JP4729475B2 - 皮下投与型ガングリオシド系ワクチン組成物 - Google Patents
皮下投与型ガングリオシド系ワクチン組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4729475B2 JP4729475B2 JP2006501455A JP2006501455A JP4729475B2 JP 4729475 B2 JP4729475 B2 JP 4729475B2 JP 2006501455 A JP2006501455 A JP 2006501455A JP 2006501455 A JP2006501455 A JP 2006501455A JP 4729475 B2 JP4729475 B2 JP 4729475B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vssp
- vaccine composition
- acgm3
- ganglioside
- adjuvant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 33
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 title claims description 23
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 title claims description 11
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- -1 N-acetyl GM3 ganglioside Chemical class 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- GIVLTTJNORAZON-HDBOBKCLSA-N ganglioside GM2 (18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 GIVLTTJNORAZON-HDBOBKCLSA-N 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010030416 proteoliposomes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/001171—Gangliosides, e.g. GM2, GD2 or GD3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
本発明は、追加のアジュバントなしで自己免疫疾患、感染性疾患、及び腫瘍の免疫治療に有用な、ガングリオシド含有皮下投与用ワクチン組成物に関する。
長い間、自己免疫疾患及び癌の免疫治療として使用する意図が知られており、たとえば、米国特許第４，９６５，１９８号は、このような疾患の予防及び治療でのガングリオシドＧＭ２の使用を開示している。出願特許ＥＰ−Ａ−６６１０６１及び米国特許第６，１４９，９２１号では、免疫原と免疫アジュバントとにある、ガングリオシドに対する抗体応答を刺激し、又は増大させるためのワクチン組成物が開示されている。
開示されている免疫原は、Ｎ−アセチルＧＭ３ガングリオシド及びＮ−グリコリルＧＭ３ガングリオシド（以下では、（Ｎ−ＡｃＧＭ３）及び（Ｎ−ＧｃＧＭ３））が髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来の外膜タンパク質複合体（ＯＭＰ）と結合して構成されるＶＳＳＰ（ｖｅｒｙ ｓｍａｌｌ ｓｉｚｅ ｐｒｏｔｅｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（非常に小さなサイズのプロテオリポソーム））である。
このような免疫原は、以下では、Ｎ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ及びＮ−ＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰと呼ぶが、これらは、非常にサイズが小さく、実際に電子顕微鏡で見ることができず、水溶性であり、浮動能力が高まっている。
ＥＰ−Ａ−６６１０６１及び米国特許第６，１４９，９２１号に記載されているワクチン組成物では、非常によく知られているフロイント完全アジュバントなどのアジュバントの利用が必要であった。
出願特許ＷＯ−Ａ−０２１４５７４６では、（Ａ）免疫原性の弱い１種又は複数の抗原、（Ｂ）ガングリオシド、主としてＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ及びＮ−ＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰが組み込まれているＶＳＳＰ、及び（Ｃ）結局のところ１種又は複数のアジュバントを含有するワクチン組成物が記載されている。
Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００１年、第１１巻、２１９〜２２７ページに発表されているＣａｒｒ Ａ．らの論文では、Ｎ−ＡｃＧＭ３ガングリオシド含有ワクチンの、黒色腫Ｂ１６を有するマウスでの抗腫瘍活性が記載されている。
この論文では、免疫アジュバント、特に完全フロイントアジュバント又は不完全フロイント様アジュバントのＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１の存在の影響も研究されている。ワクチンは筋肉内投与され、明らかになった結果は、フロイント又はＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１のいずれかのアジュバントを加えたＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰで免疫感作したマウスが、８週間目にＩｇＭ及びＩｇＧの各抗Ｎ−ＡｃＧＭ３応答を示したことである（表１）。対照的に、アジュバントなしのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰワクチンは、何の免疫原性応答も示さなかった（２２３ページ、右欄）。
