JP2016532712A

JP2016532712A - 薬物中毒に対するワクチン組成物

Info

Publication number: JP2016532712A
Application number: JP2016540373A
Authority: JP
Inventors: エイチクレッグクリストファー
Original assignee: イミューンデザインコーポレイション
Priority date: 2013-09-05
Filing date: 2014-09-04
Publication date: 2016-10-20
Also published as: EP3041478A4; WO2015035010A1; AU2014315275A1; EA032441B1; CN105517555A; EP3041478A1; US20160193326A1; HK1224187A1; EA201690378A1

Abstract

本発明は、概して、薬物中毒に対するワクチンに関する。特に、本開示は、中毒性薬物ハプテンに対抗して引き起こされる免疫応答を大幅に改善するためのアジュバント（抗原性補強剤）を提供する。

Description

政府資金の声明

本発明は、国立薬物乱用研究所により与えられた認可番号5R43DA033845の下において、米国政府の支援によりなされた。政府は、本発明において、一定の権利を有する。

本発明は、概して、薬物中毒に対するワクチンに関する。特に、本開示は、薬物中毒の抗原に対抗して引き起こされる免疫応答を大幅に改善するためのアジュバント（抗原性補強剤）を提供する。

中毒性薬物の乱用障害は、それらと共に、社会的影響および経済的影響の両方をもたらす、特有のよく見られる後遺症の多くを伴う。これらは、死亡、病気、暴力、犯罪、雇用の喪失、生産性の低下、人間関係および家庭の崩壊、並びにHIVやその他の性感染症の蔓延を含む。薬物乱用（タバコを除く）による米国社会への経済的損失は、信頼できるデータが入手可能な最後の年の1992年には、推定980億ドルであった（非特許文献１）。これらの損失は、犯罪（591億ドル）、早死（146億ドル）、生産性の低下／職場での事故（142億ドル）、福祉（104億ドル）、医療（55億ドル）、および自動車事故を含む。これらの損失は、政府（46%）、薬物乱用者およびその家族（44%）が主に負担する。薬物乱用が社会の深刻な問題として残っていることは、よく認識されている。1992年の研究から3年後の1995年に、NIDAは、薬物乱用による社会への損失を1100億ドルと見積もった。

乱用薬物のそれ自体の使用は、使用者に有害な影響を持ち得る。しかしながら、これら薬物の中毒性の本質は、そのような薬物使用に関連する問題の中心でもあり、並びに、中毒者を治療すること、および社会における薬物中毒の患者率を減少させることの両方ができないことの根底にもあることが認識されている。

世界で最も広く使用されている中毒性薬物は、タバコである。米国4,600万人、E.U.1億7000万人を含め、世界的に推定12億人の喫煙者がいる。タバコ中毒は、がんおよび心臓病の唯一の最大の原因であり、その結果、年間推定500万人が死亡している（非特許文献２）。喫煙の健康リスク並びに社会および医療制度への経済的負担は明白であり否定できない。米国では毎年、全喫煙者の半数近くが禁煙しようとするが、ニコチンの高い中毒性のために、5%未満しか成功しない（非特許文献３；非特許文献４）。禁煙への補助には、支援カウンセリングおよびニコチン置換薬が含まれるが、これらの手法は依存を改めることはなく、ニコチン置換薬の開始後12ヶ月の評価では、悲惨にも＜10%の禁煙の成功という結果を見せた（非特許文献５）。喫煙者が自身の中毒を克服するために、ニコチンの生物学的効果を体内で中和するための、明確でまだ満たされていない医学的必要性が存在する。

原理上、ワクチンは、ニコチンに結合して血液脳関門を通過するのを防ぎ、その結果ニコチンの精神活性作用を妨げる高アフィニティー抗体を誘導することができる（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）。それらは現在の禁煙薬よりも副作用を生じることが少なく、他の薬物治療と安全に組み合わせることができる。抗ニコチンワクチンは、人で試験されてきた（非特許文献１０；非特許文献１１）。まとめると、全て安全に見えるが、人体で誘導される高度に可変な抗体応答、数ヶ月にわたり大量の抗原（100〜500 ug）を繰り返し注射（5〜7回）する必要性、および抗体価が時間と共に低下するという事実により、それらの性能は弱い。（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。それにもかかわらず、有効性傾向が観察されている。最も高い抗ニコチン抗体応答（上位30%）を有するNicVAX（細菌エキソプロテインAに結合したニコチン）のレシピエントは、8週間の連続禁煙を達成する可能性が、プラセボレシピエントよりも高かった（24.6%対12.0%）（非特許文献１３）。残念ながら、NicVaxは、最近の第III相試験においてその主な有効性のエンドポイントを満たすことができず（非特許文献１６）、その開発は今では疑問視されている。乱用薬物に対するワクチン接種は、中毒に苦しむ人々にとって得策であるが、しかしながら、持続的で長く続く抗体応答の実現には、ワクチン技術の大幅な改善が必要となる。本発明は、この利点およびその他の利点を提供する。

米国特許出願公開第2011/0300174号明細書米国特許出願公開第2012/0114677号明細書米国特許出願公開第2002/0004208号明細書国際公開第99/61054号米国特許出願公開第2008/0131466号明細書米国特許第4,912,094号明細書米国特許出願公開第2010/0310602号明細書国際公開第2009/035528号米国特許第5,057,540号明細書米国特許第7,402,572号明細書欧州特許第772619号明細書国際公開第90/14837号欧州特許第0399843B 国際公開第95/17210号国際公開第98/56414号国際公開第99/12565号国際公開第99/11241号米国特許第5,422,109号明細書欧州特許第0480982B2 米国特許第5,424,067号明細書欧州特許第0480981B 欧州特許第0382271B1 米国特許第5,273,965号明細書米国特許第5,352,449号明細書米国特許第5,443,829号明細書米国特許第5,560,398号明細書米国特許第5,679,356号明細書米国特許第7,033,598号明細書米国特許第7,018,345号明細書米国特許第6,970,739号明細書米国特許第4,780,212号明細書米国特許第4,767,402号明細書米国特許第4,948,587号明細書米国特許第5,618,275号明細書米国特許第5,656,016号明細書米国特許第5,722,397号明細書米国特許第6,322,532号明細書米国特許第6,018,678号明細書米国特許第5,885,211号明細書米国特許第6,685,699号明細書米国特許第3,598,122号明細書米国特許第3,598,123号明細書米国特許第4,286,592号明細書米国特許第4,314,557号明細書米国特許第4,379,454号明細書米国特許第4,568,343号明細書米国特許第5,464,387号明細書英国特許第2232892号明細書米国特許第6,871,477号明細書米国特許第6,974,588号明細書米国特許第6,676,961号明細書米国特許第6,908,453号明細書米国特許第5,457,041号明細書米国特許第5,591,139号明細書米国特許第6,033,928号明細書米国特許第4,897,268号明細書米国特許第5,075,109号明細書

「The economic costs of alcohol and drug abuse in the United States-1992」、国立薬物乱用研究所 Jha P.、Save lives by counting the dead、世界保健機関紀要、2010年、88巻：161〜240頁 The consequences of smoking: a report of the Surgeon's General、2004年；以下から入手可能：surgeongeneral.gov/library/smokingconsequences/ Fiore M.C.ら、Treating Tobacco Use and Dependence. Quick Reference Guide for Clinicians、2000年；以下から入手可能：surgeongeneral.gov/tobacco/tobaqrg.htm. Stead L.F.ら、Nicotine replacement therapy for smoking cessation.、Cochrane Database of Systematic Reviews、2008年（1号）：CD000146頁 Kinsey B.M.ら、Anti-drug vaccines to treat substance abuse、Immunology and Cell Biology、2009年、87巻（4号）：309〜14頁 LeSage M.G.ら、Current status of immunologic approaches to treating tobacco dependence: vaccines and nicotine-specific antibodies.、The AAPS Journal、2006年、8巻（1号）：E65〜75頁 Moreno A.Y.およびK.D. Janda、Immunopharmacotherapy: vaccination strategies as a treatment for drug abuse and dependence. Pharmacology, Biochemistry, and Behavior（Pharmacology, Biochemistry, and Behavior）、2009年、92巻（2号）：199〜205頁 Polosa R.およびN.L. Benowitz、Treatment of nicotine addiction: present therapeutic options and pipeline developments、Trends in Pharmacological Sciences、2011年、32巻（5号）：281〜9頁 Cerny, E.H.およびT. Cerny、Vaccines against nicotine、Human Vaccines、2009年、5巻（4号）：200〜5頁 Escobar-Chavez J.J.ら、Targeting nicotine addiction: the possibility of a therapeutic vaccine、Drug Design, Development and Therapy、2011年、5巻：211〜24頁 Cornuz J.ら、A vaccine against nicotine for smoking cessation: a randomized controlled trial、PloS One、2008年、3巻（6号）：e2547頁 Hatsukami D.K.ら、Immunogenicity and smoking-cessation outcomes for a novel nicotine immunotherapeutic. Clinical Pharmacology and Therapeutics、2011年、89巻（3号）：392〜9頁 Hatsukami D.K.ら、Safety and immunogenicity of a nicotine conjugate vaccine in current smokers.、Clinical Pharmacology and Therapeutics、2005年、78巻（5号）：456〜67頁 Maurer P.ら、A therapeutic vaccine for nicotine dependence: preclinical efficacy, and Phase I safety and immunogenicity、European Journal of Immunology、2005年、35巻（7号）：2031〜40頁「Nabi Biopharmaceuticals Announces Results of First NicVAX(Registered trademark) Phase III Clinical Trial」、Globe Newswire、2011年7月18日；およびwww.nabi.com Fattomら、Infect Immun.、 61巻、1023〜1032頁（1993年） G. T. Hermanson、Bioconjugate Techniques、Academic Press（1996年） DickおよびBeurret、Conjugate Vaccines. Contribu. Microbiol. Immunol.、Karger、Basal（1989年）10巻、48〜114頁 Wong、Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking、CRC Press, Inc.（1991年） Hermanson、BIOCONJUGATE TECHNIQUES、Academic Press、1996年 Methods Mol Med.、2008年、138巻、167〜82頁 de Villiers, S.H.ら、Vaccine、2010年、28巻、（10号）、2161〜8頁 Fevrier F.C.ら、Regioselective C-2 and C-6 substitution of (S)-nicotine and nicotine derivatives. Organic Letters、2005年、7巻（24号）、5457〜60頁 Iwasakiら、Nat. Immunol.、5巻、987頁（2004年） Vaccine Design: the subunit and adjuvant approach、Powell M.F.およびNewman, M.J.編集、21章、Monophosphoryl Lipid A as an adjuvant: past experiences and new directions、Ulrich J.T.およびMyers K. R.、Plenum Press、New York（1995年） Kensilら、Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach、編集PowellおよびNewman、Plenum Press、NY、1995年 Stouteら、N. Engl. J. Med.、336巻、86〜91頁（1997年） Klinman、Int. Rev. Immunol.、25巻（3〜4号）、135〜54頁（2006年）ドーランド図説医学辞典、W. B.サンダース社、第25版（1974年）メルクインデックス、第10版、エントリーno.8619 Linら、Clin. Infect. Dis.、21巻（6号）、1439〜49頁（1995年） Taylor、Infect. Immun.、63巻（9号）3241〜44頁（1995年） Egilmez、14章、Vaccine Adjuvants and Delivery Systems、John Wiley & Sons, Inc. （2007年） Changeら、Hematology、9巻（3号）、207〜15頁（2004年） Dranoff、Immunol. Rev.、188巻、147〜54頁（2002年） Boehmら、Ann. Rev. Immunol.、15巻、749〜95頁（1997年） Theofilopoulos ら、Ann. Rev. Immunol. 23巻、307〜36頁（2005年） Nelson、J. Immunol. 172巻（7号）、3983〜88頁（2004年） Portieljeら、Cancer Immunol. Immunother.、52巻（3号）、133〜44頁（2003年） Trinchieri、Nat. Rev. Immunol.、3巻（2号）、133〜46頁（2003年） Remingtons Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Co. （A. R. Gennaro編集、1985年） Gennaro, 21版. Mack Pub. Co.、Easton、PA （2005年） Hieda Y.ら、Active immunization alters the plasma nicotine concentration in rats、The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics、1997年、283巻（3号）、1076〜81頁 Miller KD、R. Roque、およびC. Clegg、2014年, Novel Anti-Nicotine Vaccine Using a Synthetic Trimeric Coiled-Coil Hapten Carrier、manuscript submitted Hartmann-Boyce J.ら、Cochrane Database Syst Rev.、2012年8月15日、8巻、 CD007072頁 Tonstad S.ら、NicotineTob Res.、2013年、15巻（9号）、1492〜501頁 Pryde DC.ら、PLoS One、2013年1月、8巻、（10号）、e76557頁 La Rosa Cら、J Infect Dis. 2012年8月15日、205巻（8号）、1294〜1304頁 Clegg CHら、Proc Natl Acad Sci U S A.、2012年10月23日、109巻（43号）、17585〜90頁 Hu Kら、Biosci Trends 2012年、6巻（2号）、52〜6頁 Reed SGら、Nat Med. 2013年、19巻（12号）、1597〜608頁 Garin Aら、Immunity 2010年7月23日、33巻（1号）、84〜95頁 DeFranco ALら、Immunol Rev.、2012年5月、247巻（1号）、64〜72頁 Komegae ENら、PLoS One.、2013年8月5日、8巻（8号）、e71185頁 Cleggら、PNAS Supra; Cleggら、PLoS One. 2014年 Feb 14;9（2）:e88979頁 Kishimoto, K.ら、2012年、SEL-068 A fully synthetic nanoparticle vaccine for smoking cessation and relapse prevention.、SRNT 2012 Annual Meeting, Houston Zaman, Mら、2013年、Methods 60, 226〜231頁 Lockner, J. W.ら、2013年、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters、23, 975〜978頁 McCluskie MJら、Int Immunopharmacol. 2013年、16巻（1号）:50〜6頁 McCluskie MJら、Society for Research on Nicotine and Tobacco 2013年、要約、PA13〜4頁

