JP4638738B2 - ｇｅｍ−ビスホスホネート誘導体で被覆された磁性粒子の新規組成物 - Google Patents

ｇｅｍ−ビスホスホネート誘導体で被覆された磁性粒子の新規組成物 Download PDF

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Description

本発明は、一方で粒子の表面に結合したｇｅｍ−ビスホスホネート基および他方でバイオベクターと呼ばれる標的化実体に共有結合することが可能な反応基を含む分子で被覆された磁性粒子の組成物に関する。本発明はまた、それらの調製の方法および特に、核磁気共鳴画像（ＭＲＩ）のための造影生成物としてのそれらの使用に関する。
ＭＲＩは、生物体の内臓の可視化を可能にし、従って、診断、医学的処置および手術の強力な指針ならびに補助に寄与する。
造影生成物の投与は、該技術によって得られる画像の解像度および診断の精度を改善するのに役立つ。
従って、造影効果は、検査に供される器官の環境における多様な磁性種、例えば、常磁性種、強磁性種または超常磁性種の存在によって強調され得る。
常磁性物質は、イオンまたは有機金属状態の鉄、マンガン、ガドリニウムなどの特定の金属を含む。強磁性造影物質は、一般にマイクロメーターまたはサブマイクロメーター、即ち、１００〜２００ｎｍ以上の磁性凝集性粒子、例えば、特にマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）、マグヘマイト（γ−Ｆｅ２Ｏ３）および永久磁石のように挙動する遷移元素の他の磁性鉱物化合物を含むフェライトを含む。超常磁性粒子は、特に、マグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）、マグヘマイト（γ−Ｆｅ２Ｏ３）および遷移元素の他の磁性鉱物化合物を含むフェライトの極めて小さな粒子であり、約１００〜１５０ｎｍ未満のサイズを有する。強磁性粒子とは異なり、超常磁性粒子は、それらのサイズが臨界値よりも小さいという事実のため、もはや小さな自立した磁石のようには挙動せず、即ち、それらが外磁場に供される場合にのみ、それらは好適な方向に整列される。超常磁性粒子は、有利なことに、強磁性粒子と比較して、より高い有効密度を有する。
磁性粒子のコロイド溶液（以後、磁性流体とも称し、生理学的媒体において安定である）を入手するためには、磁性粒子の表面の状態を調整する必要がある。
一般に、医用画像化に使用される磁性粒子は、デキストランなどの炭水化物、アルブミンなどのタンパク質、またはメタクリレートおよびオルガノシランなどの合成ポリマーなどの巨大分子で被覆される。該タイプの粒子を入手することが可能な合成は、一般に、いわゆる＜＜デ・モルデイ＞＞方法（参考文献：ロバートＳ．モルデイ（Ｒｏｂｅｒｔ Ｓ．Ｍｏｌｄａｙ）およびＤ．マッケンジー（Ｄ．Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ）；Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８２），５２，３５３〜３６７頁）に従って行われ、労力のかかる高価な精製方法を要する。
磁性粒子の多くの生物医学的アプリケーションでは、粒子が標的細胞および組織に特異的に結合するように、粒子を特異的親和性を持つ分子に結合させることが必要である。この認識は、しばしば、粒子に固定されたリガンド（バイオベクター）と標的細胞または組織の表面の受容体との間の親和性複合体の形成によって確実にされる。特異的親和性を持つこのような分子は、粒子の表面に直接吸着されていてもよく、または共有結合によって結合されていてもよい。
一般に、特異的親和性分子の巨大分子上への共有結合性グラフト化には、巨大分子上の固定部位を作製するための例えば、酸化による事前の化学的活性化が必要である。
しかし、巨大分子上に作製される固定部位の数は、一般に制御することが困難であり、その結果、後の特異的親和性分子のグラフト化を制御することはできない。
グラフトされた特異的親和性分子の量の制御は、標的に関連する粒子の最終溶液の親和性を調整すること、しかしまた、薬物動態、体内分布ならびに場合により代謝、排泄およびこれらの粒子の無毒性を調整するのに重要である。さらに、産業的観点から、特異的親和性分子の量、一般的に極めて高い該分子の費用を最小限にすることも有利である。
さらに、特異的親和性分子と反応していない巨大分子の表面の反応基は、インビボで毒性反応を生じる可能性がある。
同様に、化学吸着による特異的親和性分子のグラフト化は、一般に、生理化学的観点から制御することが困難であり、さらに、生物学的媒体においてかなり不安定である。さらに、化学吸着は、特異的親和性分子の遊離型と平衡を生じる。この遊離型はＭＲＩ造影に不利である。
低分子量の有機分子で被覆された磁性粒子についても現在までに記載されている。
書面Ｊ．ｏｆ Ｃｏｌｌ．Ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１，２３８，３７〜４２頁は、ビスホスホネート部分を含む有機分子による磁性粒子の被覆は、小さく（１５ｎｍ未満）かつ広範なｐＨ範囲で安定である対象物を入手することが可能であることを教示している。
しかし、該書面に記載のビスホスホネート化合物で被覆された粒子の流体力学的サイズのＰＣＳ（光子相関法）による測定は、凝集物を取り出し、小さな流体力学的サイズの粒子のみを単離するための１００ｎｍフィルター上での事前のろ過工程を必要とする。従って、該測定は、入手される粒子の心の流体力学的サイズ（実際にはかなり大きい）を反映しない。