したがって、従来技術は、ガングリオシドと結合させたＶＳＳＰを含有するワクチンには、アジュバント、主としてフロイント（完全若しくは不完全）又はＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１を配合すべきであると教示している。
しかし、そのようなアジュバント、特にフロイント完全アジュバントは、非経口投与されると、注射部位の慢性の炎症、結果としての肉芽腫、組織の無菌膿瘍若しくは潰瘍性壊死などのある種の不都合な副作用を引き起こすことは非常によく知られている。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１はより刺激が弱いが、これも若干の炎症性障害を引き起こし得る。
自己免疫疾患、感染性疾患、及び腫瘍疾患の免疫治療で適用することを考慮に入れると、注射部位での刺激がより弱く、患者にとってそれほど不都合にならないより使用しやすい新しいガングリオシドワクチン組成物を手にすることは非常に望ましいはずである。
本発明の著者らは、ＶＳＳＰを配合したガングリオシド系ワクチンは、皮下投与するとアジュバントなしで使用することができ、一方、関連のある免疫特性は存在したままであることを発見した。
本発明の目的は、免疫アジュバントを含有せず、皮下投与される、ＶＳＳＰに含まれる新規なワクチン組成物、好ましくはＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ及びＮ−ＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰである。
本発明の目的はまた、免疫アジュバントを含有しないガングリオシドワクチン組成物、好ましくはＮＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ及びＮ−ＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰの皮下投与にある、その免疫応答を強化する必要のある患者の治療方法である。
本発明の目的はまた、ガングリオシドとは別の他の抗原性成分、又は他の免疫アジュバントを含有せず、皮下投与がなされる、Ｎ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ及び／又はＮＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰの各ワクチン組成物である。
本発明の目的であるワクチン組成物は、追加の免疫アジュバントなしで、皮下投与によって免疫応答を刺激することのできる、１種又は複数のガングリオシドを溶解又は水に分散させ、それを髄膜炎菌のＯＭＰに含めたもの（ＶＳＳＰ）にある。
ＶＳＳＰは、共有結合を必要とせずに、髄膜炎菌の外膜タンパク質複合体と疎水結合した非常に安定なガングリオシドである。このようなガングリオシド−タンパク質系は、ＥＰ−Ａ−６６１０６１及び米国特許第６，１４９，９２１号の特許だけでなく、別の刊行物、たとえば、Ｅｓｔｅｖｅｚら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９９９年、第１８巻（１〜２）：１９０〜１９７ページでも詳述されている。こうした文献には、そのような系を得るための手順も記載されている。
ＶＳＳＰに含まれるガングリオシドの中では、本発明によれば、Ｎ−ＡｃＧＭ３及びＮ−ＧｃＧＭ３が好ましく、Ｎ−ＡｃＧＭ３が特に好ましい。
両方の結合型ガングリオシドの免疫原性、並びに抗癌剤及び獲得免疫の刺激剤としてのその適用についての詳細な記述は、上述の文献及び総説論文：Ｂｉｔｔｏｎ Ｒ．ら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２００２年）、第９巻、２６７〜２７６ページ、並びに最近の対話（ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）及び学会、たとえば、２００２年１２月９日にハバナで開催された第６回ラテンアメリカ免疫学会、Ｓａｕｒｅｚ Ｇ．らの対話「進行性乳癌患者におけるガングリオシド癌ワクチンＮ−アセチル−ＧＭ３／ＶＳＳＰ／Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ／ＳＡ５１の第Ｉ期臨床治験（Ｐｈａｓｅ Ｉ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎｅ Ｎ−Ａｃｅｔｉｌ−ＧＭ３／ＶＳＳＰ／Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ）」の中に見ることができる。
ガングリオシド以外の抗原性成分を含有しないワクチン組成物は、本発明の好ましい対象であり、特有の免疫原性成分Ｎ−ＡｃＧＭ３（Ｎ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ）及び／又はＮＧｃＧＭ３（Ｎ−ＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰ）として含有するものが特に好ましく、ＮＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰのみを含有するものが特に好ましい。
本発明が対象とするワクチン組成物は、ＶＳＳＰの溶液又は水性分散液であり、非経口用途向けの医薬中に通常使用される、ポリエチレングリコールなどでよい、非毒性非刺激性の、水と適合性のある他の溶媒を最終的に含有していてよい。
溶液又は水性分散液中の結合型ガングリオシドの濃度は、決定的なものでなく、０．０３％〜３％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．０４％〜２．５％（ｗ／ｖ）の間の範囲でよい。本発明で言及しているワクチンのための皮下投与量の範囲は、５０μｇ〜２．４ｍｇの間、好ましくは２００μｇ〜２ｍｇの間である。