本発明の一態様は、キャリアタンパク質に結合する、1つ以上の中毒薬物ハプテン；薬学的に許容される担体または賦形剤；および以下の式の脂質アジュバント：
を含むワクチン組成物を提供し、
式中：R¹、R³、R⁵およびR⁶はC₁₁〜C₂₀アルキルであり；並びにR²およびR⁴はC₁₂〜C₂₀アルキルである。特定の実施形態において、R¹、R³、R⁵およびR⁶はウンデシルであり、R²およびR⁴はトリデシルである。特定の実施形態において、組成物は水性製剤である。他の実施形態において、組成物は、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、または微粒子の形態である。本明細書に記載のワクチン組成物の別の実施形態において、中毒薬物ハプテンは、アンフェタミン類、メタンフェタミン、コカイン、カフェイン、ニコチン、バルビツレート類、グルテチミド、ベンゾジアゼピン類、ゾピクロン、メタカロン、キナゾリノン、およびオピエートまたはオピオイド鎮痛薬からなる群より選択される。関連する実施形態において、ベンゾジアゼピンは、ジアゼパム、アルプラゾラム、フルニトラゼパム、トリアゾラム、テマゼパム、およびニメタゼパムからなる群より選択される。特定の実施形態において、オピエートまたはオピオイド鎮痛薬は、ジアセチルモルヒネ、フルニトラゼパム、モルヒネ、コデイン、アヘン、ヘロイン、オキシコドン、ブプレノルフィン、ヒドロモルフォン、フェンタニル、メペリジンおよびメタドンからなる群より選択される。

本発明の一実施形態において、本明細書に記載のワクチン組成物は、ワクチン1投与用量当たり約2.5 μg以上のGLAを含んでいてもよい。他の実施形態において、ワクチンは、ワクチン1投与用量当たり約2 μg〜約10 μgのGLA、またはワクチン1投与用量あたり約3 μg〜約8 μgのGLA、またはワクチン1投与用量あたり約4 μg〜約6 μgのGLA、またはワクチン1投与用量あたり約5 μgのGLAを含んでいてもよい。

本発明の別の態様は、中毒性薬物に対する免疫応答を誘導する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に記載のワクチン組成物を投与することを含む方法を提供し、例えば、ワクチン組成物は、キャリアタンパク質に結合する、1つ以上の中毒薬物ハプテン；薬学的に許容される担体または賦形剤；および以下の式の脂質アジュバント：
を含み、
式中：R¹、R³、R⁵およびR⁶はC₁₁〜C₂₀アルキルであり；並びにR²およびR⁴はC₁₂〜C₂₀アルキルである。

本発明の別の態様は、薬物中毒を治療する方法であって、それを必要とする患者に、
キャリアタンパク質に結合する、1つ以上の中毒薬物ハプテン；薬学的に許容される担体または賦形剤；および以下の式の脂質アジュバント：
を含み、
式中：R¹、R³、R⁵およびR⁶はC₁₁〜C₂₀アルキルであり；並びにR²およびR⁴はC₁₂〜C₂₀アルキルであるワクチン組成物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。

本発明のさらなる態様は、薬物中毒の、断薬率を高めるまたは再発率を減少させる、もしくはその両方のための方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に記載のワクチン組成物、例えば、本明細書に記載のワクチンの治療有効量を投与することを含む方法を提供し、例えば、本明細書に記載のワクチン組成物は、キャリアタンパク質に結合する、1つ以上の中毒薬物ハプテン；薬学的に許容される担体または賦形剤；および以下の式の脂質アジュバント：
を含み、
式中：R¹、R³、R⁵およびR⁶はC₁₁〜C₂₀アルキルであり；並びにR²およびR⁴はC₁₂〜C₂₀アルキルである。

図１Ａは、優れた持続性抗体応答を刺激するKLH-ニコチン + GLA-SEの能力を、ミョウバンニコチンワクチン製剤と比較して試験するために使用したプライム-ブーストワクチン接種計画を示す。下部に沿った矢印は、各時点で行われるアッセイを示す。白矢印：B細胞アッセイ-抗体価、アイソタイプ、アビディティー（d0、d21、d35）。黒矢印：T細胞アッセイ-CD4数および表現型（d0、d10、d28）。図１Ｂおよび図１Ｃは、KLH結合ニコチンでワクチン接種したマウスにおける、抗ニコチン抗体のエンドポイント力価を示す。GLA-SEで調合されたKLH-ニコチンでワクチン接種したマウスは、ミョウバンとKLH-ニコチンでワクチン接種したマウスと比較すると、エンドポイント抗ニコチン抗体価の増加を示した。（Ａ）TCC16を含む、いくつかのハプテンキャリア中（本文参照）のアミノ酸数。各キャリアでのハプテン結合に利用可能なリジンの数は、棒の上に記録されている。（Ｂ）各キャリアタンパク質中のリジンの割合。免疫マウスにおける抗ニコチン抗体応答。C57BL/6マウス（5/grp）に、PBSまたは2.5 μgの表示の結合ハプテンキャリアおよびアジュバントのいずれかを注射し（d0、d14、d131）、血清をELISA法により、抗ニコチン抗体価についてアッセイした。群間の比較は、対応のない両側t検定により行った。*p<0.004；**p<0.002。 160日目の抗ニコチン抗体価。C57BL/6マウス（5/grp）を、PBSまたは2.5 μgの表示の結合ハプテンキャリアおよびアジュバントのいずれかで免疫化し（d0、d14、d146）、血清をELISA法によりアッセイした。群間の比較は、対応のない両側t検定により行った。*p<0.003; **p<0.0001。 C57BL/6マウス（5/grp）を、GLA-SEがない場合（Ａ）およびある場合（Ｂ）において表示投与用量のTCCnic-12を用いて免疫化し、d35の血清を、ELISA法により、抗ニコチン抗体についてアッセイした。免疫マウスにおける抗キャリア抗体応答。C57BL/6マウス（5/grp）に、GLA-SE存在下で表示のキャリアを注射した（d0、d14）。各グループの28日目の血清を、対応する非結合ハプテンキャリアに結合する抗体についてアッセイした。 TCCnic-12免疫マウスから採取した抗血清に結合するニコチンの特異性を、競合ELISA法により、ニコチン、コチニンおよびアセチルコリンについて決定した。コチニンについてのIC50値は、ニコチンよりも1000倍大きく、アセチルコリンについては、阻害がないために算出できなかった。 TCCnic-12により誘導される抗ニコチン抗体の相対的アフィニティー。C57BL/6マウス（5/grp）に、PBSまたは2.5 μgの表示の結合ハプテンキャリアおよびアジュバントのいずれかを注射した（d0、d14、d146）。幾何平均Kd値を、競合ELISA法により決定した。血清ニコチン結合能力を、平衡状態でニコチンの結合および遊離濃度を測定することにより決定した。Kd値（図８）を、質量作用の法則の式Kd = [ニコチン][IgG]/[ニコチン-IgG]により総抗体濃度を計算するために使用した。群間の比較は、対応のない両側t検定により行った。*p<0.04; **p<0.01; ***p<0.001。マウスにおける抗ニコチン抗体の機能。C57BL/6マウス（5/grp）に、PBSまたは2.5 μgの表示の結合ハプテンキャリアおよびアジュバントのいずれかを注射した（d0、d14、d146）。マウス（5/grp）に、紙巻きたばこ3本分（1.2 ug）に相当する酒石酸ニコチン1投与用量を、d160に注射した。5分後にマウスを屠殺して組織を除去し、脳内（Ａ）および血清中（B）のニコチン量を質量分析法により測定した。*p<0.05; **p<0.007; ***p<0.0003。

本発明は、概して、薬物乱用に対する改良ワクチンに関する。本明細書に記載のワクチンは、薬物に対する優れた抗体応答を、ワクチンでの利用で提供し、薬物乱用治療の取り組みにおいて、断薬率を高めるおよび再発率を減少させる。

本明細書に記載のワクチンに使用するために検討される中毒性薬物には、アンフェタミン類、メタンフェタミン類、コカイン、カフェイン、ニコチン、バルビツレート類、グルテチミド、ベンゾジアゼピン類（例えば、ジアゼパム、アルプラゾラム、フルニトラゼパム、トリアゾラム、テマゼパム、ニメタゼパム）、ゾピクロン、メタカロン、キナゾリノン、オピエートおよびオピオイド鎮痛薬（ジアセチルモルヒネ、フルニトラゼパム、モルヒネ、コデイン、アヘン、ヘロイン、オキシコドン、ブプレノルフィン、ヒドロモルフォン、フェンタニル、メペリジンおよびメタドン）を含む、またはこれらに由来する中毒性薬物が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本明細書に記載のワクチンに使用される中毒性薬物は、ある中毒性薬物の誘導体である。別の実施形態において、本明細書に記載のように使用するための中毒性薬物は、例えば特許文献１に記載のものなどのように、ニコチン誘導体ではない。特定の実施形態において、免疫原性を増加させるために、特許文献２に記載のように、中毒性薬物は修飾されてもよい。