さらに、該書面において記載の方法によるｇｅｍ−ビスホスホネート化合物で被覆された磁性粒子の精製は、透析または樹脂による処置の工程を必要とし、それは、労力を要し、再現性が乏しく、かつ産業的に利用することが極めて困難であることが見出されている。ｇｅｍ−ビスホスホネートが−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２基であることが留意される。
従って、該方法は、労力を要する精製方法に頼らなければ、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物の磁性粒子の表面へのグラフト化の制御も得られる粒子の流体力学的サイズの制御も可能ではない。さらに、該書面は、特定の生物医学的アプリケーションのために、特異的標的化実体を、ビスホスホネート化合物、特に、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物で被覆された粒子に結合することについて記載も示唆もしておらず、それらの使用をこの標的化に極めて不適切にしている。
本発明における流体力学的直径は、その水和層によって囲まれた溶液中の粒子の直径を指し、ＰＣＳ技術（光子相関法：関連文献：Ｒ．ペコラ（Ｒ．Ｐｅｃｏｒａ）−Ｊ．ｏｆ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０００）、２巻、１２３〜１３１頁）に従う光散乱によって測定される。
公開国際公開第９７／０１７６０号パンフレットは、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）のチオール基を介して、特異的標的化実体、アネキシンに結合されたＤＭＳＡで被覆された磁性流体について記載している。
しかし、正常なｐＨおよびイオン強度条件では、粒子の表面に存在するＤＭＳＡのチオール基は酸化し、凝集物の形成をもたらすジスルフィド架橋を形成する傾向を有する。その結果、大きな流体力学的サイズおよび高い程度の多分散を生じる。
アネキシンのグラフト化にはまた、ジスルフィド架橋の還元によるチオール基の再生が予め必要である。
最後に、アネキシンのグラフト化は制御が不十分である。従って、インビボでの毒性反応または得られる粒子の後の凝集を回避するために、結合後に、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）との反応によって、残留チオール基を不活性にすることが必要であることが見出されている。
従って、特定の診断について効率的であり、同時に、低い程度の多分散を示し、安定である粒子を入手することがなお必要である。
今回、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物と酸性磁性粒子との併用により、官能化されたｇｅｍ−ビスホスホネート化合物の磁性粒子上へのグラフト化および得られる粒子のバイオベクターへの結合の両方を制御することが可能であることを見出した。この二重の制御は、粒子がバイオベクターに結合しているかどうかに係わらず、特に、得られる粒子、即ち、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によってグラフトされた酸性磁性粒子（ｐ）の流体力学的サイズの制御を可能にするという利点を有する。従って、本発明は、特に、
・ｇｅｍ−ビスホスホネートがグラフトされている酸性粒子であって、該粒子は、一旦グラフトされると、少なくとも１つのバイオベクターに結合することが可能である、上記粒子；
・ｇｅｍ−ビスホスホネートによってグラフトされ、少なくとも１つのバイオベクターに結合されている粒子、
に関する。
これに関して、そのような磁性粒子を入手するための方法は、制限された数の工程を含み、実行が簡単でありかつ再現性があることを見出した。さらに、労力を要する精製方法を必要とせず、極めて良好な収率によって特徴付けられる。
本発明に関して、「酸性磁性粒子」は、いわゆる「酸性」磁性流体内の本発明と同じタイプの磁性粒子を意味し、該磁性流体は先行技術から公知であるが、ｇｅｍ−ビスホスホネートとの会合についてはこれまで記載も示唆もされていない。
これらの「酸性」磁性流体については、「アルカリ性」磁性流体と同様に、文献、特に、刊行物マサート（Ｍａｓｓａｒｔ）ら、Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃ．Ｐａｒｉｓ，ｔ．２９１，７／０７／１９８０，Ｓａｅｒｉｅ Ｃ ａｎｄ ＩＥＥ，Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ，１９８１，ｖｏｌ．ＭＡＧ−１７，ｎ゜２，１２４７頁において広範に記載されている。
酸性磁性流体の酸性磁性粒子は、酸性媒体において、表面にプロトン化されたヒドロキシル部位を有することが一般に記載されている。
対照的に、アルカリ性磁性流体の磁性粒子は、一般に、塩基性媒体において、ＯＨ−イオンによって錯体形成した部位を有することが記載されている。
事実、部位に関するこの説明は、酸性および塩基性磁性流体が弱いポリ酸および／またはポリ塩基のように挙動することを示す多様な研究によっても確認されているモデルに対応する。
有利なことに、本発明者らは、「アルカリ性」磁性流体とは異なり、「酸性」磁性流体は極めて安定であり、粒子凝集現象を示さず、前駆体の流動力学的サイズ（即ち、非グラフト粒子）、その後、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によってグラフトされた粒子、次いで、適切である場合、バイオベクターに結合された前記粒子のより良好な制御を、労力を要する精製工程をともなうことなく生じることを示している。