すなわち本発明の対象であるワクチン組成物の本質的な特性は、追加の免疫アジュバントなしで皮下投与されるように設計されていることである。
免疫アジュバントは、ワクチン製剤中に頻繁に使用されている。そうしたアジュバントは、次の異なる方法で免疫作用を与えていた。すなわち、
−注射部位に抗原の付着層を作って、抗原を系統的な形で解放又は放出する。
−マクロファージによって捕らえられやすい油性の微小液滴を形成させて、抗原が脾臓及びリンパ節に到達するのを助ける。
−免疫応答に関与する細胞を直接又は間接的に活性化する。
−最もよく知られている免疫アジュバントは、フロイントの完全及び不完全アジュバント、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ、Ｒｉｂｉアジュバント、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ＴｉｔｅｒＭａｘ、アルミニウム塩、Ｇｅｒｂｕアジュバント、ＱＳ−２１などである。
−注射部位に抗原の付着層を作って、抗原を系統的な形で解放又は放出する。
−マクロファージによって捕らえられやすい油性の微小液滴を形成させて、抗原が脾臓及びリンパ節に到達するのを助ける。
−免疫応答に関与する細胞を直接又は間接的に活性化する。
−最もよく知られている免疫アジュバントは、フロイントの完全及び不完全アジュバント、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ、Ｒｉｂｉアジュバント、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ＴｉｔｅｒＭａｘ、アルミニウム塩、Ｇｅｒｂｕアジュバント、ＱＳ−２１などである。
驚くべきことに、また予想外に、本発明の著者らは、ガングリオシド／ＶＳＳＰワクチンを皮下投与すると、アジュバントを完全に省けることを見出した。このことは、従来技術にかかわらず、筋肉内投与をほとんど完全に除外した。
したがって、本発明は、局所的にアジュバントの使用に由来する、言及した炎症性の問題に関係する場合にはほとんどすべて、申し分のない利点となる。これは、効力があり、患者への刺激がより弱い、ガングリオシドによるワクチン接種の簡単な方法である。
以下の実施例に比較実験の詳細を含めて、免疫アジュバントを含有しないワクチン組成物の免疫効力を実証する。
米国特許第６，１４９，９２１号特許の実施例３に記載の手順を使用して、２．４ｍｇ／ｍＬのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有する水性ワクチン組成物を調製した（緩衝液Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）。一分割量のこの免疫原組成物に、同体積のＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１アジュバントを加えた（Ｓｅｐｐｉｃ Ｐａｒｉｓ、フランス）。同時に、別の分割量に、同体積の緩衝液Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを加えた。次の２種のワクチン組成物を得た。
Ａ：１．２ｍｇ／ｍＬのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有する水溶液
Ｂ：１．２ｍｇ／ｍＬのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有するＷ／Ｏ乳濁液
Ａ：１．２ｍｇ／ｍＬのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有する水溶液
Ｂ：１．２ｍｇ／ｍＬのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有するＷ／Ｏ乳濁液
体重が１８〜２０ｇの５０匹のＣ５７ＢＬ６雌性マウスを選び、それぞれ１０匹の動物からなる５つの実験群を編制した。
第１群（対照）の動物には、０、１４、２８、及び４２日目に、０．１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を筋肉内接種した。
第２群の動物には、０、１４、２８、及び４２日目に、０．１ｍＬのワクチン組成物Ｂ（１２０μｇのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ）を筋肉内接種した。
第３群（対照）の動物には、０、１４、２８、及び４２日目に、０．１ｍＬのＰＢＳを皮下接種した。
第４群の動物には、０、１４、２８、及び４２日目に、０．１ｍＬのワクチン組成物Ｂ（１２０μｇのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ）を皮下接種した。
第５群の動物には、０、１４、２８、及び４２日目に、０．１ｍＬのワクチン組成物Ａ（１２０μｇのＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ）を皮下接種した。
６３日目に、すべての群のマウスの皮下に５×１０３細胞の黒色腫ＭＢ１６Ｆ１０を植え付けた（０．２ｍＬ）。
動物は０日目から個別に扱い、次のパラメーター、すなわち腫瘍体積、生存度、及び経過期間を週２回測定した。得られた結果は以下のとおりである。
腫瘍体積：
図１に、各実験群の腫瘍成長動力学を示す。Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ（両側）Ｕ検定を使用して、群の対に統計学的有意性があるかどうか、個別に扱った動物の腫瘍植付け後３３日目の腫瘍体積値を評価した。
図１に、各実験群の腫瘍成長動力学を示す。Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ（両側）Ｕ検定を使用して、群の対に統計学的有意性があるかどうか、個別に扱った動物の腫瘍植付け後３３日目の腫瘍体積値を評価した。
この統計学的方法は、生物学的事象に関連したデータの自然のばらつきがあるこの種の実験の評価に特に相応しい。
