CN105517555A - 针对药物成瘾的疫苗组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明一般涉及针对药物成瘾的疫苗。具体而言，本公开内容提供用于显著改善针对成瘾性药物半抗原产生的免疫应答的佐剂。

Description

针对药物成瘾的疫苗组合物
政府资助声明
本发明是在美国政府支持下由国家药物滥用研究所(NationalInstitutesofDrugAbuse)授予的基金号5R43DA033845资助完成。政府对本发明拥有某些权利。
技术领域
本发明一般涉及针对药物成瘾的疫苗。具体而言，本公开内容提供用于显著改善针对药物成瘾的抗原产生的免疫应答的佐剂。
背景
成瘾性药物滥用紊乱伴随着多种特定且公认的后遗症，其同时具有社会和经济影响。这些包括死亡、疾病、暴力、犯罪、失业、生产率下降、关系与家庭破裂，以及HIV和其它性传播疾病的扩散。1992年，美国社会药物滥用(排除烟草)的经济成本估计为980亿美元，这是能够获得可靠数据的最后一年("美国1992年酒精与药物滥用的经济成本"，国家药物滥用研究所)。这些成本包括犯罪(591亿美元)、过早死亡(146亿美元)、生产力降低/工伤(142亿美元)、福利(104亿美元)、卫生保健(55亿美元)和机动车事故。这些成本主要由政府(46％)、药物滥用者及其家庭(44％)承担。公认的是，药物滥用仍然是一严重社会问题。1992年研究后的三年，在1995年，NIDA估计的药物滥用的社会成本是1100亿美元。
滥用的药物本身可对使用者具有有害影响。然而，认为这些药物的成瘾性既是与此类药物的应用相关联的问题的核心，又是无力治疗成瘾个体并减少药物成瘾在社会上的流行的根基。
世界上最广泛应用的成瘾性药物是烟草。估计世界范围内有12亿吸烟者，包括美国的4600万和欧洲的1.7亿。烟草成瘾是癌症和心脏病的最大单一诱因，导致约5百万人死亡/年(Jha，P.，《通过死亡计数来挽救生命》世界卫生组织公告(Savelivesbycountingthedead.BulletinoftheWorldHealthOrganization),2010.88:第161-240页)。与吸烟相关的对社会和医疗系统的健康风险和经济负担是清楚且不可否认的。每年，在美国，有近乎一半的吸烟者试图戒烟，但因为尼古丁的高成瘾性，只有少于5％的人成功(吸烟的后果：卫生部长的报告，美国，2004；可获自：surgeongeneral.gov/library/smokingconsequences/；Fiore,M.C.等.“烟草应用与依赖的治疗”(TreatingTobaccoUseandDependence).《临床医师快速参考指南2000》(QuickReferenceGuideforClinicians2000)；可获自：surgeongeneral.gov/tobacco/tobaqrg.htm.)。对于戒烟的协助方法包括支持性辅导和尼古丁替代法，而这些方法不会改变依赖性，并且，尼古丁替代法开始后12个月的评价显示在戒烟方面的<10％的惨淡成功率(Stead，L.F.等，“用于戒烟的尼古丁替代疗法”(Nicotinereplacementtherapyforsmokingcessation).系统性综述的实证医学资料库(CochraneDatabaseofSystematicReviews)，2008(1):第CD000146页)。在中和尼古丁在体内的生物学效应，以协助吸烟者克服其成瘾的方面存在明显的未满足的医学需求。
原则上，疫苗可诱导能够结合并防止尼古丁穿过血脑屏障的高亲和性抗体，导致短路的尼古丁精神影响(Kinsey，B.M.等，“用于治疗物质滥用的抗药疫苗”(Anti-drugvaccinestotreatsubstanceabuse).ImmunologyandCellBiology,2009.87(4):第309-14页；LeSage,M.G.等,“免疫学方法治疗烟草依赖性的现状：疫苗和烟碱特异性抗体”(Currentstatusofimmunologicapproachestotreatingtobaccodependence:vaccinesandnicotine-specificantibodies).TheAAPSJournal,2006.8(1):第E65-75页；Moreno,A.Y.和K.D.Janda,“免疫药物治疗：作为药物滥用和依赖性治疗的疫苗方案”(Immunopharmacotherapy:vaccinationstrategiesasatreatmentfordrugabuseanddependence).Pharmacology,Biochemistry,andBehavior,2009.92(2):第199-205页；Polosa,R.和N.L.Benowitz,“尼古丁成瘾治疗：现有治疗选择和途径开发”(Treatmentofnicotineaddiction:presenttherapeuticoptionsandpipelinedevelopments).TrendsinPharmacologicalSciences,2011.32(5):第281-9页)。其产生的副作用少于当前的抗吸烟药物，并且可安全地与其它药物治疗联合。已在人中测试了抗尼古丁疫苗(Cerny，E.H.和T.Cerny,抗尼古丁疫苗(Vaccinesagainstnicotine).HumanVaccines,2009.5(4):第200-5页；Escobar-Chavez,J.J.等,“靶向尼古丁成瘾：治疗性疫苗的可能性”(Targetingnicotineaddiction:thepossibilityofatherapeuticvaccine.)DrugDesign,DevelopmentandTherapy,2011.5:第211-24页)。总体上，均呈现安全，但其性能就在人中诱导的高度多变的抗体应答而言较弱，需要在数月期间重复注射(5-7x)大量的抗原(100-500ug)，并且存在抗体效价随时间降低的现实(Cornuz，J.等，“用于戒烟的尼古丁疫苗：一项随机控制试验”(Avaccineagainstnicotineforsmokingcessation:arandomizedcontrolledtrial.)PloSOne,2008.3(6):第e2547页；Hatsukami,D.K.等,“新型尼古丁免疫疗法的免疫原性和戒烟的结果”(Immunogenicityandsmoking-cessationoutcomesforanovelnicotineimmunotherapeutic).ClinicalPharmacologyandtherapeutics,2011.89(3):第392-9页；Hatsukami,D.K.等,“尼古丁偶联物疫苗对现有吸烟者的安全性和免疫原性”(Safetyandimmunogenicityofanicotineconjugatevaccineincurrentsmokers).ClinicalPharmacologyandtherapeutics,2005.78(5):第456-67页；Maurer,P.等,“用于尼古丁依赖性的治疗性疫苗：临床前功效，以及I期安全性和免疫原性”(Atherapeuticvaccinefornicotinedependence:preclinicalefficacy,andPhaseIsafetyandimmunogenicity).EuropeanJournalofImmunology,2005.35(7):第2031-40页)。不过，观察到功效的趋势。具有最高抗尼古丁Ab应答(前30％)的NicVAX(偶联至细菌外蛋白A的尼古丁)的接受者比安慰剂接受者更有可能(24.6％对比12.0％)达到8周的连续禁戒(Hatsukami,D.K.等,“新型尼古丁免疫治疗的免疫原性和戒烟结果”(Immunogenicityandsmoking-cessationoutcomesforanovelnicotineimmunotherapeutic).ClinicalPharmacologyandtherapeutics,2011.89(3):第392-9页)。不幸的是，NicVax在最近的III期研究中无法实现其原来的功效(“纳比生物制药公司宣布首个期临床试验的结果(NabiBiopharmaceuticalsAnnouncesResultsofFirstPhaseIIIClinicalTrial)”，GlobeNewswire，2011年7月18日；和www.nabi.com)，从而其开发目前尚存疑问。对于与成瘾抗争的人们来说，针对滥用药物的疫苗是一个好想法，但持久长期的抗体应答的实现仍需要疫苗技术的显著改善。本发明提供了这一优势以及其它优势。
发明内容
本发明的一个方面提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含：与载体蛋白偶联的一种或多种成瘾药物半抗原；药学上可接受的载体或赋形剂，和下式的脂质佐剂：
其中：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烷基。在某些实施方式中，R1、R3、R5和R6是十一烷基，而R2和R4是十三烷基。在某些实施方式中，所述组合物是水性制剂。在其它实施方式中，所述组合物是如下形式：水包油乳液、油包水乳液或微颗粒。在本文所述的疫苗组合物的另一个实施方式中，所述成瘾药物半抗原选自下组：安非他命、脱氧麻黄碱、可卡因、咖啡因、尼古丁、巴比妥类、苯乙哌啶酮、苯并二氮佐匹克隆、甲喹酮、喹唑啉酮，和鸦片或类鸦片镇痛剂。在一个相关实施方式中，苯并二氮选自下组：地西泮、阿普唑仑、氟硝西泮、三唑仑、替马西泮，和硝甲西泮。在某些实施方式中，鸦片或类鸦片镇痛剂选自下组：二乙酰吗啡、氟硝西泮、吗啡、可待因、阿片、海洛因、氧可酮、丁丙诺啡、氢化吗啡酮、芬太尼、哌替啶和美沙酮。