驚くべきことに、本発明者らはまた、酸性磁性粒子の表面でそれぞれプロトン化されたヒドロキシル部位が、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物による磁性粒子の極めて良好な被覆を入手することが可能であり、ｇｅｍ−ビスホスホネート錯化剤の分子によって潜在的にグラフトされる可能性があることも示している。この相互作用は、有利なことに、粒子の表面を均質に遮蔽することが可能であり、これは特に、免疫系による粒子の後の認識を防止する。
特に、本発明者らはまた、酸性磁性粒子の流体力学的サイズを減少することが可能であり、その結果、極めて小さなサイズの磁性粒子を入手することが可能な方法を見出した。有利なことに、ｇｅｍ−ビスホスホネート系薬剤によるこれらの粒子の制御されたグラフト化、場合により続いて、バイオベクターとの同様に制御された結合は、労力を要する生成工程を伴わない小さな流体力学的サイズの最終的磁性粒子の生成を可能にし、従って、究極的に、堅牢で再現性のある、従って産業上適用可能な調製方法を提供する。
本発明者らはまた、一方で、バイオベクターに共有結合可能なＸ基、および他方でｇｅｍ−ビスホスホネート基の代わりにジホスホネート基を含む化合物による酸性磁性粒子（ｐ）の錯体について研究した。
従って、本発明者らは、既に先行技術より顕著に改善されている安定な粒子を入手したが、バイオベクターへの結合は、ｇｅｍ−ビスホスホネートによるよりも有意に効率が低い。特に、ジホスホネート化合物ＨＯＯＣ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２（ＰＯ３Ｈ２））２が使用される場合、理由は明らかではないが、粒子は、ｇｅｍ−ビスホスホネートより２倍低いバイオベクターとの結合の割合を有する。従って、その結果は、ジホスホネートによってグラフトし、バイオベクターに結合した磁性粒子を生成するための費用はかなり高くなる。
従って、本発明の目的は、ｇｅｍ−ビスホスホネート誘導体によって、制御された様式でグラフトされ、場合により、該誘導体を介して、制御された様式で、特異的標的化実体タイプの種（バイオベクター）に結合した磁性粒子の組成物を提唱することである。
より具体的には、本発明の目的はまた、懸濁液、特に、生物学的媒体において安定であり、有利なことに、制御された流体力学的サイズ、特に小さな流体力学的サイズを有する該タイプの組成物を提供することである。
本発明の目的はまた、該組成物の調製のための方法を提供することである。
第１の局面に従えば、本発明は、鉄化合物に基づく酸性磁性粒子（ｐ）を含む組成物に関し、酸性磁性粒子（ｐ）は、それぞれ、式Ｉ：
Ｘ−Ｌ−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２ （Ｉ）
（式中：
・ＬはＸ基をｇｅｍ−ビスホスホネート基−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２に接続する有機基を表し；
・Ｘはバイオベクターと反応することが可能な化学基を表し；粒子（ｐ）のＸ基のすべてまたはいくつかは、場合によりバイオベクターに結合される）
の１つもしくはそれ以上のｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成している。
当業者であれば、表現「それぞれが錯体形成する」は、組成物がまた、式（Ｉ）の化合物では錯体形成しない磁性粒子（ｐ）を含み得ることを意味することを理解しており、これは、主として、ランダム分布の理由のためおよび／または組成物の調製のための方法によるものであり、以後、該方法について説明する。
組成物は、ナノ粒子の安定な水溶液の形態である。
これらの組成物では、粒子に対する化合物（Ｉ）の錯体形成の割合は７０％より高く、好ましくは、８０、９０、９５％より高く、本説明における表現「錯体形成の割合」は、好ましくは、酸性磁性粒子（ｐ）上に存在するプロトン化された部位の量に関連する式（Ｉ）の化合物の量を指す。
酸性磁性粒子（ｐ）は、式（Ｉ）の化合物によって、それらのプロトン化された部位の少なくとも９０％で錯体形成することが特に好適であり、これは、有利なことに、粒子の良好な安定を特に確実にすることが可能である、粒子の良好な被覆をもたらし、免疫系による粒子の認識を防止し、バイオベクターとの後の任意の結合をより効率的にする。
磁性粒子（Ｐ）
本説明に関して、「鉄化合物に基づく粒子」は、そのすべてまたはいくつかが、一般に、鉄（ＩＩＩ）、一般に、酸化または水酸化鉄を含む鉄誘導体によって構成される粒子を意味する。
一般的な規則として、酸性磁性粒子（ｐ）のいくつかまたはすべては、水酸化鉄；酸化鉄水和物；フェライト；コバルト、ニッケル、マンガン、ベリリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、ストロンチウム、銅、亜鉛、もしくは白金などの混合型酸化鉄；またはそれらの混合物よりなる。
本発明に関して、用語「フェライト」は、一般式［ｘ Ｆｅ２Ｏ３、ｙ ＭＯｚ］（式中、Ｍは、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｒｕ、Ｍｇ、Ｍｎなどの磁場の効果下で磁化可能な金属を示す）を意味し、場合により、磁化可能な金属は放射性であることが可能である。
好ましくは、本発明の組成物の酸性磁性粒子（ｐ）は、フェライト、具体的には、マグヘマイト（γＦｅ２Ｏ３）およびマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）、またはコバルト（Ｆｅ２ＣｏＯ４）もしくはマンガン（Ｆｅ２ＭｎＯ４）の混合型フェライトもまた含む。
これに関して、そのすべてまたはいくつか、好ましくは、ほとんどがマグヘマイトもしくはマグネタイトまたはそれらの混合物よりなる酸性磁性粒子（ｐ）が極めて格別に好適である。