ｐ値は、サンプルから算出した実際の値に関連した確率を表し、帰無仮説を確認する統計量（ｓｔａｄｉｇｒａｐｈ）及び実際のデータによって算出されたα値（有意性）の近似を規定できるようにする（ｐ＞０．０５）。
結果を図１及び表１に示す。
ａ： 第２群対第１群の比較の結果としてのｐ値
ｂ： 第４群対第３群の比較の結果としてのｐ値
ｃ： 第５群対第３群の比較の結果としてのｐ値
図１及び表１から、本発明の対象である組成物を皮下にワクチン接種した第５群のマウスが、他の実験群及び対応する対象と比べて腫瘍体積の有意な増大を示していることがわかる。
生存度
このパラメーターは、ＭＢ１６と同程度に致死的な腫瘍に対して、ワクチン接種が、免疫感作した動物の寿命を延長する能力を評価するものである。このパラメーターは、未処理動物の生存度と比較した日数で測定される。たとえば、有意性では、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ検定を使用している。
このパラメーターは、ＭＢ１６と同程度に致死的な腫瘍に対して、ワクチン接種が、免疫感作した動物の寿命を延長する能力を評価するものである。このパラメーターは、未処理動物の生存度と比較した日数で測定される。たとえば、有意性では、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ検定を使用している。
得られた値を図２及び表２に示す。表２において、基準群Ｘという句は、各欄と比較される群を意味する。
これらの結果は、本発明の対象の製剤を皮下にワクチン接種した第５群に含めたマウスが、腫瘍接種後最も長い生存を示したことが実証するものであった。
経過期間
経過期間は、接種した瞬間から測定した、各動物の腫瘍がはっきりとわかるようになるのにかかる期間を個々に評価するパラメーターである。表３に結果を示す。
経過期間は、接種した瞬間から測定した、各動物の腫瘍がはっきりとわかるようになるのにかかる期間を個々に評価するパラメーターである。表３に結果を示す。
実験を終えた時点で腫瘍ができていなかったマウスについては、経過期間を６０日間とみなした。
経過期間が延長される影響は、癌に対するワクチンにおいて有意差を得るのに非常に望ましいパラメーターであることは明らかであり、表３で観察される結果によれば、本発明の対象であるＶＳＳＰ組成物を皮下にワクチン接種した第５群の動物が、より関連性のある陽性の結果を示した。
腫瘍の退縮
第４及び第５群では、アジュバントを含む又は含まない皮下ワクチン接種に対応して、腫瘍退縮のある動物が観察された。第４群の動物では、接種１９日目には腫瘍が測定可能であり、事実上３５日まで成長がないままであり、陰性であることがわかった。第５群のマウスでは、接種２６日目に触診によって腫瘍の存在が示され、２９日目に陰性であると報告された。
第４及び第５群では、アジュバントを含む又は含まない皮下ワクチン接種に対応して、腫瘍退縮のある動物が観察された。第４群の動物では、接種１９日目には腫瘍が測定可能であり、事実上３５日まで成長がないままであり、陰性であることがわかった。第５群のマウスでは、接種２６日目に触診によって腫瘍の存在が示され、２９日目に陰性であると報告された。
全体としての評価
実験結果は、本発明の対象のワクチン組成物は、ＰＢＳで処理した対象群と比べて有意に生存期間及び経過期間を延長すると同時に腫瘍成長速度を減速させたことが示された。
実験結果は、本発明の対象のワクチン組成物は、ＰＢＳで処理した対象群と比べて有意に生存期間及び経過期間を延長すると同時に腫瘍成長速度を減速させたことが示された。
一方、アジュバントＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１を含有するワクチン組成物の投与は、筋肉内投与したときに限り防御を示し、皮下投与したときには完全に効力がなかった。
要約すれば、本発明が対象とするワクチン組成物の皮下投与は、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ型のアジュバントを含有するワクチン組成物の筋肉内ワクチン接種で得られた結果よりも優れた結果を示した。
Claims (5)
- ＶＳＳＰに含まれる１種又は複数のガングリオシドの溶液又は水性分散液を含有し、かつ、免疫アジュバントを含まない、任意の追加の免疫アジュバントなしで皮下投与によって免疫応答を刺激することのできる皮下投与用ワクチン組成物であって、ＶＳＳＰに含まれる上記ガングリオシドがＮ−ＡｃＧＭ３及びＮ−ＧｃＧＭ３から選択される皮下投与用ワクチン組成物。
- ＶＳＳＰに含まれるガングリオシドがＮ−ＡｃＧＭ３である、請求項１に記載のワクチン組成物。
- ガングリオシド以外の抗原を含有しない、請求項１に記載のワクチン組成物。
- 特有の免疫成分としてＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ及び／又はＮ−ＧｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有する、請求項１又は３に記載のワクチン組成物。
- 特有の成分としてＮ−ＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰを含有する、請求項４に記載のワクチン組成物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU47-2003 | 2003-02-27 | ||
| CU20030047A CU23257A1 (es) | 2003-02-27 | 2003-02-27 | COMPOSICIONES VACUNALES A BASE DE GANGLIOSIDOS PARA LA ADMINISTRACION SUBCUTáNEA |
| PCT/CU2004/000003 WO2004075811A2 (es) | 2003-02-27 | 2004-02-27 | Composiciones vacunales a base de gangliósidos para administración subcutánea |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2006519186A JP2006519186A (ja) | 2006-08-24 |
