EA032441B1 - Вакцинные композиции против никотиновой зависимости - Google Patents

Abstract

Изобретение в целом относится к вакцинам против никотиновой зависимости. В частности, настоящее раскрытие относится к адъювантам для значительного усовершенствования иммунного ответа, возникающего против гаптенов никотина.

Description

Настоящее изобретение в целом относится к вакцинам против никотиновой зависимости. В частности, настоящее раскрытие относится к адъювантам для значительного усовершенствования иммунного ответа, возникающего против антигенов никотиновой зависимости.

Предпосылки

Нарушения при злоупотреблении аддиктивными веществами влекут за собой множество специфичных, хорошо известных осложнений, которые имеют как социальные, так и экономические последствия. Они включают смерть, заболевания, насилие, преступления, потерю работы, сниженную производительность, разрушение отношений и семей, а также распространение ВИЧ и других заболеваний, передаваемых половым путем. Экономическая нагрузка на общество в США от злоупотребления веществами (за исключением табака) по оценкам составило 98 миллиардов долларов США в 1992 году, последнем году, для которого доступны надежные данные (ТПе есопош1е сох!х оГ а1ео1ю1 апд дгид аЬихе ίη !1е Ипйед 81а!ех-1992, Иа1юпа1 1пх!1!и!е оп Эгид АЬихе). Эти расходы включают преступления (59,1 миллиарда долларов США), преждевременную смерть (14,6 миллиарда долларов США), сниженную производительность/происшествия на рабочем месте (14,2 миллиарда долларов США), социальное обеспечение (10,4 миллиарда долларов США), здравоохранение (5,5 миллиарда долларов США) и происшествия при автоперевозках. Эти расходы понесло в первую очередь правительство (46%), лица, злоупотребляющие веществами, и их семьи (44%). Хорошо известно, что злоупотребление веществами остается серьезной проблемой в обществе. В 1995 году, через три года после исследования в 1992 году, по оценкам ΝΙΌΑ, общественное бремя от злоупотребления веществами составило 110 миллиардов долларов США.

Использование веществ, вызывающих привыкание, рег хе может оказывать вредные эффекты на пользователя. Однако установлено, что аддиктивная природа этих веществ является ядром проблем, связанных с использованием таких веществ, и лежит в основе неспособности ни лечить индивидуумов с аддикцией, ни снижать распространенность никотиновой зависимости в обществе.

Аддиктивным веществом, наиболее широко используемым в мире, является табак. По оценкам, в мире существует 1,2 миллиарда курильщиков, в том числе 46 миллионов в США и 170 миллионов в Европейском союзе. Табачная зависимость представляет собой самую крупную одиночную причину злокачественных опухолей и заболеваний сердца, что ведет к оценочным 5 миллионам смертей в год (Ла, Р., 8ахе Лех Ьу соипйпд Ле деад. Ви11е1ш оГ Ле Аог1д Неа1Л Огдашхадоп. 2010. 88: стр. 161-240). Риски для здоровья и экономическое бремя для общества и системы здравоохранения, связанные с курением, ясны и неоспоримы. Каждый год в США почти половина всех курильщиков пытается бросить, хотя из-за крайне аддиктивной природы никотина цели достигают меньше 5% (Т1е сопхеднепсех оГ хтокшд: а герой оГ Ле 8нгдеоп'х Сепега1, И8А. 2004; доступно по адресу: хигдеопдепегакдох/КЬгагх/хтокшдсопхедиепсех/; Еюге, М.С., е! а1. Тгеадпд ТоЬассо Ихе апд Эерепдепсе. Ошск РеГегепсе Сшде Гог С11п1с1апх 2000; доступно по адресу: хигдеопдепега1.дох/1оЬассо/1оЬадгд.11т). Помощь при отказе от курения включает поддерживающее консультирование и замещение никотина, однако эти подходы не изменяют зависимость, и оценка через 12 месяцев после начала замещения никотина показывает удручающий успех в отказе от курения <10% (8!еад, Ь.Е., е! а1., №со!ше гер1асетеп! Легару Гог хтокшд сеххайоп. СосЛапе Эа1аЬахе оГ 8ух!ета!1с Веу1е^х, 2008(1): р. СЭ000146). Имеет место четкая неудовлетворенная медицинская потребность нейтрализовать биологические эффекты никотина в организме для того, чтобы помогать курильщикам преодолевать свою аддикцию.

В принципе, вакцины могут индуцировать высокоаффинные антитела, которые связывают никотин и препятствуют его прохождению через гематоэнцефалитический барьер и, следовательно, замыканию психоактивных эффектов никотина (Кшхеу, В.М., е! а1., АпЦ-дгид уассшех !о 1геа1 хиЬх!апсе аЬихе. 1ттипо1оду апд Се11 Вю1оду, 2009. 87(4): стр. 309-14; Ье8аде, М.С., е! а1., Сиггеп! х!а!их оГ 1ттипо1одю арргоасйех !о 1геа!шд !оЬассо дерепдепсе: уассшех апд шсодпе-хресШс ап!1Ьод1ех. Т1е ААР8 1оита1, 2006. 8(1): р. Е65-75; Могепо, А.У. апд Κ.Ό. 1апда, 1ттипорйагтасоЛегару: хассшакоп х!га!ед1ех ах а 1геа!теп! Гог дгид аЬихе апд дерепдепсе. Р1агтасо1оду, Вюсйет1х!гу, апд ВеЬауюг, 2009. 92(2): стр. 199-205; Ро1оха, Р. апд КЬ. ВепотоЛ, Тгеа!теп! оГ шсодпе аддю!юп: ргехеп! Легареидс ор!юпх апд р1ре1ше дехе1ортеп1х. Тгепдх ш Р11агтасо1од1са1 8с1епсех, 2011. 32(5): стр. 281-9). Они создают меньшие побочные эффекты, чем существующая лекарственная терапия против курения, и их можно безопасно комбинировать с другой лекарственной терапией. Вакцины против никотина прошли тестирование у человека (Сету, Е.Н. апд Т. Сету, Уассшех адатх! шсойпе. Нитап Уассшех, 2009. 5(4): стр. 200-5; ЕхсоЬаг-Сйауех, 1.1., е! а1., Тагдейпд шсойпе аддюйоп: Ле роххМйу оГ а Легареидс хассше. Эгид Иех1дп, Эехе1оршеп1 апд Тйегару, 2011. 5: стр. 211-24). В совокупности, все они выглядят безопасными, но их эффективность низка, что основано на образовании высоко вариабельных антител, индуцируемых у человека, необходимости повторно инъецировать (5-7х) большие количества антигена (100-500 мкг) в течение нескольких месяцев, и том факте, что титры антител снижаются со временем (Сотих, 1., е! а1., А уассше адатх! шсодпе Гог

- 1 032441 зтоктд сеззайоп: а гапдопихед сопкго11ед кпа1. Р1о8 Опе, 2008. 3(6): р. е2547; Накзикатъ Ό.Κ., ек а1., 1ттиподешаку апд зтоктд-сеззакюп оиксотез Гог а поуе1 шсокте 1ттипо1кегареи11с. СНшса1 Ркагтасо1оду апд Ткегареийсз, 2011. 89(3): стр. 392-9; Накзикапи, Ό.Κ., ек а1., ЗаГеку апд 1ттиподетс11у о£ а шсокте соп_)идаке уассте т сиггепк зтокегз. СНшса1 Ркагтасо1оду апд Ткегареидсз, 2005. 78(5): стр. 456-67; Маигег, Р., ек а1., А ккегареийс уассте £ог шсокте дерепдепсе: ргес11шса1 еГЕсасу, апд Рказе I заГеку апд 1ттиподетаку. Еигореап 1оита1 о£ 1ттипо1оду, 2005. 35(7): стр. 2031-40). Тем не менее, в эффективности наблюдаются тенденции. Реципиенты №сУАХ (никотин, конъюгированный с бактериальным экзопротеином А) с самым высоким образованием антител против никотина (верхние 30%) более вероятно, чем реципиенты плацебо (24,6% против 12,0%), достигают 8 недель непрерывной абстиненции (Накзикашц Ό.Κ., ек а1., ^типодетаку апд зтоктд-сеззайоп оиксотез Гог а поуе1 шсокте 1ттипок11егареик1с. С11шса1 Ркагтасо1оду апд Ткегареидсз, 2011. 89(3): стр. 392-9). К сожалению, №сУах не смог достичь основной конечной точки эффективности в недавнем исследовании фазы III (№Ы В|оркагтасеийса1з Аппоипсез Кези1кз о£ Р1гзк №сУАХ® Рказе III С1тюа1 Тпа1, С1оЬе №\\'з\\зге, 1и1у 18, 2011; и \\л\л\-.паЫ.сот) и его разработка сейчас под вопросом. Вакцинация против злоупотребляемых веществ представляет собой хорошую идею для тех, кто борется с аддикцией, однако для достижения надежного длительного образования антител необходимы значительные усовершенствования вакцинной технологии. Настоящее изобретение предоставляет это и другие преимущества.

Сущность изобретения

Один аспект настоящего изобретения относится к вакцинной композиции, которая содержит: один или более гаптенов никотина, конъюгированных с белком-носителем, причем белок-носитель представляет собой гемоцианин морского блюдца (КЬН); фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и липидный адъювант формулы

где К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой С11-С20 алкил; и К² и К⁴ представляют собой С12-С₂₀ алкил. В некоторых вариантах осуществления К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой ундецил и К² и К⁴ представляют собой тридецил. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой водный состав. В других вариантах осуществления композиция имеет форму эмульсии масло-в-воде, эмульсии водав-масле или микрочастицы.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения вакцинные композиции, описанные в настоящем описании, могут содержать приблизительно 2,5 мкг или более СЬА на дозу вакцины. В других вариантах осуществления вакцина содержит приблизительно от 2 мкг приблизительно до 10 мкг СЬА на дозу вакцины, или приблизительно от 3 мкг приблизительно до 8 мкг СЬА на дозу вакцины, или приблизительно от 4 мкг приблизительно до 6 мкг СЬ-А на дозу вакцины, или может содержать приблизительно 5 мкг СЬА на дозу вакцины.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу индукции иммунного ответа против никотина, который включает введение пациенту вакцинной композиции, описанной в настоящем описании, например, вакцинной композиции, которая содержит: один или более гаптенов никотина, конъюгированных с белком-носителем, причем белок-носитель представляет собой гемоцианин морского блюдца (КЬН); фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и липидный адъювант формулы:

где К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой С11-С20 алкил; К² и К⁴ представляют собой С!2-С₂₀ алкил.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу лечения никотиновой зависимости, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества вакцинной композиции, которая содержит: один или более гаптенов никотина, конъюгированных с белком-носителем, причем белок-носитель представляет собой гемоцианин морского блюдца (КЬН); фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и липидный адъювант формулы

- 2 032441

где К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой С11-С20 алкил; К² и К⁴ представляют собой С12-С₂о алкил.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к способу увеличения частоты отказа или уменьшения частоты рецидивов, или того и другого, в случае никотиновой зависимости, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества вакцинной композиции, описанной в настоящем описании, например, вакцины, описанной в настоящем описании, например, вакцинной композиции, которая содержит: один или более гаптенов никотина, конъюгированных с белкомносителем, причем белок-носитель представляет собой гемоцианин морского блюдца (КЕН); фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и липидный адъювант формулы:

где: К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой С11-С20 алкил; К² и К⁴ представляют собой С12-С₂₀ алкил.

Краткое описание фигур

На фиг. 1А представлен схема прайм-буст вакцинации, используемая для того, чтобы тестировать способность КЬН-никотин+ОЬА-8Е стимулировать превосходящее долгосрочное образование антител относительно вакцинного состава из квасцов и никотина. Стрелки вдоль нижней части показывают анализы, подлежащие осуществлению в каждый момент времени. Светлые стрелки: анализы титра, изотипа, авидности антител В-клеток (60, 621, 635). Темные стрелки: анализы Т-клеток - число ί'.Ό4 и фенотип (60, 610, 628). На фиг. 1В и фиг. 1С представлен титр антител против никотина в конечной точке у мышей, которых вакцинировали КЬН-конъюгированным никотином. Мыши, которых вакцинировали с использованием КЬН-никотина в составе с ОЕА-8Е, демонстрировали увеличение титров антител против никотина в конечной точке по сравнению с мышами, которых вакцинировали КЕН-никотином с квасца ми.

Фиг. 2. (А) Число аминокислот в нескольких носителях гаптенов (см. текст), включая ТСС 16. Число лизинов, доступных для конъюгации с гаптеном в каждом носителе приведено над столбцом. (В) Процентная доля лизинов в каждом белке-носителе.

Фиг. 3. Образование антител против никотина у иммунизированных мышей. Мышам С57ВЬ/6 (5/группа) инъецировали (60, 614, 6131) РВ8 или 2,5 мкг указанных конъюгированных носителей гаптенов и адъювантов и с помощью ЕЫ8А в сыворотках анализировали титры антител против никотина. Сравнения между группами проводили с помощью непарного двустороннего критерия Стьюдента; *р<0,004; **р<0,002.

Фиг. 4. Титры антител против никотина на сутки 160. Мышей С57ВЬ/6 (5/группа) иммунизировали (60, 614, 6146) с использованием РВ8 или 2,5 мкг указанных конъюгированных носителей гаптенов и адъювантов и с помощью ЕЬ18А анализировали сыворотку. Сравнения между группами проводили с помощью непарного двустороннего критерия Стьюдента; *р<0,003; **р<0,0001.

Фиг. 5. Мышей С57ВЬ/6 (5/группа) иммунизировали указанными дозами ТССше-12 в отсутствие (А) и в присутствии (В) ОЬА-8Е, и на 635 в сыворотке анализировали антитела против никотина с помощью ЕЬ18А.

Фиг. 6. Образование антител против носителя у иммунизированных мышей. Мышам С57ВЬ/6 (5/группа) инъецировали (60, 614) указанные носители в присутствии ОЬА-8Е. На сутки 28 сыворотку от каждой группы анализировали на антитела, которые связывали соответствующий неконъюгированный носитель гаптенов.

Фиг. 7. Специфичность связывания никотина с антисыворотками, собранными у иммунизированных мышей ТССше-12, определяли посредством конкурентного ЕЬ18А для никотина, котинина и ацетилхолина. Значения 1С₅₀ для котинина были 1000-кратно больше, чем для никотина, а для ацетилхолина не могли быть вычислены из-за недостатка ингибирования.

Фиг. 8. Относительные аффинности антител против никотина, индуцированных с помощью ТССше-12. Мышам С57ВЬ/6 (5/группа) инъецировали (60, 614, 6146) или РВ8 или 2,5 мкг указанных конъюгированных носителей гаптенов и адъювантов. Геометрические средние значения К6 определяли с помощью конкурентного ЕЬ18А.

- 3 032441

Фиг. 9. Способность к связыванию никотина сыворотки определяли посредством измерения концентраций связанного и свободного никотина при равновесии. Значения КЕ (фиг. 8) использовали для того, чтобы вычислять полную концентрацию антител в соответствии с уравнением закона действующих масс: ΚΕ=[Νίο][Ι§0]/[Νίο-Ι§0]. Сравнения между группами проводили с помощью непарного двустороннего критерия Стьюдента; *р<0,04; **р<0,01; ***р<0001.

Фиг. 10. Функция антител против никотина у мышей. Мышам С57ВЕ/6 (5/группа) инъецировали (Е0, Е14, Е146) или РВ8 или 2,5 мкг указанных конъюгированных носителей гаптенов и адъювантов. Мышам (5/группа) инъецировали на Е160 дозу тартрата никотина, эквивалентную 3-м сигаретам (1,2 мкг). Пятью минутами позже мышей умерщвляли, удаляли ткани и с помощью масс-спектрометрии измеряли количества никотина в головном мозге (А); и сыворотке (В); *р<0,05; **р<0,007; ***р<0,0003.

Подробное описание

Настоящее изобретение в целом относится к усовершенствованным вакцинам против никотина. Вакцины, описанные в настоящем описании, обеспечивают превосходящее образование антител против никотина для использования в вакцинах, чтобы повышать частоту отказа и снижать частоту рецидивирования при попытках лечения злоупотребления никотином.

Термин гаптен, как используют в настоящем изобретении, относится к низкомолекулярному органическому соединению, которое не способно вызывать иммунный ответ самостоятельно, но будет вызывать иммунный ответ после прикрепления к молекуле-носителю.

В некоторых вариантах осуществления злоупотребляемые вещества, используемые в вакцинах, получаемых в настоящем описании, представляют собой гаптены, конъюгированные с молекулойносителем. Молекулы-носители, предполагаемые для применения в настоящем изобретении, включают любой подходящий иммуногенный белок или полипептид. Белок-носитель для применения в настоящем изобретении в целом содержит молекулу, которая содержит по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп, который способен стимулировать Т-клетки субъекта, который впоследствии индуцирует В-клетки для того, чтобы продуцировать антитела против всей молекулы конъюгата гаптен-носитель. Термин эпитоп, как используют в настоящем описании, включает любую детерминанту на антигене, которая отвечает за его специфичное взаимодействие с антителом. Эпитоп также может относиться к детерминанте на антигене, который распознают Т-клетки в контексте молекулы МНС. Эпитопные детерминанты, распознаваемые антителами, обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекулы, например, аминокислот или боковых цепей сахаров, и имеют специфичные трехмерные структурные характеристики, а также специфичные зарядовые характеристики. Полагают, что для того, чтобы обладать иммуногенными свойствами, белок или полипептид должен быть способен стимулировать Т-клетки. Однако возможно, что белок-носитель, который не содержит Т-клеточный эпитоп, также может быть иммуногенным.

Белок-носитель в целом достаточно инороден для того, чтобы вызывать сильный иммунный ответ на вакцину. В частности, используемый белок-носитель представляет собой гемоцианин морского блюдца (КЬН).

Для создания непосредственного конъюгата гаптен прикрепляют непосредственно к носителю, с использованием линкера или без него. Например, один никотиновый гаптен можно прикреплять к каждой доступной аминогруппе на носителе. Основные способы для получения непосредственного конъюгата гаптенов с белками-носителями, используя гомобифункциональный или гетеробифункциональный сшиватель описаны, например, у С. Т. Негтаивои в Вюсоищдаке Тсс1тк|ис5. АсаЕет1с Ргевв (1996) и у Рюк и Веште! в Соищда1с Уассшев. СопкпЬи. М1сгоЬю1. 1ттипо1., Кагдег, Вава1 (1989) том 10, 48-114. При непосредственной конъюгации с использованием бифункциональных сшивателей, молярное отношение гаптена к белку ограничено числом функциональных групп, доступных на белке для вступления в специфичную химическую реакцию конъюгации. Например, для белка-носителя, который содержит число п остатков лизина, теоретически может быть п+1 первичных аминов (включая концевую аминогруппу), которые доступны для реакции с карбоксильной группой линкера. Таким образом, используя эту процедуру непосредственной конъюгации, продукт будет иметь п+1 образованных амидных связей, т.е., максимум п+1 прикрепленных гаптенов.

Специалист в данной области признает, что в зависимости от концентрации реагентов, используемых для того, чтобы конъюгировать гаптен с белком-носителем, и свойств белка-носителя, отношение гаптена к носителю будет варьировать. Также, в пределах заданного препарата конъюгата гаптенноситель будут иметь место вариации в соотношении гаптен/носитель для каждого отдельного конъюгата. В качестве одного из примеров и как описано в примерах в настоящем описании, КЬН имеет множество остатков лизина для связывания гаптенов, делающее возможным высокое соотношение гаптен:белок-носитель, что увеличивает вероятность образования специфичных к гаптену антител. Таким образом, различное число молекул никотина можно конъюгировать с КЬН, например, от 15 до 100 молекул гаптена или больше. В качестве другого примера, экзопротеин А в теории имеет 15 аминов, доступных для конъюгации с гаптеном. Однако установлено, что когда З'-аминометилсукцинилникотин конъюгировали с этим белком, к каждому экзопротеину-носителю прикрепляли в диапазоне от 11 до 17 никотиновых гаптенов в одном препарате конъюгата. Этот диапазон определяли экспериментально с исполь

- 4 032441 зованием газовой фильтрационной хроматографии и измерения увеличения поглощения УФ при 260 нм. 17 никотинов прикрепляли к некоторым носителям, поскольку никотиновый гаптен может прикрепляться к неаминным фрагментам на носителе. Примеры неаминных фрагментов, к которым можно прикреплять гаптены, включают, но не ограничиваясь этим, фрагменты -8Н и -ОН. Однако частота возникновения этих побочных реакций низка. В некоторых вариантах осуществления гаптен аддиктивного вещества можно прикреплять к матрице (например, олигомерные и полимерные полипептиды), чтобы увеличивать число доступных сайтов прикрепления белка-носителя. Такие матрицы описаны, например, в И820020004208.

Существует большое число функциональных групп, которые можно использовать для того, чтобы облегчать сшивку или конъюгацию носителя с низкомолекулярным соединением, таким как гаптен. Они включают функциональные фрагменты, такие как карбоновые кислоты, ангидриды, смешанные ангидриды, ацилгалогениды, ацилазиды, алкилгалогениды, Ν-малеимиды, сложные иминоэфиры, изоцианаты, амины, тиолы и изотиоцианаты, а также другие, известные специалисту в данной области. Эти фрагменты способны к образованию ковалентной связи с реакционноспособной группой белковой молекулы. В зависимости от используемого функционального фрагмента, реакционноспособная группа может представлять собой Е аминогруппу остатка лизина или тиоловую группу на белке-носителе или модифицированной молекуле белка-носителя, которая, когда вступает в реакцию, ведет к формированию амидной, аминной, тиоэфирной, амидинной, карбамидной или тиокарбамидной связи. Специалист в данной области признает, что можно использовать другие подходящие активирующие группы и способы конъюгации. См., например, Жопд, Сйет1з!гу о£ Рго!еш Сощидайоп апб Сгозз-Еткшд, СКС Ргезз, 1пс. (1991). См. также Негшапзоп, ВЮСОШИОАТЕ ΤΕίΊΙΝΙΟυΐ'Έ, Асабетю Ргезз: 1996 и О1ск и Веигге! в Сощида!е Уасс1пез. Соп!пЬи. М1сгоЬю1. 1ттипо1., Кагдег, Ваза1 (1989) том 10, 48-114. Дополнительные способы конъюгации гаптенов с белками-носителями также см. в МеФобз Мо1 Меб. 2008, 138:167-82.

В качестве одного из примеров, в некоторых вариантах осуществления никотин ковалентно сшивают с белками, используя такие различные химические реакции, как описано в Могепо, Α.Υ. апб Κ.Ό. 1апба, Рйагтасо1оду, Вюсйет1з!гу, апб Вейауюг, 2009. 92(2): стр. 199-205; и бе Уййегз, 8.Н., е! а1., Уассше, 2010. 28(10): стр. 2161-8. Например, можно использовать избирательное бромирование никотина (Ееупег, Е.С., е! а1., Кедюзе1ес!1уе С-2 апб С-6 зиЬзйШйоп о£ (8)-шсо!ше апб тсойпе бепуайуез. Огдатс Еейегз, 2005. 7(24): стр. 5457-60), за которым следует восстановление сочетанием по Кастро-Стивенсу со сложным ^-алкинилэфиром (Зуепззоп, Т., е! а1., №со!ше 1ттиподеп. 1999 (Ж) 99/61054)) до алкана и, наконец, снятие защитных групп до свободной кислоты.

В некоторых вариантах осуществления линкерный фрагмент используют при конъюгации гаптена с белком-носителем. В связи с этим в некоторых вариантах осуществления линейные линкерные фрагменты используют для конъюгации гаптенов с белками-носителями. В других вариантах осуществления циклические или разветвленные линкеры используют для конъюгации гаптенов с белками-носителями. Иллюстративным линкером является сукциниловый фрагмент. Другим примером линкера является ΑΌΗ. С этой целью у бе Уййегз, 8.Н., е! а1., Уассше, 2010. 28 (10):2161-2168 описан гибкий фрагмент.

Таким образом, конъюгаты гаптен-носитель, описанные в настоящем описании для использования в вакцинах против никотина, получают посредством реакции одного или нескольких гаптенов с белкомносителем, чтобы получать конъюгат гаптен-носитель, который способен стимулировать Т-клетки, что ведет к Т-клеточной пролиферации и высвобождению медиаторов, которые активируют специфичные Вклетки для того, чтобы стимулировать образование антител в ответ на иммуногенный конъюгат гаптенноситель. Определенные антитела, индуцированные в ответ на конъюгат гаптен-носитель, будут специфичны к гаптенной части конъюгата гаптен-носитель. Настоящее изобретение относится к применению различных подходящих комбинаций гаптенов с белками-носителями для использования в лечении никотиновой зависимости, в том числе никотиновой аддикции.

Адъюванты

Адъюванты, пригодные для использования в соответствии с настоящим раскрытием, включают любое из следующего. Не ограничивая изобретение теорией, полагают, что адъюванты, описанные в настоящем описании, нацелены на ТЕК4. ТЕК4 уникален среди семейства ТЕК в том отношении, что передача сигнала вниз по каскаду происходит как через МуО88-зависимый путь, так и через ТК1Е-зависимый путь. В совокупности эти пути стимулируют созревание ОС, процессирование/представление антигена, примирование Т-клеток и образование цитокинов (например, ΙΕ-12, ΙΕΝα/β и ТУ^;Ш (см., например, Аазак1 е! а1., Ν!. 1ттипо1. 5:987 (2004)).

- 5 032441 или его фармацевтически приемлемая соль, где К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой Сц-С20 алкил; Я² и Я⁴ представляют собой С12-С₂₀ алкил; в более конкретном варианте осуществления СЬЛ имеет формулу (1а), изложенную выше, где Я¹, Я³, Я⁵ и Я⁶ представляют собой С11-С14 алкил; Я² и Я⁴ представляют собой С12-С₁₅ алкил; в еще более конкретном варианте осуществления, СЬЛ имеет формулу (1а), изложенную выше, где Я¹, Я³, Я⁵ и Я⁶ представляют собой С11 алкил или ундецил; Я² и Я⁴ представляют собой С13 алкил или тридецил.

Как используют в настоящем описании, алкил обозначает неразветвленную цепь или разветвленный, нециклический или циклический, ненасыщенный или насыщенный алифатический углеводород, который содержит от 1 до 20 углеродных атомов, и в определенных предпочтительных вариантах осуществления содержит от 11 до 20 углеродных атомов. Репрезентативные алкилы с насыщенной неразветвленной цепью включают метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил и т.п., в том числе ундецил, додецил, тридецил, тетрадецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил и т.д.; при этом насыщенные разветвленные алкилы включают изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил и т. п. Репрезентативные насыщенные циклические алкилы включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и т.п.; при этом ненасыщенные циклические алкилы включают циклопентенил и циклогексенил и т.п. Циклические алкилы также обозначают в настоящем описании как гомоциклы или гомоциклические кольца. Ненасыщенные алкилы содержат по меньшей мере одну двойную или тройную связь между смежными углеродными атомами (обозначают как алкенил или алкинил, соответственно). Репрезентативные алкенилы с неразветвленной цепью и разветвленные алкенилы включают этиленил, пропиленил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутиленил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-1-бутенил, 2метил-2-бутенил, 2,3-диметил-2-бутенил и т.п.; при этом репрезентативные алкинилы с неразветвленной цепью и разветвленные алкинилы включают ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил, 3-метил-1-бутинил и т.п. Например, С₁₈-С₁₃ алкил и С₆-С₁₁ алкил обозначает алкил, как определено выше, который содержит 8-13 или 6-11 углеродных атомов, соответственно.

В публикации патента США № 2008/0131466 предусмотрены составы, такие как водный состав (АЕ) и стабильные эмульсионные составы (8Е) для адъюванта СЬА, где эти составы можно использовать для любого из адъювантов формулы (I).

Комбинация с другими адъювантами

Адъювант можно комбинировать с дополнительным вспомогательным адъювантом и одним или несколькими антигенами. Например, вспомогательный адъювант можно выбирать по его основному механизму действия, в качестве или агониста ТЬЯ4, или агониста ТЬЯ8 или агониста ТЬЯ9. Альтернативно, или в дополнение, вспомогательный адъювант можно выбирать по его свойствам носителя; например, вспомогательный адъювант может представлять собой эмульсию, липосому, микрочастицу или квасцы.

Адъюванты, используемые в данной области для того, чтобы создавать иммунный ответ, включают соли алюминия, такие как квасцы (сульфат алюминия калия), или другие адъюванты, содержащие алюминий. Однако адъюванты, содержащие алюминий, склонны вызывать Т112 ответ и поэтому могут быть менее предпочтительными.

Дополнительные адъюванты включают 0821 и ΟιιίΙΑ. которые содержат тритерпеновый гликозид или сапонин, выделенный из коры мыльного дерева Ош11а)а каропапа, найденного в Южной Америке (см., например, Кспкй с! а1., ίη Уасстс Эскщп: ТНс 8иЬиш1 апб АбщуаШ Арргоасй (под редакцией Роус11 и №утап, Р1спит Ргскк, ΝΥ, 1995); патент США № 5057540), 3-ЭМР, полимерные или мономерные аминокислоты, такие как полиглутаминовая кислота или полилизин. Другие подходящие адъюванты включают эмульсии масла в воде (такие как сквален или арахисовое масло) (см., например, 81ои1с с! а1., Ν. Епд1. 1. Мсб. 336, 86-91 (1997)). Другим подходящим адъювантом является СрС (см., например, К1штап, 1п!. Ясу. 1ттипо1. 25(3-4): 135-54 (2006); патент США № 7402572; европейский патент № 772 619).

Подходящими адъювантами другого класс являются эмульсионные составы масло-в-воде (также называемые в настоящем описании стабильными эмульсиями масла в воде). Такие адъюванты можно необязательно использовать с другими специфичным иммуностимулирующими средствами, такими как мурамилпептиды (например, Ν-ацетилмурамил-Ь-треонил-О-изоглутамин (1ЙГ-МЭР), Ν-ацетил-нормурамил-Ь-аланил-О -изоглутамин (по г-МЭР), N-ацетилмурамил-Е-аланил-Э-изоглутаминил-Е-аланин-2(1',2'-дипальмитоил-кп--глицеро-3 -гидроксифосфорилокси)-этиламин (МТР-РЕ), Ν-ацетилглюкозаминил№ацетилмурамил-Е-А1-Э-изоглутамил-Е-аланил-дипальмитоксипропиламид (ЭТР-ЭРР) ТйсгАт1бс™), или другие компоненты бактериальной клеточной стенки. Эмульсии масло-вводе включают (1) МЕ59 (νθ 90/14837), содержащий 5% сквалена, 0,5% Т\уссп 80, и 0,5% 8рап 85 (необязательно содержит различны количества МТР-РЕ), формулированный в субмикрометровых частицах с использованием микрофлюидайзер, такой как микрофлюидайзер Мобс1 ΗΟΥ (Мюгойшбюк, №\\1оп Макк.); (2) 8АЕ, содержащий 10% сквалана, 0,4% Туссп 80, 5% блокировнный плюроником полимер Ь121 и йг-МВР, или микрофлюидизированный до субмикрометровой эмульсии или энергично перемешанный для того, чтобы создавать эмульсию с частицами большего размера, и (3) адъювантную систему Я1Ь1 (ЯА8), (Я1Ь1 1ттипосйст, НатШоп, МТ), которая содержит 2% сквалена, 0,2% Туссп 80 и один или более компонентов бактериальной клеточной стенки из группы, состоящей из монофосфориллипида А (МРЬ), димиколата тре

- 6 032441 галозы (ТОМ) и каркаса клеточной стенки (СА8), предпочтительно МРЬ+СА8 (Ое!ох™). Также, как описано выше, подходящие адъюванты включают сапониновые адъюванты, такие как 811ти1оп™ (0821. Ас.|ш1а. АогсеЧег Ма§8.) или частицы, образуемые из них, такие как 18СОМ (иммуностимулирующие комплексы) и 18СОМАТК1Х. Другие адъюванты включают полный адъювант Фрейнда (СТА) (который подходит для использования, не относящемуся к человеку, но не подходит для использования у человека) и неполный адъювант Фрейнда (1ТА). Другие адъюванты включают цитокины, такие как интерлейкины (1Ь-1, 1Ь-2 и 1Ь-12), макрофагальный колониестимулирующий фактор (М-С8Т) и фактор некроза опухоли (ΤΝΤ).

В одном конкретном варианте осуществления адъювант представляют собой эмульсию, которая адъювантные свойства. Такие эмульсии включают эмульсии масло-в-воде. Неполный адъювант Фрейнда (1ТА) является одним из таких адъювантов. Другой подходящей эмульсией масло-в-воде является адъювант МР-59™, который содержит сквален, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат (также известный как поверхностно-активное вещество Ттеееп™ 80), и сорбитантриолеат. Сквален представляет собой природное органическое соединение, исходно полученное из масла печени акулы, хотя также доступное из растительных источников (в первую очередь растительные масла), в том числе семени амаранта, рисовой мучки, проростков пшеницы и оливы. Другие подходящие адъюванты представляют собой адъюванты МоШашбс™ (8ерр1с 1пс., Еа1гПс1б N1), в том числе Моп1ап1бе™ 18А 50У, который представляет собой адъювант на основе минерального масла; Моп1ашбе™ 18А 206; и Моп1ашбе™ 1М8 1312. Если минеральное масло может присутствовать во вспомогательном адъюванте, то в одном из вариантов осуществления масляный компонент (компоненты) композиций, описанных в настоящем описании, представляет собой метаболизируемое масло.

Эмульсионные системы также можно использовать при формулировании композиций по настоящему изобретению. Например, описано множество одно- или многофазных эмульсионных систем. Предложено использовать эмульсионные адъюванты масло-в-воде рег 5С в качестве адъювантной композиции (ЕР 0 399 843В), а также комбинации эмульсий масло-в-воде и других активных средств описаны в качестве адъювантов для вакцин (АО 95/17210; АО 98/56414; АО 99/12565; АО 99/11241). Описаны другие масляные эмульсионные адъюванты, такие как эмульсии вода-в-масле (патент США № 5422109; ЕР 0 480 982 В2) и эмульсии вода-в-масле-в-воде (патент США № 5424067; ЕР 0 480 981 В). Масляные эмульсионные адъюванты для использования в настоящем изобретении могут быть натуральными или синтетическими и могут быть минеральными или органическими. Примеры минеральных и органических масел будут очевидны для специалиста в данной области.

В конкретном варианте осуществления композиция по изобретению содержит эмульсию масло-вводе, где 6ЬА встроен в масляную фазу. В другом варианте осуществления композиция по изобретению содержит эмульсию масло-в-воде, где СЬА встроен в масляную фазу и где присутствует дополнительный компонент, такой как вспомогательный адъювант, агонист ТЕК. или тому подобное, как описано в настоящем описании.

Для того чтобы какая-либо композиция масло-в-воде подходила для введения человеку, масляная фаза эмульсионной системы предпочтительно содержит метаболизируемое масло. Значение термина метаболизируемое масло хорошо известно в данной области. Метаболизируемый можно определять как способный подвергаться преобразованию посредством метаболизма (Оог1апб'8 Шийгакб Мебюа1 ОюНопагу, А. В. 8аипбсг§ Сотрапу, 25-е издание (1974)). Масло может представлять собой какое-либо растительное масло, рыбий жир, животное масло или синтетическое масло, которое не токсично для реципиента и способно подвергаться преобразованию посредством метаболизма. Орехи (например, арахисовое масло), семена и злаки представляют собой обыкновенные источники растительных масел. Синтетические масла также представляют собой часть по данного изобретения и могут включать коммерчески доступные масла, такие как NΕОΒΕΕ® и другие.

Сквален (2,6,10,15,19,23-гексаметил-2,6,10,14,18, 22-тетракозагексаен), например, представляет собой насыщенный жир, который находят в больших количествах в масле печени акулы и в более низких количествах в оливковом масле, масле проростков пшеницы, масле рисовой мучки и дрожжах, и является особенно предпочтительным маслом для использования в этом изобретении. Сквален представляет собой метаболизируемое масло благодаря тому факту, что он является промежуточным продуктом биосинтеза холестерина (справочник Мегск, 10-е издание, запись № 8619). Особенно предпочтительными масляными эмульсиями являются эмульсии масло-в-воде и, в частности, эмульсии сквалена в воде. Кроме того, наиболее предпочтительные масляные эмульсионные адъюванты по настоящему изобретению содержат антиоксидант, который предпочтительно представляет собой альфа-токоферол масла (витамин Е, ЕР 0 382 271 В1). В АО 95/17210 и АО 99/11241 раскрыты эмульсионные адъюванты на основании сквалена, альфа-токоферола и ТАΕΕN® 80, необязательно сформулированные с иммуностимуляторами 0821 и/или 30-МРЬ (которые рассмотрены выше). В АО 99/12565 раскрыто усовершенствование этих скваленовых эмульсий с добавлением стерина в масляную фазу. Дополнительно триглицерид, такой как трикаприлин (С₂₇Н₅₀О₆), можно добавлять в масляную фазу для того, чтобы стабилизировать эмульсию (АО 98/56414).

- 7 032441

Размер масляных капель, которые находят в стабильной эмульсии масло-в-воде, предпочтительно меньше 1 мкм, может находиться в диапазоне, по существу, 30-600 нм, предпочтительно, по существу, приблизительно 30-500 нм в диаметре и наиболее предпочтительно по существу 150-500 нм в диаметре и, в частности, приблизительно 150 нм в диаметре, как измеряют с помощью фотонно-корреляционной спектроскопии. В связи с этим, 80% масляных капель по числу должны находиться в предпочтительных диапазонах, более предпочтительно больше чем 90% и наиболее предпочтительно больше чем 95% масляных капель по числу находятся в пределах заданных диапазонов размеров.

Количества компонентов, присутствующих в масляных эмульсиях по настоящему изобретению стандартно находятся в диапазоне от 2 до 10% масла, такого как сквален; и, когда присутствует, от 2 до 10% альфа-токоферола; и от 0,3 до 3% поверхностно-активного вещества, такого как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат.

Предпочтительно соотношение масла к альфа-токоферолу равно или меньше чем 1, поскольку это обеспечивает более стабильную эмульсию. 8раи 85 также может присутствовать в количестве приблизительно 1%. В некоторых случаях может быть полезно, чтобы вакцины по настоящему изобретению дополнительно содержали стабилизатор.

Способ получения эмульсий масло-в-воде хорошо известен специалисту в данной области. Обыкновенно способ включает смешивание масляной фазы с поверхностно-активным веществом, таким как раствор ΡΒ8/Τ\νΕΕΝ80®. после чего следует гомогенизация с использованием гомогенизатора. Например, способ, который включает прохождение смеси один раз, два раза или больше раз через иглу шприца, будет подходящим для гомогенизации небольших объемов жидкости. В равной мере, процесс эмульсификаци в микрофлюидайзере (микрогидродинамический аппарат М1108, максимум 50 проходов, в течение периода в 2 минуты при максимальном входном давлении 6 бар (выходное давление приблизительно 850 бар)) может быть адаптирован для получения меньших или больших объемов эмульсии. Эту адаптацию можно осуществлять посредством стандартных экспериментов, которые включают измерение получаемой эмульсии до тех пор, пока масляные капли в препарате не достигнут необходимого диаметра.

Примеры иммунопотенциаторов, которые можно использовать при практическом осуществлении способов, описанных в настоящем описании, в качестве вспомогательных адъювантов, включают: МРЬ™; МЭР и производные; олигонуклеотиды; двухцепочечную РНК; альтернативные патогенассоциированные молекулярные паттерны (РАМР); сапонины; низкомолекулярные иммунопотенциаторы (8М1Р); цитокины; и хемокины.

В одном из вариантов осуществления вспомогательный адъювант представляет собой адъювант МРЬ™, который коммерчески доступен в 61ахо8тййК1ше (исходно разработан в КгЫ 1штииоСйет Векеагсй, 1пс. НатШоп, МТ). См., например, Шпсй апб Муегк, глава 21 в Уассше Эекщп: Тйе 8иЬипй апб Абщуап! Арргоасй, под редакцией Ро\се11 и №\\'тап, Р1епит Ргекк, №\ν Уогк (1995). С адъювантом МРЬ™ связаны и также подходят в качестве вспомогательных адъювантов для использования в композициях и способах, описанных в настоящем описании, адъювант А802™ и адъювант А804™. Адъювант А802™ представляет собой эмульсию масло-в-воде, которая содержит и адъювант МРЬ™ и адъювант Р8-21™ (сапониновый адъювант, рассмотренный в настоящем описании в другом месте). Адъювант А804™ содержит адъювант МРЬ™ и квасцы. Адъювант МРЬ™ получают из липополисахарида (ЬР8) 8а1топе11а тшпекоШ В595 посредством обработки ЬР8 слабой кислотой и основного гидролиза, после чего следует очистка модифицированного ЬР8.

В другом варианте осуществления вспомогательный адъювант представляет собой сапонин, такой как тот, который получен из коры дерева вида Ош11а)а каропапа, или модифицированный сапонин (см., например, патенты США №№ 5057540; 5273965; 5352449; 5443829; и 5560398). Продукт адъювант ρδ21™, продаваемый в Апйдешск, 1пс. Ьех1пд1оп, МА, представляет собой образцовый сапонинсодержащий вспомогательный адъювант, который можно использовать с адъювантом формулы (I). Альтернативными вспомогательными адъювантами, родственными сапонину, является семейство адъювантов 18СОМ™, исходно разработанных в йсоЮс (8\гебеп) и типично формируемых из сапонинов, получаемых из Ош11а)а каропапа, или синтетических аналогов, холестерина и фосфолипида, из них всех формируют структуру наподобие медовых сот.

В еще одном другом варианте осуществления вспомогательный адъювант представляет собой цитокин, который функционирует в качестве вспомогательного адъюванта (см., например, Ьш е1 а1., С1ш. 1пГесЕ Όίκ. 21 (6):1439-49 (1995); Тау1ог, 1п£ес1. 1ттип. 63 (9): 3241-44 (1995); и Ещ1тех, глава 14 в Уассше Абщуап® апб Эейуегу 8у81етк, 1ойп Абеу & 8опк, 1пс. (2007)). В различных вариантах осуществления цитокин может представлять собой, например, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (6М-С8Е) (см., например, Сйапде е1 а1., Неша1о1оцу 9(3):207-15 (2004); ЭгапоГГ, 1ттипо1. Веу. 188:147-54 (2002); и патент США 5679356); или интерферон, такой как интерферон I типа (например, интерферон-α (ΙΕΝ-α) или интерферон-β (ΙΕΝ-β)), или интерферон II типа (например, интерферон-γ (ΙΕΝ-γ) (см., например, Воейт е1 а1., Апп. Веу. Iттипо1. 15:749-95 (1997); и Тйеой1орои1ок е1 а1., Апп. Веу. Iттипо1. 23:307-36 (2005)); интерлейкин, в частности, содержащий интерлейкин-1а (Ш-Ш), интер

- 8 032441 лейкин-ΐβ (№-1β), интерлейкин-2 (1Б-2) (см., например, Νοίδοη. 1. 1ттипо1. 172(7):3983-88 (2004); интерлейкин-4 (№-4), интерлейкин-7 (№-7), интерлейкин-12 (№-12) (см., например, РогИеЦе с1 а1., Сапсег 1ттипо1. 1ттипо№ег. 52(3):133-44 (2003); и ТппсЫеп, Ναι. Кеу. 1ттипо1. 3(2): 133-46 (2003)); интерлейкин15 (11-15), интерлейкин-18 (№-18); лиганд тирозинкиназы 3 печени плода (Е1!3Б) или фактор некроза опухоли а (ΤΝΡα). Адъювант И§БР, такой как адъювант формулы (I), можно совместно формулировать с цитокином перед комбинацией антигена вакцины, или антиген, адъювант И8БР (например, адъювант формулы (I)) и цитокинный вспомогательный адъювант можно формулировать отдельно и затем объединять.

В других некоторых вариантах осуществления адъювант и конъюгат антигена(антигенов)/гаптена злоупотребляемого вещества упаковывают и поставляют в отдельных сосудах. Обычно с каждой композицией упаковывают подходящие этикетки, которые указывают предполагаемое терапевтическое применение.

Вакцины

В некоторых вариантах осуществления способы включают введение вакцинной композиции достаточное число раз для того, чтобы вызывать эффективное образование антител, чтобы блокировать эффекты никотина. В одном из вариантов осуществления способы включают введение вакцины один раз или в других вариантах осуществления больше чем один раз субъекту, в некоторых вариантах осуществления точно два раза или по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, пять, шесть, семь или больше раз субъекту.

В одном из аспектов настоящее раскрытие предусматривает способы введения вакцин по раскрытию, которые содержат ОБА и никотин или его производное (которое может быть в форме гаптена аддиктивного вещества, конъюгированного с белком-носителем), чтобы индуцировать иммунный ответ против злоупотребляемого вещества, предпочтительно индуцировать пролонгированные антитела, которые блокируют активность никотина. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение двух доз вакцины, например, приблизительно через 3 недели. Период времени между указанными двумя дозами может находиться в диапазоне приблизительно от 3 недель до 5 недель или составлять приблизительно 1 месяц, приблизительно 6 недель, приблизительно 2 месяца, приблизительно 3 месяца, приблизительно 4 месяца, приблизительно 5 месяцев или приблизительно 6 месяцев.

Вакцины вводят через любой парентеральный путь доставки, известный в данной области, например, через внутримышечную, подкожную или внутрикожную инъекцию или через безыгольную инъекцию. Вакцины можно формулировать для введения любого подходящего типа, предпочтительно для внутримышечной, подкожной или внутрикожной инъекции или безыгольной инъекции.

Жидкая вакцина может включать, например, одно или несколько из следующего: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, солевой раствор, предпочтительно физиологический раствор, раствор Рингера, изотонический хлорид натрия, жирные масла, которые могут служить в качестве растворителя или суспендирующей среды, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные средства; антиоксиданты; хелатирующие средства; буферы и средства для корректировки тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Жидкую композицию можно заключать в ампулы, одноразовые шприцы или сосуды с множеством доз, выполненные из стекла или пластмассы. Использование физиологического раствора является предпочтительным, а инъецируемая фармацевтическая композиция предпочтительно является стерильной.

Количество белка-носителя, конъюгированного с гаптеном, в каждой дозе вакцины выбирают как количество, которое индуцирует иммунопротективный ответ без значительных нежелательных побочных эффектов в типичных вакцинах. Подходящие диапазоны доз может определять посредством опытный клиницист, но в целом они составляют от 0,01 до 10 мг/доза и могут составлять от 0,1 до 1,0 мг/доза. В целом после одной дозы вакцины образование антител против чужеродного антигена у человека занимает две или более недель, и в целом необходимо несколько доз вакцины, вводимых через несколько недель для того, чтобы индуцировать высокие длительные титры антител, такие как те, которые желательны для вакцины против аддиктивного вещества, такой как вакцина против никотина для того, чтобы содействовать отказу от курения. Можно осуществлять мониторинг образования антител в крови человека с использованием способов, которые общеизвестны специалистам в данной области, таких как способы ЕБ18А, радиоиммунного анализа, поверхностного плазмонного резонанса и вестерн-блоттинг.

Для вакцин, которые содержат ОБА, описанный в настоящем описании, следует вводить приблизительно от 0,01 мкг/кг приблизительно до 100 мг/кг масса тела, типично с помощью внутрикожного, подкожного, внутримышечного или внутривенного пути или с помощью других путей.

В некоторых вариантах осуществления доза составляет приблизительно от 1 мкг/кг приблизительно до 1 мг/кг, при этом особенно предпочтительно приблизительно от 5 мкг/кг приблизительно до 200 мкг/кг. Специалистам в данной области будет очевидно, что число и частота введения зависит от реакции организма-хозяина. Фармацевтически приемлемые носители для терапевтического использования хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в Кеттд!оп8 РБагтасеи11са1 §с1епсе8, Маск РиЫкЫпд Со. (ред. А. К. Оеппаго, 1985). Например, можно использовать стерильный солевой рас

- 9 032441 твор и фосфатно-солевой буфер при физиологическом рН. В фармацевтической композиции можно предусмотреть консерванты, стабилизаторы, красители и даже ароматизаторы. Например, бензоат натрия, сорбиновую кислоту и сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты можно добавлять в качестве консервантов. И. а! 1449. Кроме того, можно использовать антиоксиданты и суспендирующие средства.

Количество адъюванта, например, СЬЛ, который используют в дозе композиции по настоящему изобретению (где доза представляет собой количество композиции, вводимое субъекту, нуждающемуся в этом), которая также содержит антиген, эффективный в виде вакцины, в одном из вариантов осуществления составляет приблизительно от 0,5 мкг приблизительно до 50 мкг, в другом варианте осуществления составляет приблизительно от 1,0 мкг до 25 мкг, и в различных других вариантах осуществления настоящего изобретения может составлять приблизительно 1 мкг, приблизительно 2 мкг, приблизительно 2,5 мкг, приблизительно 5 мкг, приблизительно 7,5 мкг, приблизительно 10 мкг, приблизительно 15 мкг, приблизительно 20 мкг или приблизительно 25 мкг. В некоторых вариантах осуществления количество адъюванта СЬЛ в вакцинных композициях может находиться в диапазоне приблизительно от 2 мкг приблизительно до 15 мкг или более на дозу вакцины. В некоторых вариантах осуществления количество СЬЛ на дозу вакцины составляет приблизительно 2-5 мкг, или приблизительно 2-7 мкг, или приблизительно 2-10 мкг, или приблизительно 3-5, 3-7 или 3-10 мкг. Общий объем композиции в дозе типично должен находиться в диапазоне от 0,5 мл до 1,0 мл. Эмульсия, такая как 8Е, может присутствовать в композиции, где масляный компонент (компоненты) эмульсии составляет в различных вариантах осуществления приблизительно 0,1%, приблизительно 0,5%, приблизительно 1,0%, приблизительно 1,5%, приблизительно 2%, приблизительно 2,5%, приблизительно 3%, приблизительно 4%, приблизительно 5%, приблизительно 7,5% или приблизительно 10% от общего объема композиции.

Вакцина дополнительно может содержать по меньшей мере один физиологически (или фармацевтически) приемлемый или подходящий эксципиент. Любой физиологически или фармацевтически подходящий эксципиент или носитель (т.е., нетоксичный материал, который не препятствует активности активного ингредиента), известный специалистам в данной области для использования в фармацевтических композициях, можно использовать в композициях, описанных в настоящем описании. Образцовые эксципиенты включают разбавители и носители, которые сохраняют стабильность и целостность белков. Эксципиенты для терапевтического использования хорошо известны и описаны, например, в Кетшд1оп: Тйе 8с1еисе апб Ргасйсе о£ Рйагтасу (Сеппаго, 21-е издание. Маск РиЬ. Со., ЕаЯои, РА (2005)), а также более подробно описаны в настоящем описании.

Фармацевтически приемлемые носители для терапевтического использования хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в Реттфощ Рйагтасеи11са1 8с1еисе§, Маск РиЫйЫид Со. (ред. А.Р. Сеипаго, 1985). Например, можно использовать стерильный солевой раствор и фосфатносолевой буфер при физиологическом рН. В композицию, предназначенную для введения посредством инъекции, можно включать одно или несколько из поверхностно-активного вещества, консерванта, увлажняющего средства, диспергирующего средства, суспендирующего средства, буфера, стабилизатора, антиоксидантов и/или изотонических средств. Например, бензоат натрия, сорбиновую кислоту и сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты можно добавлять в качестве консервантов.

Фармацевтически приемлемая соль относится к солям соединений по настоящему изобретению, получаемых из комбинации таких соединений и органической или неорганической кислоты (кислотноаддитивные соли) или органического или неорганического основания (основно-аддитивные соли). Композиции по настоящему изобретению можно использовать в форме свободного основания или соли, причем обе формы рассматривают в качестве входящей в объем настоящего изобретения.

Вакцины могут находиться в какой-либо форме, которая допускает введение пациенту. Например, композиция может быть в форме твердого вещества, жидкости или газа (аэрозоля). Типичные пути введения включают, без ограничения, пероральный, топический, парентеральный (например, сублингвально или буккально), сублингвальный, ректальный, вагинальный и интраназальный (например, в виде спрея). Термин парентеральный, как используют в настоящем описании, включает ионтофоретическое (например, США 7033598; 7018345; 6970739), сонофоретическое (например, США 4780212; 4767402; 4948587; 5618275; 5656016; 5722397; 6322532; 6018678), тепловое (например, США 5885211; 6685699), пассивное трансдермальное (например, США 3598122; 3598123; 4286592; 4314557; 4379454; 4568343; 5464387; описание патента Соединенного Королевства № 2232892; США 6871477; 6974588; 6676961), микроигольное (например, США 6908453; 5457041; 5591139; 6033928) введение, а также способы подкожных инъекций, внутривенных, внутримышечных, интрастернальных, внутрикавернозных, интратекальных, интралюминальных, внутриуретральных инъекций или инфузий. В конкретном варианте осуществления композицию, как описано в настоящем описании (в том числе вакцина и фармацевтические композиции), вводят внутрикожно способом, который выбран из ионтофореза, микрокавитации, сонофореза или микроигл.

Вакцину формулируют с тем, чтобы позволять активным ингредиентам, содержащимся в ней, быть биодоступными при введении композиции пациенту. Вакцины, которые будут вводить пациенту, принимают форму одной или нескольких единиц дозирования, где, например, сосуд или другой контейнер может содержать одну или несколько единиц дозирования.

- 10 032441

Жидкая фармацевтическая композиция, такая как вакцина, будь она в форме раствора, суспензии или другой похожей форме, может содержать одно или несколько из следующих носителей или эксципиентов: стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, солевой раствор, предпочтительно физиологический раствор, раствор Рингера, изотонический хлорид натрия или буферы. Нейтральный буферный физиологический раствор или физиологический раствор, смешанный с неспецифическим сывороточным альбумином, представляют собой образцовые подходящие разбавители. Вакцина также может содержать жирные масла, такие как сквален, сквалан, минеральное масло, маннидмоноолеат, холестерин и/или синтетические моно- или диглицериды, которые могут служить в качестве растворителя или суспендирующей среды, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабен; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие средства, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и средства для корректировки тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза; низкомолекулярные (меньше чем приблизительно 10 остатков) полипептиды, белки, аминокислоты, углеводы, в том числе глюкоза, сахароза или декстрины, хелатирующие средства, такие как ЭДТА, глутатион и другие стабилизаторы и эксципиенты. Предпочтительно, продукт можно формулировать в виде лиофилизата с использованием подходящих растворов эксципиентов (например, сахарозы) в качестве разбавителей. Вакцины или их компоненты можно заключать в ампулы, одноразовые шприцы или сосуды с несколькими дозами, выполненные из стекла или пластмассы.

В конкретном варианте осуществления вакцинная композиция по изобретению содержит стабильную водную суспензию меньше 0,2 мкм и дополнительно содержит по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из фосфолипидов, жирных кислот, поверхностно-активных веществ, детергентов, сапонинов, фторированных липидов и т.п.

Также может быть желательным, чтобы вакцина или фармацевтическая композиция содержала другие компоненты, такие как наполнители для доставки, включая в качестве неограничивающих примеров соли алюминия, эмульсии вода-в-масле, биоразрушаемые масляные наполнители, эмульсии масловводе, биоразрушаемые микрокапсулы и липосомы. Примеры дополнительных иммуностимулирующих веществ (вспомогательных адъювантов) для использования в таких наполнителях также описаны выше и могут включать Ν-ацетилмурамил-Ь-аланин-О-изоглутамин (МЭР), глюкан, ГБ-12, СМ-С8Б, интерферон-γ и 1Б-12.

Хотя в фармацевтических композициях по настоящему изобретению можно использовать любой подходящий носитель, известный специалистам в данной области, тип носителя будет меняться в зависимости от способа введения и того, является ли замедленное высвобождение желаемым. Для парентерального введения, такого как подкожная инъекция, носитель предпочтительно содержит воду, солевой раствор, спирт, жир, воск или буфер. Биоразрушаемые микросферы (например, полимолочный галактид) также можно использовать в качестве носителей для фармацевтических композиций по данному изобретению. Подходящие биоразрушаемые микросферы раскрыты, например, в патентах США №№ 4897268 и 5075109. В связи с этим предпочтительно микросферы больше приблизительно 25 мкм.

Вакцины по настоящему изобретению можно использовать для лечения аддикции к никотину. Терапевтически эффективное количество вакцин, описанных в настоящем описании, представляет собой то, которое индуцирует образование антител, специфичных к никотину, которые блокируют прохождение аддиктивного вещества через гематоэнцефалитический барьер, тем самым снижая или устраняя вызванные аддиктивным веществом изменения в химии головного мозга, которые являются источником никотиновой зависимости. В связи с этим важно, чтобы конъюгат никотина и носителя индуцировал образование антител, которые будут распознавать нативную молекулу никотина. Таким образом, настоящее изобретение предусматривает в одном из аспектов способ лечения или предотвращения никотиновой зависимости у нуждающегося в таком лечении пациента, который включает введение терапевтически эффективного количества конъюгата гаптена никотина и носителя в комбинации с адъювантом ОБА, как описано в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение также относится к способам лечения никотиновой зависимости у нуждающегося в таком лечении пациента, который включает введение терапевтически эффективного количества антитела, индуцированного в ответ на конъюгаты гаптена никотина и носителя.

В настоящем описании и в приложенной формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число до тех пор, пока контекст явно не диктует иное. Таким образом, например, упоминание об антигене включает множество таких антигенов, а упоминание о клетке включает упоминание об одной или нескольких клетках и их эквивалентах (например, множестве клеток), известных специалистам в данной области, и так далее. Аналогичным образом, упоминание о соединение или композиции включает множество таких соединений или композиций, и относится к одному или нескольким соединениям или композициям, соответственно, пока контекст явно не диктует иное. Когда стадии способа описаны или заявлены, и стадии описаны как встречающиеся в конкретном порядке, описание первой стадии, встречающейся (или выполняемой) до (т.е., перед) второй стадии, имеет то же значение, как если бы переписать в таком виде, что вторая стадия происходит (или ее осуществляют)

- 11 032441 после первой стадии. Термин приблизительно, когда относится к числу или числовому диапазону, обозначает, что упоминаемое число или числовой диапазон представляет собой аппроксимацию в пределах экспериментальной вариабельности (или в пределах статистической экспериментальной ошибки) и, таким образом, число или числовой диапазон может варьировать между 1% и 15% от указанного числа или числового диапазона. Термин содержит (и родственные термины, такие как содержит или содержащий или имеет или включает) не предназначен для того, чтобы исключать, что в других некоторых вариантах осуществления, например, вариант осуществления какой-либо композиции вещества, композиции, способа или процесса или тому подобное, описанных в настоящем описании, может состоять из или состоять по существу из описанных признаков.

Примеры

Пример 1. Вакцинная композиция против никотина, сформулированная с СЬА-δΕ, демонстрирует усовершенствованную активность адъюванта по сравнению с вакциной, сформулированной с квасцами.

В этом эксперименте оценивали влияние СЬА-δΕ на иммуногенность вакцины и экономию дозы антигена. Мыши С57/ВЬ (5/группа) получали прайм-буст вакцинацию внутримышечно (ΙΜ) (100 мкл), как показано на фиг. 1А. Измеряли образование антител. Две дозы КЬНшс, сформулированного с адъювантом СЬА-δΕ, сравнивали с КБН-Νίο отдельно или формулированным с квасцами. КЬН конъюгировали с никотином (22 молекулы или 100 молекул/мономер КЬН). Для 2,5 мкг или 10 мкг конъюгата в качестве адъюванта использовали 5 мкг СЬА-δΕ или квасцов и измеряли антитела к никотину с помощью ЕЫ8А.

Антитела против никотина измеряли посредством количественного ΕΜ^ с использованием конъюгата овальбумина с никотином (Οναηίε) в качестве покрывающего антигена для того, чтобы избегать обнаружения антител, направленных на белок-носитель (Шеба, Υ., εΐ а1., Лебтс ίιηιηιιηίζαΐίοη а11сгь 111с р1акта ηίοοίίηε сопссп!та!юп ίη так. ТНс 1оитпа1 оГ РНагтасо1оду апб Εχρετ^εηίαΐ Тйсгарсибск, 1997. 283(3): стр. 1076-81). Титры в конечной точке определяли с использованием СгарНРаб (8ап О|сдо) Рткт версии 4.00 для \Ушбо\\'5. Осуществляли двухфакторный дисперсионный анализ с апостериорным криетрием Даннета.

Как показано на фиг. 1В и фиг. 1С, СЬА-δΕ значительно усовершенствовал иммунный ответ против никотина, вызываемый с помощью никотинового антигена, конъюгированного с КЬН.

Пример 2. Вакцинные композиции против никотина с новым белком-носителем, сформулированные с СЬА-δΕ, демонстрируют усовершенствованную активность по сравнению с вакциной, формулированной с квасцами.

Синтезировали новый тримерный суперспиральный пептид-носитель (ТСС) (См. Мб1ст КО, В. Воцис, апб С. С1сдд, 2014, Nονε1 Ап!1-№со!шс Уассшс Иапд а δуη!йε!^с Тптспс Собсб-Соб Нар1сп Сагпст, рукопись подана), и использовали его для того, чтобы конъюгировать никотиновый гаптен, содержащий гексановую кислоту в 6 положении кольца пиридина. На фиг. 2 сравнивают относительный размер и содержание лизина в ТСС с 4 различными носителями никотинового гаптена; КЬН представляет собой широко используемый белок-носитель гаптена; экзотоксин А представляет собой носитель для №сУахТМ, который потерпел неудачу в фазе III в двух клинических исследованиях (Набтапп-Воусе 1., с! а1. СосНгапс Ьа1аЬа5С δνδΐ Вст. 2012 Аид 15; 8: СИ007072); токсоид столбняка (МссшсТМ), который потерпел неудачу в фазе II исследования рецидивирования курения (Топк!аб δ, с! а1. МсобпсТоЬ Вск. 2013;15(9):1492-501), и белковый токсин дифтерии СВМ197, который в настоящее время проходит тестирование на фазе I исследований. Усредненное число гаптенов, конъюгированных с этими носителями на клиническом этапе, составило между 10 и 30 гаптенами на молекулу (Ргубс ИС, с! а1. ΡΡυδ Опс, 2013 1, 8 (10):с76557).

Иммуногенность ТССшс: чтобы охарактеризовать образование антител с использованием мышей С57ВЬ/6, синтезировали ТСС, содержащий два Н2ИЬ рестриктированных эпитопа хелперных Т-клеток; последовательност 13 АА РЛ^ВΕ (Ьа Вока С, с! а1., 1 ЛГсс! Όίδ. 2012 Арг 15, 205 (8):1294-1304), после чего следует последовательность 11 АА, присутствующая в гемагглютинине 45Ν1 [С1сдд СН, с! а1., Ргос Ν!1 Асаб δα И8А. 2012 Ос! 23;109(43):17585-90). ТСС конъюгировали с производным никотина, содержащим гексановую кислоту в 6 положении кольца пиридина (№с-6-НА), причем финальная конструкция в среднем содержала 12 гаптенов на триммер (ТССшс-12). В качестве контролей также получали два конъюгированных носителя КЬН. Первый, КЬНшс-22, содержал в среднем 22 никотина на мономер, что приближено к нагрузке гаптеном, схожей с многими доклиническими и клиническими вакцинами [Ргубс ИС, с! а1., выше). Второй, КЬНшс-100, представляет собой гиперконъюгированный носитель по сравнению с большинством никотиновых вакцин, который использовали для того, чтобы тестировать влияние увеличенной плотности гаптена на иммуногенность вакцины. Отдельно, чтобы измерять роль, которую адъюванты играют в функции вакцины, эти носители формулировали с использованием или квасцов или СЬА-δΕ.

Мышей С57ВЬ/6 (5/группа) иммунизировали три раза (б0, б14 и б131) и в сыворотках анализировали титры антител против никотина с помощью Ε^IδА. Кинетика результирующего образования антител представлена на фиг. 3. Как показано, все три носителя стимулировали титры антител, которые сохранялись около максимальных уровней на всем протяжении хода эксперимента. Титры, индуцированные с

- 12 032441 помощью ТССшс-12 с адъювантом в виде или квасцов или СЬА-А, выглядели слегка выше, чем КЬНшс-22 с адъювантом, в ходе эксперимента (фиг. ЗА и ЗВ), тогда как активности ТССшс-12 и КЬНшС100 главным образом совпадали (фиг. ЗС). На фиг. 4 представлены титры в конечной точке сутки 160, которые собирали через 3 недели после конечной бустер-инъекции.

В отношении адъюванта, у мышей, иммунизированных с использованием ТССшс-12+СЬА-А, стимулировали образование антител, которое ~100х лучше, чем отдельно ТССшс-12, и ~10х больше, чем ТССшс-12+квасцы. Похоже, СЬА-А улучшает уровни ответа у мышей, иммунизированных с использованием КЬНшс-22, но различия в средних титрах не были статистически значимыми. В отношении носителей гаптена, ТССшс-12+СЕА-А стимулировал ~10х больше антител, чем КЬНшс-22+^А-А, тогда как ТССшс-12 и КЬНшс-100 выглядели эквивалентными в присутствии СЬА-А. Кроме того, КЬНшс100+СЬА-А сообразно индуцировал более высокие титры антител, чем КЬНшс-22+^А-А на всем протяжении эксперимента. В совокупности эти результаты демонстрируют, что носитель гаптенов ТСС может эффективно стимулировать образование антител против никотина у мышей. Они также подтверждают предыдущие исследования о том, что плотность гаптена представляет собой важную переменную для иммуногенности конъюгатной вакцины. Кроме того, эти исследования подтверждают, что адъювант СЬА-А повышает образование антител против никотина.

В усовершенствованном эксперименте измеряли эффект дозы ТССшс-12+/-СЬА-А и определили, что наименьшая доза антигена (100 нг) индуцировал максимальные титры антител (фиг. 5). Этот результат подсказывает, что полный комплемент лимфоцитов, способных отвечать на носитель гаптенов, примировали с помощью конъюгата и что присутствие адъюванта расширяло клональную экспансию и расположенную ниже эффекторную фазу ответа. В отдельном эксперименте тестировали, схожи ли индуцированные ТСС антитела против носителя со стандартной никотиновой вакциной. В этом эксперименте мышей иммунизировали с использованием контролей, КЬНшс-22 и КЬНшс-100, наряду с ТСС, который конъюгировали в среднем с 2, 12 или 42 гаптенами на тример. Как показано на фиг. 6, индукция антител против ТСС по сравнению с титрами против КНЬ была заметно уменьшена при увеличении плотности гаптена. Этот результат демонстрирует важность плотности гаптена в управлении ответами против носителя и подсказывает, что ТСС может менее вероятно индуцировать нейтрализующие антитела по сравнению с существующими носителями никотина.

