増加のため、そして２）皮膚外観の向上（《オレンジピール》出現の減少）のために選択した作用生成物を構成する。
脂肪分解作用生成物：
１）鍵となる脂肪分解酵素は、脂肪細胞の細胞内酵素であるホルモン感受性リパーゼ（ＨＳＬ）である。このリパーゼにより、（ＨＳＬによる）加水分解で脂肪細胞トリグリセリドの数の減少及び（細胞による）形成されたアミノ酸の分解が可能となる。脂肪分解性の化粧作用生成物では、補助因子を用いたこの酵素の作用化、又は、この酵素の阻害の予防が求められる。
２）ＨＳＬは、２つの型で存在する：活性型は不活性型がリン酸化されたものに相当し、リン酸化はｃＡＭＰ依存性、すなわち酵素自体の活性化にｃＡＭＰを必要とする酵素であるプロテインキナーゼ（ＰＫＡ）により生ずる。脂肪分解性の化粧作用生成物では、このように細胞内で生産されるｃＡＭＰをより多くするよう試みることにより、又は、このｃＡＭＰの分解を防止するようにして、この酵素を活性化することが求められる。
３）ｃＡＭＰは、β−３アドレナリン受容体に感受性のある刺激性Ｇ−タンパク質（Ｇｓ）により活性化できる、又は、α−２アドレナリン受容体に感受性のある阻害性Ｇ−タンパク質（Ｇｉ）により阻害できる膜酵素であるアデニルシクラーゼを利用して細胞中で形成される。一定数の化粧作用生成物は、これらの受容体を互いに相互作用させ、アデニルシクラーゼを刺激して、そして細胞内ｃＡＭＰ濃度を増加するよう発展してきた。
４）ｃＡＭＰは、細胞内酵素、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の働きで細胞内で加水分解もされうる、そして、他の化粧作用生成物は、この酵素の阻害を可能にして、細胞内ｃＡＭＰ濃度を高く保持するよう発展してきた。

本発明の目的
本発明の目的は、安全で信頼でき、物質の脂肪分解作用度及びその脂肪分解に作用する能力を測定することができる、脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の新規試験方法を提供し、よって脂肪蓄積を減少、衰退若しくは再吸収させること、スリミング作用を有するようにすること、及び、血液微小循環を増加させるようにすること、皮膚の外観を向上させること、特に醜い《オレンジピール》出現を減少させることを可能にすることである。
本発明の他の主な目的は、高価でない、産業スケールで、特に研究室内で好ましくは自動的に使用することが可能な、できるだけ操作数が少ない試験方法により、脂肪分解の分野において作用のある物質を見いだすことができ、試験を行う当業者ができるだけ簡単にできる試験方法を提供することからなる新規技術上の問題の解決である。

本発明のまた別の主な目的は、脂肪蓄積の減少、衰退若しくは再吸収作用又はスリミング作用に特に関連する、このような脂肪分解を利用した新規化粧組成物若しくは医薬的組成物の調製のため又は皮膚の色調の向上のために使用でき、大変効率が良く、脂肪分解の分野において作用のある新規物質を見いだすことができる試験方法を提供することからなる新規技術上の問題の解決である。

発明の要約
本発明は当業者にも自明でなかったものであり、本発明により全く驚くべくして上記した目的全部に応じることができた。
すなわち、本発明は、試験して脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質による酵素リポプロテインリパーゼの阻害能力に基づく、脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の新規試験方法を提供する。
酵素リポプロテインリパーゼ又はＬＰＬは、脂肪細胞により生産され、上皮細胞の毛細血管へエキソサイトーシスにより分泌され、Ｉ．Ｊ．Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、“Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ ａｎｄ ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ：ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ”、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ３７， ６９３−７０７ （１９９６）で記載されるように、血管管腔内を循環するカイロミクロン及び低密度リポプロテイン（ＶＬＤＬ）によりトリアシルグリセリド骨格の１，３位でエステル結合を加水分解して、脂肪酸を解離する能力を有し、脂肪細胞で捕獲される酵素である。カイロミクロン及びＶＬＤＬは、脂肪を組織へ輸送するヒト血漿リポプロテインであることが着目されよう、参照、Ｄ．Ｑｕｉｎら、論文“Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ：ｍｅｃｈａｍｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｌｅ ｉｎ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ”、Ｐｒｏｇ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．２２，３５−７８（１９８２）。

さらに、脂肪細胞の血漿膜を介して輸送される脂肪酸は、Ｂ．Ｆｅｖｅ、論文“Ｌ’ａｄｉｐｏｃｙｔｅ， ｕｎｅ ｃｅｌｌｕｌｅ ｔｒｅｓ ａｃｔｉｖｅ ｑｕｅ ｌ’ｏｎ ｃｏｍｍｅｎｃｅ ａ ｓａｖｏｉｒ ｃｏｎｔｒｏｌｅｒ”、Ｃｏｓｍｅｔｏｌｏｇｉｅ、Ｎ^ｏ２１，３０−３３ （１９９９）で実証されたように、トリアシルグリセロールの形で再蓄積されるようにするため、脂肪細胞の内部生化学系により摂取されることが着目されよう。
すなわち、本発明は、第一に脂肪分解の分野において潜在的作用のある、好ましくはリポプロテインリパーゼ阻害に作用することができる物質の試験方法を提供し、第二に脂肪細胞内の蓄積を制限する作用の新規手段として、脂肪分解の分野において、このような作用のある、特にリポプロテインリパーゼ活性を阻害できる物質のいずれかを利用するという新規概念に基づく。