在本发明的一个实施方式中，本文所述的疫苗组合物可包含约2.5μg或更多GLA/剂量疫苗。在其他实施方式中，所述疫苗包含约2μg至约10μgGLA/剂量疫苗，或约3μg至约8μgGLA/剂量疫苗，或约4μg至约6μgGLA/剂量疫苗，或可包含约5μgGLA/剂量疫苗。
在本发明的另一个方面提供一种用于针对成瘾性药物诱导免疫应答的方法，所述方法包括：给予有此需要的患者本文所述的疫苗组合物，例如，包含如下物质的疫苗组合物：与载体蛋白偶联的一种或多种成瘾药物半抗原；药学上可接受的载体或赋形剂，和下式的脂质佐剂：
其中：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烷基。
在本发明的另一个方面提供一种治疗药物成瘾的方法，所述方法包括：给予有此需要的患者治疗有效量的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含：与载体蛋白偶联的一种或多种成瘾药物半抗原；药学上可接受的载体或赋形剂，和下式的脂质佐剂：
其中：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烷基。
本发明的另一个方面提供一种用于针对药物成瘾提高戒瘾率或降低复发率或同时实现两者的方法，所述方法包括：给予有此需要的患者治疗有效量的本文所述的疫苗组合物，例如，本文所述的疫苗，例如，包含如下物质的疫苗组合物：与载体蛋白偶联的一种或多种成瘾药物半抗原；药学上可接受的载体或赋形剂，和下式的脂质佐剂：
其中：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烷基。
附图的简要说明
图1A显示用于测试，相对于明矾尼古丁疫苗制剂，KLH-尼古丁+GLA-SE刺激优越的持久抗体应答的能力的初免加强疫苗接种方案。底部的箭头指示在各时间点进行的试验。空心箭头：B细胞试验-抗体效价、同种型、亲和力(第0天、第21天、第35天)。黑色箭头：T细胞试验–CD4数量和表型(第0天、第10天、第28天)。图1B和图1C显示抗尼古丁抗体在疫苗接种了KLH-偶联的尼古丁的小鼠中的终点效价。相对于疫苗接种了与明矾配制的KLH-尼古丁的小鼠，疫苗接种了用GLA-SE配制的KLH-尼古丁的小鼠显示终点抗尼古丁抗体效价的增加。
图2.(A)包括TCC16的数种半抗原载体(见文字)中的氨基酸数量。柱上方报告各载体中的半抗原偶联可用的赖氨酸数量。(B)各载体蛋白中赖氨酸的百分比。
图3.免疫的小鼠中的抗尼古丁抗体应答。C57BL/6小鼠(5只/组)用PBS或2.5ug的指示的偶联半抗原载体和佐剂注射(第0天、第14天、第131天)，并且通过ELISA分析血清的抗尼古丁Ab效价。组间比较通过非成对双尾t检验进行；*p<0.004；**p<0.002。
图4.第160天抗尼古丁Ab效价。C57BL/6小鼠(5只/组)用PBS或2.5ug的指示的偶联的半抗原载体和佐剂免疫(第0天、第14天、第146天)，并且通过ELISA分析血清。组间比较通过非成对双尾t检验进行；*p<0.003；**p<0.0001。
图5.C57BL/6小鼠(5只/组)用指示剂量的TCCnic-12在GLA-SE不存在(A)和存在(B)下免疫，并且在第35天通过ELISA分析血清的抗尼古丁Ab。
图6.免疫的小鼠中的抗载体Ab应答。C57BL/6小鼠(5只/组)用指示的载体在GLA-SE的存在下注射(第0天、第14天)。第28天，分析来自各组的血清的结合相应的未偶联的半抗原载体的Ab。
图7.结合至从TCCnic-12免疫的小鼠收集的抗血清的尼古丁的特异性通过针对尼古丁、可铁宁和乙酰胆碱的竞争性ELISA测定。可铁宁的IC50值比尼古丁高1000倍，并且因缺乏抑制而无法对乙酰胆碱计算。
图8.TCCnic-12诱导的抗尼古丁Ab的相对亲和力。C57BL/6小鼠(5只/组)用PBS或2.5ug的指示的偶联半抗原载体和佐剂注射(第0天、第14天、第146天)。通过竞争性ELISA确定几何平均Kd值。
图9.血清尼古丁结合能力通过测量平衡时尼古丁的结合与游离浓度来确定。采用Kd值(图8)来计算总抗体浓度，根据如下质量作用定律方程：Kd＝[Nic][IgG]/[Nic-IgG]。组间比较通过非成对双尾t检验进行；*p<0.04；**p<0.01；***p<0001。
图10.小鼠中的抗尼古丁Ab功能。C57BL/6小鼠(5只/组)用PBS或2.5ug的指示的偶联半抗原载体和佐剂注射(第0天、第14天、第146天)。小鼠(5只/组)在第160天用等同于3支香烟的酒石酸尼古丁剂量(1.2ug)注射。五分钟后，处死小鼠，切除组织并通过质谱检测脑(A)；和血清(B)中的尼古丁的量；*p<0.05；**p<0.007；***p<0.0003。
发明详述
本发明一般涉及改善的针对滥用药物的疫苗。本文所述的疫苗提供用于疫苗的针对药物的优越的抗体应答，以在药物滥用治疗工作中提高戒瘾率并降低复发率。
设想用于本文所述的疫苗的成瘾性药物包括但不限于，包含或由如下组分组成的成瘾性药物：安非他命、脱氧麻黄碱、可卡因、咖啡因、尼古丁、巴比妥酸盐苯乙哌啶酮、苯并二氮(例如，地西泮、阿普唑仑、氟硝西泮、三唑仑、替马西泮、硝甲西泮)、佐匹克隆、甲喹酮、喹唑啉酮、鸦片和类鸦片镇痛剂(二乙酰吗啡、氟硝西泮、吗啡、可待因、阿片、海洛因、氧可酮、丁丙诺啡、氢化吗啡酮、芬太尼、哌替啶和美沙酮)。在某些实施方式中，用于本文所述的疫苗的成瘾性药物是成瘾性药物的衍生物。在另一个实施方式中，按照本文描述所用的成瘾性药物不是尼古丁衍生物，例如，US20110300174中描述的那些。在某些实施方式中，成瘾性药物可经修饰，从而增加免疫原性，例如US20120114677中所述的那些。
本发明中所用术语"半抗原"指的是一种低分子量的有机化合物，其自己无法引发免疫应答，但将在一旦连接至载体分子之后引发免疫应答。在某些实施方式中，本文所述的疫苗中所用的滥用药物是偶联至载体分子的半抗原。设想用于本文中的载体分子包括任何合适的免疫原性的蛋白质或多肽。本文所用的载体蛋白一般包含含有至少一种T细胞表位的分子，其能够刺激对象的T细胞，随后诱导B细胞产生针对整个半抗原-载体偶联物分子的抗体。本文中所用的术语"表文"包括对其与抗体的特异性相互作用具有反应性的抗原上的任何决定簇。表位也可指被MHC分子组成中的T细胞识别的抗原上的决定簇。被抗体识别的表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团(如氨基酸或糖侧链)组成，且具有特定的三维结构性质以及特定的电荷性质。据信，具有免疫原性性质，蛋白质或多肽一定能够刺激T细胞。然而，缺乏T细胞表位的载体蛋白也可以是免疫原性的。
载体蛋白一般具有足够的外源性以引发针对疫苗的强免疫应答。通常，所用的载体蛋白是能够使共价连接的半抗原具有免疫原性的大分子。说明性的载体蛋白是固有地具有高免疫原性的。因此，具有高度免疫原性并且能够使针对半抗原的抗体生成最大化的载体蛋白是理想的。
当采用动物进行实验时，牛血清白蛋白(BSA)和钥孔戚血蓝蛋白(KLH)均已在偶联物疫苗的开发中作为常规载体使用，并且在本文中设想作为载体蛋白。已用于制备治疗性偶联物疫苗的蛋白质包括但不限于，病原性细菌的多种毒素及其类毒素。示例包括白喉和破伤风毒素及其医药上可接受的相应的类毒素。其它载体蛋白候选物是抗原性与细菌毒素类似的蛋白质，称为交叉反应性物质(CRM)。
重组绿脓假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)外蛋白A(rEPA)可用作载体蛋白，因为其结构和生物学活性已被充分表征。此外，该重组蛋白质已被成功并安全地用于人类，由国立卫生研究院用于金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcusaureus)荚膜多糖偶联物疫苗(参见例如，Fattom等，InfectImmun.611023-1032(1993))。该蛋白质已被鉴定为合适的蛋白质载体，因为由于553位的氨基酸缺失而已经消除了该天然外毒素的固有酶促活性。因此，rEPA具有与天然外毒素A(ETA)相同的免疫学概况，但不具有天然ETA的肝毒素性质。本发明中所用的"外蛋白A"指的是经修饰的非肝毒性的，ETA。这种外蛋白A的一个示例具有553位的氨基酸缺失。
合适的载体分子众多，并且包括但不限于：细菌毒素或产物，例如，霍乱毒素B-(CTB)、白喉毒素、破伤风类毒素，和百日咳毒素，以及丝状血凝素、志贺氏毒素、假单胞菌外毒素；凝集素，例如，蓖麻毒素-B亚基、相思豆毒素和香豌豆凝集素；亚病毒，例如，逆转录酶病毒核蛋白(逆转录NP)、狂犬病核蛋白(狂犬病RNP)、植物病毒(例如TMV、豇豆和花椰菜花叶病病毒)、水疱性口炎病毒-核壳体蛋白质(VSV-N)、痘病毒载体和塞姆利基森林病毒载体；人工运载体，例如，多抗原肽(MAP)、微球；酵母病毒样颗粒(VLP)；疟疾蛋白质抗原；以及其它，例如上述物质的蛋白质和肽以及任何修饰形式、衍生物或类似物。其它有用的载体包括具有增强粘膜应答的能力的那些，更具体地，细菌毒素的LTB家族、逆转录酶病毒核蛋白(逆转录NP)、狂犬病核核蛋白(狂犬病RNP)、水疱性口炎病毒-核壳体蛋白质(VSV-N)，和重组痘病毒亚基。