Образование функциональных антител ТССшс: в дополнение к титрам антител, исследовали качество антител, индуцированных с использованием ТССшс-12. Как показано на фиг. 7, они обладали очень высокой специфичностью к никотину и не связывали в физиологических концентрациях ни котинин, наиболее обильный метаболит в пути расщепления никотина, ни ацетилхолин, эндогенный лиганд рецептора никотина. Схожие результаты получали для КЬНшс-22 и КЬНшс-100 и не наблюдали различий в специфичности при использовании любого адъюванта. Аффинность этих антител также измеряли (фиг. 8). Как показывают относительные различия в значениях КЕ, ТССшс-12 без адъюванта индуцировал антитела со значительно более высокой аффинностью (4,2 нМ), чем КЬНшс-22 (203 нМ). Добавление квасцов не оказывало явного влияния на ответ на ТССшс-12, несмотря на то, что оно усовершенствовало аффинность антител к КЬНшс-22 (9,4 нМ). В присутствии СЬА-А, аффинность антител у мышей, иммунизированных с использованием ТССшс-12, возрастала еще больше (0,7 нМ) и была на порядок величины больше, чем ответ на КЬНшс-22 + СЬА-А (11,8 нМ). Аффинность антител к никотину, индуцированных у мышей, иммунизированных с использованием I<^Нη^С100+С^Л-Α (1,0 нМ), также была больше, чем для КЬНшс-22+^А-А, и была эквивалентна ТССшс-12+^А-А.

Для того чтобы измерять функцию антитела, определяли способность к связыванию никотина в сыворотках иммунизированных мышей. Как показано на фиг. 9, ТССшс-12+^А-А и КЬНп1с-100+СЬАА индуцировали самые большие способности к связыванию, которые, как ожидали, коррелировали с соответствующими им титрами антител (фиг. 3) и аффинностями (фиг. 8). В качестве второй меры функции антитела, иммунизированным мышам инъецировали дозу никотина, эквивалентную З сигаретам (0,05 мг/кг), и после 5 минут использовали масс-спектрометрию для того, чтобы определять количество никотина, накопленного в ткани головного мозга (фиг. 10). Снова наиболее эффективными вакцинами были ТССшс-12+^А-А и КЬНшС100+^А-А, где проникновение никотина в головной мозг ингибировали, соответственно, на 91% и 95% относительно животных с РВ8 контролем. Степень ингибирования для других конструкций составляла 76% для ТССшс-12+квасцы, 62% для КЬНшс-22+^А-А и 47% для КЬНшс-22+квасцы. ТССшс-12 стимулировал превосходящий ответ относительно КЬНшс-22, когда в качестве адъюванта использовали или квасцы или СЬА-А, и I<^Нη^с-100+С^Л-Α превосходил по эффективности КЬНшс-22+СЬА-А. В совокупности эти результаты демонстрируют, что ТССшс-12 является эффективным носителем гаптенов для индукции титров функциональных антител у мышей. Эти находки также демонстрируют, что плотность гаптена и качество адъюванта играют важные роли в регуляции функции никотиновой вакцины.

Адъюванты вакцин управляют величиной и качеством адаптивных Т- и В-клеточных ответов посредством облегчения накопления антигена в антигенпредставляющих клетках и стимуляции врожденных путей, которые управляют рекрутированием лейкоцитов в места инъекции [Ни К, с! а1., Вюва ТгепЕв

- 13 032441

2012;6(2):52-6). На сегодняшний день единственным адъювантом, который использовали в клинических исследованиях никотиновой вакцины, являются квасцы, однако многие исследования подсказывают, что квасцы могут быть относительно слабыми в сравнении с адъювантами, которые направлены на врожденные рецепторы опознавания паттерна на АРС [Кеед 8С, ек а1., Хак Мед. 2013, 19 (12): 1597-608). Рецептор, который связывает бактериальный ИР8, ТИК-4, играет критическую роль в регуляции формирования зародышевых центров С1)4 Т-клетками, созревании аффинности и образовании плазматических клеток, долгосрочно секретирующих антитела [Сапп А, ек а1., Ртишку 2010 1и1 23, 33(1):84-95; ИеЕгапсо АИ, ек а1., Iшшипо1 Кеу. 2012 Мау; 247(1): 64-72; Котедае ΕΝ, ек а1., РИо8 Опе. 2013 Аид 5;8(8):е71185), и, как ранее показано, адъюванты, сформулированные с синтетическим лигандом ТИК-4, С1.А, представляют собой эффективные стимуляторы образования антител, опосредованного протективными Т-клетками, против гетеросубтипических вирусов гриппа Η5Ν1 [С1едд ек а1., РХА8, выше; С1едд ек а1., РИо8 Опе. 2014 РеЬ 14; 9(2):е88979). Здесь в отношении квасцов показано, что СИА-8Е играл основную роль в регуляции более высоких титров антител, усовершенствованных аффинностях антител и значительном увеличении функциональной ингибиторной активности. Наблюдение о том, что СИА-опосредованное образование антител было больше и более соответствовало ТССшс-12, чем КИНшс-22, может являться результатом замены 2 доминантных Н20Ь рестриктированных эпитопов хелперных Т-клеток в ТСС. Эта способность синтезировать носители с определенными эпитопами МНС II класса создает возможность для персонализированной вакцины, которая может одновременно повышать индивидуальное образование антител и уменьшать большую вариабельность в титрах антител в сыворотках, наблюдаемую в клинике.

Вкратце, в этом примере описаны два важных разработанных инструмента, которые могут значительно усовершенствовать эффективность вакцин против аддиктивных веществ у человека. Первым является новый носитель гаптенов, который индуцирует превосходящее образование антител по сравнению с традиционным носителем. Несмотря на то, что описаны различные синтетические каркасы наночастиц и самособирающиеся синтетические везикулы | К1з1итоко, К., ек а1., 2012). 8ЕИ-068 А Ги11у зупккеИс папораг11с1е уассте Гог зтоктд сеззакюп апд ге1арзе ргеуепкюп. 8К\'Т 2012 Аппиа1 Меектд, Ноизкоп; 2атап, М, ек а1., 2013 Меккодз 60, 226-231; Иоскпег, I. Ж., ек а1., 2013 Вюогдатс & Мед1ста1 Сйенпзкгу Иеккегз, 23, 975-978), ни одна из них не имеет такую же простую конструкцию, как ТСС, и ни для одной из них не показана такая же активность. Второй инструмент представляет собой использование адъюванта СИА8Е, который значительно превосходит квасцы в увеличении титра, аффинности и функции антител против никотина. Это находится в соответствии с предыдущей работой, показывающей, что добавление ТИК9 лиганда СрС к квасцам значительно усовершенствовало образование функциональных антител к никотину как у мышей, так и у яванских макаков (МсС1изк1е Α1.Ι, ек а1., !пк Iшшипорйа^шасо1. 2013;16(1):50-6; МсС1изк1е Α1.Ι, ек а1., 8ос1еку Гог Кезеагсй оп №сокте апд ТоЬассо 2013, реферат, РА13-4).

Различные варианты осуществления, которые описаны выше, можно комбинировать, чтобы предоставлять дополнительные варианты осуществления. Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и непатентные публикации, упомянутые в этом описании и/или перечисленные в АррНсакюп Сака 8йеек, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Аспекты вариантов осуществления можно модифицировать в случае необходимости, чтобы использовать идеи различных патентов, заявок и публикаций, чтобы предоставлять другие дополнительные варианты осуществления.

Эти и другие изменения можно выполнять в вариантах осуществления в свете приведенного выше подробного описания. В целом, в нижеследующей формуле изобретения используемые термины не следует толковать для ограничения формулы изобретения конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в описании и формуле изобретения, но следует толковать как включающие все возможные варианты осуществления наряду с полным объемом эквивалентов, для которых такая формула изобретения является основанием. Соответственно, формула изобретения не ограничена раскрытием.

Claims (12)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Вакцинная композиция, которая содержит:

   (a) один или более гаптенов никотина, конъюгированных с белком-носителем, причем белокноситель представляет собой гемоцианин морского блюдца (КИН);

   (b) фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и или его фармацевтически приемлемую соль,

   - 14 032441 где К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой С₁₁-С₂₀ алкил;

   К² и К⁴ представляют собой С₁₂-С₂₀ алкил.
2. 2. Вакцинная композиция по п.1, где К¹, К³, К⁵ и К⁶ представляют собой ундецил и К² и К⁴ представляют собой тридецил.
3. 3. Вакцинная композиция по п.1, где композиция представляет собой водный состав.
4. 4. Вакцинная композиция по п.1, где композиция имеет форму эмульсии масло-в-воде, эмульсии вода-в-масле или микрочастицы.
5. 5. Способ индукции иммунного ответа против никотина, который включает введение пациенту вакцины по п.1.
6. 6. Способ лечения никотиновой зависимости, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества вакцины по п.1.
7. 7. Способ увеличения частоты отказа или снижения частоты рецидивирования или и того и другого в случае никотиновой зависимости, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества вакцины по п.1.
8. 8. Вакцина по п.1, которая содержит приблизительно 2,5 мкг или более глюкопиранозиллипида А (СЬА) на дозу вакцины.
9. 9. Вакцина по п.1, которая содержит приблизительно от 2 мкг приблизительно до 10 мкг СЬА на дозу вакцины.
10. 10. Вакцина по п.1, которая содержит приблизительно от 3 мкг приблизительно до 8 мкг СЬА на дозу вакцины.
11. 11. Вакцина по п.1, которая содержит приблизительно от 4 мкг приблизительно до 6 мкг СЬА на дозу вакцины.
12. 12. Вакцина по п.1, которая содержит приблизительно 5 мкг СЬА на дозу вакцины.

    Примирование Буст Буст (10 (110 (121 (128 ά35 ά56 ш 1 и ΐ ΐ