本発明に従う組成物の酸性磁性粒子（ｐ）は、それらの表面で、酸性媒体においてプロトン化されたヒドロキシル部位を有し、該部位は、より正確には、粒子の表面のＦｅ３＋イオンと酸性水の分子（Ｈ３Ｏ＋）との間の強い相互作用から生じる種Ｆｅ−ＯＨ２ ＋に対応する。これらのプロトンは、Ｊ．ライクレマ（Ｊ．Ｌｙｋｌｅｍａ）ら、Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９８４，１７，１〜２４頁の研究に従う粒子を構成するとみなすことができる。酸性粒子上のプロトン化された部位の百分率は、典型的に、１．３〜２．５％（部位のモル／鉄のモル）である。
特に好適な変異体に従えば、酸性粒子（ｐ）は超常磁性である。
次いで、磁性粒子（ｐ）は、５〜３００ｎｍ、好ましくは、５〜６０ｎｍ、より好ましくは、５〜３０ｎｍの流体力学的直径を有する。
好ましくは、本発明の組成物は、有利なことに、適切である場合、安定なコロイド溶液（ナノ粒子の安定な水性懸濁液）の形成に適切な濃度、即ち、一般に、金属イオンの全モル数で表現して２μｍｏｌＬ−１〜４ｍｏｌＬ−１の磁性粒子（ｐ）の濃度を有する酸性磁性粒子（ｐ）の懸濁液である。
式（Ｉ）の化合物
本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物が酸性磁性粒子の表面に固定されることを確実にするｇｅｍ−ビスホスホネート基を含む。
より正確には、本発明者らは、それぞれのｇｅｍ−ビスホスホネート基が酸性粒子の表面の単一のプロトン化されたヒドロキシル部位と相互作用することを実証した。
本発明の式（Ｉ）の化合物は、ｇｅｍ−ビスホスホネート基と、バイオベクターの共有結合性グラフト化を確実にすることが可能な反応性実体Ｘ基を接続するおよび／または相互に間隔を置くことが可能なリンカー（Ｌ）を含む。
好ましくは、リンカーＬは２価の基を表す。
好ましくは、リンカーＬは：
・脂肪族；脂環式；脂環−脂肪族；芳香族；芳香族−脂肪族基（脂肪族、脂環式および芳香族基は、メチル、ヒドロキシ、メトキシ、アセトキシ、アミド基または塩素、ヨウ素もしくは臭素原子によって置換されることが場合により可能である）；
・基−Ｌ１−ＮＨＣＯ−Ｌ２（式中、Ｌ１およびＬ２は同一または異なるものであり、脂肪族；脂環式；芳香族；脂環−脂肪族もしくは芳香族−脂肪族基を表し、前記基は、メチル、ヒドロキシ、メトキシ、アセトキシ、アミド基または塩素、ヨウ素もしくは臭素原子によって置換されることが場合により可能である）
から選択される。
本発明に関する脂肪族基は、好ましくは、１〜１６個の炭素原子、より好ましくは１〜６個の炭素原子を含む線状または分岐した炭化水素鎖を意味する。その例には、特に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ペンチルおよびヘキシルラジカルがある。
用語「脂環式」は、好ましくは、３〜８個の炭素原子を含む環式炭素原子を意味する。その例として、特に、シクロプロピルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
用語「芳香族」は、５〜２０個の炭素原子、より好ましくは、６〜１８個を含む、モノ−または多環式芳香族炭化水素基を表す。その例には、特に、フェニルおよび１−または２−ナフチルラジカルがある。１つの特定の変異体に従えば、本発明に関する「芳香族」基は、イオウ、酸素または窒素などの１個もしくはそれ以上のヘテロ原子を組み入れることができる。この特定の場合では、「芳香族」基は、モノ−または多環式へテロ芳香族基を示す。
「脂肪族−脂環式」および「脂肪族−芳香族」基は、上記で規定されたようなそれぞれ脂肪族または芳香族基によって置換される、上記の規定に対応する脂肪鎖を表す。特に、ベンジルは、脂肪族−芳香族基の例として挙げられる。
好適な変異体に従えば、Ｌは、場合により置換されるフェニレン基を表し、Ｘおよびｇｅｍ−ビスホスホネート基はオルト、メタまたはパラ位であることが可能である。
１つの特に好適な実施態様に従えば、Ｌは、置換または非置換脂肪族基、より好ましくは、基−（ＣＨ２）ｐ −（式中、ｐは１〜５の整数である）を表す。
別の好適な実施態様に従えば、Ｌは、基Ｌ１−ＣＯＮＨ−Ｌ２、より好ましくは、基−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＯ−（ＣＨ２）ｍ −（式中、ｎおよびｍは０〜５の整数を表す）を表す。
式（Ｉ）のｇｅｍ−ビスホスホネート化合物のＸ末端は、該末端がバイオベクター上に存在する基と反応し、共有結合を形成することが可能であるような様式で選択される。これらの結合方法に関するさらなる情報については、特に、研究Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，グレッグＴ．ハーマンソン（Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ），１９９５，出版社：アカデミック（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ）を参考にすることができる。
好適なＸ基としては、特に：
・−ＣＯＯＨ、
・−ＮＨ２、−ＮＣＳ、−ＮＨ−ＮＨ２、−ＣＨＯ、アルキルピロカルボニル（−ＣＯ−Ｏ−ＣＯ−アルキ（ａｌｋ））、アシルアジジル（−ＣＯ−Ｎ３）、イミノカルボネート（−Ｏ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２）、ビニルスルフリル（−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ２）、ピリジルジスルフリル（−Ｓ−Ｓ−Ｐｙ）、ハロアセチル、マレイミジル、ジクロロトリアジニルおよびハロゲン
を挙げることができ、
・基−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ２が特に好適である。