| JP4729475B2 true JP4729475B2 (ja) | 2011-07-20 |
Family
ID=40091613
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006501455A Expired - Lifetime JP4729475B2 (ja) | 2003-02-27 | 2004-02-27 | 皮下投与型ガングリオシド系ワクチン組成物 |
Country Status (37)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8591917B2 (ja) |
| EP (1) | EP1604683B1 (ja) |
| JP (1) | JP4729475B2 (ja) |
| KR (1) | KR100703570B1 (ja) |
| CN (1) | CN100418576C (ja) |
| AR (1) | AR043377A1 (ja) |
| AT (1) | ATE353668T1 (ja) |
| AU (1) | AU2004216554B2 (ja) |
| BR (1) | BRPI0407854B1 (ja) |
| CA (1) | CA2535214C (ja) |
| CL (1) | CL2004000374A1 (ja) |
| CR (1) | CR7965A (ja) |
| CU (1) | CU23257A1 (ja) |
| CY (1) | CY1106668T1 (ja) |
| DE (1) | DE602004004768T2 (ja) |
| DK (1) | DK1604683T3 (ja) |
| EA (1) | EA008905B1 (ja) |
| EC (1) | ECSP055978A (ja) |
| EG (1) | EG26446A (ja) |
| ES (1) | ES2280948T3 (ja) |
| GE (1) | GEP20074120B (ja) |
| HK (1) | HK1087630A1 (ja) |
| HR (1) | HRP20050763A2 (ja) |
| IL (1) | IL170355A (ja) |
| LT (1) | LT5351B (ja) |
| LV (1) | LV13400B (ja) |
| MY (1) | MY139811A (ja) |
| NZ (1) | NZ541952A (ja) |
| PE (1) | PE20040955A1 (ja) |
| PT (1) | PT1604683E (ja) |
| RS (1) | RS20050664A (ja) |
| SI (1) | SI1604683T1 (ja) |
| TN (1) | TNSN05209A1 (ja) |
| TW (1) | TWI344372B (ja) |
| UA (1) | UA80859C2 (ja) |
| UY (1) | UY28207A1 (ja) |
| WO (1) | WO2004075811A2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU24534B1 (es) * | 2017-11-06 | 2021-07-02 | Ct Inmunologia Molecular | Adyuvantes nano-particulados que contienen variantes sintéticas del gangliósido gm3 |
| CU20170173A7 (es) * | 2017-12-27 | 2019-11-04 | Ct Inmunologia Molecular | Nano-partículas que contienen el gangliósido gm3 como inmunomoduladoras |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0853366A (ja) * | 1993-12-29 | 1996-02-27 | Centro Immunologia Molecular | Ｎ−グリコリル化ガングリオシドに対する免疫応答を誘発させるワクチン組成物および癌処置におけるその使用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4965198A (en) | 1985-12-24 | 1990-10-23 | Konica Corporation | Monoclonal antibody and method of manufacturing hybridoma producing the same |
| US6149921A (en) * | 1993-12-29 | 2000-11-21 | Centro De Inmunologia Molecular | Vaccine compositions for eliciting an immune response against N-acetylated gangliosides and their use for cancer treatment |
| PE20020572A1 (es) * | 2000-12-06 | 2002-07-31 | Centro Inmunologia Molecular | Preparaciones para potenciar la inmunogenicidad de antigenos poco inmunogenicos |
| EP1293212A1 (en) * | 2001-08-21 | 2003-03-19 | National Research Council Of Canada | Anti cancer vaccine comprising whole cancer cells with modified sialic acid |
-
2003
- 2003-02-27 CU CU20030047A patent/CU23257A1/es unknown