本発明で使用される用語「ハプテン」は、それ自体で免疫応答を誘発することはできないが、一旦キャリア分子に結合すると免疫応答を誘発する低分子量の有機化合物を意味する。特定の実施形態において、本明細書で得られるワクチンに使用される乱用薬物は、キャリア分子に結合するハプテンである。本明細書での使用に検討されるキャリア分子には、適切な免疫原性タンパク質またはポリペプチドが含まれる。本明細書において使用されるキャリアタンパク質には、概して、被験者のT細胞を刺激することができ、それに続いてB細胞がハプテン-キャリア結合分子全体に対する抗体を産生するように促される、少なくとも1つのT細胞エピトープを含む分子が含まれる。本明細書で使用する用語「エピトープ」は、抗体との特異的相互作用に関与する抗原上の決定基を含む。エピトープは、MHC分子のコンテクストにおいてT細胞により認識される抗原上の決定基を意味し得る。抗体により認識されるエピトープ決定基は通常、化学的に活性な表面上の、アミノ酸または糖側鎖などの分子の集団からなり、特異的な三次元構造特性および特異的な電荷特性を有する。免疫原性特性を有するには、タンパク質またはポリペプチドは、T細胞を刺激することができなければならないと考えられている。しかし、T細胞エピトープを欠くキャリアタンパク質が、免疫原性である可能性もある。

キャリアタンパク質は、一般的に、ワクチンに対する強い免疫応答を誘発するのに十分に異質的である。典型的には、使用されるキャリアタンパク質は、共有結合したハプテンに免疫原性を付与することが可能な巨大分子である。例示的なキャリアタンパク質は、本質的に免疫原性が高い。したがって、高い免疫原性を有し、ハプテンの抗体の産生を最大にすることができるキャリアタンパク質が望ましい。

ウシ血清アルブミン（BSA）およびキーホール・リンペット・ヘモシアニン（KLH）は、一般的に結合型ワクチンの開発におけるキャリアとして動物実験で使用されており、本明細書においてキャリアタンパク質として検討される。治療用結合型ワクチンの調製に使用されてきたタンパク質には、多数の病原性細菌およびそれらのトキソイド（類毒素）の毒素が含まれるが、これらに限定されない。例としては、ジフテリアおよび破傷風の毒素、並びにそれらの医学的に許容される対応するトキソイドが含まれる。その他のキャリアタンパク質候補は、交差反応物質（CRM）と称される細菌毒素に抗原性が似ているにタンパク質である。

組み換え緑膿菌エキソプロテインA（rEPA）は、その構造と生物活性の特徴が十分に明らかにされているので、キャリアタンパク質として使用され得る。さらに、この組み換えタンパク質は、国立衛生研究所により、黄色ブドウ球菌莢膜多糖体結合型ワクチンで正常にかつ安全にヒトに使用されてきた（例えば、非特許文献１７を参照）。このタンパク質は、553位のアミノ酸欠失により、天然のエキソトキシン（外毒素）の内因性酵素活性が排除されたため、適切なタンパク質キャリアとして認定されている。その結果、rEPAは、天然のエキソトキシンA（ETA）と同じ免疫プロファイルを有するが、天然のETAの肝毒性は有していない。本出願で使用される場合、「エキソプロテインA」は、修飾された非肝毒性ETAを意味する。そのようなエキソプロテインAの一例は、553位でアミノ酸欠失がある。

適切なキャリア分子は多数あり、以下が含まれるが、それらに限定されない：
細菌毒素または生成物、例えば、コレラ毒素B-(CTB)、ジフテリア毒素、破傷風トキソイド、および百日咳毒素および線維状赤血球凝集素、志賀毒素、緑膿菌エキソトキシンなど；
レクチン、例えば、リジン-Bサブユニット、アブリンおよびスイートピーレクチンなど；
サブウイルス、例えば、レトロウイルス核タンパク質（レトロNP）、狂犬病リボ核タンパク質（狂犬病RNP）、植物ウイルス（例えばTMV、ササゲおよびカリフラワーモザイクウイルス）、水疱性口内炎ウイルス-ヌクレオカプシドタンパク質（VSV-N）、ポックスウイルスベクターおよびセムリキ森林ウイルスベクターなど；
人工運搬体、例えば、複数抗原性ペプチド（MAP）、マイクロスフェアなど；
酵母ウイルス様粒子（VLP）；
マラリアタンパク質抗原；並びに
その他タンパク質やペプチド、および上記の修飾体、誘導体または類似体。
その他の有用なキャリアには、粘膜応答を増強する能力を有するものが含まれ、より具体的には、細菌毒素のLTBファミリー、レトロウイルス核タンパク質（レトロNP）、狂犬病リボ核タンパク質（狂犬病RNP）、水疱性口内炎ウイルス-ヌクレオカプシドタンパク質（VSV-N）、および組み換えポックスウイルスサブユニットが含まれる。

「直接結合」を作るために、ハプテンは、リンカーの有無にかかわらず、キャリアに直接結合される。例えば、単一のニコチンハプテンを、キャリア上の利用可能な各アミン基に結合させることができる。ホモ二官能性またはヘテロ二官能性架橋剤を使用して、ハプテンをキャリアタンパク質に直接結合させるための一般的な方法は、例えば、非特許文献および非特許文献１９に記載されている。二官能性架橋剤を使用して直接結合すると、ハプテン対タンパク質のモル比は、タンパク質上で特定の結合化学に利用できる官能基の数により制限される。例えば、n個のリジン部位を有するキャリアタンパク質では、理論的に、リンカー架橋剤のカルボキシル基との反応に利用できるn+1個の第一級アミン（末端アミノを含む）があるであろう。したがって、この直接結合手順を使用すると、生成物は、n+1個の形成されたアミド結合、すなわち、最大n+1個のハプテン結合を有することになる。

ハプテンをキャリアタンパク質に結合させるために用いられる反応物の濃度、およびキャリアタンパク質の性質に依存して、ハプテン対キャリアの比率が変化することを、当業者は理解するであろう。また、与えられたハプテン-キャリア結合体調製物の中でも、それぞれ個々の結合体のハプテン／キャリアの比率は変化し得る。一例として、本明細書の実施例に記載されるように、KLHは、高いハプテン：キャリアタンパク質比を与え、ハプテン-特異的抗体を生成する可能性を高める結合ハプテンのための、多数のリジン残基を有する。したがって、15〜100個またはそれ以上のハプテン分子など、様々な数のニコチン分子がKLHに結合することができる。別の例として、エキソプロテインAは、理論的には、ハプテンとの結合に利用可能な15個のアミンを有する。しかしながら、3'アミノメチル-スクシニル-ニコチンがこのタンパク質に結合する場合、単一の結合体調製物において、11〜17個の範囲のニコチンハプテンがそれぞれエキソプロテインAキャリアに結合されていることが判明した。この範囲は、ガス濾過クロマトグラフィーを用い、260 nmでのUV吸収の増加を測定することにより、実験的に決定された。ニコチンハプテンがキャリア上の非アミン部位に結合できるため、いくつかのキャリアには17個のニコチンが結合していた。ハプテンが結合できる非アミン部位の例には、-SH及び-OH部位が挙げられるが、これらに限定されない。しかし、これら副反応の発生率は低い。特定の実施形態において、中毒性薬物ハプテンは、「基質（マトリックス）」（例えば、オリゴマーおよびポリマーのポリペプチド）に結合してもよく、利用可能なキャリアタンパク質結合部位数を増加させる。そのような基質は、例えば、特許文献３に記載されている。

ハプテンなどの低分子とキャリアの架橋または結合を容易にするために利用できる官能基が、多数存在する。これらには、カルボン酸、無水物、混合無水物、ハロゲン化アシル、アジ化アシル、ハロゲン化アルキル、N-マレイミド、イミノエステル、イソシアネート、アミン、チオール、およびイソチオシアネートなど、並びに当業者に知られているその他の官能基部位が含まれる。これら部位は、タンパク質分子の反応基と共有結合を形成することができる。使用される官能基部位に応じて、反応基は、反応して結果的にアミド、アミン、チオエーテル、アミジンウレアもしくはチオウレア結合を形成する、キャリアタンパク質または修飾キャリアタンパク質分子上のリジン残基またはチオール基のεアミノ基であり得る。他の適切な活性基および結合技術を使用することができることを、当業者は認識するであろう。例えば、非特許文献２０を参照。また、非特許文献２１および非特許文献１９を参照。また、ハプテンとキャリアタンパク質を結合する別の方法には、非特許文献２２を参照。

一例として、特定の実施形態において、非特許文献８；および非特許文献２３に記載されているように、様々な化学的方法を用いて、ニコチンはタンパク質に共有結合される。一例として、ニコチンの選択的臭素化（非特許文献２４）を使用することができ、その後カストロ・ステファンズカップリングによりω-アルキニルエステルへ（特許文献４）、還元によりアルカンへ、そして最終的に脱保護により遊離酸へと続く。

特定の実施形態において、リンカー部位は、ハプテンのキャリアタンパク質への結合に使用される。この点で、特定の実施形態において、直線状のリンカー部位が、ハプテンのキャリアタンパク質への結合に使用される。他の実施形態において、環状または分枝状のリンカーが、ハプテンのキャリアタンパク質への結合に使用される。例示的なリンカーは、スクシニル部位である。リンカーのその他の例は、ADHである。この目的のための柔軟なテザーが、非特許文献２３に記載されている。

したがって、本明細書中に記載の、中毒性薬物に対するワクチンに使用するためのハプテン-キャリア結合体は、1つ以上のハプテンをキャリアタンパク質と反応させることにより調製され、T細胞を刺激する能力があるハプテンキャリア結合体を生成し、T細胞増殖、および、特定のB細胞を活性化し、免疫原性ハプテン-キャリア結合体に応答した抗体産生を刺激するメディエーターの放出につながる。ハプテンキャリア結合体に応答して生じる特定の抗体は、ハプテン-キャリア結合体のハプテン部位に特異的になる。本発明は、ニコチン中毒、コカイン中毒、メタンフェタミン中毒、およびその他薬物の中毒を含む薬物中毒の治療に使用するための、ハプテンとキャリアタンパク質の種々の適切な組み合わせを使用することを検討する。

（アジュバント）
本開示による使用に適したアジュバントには、以下のものが含まれる。本発明の理論に縛られることなく、本明細書に記載のアジュバントは、TLR4を標的とすると考えられている。TLR4は、TLRファミリーの中でも特殊であり、下流シグナル伝達がMyD88-およびTRIF-依存性経路の両方を経て起こる。まとめて、これら経路は、DC成熟化、抗原処理／提示、T細胞プライミング、およびサイトカイン（例えば、IL-12、IFNα/β、およびTNFα）産生を刺激する（例えば、非特許文献２５を参照）。

式（Ia）のグルコピラノシル脂質A（GLA）化合物：
もしくはその薬学的に許容される塩であり、
式中：R1、R3、R5およびR6はC11〜C20アルキルであり；並びにR2およびR4はC12〜C20アルキルであり；より具体的な実施形態において、GLAは上記の式（Ia）で表され、式中R1、R3、R5およびR6はC11〜C14アルキルであり；並びにR2およびR4はC12〜C15アルキルであり；さらにより具体的な実施形態において、GLAは上記の式（Ia）で表され、式中R1、R3、R5およびR6はC11アルキル、もしくはウンデシルであり；並びにR2およびR4はC13アルキル、もしくはトリデシルである；
または式（Ib）のグルコピラノシル脂質A（GLA）化合物：
もしくはその薬学的に許容される塩であり、
式中：L1、L2、L3、L4、L5およびL6は同一または異なり、かつ独立してO、NH、および（CH2）から選択され；L7、L8、L9およびL10は同一または異なり、かつ任意の発生率で、存在しないか、またはC(=O)のいずれかであってよく；Y1は、酸性官能基であり；Y２およびY３は同一または異なり、かつそれぞれ独立してOH、SH、および酸性官能基から選択され；Y4はOHまたはSHであり；
R1、R3、R5およびR6は同一または異なり、かつそれぞれ独立してC8〜C13アルキルの群から選択され；並びにR2およびR4は同一または異なり、かつそれぞれ独立してC6〜C11アルキルの群から選択される。