すなわち、第一の側面において、本発明は、以下の操作：
ａ）少なくとも１つのトリアシルグリセリロールを含有する物質を調製して、
ｂ）トリアシルグリセリロールの脂肪酸の少なくとも一部が解離するのに充分な時間、リポプロテインリパーゼの補助因子の存在下で、脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質及びリポプロテインリパーゼとこの物質を接触させておき、
ｃ）上記潜在的作用物質の作用に基づき、リポプロテインリパーゼの作用から生じる脂肪酸解離の阻害能力を測定し、試験される潜在的作用物質の不存在下で得られた結果と比較するか、又は、対照として作用する既知の阻害剤の存在下で得られた結果と比較して阻害結果を評価する
ことからなることを特徴とする脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の試験方法を提供する。

すなわち、当業者は、潜在的作用のある物質の阻害結果が、コントロール、すなわち作用物質不存在下の場合より有意に大きな場合、すなわち対照阻害剤と同等又は有意に大きな場合、脂肪分解分野での物質の作用を特徴付ける、すなわち確証又は確証できないことを容易に理解する。
本発明の関係において、試験方法はトリアシルグリセロールのアシル化部分若しくはトリアシル部分又は非エステル脂肪酸より解離された脂肪酸の測定を利用していることに着目される。
好ましい一形態において、使用するリポプロテインリパーゼは牛ミルクより得られるか又は細菌由来のものであることに、この方法の特徴がある。
別の一形態において、上記トリアシルグリセロールが、好ましくは１２〜３０の飽和若しくは不飽和炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の、より好ましくは主に食物に存在する長鎖脂肪酸から得られるアシル部分を有することに、この方法の特徴がある。

本発明の方法の好ましい性質において、リポプロテインリパーゼは、好ましくはヒト由来の、アポリポプロテインＣ−ＩＩを含有するか、又は、から構成される上記補助因子と一緒に存在することに、その方法の特徴がある。
本発明の方法の別の好ましい一形態において、リポプロテインは、リポプロテインリパーゼの酵素活性の阻害を防止する脂肪酸受容体物質又は脂肪酸解離物質の存在下で物質に接触させておくことに、その方法の特徴がある。好ましくは、脂肪酸受容体物質又は脂肪酸解離物質は、牛又はヒトアルブミンを含有するか、又は、から構成される。

本発明の方法の特に好ましい形態において、潜在的作用物質によるリポプロテインリパーゼの阻害能力は、
ａ）まず最初に、阻害剤として潜在的作用のある物質の存在下で一定の時間、リポプロテインリパーゼをインキュベートし、
ｂ）好ましくはアポリポプロテインＣ−ＩＩを含有するか、又は、から構成される、リポプロテインリパーゼ補助因子の存在下で、トリアシルグリセロールを含有する物質をインキュベートし、
ｃ）酵素リポプロテインリパーゼの存在下、そのリポプロテインリパーゼの阻害能力について試験される潜在的作用物質と一緒に又は無しで、トリアシルグリセロール／好ましくはアポリポプロテインＣ−ＩＩであるリポプロテインリパーゼ補助因子の混合物をインキュベートし、
ｄ）このインキュベーションの終了後、当業者に利用できる技法で非エステル化脂肪酸の反応溶媒で測定を行い、
ｅ）試験される潜在的作用物質の存在下、リポプロテインリパーゼの作用から生じたトリアシルグリセロールの脂肪酸又は非エステル化脂肪酸の解離の阻害能力を、試験される潜在的作用物質無しで得られた結果又は対照として作用する既知の阻害剤の存在下で得られた結果と比べて比較を行う：
数個の操作からなることに、この方法の特徴がある。

この実施形態の一形態において、好ましくは選択される酵素学的技法により決定した波長で比色定量を後に行うために、非エステル化脂肪酸の測定を酵素学的技法により反応溶媒中で行う。そしてこの場合、この波長で得られた光学密度の低下をコントロール又は対照阻害剤と対照して測定する。
さらにより好ましい一形態において、５５０ｎｍでの比色測定を後に行える酵素学的技法を用いて、非エステル化脂肪酸の測定を反応溶媒中で行う。そして、反応溶媒で合成される脂肪酸の減少を表す５５０ｎｍでの光学密度で、コントロール又は対照阻害剤と比較して阻害を測定し、コントロール又は対照阻害剤に関して試験される上記物質によりなされた有意又は有意でない阻害の観察に関連して、試験される上記物質の正又は負の作用を測定する。

本発明の方法の別の特に好ましい一形態において、褐藻抽出液；ダルス・パルマリア・パルメート抽出液；小麦タンパク質抽出液；スピルリナ抽出液；スイガスラ抽出液；Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート（Ｓｔ．Ｊｏｈｎ’ｓ ｗｏｒｔ）抽出液；米タンパク質抽出液；ツル植物抽出液；イモ抽出液；シイタケ抽出液；生サケ抽出液；カボチャ抽出液；及びレモン抽出液からなる群より選択される脂肪分解の分野で潜在的作用のある物質の試験が行われる。これらの抽出液は、好ましくは水性若しくは水抽出又はアルコール抽出、又は、アルコール水溶液抽出、グリコール水溶液抽出からなる、特にエチレングリコール、プロピレングリコール若しくはブチレングリコール又はこれらの溶媒の混合液を用いた溶媒抽出方法により好ましく得られる。
特に好ましい実施形態において、上記試験はＳｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液で行われる。

本発明の別の好ましい一形態において、ツル植物、好ましくはツル植物ウンカリア・トメントーサとして知られるペルーのツル植物抽出液を用いて、上記試験が行われる。
本発明の別の好ましい実施形態において、上記阻害試験より、その脂肪分解作用、特にそのスリミング作用に関して、物質が識別されることに、その方法の特徴がある。
第二の側面によれば、本発明は化粧組成物に使用できる物質の作用を評価するための、又は、特に脂肪分解による脂肪蓄積の処置を目的するための、又は、スリミング作用のための薬剤を調製するための、被処置者へ塗布したスリミング・ケア又は処置の効果を評価するための上記試験の使用も包含する。
第三の側面によれば、本発明は、脂肪分解の分野でのその作用は、上記定義した又は以下の記載から結論付けられる試験方法により評価されていることを特徴とする脂肪分解の分野で作用のある物質のいずれをも包含する。