本説明に関して、用語「アルキ（ａｌｋ）」は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルラジカルを意味し、その部分について用語「ピリ（Ｐｙ）」は、ピリジルラジカルを意味する。
マレイミジルラジカルは、式：
Figure 0004638738
 の環式ラジカルを示す。
ジクロロトリアジニルラジカルは、式：
Figure 0004638738
 を示す。
ハロゲン基のうち、特に、塩素、臭素、フッ素およびヨウ素を挙げることができ、塩素および臭素が特に好適である。
本発明に関して、「ハロアセチル」は、水素原子のうちの１つがハロゲン原子によって置換されるアセチルラジカルＣＨ３−ＣＯ−を意味し、前記ハロゲン原子は上記で規定した通りである。
好ましくは、Ｘは、基−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２を表し、Ｌは置換または非置換脂肪族基、なおより良好な基−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｐは１〜５の整数である）を表す。
式（Ｉａ）の化合物
ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２ （Ｉａ）
は特に最も好適である。
別の好適な実施態様に従えば、Ｌは、基Ｌ１−ＣＯＮＨ−Ｌ２、より好適には、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＯ−（ＣＨ２）ｍ−（式中、ｎおよびｍは０〜５の整数を表す）を表し、Ｘは−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２を表す。
もちろん、直接的様式、即ち、ホモ二官能またはヘテロ二官能試薬を介するＸ基およびバイオベクターの結合もまた、本発明の内容に当てはまる。例示的に、ホモ−二官能試薬、グルタルアルデヒドは、例えば、基Ｘ＝−ＮＨ２とバイオベクターの−ＮＨ２との結合を行うのに適切であり得る。
本発明の好適な変異体に従えば、
−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＯＣＯ、−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−、−Ｃ−Ｓ−、−Ｎ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｎ−ＣＨ２−、−Ｎ−ＣＳ−Ｎ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｎ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｎ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ＝ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−もしくは−Ｏ−Ｎ＝ＣＨ−、または以下の式：
Figure 0004638738
 のタイプのＸ基は、バイオベクターと共有結合Ｌ３を形成する。
１つの特定の実施態様に従えば、タイプ：
Figure 0004638738
 の結合を介して、同じＸ基上の２つのバイオベクターを結合することを想定することが可能である。
本発明に従う酸性磁性粒子（ｐ）のプロトン化された部位は、同一または異なる構造を有する式（Ｉ）の少なくとも２つの化合物によって錯体形成することができる。
好適な実施態様に従えば、磁性粒子（ｐ）は、異なる構造を有する、特に、異なるＸ基を有する式（Ｉ）の２つの化合物の１つもしくはそれ以上の分子によって錯体形成する。このことは、有利なことに、異なるＸ基と反応することが可能である基を有するバイオベクターの以後のグラフト化を可能にする。
好適な実施態様に従えば、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物のＸ基のすべてまたはいくつかは、バイオベクターに結合する。
従って、本発明はまた、式（Ｉ）：
Ｘ−Ｌ−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２ （Ｉ）
（式中、Ｘ基のすべてまたはいくつかは、少なくとも１つのバイオベクターに結合する）
の１つもしくはそれ以上の同一または異なるｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって、プロトン化された部位の少なくとも９０％が錯体形成している酸性ナノ粒子（ｐ）の安定な水性懸濁液を含む（ＭＲＩのための造影生成物として使用することができる）組成物に関する。
表現「すべてまたはいくつか」は、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物のＸ基のすべてが必ずしもバイオベクターに結合している必要はないが、しかし、結合の程度は、使用するバイオベクターによって得られる所望の診断特異性に十分であることを意味する。また、いくらかのＸ基および／またはいくらかのバイオベクターを使用する場合、Ｘ基および／またはバイオベクターは同一あるいは異なるものであり得ることも詳記される。
従って、ベクトル化された粒子は、以下のように記載される：
（分岐）ｒ−酸性粒子 （ＩＩＩ）
（式中、ｒは、粒子あたりのグラフトされた分岐の数を表し、分岐は：
［（（バイオベクター）−Ｌ３）ｓ−Ｌ−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２］により規定され、Ｌ３は、場合により、ホモ二官能またはヘテロ二官能試薬を介して、式（Ｉ）の化合物のＸ基およびバイオベクターの結合から生じる上記で規定された共有結合であり；ｓは、Ｘ基あたりの結合したバイオベクターの数を表し、特に、１、２または３に等しくあり得る）。