DSLP化合物は、グルコースおよびアミノ置換グルコースから選択される二つの単糖基を結合させることにより形成された二糖（DS）基を含むGLAアジュバントの一種であり、ここでその二糖は、化学的にリン酸（P）基および複数の脂質（L）基の両方に結合されている。より具体的には、二糖は、それぞれが6個の炭素を有する、二つの単糖単位から形成されるものとして描くことができる。二糖では、1つの単糖が還元末端を形成し、もう1つの単糖が非還元末端を形成する。便宜的に、還元末端を形成する単糖の炭素は1、2、3、4、5および6位に位置すると表記され、一方非還元末端を形成する単糖の対応する炭素は、1'、2'、3'、4'、5'および6'位に位置すると表記され、従来の炭水化物番号命名法に従う。DSLPでは、非還元末端の1位の炭素は、エーテル（-O-）またはアミノ（-NH-）基のいずれかを介して、還元末端の6'位の炭素に結合される。リン酸基は、好ましくは非還元末端の4'炭素を介して、二糖類に結合される。脂質基のそれぞれは、アミド（-NH-C(O)-）またはエステル（-O-C(O)-）結合を介して二糖に結合し、ここでカルボニル基は、脂質基に結合する。二糖は、アミドまたはエステル基に結合し得る7つの位置を有し、それらはすなわち、非還元末端の2'、3'、および6'位、並びに還元末端の1、2、3および4位である。

たとえば、脂質基は、少なくとも3個の炭素、または少なくとも6個の炭素、好ましくは少なくとも8個の炭素、より好ましくは少なくとも10個の炭素を有し、ここでいずれの場合にも、脂質基は、24個以下の炭素、22個以下の炭素、または20個以下の炭素を有する。一実施形態において、脂質基はまとめて60〜100個の炭素、好ましくは70〜90個の炭素を提供する。脂質基は、炭素および水素原子のみからなっていてもよく、すなわち炭化水素脂質基であってもよく、または1つの水酸基を含んでいてもよく、すなわちヒドロキシル置換脂質基であってもよく、またはエステル基のカルボニル（-C(O)-）を介して炭化水素脂質またはヒドロキシル置換脂質基に結合されたエステル基を含んでいてもよく、すなわち、エステル置換脂質であってよい。炭化水素脂質基は、飽和または不飽和であってもよく、不飽和炭化水素脂質基は、隣接炭素原子間に1つの二重結合を有することになる。

DSLPは、3つ、または4つ、または5つ、または6つ、または7つの脂質基を含む。一態様において、DSLPは3〜7つの脂質基を含み、別の態様においては、DSLPは4〜6つの脂質を含む。一態様において、脂質基は、独立して、炭化水素脂質、ヒドロキシル置換脂質、およびエステル置換脂質から選択される。一態様において、1,4'および6'位が水酸基で置換されている。一態様において、単糖単位は、それぞれグルコサミンである。DSLPは、遊離酸の形態、または塩の形態、例えばアンモニウム塩であってもよい。

特定の実施形態において、DSLPの脂質は、以下により説明される：3'位が-O-(CO)-CH₂-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)で置換されていて；2'位が-NH-(CO)-CH₂-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)で置換されていて；3位が-O-(CO)-CH₂-CH(OH)(Ra)で置換されていて；2位が-NH-(CO)-CH₂-CH(OH)(Ra)で置換されていて；RaおよびRbのそれぞれはデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシルから選択され、ここでこれらの用語のそれぞれは、飽和炭化水素基を意味する。一実施形態において、Raはウンデシルであり、Rbはトリデシルあり、このアジュバントは、例えば、特許文献５において、「GLA」と称されている。Raがウンデシルであり、Rbがトリデシルである化合物は、立体化学的に決定された形態で用いられてもよく、例えば、アヴァンティ・ポーラ・リピッド（Avanti Polar Lipid）から、PHAD（商標）アジュバントとして入手可能である。

一態様において、DSLPは、3D-MPLとして知られている天然由来化合物の混合物である。3D-MPLアジュバントは、グラクソスミスクライン（GlaxoSmithKline）社により、そのMPL（商標）アジュバントとして、医薬品グレードの形態で商業的に生産されている。3D-MPLは、科学文献および特許文献に広く記載されており、例えば、非特許文献２６および特許文献６を参照。

別の態様において、DSLPアジュバントは、（i）非還元末端グルコサミンのヘキソサミン1位と還元末端グルコサミンのヘキソサミン6位との間で、エーテル結合を介して非還元末端グルコサミンに結合された還元末端グルコサミンを有するジグルコサミン骨格と、（ii）非還元末端グルコサミンのヘキソサミン4位に結合したO-ホスホリル基と、（iii）6つ以下の脂肪酸アシル鎖とを含むものとして説明することができ；ここで脂肪酸アシル鎖の1つが、エステル結合を介して還元末端グルコサミンの3-ヒドロキシに結合し、ここで脂肪酸アシル鎖の1つが、アミド結合を介して非還元末端グルコサミンの2-アミノに結合し、かつ炭素原子が12個より多いアルカノイル鎖にエステル結合を介して結合したテトラデカノイル鎖を含み、そしてここで脂肪酸アシル鎖の1つが、エステル結合を介して非還元末端グルコサミンの3-ヒドロキシに結合し、かつ炭素原子が12個より多いアルカノイル鎖にエステル結合を介して結合したテトラデカノイル鎖を含む。例えば、特許文献５を参照。

別の態様において、アジュバントは、特許文献７に記載されているように、6つの脂質基を有する合成二糖類であってもよい。

別の態様において、DSLPアジュバントは、化学式（II）：
で表され、
式中、部位A1およびA2は、独立して水素、リン酸、およびリン酸塩の群から選択される。ナトリウムおよびカリウムは、リン酸塩にとって例示的な対イオンである。部位R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、C3-C23と表される3〜23個の炭素を有する炭化水素の群より選択される。さらに明確にするために、部位が複数の要素を有する特定の群「から独立して選択される」場合、最初の部位に選ばれた要素は、第二の部位に選ばれる要素の選択には、決して影響や制限を与えないことが理解されるべきであることが説明される。R1、R3、R5およびR6が結合している炭素原子は不斉であり、したがって、RまたはSいずれかの立体化学で存在してもよい。一実施形態において、これら炭素原子の全てがRの立体化学であり、一方別の実施形態においては、これら炭素原子の全てがSの立体化学である。

本明細書で使用される場合、「アルキル」は、直鎖または分枝鎖であり、非環式または環式であり、不飽和または飽和であり、1〜20個の炭素原子を含有する、そして特定の好ましい実施形態においては、11〜20個の炭素原子を含有する脂肪族炭化水素を意味する。代表的な飽和直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、n-プロピル、n-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル、および、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシルなどを含むその他のものが挙げられ；一方、飽和分枝鎖アルキルとしては、イソプロピル、sec-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、イソペンチルなどが挙げられる。代表的な飽和環式アルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられ；一方、不飽和環式アルキルとしては、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどが挙げられる。環状アルキルは、本明細書では、「同素環（“homocycles”または“homocyclic rings”）」とも称される。不飽和アルキルは、隣接炭素原子間に少なくとも1つの二重または三重結合を含有する（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と称される）。代表的な直鎖および分枝鎖アルケニルには、エチレニル、プロピレニル、1-ブテニル、2-ブテニル、イソブチレニル、1-ペンテニル、2-ペンテニル、3-メチル-1-ブテニル、2-メチル-2-ブテニル、2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられ；一方代表的な直鎖および分枝鎖アルキニルには、アセチレニル、プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、1-ペンチニル、2-ペンチニル、3-メチル-1-ブチニルなどが挙げられる。例えば、「C18〜13アルキル」および「C6〜11アルキル」は、上記で定義されるように、それぞれ8〜13個または6〜11個の炭素原子を含有するアルキルを意味する。

本明細書で使用される場合、「酸性官能基」は、水性溶媒中でプロトンを供与することができる官能基を意味する（すなわち、ブレンステッド-ローリー酸）。プロトンを供与した後、酸性官能基は負電荷種になる（すなわち、酸性官能基の共役塩基）。酸性官能基の例としては、-OP(=O)(OH)₂ (リン酸), -OS(=O)(OH)₂(硫酸), -OS(OH)₂ (亜硫酸), -OC(OH)₂ (カルボン酸), -OC(=O)CH(NH₂)CH₂C(=O)OH (アスパラギン酸), -OC(=O)CH₂CH₂C(=O)OH (コハク酸), および-OC(=O)CH₂OP(=O)(OH)₂(リン酸カルボキシメチル)が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「炭化水素」は、水素と炭素だけから形成された化学的部位を意味し、ここで炭素原子の配列は、直鎖でも分岐鎖でもよく、非環式または環式でもよく、そして隣接する炭素原子間の結合は、単結合だけであってもよく、すなわち飽和炭化水素を提供してもよく、または任意の隣接する2個の炭素原子間に存在する二重結合または三重結合があってもよく、すなわち不飽和炭化水素を提供してもよく、かつ炭化水素基中の炭素原子数は、3〜24個の炭素原子の間である。炭化水素はアルキルであってもよく、代表的な直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、n-プロピル、n-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル、および、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシルなどを含むその他のものが挙げられ；一方、分枝鎖アルキルとしては、イソプロピル、sec-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、イソペンチルなどが挙げられる。代表的な飽和環式炭化水素としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられ；一方、不飽和環式炭化水素としては、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどが挙げられる。不飽和炭化水素は、隣接炭素原子間に少なくとも1つの二重または三重結合を含有する（炭化水素が非環式である場合、それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と称され、炭化水素が少なくとも部分的に環状である場合、それぞれシクロアルケニルおよびシクロアルキニルと称される）。代表的な直鎖および分枝鎖アルケニルには、エチレニル、プロピレニル、1-ブテニル、2-ブテニル、イソブチレニル、1-ペンテニル、2-ペンテニル、3-メチル-1-ブテニル、2-メチル-2-ブテニル、2,3-ジメチル-2-ブテニル、などが挙げられ；一方代表的な直鎖および分枝鎖アルキニルには、アセチレニル、プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、1-ペンチニル、2-ペンチニル、3-メチル-1-ブチニルなどが挙げられる。

式（II）のアジュバントは、当該技術分野で知られている合成方法により得ることができ、例えば、参照により本明細書に組み込まれる特許文献８に記載の合成方法、並びに、特許文献８の中で確認され、参照によりまた本明細書にそれぞれ組み込まれる公表文献に記載の合成方法により得ることができる。アジュバントのいくつかは、商業的に入手することができる。