第四の側面によれば、本発明は、脂肪蓄積の減少、衰退若しくは再吸収のための、スリミング作用のための、又は、血液微小循環増加のための、又は、皮膚の外観若しくは色調を向上させるための、特に《オレンジピール》出現の減少のための化粧組成物における脂肪分解作用剤の１つとしての、脂肪分解の分野でのその作用が上記した又は以下の記載に記述された試験方法により評価されている物質の使用も包含する。
第五の側面によれば、本発明は、過度の脂肪沈着から生じた病状を治療することを目的とした薬剤を調製するための脂肪分解作用剤の１つとしての、脂肪分解の分野での作用が上述した又は以下の記載から結論付けられる試験方法により評価されている物質の使用も包含する。
本発明は、さらに化粧組成物中の脂肪分解又はスリミング作用のある成分の１つとしての、ツル植物ウンカリア・トメントーサ抽出液の使用を包含する。
本発明は、さらに化粧組成物中の脂肪分解又はスリミング作用のある作用剤の１つとしての、Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液の使用を包含する。
第六の側面によれば、本発明は、化粧に許容される賦形剤中に、脂肪分解又はスリミング作用のある作用剤の１つとして有効量のツル植物ウンカリア・トメントーサを有することを特徴とする化粧組成物もさらに包含する。
本発明は、脂肪分解又はスリミング作用のある薬剤の１つとして有効量のＳｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液を有することを特徴とする化粧組成物もさらに包含する。
第七の側面によれば、本発明は、脂肪分解又はスリミング作用のある作用物質を有する、その作用は上記定義した又は以下の記載全体から結論付けられる試験方法により測定されているものである化粧組成物を、皮膚上へ局所的に塗布することを特徴とする化粧ケア方法を更に包含する。

ある実施形態において、本発明は、脂肪分解又はスリミング作用のある作用剤の１つとして、ツル植物ウンカリア・トメントーサ抽出液を有する化粧組成物を、皮膚上へ局所的に塗布することを特徴とする化粧ケア方法を更に包含する。
別の特定の実施形態において、本発明は、脂肪分解又はスリミング作用のある作用剤の１つとして、Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液を有する化粧組成物を、皮膚上へ局所的に塗布することを特徴とする化粧ケア方法を更に包含する。
本発明の上記側面又は実施形態のいずれか１つに関して、脂肪分解の分野に作用のある物質は、脂肪蓄積の減少、衰退若しくは再吸収のための、スリミング作用のための、又は、血液微小循環増加のための、又は、皮膚の外観若しくは色調を向上させるための、特に《オレンジピール》出現の減少のために求められる脂肪分解効果を得るのに充分な量で使用されうる。上記物質の使用濃度は、物質自体の本来の機能により変化するであろう。一般に、物質又は作用物質を有する、若しくは、から構成される植物抽出液の濃度は、広義で、０．０１〜７０重量％の間、より良くは０．０１〜３０重量％の間、好ましくは０．５〜２０重量％の間である。商品の濃度は、一般に処方実施例２〜６に示すように、０．０１〜３０重量％の間であろう。

以下の記載は、単に例示として与えられ、本発明の範疇を制限する意図でない、本発明の脂肪分解の分野において潜在的作用のある物質の試験方法の好ましい実施形態を記述したものであり、これより本発明は当業者により良く理解されるであろう。同様に、物質の実際の好ましい実施例は、本発明の試験方法に関する脂肪分解の分野での作用を実証するものであるが、単に例示として与えられ、本発明の試験方法の範疇を制限する意図でない。
さらに、特徴のいずれも、実施例を含め添付の図面により完結した記述全体より新規性が明らかとなるが、その機能及びその作用の一般的な態様においてそのまま請求されるものである。化粧組成物又は医薬組成物の例示も、同様に例示の様式で与えられるであろう。実施例中、全てのパーセンテージは他に示さない限り重量単位であり、温度は他に示さない限り摂氏℃であり、圧力は他に示さない限り大気圧である。

脂肪分解の分野において最終的に作用のある物質の試験方法の実施に関する発明の実施例１
Ｉ−脂肪分解作用を測定する試験モデル
生体内で見受けられる環境としてありうる、最も《知的な》考察が望まれる試験管内モデルで、リポプロテインリパーゼの阻害試験を無細胞で行った。
維持した試験モデル中で使用したＬＰＬは、実際に牛ミルクに由来するものであり、これはこの酵素がヒトの同等のものと非常に高い相同性（９７％）を有すること（Ａ．Ｔａｎｉｔａら、“Ｌａ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎ ａｃｉｄｅｓ ａｍｉｎｅｓ ｄｅ ｌａ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅ ｌｉｐａｓｅ ｈｕｍａｉｎｅ ａ ｅｔｅ ｃｏｍｐａｒｅｅ ａ ｃｅｌｌｅ ｄｕ ｌａｉｔ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｌｏｎ ｌｅ ｐｒｏｇｒａｍｍｅ ＢＬＡＳＴ ２ ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ”、「ブラスト２配列−タンパク質配列及び核酸配列の比較の為の新しい道具」：ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｌ Ｌｅｔｔ．， １７４， ２４７−２５０，（１９９９））により決定されたものである。これを、物質、３つのオレイン酸鎖から構成されるトリアシルグリセロールであるトリオレイン（主に食物で見受けられる長鎖脂肪酸）の存在下に静置した。