为了获得"直接偶联物"，将半抗原在有或没有接头的情况下直接连接至载体。例如，可使单一尼古丁半抗原连接至所述载体上的各可用胺基团。用于将半抗原直接偶联至载体蛋白的，采用同双功能或异双功能交联剂的常用方法描述于，例如，G.T.Hermanson，刊于《生物偶联技术》(BioconjugateTechniques)，学术出版社(1996)，以及Dick和Beurret，“偶联物疫苗”(ConjugateVaccines).Contribu.Microbiol.Immunol.，卡尔格，巴塞尔(1989)第10卷,48-114。利用双官能交联剂进行直接偶联，半抗原与蛋白质的摩尔比由所述蛋白质上可用于特定偶联化学的官能团的数量限制。例如，如果载体蛋白具有n数量的赖氨酸部分，则理论上将有可用于与接头的羧基基团反应的n+1个伯胺(包括末端氨基)。因此，采用该直接偶联法，该产物将具有形成的n+1个酰胺键，即，最多连接n+1个半抗原的情况。
本领域技术人员应理解，取决于用于将半抗原偶联至载体蛋白的反应物的浓度，以及载体蛋白的性质，半抗原与载体的比率将会变化。并且，在给定的半抗原-载体偶联物的制备中，各个体偶联物的半抗原/载体比率将有变化。作为一个示例，并且描述于本文的实施例，KLH具有丰富的赖氨酸残基用于偶联半抗原，从而允许高半抗原:载体蛋白比率，提高了产生半抗原-特异性抗体的可能性。因此，不同数量的尼古丁分子可被偶联至KLH，例如15至100个或更多半抗原分子。作为另一个示例，外蛋白A理论上具有可用于与半抗原偶联的15个胺。然而，已确定，在偶联物的单一制备中，当3'氨基甲基-琥珀酰基-尼古丁被偶联至该蛋白质时，11-17个尼古丁半抗原被连接至各外蛋白A载体。该范围采用气体过滤色谱并且测量260nm处的UV吸光度增加通过实验确定。17个尼古丁连接至一些载体，因为尼古丁半抗原可连接至所述载体上的非胺部分。半抗原可连接的非胺部分的示例包括但不限于，--SH和--OH部分。然而，这些副反应的发生率较低。在某些实施方式中，可将成瘾性药物半抗原连接至“基质”(例如，寡聚和多聚多肽)，以增加可用的载体蛋白连接位点的数量。这类基质的描述于，例如，US20020004208。
有众多的官能团可用于促进载体与小分子(例如半抗原)的连接或偶联。这些包括功能性部分，例如羧酸、酐、混合酐、酰基卤、酰基叠氮、烷基卤、N-马来酰亚胺、亚氨基酯、异氰酸酯/盐、胺、硫醇，和异硫氰酸酯/盐，以及本领域技术人员已知的其它部分。这些部分能够与蛋白质分子的反应性基团形成共价键。取决于所用的功能性部分，所述反应性基团可以是载体蛋白或经修饰的载体蛋白分子上的赖氨酸残基的E氨基基团或硫醇基团，其在反应时，导致酰胺、胺、硫醚、脒脲或硫脲键形成。本领域技术人员应认识到可使用其它合适的活化基团和偶联技术。参见例如，Wong，《蛋白质偶联和交联化学》(ChemistryofProteinConjugationandCross-Linking)，CRC出版社公司.(1991)。还参见Hermanson,《生物偶联技术》(BIOCONJUGATETECHNIQUES),学术出版社:1996，和Dick与Beurret，“偶联物疫苗”(ConjugateVaccines).Contribu.Microbiol.Immunol.,卡尔格,巴塞尔(1989)第10卷，48-114。还参见MethodsMolMed.2008,138:167-82，关于半抗原与载体蛋白的偶联的其它方法。
作为一个示例，在某些实施方式中，采用不同的化学法将尼古丁共价连接至蛋白质，所述化学法描述于，例如Moreno，A.Y.和K.D.Janda，《药学、生物化学和性能》(Pharmacology,Biochemistry,andBehavior)，2009.92(2):第199-205页；和deVilliers,S.H.等,Vaccine,2010.28(10):第2161-8页。作为一个示例，可采用尼古丁的选择性溴化作用(Fevrier，F.C.等，“(S)-尼古丁和尼古丁衍生物的区域选择性C-2和C-6取代”(RegioselectiveC-2andC-6substitutionof(S)-nicotineandnicotinederivatives).OrganicLetters,2005.7(24):第5457-60页)，然后进行与w-炔基酯的Castro-Stephens偶联反应(Svensson,T.等,Nicotineimmunogen.1999(WO99/61054))，还原至链烷，并最终去保护以成为游离酸。
在某些实施方式中，在半抗原与载体蛋白的偶联中采用接头部分。就此而言，在某些实施方式中，采用直链接头部分用于半抗原与载体蛋白的偶联。在其他实施方式中，采用环状或支化的接头用于半抗原与载体蛋白的偶联。说明性的接头是琥珀酰基部分。接头的另一个示例是ADH。用于该目的的柔性连系物描述于deVilliers，S.H.等，Vaccine，2010.28(10):2161-2168。
因此，本文所述的用于针对成瘾性药物的疫苗的半抗原-载体偶联物通过如下方式制备：使一种或多种半抗原与载体蛋白反应，以产生半抗原载体偶联物，所述半抗原载体偶联物能够刺激T细胞，导致T细胞增殖并释放介导物，其激活特定B细胞以刺激响应免疫原性的半抗原-载体偶联物的抗体生成。响应该半抗原载体偶联物产生的某些抗体将对所述半抗原-载体偶联物的半抗原部分具有特异性。本发明设想采用半抗原与载体蛋白的各种合适的组合，用于治疗药物成瘾，包括尼古丁成瘾、可卡因成瘾、脱氧麻黄碱成瘾，和其它成瘾药物。
佐剂
适用于本发明所述应用的佐剂包括任何以下化合物。不受本发明理论的束缚，认为本文所述的佐剂靶向TLR4。TLR4在TLR家族中的独特之处在于同时经由MyD88和TRIF依赖性通路发生下游信号转导。总之，这些通路刺激DC成熟、抗原加工/呈递、T细胞初免和细胞因子(如IL-12、IFNα/β和TNFα)生产(参加例如Iwasaki等，Nat.Immunol.5:987(2004))。
一种式(Ia)的吡喃葡糖基脂A(GLA)化合物或其药学上可接受的盐：
其中：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烷基；在更具体的实施方式中，该GLA具有上文所列式(Ia)其中R1、R3、R5和R6是C11-C14烷基；且R2和R4是C12-C15烷基；在更具体的实施方式中，该GLA具有上文所列式(Ia)其中R1、R3、R5和R6是C11烷基或十一烷基；且R2和R4是C13烷基或十三烷基；
或一种式(Ib)的GLA化合物或其药学上可接受的盐：
其中：L1、L2、L3、L4、L5和L6相同或不同且独立地选择O、NH和(CH2)；L7、L8、L9和L10相同或不同且在任何情况下可以不存在或是C(＝O)；Y1是酸性功能基团；Y2和Y3相同或不同且各自独立地选自OH、SH和酸性功能基团；Y4是OH或SH；R1、R3、R5和R6相同或不同且各自独立地选自C8-C13烷基；且R2和R4相同或不同且各自独立地选自C6-C11烷基。
DSLP化合物是一类GLA佐剂，其含有通过接合选自葡萄糖和氨基取代葡萄糖的两个单糖基团形成的二糖(DS)基团，其中该二糖化学结合一个磷酸(P)基团和多个脂(L)基团。更具体地，该二糖可视作由两个单糖单元形成，各单糖单元具有6个碳。在该二糖中，单糖之一将形成还原末端，且另一个单糖将形成非还原末端。为方便起见，形成还原末端的单糖的碳将表示为位于位置1、2、3、4、5和6处，而形成非还原末端的单糖的相应碳原子将表示为位于位置1’、2’、3’、4’、5’和6’处，其遵循常规碳水化合物编号命名方法。在DSLP中，非还原末端的1位碳通过醚(-O-)或氨基(-NH-)基团连接至还原末端的6’位碳。该磷酸基团将连接至二糖，优选通过非还原末端的4’碳。各脂基团将通过酰胺(-NH-C(O)-)或酯(-O-C(O)-)连接接合至二糖，其中羰基接合至脂基团。该二糖具有7个位置可连接至酰胺或酯基，即非还原末端的2’、3’和6’位以及还原末端的1、2、3和4位。
例如，该脂基团具有至少3个碳，或至少6个碳，优选至少8个碳，且更优选至少10个碳，其中在各情况下，该脂基团具有不超过24个碳，不超过22个碳，或不超过20个碳。在一个实施方式中，这些脂基团总共提供60-100个碳，优选70-90个碳。脂基团可仅有碳和氢原子组成，即其可以是烃基脂基团，或其可以含有一个羟基，即其可以是羟基取代的脂基团，或其可以含有酯基，该酯基继而通过酯基的羰基(-C(O)-)接合至烃基脂或羟基取代的脂基团，即酯取代的脂。烃基酯基团可以是饱和的或不饱和的，不饱和烃基脂基团将在相邻的碳原子之间具有一个双键。
该DSLP包含3或4或5或6或7个脂基团。在一个方面中，该DSLP包含3-7个脂基团，而在另一个方面中，该DSLP包含4-6个脂基团。在一个方面中，该脂基团独立地选自烃基脂、羟基取代的脂和酯取代的脂。在一个方面中，使用羟基取代1、4’和6’位。在一个方面中，该单糖单元各自是葡糖胺。该DSLP可以是游离酸形式，或盐形式，例如铵盐。
在某些实施方式中，DSLP上的脂如下文所述：使用–O-(CO)-CH2-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)取代3’位；使用–NH-(CO)-CH2-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)取代2’位；使用–O-(CO)-CH2-CH(OH)(Ra)取代3位；使用–NH-(CO)-CH2-CH(OH)(Ra)取代2位；其中，Ra和Rb各自选自癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基，各术语都指饱和烃基。在一个实施方式中，Ra是十一烷基且Rb是十三烷基，该佐剂描述于例如美国专利申请公开2008/0131466中作为“GLA”。其中Ra是十一烷基且Rb是十三烷基的化合物可以立体化学限定的形式使用，其可以PHADTM佐剂的形式购自例如阿凡提极性脂质制品公司(AvantiPolarLipids)。