DSLPアジュバントは、当該技術分野で知られている合成方法により得ることができ、例えば、参照により本明細書に組み込まれる特許文献８に記載の合成方法、並びに、特許文献８の中で確認され、参照によりまた本明細書にそれぞれ組み込まれる公表文献に記載の合成方法により得ることができる。化学的に合成されたDSLPアジュバント、例えば式（II）のアジュバントは、実質的に均質な形態で調製する〜〜ことができ、これは、含まれるDSLP分子、例えば、式（II）の化合物について、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも96%、97%、98%もしくは99%が純粋である調製物を意味する。得られるアジュバント製剤の純度の決定は、適切な分析化学の方法論に精通した者により、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、質量分析、および/または核磁気共鳴分析などで、容易に実施され得る。天然物から得られたDSLPアジュバントは、通常、化学的に純粋な形態に作るには容易ではないため、合成的に調製されたアジュバントが、本明細書に記載の組成物および方法での使用に好ましいアジュバントである。前述のように、アジュバントのいくつかは、商業的に入手することができる。そのようなDSLPアジュバントの１つは、アヴァンティ・ポーラ・リピッド（アラバマ州アラバスター）のカタログで確認される製品番号699800であり、以下、E1をE10と組み合わせて参照。

様々な実施形態において、アジュバントは式（II）の化学構造を有するが、部位A1、A2、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、これら部位に対して予め与えられた選択肢のサブセットから選択され、これらのサブセットはE1、E2、その他により以下に特定される。
E1：A1はリン酸またはリン酸塩であり、A2は水素である。
E2：R1、R3、R5、およびR6はC3〜C21アルキルであり；R2およびR4はC5〜C23炭化水素である。
E3：R1、R3、R5およびR6は、C5〜C17アルキルであり；R2およびR4はC7〜C19炭化水素である。
E4：R1、R3、R5およびR6は、C7〜C15アルキルであり；R2およびR4は、C9〜C17炭化水素である。
E5：R1、R3、R5およびR6は、C9〜C13アルキルであり；R2およびR4はC11〜C15炭化水素である。
E6：R1、R3、R5およびR6は、C9〜C15アルキルであり；R2およびR4は、C11〜C17炭化水素である。
E7：R1、R3、R5およびR6は、C7〜C13アルキルであり；R2およびR4は、C9〜C15炭化水素である。
E8：R1、R3、R5およびR6は、C11〜C20アルキルであり；R2およびR4は、C12〜C20炭化水素である。
E9：R1、R3、R5およびR6は、C11アルキルであり；R2およびR4はC13炭化水素である。
E10：R1、R3、R5およびR6はウンデシルあり、R2およびR4はトリデシルである。

特定の実施形態において、E2〜E10のそれぞれは実施例E1と組み合わされ、および/またはE2〜E9の炭化水素基はアルキル基であり、好ましくは直鎖アルキル基である。

GLAアジュバント用の水性製剤（AF）および安定したエマルジョン製剤（SE）などの製剤を提供する特許文献５、ここで、これら製剤は、どの式（I）のアジュバントでも使用され得る。
（他のアジュバントとの併用）

アジュバントは、追加のコアジュバントおよび1つ以上の抗原と併用されてもよい。例えば、コアジュバントは、TLR4アゴニスト、またはTLR8アゴニスト、またはTLR9アゴニストとしてなど、その主要な作用機序で選択されてもよい。あるいは、または補足で、コアジュバントは、その担体特性で選択されてもよく；例えば、コアジュバントは、エマルジョン、リポソーム、微粒子、またはミョウバンであってもよい。

免疫応答を引き起こすために当該技術分野で使用されるアジュバントには、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム）などのアルミニウム塩、またはアジュバントを含有する他のアルミニウムが挙げられる。しかし、アジュバント含有アルミニウムは、Th2応答を引き起こす傾向があり、そのためあまり好ましくない。

追加的アジュバントには、南米で発見されたキラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja saponaria Molina）の木の樹皮から単離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンを含有するQS21およびQuilA（例えば、非特許文献２７；特許文献９を参照）、3-DMP、ポリグルタミン酸またはポリリジンなどのポリマーまたはモノマーアミノ酸が挙げられる。その他の適切なアジュバントには、水中油型エマルジョン（例えば、スクアレンまたはピーナッツ油など）が挙げられる（例えば、非特許文献２８を参照）。別の適切なアジュバントは、CpGである（例えば、非特許文献２９；特許文献１０；特許文献１１を参照）。

適切なアジュバントの別のクラスは、水中油型エマルジョン製剤である（本明細書中では、安定な水中油型エマルジョンとも呼ばれる）。そのようなアジュバントは、必要に応じて、他の特定の免疫賦活剤、例えばムラミルペプチド（例えば、N-アセチルムラミル-L-スレオニル-D-イソグルタミン（thr-MDP）、N-アセチル-ノルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミン（nor-MDP）、N-アセチルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミニル-L-アラニン-2-(1'-2'ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシ)-エチルアミン（MTP-PE）、N-アセチルグルクサミニル-N-アセチルムラミル-L-Al-D-イソGlu-L-Ala-ジパルミトキシプロピルアミド（DTP-DPP）テラミド（商標））、またはその他の細菌細胞壁成分などと共に使用することができる。水中油型エマルジョンには、（1）5%スクアレン、0.5%ツイン80、および0.5%スパン85（必要に応じて種々の量のMTP-PEを含む）を含有し、モデル110Yマイクロ流動化装置（マイクロフルイディクス、マサチューセッツ州ニュートン）などのマイクロ流動化装置を使用してサブミクロン粒子に製剤化されたMF59（特許文献１２）；（2）10%スクアラン、0.4%ツイン80、5%プルロニック-ブロックポリマーL121、およびthr-MDPを含有し、サブミクロンエマルジョンにマイクロ流動化された、または、より大きめの粒子サイズのエマルジョンを生成するためにボルテックスされたSAF、並びに、（3）2%スクアレン、0.2%ツイン80、および、モノホスホリルリピドA（MPL）、トレハロースジミコレート（TDM）、および細胞壁骨格（CWS）からなる群からの1つ以上の細菌細胞壁成分、好ましくはMPL+CWS（デトックス（商標））を含有する、Ribiアジュバントシステム（RAS）（リビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）、モンタナ州ハミルトン）が挙げられる。また、上述したように、適切なアジュバントには、スティミュロン（商標）（QS21、アクイラ（Aquila）、マサチューセッツ州ウースター）などのサポニンアジュバント、または、それから生成された、ISCOM（免疫刺激複合体）およびISCOMATRIXなどの粒子が含まれる。他のアジュバントには、完全フロイントアジュバント（CFA）（ヒト以外での使用には適しているが、ヒトでの使用には適さない）および不完全フロイントアジュバント（IFA）が含まれる。他のアジュバントには、インターロイキン（IL-1、IL-2、およびIL-12）、マクロファージコロニー刺激因子（M-CSF）、および腫瘍壊死因子（TNF）などのサイトカインが含まれる。

特定の一実施形態において、アジュバントは、アジュバント特性を有するエマルジョンである。そのようなエマルジョンには、水中油型エマルジョンが挙げられる。フロイント不完全アジュバント（IFA）は、そのようなアジュバントの1つである。別の適切な水中油型エマルジョンはMF-59（商標）アジュバントであり、これはスクアレン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ツイン80（商標）界面活性剤としても知られる）、およびトリオレイン酸ソルビタンを含む。スクアレンは、アマランサス種子、米ぬか、小麦胚芽、およびオリーブを含む植物源（主に植物油）からも入手可能であるが、もともとサメ肝油から得られた天然有機化合物である。他の適切なアジュバントは、モンタナイド（商標）アジュバント（セピック（Seppic）社、ニュージャージー州フェアフィールド）であり、鉱油ベースのアジュバントであるモンタナイド（商標）ISA 50V；モンタナイド（商標）ISA 206；およびモンタナイド（商標）IMS 1312が挙げられる。鉱油はコアジュバント中に存在することができるが、一実施形態において、本明細書に記載の組成物の油成分（複数を含む）は、全て代謝可能な油である。

エマルジョン系もまた、本発明の組成物を製剤化するのに使用され得る。例えば、多くの単相または多相のエマルジョン系が報告されている。水中油型エマルジョンアジュバントそれ自体が、アジュバント組成物として有用であることが示唆されており（特許文献１３）、水中油型エマルジョンと他の活性剤との組み合わせも、ワクチンのアジュバントとして報告されている（特許文献１４；特許文献１５；特許文献１６；特許文献１７）。油中水型エマルジョン（特許文献１８；特許文献１９）、および水中油中水型エマルジョン（特許文献２０；特許文献２１）などの他の油性エマルジョンアジュバントが報告されている。本発明で使用される油性エマルジョンアジュバントは、天然物または合成物であってよく、かつ無〜〜機鉱物または有機物であってもよい。鉱油および有機油の例は、当業者には容易に明らかであろう。

特定の実施形態において、本発明の組成物は、GLAが油相中に取り込まれている水中油型のエマルジョンを含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、GLAが油相中に取り込まれていて、かつ、コアジュバント、TLRアゴニスト、または本明細書に記載のその他のものなどの追加的成分が存在する水中油型のエマルジョンを含む。

任意の水中油型組成物がヒトへの投与に適しているためには、エマルジョン系の油相は、好ましくは代謝可能な油を含む。代謝可能な油という用語の意味は、当該技術分野においてよく知られている。代謝可能とは、「代謝により変換されることが可能であること」と定義することができる（非特許文献３０）。油は、レシピエントに毒性がなく、代謝により変換されることが可能な植物油、魚油、動物油または合成油であってよい。ナッツ（ピーナッツ油など）、種子、および穀物は、植物油の一般的供給源である。合成油も本発明の一部であり、NEOBEE（登録商標）などの市販の油を含むことができる。

例えば、スクアレン（2,6,10,15,19,23-ヘキサメチル-2,6,10,14,18,22-テトラコサヘキサエン）は、不飽和油であり、サメ肝油中に大量に含まれ、少量ではオリーブオイル、小麦胚芽油、米ぬか油、および酵母から得られ、本発明での使用に特に好ましい油である。スクアレンは代謝可能な油であり、事実、コレステロールの生合成における中間体である（非特許文献３１）。特に好ましい油性エマルジョンは、水中油型エマルジョンであり、特に水中スクアレンエマルジョンである。加えて、本発明の最も好ましい油性エマルジョンアジュバントは酸化防止剤を含み、好ましくは、α-トコフェロール油である（ビタミンE、特許文献２２）。特許文献１４および特許文献１７は、スクアレン、α-トコフェロール、およびツイン（登録商標）80をベースとし、必要に応じて免疫賦活剤のQS21および/または3D-MPLと共に製剤化されている（上記で論じている）エマルジョンアジュバントを開示している。特許文献１６は、ステロールの油相への添加による、これらスクアレンエマルジョンの改善を開示している。さらに、トリカプリリン（C₂₇H₅₀0₆）などのトリグリセリドは、エマルジョンを安定化するため油相に添加されてもよい（特許文献１５）。

安定な水中油型エマルジョンに内に見られる油滴のサイズは、光子相関分光法により測定した場合、好ましくは1ミクロン未満であり、実質的に30〜600 nmの範囲であってもよく、好ましくは実質的に直径約30〜500 nmであり、最も好ましくは実質的に直径150〜500 nmであり、とりわけ直径約150 nmである。これに関して、数において80%の油滴が好ましい範囲内にあるべきであり、より好ましくは90%より多くが、そして最も好ましくは、数において95%より多くの油滴が、定義されたサイズの範囲内にある。本発明の油性エマルジョン中に存在する成分の量は、慣例的に、スクアレンなどの油が2〜10%；α-トコフェロールは、存在する場合には2〜10%；およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどの界面活性剤が0.3〜3%の範囲である。好ましくは、油：α-トコフェロール比は1以下であり、これはより安定なエマルジョンを提供する。スパン85はまた、約1%の程度で存在していてもよい。いくつかの場合では、本発明のワクチンがさらに安定剤を含むことが有利であり得る。