トリオレインは、脂肪細胞内に存在する脂肪酸の分析試験（Ｔ．Ｒａｃｌｏｔら、“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ”、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３２４， ９１１−９１５，（１９９７）に掲載；“Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ ｅｓｔｅｒ ｔｒａｓｆｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ， ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐｉｄｓ”、Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ２４８， １５７−１７４ （１９９６）で、脂肪細胞内にオレイン酸が主に存在し、リポプロテインリパーゼの主な加水分解産物を構成することが明らかになったことから、生体内で見受けられる環境にある最も代表的な物質である。

この反応溶液に、
−ＬＰＬによるトリアシルグリセロールの加水分解で同定された役割を有する（Ｐｏｓｎｅｒら、“Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＣＩＩ”、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２６， ３７７１−３７１７，（１９８７）に掲載）ＬＰＬ補助因子、ヒト由来のアポリポプロテインＣ−ＩＩ（ａｐｏＣＩＩ）。ａｐｏＣＩＩは、血液のトリアシルグリセロールに固定して、ＬＰＬのコンフォメーション変化を誘導することができる、酵素活性部位による基質の認識に不可欠なものである（Ｓａｎｔａｍａｒｉｎａ−Ｆｏｊｏ Ｓ．及びＤｕｇｉ Ｋ．Ａ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｌｅ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ ｉｎ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ”、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｌｉｐｉｄｏｌｏｇｙ， ５， １１７−１２５（１９９４）に掲載）；
を添加した。

−牛アルブミンにより構成された脂肪酸受容体。ＬＰＬは、その反応生成物は有意な親和性を有する酵素である。実際に解離した脂肪酸は、酵素の周囲に凝集して、脂肪酸により隔離されて、基質に接近できなくなる。脂肪酸に対し非常に高い親和性を有するアルブミンを使用して、ＬＰＬ酵素活性を阻害されないようにする（Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ−Ｏｌｉｖｅｃｒｏｎａ Ｇ．及びＯｌｉｖｅｃｒｏｎａ Ｔ．“Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｉｌｋ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ”、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９７，３４５−３５６，（１９９１）に掲載。

ＩＩ−リポプロテインリパーゼの阻害：
ＬＰＬ阻害試験を、好ましくはここに示した２つの操作で、本発明に従い行った：
その阻害剤の存在下、酵素を一定時間インキュベートし、一方ａｐｏＣＩＩの存在下で、トリオレインをインキュベートして、生体内でありうる環境に類似させた。
そして、酵素±阻害剤で構成された溶媒の存在下で、トリオレイン／ＡｐｏＣＩＩ混合液をインキュベートして、５５０ｎｍでの比色定量（ＮＥＦＡ−Ｃ ｋｉｔ）を後に行うことができる酵素学的技法で、非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）の測定を反応溶媒中で行った。
阻害剤不存在下のＬＰＬ活性に相当するコントロールを反応させた。酵素活性を改良することができる作用生成物の使用は、５５０ｎｍでのＯＤの低下、すなわちコントロールに対する溶媒中で合成される脂肪酸の減少で表される。結果をコントロールに対する阻害パーセンテージで表す。

１−対照リポプロテインリパーゼ阻害：
文献（Ｋｏｒｎ Ｅ．Ｄ．“Ｃｌｅａｎｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ， ａ ｈｅｐａｒｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ” Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２１５，１−１４，（１９９５）に記載；Ｑｕｉｎｎ Ｄ．Ｍ．ら、“Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ｅｓｔｅｒｓ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ−ＩＩ”、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２１（２６），６８７２−６８７９，（１９８２）に記載；Ｇｒｅｔｅｎ Ｈ．ら、“Ｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎ ｏｆ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｌｉｐａｓｅ”，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２６，５６３−５７２，（１９７７）に記載）に記載の対照阻害剤を我々のモデルで試験することができ、以下の結果を与えた；

酵素基質と競合して作用する阻害剤に関する科学文献に記載されているように、試験した濃度で観察された阻害レベルは比較的大きくなかったので、文献に記載された阻害剤は、ＬＰＬの非常に強力な阻害剤ではなかったようだ。
２−タンパク質変性生成物：
タンパク質を沈殿させるものとして知られているタンニン及びフラノボイド等の変性生成物を評価することができた。結果を表２に示した。

３−本発明の方法による作用生成物のスクリーニング：
様々な系統の潜在的作用成分の中から、強力なＬＰＬ阻害作用を有する植物抽出液、藻類、多糖又はタンパク質を選択する為に、本発明の方法により約１００分子のスクリーニングを行った。パラグラフＩＩＩ−１−ｂに記載したプロトコールに従い、全ての抽出液を製造した。
様々な化合物の阻害作用を比較する為に、阻害レベルを２つの別個の濃度で評価した。
以下の表３に、得られた阻害パーセンテージのいくつかを一緒に集めた：

この試験の完了後、南アメリカ原産の特定のツル植物（ウンカリア・トメントーサ（Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ））から製造された特定の抽出液を、高作用の基準として選択した。

ＩＩＩ−選択した作用生成物
１−ツル植物又はウンカリア・トメントーサ又はウングイスカティの抽出液
ａ）概略
ウングイスカティ（Ｃａｔ’ｓ ｃｌａｗ）は、いわゆるウンカリア・トメントーサといわれるノウゼンカズラ科に属する植物である。ウングイスカティは、葉の基底部に位置した猫の爪に似ているツメを用いてアマゾンの森の木に付着するツル植物であり、ゆえにこのように名付けられている。その植物はペルー全域及び南アメリカ中央部に生息する。その植物は、標高４００〜８００ｍの湿地帯に生息する。
ペルー・インディアンの伝統は、このツル植物の多くの利点に帰するものである。彼らは、胃腸の不調及び多様な炎症病に対し樹皮抽出物を使用する。さらに、数種の感染症に対し、煎じ汁を局所的使用又は全身に使用している。それは、病気の予防及び腫瘍又は癌の治療の能力があることを依拠している。女性の月経周期の正常化効果及び避妊薬の可能性が報告されている（Ｋａｒｌ−Ｈｅｉｎｚ Ｒｅｉｎｈａｒｄ “Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ （Ｗｉｌｌｄ．）Ｄ．Ｃ．：Ｃａｔ’ｓ ｃｌａｗ， Ｕｎａ ｄｅ ｇａｔｏ， ｏｒ Ｓａｖｅｎｔａｒｏ”、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｖｏｌ．５ Ｎｏ．２， １４３−１５１，（１９９５））に記載）。