在一个方面中，该DSLP是称作3D-MPL的天然衍生化合物的混合物。3D-MPL佐剂由GSK公司(GlaxoSmithKlineCompany)以药物级别生产，作为其MPLTM佐剂。3D-MPL已被广泛描述于科学和专利文献，参见例如，《疫苗设计：亚基和佐剂方法》(VaccineDesign:thesubunitandadjuvantapproach)，PowellM.F.和Newman，M.J.编，第21章“单磷酸脂A作为佐剂：过去的经验和新方向”(MonophosphorylLipidAasanadjuvant:pastexperiencesandnewdirections)，J.T.和Myers,K.R.著，普莱南出版社(PlenumPress)，纽约(1995)以及美国专利号4,912,094。
在另一个方面中，该DSLP佐剂可描述为包含(i)二葡糖胺主链，其还原末端葡糖胺连接至非还原末端葡糖胺，所述连接是通过非还原末端葡糖胺的己糖胺1位与还原末端葡糖胺的己糖胺6位之间的醚键；(ii)与非还原末端葡糖胺的己糖胺4位相连的O-磷酰基；以及(iii)最多6个脂肪酰基链；这些脂肪酰基链之一通过酯键连接至还原末端葡糖胺的3-羟基，这些脂肪酰基链之一通过酰胺键连接至非还原末端葡糖胺的2-氨基且包含通过酯键连接至超过12个碳原子的烷酰基链的十四烷酰链；且这些脂肪酰基链之一通过酯键连接至非还原末端葡糖胺的3-羟基且包含通过酯键连接至超过12个碳原子的烷酰基链的十四烷酰链。参见例如，美国专利申请公开号2008/0131466。
在另一个方面中，该佐剂可以是具有6个脂基团的合成的二糖，参见美国专利申请公开号2010/0310602。
在另一个方面中，DSLP佐剂如化学式(II)所示：
其中，部分A1和A2独立地选自氢、磷酸酯和磷酸盐。对于磷酸盐而言，钠和钾是示例性抗衡离子。部分R1、R2、R3、R4、R5和R6独立地选自具有3-23个碳的烃基(表示为C3-C23)。为更清楚起见，应理解，当一个部分“独立地选自”含有多个成员的特定基团时，第一部分所选成员在任何情况下都不会影响或限制第二部分成员的选择。R1、R3、R5和R6接合的碳原子是不对称的，且因此可以R或S立体化学结构存在。在一个实施方式中，所有那些碳原子都是R立体化学结构，而在另一个实施方式中，所有那些碳原子都是S立体化学结构。
本文中，“烷基”指直链或支链、非环状或环状、不饱和或饱和的脂族烃，其含有1-20个碳原子，且在某些优选实施方式中含有11-20个碳原子。代表性饱和直链烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基等，包括十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等；而饱和支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基等。代表性饱和环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等；而不饱和环烷基包括环戊烯基和环己烯基等。环烷基在本文中也称作“同素环”或“同素环状环”。不饱和烷基在相邻的碳原子之间含有至少一个双键或三键(分别称作“烯基”或“炔基”)。代表性直链和支链烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等；而代表性直链和支链炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基等。例如，“C18-13烷基”和“C6-11烷基”表示上文所定义的烷基，分别含有8-13或6-11个碳原子。
本文中，“酸性官能团”指能够在水性介质中供给质子的官能团(即布朗斯台德-劳里酸)。供给质子后，酸官能团成为带负电荷的物质(即酸官能团的共轭碱)。酸官能团的示例包括但不限于：-OP(＝O)(OH)2(磷酸酯/盐)、-OS(＝O)(OH)2(硫酸酯/盐)、-OS(OH)2(亚硫酸酯/盐)、-OC(OH)2(碳酸酯/盐)、-OC(＝O)CH(NH2)CH2C(＝O)OH(天冬氨酸酯/盐)、-OC(＝O)CH2CH2C(＝O)OH(琥珀酸酯/盐)以及-OC(＝O)CH2OP(＝O)(OH)2(羧甲基磷酸酯/盐)。
本文中，“烃基”指完全由氢和碳形成的化学部分，其中碳原子的排列可以是直链或支链、非环状或环状，且相邻碳原子之间的连接可以完全是单键，即提供饱和烃基，或者两个相邻碳原子之间可存在双键或三键，即提供不饱和烃基，且烃基中碳原子的数目是3-24个碳原子。该烃基可以是烷基，代表性直链烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基等，包括十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等；而支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基等。代表性饱和环烃基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等；而不饱和环烃基包括环戊烯基和环己烯基等。不饱和烃基在相邻的碳原子之间含有至少一个双键或三键(如果该烃基是非环状的，分别称作“烯基”或“炔基”，如果该烃基是至少部分环状的，分别称作环烯基和环炔基)。代表性直链和支链烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等；而代表性直链和支链炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基等。
式(II)的佐剂可获自本领域已知的合成方法，例如PCT国际公开号WO2009/035528(其通过引用纳入本文)以及WO2009/035528中提及的出版物(其也各自通过引用纳入本文)中公开的合成方法。还可通过购买获得所述佐剂中的某些。
该DSLP佐剂可通过本领域已知的合成方法获得，例如PCT国际公开号WO2009/035528(其通过引用纳入本文)以及WO2009/035528中提及的出版物(其也各自通过引用纳入本文)中公开的合成方法。化学合成的DSLP佐剂(如式(II)的佐剂)可以基本均匀的形式制备，其表示该制剂相对于存在的DSLP分子(如式(II)的化合物)是至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％、97％、98％或99％纯。给定佐剂制剂纯度的测定可由熟悉适当分析化学方法的技术人员容易地完成，例如通过气相色谱、液相色谱、质谱和/或核磁共振分析。获自天然来源的DSLP佐剂通常不能容易地制备为化学纯形式，因此，用于本文所述的组合物和方法的优选的佐剂是合成制备的佐剂。如前文所述，可通过购买获得所述佐剂中的某些。一种这类DSLP佐剂是阿凡提极性脂质制品公司(阿拉巴马州阿拉巴斯特)的产品目录中的产品号699800，参见下文与E10联用的E1。
在多个实施方式中，该佐剂具有式(II)的化学结构但部分A1、A2、R1、R2、R3、R4、R5和R6选自前文针对这些部分提供的选项的子集，这些子集在下文中鉴定为E1、E2等。
E1：A1是磷酸酯或磷酸盐且A2是氢。
E2：R1、R3、R5和R6是C3-C21烷基；且R2和R4是C5-C23烃基。
E3：R1、R3、R5和R6是C5-C17烷基；且R2和R4是C7-C19烃基。
E4：R1、R3、R5和R6是C7-C15烷基；且R2和R4是C9-C17烃基。
E5：R1、R3、R5和R6是C9-C13烷基；且R2和R4是C11-C15烃基。
E6：R1、R3、R5和R6是C9-C15烷基；且R2和R4是C11-C17烃基。
E7：R1、R3、R5和R6是C7-C13烷基；且R2和R4是C9-C15烃基。
E8：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烃基。
E9：R1、R3、R5和R6是C11烷基；且R2和R4是C13烃基。
E10：R1、R3、R5和R6是十一烷基；且R2和R4是十三烷基。
在某些实施方式中，E2至E10各自与实施方式E1联用，和/或E2至E9的烃基是烷基，优选直链烷基。
美国专利公开号2008/0131466提供了制剂，如GLA佐剂的水性制剂(AF)和稳定的乳液制剂(SE)，这些制剂可用于任意式(I)的佐剂。
与其它佐剂组合
佐剂可与另一种辅佐剂，以及一种或多种抗原组合。例如，辅佐剂可根据其主要作用模式选择是TLR4激动剂、或TLR8激动剂、或TLR9激动剂。或者或此外，辅佐剂可根据其载体性质来选择；例如，所述辅佐剂可以是乳液、脂质体、微颗粒或明矾。
用于本领域以产生免疫应答的佐剂包括铝盐，例如明矾(硫酸铝钾)，或其它含铝佐剂。然而，含铝佐剂趋于产生Th2应答，从而可能不是优选的。
其它佐剂包括QS21和QuilA，其包含来自从南美洲的皂皮树的树皮分离的三萜皂苷或皂素(参见例如，Kensil等,刊于《疫苗设计：亚基和佐剂方法》(VaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach)(Powell和Newman编，普莱纽姆出版社，纽约，1995)；美国专利号5,057,540)、3-DMP、多聚或单体氨基酸，例如多聚谷氨酸或多聚赖氨酸。其它合适的佐剂包括水包油乳液(例如鲨烯或花生油)(参见例如，Stoute等，N.Engl.J.Med.336，86-91(1997))。另一种合适的佐剂是CpG(参见例如，Klinman,Int.Rev.Immunol.25(3-4):135-54(2006)；美国专利号7,402,572；欧洲专利号772619)。