バイオベクター
本発明に関して、「バイオベクター」は、好ましくは、即ち、所定の標的組織および／または生物学的受容体および／または輸送体および／または生物学的マトリクスに対する特異的親和性を有する特異的標的化実体（一般に、リガンド）を意味する。
多くの受容体／リガンドアフィニティー対が存在し、規定された本発明は、当業者によって、抗体／抗原、レクチン／多糖、ビオチン／アビジンまたは核酸（＋および−鎖）対などの標的受容体とのアフィニティー対を形成することが可能な多様なリガンドに容易に適用することができ、リガンドは、共有結合を介して、式（Ｉ）の化合物のＸ末端に対して直接的に、または二官能試薬を介して間接的に、のいずれかで結合することができることが理解される。
拡大解釈すれば、本説明に関して、用語「バイオベクター」はまた、薬理学的および／または細胞障害性活性、あるいはより一般的には、治療または予防処置の方法において有用なファーマコフォアを有する有機分子を含むことができる。
本発明に関して、用語「ファーマコフォア」は、薬理学的および／または細胞障害性活性を伴う有機分子、およびまた、その構造的類似体を含み、後者もおそらく薬理学的および／または細胞障害性活性を有する。
本説明に関して、「バイオベクター」は、拡大解釈すれば、アミノアルコールなどの事実上顕著に親水性である生体適合性分子を示す。
好適なバイオベクターとしては、特に、（場合により組換えもしくは変異された）タンパク質、糖タンパク質、レクチン、ビオチン、ビタミン、プテロインまたはアミノプテロイン誘導体、抗葉酸および葉酸誘導体、抗体または抗体フラグメント、ペプチドおよびその誘導体、単糖または多糖、アビジン、（膜または核）受容体基質もしくは阻害剤、リン脂質、ステロイドおよびその類似体、オリゴヌクレオチド、リボ核酸配列、デオキシリボ核酸配列、ホルモンまたはホルモン様物質、アミノ酸、薬理学的活性を有する有機分子、ファーマコフォア、（場合により組換えもしくは変異された）タンパク質、抗体または抗体フラグメント、アミノアルコール、リン脂質誘導体、ファーマコフォアを挙げることができ；抗葉酸および葉酸誘導体、インテグリン標的化剤またはＭＭＰ標的化剤が特に好適である。
特に、抗体およびファーマコフォアを含むバイオベクターは、好ましくは、
−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−、−Ｃ−Ｓ−、−Ｎ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｎ−ＣＨ２−、−Ｎ−ＣＳ−Ｎ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｎ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｎ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ＝ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−もしくは−Ｏ−Ｎ＝ＣＨ−、または以下の式
Figure 0004638738
 のタイプのＸ基と反応し、共有結合を形成することが可能になるように、場合により官能化することができる。
用語「葉酸誘導体および抗葉酸誘導体」は、特に上記のようなタイプのＸ基と共有結合を形成することができるような、葉酸またはプテロイン酸の少なくとも１つの化学基の官能化によって得られる分子を示す。官能化の例として、特に、ヒドロキシル基のエーテル化、カルボン酸基のエステル化またはアミド化、あるいは（２−アミノピリミジン）構造モチーフ上、より好ましくは、アミノプテロインおよびプテロイン誘導体に存在する（２−アミノピリミジン）構造モチーフ上の置換基の修飾および／または導入を挙げることができる。葉酸誘導体の好適な例として、より詳細には、Ｍ．Ｐ コスティ（Ｍ．Ｐ Ｃｏｓｔｉ）−Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ（２００１）２巻、１３５〜１６６頁による記事に記載の誘導体を挙げることができる。
「リン脂質」誘導体の好適な例として、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトールもしくはスフィンゴミエリン誘導体またはセラミド誘導体を挙げることができ、ここで、用語「誘導体」は、分子が上記のＸ基、特に、Ｘ＝−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２と共有的に反応することが可能であるように分子を官能化することを意味する。
本説明に関して、「ペプチド誘導体」は、天然であってもまたは天然でなくてもよいアミノ酸から誘導されるペプチドを意味し、その生来の構造は、例えば、ペプチド結合の修飾により、得られるペプチドがＸ基と共有的に反応することが可能であるような方法で、所定の化学基の官能化によって化学的に修飾される。標示として、ペプチド誘導体は、ポリペプチド、擬ペプチド、レトロペプチド、ペプチド模倣薬、環状ペプチド、酵素阻害ペプチド、アゴニストペプチドまたはアンタゴニストペプチドを示すことができる。好適な例として、核医学において使用される官能化ペプチド（参考文献：Ｓ．リュウ（Ｓ．Ｌｉｕ）およびＤ．スコット・エドワーズ（Ｄ．Ｓｃｏｔｔ Ｅｄｗａｒｄｓ）；Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２），２２２，２５９〜２７８頁およびオカービ（Ｏｋａｒｖｉ）Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，１９９９，２０：１０９３−１１１２）ならびにプロテアーゼ、特に、メタロプロテアーゼの基質の阻害剤を挙げることができる。