ウンカリア・トメントーサは、アメリカ合衆国では、喘息、ガン、病気の予防、熱、胃潰瘍、出血、炎症、リュウマチ、尿道の炎症、皮膚の汚れ等の治療目的用の生成物として、いくつかの形態で存在する（Ｋｅｐｌｉｎｇｅｒ Ｋｌａｕｓら、“Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ （Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ−Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｕｓｅ ａｎｄ ｎｅｗ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ， ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｏｔａｎｉｃａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ”、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，６４，２３−３４，（１９９９））に記載）。ここ１０年、このツル植物で数多くの研究調査が行われてきた。
本来、ウンカリア・トメントーサは、テトラサイクリックオキンドールアルカロイド（リンクロフィリン及びイソリンコフィリン）又はペンタサイクリックオキンドールアルカロイド（プテロポジン、イソプテロポジン、スペシオフィリン、ウンカリンＦ、ミトラフィリン及びイソミトラフィリン）のいずれかを含有する２つの化学種として、その根に存在する。化学種によって、ウンカリア・トメントーサの性質は異なる（Ｌａｕｓ Ｇｅｒｈａｒｄ， Ｂｒｏｓｓｎｅｒ Ｄａｇｍｅｒ及びＫｅｐｌｉｎｇｅｒ Ｋｌａｕｓ“Ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｏｆ Ｐｅｒｕｖｉａｎ Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ”，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．４， ８５５−８６０，（１９９７）に掲載）。

ウンカリア・トメントーサは、抗炎症作用を有することが示されていた。この性質は、このツル植物の樹皮に存在するキノビン酸グリコシド（ｑｕｉｎｏｖｉｃ ａｃｉｄ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）に主に起因するものであろう。ウングイスカティ樹皮水性抽出液は、パーオキシニトライトにより誘導され、分解する細胞毒性を阻害する。ＮＯ生産を減少させるＮＦ―κＢの活性化を阻害する誘導性ニトリックオキサイドシンターゼ（ｉＮＯＳ）の発現を阻害する。この抗炎症作用はツル植物中に存在する全てのグリコシドの組み合わせに起因するものであろうことが実証されている（Ｓａｎｄｖａｌ−Ｃｈａｃｏｎ Ｍ．ら、“Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃａｔ’ｓ ｃｌａｗ： ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＮＦ−ＫＢ”、Ａｌｉｍｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ １２， １２７９−１２８９（１９９８）に掲載）。

この抗炎症の性質に加え、防御（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）抗突然変異誘発性効果が、光突然変異誘発に関してエームズ試験により生体内で実証されている（Ｋａｒｌ−Ｈｅｉｎｚ Ｒｅｉｎｈａｒｄ “Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）Ｄ．Ｃ．：Ｃａｔ’ｓ ｃｌａｗ， Ｕｎａ ｄｅ ｇａｔｏ， ｏｒ Ｓａｖｅｎｔａｒｏ”、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．５ Ｎｏ．２，１４３−１５１，（１９９９））。
ペンタサイクリックオキンドールアルカロイド（ＰＯＡ）のウンカリア・トメントーサは、顆粒白血球の食作用レベルを増加させる。さらに、内皮細胞を介したヒトＢ及びＴリンパ球の増殖を増加させる。ＰＯＡは、内皮細胞を誘導して、リンパ球増殖の調整因子を上精に解離させる。ウンカリア・トメントーサは、リンパ芽球及びリンパ芽球状細胞種の増殖を阻害する。このアルカロイドは、ヒト免疫応答の調整因子として作用する（Ｗｕｒｍ Ｍａｒｔｉｎら、“Ｐｅｎｔａｃｙｃｌｉｃ Ｏｘｉｎｄｏｌｅ Ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｏｒｍ Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ ｉｎｄｕｃｅ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｒｅｌｅａｓｅ ａ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ”、 Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ， ６４， ７０１−７０４，（１９９８）に記載）。

ウンカリア・トメントーサ中に存在するキノビン酸のグリコシド及びステロイドは、最小阻害濃度２０〜６０ｍｇ／ｍｌで、小包口内炎に対する抗ウイルス作用を有する。白血病ＨＬ６０及びＵ９３７細胞の成長を阻害するＰＯＡにより、抗白血病作用が実証された（Ｋｅｐｌｉｎｇｅｒ，Ｋｌａｕｓら、“Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ−Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｕｓｅ ａｎｄ ｎｅｗ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ， ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｏｔａｎｉｃａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ”、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，６４，２３−３４，（１９９９））。
ウンカリア・トメントーサは、インターロイキンＩＬ１及びＩＬ６の生産をマクロファージによっても刺激される。よって、それは免疫刺激作用を有するであろう（Ｌｅｍａｉｒｅ Ｉ．ら、“Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ ａｎｄ −６ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｒｇｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｎｅｏｔｒｏｐｉｃａｌｌｉａｎａ， ＵＮｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ （ｕｎａ ｄｅ ｇａｔｏ）、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｎｏｐｈａｒｍｃｏｌｏｇｙ ６４， １０９−１１５ （１９９９）に記載）。