另一类合适的佐剂是水包油乳液制剂(本文中也称作稳定水包油乳液)。此类佐剂可任选地与其它特异性免疫刺激剂联用，例如胞壁酰肽(例如，N-乙酰胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺(nor-MDP),N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰基-L-丙氨酸-2-(1'-2'二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺(MTP-PE)、N-乙酰葡萄糖胺酰基-N-乙酰胞壁酰基-L-Al-D-异谷氨酸-L-Ala-二棕榈酰丙酰胺(DTP-DPP)TheramideTM)，或其它细菌细胞壁组分。水包油乳液包括(1)MF59(WO90/14837)，其包含5％鲨烯、0.5％吐温80和0.5％司盘85(任选地包含不同量的MTP-PE)，采用微流化器例如Model110Y微流化器(微流体公司(Microfluidics)，马萨诸塞州牛顿市)配制成亚微米颗粒；(2)SAF，其包含10％角鲨烷、0.4％吐温80、5％普朗尼克-嵌段聚合物L121，和thr-MDP，其被微流体化成为亚微米乳液或涡旋振荡产生较大粒径的乳液，和(3)Ribi佐剂系统(RAS)(Ribi免疫化学公司，蒙大拿州哈密尔顿)，其包含2％鲨烯、0.2％吐温80，和选自下组的一种或多种细菌细胞壁组分：单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)，和细胞壁骨架(CWS)，优选是MPL+CWS(DetoxTM)。同样如上所述，合适的佐剂包括皂素佐剂，例如StimulonTM(QS21，Aquila，马萨诸塞州伍斯特)或由其生成的颗粒，例如ISCOM(免疫刺激复合物)和ISCOMATRIX。其它佐剂包括完全弗氏佐剂(CFA)(其适用于非人类应用，但不适用于人)和不完全弗氏佐剂(IFA)。其它佐剂包括细胞因子，例如白介素(IL-1、IL-2和IL-12)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，和肿瘤坏死因子(TNF)。
在一个具体实施方式中，所述佐剂是具有佐剂性质的乳液。这类乳液包括水包油乳液。弗氏不完全佐剂(IFA)是此类佐剂之一。另一种合适的水包油乳液是MF-59TM佐剂，其包含鲨烯、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(也称为TweenTM80表面活性剂)，和失水山梨糖醇三油酸酯。鲨烯是源自鲨鱼肝油的天然有机化合物，但也可获自植物来源(主要是植物油)，包括苋菜种籽、米糠、小麦胚芽和橄榄油。其它合适的佐剂有MontanideTM佐剂(森皮公司(SeppicInc.)，新泽西州费尔菲尔德)，包括MontanideTMISA50V，其为矿物油基佐剂；MontanideTMISA206；和MontanideTMIMS1312。尽管矿物油可存在于辅佐剂中，在一个实施方式中，本文所述的组合物的油组分均为可代谢的油。
乳液系统也可用于配制本发明的组合物。例如，已经描述了多个单一或多相乳液系统。水包油乳液佐剂本身已被表明是有用的佐剂组合物(EP0399843B)，并且，水包油乳液和其它活性剂的组合也被描述为用于疫苗的佐剂(WO95/17210；WO98/56414；WO99/12565；WO99/11241)。其它油乳液佐剂已被描述，例如油包水乳液(美国专利号5,422,109；EP0480982B2)和水包油包水乳液(美国专利号5424067；EP0480981B)。用于本发明的油乳液佐剂可以是天然的或合成的，并且可以是无机或有机的。无机和有机油的示例是本领域技术人员显见的。
在具体的实施方式中，本发明的组合物包含水包油乳液，其中GLA被纳入油相中。在另一个实施方式中，本发明的组合物包含水包油乳液，其中，GLA被纳入油相，并且其中，存在另一种组分，例如辅佐剂、TLR激动剂等，如本文所述。
对于适用于人类给予的水包油组合物，所述乳液系统的油相优选包含可代谢的油。术语可代谢油的含义是本领域熟知的。可代谢可定义为“能够通过代谢转化”(Dorland'sillustratedMedicalDictionary(《道氏说明性医学词典》)，WBS公司(W.B.SaundersCompany)，第25版(1974))。该油可以是任何植物油、鱼油、动物油或合成油，其对接受者是无毒性的且能够通过代谢转化。坚果(如花生油)、种子和谷粒是植物油的常见来源。合成油也是本发明的一部分，并且可包括市售可得油例如等。
例如，鲨烯(2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯)是在鲨鱼肝油中大量发现且在橄榄油、小麦胚芽油、米糠油和酵母中以较低量发现的不饱和油，并且是用于本发明的特别优选的油。鲨烯是可代谢的油，其优点是其为胆固醇生物合成的中间体(默克目录(Merckindex)，第10版，条目编号8619)。特别优选的油乳液是水包油乳液，具体而言是水包鲨烯乳液。此外，本发明最优选的油乳液佐剂包含抗氧化剂，其优选是油α-生育酚(维生素E，EP0382271B1)。WO95/17210和WO99/11241公开了基于鲨烯、α-生育酚和80的乳液佐剂，任选地用免疫刺激剂QS21和/或3D-MPL(其在上文中讨论)配制。WO99/12565公开了对这些鲨烯乳液的改进，其向油相添加了甾醇。另外，可向油相添加甘油三酯，例如三辛酸甘油酯(C27H5006)，以使乳液稳定化(WO98/56414)。
稳定的水包油乳液中发现的油滴尺寸优选是小于1微米，基本可在30-600nm范围内，优选是直径基本在30-500nm左右，并且最优选是直径基本为150-500nm，具体而言，光子关联光谱学测定的直径为约150nm。就此而言，80％数量的油滴应处于优选范围内，更优选是多于90％数量，且最优选是多于95％数量的油滴处于确定尺寸范围内。本发明油乳液中存在的组分的量通常在2～10％油，例如鲨烯；并且，若存在，2～10％α生育酚；和0.3～3％表面活性剂，例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。优选的油:α生育酚的比率等于或小于1，因为这能够提供更为稳定的乳液。司盘85也可以约1％的水平存在。在一些示例中，本发明的疫苗还可有利地包含稳定剂。
用于产生水包油乳液的方法是本领域技术人员熟知的。通常，所述方法包括将油相与表面活性剂(例如溶液)混合，然后采用均化器均质化。例如，包括使该混合物通过注射器针头一次、两次或更多次的方法将适用于使小体积液体均质化。同样地，微流化器(M110S微流体机，最大通过50次，历时2分钟，最大压强输入6巴(输出压强为约850巴))的乳化过程可适应于生成较小或较大体积的乳液。该适应性可通过包括测量所得乳液直至获得具有所需直径的油滴的制剂的常规实验来实现。
可用于本文所述方法的实践的作为辅佐剂的免疫增效剂的示例包括：MPLTM；MDP及衍生物；寡核苷酸；双链RNA；替代性的病原体相关的分子模式(PAMPS)；皂苷；小分子免疫增效剂(SMIP)；细胞因子和趋化因子。
在一个实施方式中，所述辅佐剂是MPLTM佐剂，其可购自GSK公司(最初由Ribi免疫化学研究公司开发，蒙大拿州哈密尔顿)。参见例如，Ulrich和Myers,《疫苗设计：亚基和佐剂方法》(VaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach)的第21章，Powell和Newman编，普莱纽姆出版社，纽约(1995)。关于MPLTM佐剂且也合适作为辅佐剂用于本文所述的组合物和方法的是AS02TM佐剂和AS04TM佐剂。AS02TM佐剂是水包油乳液，其同时包含MPLTM佐剂和QS-21TM佐剂(本文他处讨论的皂素佐剂)。AS04TM佐剂包含MPLTM佐剂和明矾。MPLTM佐剂由明尼苏达沙门菌(Salmonellaminnesota)R595的脂多糖(LPS)通过用弱酸处理LPS，并进行碱水解，然后纯化经修饰的LPS来制备。
在另一个实施方式中，所述辅佐剂是皂素，例如源自皂皮树物种的树皮的那些，或经修饰的皂素(参见例如，美国专利号5,057,540；5,273,965；5,352,449；5,443,829和5,560,398)。马萨诸塞州列克星敦的抗原公司(Antigenics,Inc.)出售的产品QS-21TM佐剂是示例性的含皂苷的辅佐剂，其可与式(I)的佐剂联用。关于皂素的替代性的辅佐剂，是ISCOMTM佐剂家族，最初由艾丝科泰公司(Iscotec)(瑞典)开发，并通常由源自皂皮树的皂素形成，或合成的类似物、胆固醇，和磷脂，其均形成蜂窝状结构。