-
2004
- 2004-02-24 PE PE2004000186A patent/PE20040955A1/es not_active Application Discontinuation
- 2004-02-24 AR ARP040100571A patent/AR043377A1/es not_active Application Discontinuation
- 2004-02-25 TW TW093104808A patent/TWI344372B/zh not_active IP Right Cessation
- 2004-02-26 CL CL200400374A patent/CL2004000374A1/es unknown
- 2004-02-26 MY MYPI20040641A patent/MY139811A/en unknown
- 2004-02-27 GE GEAP20048952A patent/GEP20074120B/en unknown
- 2004-02-27 UY UY28207A patent/UY28207A1/es unknown
- 2004-02-27 AT AT04715239T patent/ATE353668T1/de active
- 2004-02-27 BR BRPI0407854-3A patent/BRPI0407854B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-02-27 DK DK04715239T patent/DK1604683T3/da active
- 2004-02-27 JP JP2006501455A patent/JP4729475B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-02-27 US US10/547,164 patent/US8591917B2/en active Active
- 2004-02-27 SI SI200430262T patent/SI1604683T1/sl unknown
- 2004-02-27 UA UAA200508381A patent/UA80859C2/xx unknown
- 2004-02-27 EA EA200501367A patent/EA008905B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-02-27 RS YUP-2005/0664A patent/RS20050664A/sr unknown
- 2004-02-27 PT PT04715239T patent/PT1604683E/pt unknown
- 2004-02-27 ES ES04715239T patent/ES2280948T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-02-27 NZ NZ541952A patent/NZ541952A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-02-27 EP EP04715239A patent/EP1604683B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-02-27 CA CA2535214A patent/CA2535214C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-02-27 WO PCT/CU2004/000003 patent/WO2004075811A2/es active IP Right Grant
- 2004-02-27 AU AU2004216554A patent/AU2004216554B2/en not_active Expired
- 2004-02-27 DE DE602004004768T patent/DE602004004768T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-02-27 CN CNB2004800052015A patent/CN100418576C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-02-27 KR KR1020057015531A patent/KR100703570B1/ko active IP Right Grant
-
2005
- 2005-08-18 IL IL170355A patent/IL170355A/en not_active IP Right Cessation
- 2005-08-20 EG EGPCTNA2005000479A patent/EG26446A/en active
- 2005-08-24 EC EC2005005978A patent/ECSP055978A/es unknown
- 2005-08-26 CR CR7965A patent/CR7965A/es unknown
- 2005-08-26 TN TNP2005000209A patent/TNSN05209A1/en unknown
- 2005-08-29 LV LVP-05-110A patent/LV13400B/en unknown