ｂ）ウンカリア・トメントーサの抗リポプロテインリパーゼ作用
ｂ１−ａ）ペルーのツル植物、ウンカリア・トメントーサのアルコール水溶液抽出液の調整
市販されているペルーのツル植物、ウンカリア・トメントーサ全体の樹皮及び／又は根より、アルコール抽出液を以下のように調整した：
５０グラムの樹皮又は３０グラムの植物全体を微細にすりつぶした。
７０％ｖ／ｖエタノールであるエタノール水溶液５００ｍｌを、すりつぶした材料に添加した。６５℃の熱を与え、２時間還流加熱した。アルコールを蒸散させて、水溶液に存在する沈殿物を遠心分離で除去した。得られた上精をそのまま使用でき、また好ましくは凍結乾燥でき、以下のパラグラフｂ２に従った、特に化粧組成物調整用に本発明で使用する乾燥ツル植物抽出液を構成した。

ｂ１−ｂ）ペルーのツル植物、ウンカリア・トメントーサ水性抽出液の調整
加熱操作を必要とせず、例えば１５〜３５℃の温度、好ましくは室温で水の存在下である以外は、パラグラフｂ１−ａに記載した抽出を行った。
不溶性物質を遠心分離で除去して、水溶液の形態にある得られた上精は、特に化粧組成物の調整に、そのままで好ましく使用できた。

ｂ１−ｃ）ペルーのツル植物、ウンカリア・トメントーサのグリコール水溶液の抽出液の調整
８０／２０〜２０／８０の割合にある冷却した水／ブチレングリコール混合液の存在下である以外は、パラグラフｂ１−ａに記載したように抽出を行った。８０／２０〜２０／８０の割合にある水／プロピルレングリコール混合液の存在下で、加熱操作を必要とせず、例えば１５〜３５℃の温度、好ましくは室温で、又は、８０／２０〜２０／８０の割合で、グリセロールも合わせて、加熱操作を必要とせず、例えば１５〜３５℃の温度、好ましくは室温で、同様のプロトコールを行った。
不溶性物質を遠心分離で除去して、得られたグリコール水溶液上精は、特に化粧組成物の調整に、そのままで好ましく使用できた。

ｂ２）和光から販売されているＮＥＦＡ−Ｃ測定キット（Ｏｘｏｉｄ，６９５７１ Ｄａｒｄｉｌｌｙ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いた非エステル脂肪酸又はＮＥＦＡの測定
様々な使用濃度の０．２％メチルパラベンナトリウム及び１５％ブチレングリコールを含有する２％ツル植物抽出液（パラグラフｂ１−ａに従い調整した凍結乾燥物２ｇを１００ｇ水でメスアップしたもの）の阻害作用の試験を４回行った。得られた結果を、以下の表４及び図１に示した。

表４及び図１より選択したツル植物抽出液は、文献に記載された《潜在的な》阻害剤と対比して、強力で、《投薬量依存的な》リポプロテインリパーゼ阻害作用を有することが結論づけられた。
ツル植物抽出液は、結論として非常に強力な作用生成物として位置づけられ、スリミング剤の分野において非常に革新的なものである。

ｂ３）ガス相クロマトグラフィー又はＧＰＣによるＮＥＦＡの測定：
ＮＥＦＡ−Ｃ測定キットを用いたウンカリア・トメントーサで得られる阻害の結果を確証するために、ＬＰＬにより反応溶媒に解離された脂肪酸をＧＰＣで分析した。
このために、酵素反応終了時のオレイン酸を定量することができるオレイン酸測定方法を、開発した。
エタノールを用いた酵素学的測定の反応溶媒からオレイン酸を抽出して、ＤＢＪＷサイエンティフィク社より販売された市販のカラム：リファレンスＤＢ ＦＦＡＰ，長さ１５ｍ，内径０．３２ｍｍ、厚さ０．２５μｍ、スプリット型、へ注入した。注入器及び検出器の温度は２８０℃であった。温度プログラムは、５０℃１分間で開始して、そして４０℃／分で２００℃まで上昇させ、そして１分あたり１５℃ずつで２５０℃まで上昇させ、３分間２５０℃にした。この条件下でのオレイン酸の保留時間は、７．７４分であった。
変性生成物として、ピロリン酸ナトリウム、プロタミンサルフェート及びタンニン酸等、一定の対照阻害剤をＧＰＣによるこの技法で再試験した。
得られた結果を以下の表５に示した。

用いたＮＥＦＡ測定試験の対象物、すなわち２ｇを１００ｇ水で、ＮＥＦＡ−Ｃ測定キットを希釈し、０．２％メチルパラベンナトリウム及び１５％ブチレングリコールを含有するウンカリア・トメントーサ２％抽出液に対し様々な使用濃度でＬＰＬの試験を４回行った。そして、解離した脂肪酸をＧＰＣで分析した。得られた結果を表６及び図２に示した。

ＧＰＣによる分析から、測定キットで得られた結果が確証された。
ＧＰＣは、低い阻害パーセンテージに対し高感度であった。実際、対照阻害剤及びタンニン酸について得られた阻害は高めである。
対照的に、２〜５％の使用濃度のツル植物で得られた阻害は、ＧＰＣ又はキットによれば、ほぼ同等となった。２％以下では、キットにより検出されないが、ＧＰＣでは阻害が検出される。
これらの結果は、ツル植物ウンカリア・トメントーサがリポプロテインリパーゼの非常に強力な阻害作用生成物である事実を確証する。

２）ＬＰＬの阻害について選択されたその他の作用生成物：Ｓｔ．Ｊｏｈｎワートの抽出液
２．１）Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液の調整
Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液は、市販されている植物Ｓｔ．Ｊｏｈｎワートの花頭部（花及び／又は芽）より、以下の操作で調整した：
２．１−ａ）Ｓｔ．Ｊｏｈｎワートアルコール水溶液の抽出液の調整
５０グラムの花頭部を微細にすりつぶした。
７０％ｖ／ｖエタノールのエタノール水溶液５００ｍｌをすりつぶした材料に添加した。６５℃の熱を与え、２時間還流加熱した。アルコールを蒸散させて、水溶液に存在する沈殿物を遠心分離で除去した。得られた上精をそのまま使用、又は、好ましくは凍結乾燥でき、特に化粧組成物調整用の、以下の２．２に従った本発明で使用する乾燥Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出物を構成した。

２．１−ｂ）Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート水溶液の抽出液の調整
加熱操作を必要とせず、例えば１５〜３５℃の温度、好ましくは室温で水の存在下である以外は、パラグラフ２．１−ａ）に記載した抽出を行った。
不溶性物質を遠心分離で除去して、水溶液の形態にある得られた上精は、特に化粧組成物の調整用に、そのままで好ましく使用できた。
２．１−ｃ）Ｓｔ．Ｊｏｈｎワートグリコール水溶液の抽出液の調整
８０／２０〜２０／８０の割合にある水／ブチレングリコール混合液の存在下で、加熱操作を必要とせず、例えば１５〜３５℃の温度、好ましくは室温である以外は、パラグラフ２．１−ａの記載と同様の抽出を行った。８０／２０〜２０／８０の割合にある水／プロピルレングリコール混合液の存在下で、加熱操作を必要とせず、例えば１５〜３５℃の温度、好ましくは室温で、又は、８０／２０〜２０／８０の割合で、グリセロールも合わせて、同様の操作条件下で同様のプロトコールを行った。
不溶性物質を遠心分離で除去して、得られたグリコール水溶液上精は、特に化粧組成物の調整用に、そのままで好ましく使用された。

２．２）和光（Ｏｘｏｉｄ，６９５７１ Ｄａｒｄｉｌｌｙ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）から販売されているＮＥＦＡ−Ｃ測定キットを用いた非エステル脂肪酸又はＮＥＦＡの測定
２％Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液のＬＰＬ阻害作用の試験を、様々な濃度で４回ずつ行った。この２％Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液は、微細にすりつぶした花頭部を、４０重量％水／６０重量％ブチレングリコールからなるグリコール水溶液溶媒混合液９８ｇ中で、微細にすりつぶした花頭部２ｇを抽出して調整した。不溶性物質を遠心分離で除去し、得られたグリコール水溶液上精は、ＬＰＬ阻害作用に使用される「２％Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液」から構成されるものであった。
得られた結果を、以下の表７に示した。

上記ｂ２）で記載したウンカリア・トメントーサの測定試験に関する和光から販売されているＮＥＦＡ−Ｃ測定キットに基づくＮＥＦＡ測定により測定して、阻害パーセンテージを得て、表７に示した。
Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液及びウンカリア・トメントーサ抽出液で得られた阻害の各結果を、図３に示す。
試験濃度でのＬＰＬ阻害の結果は、選択した２つの抽出液でほぼ同一であったことに着目できる。その上、ツル植物抽出液及びＳｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液のＬＰＬ阻害作用は高く、投薬量に依存したことを付言することができる。
本発明者らにより発展したリポプロテインリパーゼの阻害モデルでの作用生成物のスクリーニングにより、本酵素を濃度依存的に阻害する作用生成物を選択することが可能となった。

選択された作用生成物の間で、２つの抽出液には甚だしい効果があった：それらは、２つの植物：
ウンカリア・トメントーサと呼ばれるペルーのツル植物；及び
Ｓｔ．Ｊｏｈｎワート
のグリコール水溶液又はアルコール抽出液である。
すなわち、本発明は、当業者に自明でなく、リポプロテインリパーゼ又はＬＰＬに作用しうる作用生成物を選択することを可能にする新規試験方法を提供することができる、全く予期しない技術上の利点をもたらした。
スリミング、脂肪分解、皮膚の調子を整えるために適用する化粧の使用のために、本試験方法により選択された作用生成物、特にツル植物抽出液及びＳｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液も、本言及で包含される。
本発明は、このような作用生成物を含有する化粧処方、及び、スリミング・クリームとしてのその使用も包含する。
本発明は、化粧作用に関して選択されうる作用生成物と同等又は同等でない作用生成物である医薬作用生成物の試験方法による選択、並びに、このような作用物質を含有する医薬処方及び脂肪分解の分野における病状の治療に関するその使用も包含する。
化粧組成物及び医薬組成物の処方例を新たに以下に示す。

化粧組成物及び医薬組成物の処方例
実施例２：
オイル−イン−ウォーター型の化粧組成物又は医薬組成物の処方における本発明の生成物の使用
処方２ａ：

フェーズＡ及びフェーズＢを７５℃に別々に加熱して、そしてＢをＡへ激しく攪拌しなら添加する；それから、このように形成したクリームを冷却している間に、ＣそしてＤを添加する。
処方２ｂ：

フェーズＡを７５℃で加熱する；それから、処方物をこのように形成したクリームを冷却している間に、ＢそしてＣをＡへ攪拌しながら添加する。
処方２ｃ：

フェーズＡ及びフェーズＢを７５℃で別々に加熱して、そしてＢをＡへ激しく攪拌しながら添加する；それから、このように形成したクリームを冷却している間にＣ、そしてＤ、そしてＥ、そしてＦを連続的に添加する。
本発明の実施例３：
ウォーター−イン−オイル型の「脂肪分解」生成物の使用

フェーズＡ及びフェーズＢは７５℃で別々に加熱して、そしてＢをＡへ激しく攪拌しながら添加する；このように形成したクリームを冷却している間に、Ｃ、そしてＤ、そしてＥを添加する。
本発明の実施例４：
洗顔剤型の処方中の「脂肪分解」生成物の使用