水中油型エマルジョンの製造方法は、当業者にはよく知られている。一般的に、本方法は、油相を、PBS／ツイン80（登録商標）溶液などの界面活性剤と混合し、その後ホモジナイザーを用いて均質化することを含む。例えば、混合物を、シリンジに1回、2回またはそれ以上通す方法は、少量の液体を均質化するのに適しているであろう。同様に、マイクロ流動化装置での乳化工程（M110Sマイクロ流動化装置、6バールの最大圧力入力（出力圧約850バール）で2分間、最大で50回のパス（処理）)は、より少量またはより大量のエマルションを製造するのに適応され得る。この適応は、製造物が必要とされる直径の油滴で得られるまでの、得られるエマルジョンの測定を含む日常的な実験により実現することができる。

本明細書に記載の方法の実施において、コアジュバントとして使用され得る免疫増強剤
の例としては：MPL（商標）;MDPおよび誘導体；オリゴヌクレオチド；二本鎖RNA；代替病原体関連分子パターン（PAMPS）；サポニン；小分子免疫増強因子（SMIP）；サイトカイン；およびケモカインが挙げられる。

一実施形態において、コアジュバントは、MPL（商標）アジュバントであり、グラクソスミスクライン社から市販されている（もともとはリビ・イミュノケム・リサーチ社（モンタナ州ハミルトン）により開発された）。例えば、非特許文献２６を参照。MPL（商標）アジュバントに関連し、そして本明細書に記載の組成物および方法において、コアジュバントとして使用されるのに適しているものは、AS02（商標）アジュバントおよびAS04（商標）アジュバントである。AS02（商標）アジュバントは、MPL（商標）アジュバントとQS-21（商標）アジュバント（本明細書の他の箇所で説明されるサポニンアジュバント）の両方を含む、水中油型エマルジョンである。AS04（商標）アジュバントは、MPL（商標）アジュバントとミョウバンを含む。MPL（商標）アジュバントは、サルモネラミネソタR595のリポポリサッカライド（LPS）から、穏やかな酸塩基加水分解でのLPS処理と、その後の修飾LPSの精製により調製される。

別の実施形態において、コアジュバントは、キラヤサポナリア樹種の樹皮由来のもの、または修飾サポニンなどのサポニンである（例えば、特許文献９;特許文献２３；特許文献２４；特許文献２５；および特許文献２６を参照）。アンチゲニクス（Antigenics）社（マサチューセッツ州レキシントン）により販売されている製品QS-21（商標）アジュバントは、式（I）のアジュバントと共に使用され得る、例示的なサポニン含有コアジュバントである。サポニンに関連する代わりのコアジュバントは、アジュバントのISCOM（商標）ファミリーであり、もともとイスコテック（Iscotec）（スウェーデン）により開発され、典型的には、キラヤサポナリア由来サポニンまたは合成類似体、コレステロール、およびリン脂質から形成され、全てがハニカム状構造に形成されている。

さらに別の実施形態において、コアジュバントは、コアジュバントとして機能するサイトカインである（例えば、非特許文献３２；非特許文献３３；および非特許文献３４を参照）。様々な実施形態において、サイトカインは、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）（例えば、非特許文献３５；非特許文献３６；および特許文献２７を参照）；
またはインターフェロン、例えばI型インターフェロン（例えば、インターフェロン-α（IFN-α）もしくはインターフェロンβ（IFN-β））、もしくはII型インターフェロン（例えば、インターフェロン-γ（IFN-γ））（例えば、非特許文献３７；および非特許文献３８を参照）；
インターロイキン、特に、インターロイキン-1α（IL-1α）、インターロイキン-1β（IL-1β）、インターロイキン-2（IL-2）（例えば、非特許文献３９を参照）、インターロイキン-4（IL-4）、インターロイキン-7（IL-7）、インターロイキン-12（IL-12）（例えば、非特許文献４０；および非特許文献４１を参照）、インターロイキン-15（IL-15）、インターロイキン-18（IL-18）を含む；
胎児肝チロシンキナーゼ3リガンド（Flt3L）；
または腫瘍壊死因子α（TNFα）であり得る。式（I）のアジュバントなどのDSLPアジュバントは、ワクチン抗原との配合の前にサイトカインと共に製剤化してもよく、または抗原、DSLPアジュバント（例えば、式（I）のアジュバント）およびサイトカインコアジュバントは、別々に製剤化した後に配合してもよい。

他の特定の実施形態において、アジュバントおよび乱用薬物抗原（複数を含む）／ハプテン結合体は、別々のバイアルに包装されて供給される。適切なラベルは、通常各組成物と同梱され、対象とする治療用途を示す。
（ワクチン）

特定の実施形態において、方法は、効果的な抗体応答を引き起こし、中毒性薬物の効果を阻害するために、ワクチン組成物を十分な回数投与することを含む。一実施形態において、本方法は、ワクチンを被験者に1回、または他の実施形態において、1回以上投与することを含み、特定の実施形態においては、ちょうど2回、または少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4、5、6、7回、またはそれ以上の回数、被験者に投与することを含む。

一態様において、本開示は、GLAおよび中毒〜〜性薬物またはその誘導体（キャリアタンパク質に結合している薬物ハプテンの形態であってもよい）を含有する本開示のワクチンを投与する方法を提供し、乱用薬物に対する免疫応答を誘発して、薬物の作用を阻害し、好ましくは長持ちする抗体を誘導する。特定の実施形態において、本方法は、2投与用量のワクチンを、例えば、約3週間間隔で投与することを含む。前記2投与用量の間の期間は、約3週間〜5週間の範囲とすることができ、または約1ヶ月、約6週間、約2ヶ月、約3ヶ月、約4ヶ月、約5ヶ月、もしくは約6ヶ月であってもよい。

ワクチンは、当該技術分野で知られている、筋肉内、皮下、または皮内注射、または無針注射などの非経口送達経路により投与される。ワクチンは、適切な投与方法用に、好ましくは、筋肉内、皮下または皮内注射、または無針注射用に製剤化することができる。

液体ワクチンは、例えば、以下の1つ以上のものを含んでいてもよい：注射用水、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウムなどの滅菌希釈剤、溶媒または懸濁媒体として働き得る不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の溶媒；抗菌剤；抗酸化剤；キレート剤；緩衝液；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性調整薬剤。液体組成物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチック製の多用量バイアルに封入することができる。生理食塩水の使用が好ましく、かつ注射用医薬組成物は、好ましくは無菌である。

1回当たりのワクチン投与用量中のハプテン結合キャリアタンパク質の量は、典型的なワクチンにおいて、重大で有害な副作用なしに免疫防御応答を誘発する量として選択される。適切な投与用量範囲は、熟練した臨床医により決定され得るが、一般的に0.01〜10 mg／1投与用量であり、0.1〜10 mg／1投与用量であってもよい。一般的に、人は、ワクチンの単回投与後に外来抗原に対する抗体を生産するのに2週間またはそれ以上かかり、一般的に、禁煙を補助する抗ニコチンワクチンなど、中毒性薬物に対するワクチンに望まれる高い持続的な抗体価を誘導するために、数週間にわたって投与される複数回分のワクチン投与用量を必要とする。ELISA、放射免疫測定、表面プラズマ共鳴、およびウェスタンブロッティング法などの当業者によく知られている技術を使用することにより、人の血液中での抗体の産生を観察することができる。

本明細書に記載のGLAを含むワクチンでは、約0.01 ug/kg〜約100 mg/kg体重が、通常、皮内、皮下、筋肉内または静脈内経路、またはその他の経路により投与される。

特定の実施形態において、投薬量は約1 ug/kg〜約1 mg/kgであり、約5 ug/kg〜約200 ug/kgが特に好ましい。投与の回数および頻度が宿主の応答に依存することは、当業者には明らかであろう。治療的使用のための「薬学的に許容される担体」は、製薬分野でよく知られており、例えば、非特許文献４２に記載されている。例えば、生理的pHの滅菌生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水を用いてもよい。防腐剤、安定剤、染料、さらには香料が、医薬組成物中に加えらることもある。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびp-ヒドロキシ安息香酸のエステルを、保存剤として添加してもよい。同文献、1449頁。また、抗酸化剤および懸濁剤を使用してもよい。

ワクチンとして有用な抗原をも含む本発明の組成物の1投与用量中（ここで、投与用量は、それを必要とする被験者に投与される組成物の量である）に使用される、例えばGLAなどのアジュバントの量は、一実施形態において約0.5 μg〜約50 μgであり、別の実施形態においては約1.0 μg〜25 μgであり、そして本発明の様々な他の実施形態において、約1 μg、約 2μg、約2.5 μg、約5 μg、約 7.5 μg、約10 μg、約 15 μg、約20 μgまたは約25 μgであってもよい。特定の実施形態において、ワクチン組成物中のGLAアジュバントの量は、ワクチン1投与用量当たり約2 μg〜約15 μgまたはそれ以上の範囲とすることができる。特定の実施形態において、ワクチン1投与用量当たりのGLAの量は、約2〜5 μg、または約2〜7 μg、または約2〜10 μg、または約3〜5、3〜7または3〜10μgである。投与用量中の組成物の総体積は、典型的には、0.5 mL〜1.0 mLの範囲である。SEなどのエマルジョンが組成物中に存在していてもよく、エマルジョンの油成分（複数を含む）は、様々な実施形態において、組成物の全体積の約0.1%、約0.5%、約1.0%、約1.5%、約2%、約2.5%、約3%、約4%、約5%、約7.5%または約10%を構成する。

ワクチンは、少なくとも1つの生理学的に（もしくは薬学的に）許容されるまたは適切な賦形剤をさらに含んでいてもよい。当業者に知られている、医薬組成物で使用される生理学的または薬学的に適切な賦形剤または担体（すなわち、活性成分の活性を妨げない非毒性物質）はいずれも、本明細書に記載の組成物に用いることができる。例示的な賦形剤には、タンパク質の安定性と完全性を維持する希釈剤および担体が含〜まれる。治療的使用のための賦形剤はよく知られており、例えば、非特許文献４３に記載されており、そして本明細書でより詳細に記載されている。

治療的使用のための「薬学的に許容される担体」は、製薬分野でよく知られており、例えば、非特許文献４２に記載されている。例えば、生理的pHの滅菌生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水を用いてもよい。注射により投与されることを目的とする組成物中において、1つ以上の界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝液、安定剤、酸化防止剤および/または等張剤が含まれていてもよい。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびp-ヒドロキシ安息香酸のエステルを保存剤として添加してもよい。

「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の塩を意味し、そのような化合物と、有機もしくは無機酸（酸付加塩）または有機もしくは無機塩基（塩基付加塩）との組み合わせから生じる。本発明の組成物は、遊離塩基または塩の形態のいずれかで使用することができ、両方の形態が本発明の範囲内であるとみなされる。