バイオベクターの特定のクラスは、アミノアルコールまたはアミノポリエチレングリコールなどの高度に親水性の分子である。これらのアミノアルコールは、水性安定性および生体適合性について十分に親水性である磁性粒子を入手し、また薬物動態および体内分布を調整するのに特に有用である。
アミノアルコールのうち、以下の式（ＩＩ）
Figure 0004638738
 （式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なるものであり、好ましくは６〜１０個のヒドロキシル基、あるいはＲ１および／またはＲ２が酸素原子によって中断される場合、４〜８個のヒドロキシル基によって置換される、２〜６個の炭素原子を含む脂肪族炭化水素鎖を表す）
に従うアミノアルコールが特に好適である。
これに関連して、Ｒ１が基−（ＣＨ２）−（ＣＨＯＨ）４−ＣＨ２ＯＨまたは−（ＣＨ２）−ＣＨＯＨ−ＣＨ２ＯＨを表し、Ｒ２が基−ＣＨ２−（ＣＨＯＨ）４−ＣＨ２ＯＨを表す、アミノアルコールが一般に好適である。
アミノポリエチレングリコールのうち、同一または異なるＲ １ およびＲ ２ がＨ、アルキル基または式−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−ＣＨ２ＯＲ３（式中、ｋは２〜１００の範囲である）のポリエチレングリコール鎖を表し、Ｒ３はＨ、アルキルまたは−（ＣＯ）アルキから選択される式（ＩＩ）の化合物が特に好適であり、用語「アルキル」または「アルキ」は、鎖中に約１〜６個の炭素原子を有する線状または分岐脂肪族炭化水素基を示す。
アミノポリエチレングリコールの例には、特に、Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルプロピレングリコール１１００、Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール２０００およびＯ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリ−エチレングリコール７５０である。
本発明の特定の変異体に従えば、適切である場合、事実上異なるバイオベクターは、Ｘ基を介して、磁性粒子（ｐ）の表面に結合する。これに関して、２つの異なるバイオベクターをそれぞれの酸性磁性粒子（ｐ）に結合させることが特に最も好適である。
１つの実施態様に従えば、最終生成物の体内分布を改変するように、アミノアルコールと、事実上異なる、即ち、所定の標的に対する特異的親和性か、または薬理学的および／または細胞障害性活性のいずれかを示すバイオベクターとの間の「混合型」結合が行われる。
ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物のＸ基の１〜１００％が少なくとも２つの同一または異なるバイオベクターに結合されることが好適である。例として、Ｘ基の３０％は、バイオベクターＢ１に結合することができ、３０％はバイオベクターＢ２、そして３０％はバイオベクターＢ３に結合することができ、Ｂ１、Ｂ２およびＢ３は異なる。
酸性磁性粒子（ｐ）の表面に存在するＸ基の１００％をバイオベクターに結合させることを想定することが可能である一方、最終粒子の流体力学的サイズの増加を制限するような結合収率は、同時に効率的な特異的標的化を確実にすることを可能にし、一般的に好適である。
従って、本発明の好適な実施態様に従えば、特にバイオベクターが同一である場合、式（Ｉ）の化合物のＸ基の１〜７０％、特に１〜５０％が結合する。
好適でもある本発明の変異体に従えば、バイオベクターが異なる場合、特に該バイオベクターがアミノアルコールおよび本質的に異なるバイオベクターに関与する場合、式（Ｉ）の化合物のＸ基の１〜１００％が結合する。
より一般的には、例えば、混合型結合が、病理学的癌または循環器系領域において過剰発現される多様なメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を標的化することが可能である異なる配列を有するペプチドなどの異なるが、同じ病理を特異的に標的化することが可能なバイオベクターと共に使用することができる。
本発明に関連して特に使用することができる多様なバイオベクターについて、より正確に３つの分野において説明する：
・Ａ）循環器系
・Ｂ）腫瘍学
・Ｃ）炎症性および変性疾患。
Ａ）循環器系分野および危険な状態のアテロームプラーク
循環器系疾患、特にアテロームプラークに関連する疾患に存在する多様な生物学的系／機構は、本発明に従う造影または治療薬剤のための好適な標的であり、特に、メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に関与する系、血栓系、アネキシンＶ系が該当する。
マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはマトリキシンは、細胞外マトリクスのタンパク質成分を分解する特性を有する酵素であることが既知である。細胞および組織を囲むこの細胞外マトリクスはコラーゲンなどのタンパク質よりなる。ＭＭＰは、３つのグループに分類される：ゲラチナーゼ（ＩＶ型コラゲナーゼ）、ストロメリシンおよび間質コラゲナーゼ。
ＭＭＰは、アテロームプラークにおいて過剰発現される。循環器系分野では、多くの研究により、ＭＭＰがプラークにおける細胞外マトリクスのリモデリングに関与することが示されている。アテロームプラークに関しては、非網羅的様式ではあるが、本明細書において少なくとも８つのＭＭＰが過剰発現されている：
Figure 0004638738