在另一个实施方式中，所述辅佐剂是具有辅佐剂功能的细胞因子(参见例如,Lin等，Clin.Infect.Dis.21(6):1439-49(1995)；Taylor,Infect.Immun.63(9):3241-44(1995)；和Egilmez，《佐剂与递送系统》(VaccineAdjuvantsandDeliverySystems)第14章，约翰威利父子公司(JohnWiley&Sons,Inc.)(2007))。在不同实施方式中，所述细胞因子可以是，例如，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(参见例如，Change等，Hematology9(3):207-15(2004)；Dranoff，Immunol.Rev.188:147-54(2002)；和美国专利5,679,356)；或干扰素，例如I型干扰素(例如，干扰素-α(IFN-α)或干扰素-β(IFN-β))或II型干扰素(例如，干扰素-γ(IFN-γ)(参见例如，Boehm等，Ann.Rev.Immunol.15:749-95(1997)；和Theofilopoulos等，Ann.Rev.Immunol.23:307-36(2005))；白介素，尤其包括白介素-1α(IL-1α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)(参见例如，Nelson，J.Immunol.172(7):3983-88(2004)；白介素-4(IL-4)、白介素-7(IL-7)、白介素-12(IL-12)(参见例如，Portielje等，CancerImmunol.Immunother.52(3):133-44(2003)；和Trinchieri，Nat.Rev.Immunol.3(2):133-46(2003))；白介素-15(Il-15)、白介素-18(IL-18)；胎儿肝酪氨酸激酶3配体(Flt3L)，或肿瘤坏死因子α(TNFα)。DSLP佐剂，例如式(I)的佐剂，可以与细胞因子共同配制，然后与疫苗抗原组合，或者抗原、DSLP佐剂(例如，式(I)的佐剂)和细胞因子辅佐剂可分开配制，然后合并。
在其它某些实施方式中，佐剂和滥用药物抗原/半抗原偶联物被包装并以分开的小瓶提供。合适的标签通常与各组合物一同包装，指示意图的治疗性应用。
疫苗
在某些实施方式中，方法包括给予疫苗组合物足够次数以产生有效的抗体应答来阻滞成瘾性药物的作用。在一个实施方式中，所述方法包括给予所述疫苗一次，或在其他实施方式中，超过一次给予对象，在某些实施方式中，准确地给予对象两次，或至少两次、至少三次、至少四次、五次、六次、七次或更多次。
在一个方面中，本公开内容提供用于给予本发明的疫苗的方法，所述疫苗包含GLA和成瘾性药物或其衍生物(其可以是偶联至载体蛋白的药物半抗原形式)，以诱导针对药物滥用的免疫应答，优选诱导阻滞所述药物活性的长效抗体。在某些实施方式中，所述方法涉及给予两个剂量的疫苗，例如，间隔约3周。所述两个剂量之间的时间长度可在约3周～5周，或约1个月、约6周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。
所述疫苗通过本领域已知的任何胃肠外递送途径给予，例如，通过肌内、皮下或皮内注射，或通过无针注射。疫苗可配制用于任何合适的给予形式，优选是肌内、皮下或皮内注射，或无针注射。
液体疫苗可包含例如，以下一种或多种物质：无菌稀释剂如注射用水，盐水溶液，优选生理盐水，林格氏溶液等张氯化钠，可用作溶剂或悬浮介质的非挥发油，聚乙二醇，甘油，聚丙二醇或其他溶剂；抗菌剂；抗氧化剂；螯合剂；缓冲剂和用于调节张力的试剂如氯化钠或右旋糖。液体组合物可封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。优选使用生理盐水，且可注射药物组合物优选是无菌的。
选择各疫苗剂量中的半抗原偶联的载体蛋白的量，该量诱导免疫保护性应答，但不具有显著的典型疫苗中的不利副作用。合适的剂量范围可由技术人员确定，但通常是0.01～10mg/剂量，并且可以是0.1～1.0mg/剂量。在单一疫苗剂量之后，人体通常需要两周或更多周来产生针对外来抗原的抗体，并且，通常需要在数周过程中给予数次疫苗剂量来诱导高持续的抗体效价，例如，针对成瘾性药物的疫苗所需的那些，例如，抗尼古丁疫苗，以协助戒烟。人血液中的抗体生成可通过采用本领域技术人员熟知的技术来监测，例如ELISA、放射性免疫测定、表面等离子体共振，和Western印迹法。
对于本文所述的包含GLA的疫苗，将给予约0.01ug/kg～约100mg/kg体重，通常通过皮内、皮下、肌肉内或静脉内途径，或通过其他途径。
在某些实施方式中，所述剂量是约1ug/kg至约1mg/kg，而约5ug/kg至约200ug/kg是特别优选的。对于本领域技术人员而言显而易见的是，给药的次数和频率将取决于宿主的应答。用于治疗应用的“药学上可接受的运载体”也是药学领域所熟知的，并描述在例如《雷明顿药物科学》(Remington’sPharmaceuticalSciences)，麦克出版公司(MackPublishingCo.)(A.R.Gennaro编，1985)。例如，可使用生理pH下的无菌盐水和磷酸盐缓冲盐水。药物组合物可包含防腐剂、稳定剂、染料、甚至是调味剂。例如，可添加苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯作为防腐剂。同上，于1449。此外，可以使用抗氧化剂和助悬剂。
用于本发明的组合物的剂量中的佐剂(例如，GLA)的量(其中，剂量是给予有此需要的对象的组合物的量)(所述组合物还包含抗原，用作疫苗)，在一个实施方式中是约0.5μg至约50μg，在另一个实施方式中是约1.0μg至25μg，并且在本发明的多个其它实施方式中可以是约1μg、约2μg、约2.5μg、约5μg、约7.5μg、约10μg、约15μg、约20μg或约25μg。在某些实施方式中，所述疫苗组合物中GLA佐剂的量可以在约2μg至约15μg或更多/剂量疫苗。在某些实施方式中，GLA/剂量疫苗的量是约2-5μg，或约2-7μg，或约2-10μg，或约3-5、3-7或3-10μg。剂量中组合物的总体积通常是0.5mL至1.0mL。乳液，例如SE，可存在于所述组合物中，其中，所述乳液的油组分在不同实施方式中组成约0.1％、约0.5％、约1.0％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约4％、约5％、约7.5％或约10％的组合物总体积。
该疫苗还可包含至少一种生理上(或药学上)可接受或合适的赋形剂。用于药物组合物的本领域技术人员已知的任何生理上或药学上合适的赋形剂或载体(即不干扰活性成分活性的非毒性材料)都可用于本发明所述的组合物。示例性赋形剂包括维持蛋白质稳定性和完整性的稀释剂和载体。用于治疗性应用的赋形剂是熟知的，且描述于例如Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(《雷明顿：药物科学和实践》)(Gennaro，第21版，马克出版公司(MackPub.Co)，宾夕法尼亚州伊斯顿(2005))，且在本文中更详细地描述。
用于治疗应用的“药学上可接受的运载体”也是药学领域所熟知的，并描述在例如Remington’sPharmaceuticalSciences(《雷明顿药物科学》)，麦克出版公司(MackPublishingCo.)(A.R.Gennaro编，1985)。例如，可使用生理pH下的无菌盐水和磷酸盐缓冲盐水。对于旨在通过注射给药的组合物，可包含一种或多种表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、缓冲剂、稳定剂、抗氧化剂和/或等张剂。例如，可添加苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯作为防腐剂。
“药学上可接受的盐”指本发明的化合物的盐，其衍生自这类化合物和有机或无菌酸(酸加成盐)或有机或无机碱(碱加成盐)的组合。本发明的组合物可以游离碱或盐的形式使用，这两种形式都被认为在本发明的范围内。
所述疫苗可以是允许给予患者的任何形式。例如，该组合物可以是固体、液体或气体(气凝胶)的形式。典型的给药途径包括但不限于：口服、局部、胃肠道外(例如，舌下或经颊)、舌下、直肠、阴道和鼻内(例如以喷雾形式)给药。本文所用术语胃肠道外包括离子电渗(iontophoretic)(例如U.S.7,033,598；7,018,345；6,970,739)、超声波电渗(sonophoretic)(例如U.S.4,780,212；4,767,402；4,948,587；5,618,275；5,656,016；5,722,397；6,322,532；6,018,678)、热(例如U.S.5,885,211；6,685,699)、被动透皮(例如U.S.3,598,122；3,598,123；4,286,592；4,314,557；4,379,454；4,568,343；5,464,387；UK专利号2232892；U.S.6,871,477；6,974,588；6,676,961)、微针(例如U.S.6,908,453；5,457,041；5,591,139；6,033,928)给药且还包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内、海绵窦内、鞘内、耳道内、尿道内注射或输注技术。在具体的实施方式中，本发明所述组合物(包括疫苗和药物组合物)可通过选自下组的技术皮内给予：离子电渗、微空泡、超声波电渗或微针。
该疫苗配制为允许其中含有的活性成分在将组合物给予患者后是生物可利用的。待给予患者的疫苗的形式为一个或多个剂量单位，其中，例如，小瓶或其它容器可包含单一剂量或多剂量单位。
液体药物组合物(例如疫苗)，无论是溶液、悬浮液或其他形式，均可包含一种或多种以下载体或赋形剂：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液，优选是生理盐水、林格氏(Ringer’s)溶液、等张氯化钠或缓冲剂。中性缓冲盐水或与非特异性血清白蛋白混合的盐水是示例性适当的稀释剂。所述疫苗还可包含非挥发性油，例如鲨烯、角鲨烷、矿物油、甘露糖醇单油酸酯、胆固醇和/或合成的单甘油酯或甘油二酯，其可作为溶剂或悬浮介质，聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，和用于调节渗透压的试剂，例如氯化钠或右旋糖；低分子量(低于约10个残基)的多肽、蛋白质、氨基酸、碳水化合物，包括葡萄糖、蔗糖或糊精，螯合剂例如EDTA、谷胱甘肽和其它稳定剂和赋形剂。优选地，用合适赋形剂溶液(如蔗糖)为稀释剂将产物可以配制成冻干物。其疫苗或组分可封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
在一个具体的实施方式中，本发明的疫苗组合物包含小于0.2um的稳定水性悬浮液且还包含选自下组的至少一种组分：磷脂、脂肪酸、表面活性剂、去垢剂、皂苷、含氟脂质等。
疫苗或药物组合物中还可能需要包括其它组分，例如，递送载剂，包括但不限于，铝盐、油包水乳液、可生物降解的油载剂、水包油乳液、可生物降解的微胶囊和脂质体。用于此类载剂中的其它免疫刺激性物质(辅佐剂)的示例也描述于上文，并且可包括N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨酰胺(MDP)、葡聚糖、IL12、GMCSF、γ干扰素和IL12。
虽然本领域普通技术人员已知的任何合适载体都可用于本发明的药物组合物，但载体的类型将根据给药方式和释放是否需要缓释而变化。对于胃肠道外给药，如皮下注射，该载体优选包含水、盐水、醇、脂肪、蜡或缓冲剂。生物可降解微球(如聚乳酸半乳糖)也可用作本发明的药物组合物的载体。合适的可生物降解的微球公开于例如美国专利号4,897,268和5,075,109。在这方面，该微球优选大于约25微米。
本发明的疫苗有用于治疗多种成瘾性药物的成瘾。治疗有效量的本文所述的疫苗是诱导药物特异性抗体应答的疫苗，其阻止成瘾性药物通过血脑屏障，由此降低或消除药物诱导的脑化学变化(其为药物成瘾性的源头)。就此而言，重要的是，该药物-载体偶联物引发识别天然药物分子的抗体生成。因此，本发明提供在一个方面中，治疗或预防有此治疗需求的患者中药物成瘾的方法包括给予治疗有效量的成瘾性药物半抗原-载体偶联物，联合GLA佐剂。在一个实施方式中，本发明还提供用于治疗有此治疗需要的患者中的药物成瘾的方法，所述方法包括：给予治疗有效量的响应成瘾性药物半抗原-载体偶联物产生的抗体。
在一个实施方式中，本发明提供用于协助希望戒烟的吸烟者戒烟，或防止已经通过疫苗接种抗尼古丁疫苗或通过采用药物治疗的先前的治疗或通过自发戒烟而已经成功戒烟的前吸烟者复吸，或阻止有所述治疗需求的人中的尼古丁依赖性的方法，所述方法包括给予此人本文所述的包含GLA佐剂的疫苗组合物。
试剂盒可包含一个或多个剂量的佐剂组合物，以及任选的包含成瘾性药物抗原/半抗原/半抗原-载体蛋白偶联物的一个或多个剂量的组合物。试剂盒还可含有说明书。说明书通常描述给药方法，包括用于确定对象的适当状态、适当剂量和适当给药方法的方法，从而用于给予组合物。说明书还可包括用于在治疗期间监测对象的指南。
本发明提供的试剂盒还可包括用于向对象给予各本发明所述组合物的装置。用于给予药物或疫苗的本领域已知的多种装置中的任一种都可包含在本发明提供的试剂盒中。示例性装置包括但不限于：皮下针头、静脉内针头、导管、无针注射装置、雾化器、吸入器或喷雾器或喷瓶或微喷装置，以及液体分散器，如点眼药器。通常，用于给予组合物的装置与试剂盒的活性组分相容。例如，无针注射装置，例如高压注射装置可被包括在具有不被高压注射破坏的载体颗粒、多核苷酸和多肽的试剂盒中，但通常不被包括在包含可被高压注射破坏的载体颗粒、多核苷酸和多肽的试剂盒中。
本文和所附权利要求书所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提到“一种抗原”，包括多种这类抗原，且提到“一种细胞”或“所述细胞”包括本领域技术人员已知的一种或多种细胞及其等同物(例如，多种细胞)等。类似地，提及“一种化合物”或“一种组合物”，包括多种此类化合物或组合物，并且除非本文中另有明确说明，分别指的是一种或多种化合物或组合物。当方法中的步骤被描述或需要保护，并且所述步骤以一定顺序描述时，描述第一步在“先于”或在第二步“之前”发生(或进行)等同于描述第二步“后续于”或在第一步“之后”发生(或进行)。指代数字或数字范围时，术语“约”表示所指数字或数字范围是实验变异性内的约数(或在统计学实验误差内)，且因此该数字或数字范围可在所示数字或数字范围的1％至15％之间变化。术语“包含”(和相关术语例如“包括”或“含有”或“具有”或“涵盖”)不意在排除在其它某些实施方式中，例如，本文所述的物质的任何组合物、组合物、方法或步骤等，可“由”所述特征“组成”或“基本由”所述特征“组成”。
实施例
实施例1
相较于用明矾配制的疫苗，用GLA-SE配制的抗尼古丁疫苗组合物显示改善的佐剂活性
在该实验中，评价了GLA-SE对疫苗免疫原性和抗原剂量节约(dose-sparing)的作用。C57/BL小鼠(5只/组)接受初免加强性肌内(IM)疫苗接种(100ul)，示于图1A。检测抗体应答。将两个剂量的用GLA-SE佐剂配制的KLHnic与单独或用明矾配制的KLH-Nic做比较。KLH与尼古丁偶联(22分子或100分子/KLH单体)。2.5μg或10μg偶联物辅以5μgGLA-SE或明矾佐剂，并且通过ELISA检测尼古丁的抗体。
抗尼古丁抗体通过定量ELISA检测，采用卵白蛋白尼古丁(Ovanic)偶联物作为包被抗原，以避免检测导向载体蛋白的抗体(Hieda，Y.等，“主动免疫改变大鼠的血浆尼古丁浓度”(Activeimmunizationalterstheplasmanicotineconcentrationinrats.)TheJournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics,1997.283(3):第1076-81页)。终点效价采用GraphPad(圣迭戈)Prism第4.00版(用于windows)进行。进行采用邓奈特事后检验(Dunnettsposttest)的双向ANOVA。
如图1B和图1C中所示，GLA-SE显著改善了由KLH偶联的尼古丁抗原产生的抗尼古丁免疫应答。
实施例2
相较于用明矾配制的疫苗，含有用GLA-SE配制的新型载体蛋白的抗尼古丁疫苗组合物显示改善的活性
新型三聚体卷曲螺旋肽载体(TCC)经合成(参见MillerKD，R.Roque和C.Clegg，2014，“采用合成的三聚体卷曲螺旋半抗原载体的新型抗尼古丁疫苗”(NovelAnti-NicotineVaccineUsingaSyntheticTrimericCoiled-CoilHaptenCarrier)，提交手稿)并用于偶联在吡啶环的6位包含己酸的尼古丁半抗原。图2比较了TCC和4种不同的尼古丁-半抗原载体的相对大小和赖氨酸含量；KLH是常用的半抗原载体蛋白；外毒素A是用于NicVaxTM的载体，其在两次III期临床研究中失败(Hartmann-BoyceJ.等,2012年8月15日；8:CD007072)；破伤风类毒素(NiccineTM)，其在II期吸烟复发研究中失败(TonstadS等.NicotineTobRes.2013；15(9):1492-501)，和白喉毒素蛋白CRM197，其目前处于I期研究测试。偶联至这些临床阶段载体的半抗原的数量平均为10-30个半抗原/分子(PrydeDC等.PLoSOne,20131,8(10):e76557)。
TCCnic免疫原性：为表征抗体应答，采用C57BL/6小鼠，合成包含两个H2Db限制性辅助T细胞表位的TCC；13AAPADRE序列(LaRosaC等，JInfectDis.2012年4月15日，205(8):1294-1304)，然后是H5N1血凝素中存在的11AA序列[CleggCH等，ProcNatlAcadSciUSA.2012年10月23日；109(43):17585-90)。TCC与在吡啶环的6位包含己酸(Nic-6-HA)的尼古丁衍生物偶联，最终构建体平均为12个半抗原/三聚体(TCCnic-12)。还制备两个偶联的KLH载体作为对照。第一个，KLHnic-22，包含平均22个尼古丁/分子，其近似与多种临床前和临床疫苗类似的半抗原装载[PrydeDC等，同上)。第二个，KLHnic-100，是与大多数尼古丁疫苗相比过度偶联的载体，其用于测试增加的半抗原密度对疫苗免疫原性的影响。为了检测佐剂对疫苗功能的作用，这些载体分别用明矾或GLA-SE配制。
C57BL/6小鼠(5只/组)免疫三次(第0天、第14天和第131天)，并且通过ELISA分析血清的抗尼古丁Ab效价。所得的Ab应答动力学示于图3。如同所示，全部三种载体刺激出的Ab效价在整个实验过程中保持近乎最大水平。在实验过程中，辅有明矾或GLA-SE的TCCnic-12佐剂诱导的效价似乎稍高于辅有佐剂的KLHnic-22(图3A和3B)，而TCCnic-12和KLHnic100活性大部分是重叠的(图3C)。图4显示在最终加强注射之后3周收集的第160天终点效价。
对于所述佐剂，用TCCnic-12+GLA-SE免疫的小鼠刺激出的Ab应答比单独TCCnic-12高约100倍，且比TCCnic-12+明矾高约10倍。GLA-SE似乎改善了用KLHnic-22免疫的小鼠的应答率，但平均效价的差异不具统计学显著性。对于半抗原载体，TCCnic-12+GLA-SE刺激的抗体比KLHnic-22+GLA-SE多约10倍，而TCCnic-12和KLHnic-100似乎在GLA-SE的存在下是等同的。此外，在实验过程中，KLHnic-100+GLA-SE一贯地诱导高于KLHnic-22+GLA-SE的Ab效价。总体而言，这些结果证明，TCC半抗原载体能够有效地刺激小鼠中的抗尼古丁Ab应答。其还证实半抗原密度是偶联物疫苗免疫原性的重要变量的先前研究。这些研究进一步证实GLA-SE佐剂改善了抗尼古丁抗体应答。
在随后的实验中，检测了TCCnic-12+/-GLA-SE的剂量响应性，并测定了诱导最大Ab效价的最低抗原剂量(100ng)(图5)。该结果表明，能够响应半抗原载体的淋巴细胞的完全补充(fullcomplement)通过所述偶联物而接触抗原(primed)，并且，佐剂的存在扩大了克隆扩增和应答的下游效应相。在另一个实验中，测试了TCC是否诱导与常规尼古丁疫苗相似的抗载体Ab。在该实验中，小鼠用对照、KLHnic-22和KLHnic-100免疫，伴随与平均2、12或42个半抗原/三聚体偶联的TCC。如图6中所示，抗TCCAb的诱导相对于抗KHL效价随增加的半抗原密度而显著减少。该结果证明，半抗原密度在控制抗载体应答中的重要性，并表明相对于现有的尼古丁载体，TCC不太可能诱导中和Ab。
TCCnic功能性抗体应答：除了Ab效价以外，检测了用TCCnic-12诱导的Ab的质量。如图7中所示，其对尼古丁具有高度特异性，并且不结合生理浓度的可铁宁，尼古丁降解通路中丰度最高的代谢物，也不结合乙酰胆碱，内源性尼古丁受体配体。采用KLHnic-22和KLHnic-100获得类似的结果，并且观察到采用各佐剂没有特异性差异。还检测了这些抗体的亲和性(图8)。如Kd值的相对差异所示，无佐剂的TCCnic-12诱导的Ab的亲和性(4.2nM)远高于KLHnic-22(203nM)。明矾的添加对TCCnic-12应答没有明显影响，尽管其确实改善了KLHnic-22抗体亲和性(9.4nM)。在GLA-SE的存在下，用TCCnic-12免疫的小鼠中的Ab亲和性甚至有进一步提高(0.7nM)，并且比KLHnic-22+GLA-SE应答(11.8nM)高一个数量级。用KLHnic100+GLA-SE免疫的小鼠中诱导的尼古丁Ab的亲和性(1.0nM)也高于KLHnic-22+GLA-SE，并且等同于TCCnic-12+GLA-SE。
为了检测抗体功能，在免疫的小鼠的血清中测定尼古丁结合能力。如图9所示，TCCnic-12+GLA-SE和KLHnic-100+GLA-SE诱导最大结合能力，这如同预期，与其相应的抗体效价(图3)和亲和力(图8)相关联。作为对Ab功能的第二种检测，免疫的小鼠用等同于三支香烟的尼古丁剂量(0.05mg/kg)注射，5分钟之后，采用质谱来确定已在脑组织中累积的尼古丁的量(图10)。同样地，性能最佳的疫苗是TCCnic-12+GLA-SE和KLHnic100+GLA-SE，其中，相对于PBS对照动物，尼古丁向脑中的进入分别被抑制了91％和95％。其它构建体的抑制程度是：TCCnic-12+明矾为76％，KLHnic-22+GLA-SE为62％，而KLHnic-22+明矾为47％。当以明矾或GLA-SE作为佐剂时，TCCnic-12刺激的应答优于KLHnic-22，并且KLHnic-100+GLA-SE胜过KLHnic-22+GLA-SE。总体上，这些结果证明，TCCnic-12是用于诱导小鼠中功能性Ab效价的有效的半抗原载体。这些发现还证明，半抗原密度和佐剂的质量对于调节尼古丁疫苗功能而言具有重要作用。
疫苗佐剂通过促进抗原呈递细胞对抗原的摄取，并刺激控制白细胞招募至注射位点的先天通路来控制适应性T和B细胞应答的量级和质量[HuK等，BiosciTrends2012；6(2):52-6)。迄今，用于尼古丁疫苗临床研究的唯一佐剂是明矾，然而多项研究表明，相对于靶向APC上的先天模式识别受体的佐剂，明矾可能相对较弱[ReedSG等，NatMed.2013，19(12):1597-608)。结合细菌LPS、TLR-4的受体在生发中心形成的CD4T细胞调节、亲和性成熟和长效抗体分泌型浆细胞的产生中起关键作用[GarinA等，Immunity2010年7月23日，33(1):84-95；DeFrancoAL等，ImmunolRev.2012年5月；247(1):64-72；KomegaeEN等,PLoSOne.2013年8月5日；8(8):e71185)，并且如先前所示，用合成的TLR-4配体、GLA配制的佐剂是针对异源亚型H5N1流感病毒的保护性T细胞介导的抗体应答的有力刺激剂[Clegg等,PNAS如上；Clegg等,PLoSOne.2014年2月14日；9(2):e88979)。现显示，相对于明矾，GLA-SE在调节较高Ab效价、改善的Ab亲和力，和功能性抑制剂活性的显著增加中起主要作用。相比KLHnic-22，GLA-介导的抗体应答更大，并与TCCnic-12更一致的观察结果可能源于TCC中2个主要H2Db限制性辅助T细胞表位的替代。该合成具有限定的MHCII型表位的载体的能力为个性化疫苗创造了机会，所述个性化疫苗能够同时促进个体抗体应答并减少临床上观察到的血清Ab效价的大幅变异性。
总之，该实施例描述了两种已被开发的、能够显著改善抗成瘾性疫苗在人中的性能的重要工具。第一个是新型半抗原载体，其诱导优于传统载体的Ab应答。尽管多种合成的纳米颗粒支架和自组装合成囊泡已被描述[Kishimoto，K.等，2012)。SEL-068，一种用于戒烟和防止复吸的完全合成的纳米颗粒疫苗。刊于SRNT2012年会，休斯顿；Zaman，M等，2013Methods60，226-231；Lockner，J.W.等，2013Bioorganic&MedicinalChemistryLetters，23，975-978)，但其中没有一种像TCC这样设计简单，并且它们也没有显示这样的活性。第二个工具是佐剂GLA-SE的应用，其在增大抗尼古丁Ab效价、亲和性和功能方面远远优于明矾。该与显示添加TLR9配体CpG至明矾能够显著提高小鼠和食蟹猴中的功能性尼古丁抗体应答的先前工作相一致(McCluskieMJ等，IntImmunopharmacol.2013；16(1):50-6；McCluskieMJ等,《尼古丁和烟草研究学会2013》(SocietyforResearchonNicotineandTobacco2013),摘要,PA13-4)。
也可以组合所述各种实施方式以提供其他实施方式。本说明书中提及的和/或列于申请数据表单中的所有美国专利、美国专利申请公开文本、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公开文本均通过引用其全文纳入本文。所述实施方式的各方面可被修改，必要时可应用各种专利、申请和出版物的概念，以提供更多的实施方式。
根据上述详细说明可对实施方式进行这些和其他改变。总体而言，权利要求中所用的术语应不被认为是将权利要求限制到本说明书和权利要求中公开的具体的实施方式，而应认为是包括遵循与所列权利要求等同的完全范围的所有可能的实施方式。因此，权利要求并不受本公开内容限制。

Claims (15)

1.一种疫苗组合物，其包含：
(a)与载体蛋白偶联的一种或多种成瘾药物半抗原；
(b)药学上可接受的载体或赋形剂，和
(c)下式的脂质佐剂：
其中：
R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且
R2和R4是C12-C20烷基。
2.如权利要求错误！未找到引用源所述的疫苗组合物，其特征在于，R1、R3、R5和R6是十一烷基，且R2和R4是十三烷基。
3.如权利要求错误！未找到引用源所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物是水性制剂。
4.如权利要求错误！未找到引用源所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物的形式是水包油乳液、油包水乳液或微颗粒。
5.如权利要求错误！未找到引用源所述的疫苗组合物，其特征在于，所述成瘾药物半抗原选自下组：安非他命、脱氧麻黄碱、可卡因、咖啡因、尼古丁、巴比妥类、苯乙哌啶酮、苯并二氮、佐匹克隆、甲喹酮、喹唑啉酮，和鸦片或类鸦片镇痛剂。
6.如权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，所述苯并二氮选自下组：地西泮、阿普唑仑、氟硝西泮、三唑仑、替马西泮，和硝甲西泮。
7.如权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，所述鸦片或类鸦片镇痛剂选自下组：二乙酰吗啡、氟硝西泮、吗啡、可待因、阿片、海洛因、氧可酮、丁丙诺啡、氢化吗啡酮、芬太尼、哌替啶和美沙酮。
8.一种用于诱导针对成瘾性药物的免疫应答的方法，所述方法包括给予有此需要的患者权利要求1所述的疫苗。
9.一种用于治疗药物成瘾的方法，所述方法包括给予有此需要的患者治疗有效量的权利要求1所述的疫苗。
10.一种用于针对药物成瘾提高戒瘾率或降低复发率或同时实现两者的方法，所述方法包括给予有此需要的患者治疗有效量的权利要求1所述的疫苗。
11.如权利要求1所述的疫苗，其包含约2.5μg或更多的GLA/剂量疫苗。
12.如权利要求1所述的疫苗，其包含约2μg至约10μgGLA/剂量疫苗。
13.如权利要求1所述的疫苗，其包含约3μg至约8μgGLA/剂量疫苗。
14.如权利要求1所述的疫苗，其包含约4μg至约6μgGLA/剂量疫苗。
15.如权利要求1所述的疫苗，其包含约5μgGLA/剂量疫苗。
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