- 2005-09-02 HR HR20050763A patent/HRP20050763A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2005-09-21 LT LT2005087A patent/LT5351B/lt not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-07-14 HK HK06107889.3A patent/HK1087630A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-04-26 CY CY20071100556T patent/CY1106668T1/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0853366A (ja) * | 1993-12-29 | 1996-02-27 | Centro Immunologia Molecular | Ｎ−グリコリル化ガングリオシドに対する免疫応答を誘発させるワクチン組成物および癌処置におけるその使用 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Silva et al. | Inulin‐derived adjuvants efficiently promote both Th1 and Th2 immune responses | |
| Tamayo et al. | Poly (anhydride) nanoparticles act as active Th1 adjuvants through Toll-like receptor exploitation | |
| JP4509554B2 (ja) | アルミニウムアジュバントおよびヒスチジンを含むワクチン | |
| JP3814290B2 (ja) | 抗原用のアジュバントおよびその製法ならびに用途 | |
| TW200911274A (en) | Alpha-galatosyl ceramide analogs and their use as immunotherapies | |
| JP6796146B2 (ja) | 水酸化アルミニウムゲル−塩化ナトリウム複合免疫学的アジュバント、並びにその調製方法及びその使用 | |
| JP2015038130A (ja) | 結核のワクチンおよびその使用方法 | |
| JPH09511737A (ja) | 免疫治療剤とその使用 | |
| JP2005528373A (ja) | 免疫プロトコルにＦｌｔ３リガンドを用いる方法 | |
| CA2839811A1 (en) | Materials and methods for modulating immune responses | |
| JP4729475B2 (ja) | 皮下投与型ガングリオシド系ワクチン組成物 | |
| EP3392291B1 (en) | Vaccine adjuvant composition based on amphiphilic polyamino acid polymer, containing squalene | |
| JP2016532712A (ja) | 薬物中毒に対するワクチン組成物 | |
| JPS6236501B2 (ja) | ||
| CA2255867C (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| Heath et al. | Shaping Modern Vaccines: Adjuvant Systems Tyrosine Using (MCT®) MicroCrystalline | |
| Alving et al. | Design and selection of vaccine adjuvants: principles and practice | |
| JP4217418B2 (ja) | キトサン誘導性免疫強化 | |
| RU2360699C2 (ru) | Композиции менингококковых вакцин с адъювантами | |
| AU771525B2 (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| Baogang et al. | Fixed-tumor vaccine: a practical formulation with cytokine-microspheres for protective and therapeutic antitumor immunity | |
| AU2012272607A1 (en) | Materials and methods for modulating immune responses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060914 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091016 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100115 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100122 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100209 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100309 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100521 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100528 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100909 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100909 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110412 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110418 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4729475 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140422 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |