CN102159242A - 疫苗佐剂组合 - Google Patents

疫苗佐剂组合 Download PDF

Info

Publication number
CN102159242A
CN102159242A CN2009801371805A CN200980137180A CN102159242A CN 102159242 A CN102159242 A CN 102159242A CN 2009801371805 A CN2009801371805 A CN 2009801371805A CN 200980137180 A CN200980137180 A CN 200980137180A CN 102159242 A CN102159242 A CN 102159242A
Authority
CN
China
Prior art keywords
adjuvant
oil
emulsion
immunogen
complex
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2009801371805A
Other languages
English (en)
Inventor
M·帕劳罗
D·欧哈根
R·拉普奥利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis Vaccines and Diagnostics AG
Original Assignee
Novartis Vaccines and Diagnostics AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Vaccines and Diagnostics AG filed Critical Novartis Vaccines and Diagnostics AG
Publication of CN102159242A publication Critical patent/CN102159242A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59

Abstract

一种免疫佐剂，其包含水包油乳剂、免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物，其中所述寡核苷酸和聚合物理想地相互缔合，形成复合物。该佐剂可与免疫原联合用于制备疫苗。

Description

疫苗佐剂组合
本申请要求提交于2008年9月18日的美国临时申请61/192,577的优先权，该临时申请的全部内容纳入本文作为参考。
技术领域
本发明属于疫苗佐剂及它们的组合领域。
背景技术
已知可将水包油乳剂用作疫苗佐剂，FLUADTM产品包括水包角鲨烯“MF59”佐剂。本发明的一个目的是提供修饰和改进的乳剂型佐剂。
发明内容
本发明提供了一种免疫佐剂，其包含水包油乳剂、免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物。所述寡核苷酸和聚合物优选相互缔合，形成复合物。
本发明还提供了一种制备本发明免疫佐剂的方法，所述方法包括将水包油乳剂与免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的复合物混合的步骤。
本发明还提供了一种免疫原性组合物，其包含：(i)本发明的佐剂；和(ii)免疫原。
本发明还提供了一种制备免疫原性组合物的方法，所述方法包括将(i)本发明的佐剂与(ii)免疫原混合的步骤。
免疫原、乳剂、寡核苷酸和聚合物可以任何顺序混合。例如，本发明提供了一种制备本发明的免疫原性组合物的方法，所述方法包括以下步骤：将(i)水包油乳剂与(ii)免疫原混合；然后，将乳剂/免疫原混合物与免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物混合。
本发明还提供了一种制备本发明的免疫原性组合物的方法，所述方法包括以下步骤：将(i)免疫刺激性寡核苷酸与聚阳离子聚合物(通常以复合物形式存在)与(ii)免疫原混合；然后，将寡核苷酸/聚合物/免疫原混合物与水包油乳剂混合。
本发明还提供了一种试剂盒，其包含：(i)容纳有本发明的佐剂的第一容器；和(ii)容纳有免疫原和/或其它佐剂的第二容器。本发明还提供了一种试剂盒，其包含：(i)容纳有水包油乳剂的第一容器；和(ii)容纳有免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的第二容器。第一和第二容器之一或两者可含有免疫原。由此，可将这两个容器中的内容物合并(例如在使用时)，以形成本发明的佐剂或免疫原性组合物。这些试剂盒可包含第三容器，该容器中容纳有免疫原和/或其它佐剂。
本发明还提供了一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂和吸附性颗粒佐剂，其中所述吸附性颗粒佐剂中颗粒的平均直径和乳剂中油滴(droplets)的平均直径均小于250nm(例如≤220nm，≤200nm，≤190nm，≤180nm，≤150nm，≤120nm，≤100nm等)。如果颗粒佐剂中颗粒具有一定的直径范围，则这些直径可能不与油滴粒径相互重叠(即，最大的油滴小于最小的佐剂颗粒，或最大的佐剂颗粒小于最小的油滴)。然而，在其它实施方式中，尺寸分布可重叠。在一些实施方式中，佐剂颗粒的平均直径可基本上与油滴的平均直径相同，或这两种直径可相差例如至少5％、10％、15％、20％、25％等。
本发明还提供了一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂和吸附性颗粒佐剂，其中吸附性颗粒佐剂中颗粒的平均直径大于乳剂中油滴的平均直径。吸附性颗粒佐剂理想地不含(i)不溶性铝或钙盐或(ii)聚合物微粒，相反优选是(iii)免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的复合物。在本文中已显示：将水包油乳剂与此类复合物混合可减小复合物的分析的平均直径。
本发明还提供了一种免疫原性组合物，其包含：(i)包含水包油乳剂和吸附性颗粒佐剂的免疫佐剂；和(ii)免疫原。如上文所述，吸附性颗粒佐剂理想地不含有不溶性铝或钙盐或聚合物微粒，相反优选是免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的复合物。通常，免疫原至少部分吸附于吸附性颗粒佐剂。
本发明还提供了一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂和免疫刺激性寡核苷酸，其中所述免疫刺激性寡核苷酸包含至少一个CpI基序(一种包含与肌苷连接的胞嘧啶的二核苷酸序列)。寡聚脱氧核苷酸可包含多于一个(例如2、3、4、5、6或更多)的CpI基序，且这些基序可直接重复(例如包含序列(CI)x，其中x为2、3、4、5、6或更多)或彼此分离(例如包含序列(CIN)x，其中x为2、3、4、5、6或更多，且其中各N独立地表示一个或多个核苷酸)。寡核苷酸中的胞嘧啶残基优选未甲基化。本发明还提供了一种制备该免疫佐剂的方法，所述方法包括将水包油乳剂与含CpI的免疫刺激性寡核苷酸混合的步骤。本发明还提供了一种免疫原性组合物，其包含：(i)该佐剂和(ii)免疫原。本发明还提供了一种制备免疫原性组合物的方法，其包括混合(i)该佐剂和(ii)免疫原的步骤。本发明还提供了一种制备本发明免疫原性组合物的方法，所述方法包括以下步骤：混合(i)水包油乳剂和(ii)免疫原；然后，将乳剂/免疫原混合物与含CpI的免疫刺激性寡核苷酸混合。
本发明还提供了一种制备本发明的免疫原性组合物的方法，所述方法包括以下步骤：混合(i)含CpI的免疫刺激性寡核苷酸和(ii)免疫原；然后，将寡核苷酸/免疫原混合物与水包油乳剂混合。
水包油乳剂
用于本发明的水包油乳剂通常包含至少一种油和至少一种表面活性剂，所述油与表面活性剂是生物可降解的(可代谢的)和生物相容的。
乳剂中油滴的直径通常小于5μm，优选亚微米直径，这些小尺寸是用微流化仪(microfluidiser)获得的，从而提供稳定的乳剂。优选尺寸小于220nm的微滴，这是因为可对它们进行过滤灭菌。在一些有用的乳剂中，至少80％(以数量计)的油滴直径小于500nm。
乳剂可包含油，例如动物(如鱼类)或植物来源的油。植物油的来源包括：坚果、种子和谷物。花生油、大豆油、椰子油和橄榄油是最为常用的示例性坚果油。可使用希蒙得木油(例如获自希蒙得木豆)。种子油包括：红花油、棉籽油、向日葵籽油、芝麻籽油等。在谷物类型中，玉米油最容易获得，但也可使用其它谷物颗粒(如小麦、燕麦、黑麦、水稻、埃塞俄比亚画眉草(teff)、黑小麦等)的油。虽然丙三醇和1，2-丙二醇的6-10碳脂肪酸酯在种子油中并不天然存在，其可通过从坚果和种子油开始对适当材料进行水解、分离和酯化来制备。哺乳动物乳汁的脂肪和油是可代谢的，因此可用于实施本发明。本领域中熟知分离、纯化、皂化工艺和从动物来源获得纯净油所需的其它方法。大部分鱼类包含易于回收的可代谢油。例如，鳕鱼肝油、鲨鱼肝油、鲸油(如鲸蜡)是可用于本文的数种示例性的鱼油。可在5-碳异戊二烯(5-carbon isoprene)单元中生化合成一些支链油，这些支链油通常被称为萜类化合物。鲨鱼肝油包含支链、不饱和萜类化合物，其被称为角鲨烯，即2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯。也可使用角鲨烷，即角鲨烯的饱和类似物。可从商业途径很容易地获得鱼油(包括角鲨烯和角鲨烷)，或可通过本领域中已知的方法获得鱼油。优选角鲨烯。