フェーズＡ及びフェーズＢは室温で別々に調整して、そしてＢをＡへ攪拌しながら添加する；Ｃ、そしてＤ、そしてＥを穏やか攪拌しながら添加する。
本発明の実施例５：
無水型の処方における本発明の生成物の使用

フェーズＡ及びフェーズＢは８０℃で別々に加熱して、そしてＢをＡへ攪拌しながら添加する。
本発明の実施例６：
水性ジェル（フェース・ジェル、ボディ・ジェル等）処方における本発明の生成物の使用

フェーズＡは、全ての成分を添加し、均一な混合液を得るまで８０℃で全体を加熱して調整した。そして、冷却してジェルが形成される間に、ＢをＡへ激しく攪拌しながら添加する。

実施例７−無害性試験
本発明の生成物を含有する調整物の化粧許容性の評価
２つの維持した化合物、すなわち純粋にして使用したツル植物抽出液及びＳｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液で、ウサキでの視覚評価、ラットでの単一経口投与による異常毒性不存在試験及びモルモットでの感作力試験により、毒性試験を行った。

１．ウサギにおける初期皮膚刺激の評価：
「皮膚に対する急性刺激／腐食性効果」に関してＯＥＣＤにより推奨された方法に従い、上記した調整物を希釈せずに投薬量０．５ｍｌで３匹のウサギの皮膚上へ塗布した。
生成物は１９８２年２月１日のＪＯＲＦ（“Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆｆｉｃｉｅｌ ｄｅ ｌａ Ｒｅｐｕｂｌｉｑｕｅ Ｆｒａｎｃａｉｓｅ”、１９８２年２月２１日の「フランス共和国公式ジャーナル」）に記載の決定により定義される基準に従い分類した。
この試験の結果より、維持した調整物が皮膚に対して非刺激性であると分類されると結論付けることができた。

２．ウサギにおける視覚上の刺激評価：
《眼に対する急性刺激／腐食性効果》に関して、１９８７年２月２４日にＯＥＣＤ、Ｎｏ．４０５の指示により推奨された方法に従い、上記調整物を３匹のウサギの眼に、０．１ｍｌの割合で、１度に、単一に投与した。
この試験の結果より、維持した調整物が、ＥＥＣの指令９１／３２６の観点において、眼に対して非刺激性であると考えられると結論付けることができた。

３．ラットにおける単一経口投与による異常毒性不存在の試験：
１９８７年２月２４日にＯＥＣＤ、Ｎｏ．４０１の指示により示唆されたプロトコールに従い、５匹のオスラット及び５匹のメスラットへ、投薬量５ｇ／ｋｇ体重で一度に経口投与し、化粧生成物に採用した。
ＬＤ０及びＬＤ５０は、投薬量５０００ｍｇ／ｋｇを超えることが分かった。試験した調整物は、このように摂取により危険な調整物の間に分類されるものでない。

４．モルモットにおける皮膚感作力の評価：
ＯＥＣＤのＮｏ．４０６の指示に対応したプロトコールである、Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ及びＫｌｉｇｍａｎｎにより記載された最大化試験を行った。
調整物は、皮膚接触により不感作であると分類された。

図１は、ツル植物ウンカリア・トメントーサのアルコール水溶液抽出液中の濃度を相関させたリポプロテインリパーゼの阻害を示したものであり、横軸は使用濃度を重量％で示し；縦軸は得られたリポプロテインリパーゼの阻害を相対％で示す；上記測定は、和光より販売された市販のＮＥＦＡ−Ｃ測定キット、Ｏｘｏｉｄ，６９５７１ Ｄａｒｄｉｌｌｙ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅを使用して、非エステル化脂肪酸又はＮＥＦＡに対し行った。 図２は、図１と同じ条件で得られた結果を表すが、反応溶媒中で解離した脂肪酸はガス相クロマトグラフィー又はＧＰＣにより分析された。 図３は、リポプロテインリパーゼの作用について、図１及び２のツル植物ウンカリア・トメントーサ試験物抽出液の阻害作用を、４０重量％水／６０重量％ブチレングリコールからなるグリコール水溶液溶媒で抽出して得られたＳｔ．Ｊｏｈｎワート抽出液で同様の試験条件下で得られた結果との比較を示したものであり、処方した作用物質の濃度は横軸に示し、阻害を相対パーセンテージを縦軸に示す。ウンカリア・トメントーサ抽出物で得られた結果は右方向に上がった斜線の右の棒に示し、Ｓｔ．Ｊｏｈｎワートで得られた結果は右方向に下がった斜線の左の棒に示した。

Claims (7)

1. リポプロテインリパーゼを阻害するための、
   スリミング作用のための、
   脂肪蓄積の減少、衰退若しくは制限のための、
   血液微小循環増加のための、又は、
   《オレンジピール》出現の減少のための
   組成物であって、上記作用を有する有効成分の一つとしてツル植物ウンカリア・トメントーサの水、グリコール水溶液又はアルコール水溶液抽出物の有効量、及び化粧学的又は製薬学的に許容される賦形剤からなることを特徴とする組成物。
2. 前記ツル植物ウンカリア・トメントーサの抽出物の濃度が０．０１重量％〜７０重量％であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
3. 前記ツル植物ウンカリア・トメントーサの抽出物の濃度が０．０１重量％〜３０重量％であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
4. 前記ツル植物ウンカリア・トメントーサの抽出物の濃度が０．５重量％〜２０重量％であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
5. 前記組成物が化粧用組成物であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
6. 前記組成物が医薬用組成物であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
7. 請求項５記載の化粧用組成物を局所的に皮膚に塗布することを特徴とする、化粧ケアの方法。

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