ワクチンは、患者への投与を可能にするいずれの形態であってもよい。例えば、組成物は、固体、液体または気体（エアロゾル）の形態であってもよい。典型的な投与経路としては、限定されないが、経口、局所、非経口（例えば、舌下または口腔）、舌下、直腸、膣、および鼻腔内（例えば、スプレーとして）が挙げられる。本明細書で使用する非経口という用語は、イオントフォレーシス（例えば、特許文献２８；特許文献２９；特許文献３０）、ソノフォレーシス（例えば、特許文献３１；特許文献３２；特許文献３３；特許文献３４；特許文献３５；特許文献３６；特許文献３７；特許文献３８）、熱（例えば、特許文献３９；特許文献４０）、受動的経皮（例えば、特許文献４１；特許文献４２；特許文献４３；特許文献４４；特許文献４５；特許文献４６；特許文献４７；特許文献４８；特許文献４９；特許文献５０；特許文献５１）、マイクロニードル（例えば、特許文献５２；特許文献５３；特許文献５４；特許文献５５）投与、およびまた、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内、海綿内、髄腔内、道内（intrameatal）、尿道内注射または注入法を含む。特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物（ワクチンおよび医薬組成物を含む）は、イオントフォレーシス、マイクロキャビテーション、ソノフォレーシスまたはマイクロニードルから選択される技術により皮内投与される。

ワクチンは、その組成物を患者に投与した際に、その中に含まれる活性成分が生物学的に利用可能になるように製剤化される。患者に投与されるワクチンは、1つ以上の投与単位の形態をとり、例えば、バイアルまたは他の容器は、単回または複数回の投与単位を含んでいてもよい。

ワクチンなどの液体医薬組成物は、溶液、懸濁液または他の形態であろうと、以下の担体または賦形剤の1つ以上を含み得る：注射用水、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、または緩衝液などの滅菌希釈剤。中性緩衝食塩水または非特異的血清アルブミンと混合した生理食塩水は、例示的で適切な希釈剤である。ワクチンは、スクアレン、スクアラン、鉱油、モノオレイン酸マンニド、コレステロール、および/または合成モノまたはジグリセリドなどの、溶媒または懸濁媒体として働き得る不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝液または塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性調整薬剤；低分子量（約10残基未満の）ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストリンを含む炭水化物、EDTA、グルタチオンなどのキレート剤、およびその他の安定剤並びに賦形剤を含有してもよい。好ましくは、生成物は、希釈剤として適切な賦形剤溶液（例えば、スクロース）を用いて、凍結乾燥物として製剤化することができる。ワクチンまたはその成分は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチック製の多用量バイアルに封入することができる。

特定の実施形態において、本発明のワクチン組成物は、0.2 um未満の安定な水性懸濁液を含み、さらに、リン脂質、脂肪酸、界面活性剤、洗浄剤、サポニン、フッ素化脂質などからなる群より選択される少なくとも1つの成分を含む。

また、ワクチンまたは医薬組成物中に、アルミニウム塩、油中水型エマルジョン、生分解性油の運搬体、水中油型エマルジョン、生分解性マイクロカプセル、およびリポソームを含むが、これらに限定されない送達運搬体などの他の成分を含有することも望ましい。そのような運搬体に使用される追加的な免疫賦活物質（コアジュバント）の例は、上記にも記載されており、およびN-アセチルムラミル-L-アラニン-D-イソグルタミン（MDP）、グルカン、IL 12、GM CSF、γインターフェロンおよびIL 12を挙げることができる。

当業者に知られている適切な担体はいずれも本発明の医薬組成物に使用されることができるが、担体の種類は、投与方法により、および持続放出が望まれるかどうかにより変化する。皮下注射などの非経口投与については、担体は、好ましくは水、食塩水、アルコール、脂肪、ワックスまたは緩衝液を含む。生分解性マイクロスフェア（例えば、ポリ乳酸ガラクチド）もまた、本発明の医薬組成物の担体として使用することができる。適切な生分解性マイクロスフェアは、例えば、特許文献５６および特許文献５７に開示されている。これに関して、マイクロスフェアは約25ミクロンよりも大きいことが好ましい。

本発明のワクチンは、様々な中毒性薬物の中毒の治療に有用である。本明細書中に記載のワクチンの治療有効量は、中毒性薬物が血液脳関門を通過するのを阻害する薬物-特異的抗体応答を誘発する量であり、それにより、薬物中毒の原因である脳内化学物質の薬剤誘発性変化を低減または排除する。この点で、薬物-キャリア結合体は、天然の薬物分子を認識する抗体の産生を誘発することが重要である。したがって、本発明は、一態様において、本明細書に記載されるGLAのアジュバントとの併用で中毒性薬物ハプテン-キャリア結合体の治療有効量を投与することを含む、そのような治療を必要とする患者の薬物中毒を治療または予防する方法を提供する。一実施形態において、本発明はまた、中毒性薬物ハプテン-キャリア結合体に応答して産生された抗体の治療的有効量を投与することを含む、そのような治療を必要とする患者の薬物中毒を治療する方法を提供する。

一実施形態において、本発明は、禁煙を望む喫煙者の禁煙を補助する方法、または、抗ニコチンワクチンの接種により、もしくは薬物療法を用いた以前の治療により、もしくは自分で禁煙に成功した元喫煙者の喫煙再発を防止する方法、または、そのような治療を必要とする人のニコチン依存を防止する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載の、GLAアジュバントを含むワクチン組成物を、人に投与することを含。

キットは、アジュバント組成物を1投与用量以上、および必要に応じて、中毒性薬物の抗原（複数を含む）／ハプテン／ハプテン-キャリアタンパク質結合体を含有する組成物を1投与用量以上含んでいてもよい。キットは、使用説明書を含んでいてもよい。使用説明書は、典型的には投与方法を記載しており、被験者の適切な状態および適切な投与用量の決定方法、並びに組成物を投与するための適切な投与方法を含む。使用説明書は、治療期間にわたって被験者を観察するための指針を含むことができる。

本明細書で提供されるキットは、本明細書に記載の組成物のそれぞれを被験者に投与するための器具を含むこともできる。当該技術分野で知られている医薬またはワクチンを投与するための様々な器具のいずれも、本明細書で提供されるキットに含めることができる。例示的な器具としては、皮下注射針、静脈注射針、カテーテル、無針注射器、エアロゾライザー、吸入器またはネブライザーもしくはアトマイザーもしくはマイクロスプレー器具、および、点眼器などの液体散布器が挙げられるが、これらに限定されない。典型的には、組成物を投与するための器具は、キットの活性成分と相性が良い。例えば、高圧注入器などの無針注射器は、高圧注入により損傷を受けないベクター粒子、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドとともにキットに含めることができるが、高圧注入により損傷を受ける可能性があるベクター粒子、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを〜〜含む無針注射器は、通常キットに含まれない。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形（「a」、「an」および「the」）は、文脈が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「抗原（an antigen）」への言及は、複数のそのような抗原を含み、そして「細胞（a cell）」または「該細胞（the cell）」への言及は、1つ以上の細胞および当業者に知られているその等価物などへの言及を含む（例えば、複数のセル（plurality of cells））。同様に、「化合物（a compound）」または「組成物（a composition）」への言及は、複数のそのような化合物または組成物を含み、文脈が明確に指示しない限り、それぞれ1つ以上の化合物または組成物を意味する。方法の工程が記載または特許請求されている場合、および工程が特定の順序で発生するものとして説明されている場合、第二工程「の前に」起こる（または実行される）最初の工程という記述は、第二工程が最初の工程の「後に」起こる（または実行される）という記述に書き換えられても、同じ意味を持つ。数または数値範囲に言及する場合の用語「約」は、言及されている数または数値範囲が、実験的なばらつきの範囲内（または統計的実験誤差の範囲内）での近似であることを意味し、したがって、その数または数値範囲は、記載の数または数値範囲の1%〜15%の間で変化し得る。用語「含む」（例えば、「含有する」または「有する」または「挙げる」などの関連用語）は、例えば、他の特定の実施形態において、物質の組成物、組成物、方法、またはプロセスなどの、本明細書に記載のある実施形態が、記載の特徴「から本質的になる」または「から本質的になる」ことを排除するものではない。
[実施例]

GLA-SEと共に製剤化された抗ニコチンワクチン組成物は、ミョウバンと共に製剤化されたワクチンと比較して、向上したアジュバント活性を示す。

この実験では、ワクチンの免疫原性および抗原投与用量の節約への、GLA-SEの影響を評価した。図１Ａに概説されるように、C57／BLマウス（5／グループ）に、プライム-ブースト筋肉内（IM）ワクチン接種（100 ul）をした。抗体応答を測定した。GLA-SEアジュバントと共に製剤化したKLH^nicの2投与用量を、KLH-Nic単独またはミョウバンと共に製剤化したKLH-Nicと比較した。KLHをニコチン（22分子または100分子／KLHモノマー）と結合させた。5 μgのGLA-SEまたはミョウバンを、2.5 μgまたは10 μgの結合体のアジュバントとして、ニコチンに対する抗体をELISA法により測定した。

抗ニコチン抗体を定量ELISA法により測定し、〜〜キャリアタンパク質に対する抗体の検出を避けるために、コー〜〜ティング抗原としてオボアルブミンニコチン（Ova^nic）結合体を使用した（非特許文献４４）。エンドポイント力価測定を、GraphPad（サンディエゴ）のWindows用Prism 4.00版を用いて行った。ダネット（Dunnett）事後検定での二要因分散分析を行った。

図１Ｂおよび図１Ｃに示すように、GLA-SEは、KLH結合ニコチン抗原により生成さる抗ニコチン免疫応答を大幅に向上させた。

GLA-SEと共に製剤化された、新規キャリアタンパク質を有する抗ニコチンワクチン組成物は、ミョウバンと共に製剤化されたワクチンと比較して、向上した活性を示す。

新規三量体コイルドコイルペプチドキャリア（TCC）を合成し（非特許文献４５を参照）、ピリジン環の6位にヘキサン酸を有するニコチンハプテンを結合させるために使用した。図２は、TCCと4つの異なるニコチン-ハプテンキャリアとの相対的サイズおよびリジン含有量を比較する；KLHは、一般的に使用されるハプテンキャリアタンパク質であり；エキソトキシンAは、2つの第III相臨床試験に失敗したNicVax（商標）のキャリアである（非特許文献４６）；破傷風トキソイド（Niccine（商標））は、第II相喫煙再発試験に失敗した（非特許文献４７）；およびジフテリア毒素タンパク質CRM197は、現在第I相試験でテストされている。これら臨床段階のキャリアに結合するハプテンの数は、平均すると、1分子当たり10〜30個のハプテンとされている（非特許文献４８）。

TCCnic免疫原性：C57BL/6マウスを使用して抗体応答の特性を明らかにするために、2つのH2D^b拘束性ヘルパーT細胞エピトープを含むTCCを合成した；13 AA PADRE配列（非特許文献４９）、その後にH5N1血球凝集素に存在する11 AA配列が続く（非特許文献５０）。TCCを、ピリジン環の6位にヘキサン酸を有するニコチン誘導体（NIC-6-HA）と結合させると、最終構築物は、平均して三量体当たり12個のハプテン（TCCnic-12）を有する。対照として、2つの結合KLHキャリアも調製した。1つめのKLHnic-22は、モノマー当たり平均22個のニコチンを含み、多くの前臨床および臨床ワクチンと同様のハプテン負荷量に近い（上記非特許文献４８を参照）。2つめのKLHnic-100は、ハプテン密度の増加が与えるワクチンの免疫原性への影響を試験するのに使用したほとんどのニコチンワクチンと比較して、非常に多く結合したキャリアであった。別々に、アジュバントがワクチンの機能に果たす役割を測定するために、これらキャリアを、ミョウバンまたはGLA-SEのいずれかと共に製剤化した。

C57BL/6マウス（5/grp）を、3回免疫化し（d0、d14、およびd131）、血清を、抗ニコチン抗体価について、ELISA法によりアッセイした。得られた抗体応答の動態を、図３に示す。示されているように、3つの全てのキャリアは抗体価を刺激し、それは実験の経過を通して最大値付近で推移した。ミョウバンまたはGLA-SEのいずれかをアジュバントとしたTCCnic-12により誘導された力価は、実験の過程で、アジュバントを添加したKLHnic-22よりもわずかに高く現れ（図３Ａおよび図３Ｂ）、一方、TCCnic-12およびKLHnic100の活性はほとんど重なっている（図３Ｃ）。図４は、最後のブースト（追加免疫）接種から3週間後に収集した、160日目のエンドポイント力価を示す。

アジュバントに関しては、TCCnic-12 + GLA-SEで免疫化したマウスは、TCCnic-12単独よりも〜100倍良く、TCCnic-12 + ミョウバンよりも〜10倍大きく、抗体応答を刺激した。GLA-SEは、KLHnic-22で免疫化したマウスの応答率を向上するように見られるが、平均力価の差は統計的に有意ではなかった。ハプテンキャリアに関しては、TCCnic-12 + GLA-SEは、KLHnic-22 + GLA-SEよりも〜10倍以上の抗体を刺激し、一方、TCCnic-12およびKLHnic-100は、GLA-SEの存在下では同等のように見られた。また、KLHnic-100 + GLA-SEは、一貫して実験を通じて、KLHnic-22 + GLA-SEよりも高い抗体価を誘導した。まとめると、これらの結果は、TCCハプテンキャリアは、マウスの抗ニコチン抗体応答を効率的に刺激することができることを示している。それらはまた、ハプテン密度が、結合ワクチンの免疫原性にとって重要な変数であるという以前の研究を確証する。これらの研究はさらに、GLA-SEアジュバントが、抗ニコチン抗体応答を向上することを確証する。

後続の実験では、TCCnic-12 +/- GLA-SEの投与用量反応を測定し、最少の抗原投与用量（100 ng）で最大の抗体価を誘導したと確認された（図５）。この結果は、ハプテンキャリアに応答できるリンパ球の十分な補充は、結合によりプライミングされること、および、アジュバントの存在は、クローン増殖および応答の下流のエフェクター相を増強させることを示唆している。別の実験では、TCCが、従来のニコチンワクチンと類似の抗キャリア抗体を誘導したかどうかを試験した。この実験では、マウスを、平均して三量体当たり2、12、または42個のハプテンを結合させたTCCと共に、対照のKLHnic-22およびKLHnic-100で免疫した。図６に示されるように、抗TCC抗体価の誘導は、抗KHL抗体価と比べて、ハプテン密度の増加に伴って著しく減少した。この結果は、抗キャリア応答の制御におけるハプテン密度の重要性を示し、そして、TCCが、現在のニコチンキャリアと比べて、中和抗体を誘発する傾向が低い可能性があることを示唆している。

TCCnic機能性抗体応答：抗体価に加えて、TCCnic-12で誘導された抗体の質を検査した。図７に示すように、それらはニコチンに非常に特異的であり、ニコチン分解経路で最も豊富な代謝物である生理的濃度のコチニン、および内因性ニコチン受容体リガンドであるアセチルコリンには結合しなかった。同様の結果が、KLHnic-22およびKLHnic-100で得られ、いずれのアジュバントでも特異性の差は見られなかった。これら抗体のアフィニティーを測定した（図８）。Kd値の相対的な差により示されるように、非アジュバント化TCCnic-12は、
KLHnic-22（203 nM）よりもはるかに高いアフィニティー（4.2 nM）を有する抗体を誘導した。ミョウバンの添加は、TCCnic-12応答に明らかな影響を与えなかったが、KLHnic-22抗体のアフィニティーを向上させた（9.4 nM）。GLA-SEの存在下では、TCCnic-12で免疫化したマウスにおける抗体のアフィニティーはさらに増加し（0.7 nM）、KLHnic-22 + GLA-SE応答（11.8 nM）よりも1桁大きかった。KLHnic-100 + GLA-SEで免疫化したマウスにおいて誘導されたニコチン抗体のアフィニティー（1.0 nM）も、KLHnic-22 + GLA-SEよりも大きく、そしてTCCnic-12 + GLA-SEと同等であった。

抗体機能を測定するために、ニコチン結合能力を、免疫化マウスの血清内で決定した。図９に示すように、TCCnic-12 + GLA-SEおよびKLHnic-100 + GLA-SEは、最大の結合能力を誘発し、予想されるように、それぞれの抗体価（図３）およびアフィニティー（図８）と相関性があった。第二の抗体機能の測定として、免疫化マウスに、紙巻きたばこ3本分（0.05 mg/kg）に相当する投与用量のニコチンを注射し、5分後に、質量分析を使用して、脳組織に蓄積したニコチンの量（図１0）を定量化した。ここでも、最も能力の高いワクチンはTCCnic-12 + GLA-SEおよびKLHnic100 + GLA-SEであり、ニコチンの脳への侵入は、PBSの対照動物と比べて、それぞれ91%および95%阻害された。他の構築物の阻害の程度は、TCCnic-12 +ミョウバンで76%、KLHnic-22 + GLA-SEで62%、およびKLHnic-22 +ミョウバンで47%であった。TCCnic-12は、ミョウバンまたはGLA-SEのいずれかをアジュバントとした場合、KLHnic-22よりも優れた応答を刺激し、そしてKLHnic-100 + GLA-SEは、KLHnic-22 + GLA-SEよりも優れていた。まとめると、これらの結果は、TCCnic-12は、マウスにおいて機能的抗体価を誘導するのに有効なハプテンキャリアであることを示している。これらの知見はまた、ハプテン密度およびアジュバントの質が、ニコチンワクチンの機能の調節において重要な役割を果たすことを示している。

ワクチンアジュバントは、抗原提示細胞への抗原取り込みを促進することにより、並びに、注射部位への白血球動員を制御する先天性経路を刺激することにより、適応TおよびB細胞応答の大きさと質を制御する（非特許文献５１）。現在までに、臨床のニコチンワクチン研究に使用される唯一のアジュバントはミョウバンであったが、多くの研究は、APC上の先天性のパターン認識受容体を標的とするアジュバントと比較して、ミョウバンが相対的に弱い可能性があることを示唆している（非特許文献５２）。細菌LPS、TLR-4に結合する受容体は、CD4 T細胞の胚中心形成の調節、アフィニティー成熟、および長期生存抗体分泌形質細胞の産生において重要な役割を果たしており（非特許文献５３；非特許文献５４；非特許文献５５）、以前に示されたように、合成TLR-4リガンド、GLAと共に製剤化されたアジュバントは、ヘテロ亜型H5N1インフルエンザウイルスに対する、防御T細胞媒介の抗体応答の強力な刺激因子である（非特許文献５６）。ここでは、ミョウバンと比較して、GLA-SEが、高い抗体価の調節、抗体のアフィニティーの向上、および機能的阻害活性の有意な増加に重要な役割を果たしたことが示されている。GLA媒介抗体応答は、KLHnic-22よりもTCCnic-12でより大きくかつより安定であるという観察結果は、TCC内の2つの優性H2D^b拘束性ヘルパーT細胞エピトープの配置に起因し得る。規定のMHCクラスIIエピトープを有するキャリアを合成するこの能力は、個々の抗体応答を向上させ、それと同時に、診療所で見られる血清抗体価の大きな変動を減少させ得る、個人に合わせたワクチンへの機会をもたらす。

要約すると、この実施例は、人の抗中毒ワクチンの性能を大きく向上させ得る、開発されてきた2つの重要な手段について説明している。1つめは、従来のキャリアに比べて、優れた抗体応答を誘導する新規ハプテンキャリアである。様々な合成ナノ粒子の母核および自己組織化合成運搬体が報告されているが（非特許文献５７；非特許文献５８；非特許文献５９）、いずれも、TCCのように設計が単純なものではなく、同じように活性があることが示されているわけではない。2つめの手段は、アジュバントGLA-SEを使用することであり、これは、抗ニコチン抗体価、アフィニティー、および機能の増強において、ミョウバンよりもはるかに優れていた。これは、TLR9リガンドCpGのミョウバンへの追加が、マウスおよびカニクイザルの両方で、機能的ニコチン抗体応答を有意に改善したことを示す以前の研究と一致している（非特許文献６０；非特許文献６１）。

上述の様々な実施形態は、さらなる実施形態を提供するために組み合わせることができる。全ての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、並びに本明細書で言及されているおよび/または出願データシートに記載されている非特許刊行物は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。実施形態の態様を、必要ならば、種々の特許、出願、および刊行物の概念を使用してさらに別の実施形態を提供するように変更することができる。

上述の詳細な説明に照らして、これらのおよびその他の変更を、実施形態に対して行うことができる。一般的に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を、明細書および請求項に開示された特定の実施形態に限定するように解釈されるべきではないが、このような特許請求の範囲が与られている等価物の全範囲と共に、全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示により限定されるものではない。

Claims

以下を含む、ワクチン組成物：
（a）キャリアタンパク質に結合する、1つ以上の中毒薬物ハプテン；
（b）薬学的に許容される担体または賦形剤；および
（c）以下の式の脂質アジュバント：
式中：
R¹、R³、R⁵およびR⁶はC₁₁〜C₂₀アルキルであり；並びに
R²およびR⁴はC₁₂〜C₂₀アルキルである。
R¹、R³、R⁵およびR⁶がウンデシルであり、R²およびR⁴がトリデシルである、請求項エラー！参照元が見つかりません。に記載のワクチン組成物。
該組成物が水性製剤である、請求項エラー！参照元が見つかりません。、に記載のワクチン組成物。
該組成物が水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、または微粒子の形態である、請求項エラー！参照元が見つかりません。、に記載のワクチン組成物。
該中毒薬物ハプテンが、アンフェタミン類、メタンフェタミン、コカイン、カフェイン、ニコチン、バルビツレート類、グルテチミド、ベンゾジアゼピン類、ゾピクロン、メタカロン、キナゾリノン、およびオピエートまたはオピオイド鎮痛薬からなる群より選択される、請求項エラー！参照元が見つかりません。、に記載のワクチン組成物。
該ベンゾジアゼピンが、ジアゼパム、アルプラゾラム、フルニトラゼパム、トリアゾラム、テマゼパム、およびニメタゼパムからなる群より選択される、請求項５に記載のワクチン組成物。
該オピエートまたはオピオイド鎮痛薬が、ジアセチルモルヒネ、フルニトラゼパム、モルヒネ、コデイン、アヘン、ヘロイン、オキシコドン、ブプレノルフィン、ヒドロモルフォン、フェンタニル、メペリジンおよびメタドンからなる群より選択される、請求項５に記載のワクチン組成物。
中毒性薬物に対する免疫応答を誘導する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１に記載のワクチンを投与することを含む方法。
薬物中毒を治療するための方法であって、それを必要とする患者に、請求項１に記載のワクチンの治療有効量を投与することを含む方法。
薬物中毒の、断薬率を高めるまたは再発率を減少させる、もしくはその両方のための方法であって、それを必要とする患者に、請求項１に記載のワクチンの治療有効量を投与することを含む方法。
ワクチン1投与用量当たり約2.5 μg以上のGLAを含む、請求項１に記載のワクチン。
ワクチン1投与用量当たり約2 μg〜約10 μgのGLAを含む、請求項１に記載のワクチン。
ワクチン1投与用量あたり約3 μg〜約8 μgのGLAを含む、請求項１に記載のワクチン。
ワクチン1投与用量あたり約4 μg〜約6 μgのGLAを含む、請求項１に記載のワクチン。
ワクチン1投与用量あたり約5 μgのGLAを含む、請求項１に記載のワクチン。