其它有用的油是生育酚，其优选包含在针对年老对象(例如年龄在60岁或以上)的疫苗中，这是因为已报道维生素E对此该对象群体中的免疫应答具有积极的影响。它们还具有可有助于稳定乳剂的抗氧化性质。虽然存在各种生育酚(α、β、γ、δ、ε或ξ)，但通常使用的是α。优选的α-生育酚是DL-α-生育酚。已知α-生育酚琥珀酸盐与流感疫苗相容，并可替代汞化合物作为有用的防腐剂。
可采用油的混合物，例如角鲨烯和α-生育酚的混合物。
常用的油含量为2～20％(以体积计)。
表面活性剂是通过它们的“HLB”(亲水/亲脂平衡)分类的。一些在本发明中有用的表面活性剂的HLB至少为10，例如至少15或至少16。本发明中可用的表面活性剂包括但不限于：聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯类表面活性剂(通常称为吐温(Tween))，尤其是聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80；环氧乙烷(EO)、环氧丙烷(PO)、和/或环氧丁烷(BO)的共聚物，以DOWFAXTM为商品名出售，例如线形EO/PO嵌段共聚物；辛苯聚醇，其中乙氧基(氧-1，2-乙二基)(ethoxy(oxy-1，2-ethanediyl))重复基团的数量可不同，尤为感兴趣的是辛苯聚醇-9(曲通(Triton)X-100，或叔辛基苯氧聚乙氧基乙醇)；(辛基苯氧基)聚乙氧基乙醇(IGEPAL CA-630/NP-40)；磷脂类，例如磷脂酰胆碱(卵磷脂)；壬基苯酚乙氧基化物(nonylphenol ethoxylates)，例如TergitolTM NP系列；衍生自月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇和油醇的聚氧乙烯脂肪醚(称为Brij表面活性剂)，例如三甘醇单月桂基醚(Brij 30)；以及脱水山梨糖醇酯(通常称为司盘(SPAN))，例如脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘85)和去水山梨糖醇单月桂酸酯。优选非离子表面活性剂。包含在乳剂中的最优选表面活性剂是聚山梨醇酯80(聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯；吐温80)。
可采用表面活性剂的混合物，例如吐温80/司盘85的混合物。聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯和辛苯聚醇的组合也是适合的。其它有用的组合包括laureth 9加上聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯和/或辛苯聚醇。
表面活性剂(％，以重量计)的用量为：聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(例如吐温80)为0.01～1％，具体为约0.1％；辛基或壬基苯氧基聚氧乙醇(例如曲通X-100，或其它曲通系列的成分)为0.001～0.1％，具体为0.005～0.02％；聚氧乙烯醚(例如laureth 9)为0.1～20％，例如0.1～10％，具体为0.1～1％或约为0.5％。
优选含角鲨烯的乳剂，具体为含聚山梨醇酯80的那些乳剂。
可用于本发明的特定水包油乳剂佐剂包括但不限于：
·角鲨烯、聚山梨酯80和去水山梨糖醇三油酸酯的亚微米乳剂。该乳剂的组成以体积计可为：约5％角鲨烯，约0.5％聚山梨酯80和约0.5％司盘85。就重量而言，这些比例转换为：4.3％角鲨烯，0.5％聚山梨酯80和0.48％司盘85。该佐剂称为“MF59”[1-3]，其在参考文献4的第10章和参考文献5的第12章中有更详细的描述。MF59乳剂优选包含柠檬酸盐离子，例如10mM柠檬酸钠缓冲液。
·角鲨烯、生育酚和聚山梨酯80的亚微米乳剂。这些乳剂可包含：2～10％角鲨烯，2～10％生育酚和0.3～3％聚山梨酯80，角鲨烯∶生育酚的重量比优选≤1(例如0.90)，该重量比可提供更为稳定的乳剂。角鲨烯和聚山梨酯80可以约5∶2的体积比或约11∶5的重量比存在。可如下制备一种此类乳剂：将吐温80溶解在PBS中，得到2％溶液，然后将90ml该溶液与(5g DL-α-生育酚与5ml角鲨烯)的混合物混合，随后对该混合物进行微流化。所得的乳剂包含亚微米油滴，例如平均直径为100～250nm，优选约180nm的油滴。该乳剂还可包含3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A(3d-MPL)。该类型的另一有用乳剂可包含，每人用剂量0.5～10mg角鲨烯，0.5～11mg生育酚，和0.1～4mg聚山梨酯80[6]。
·角鲨烯、生育酚和曲通去污剂(例如曲通X-100)的乳剂。该乳剂还可包含3d-MPL(见下文)。该乳剂可包含磷酸盐缓冲液。
·包含聚山梨酯(例如聚山梨酯80)、曲通去污剂(例如曲通X-100)和生育酚(例如α-生育酚琥珀酸盐)的乳剂。该乳剂可包含如下质量比的这三种成分：约75∶11∶10(例如750μg/ml聚山梨酯80，110μg/ml曲通X-100和100μg/mlα-生育酚琥珀酸盐)，这些浓度应包括抗原中这些组分的任何贡献。该乳剂还可包含角鲨烯。乳剂还可包含3d-MPL。水相可包含磷酸盐缓冲液。
·角鲨烷、聚山梨酯80和泊洛沙姆401(“PluronicTM L121”)的乳剂。该乳剂可配制在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中。该乳剂是胞壁酰二肽的有用递送载体，且已和苏氨酰基-MDP一起用于“SAF-1”佐剂中[7](0.05～1％Thr-MDP，5％角鲨烷，2.5％Pluronic L121和0.2％聚山梨酯80)。其也可不与Thr-MDP一起使用，如在“AF”佐剂中[8](5％角鲨烷，1.25％Pluronic L121和0.2％聚山梨酯80)。优选进行微流化。
·包含角鲨烯、水性溶剂、聚氧乙烯烷基醚亲水性非离子表面活性剂(例如聚氧乙烯(12)鲸蜡硬脂醚)和疏水性非离子表面活性剂(例如脱水山梨糖醇酯或二缩甘露醇酯，例如去水山梨糖醇单油酸酯或“司盘80”)。乳剂优选为热可逆的和/或至少90％的油滴(以体积计)的尺寸小于200nm[9]。乳剂还可包含一种或多种如下物质：醛糖醇；低温防护剂(例如糖，如十二烷基麦芽糖苷和/或蔗糖)；和/或烷基聚糖苷。乳剂可包括TLR4激动剂[10]。可冷冻干燥该乳剂。
·角鲨烯、泊洛沙姆105和Abil-Care[11]的乳剂。含佐剂(adjuvanted)的疫苗中这些成分的终浓度(重量)为：5％角鲨烯，4％泊洛沙姆105(普流罗尼多元醇)和2％Abil-Care 85(二-PEG/PPG-16/16PEG/PPG-16/16二甲基硅氧烷；辛酸/癸酸甘油三酯)。
·包含0.5～50％油，0.1～10％磷脂，和0.05～5％非离子表面活性剂的乳剂。如参考文献12所述，优选的磷脂组分是：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、鞘磷脂和心肌磷脂。优选亚微米的微滴尺寸。
·不可代谢的油(例如轻质矿物油)和至少一种表面活性剂(例如卵磷脂、吐温80或司盘80)的亚微米水包油乳剂。可加入添加剂，例如皂树A皂甙(QuilA saponin)、胆固醇、皂甙-亲脂性偶合物(例如GPI-0100，描述于参考文献13，通过葡萄糖醛酸的羧基将脂族胺添加到脱乙酰基皂甙而产生)、溴化二甲基双十八烷基铵和/或N，N-双十八烷基-N，N-二(2-羟乙基)丙二胺。
·所含皂甙(例如QuilA或QS21)和固醇(例如胆固醇)结合成螺旋状胶束的乳剂[14]。
·包含矿物油、非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇、非离子亲水表面活性剂(例如乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳剂[15]。
·包含矿物油、非离子亲水性乙氧基化脂肪醇、和非离子亲脂性表面活性剂(例如乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳剂[15]。
如上所述，包含角鲨烯的水包油乳剂是尤为优选的。在一些实施方式中，疫苗剂量中的角鲨烯浓度可为5～15mg(即，假定剂量体积为0.5ml，浓度为10～30mg/ml)。然而，可能将角鲨烯的浓度降低到[16，17]，例如包括＜5mg/剂，或甚至＜1.1mg/剂。例如，人用剂量可包含9.75mg角鲨烯/剂(如在FLUADTM产品中：9.75mg角鲨烯，1.175mg聚山梨酯80，1.175mg去水山梨糖醇三油酸酯，0.5ml的剂量体积)，或可包含其分数量，例如3/4、2/3、1/2、2/5、1/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9或1/10。例如，组合物可包含4.875角鲨烯/剂(由此聚山梨酯80和去水山梨糖醇三油酸酯各为0.588mg)、3.25mg角鲨烯/剂、2.438mg/剂、1.95mg/剂、0.975mg/剂等。在本发明中可使用这些FLUADTM-强度MF59分数稀释物中的任何一种，而保持角鲨烯∶聚山梨酯80∶去水山梨糖醇三油酸酯的比例为8.3∶1∶1(以质量计)。
免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物
本发明中使用了免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物。这些物质优选彼此缔合以形成颗粒复合物，该复合物是有用的TLR9激动剂。
已知免疫刺激性寡核苷酸可用作佐剂。它们通常含有CpG基序(含有与鸟苷连接的未甲基化胞嘧啶的二核苷酸序列)，它们的佐剂效果在参考文献18-23中有所讨论。含TpG基序、回文序列、多个串接的胸腺嘧啶核苷酸(例如TTTT)、多个串接的胞嘧啶核苷酸(例如CCCC)或poly(dG)序列的寡核苷酸也是已知的免疫刺激剂，双链RNA也是免疫刺激剂。虽然这些不同的免疫刺激性寡核苷酸中的任何一种均可用于本发明，优选采用含有脱氧肌苷/和/或脱氧尿苷的寡聚脱氧核苷酸，理想的是采用含脱氧肌苷和脱氧胞嘧啶的寡聚脱氧核苷酸。含肌苷的寡聚脱氧核苷酸可包括CpI基序(含有连接于肌苷的胞嘧啶的二核苷酸序列)。寡聚脱氧核苷酸可包含多于一个(例如2、3、4、5、6或更多个)的CpI基序，这些基序可直接重复(例如包含序列(CI)x，其中x为2、3、4、5、6或更多)或彼此分离(例如包含序列(CIN)x，其中x为2、3、4、5、6或更多，其中各N独立地表示一个或多个核苷酸)。胞嘧啶残基最好未甲基化。
寡核苷酸通常具有10～100个核苷酸，例如15～50个核苷酸，20～30个核苷酸，或25～28个核苷酸。其将通常为单链。
寡核苷酸可仅包含天然核苷酸，仅包含非天然核苷酸，或包含两者的混合。例如，其可包含一个或多个磷硫酰(phosphorothioate)连接键，和/或一个或多个核苷酸可包含2′-O-甲基修饰。
用于本发明的优选寡核苷酸是包含26聚体序列5′-(IC)13-3′(SEQ ID NO：1)的单链脱氧核苷酸。该寡聚脱氧核苷酸与聚阳离子聚合物形成稳定的复合物，从而提供优良的佐剂。
聚阳离子聚合物理想地为聚阳离子肽。聚合物可包含一个或多个亮氨酸氨基酸残基和/或一个或多个赖氨酸氨基酸残基。聚合物可包含一个或多个精氨酸氨基酸残基。其可包含这些氨基酸之一的至少一个直接重复，例如一个或多个Leu-Leu二肽序列，一个或多个Lys-Lys二肽序列，或一个或多个Arg-Arg二肽序列。其可包含至少一个(优选多个，例如2或3个)Lys-Leu二肽序列和/或至少一个(优选多个，例如2或3个)Lys-Leu-Lys三肽序列。
肽可包含序列R1-XZXZxXZX-R2，其中：x为3、4、5、6或7；各X独立地为带正电荷的天然和/或非天然氨基酸残基；各Z独立地为氨基酸残基L、V、I、F或W；R1和R2独立地选自：-H、-NH2、-COCH3或-COH。在一些实施方式中，X-R2可为该肽C末端氨基酸残基的酰胺、酯或硫酯。
聚阳离子肽将通常具有5～50个氨基酸，例如6～20个氨基酸，7～15个氨基酸，或9～12个氨基酸。
肽可仅包含天然氨基酸、仅包含非天然氨基酸、或包含两者的混合。其可包含L-氨基酸和/或D-氨基酸。通常是L-氨基酸。
肽可具有天然N-末端(NH2-)或修饰的N-末端，例如羟基、乙酰基等。肽可具有天然C-末端(-COOH)或修饰的C-末端，例如羟基、乙酰基等。这些修饰可提高肽的稳定性。
用于本发明中的优选的肽是11聚体KLKLLLLLKLK(SEQ ID NO：2)，其中所有均为L-氨基酸。N-末端可去氨基，C-末端可被羟基化。优选的肽是H-KLKL5KLK-OH，其中所有均为L-氨基酸。该寡肽是已知的抗微生物剂[24]、中性粒细胞激活剂[25]和佐剂[26]，其与免疫刺激性寡核苷酸形成稳定的复合物以提供优良的佐剂。
免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的最优选混合物是称为IC31TM[27-29]的TLR9激动剂，它是寡聚脱氧核苷酸SEQ ID NO：1与聚阳离子寡肽SEQID NO：2的吸附型复合物。
寡核苷酸和寡肽可以各种比例混合，但它们通常将以肽摩尔过量混合。所述的摩尔过量可为至少5∶1，例如10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1等。约25∶1的摩尔比是理想的[30，31]。以该过量比例混合可使得寡核苷酸与寡肽之间形成不溶性颗粒复合物。可将复合物与水包油乳剂组合。
寡核苷酸和寡肽将通常在水性条件下混合，例如可将寡核苷酸的溶液与寡肽的溶液以所需的比例混合。这两种溶液可通过将干燥(例如冷冻干燥)的材料溶解于水或缓冲液中形成随后可混合的储备溶液来制备。
可通过参考文献32所述方法来分析复合物。复合物所具有的平均直径理想地应大于乳剂中油滴的平均直径。可采用平均直径为1μm～20μm的复合物。在一些实施方式中，乳剂和复合物的尺寸分布没有重叠，即乳剂中最大的液滴小于最小的复合物(或最大的复合物小于最小的液滴)。然而，在其它实施方式中，液滴和复合物的直径可重叠。
聚赖氨酸和CpG寡聚脱氧核苷酸类似地形成复合物[33]。
可将复合物保持在水性悬液中，例如保持在水或缓冲液中。用于复合物的代表性缓冲液是：磷酸盐缓冲液(例如磷酸缓冲盐水)、Tris缓冲液、Tris/山梨醇缓冲液、硼酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液等。作为可选方式，有时可将复合物冷冻干燥。
可离心水性悬液中的复合物以将它们从主体(bulk)介质中分离(例如通过抽吸、倾析等)。然后，可将这些复合物重悬在其它介质中，例如重悬在水包油乳剂。
乳剂、寡核苷酸和聚合物的混合
本发明的佐剂组合物通常可通过混合水包油乳剂与寡核苷酸/聚合物复合物来制备。乳剂是液体，复合物通常以液体形式保持，因此本发明的佐剂可通过混合这两种液体形成。在一些实施方式中，这些液体中的一种或两种包含免疫原，从而可通过混合提供本发明的免疫原性组合物。在其它实施方式中，两种液体均不含免疫原，由此随后可将混合产物(即，本发明的佐剂组合物)与免疫原组合以提供本发明的免疫原性组合物。
两种液体的混合可以不同的混合体积比进行(例如20∶1～1∶20，10∶1～1∶10，5∶1～1∶5，2∶1～1∶2等)，但理想地约为1∶1。可对两种液体中组分的浓度进行选择，从而在混合后获得所需的终浓度，例如可将两种液体制成2倍的强度，从而1∶1混合可提供所需的终浓度。
在其它实施方式中，复合物不是液体形式(例如它们经离心或冷冻干燥)，它们可与乳剂组合(例如溶于乳剂)。
可采用各种浓度的寡核苷酸和聚阳离子聚合物，例如可采用参考文献27、30或31中、或参考文献34中所用的任何浓度。例如，聚阳离子寡肽可以如下浓度存在：1100μM、1000μM、350μM、220μM、200μM、110μM、100μM、11μM、10μM、1μM、500nM、50nM等。寡核苷酸可以如下浓度存在：44nM、40nM、20nM、14nM、4.4nM、4nM等。通常聚阳离子寡肽的浓度小于2000nM。对于以摩尔比1∶25混合的SEQ ID NO：1和2，在本发明三种实施方式中以mg/mL计的浓度可由此为0.311和1.322，或0.109和0.463，或0.031和0.132。
可采用以1∶1体积比混合的水包角鲨烯乳剂和IC31的水性制剂以提供每ml中各组分最终量如下的组合物：角鲨烯，4.9mg；聚山梨酯80，588μg；阳离子寡肽，500nMol或50nMol；寡核苷酸，20nMol或2nMol。
药物组合物
除了乳剂、寡核苷酸和聚合物，本发明的佐剂通常还包含其它组分，例如它们通常包含一种或多种药学上可接受的组分。这些组分也可存在于本发明的免疫原性组合物中，源自佐剂组合物中或其它组合物中。关于这些组分的详尽讨论可参见参考文献35。
组合物可包含防腐剂，例如柳硫汞或2-苯氧基乙醇。优选疫苗应基本上不含(例如＜10μg/ml)汞材料，例如不含柳硫汞。更优选不含汞的疫苗。尤为优选不含防腐剂的疫苗。在流感疫苗中可包含α-生育酚琥珀酸盐来替代汞化合物。
为控制毒性，组合物可包含生理盐，例如钠盐。优选氯化钠(NaCl)，其可以1～20mg/ml浓度存在。也可存在其它盐，包括：氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸二钠和/或氯化镁等。
组合物的重量克分子渗透压浓度可为200mOsm/kg～400mOsm/kg，例如240～360mOsm/kg，可为280～330mOsm/kg或290～310mOsm/kg。
组合物的pH通常可为5.0～8.1，更通常为6.0～8.0，例如6.5～7.5，或7.0～7.8。
组合物优选为无菌。组合物优选无热原，例如包含＜1EU(内毒素单位，标准测定)/剂，优选＜0.1EU/剂。组合物优选不含谷蛋白。
免疫原性组合物可包含用于单次免疫接种的材料，或可包含用于多次免疫接种的材料(即，“多剂量”试剂盒)。在多剂量配置中包含防腐剂是有利的。作为在多剂量组合物中包含防腐剂的可选(或其它)方式，可将组合物容纳在具有用于取出材料的无菌连接物(adaptor)的容器中。
在给药时，组合物通常是水性形式。疫苗通常以约0.5ml的体积剂量给药，虽然有时(例如对儿童)也可给予半剂(即，约0.25ml)。在本发明的一些实施方式中，组合物可以较高的剂量(例如约1ml，例如在混合两个0.5ml体积后)给药。
免疫原
可将本发明的佐剂组合物与免疫原组合给予动物，以诱导免疫应答。本发明可与许多免疫原一起使用，用于治疗或预防许多疾病。免疫原可引发免疫应答，而免疫应答可起到保护作用以抵御抗病毒性疾病(例如由被膜病毒或无被膜病毒引起)、细菌性疾病(例如由革兰氏阴性或革兰氏阳性细菌引起)、真菌性疾病、寄生虫疾病、自身免疫性疾病、或任何其它疾病。免疫原还可用于免疫治疗，例如治疗肿瘤/癌症、阿尔茨海默病或成瘾(addiction)。
免疫原可具有多种形式，例如完整生物体、外膜囊泡、蛋白质、糖、脂多糖、偶联物(例如载体和半抗原、载体和糖或脂多糖的偶联物)等。
免疫原可引发抗流感病毒(包括甲型和乙型流感病毒)的免疫应答。已显示水包油乳剂佐剂(尤其是包含角鲨烯的佐剂)的存在可增强对季节性[36]和大流行性[37，38]流感疫苗的免疫应答的株间交叉反应性。各种形式的流感病毒免疫原目前均是可获得的，它们通常基于活病毒或灭活病毒。灭活疫苗可基于完整病毒体、裂解的病毒体、或纯化的表面抗原。流感抗原还可以病毒小体的形式存在。血凝素是目前灭活疫苗中主要的免疫原，疫苗剂量参考HA水平标准化，通常通过SRID测定。现有疫苗通常包含约15μg HA/株，虽然可采用更低的剂量，例如用于儿童，或在大流行的情况下，或当使用佐剂时。已采用了分数剂量，例如1/2(即，7.5μg HA/株)、1/4和1/8，也有较高剂量(例如3倍或9被剂量[39，40])。因此，组合物可包含0.1～150μg HA/流感株，优选0.1～50μg，例如0.1-20μg，0.1-15μg，0.1-10μg，0.1-7.5μg，0.5-5μg等。具体的剂量包括，例如：每株约45、约30、约15、约10、约7.5、约5、约3.8、约1.9、约1.5等。对于疫苗中包含的各株，通常包含基本相同质量的HA，例如由此各株的HA质量在每株平均HA质量的10％之内，优选为平均值的5％之内。对于活疫苗，通过半数组织培养感染量(TCID50)而不是HA含量来测定剂量，通常采用的TCID50为106～108(优选106.5～107.5)/株。不采用SPF蛋作为细菌生长的基材(其中从感染的鸡蛋尿囊液中收获病毒)，而可采用支持流感病毒复制的细胞系。细胞系通常为哺乳动物来源，例如MDCK。甲型流感病毒免疫原可来自任何适合的HA亚型株，例如H1、H3、H5、H7、H9等，例如H1N1、H3N2和/或H5N1株。
免疫原可引发抗念珠球菌(例如白色念珠球菌(C.albicans))的免疫应答。例如，免疫原可为β-葡聚糖，其可与载体蛋白偶联。葡聚糖可包括β-1，3和/或β-1，6连接键。合适的免疫原包括参考文献41和42中所记载的那些。
免疫原可引发抗链球菌的免疫应答，包括：无乳链球菌(S.agalactiae)、肺炎链球菌(S.pneumoniae)和酿脓链球菌(S.pyogenes)。例如，免疫原可为荚膜糖，该荚膜糖可与载体蛋白偶联。对于无乳链球菌而言，该糖可来自血清型Ia、Ib、II、III和/或V中的一种或多种。对于肺炎链球菌而言，该糖可来自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和/或23F中的一种或多种。除了(或作为替换)荚膜糖免疫原，还可使用多肽免疫原来引发保护性抗链球菌免疫应答。
免疫原可引发抗脑膜炎球菌(脑膜炎奈瑟菌(N.meningitidis))的免疫应答。例如，免疫原可为荚膜糖，该荚膜糖可与载体蛋白偶联。荚膜糖和它们的偶联物尤其可用于抗脑膜炎球菌血清群A、C、W135和/或Y的保护中。除了(或作为替换)荚膜糖免疫原，还可用多肽免疫原和/或外膜囊泡来引发保护性抗脑膜炎球菌免疫应答，尤其是用于抗血清群B，例如如参考文献43中所揭示。
免疫原可引发抗肝炎病毒的免疫应答，例如甲肝病毒、乙肝病毒和/或丙肝病毒。例如，免疫原可为乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。
免疫原可引发抗呼吸道合胞病毒的免疫应答。免疫原可来自A群RSV和/或B群RSV。适合的免疫原可包括F和/或G糖蛋白或它们的片段，例如44和45所揭示。
免疫原可引发抗衣原体(Chlamydia)菌的免疫应答，包括沙眼衣原体(C.trachomatis)和肺炎衣原体(C.pneumoniae)。合适的免疫原包括参考文献46-52中所揭示的免疫原。
免疫原可引发抗大肠杆菌(Escherichia coli)的免疫应答，包括肠外致病菌株。合适的免疫原包括参考文献53-55中所揭示的免疫原。
免疫原可引发抗冠状病毒的免疫应答，例如人SARS冠状病毒。合适的免疫原可包含刺突糖蛋白。
免疫原可引发抗幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)的免疫应答。合适的免疫原包括CagA[56-59]、VacA[60，61]和/或NAP[62-64]。
免疫原可引发抗狂犬病毒的免疫应答。合适的免疫原是灭活的狂犬病毒[65，RabAvertTM]。
免疫原可引发抗人乳头瘤病毒的免疫应答。有用的免疫原是L1衣壳蛋白，该蛋白可组装成称为病毒样颗粒(VLP)的结构。可通过在酵母细胞(例如在酿酒酵母(S.cerevisiae))或在昆虫细胞(例如在夜蛾(Spodoptera)细胞，如草地夜蛾(S.frugiperda)，或果蝇(Drosophila)细胞中)重组表达L1来制备VLP。对于酵母细胞而言，质粒载体可携带L1基因；对于昆虫细胞而言，杆状病毒载体可携带L1基因。更优选，组合物包含来自HPV-16和HPV-18株的L1 VLP。该二价组合已显示出高效[66]。除了HPV-16和HPV-18株，还可包含来自HPV-6和HPV-11株的L1 VLP。
免疫原可引发抗肿瘤抗原的免疫应答，例如MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3(MAGE-A3)、MART-1/Melan A、酪氨酸酶、gp100、TRP-2等。免疫原可引发抗肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌等的免疫治疗性应答。
免疫原可引发抗偶联于载体蛋白的半抗原的免疫应答，其中所述半抗原是滥用的药物[67]。例子包括但不限于：鸦片制剂、大麻、苯异丙胺、可卡因、巴比妥酸盐、格鲁米特、甲乙哌啶酮、水合氯醛、甲喹酮、地西泮、LSD、尼古丁、抗胆碱能药、抗精神病药、色胺、其它精神病学模拟药物、镇静药、苯环己哌啶、西洛西宾、挥发性硝酸盐、以及其它诱导物理和/或心理依赖的药物。
可使用各种其它免疫原。
免疫原性组合物包含免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的复合物时，通常可将免疫原吸附于复合物，但这并不是必须的。因此，抗原可在离心后与复合物缔合，指吸附。当免疫原被描述为“至少部分吸附”于复合物时，优选组合物中免疫原总量的至少10％(以重量计)是吸附的，例如＞20％、＞30％、＞40％或更多。当免疫原被描述为“吸附”于复合物时，优选组合物中免疫原总量的至少50％(以重量计)是吸附的，例如50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或更多。在一些实施方式中，免疫原完全被吸附，即在通过离心从主体液体介质中分离复合物后，在上清液中检测不到任何免疫原。但是，在其它实施方式中，没有吸附。
组合物或试剂盒组分的包装
用于本发明佐剂组合物、免疫原性组合物和试剂盒组分的适合容器包括：小药瓶、注射器(例如一次性注射器)等。这些容器应为无菌。可将容器包装在一起形成试剂盒，例如在同一盒子内。
当组分位于小药瓶中时，该小药瓶可用玻璃或塑料材料制成。优选在将组合物装进小药瓶之前，对该小药瓶进行灭菌。为了避免乳胶过敏对象的问题，优选用无乳胶塞密封小药瓶，且优选在整个包装材料中都不含乳胶。小药瓶可包含单剂疫苗，或其可包含多于一剂(“多剂”小药瓶)，例如10剂。有用的小药瓶可用无色玻璃制成。硼硅玻璃比碱石灰玻璃更优选。小药瓶可具有丁基橡胶制的塞子。
小药瓶可具有合适的盖子(例如吕埃锁扣(Luer lock))，从而可将注射器插入该盖子中。小药瓶盖可位于封闭物或覆盖物内，从而必须先除去该封闭物或覆盖物才能接触到盖子。小药瓶可具有确保无菌取出其内容物的盖子，尤其是对于多剂小药瓶。
当组分包装到注射器中时，注射器可附有针头。如果未附有针头，可随注射器提供单独的针头以组装和使用。该针头可带鞘。注射器中的活塞可具有制动装置防止活塞在抽吸时意外脱落。注射器可具有橡胶盖和/或活塞。一次性注射器包含单剂疫苗。注射器通常具有顶帽以在连接针头前封闭尖端，该顶帽可用丁基橡胶制成。如果注射器和针头是分别包装的，则优选该针头配备有丁基橡胶护罩。有用的注射器是以商品名“Tip-Lok”TM市售的那些。
容器可标注有半剂量体积，例如以便于递送给儿童。例如，含有0.5ml剂量的注射器可标有0.25ml体积的标记。
多组分产品中通常包含比给予对象所需更多的材料，从而即便材料转移有任何不足，也能获得完全的最终剂量体积。因此，单个容器可过载例如5-20体积％。
治疗方法以及免疫原性组合物的给药
本发明的组合物适于给予人类对象，且本发明提供了提高对象中免疫应答的方法，该方法包括给予该对象本发明的免疫原性组合物的步骤。
本发明还提供了一种提高对象中免疫应答的方法，该方法包括步骤：混合本发明试剂盒中容器(或注射器腔)中的内容物，和将混合的内容物给予对象。
本发明还提供了用作药物(例如用于提高对象中的免疫应答)的本发明的组合物或试剂盒。
本发明还提供了水包油乳剂、免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物在制备用于提高对象中免疫应答的药物中的用途。该药物可与免疫原联合给药。
本发明还提供了水包油乳剂、免疫刺激性寡核苷酸、聚阳离子聚合物和免疫原在制备用于提高对象中免疫应答的药物中的用途。
通常可采用这些方法和用途来产生抗体应答，优选保护性抗体应答。
可以各种方法给予本发明的组合物。常用的免疫接种途径是肌内注射(例如注射入手臂或腿部)，但其它可用的途径包括：皮下注射、鼻内、口服、口腔内、舌下、皮内、经皮、透皮等。
根据本发明制备的免疫原性组合物可用作治疗儿童和成人的疫苗。对象的年龄可小于1岁、1～5岁、5～15岁、15～55岁、或者至少55岁。接受疫苗的优选对象为中年以上(例如≥50岁、≥60岁、优选≥65岁)、幼年(例如≤5岁)、住院对象、护工、武装部门和军事人员、怀孕妇女、慢性病、免疫缺陷对象、出国旅行者等。已显示IC31TM在婴儿群体中有效[34，68]。虽然，疫苗不只是适用于这些群体，其可更广泛地用于人群。
可采用单剂方案或多剂方案进行治疗。多剂可用于初次免疫接种方案和/或用于加强免疫接种方案。在多剂方案中，可通过相同或不同途径给予各种剂量，例如胃肠道外初次免疫和粘膜加强，粘膜给药初次免疫和胃肠道外加强等。在未经免疫的对象中，给予多于一剂(通常为两剂)是尤为有用的。多剂可通常间隔至少一周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约12周、约16周等)给予。
通用
术语“包括”涵盖“包含”和“由......组成”，例如“包括”X的组合物可完全由X组成、或可包含其它物质，例如X+Y。
词语“基本上”不排除“完全”，例如组合物“基本上不含”Y，可完全不含Y。如果需要，词语“基本上”可从本发明的定义中省略。
与数值x关联使用的术语“约”是任选和平均值，例如x±10％。
除非特别说明，包括将两种或更多种组分混合的步骤的方法不需任何特定的混合顺序。因此，可将组分以任何顺序混合。当有三种组分时，可将两种组分彼此组合，然后再将该组合与第三种组分组合等。
当在细胞培养中使用动物(尤其是牛)材料时，它们可获自不含传染性海绵状脑病(TSE)的来源，尤其是不含牛海绵状脑病(BSE)的来源。总体而言，优选在完全不含动物来来源材料的情况下培养细胞。
当化合物作为组合物的一部分给予人体时，该化合物或可用适当的前体药物替代。
当细胞底物用于重配或反向遗传学方法或用于病毒生长时，优选该细胞已经批准用于人疫苗产品，例如欧洲药典(Ph Eur)总章5.2.3中所记载的。
附图说明
图1显示IC31与MF59的混合物中的粒径。Y轴显示体积(％)，x轴显示粒径(μm)。图2～5显示在如下时间点对含佐剂H5N1抗原的相同分析：(2)时间0；(3)30分钟；(4)6小时；和(5)24小时。图6显示对仅含IC31佐剂的H5N1抗原的相同分析。
图7和8显示随时间变化的体温(℃)，从注射前3天到注射后5天。
具体实施方式
佐剂
按照参考文献4第10章中的记载制备水包角鲨烯乳剂，MF59。按照参考文献31中的记载制备高浓度和低浓度的IC31(10倍差异)。通过将MF59与IC31高或IC31低以1∶1体积比或5∶1体积比混合来制备佐剂组合。将三种单独的佐剂(MF59，IC31高，IC31低)和两种混合物(MF59+IC31高，MF59+IC31低)与不同免疫原组合，并给予各种哺乳动物以评估它们的效力。
此外，将IC31高和IC31低与含MF59佐剂的流感疫苗(FLUADTM)以1∶1的体积比混合。对于人类对象，在免疫接种前即时进行混合(“床边混合”)。
流感病毒
将IC31高或IC31低加入FLUADTM后，该流感抗原迅速与IC31复合物结合(吸附于)。在室温下，加入IC31高30分钟内，至少98％抗原吸附于IC31颗粒。在室温下，加入IC31低2小时后，观察到96％的吸附。在较低的温度(4℃)下24小时，观察到97％(IC31高)或91％(IC31低)的吸附。IC31高和IC31低在室温下24小时内的重量克分子渗透压浓度和pH保持基本恒定，这表明这些组合是稳定的。混合后，乳剂和IC31复合物的粒径保持不变。
流感抗原包含以下佐剂：MF59(FLUADTM)、IC31(IC31高或IC31低)、或MF59+IC31组合(50μL FLUADTM与等体积水性IC31混合；两种佐剂以2倍强度混合以在稀释后获得1倍的终强度)。将两剂各种组合物给予小鼠，评估HI滴度。基于单个样品，给予抗甲型流感病毒H1N1株的第二剂后的滴度如下：
  抗原   -   +   +   +   +   +   +
  佐剂   -   -   MF59   IC31高   IC31低   MF59+IC31高   MF59+IC31低
  滴度   84   400   3360   1392   704   3200   4352
对于所有三株的合并样品，HI滴度如下：
  抗原  -   +   +   +   +  +  +
  佐剂  -   -   MF59   IC31高   IC31低  MF59+IC31高  MF59+IC31低
  H1N1滴度  160   640   3840   1920   640  10240  10240
  H3N2滴度  240   1920   5120   5120   640  7880  7880
  B滴度  20   320   1920   640   480  640  1280
因此，MF59和IC31的组合比单独的佐剂更能提高HI滴度，尤其是对甲型流感病毒。
通过评估CD4+T细胞来测定佐剂引发了Th1型还是Th2型应答。MF59所引起的应答偏向于Th2型应答，而IC31所引起的应答(两种剂量)偏向于Th1型应答(但不如MF59偏向强烈)，组合的佐剂在Th1型和Th2型应答间更平衡。
虽然将IC31加入FLUADTM未对HI滴度产生重大影响，但其改变了免疫应答的平衡。
丙肝病毒
采用丙肝病毒E1E2蛋白免疫小鼠。采用MF59+IC31获得的抗体应答与单独采用MF59的应答相似，但在采用MF59+IC31低时，在三剂后观察到CD81结合的最高抑制。
ExPEC
给获自肠外致病性大肠杆菌株的抗原124加入以下佐剂：明矾、IC31、MF59或IC31+MF59。保护率如下：
  明矾   IC31   MF59   MF59+IC31
  40％   66％   75％   83％
血清群B脑膜炎球菌
给参考文献43的脑膜炎球菌血清群B疫苗的抗原加入以下佐剂：MF59、IC31高、IC31低或它们的组合。疫苗包含三种重组抗原(Ag1、Ag2和Ag3)，抗这些抗原的总IgG水平如下：
  抗原→   Ag1   Ag2   Ag3
  IC31低   7025   2021   2357
  MF59+IC31低   27132   7448   7120
  MF59   28611   4436   13099
  MF59+IC31高   36541   13632   8560
  IC31高   21334   6922   12962
由此，除了抗原“Ag3”，在使用MF59和IC31的混合物时观察到最高IgG水平。
还测试了血清对各种脑膜炎球菌株的杀菌活性。代表性的结果包括：
  菌株→   A   B   C   D   E   F   G   H
  IC31低   1024   256   4096   2048   256   64   512   ＜16
  MF59+IC31低   4096   1024   4096   2048   1024   128   4096   ＜16
  MF59   32768   1024   32768   4096   2048   128   4096   ＜16
  MF59+IC31高   8192   2048   8192   32768   2048   128   8192   ＜16
  IC31高   16384   2048   16384   32768   2048   512   4096   ＜16
由此，除了一些例外，在使用MF59和IC31的混合物时观察到最高的杀菌滴度。
脑膜炎球菌的多种血清群
还将这些脑膜炎球菌B蛋白抗原与来自血清群A、C、W135和Y抗原的偶联糖抗原组合，并用相同佐剂混合物测试。抗各血清群的测试株的杀菌滴度如下：
  抗原→   A   C   W135   Y
  IC31低   16384   8192   1024   2048
  MF59+IC31低   4096   8192   4096   8192
  MF59   16384   8192   2048   4096
  MF59+IC31高   8192   16384   4096   4096
  IC31高   32768   16384   4096   4096
由此，除了血清群A，在使用MF59和IC31的混合物时观察到最高的杀菌滴度。
大流行流感
将IC31高与MF59或缓冲液以1∶1比例混合，或与MF59和缓冲液以1∶0.5∶0.5的比例混合。由此，以正常浓度或半浓度测试MF59。将佐剂与流感病毒H5N1株(A/越南/1193/04)的表面抗原疫苗组合。测试该组合的稳定性和免疫原性。
通过在0时、然后在室温下储存30分钟或6小时后测试pH、重量克分子渗透压浓度、吸附、粒径来评估稳定性。pH稳定在7.23～7.26。重量克分子渗透压浓度稳定在280-286mOsm/kg。吸附的抗原的比例经6小时从76％上升到80％，在30分钟时间点时略有下降。这些数值与不含MF59的对照组合物相似，该对照组合物具有略低的重量克分子渗透压浓度(273-275mOsm/kg)，略高的pH(7.32-7.35)，和略低的吸附抗原比例(54-68％)。
图1中显示了PBS中IC31高∶MF591∶1混合物在0时的粒径。乳剂液滴(平均直径161nm)占体积的46.4％，IC31复合物(平均直径15.9μm)占53.6％。图2～5显示了室温下从0时到24小时针对包含H5N1抗原的含佐剂疫苗作的类似分析：
H5N1抗原与单独MF59组合(无IC31)的平均液滴直径为151nm。H5N1抗原与IC31高组合(但无MF59)的平均粒径为38.4μm(图6)。由此，MF59与IC31的混合略微增加了MF59颗粒的分析直径(但仍可进行灭菌过滤)，且降低了IC31复合物的直径。但是，在所有情况下，混合物均是稳定的。
雪貂(地中海雪貂(Mustela putorius furo))模型是提供候选大流行流感疫苗效力证据的优选动物模型。因此，将含有1μg或3.75μg抗原(血凝素剂量)的含佐剂疫苗给予8组雪貂。雪貂接受初次剂量和加强剂量，然后用异源H5B1株攻击。
在攻击前后监测雪貂的体温。图7和8显示了两只样本鼠的温度，一只来自组D(图7)，另一只来自组E(图8)。
在第0、21、42和49天时评估抗疫苗株的HAI滴度滴度。平均滴度如下：
  第0天   第21天   第42天   第49天
  A   5   5   28   24
  B   5   31   313   265
  C   5   5   38   29
  D   5   47   293   182
  E   5   60   820   578
  F   5   5   5   5
  G   5   5   28   20
  H   5   5   5   5
由此，IC31和MF59(组B和E)给出了最高的滴度。
初步数据着眼与受侵袭肺组织的百分比(对肉眼可见的肺损伤的估测)和相对肺重(低于1.0表明为健康的肺)。每组的平均结果如下：
  初次   加强   侵袭％   相对肺重
  A   1μg+MF59   1μg+MF59   25.8   1.1
  B   1μg+IC31/MF59   1μg+IC31/MF59   0.0   0.9
  C   3.75μg+MF59   3.75μg+MF59   18.3   1.3
  D   3.75μg+IC31   3.75μg+IC31   2.5   1.0
  E   3.75μg+IC31/MF59   3.75μg+IC31/MF59   1.7   1.0
  F   -   3.75μg+MF59   16.7   1.9
  G   -   3.75μg+IC31/MF59   14.0   1.1
  H   IC31/MF59   IC31/MF59   87.1   2.1
与单独的MF59或IC31相比，IC31和MF59的组合改善了该模型中的肺病理学情况。
由此，IC31与MF59水包油乳剂组合的佐剂是稳定的，且为雪貂提供了优良的免疫原性和抗大流行流感病毒株的保护。
群A链球菌和念珠菌
还给酿脓链球菌和白色念珠菌抗原加入了MF59TM+IC31TM佐剂。
应理解，虽然仅通过实例的方式描述了本发明，在保持本发明范围和精神的同时可进行修改。
参考文献
[1]WO90/14837.
[2]Podda&Del Giudice(2003)Expert Rev Vaccines 2：197-203.
[3]Podda(2001)Vaccine 19：2673-2680.
[4]Vaccine Design：The Subunit and Adjuvant Approach(《疫苗设计：亚单位和佐剂进展》，Powell&Newman编)普氏出版社(Plenum Press)1995(ISBN 0-306-44867-X).
[5]Vaccine Adjuvants：Preparation Methods and Research Protocls(《疫苗佐剂：制备方法和研究方案》，第42卷，Methods in Molecular Medicine series，“分子药物系列的方法”).ISBN：1-59259-083-7.O’Hagan编.
[6]WO2008/043774.
[7]Allison&Byars(1992)Res Immunol 143：519-25.
[8]Hariharan等，(1995)Cancer Res 55：3486-9.
[9]US-2007/0014805.
[10]US-2007/0191314.
[11]Suli等，(2004)Vaccine 22(25-26)：3464-9.
[12]WO95/11700.
[13]US专利：6,080,725.
[14]WO2005/097181.
[15]WO2006/113373.
[16]WO2007/052155.
[17]WO2008/128939.
[18]Krieg(2003)Nature Medicine 9：831-835.
[19]McCluskie等，(2002)FEMS Immunology and Medical Microbiology 32：179-185.
[20]WO98/40100.
[21]US 6,207,646.
[22]US 6,239,116.
[23]US 6,429,199.
[24]Alvarez-Bravo等，(1994)Biochem J 302：535-8.
[25]Nakajima等，(1997)FEBS Letts 415：64-66.
[26]Fritz等，(2004)Vaccine 22：3274-84.
[27]Schellack等，(2006)Vaccine 24：5461-72.
[28]Lingnau等，(2007)Expert Rev Vaccines 6：741-6.
[29]WO2004/084938.
[30]Kamath等，(2008)Eur J Immunol 38：1247-56.
[31]Riedl等，(2008)Vaccine 26：3461-8.
[32]Kritsch等，(2005)J Chromatography B 822：263-70.
[33]Lingnau等，(2003)Vaccine 20：3498-508.
[34]Olafsdottir等，(2009)Scand J Immunol 69：194-202.
[35]Gennaro(2000)Remington：The Science and Practice of Pharmacy(《雷明顿：药物科学和实践》).第20版，ISBN：0683306472.
[36]O’Hagan(2007)Expert Rev Vaccines.6(5)：699-710.
[37]Bernstein等，(2008)J Infect Dis.197(5)：667-75.
[38]Stephenson等，(2005)J Infect Dis.191(8)：1210-5.
[39]Treanor等，(1996)J Infect Dis 173：1467-70.
[40]Keitel等，(1996)Clin Diagn Lab Immunol 3：507-10.
[41]WO03/097091.
[42]Cassone和Torosantucci(2006)Expert Rev Vaccines 5：859-67.
[43]Giuliani等，(2006)Proc Natl Acad Sci U S A.103：10834-9.
[44]WO95/27787.
[45]WO03/010317.
[46]WO2007/110700.
[47]WO2006/138004.
[48]WO2005/084306.
[49]WO2005/002619.
[50]WO03/049762.
[51]WO02/02606.
[52]WO00/37494.
[53]WO2008/020330.
[54]WO2006/091517.
[55]WO2006/089264.
[56]Covacci和Rappuoli(2000)J.Exp.Med.19：587-592.
[57]WO 93/18150.
[58]Covacci等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5791-5795.
[59]Tummuru等，(1994)Infect.Immun.61：1799-1809.
[60]Marchetti等，(1998)Vaccine 16：33-37.
[61]Telford等，(1994)J.Exp.Med.179：1653-1658.
[62]Evans等，(1995)Gene 153：123-127.
[63]WO 96/01272&WO96/01273，尤其是SEQ ID NO：6.
[64]WO 97/25429.
[65]MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1998年1月16；47(1)：12，19.
[66]Harper等，(2004)Lancet 364(9447)：1757-65.
[67]美国专利：6,699,474.
[68]Kamath等，(2008)PLoS ONE 3(11)：e3683.
Figure IPA00001331579200011

Claims (15)

1.一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂、免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物。
2.如权利要求1所述的佐剂，其特征在于，所述寡核苷酸和所述聚合物是复合的。
3.如权利要求2所述的佐剂，其特征在于，所述寡核苷酸和所述聚合物的复合物是吸附性的。
4.如权利要求3所述的佐剂，其特征在于，所述吸附性的复合物的平均直径大于乳剂中油滴的平均直径。
5.如权利要求4所述的佐剂，其特征在于，所述复合物的平均直径为1～20μm。
6.如权利要求5所述的佐剂，其特征在于，所述油滴的平均直径小于220nm。
7.如权利要求4～6中任一项所述的佐剂，其特征在于，所述乳剂和所述复合物的尺寸分布之间没有重叠。
8.一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂和吸附性颗粒佐剂，其特征在于，所述吸附性颗粒佐剂中颗粒的平均直径大于所述乳剂中油滴的平均直径，且其中，所述吸附性颗粒佐剂是免疫刺激性寡核苷酸与聚阳离子聚合物的复合物。
9.一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂和免疫刺激性寡核苷酸，其特征在于，所述免疫刺激性寡核苷酸包含至少一个CpI基序。
10.一种免疫佐剂，其包含：水包油乳剂和吸附性颗粒佐剂，其特征在于，所述吸附性颗粒佐剂中颗粒的平均直径和所述乳剂中油滴的平均直径均小于250nm。
11.一种制备前述权利要求中任一项所述的佐剂的方法，所述方法包括将水包油乳剂与免疫刺激性寡核苷酸和聚阳离子聚合物的复合物混合的步骤。
12.一种免疫原性组合物，其包含：(i)权利要求1～10中任一项所述的佐剂；和(ii)免疫原。
13.一种制备免疫原性组合物的方法，其包含：混合(i)权利要求1～10中任一项所述的佐剂；和(ii)免疫原的步骤。
14.如权利要求12所述的组合物，或如权利要求13所述的方法，其特征在于，当给予宿主时，所述免疫原引发抵御病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病、寄生虫疾病或自身免疫疾病的免疫应答。
15.如权利要求12所述的组合物，或如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述免疫原引发抗甲型流感病毒或乙型流感病毒，例如H5N1甲型流感病毒的免疫应答。
CN2009801371805A 2008-09-18 2009-09-18 疫苗佐剂组合 Pending CN102159242A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19257708P 2008-09-18 2008-09-18
US61/192,577 2008-09-18
PCT/IB2009/007111 WO2010032138A2 (en) 2008-09-18 2009-09-18 Vaccine adjuvant combinations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102159242A true CN102159242A (zh) 2011-08-17

Family

ID=41582222

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2009801371805A Pending CN102159242A (zh) 2008-09-18 2009-09-18 疫苗佐剂组合

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20110236489A1 (zh)
EP (1) EP2331127A2 (zh)
JP (1) JP2012502972A (zh)
KR (1) KR20110061611A (zh)
CN (1) CN102159242A (zh)
AU (1) AU2009294318B2 (zh)
CA (1) CA2737455A1 (zh)
NZ (1) NZ591768A (zh)
WO (1) WO2010032138A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114010778A (zh) * 2021-10-21 2022-02-08 广州一品红制药有限公司 一种水包油型疫苗佐剂

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102740882A (zh) 2009-08-27 2012-10-17 诺华有限公司 含有铝、寡核苷酸和聚阳离子的佐剂
WO2015035010A1 (en) * 2013-09-05 2015-03-12 Immune Design Corp. Vaccine compositions for drug addiction

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5961970A (en) * 1993-10-29 1999-10-05 Pharmos Corporation Submicron emulsions as vaccine adjuvants
WO2008068631A2 (en) * 2006-12-06 2008-06-12 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990014837A1 (en) * 1989-05-25 1990-12-13 Chiron Corporation Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
US6699474B1 (en) 1990-08-20 2004-03-02 Erich Hugo Cerny Vaccine and immunserum against drugs of abuse
CA2383007A1 (en) 1992-03-02 1993-09-16 Chiron S.P.A. Helicobacter pylori proteins useful for vaccines and diagnostics
AU5543294A (en) 1993-10-29 1995-05-22 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
FR2718452B1 (fr) 1994-04-06 1996-06-28 Pf Medicament Elément d'immunogène, agent immunogène, composition pharmaceutique et procédé de préparation.
GB2303854B (en) 1994-07-01 1998-10-21 Rican Limited Helicobacter proteins and vaccines
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
ES2283012T3 (es) 1996-01-04 2007-10-16 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Bacterioferritina de helicobacter pylori.
DE69841122D1 (de) 1997-03-10 2009-10-15 Coley Pharm Gmbh Verwendung von nicht-methyliertem CpG Dinukleotid in Kombination mit Aluminium als Adjuvantien
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
ATE215385T1 (de) * 1997-12-16 2002-04-15 Chiron Corp Verwendung von mikropartikeln mit submikron öl/wasser emulsionen
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
DE60139690D1 (de) 2000-07-03 2009-10-08 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae
ES2307568T3 (es) * 2000-12-08 2008-12-01 Coley Pharmaceutical Gmbh Acidos nucleicos de tipo cpg y metodos de uso de los mismos.
FR2827605B1 (fr) 2001-07-20 2004-07-16 Pf Medicament Nouveaux peptides derives de la proteine g du vrs et leur utilisation dans un vaccin
US20030202982A1 (en) * 2001-08-15 2003-10-30 Birkett Ashley J. Influenza immunogen and vaccine
US20050106162A1 (en) 2001-12-12 2005-05-19 Guido Grandi Immunisation against chlamydia trachomatis
GB0211118D0 (en) 2002-05-15 2002-06-26 Polonelli Luciano Vaccines
CA2517673C (en) 2003-03-24 2013-08-13 Intercell Ag Improved vaccines for preventing viral infection
WO2004087203A2 (en) * 2003-04-02 2004-10-14 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations for topical application
US20100255002A1 (en) 2003-06-26 2010-10-07 Chiron Corporation Immunogenic compositions for chlamydia trachomatis
WO2005084306A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Chiron Corporation Immunogenic compositions for chlamydia pneunomiae
KR20070008625A (ko) 2004-04-05 2007-01-17 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 미세유체화된 수중유 유화액 및 백신 조성물
CN101203529A (zh) 2005-02-18 2008-06-18 诺华疫苗和诊断公司 来自脑膜炎/脓毒症相关性大肠杆菌的蛋白质和核酸
ES2595363T3 (es) 2005-02-18 2016-12-29 J. Craig Venter Institute, Inc. Sepsis asociada a las proteínas y los ácidos nucleicos de meningitis / Escherichia coli
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
US8133973B2 (en) 2005-05-12 2012-03-13 Novartis Vaccines And Diagnostics, S.R.L. Immunogenic compositions for Chlamydia trachomatis
US8703095B2 (en) 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
AU2006310163B2 (en) 2005-11-04 2011-09-15 Seqirus UK Limited Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant
WO2007110700A2 (en) 2005-12-22 2007-10-04 Novartis Vaccines And Diagnostics, Srl. Chlamydial antigens
FR2896162B1 (fr) 2006-01-13 2008-02-15 Sanofi Pasteur Sa Emulsion huile dans eau thermoreversible
WO2007098186A2 (en) * 2006-02-22 2007-08-30 Novavax, Inc. Adjuvant and vaccine compositions
EP2064230A2 (en) 2006-08-16 2009-06-03 Novartis AG Immunogens from uropathogenic escherichia coli
BRPI0717219B8 (pt) 2006-10-12 2021-05-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa composição imunogênica, e, uso de uma composição imunogênica
AR066405A1 (es) 2007-04-20 2009-08-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna
CN102740882A (zh) * 2009-08-27 2012-10-17 诺华有限公司 含有铝、寡核苷酸和聚阳离子的佐剂

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5961970A (en) * 1993-10-29 1999-10-05 Pharmos Corporation Submicron emulsions as vaccine adjuvants
WO2008068631A2 (en) * 2006-12-06 2008-06-12 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CAROLA SCHELLACK, ET AL.: "IC31, a novel adjuvant signaling via TLR9, induces potent cellular and humoral immune responses", 《VACCINE》 *
KAREN LINGNAU, ET AL.: "IC31 and IC30, novel types of vaccine adjuvant based on peptide delivery systems.", 《EXPERT REV. VACCINES》 *
张天笑 等: "DNA疫苗佐剂研究进展", 《生物技术通报》 *
潘杭君 等: "免疫佐剂的研究进展", 《中国兽药杂志》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114010778A (zh) * 2021-10-21 2022-02-08 广州一品红制药有限公司 一种水包油型疫苗佐剂

Also Published As

Publication number Publication date
AU2009294318A1 (en) 2010-03-25
WO2010032138A2 (en) 2010-03-25
WO2010032138A3 (en) 2010-06-24
EP2331127A2 (en) 2011-06-15
AU2009294318B2 (en) 2014-04-24
JP2012502972A (ja) 2012-02-02
NZ591768A (en) 2012-11-30
US20110236489A1 (en) 2011-09-29
CA2737455A1 (en) 2010-03-25
KR20110061611A (ko) 2011-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1767854B (zh) 微流化水包油乳剂及疫苗组合物
ES2335160T3 (es) Procedimientos de control de calidad para emulsiones de aceite en agua que contienen escualeno.
CN101951949B (zh) 脑膜炎球菌疫苗制剂
CN101784283A (zh) 低添加流感疫苗
US20180036237A1 (en) Oil/surfactant mixtures for self-emulsification
TW200908994A (en) Vaccine
CN101553252A (zh) 包含来自于四株流感病毒的抗原的疫苗
US9370570B2 (en) Polychlorinated biphenyls and squalene-containing adjuvants
CN101500603A (zh) 节省佐剂的多剂量流感疫苗接种方案
TW200906448A (en) Emulsion vaccine compositions comprising antigen and adjuvant in the aqueous phase
CN102438651A (zh) 用于大流行相关毒株的流感疫苗方案
US20170080084A1 (en) Oil/surfactant mixtures for self-emulsification
CN102159242A (zh) 疫苗佐剂组合
Burakova et al. Food-grade saponin extract as an emulsifier and immunostimulant in emulsion-based subunit vaccine for pigs
O’Hagan et al. Emulsion-based adjuvants for improved influenza vaccines
Ledet et al. Nanoemulsions as a vaccine adjuvant
JP2023532944A (ja) 水中油型エマルジョンアジュバントの低温濾過
Shah Development of a self-emulsification process for emulsion adjuvants and the effect of droplet size on vaccine response
NZ597405B (en) Polychlorinated biphenyls and squalene-containing adjuvants
NZ597405A (en) Shark-derived squalene containing low levels of polychlorinated biphenyl contaminants for use in vaccine adjuvants

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent of invention or patent application
CB02 Change of applicant information

Address after: Basel

Applicant after: Novartis Ag

Address before: Basel

Applicant before: Novartis Vaccines & Diagnostic

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: NOVARTIS VACCINES + DIAGNOSTIC TO: NOVARTIS CO., LTD.

C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20110817