ＭＭＰ１およびＭＭＰ３は、ジョンソン Ｊ（Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊ）ら、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｔｒｉｘ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｂｙ Ｍａｓｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｉｎ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ Ｐｌａｑｕｅｓ，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１９９８；１８：１７０７−１７１５に詳しく記載される。
従って、本発明は、バイオベクターが、少なくとも１つのＭＭＰを阻害することが可能な薬剤、特に、循環器系分野におけるアプリケーションのためのＭＭＰ阻害剤である式（ＩＩＩ）のベクトル化されたナノ粒子に関する。好適な実施態様に従えば、阻害剤は、アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）の誘導体または後に例示するペプチドである。Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，８，４２５−４７４；Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ，１９９９，９９，２７３５−２７７６に記載の阻害剤から選択されるＭＭＰ阻害剤も好適である。特に、ＴＩＭＰと称されるＭＭＰ阻害剤を使用することができ、ＤＤＴ １巻、Ｎ°１，Ｊａｎｕａｒｙ １９９６，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６−１７；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ，２００１，１２，９６４−９７１において想起される。
血栓については：
・ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体が活性型血小板上で発現される（それは、抗血小板剤の標的としての療法において既に使用されている）；
・フィブリンは血栓症に関連する、
ことが公知である。
より正確には、血栓に関して、活性型血小板上のＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ糖タンパク質の改善が実証されている。血小板は、アテローム性動脈硬化症および血栓症の方法において中軸的役割を果たす骨髄巨核球の無核フラグメントである。最も一般的に使用される従来の抗血小板医薬製品は、アスピリン、チクロピジンおよびクロピドグレルである。血小板凝集を生じる分子機構に関する知識から、血小板受容体フィブリノゲン、インテグリンＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａに対して指向された新規のファミリーの分子を開発することが可能である。上記のアンタゴニストと比較した主要な利点は、血小板の活性化の経路には依存せずに、血小板活性化の最終工程が遮断されることである。血小板−血小板相互作用は血栓の形成に極めて重要であるため、（血小板の間で架橋を形成する）フィブリノゲンのＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体への結合は止血および血栓症において重要な事象である。血小板が活性化される場合、血小板膜の表面にあるＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ糖タンパク質受容体は、それらの空間的コンホメーションの修飾を経験し、次いで、血漿に可溶なフィブリノゲンの分子、およびカルシウムに結合することができる。フィブリノゲンは、血球が捕らえられるネットワークを形成するＣａ２＋−フィブリノゲン結合を介して、血小板の間で連結される。トロンビンは、フィブリノゲンをフィブリンに変換することによって、この網の網の目を締め付ける。この凝集は、損傷を受けた領域の血栓の形成をもたらす。従って、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体上のリガンド相互作用部位を同定するために、多くの研究が行われている。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体は、血小板における重要な膜結合へテロ二量体糖タンパク質複合体（血小板あたり約５００００コピー）である。
ヒトフィブリノゲンに天然に存在するアミノ酸配列に対応する少なくとも２つの系列のペプチドは、付着巨大分子のＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体への結合を阻害することが公知である：配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）およびＬｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌγ鎖。
配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）は、当初、血小板によるその放出後、フィブロネクチンの付着配列、血小板−血小板および血小板−管相互作用において重要な役割を果たすインテグリンとして同定された。この配列はフィブリノゲン、フォン・ヴィレブランド因子およびビトロネクチン（線溶および管への結合に役割を果たす）にも存在する。
ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体は、血小板へのフィブロネクチン、フィブリノゲン、フォン・ヴィレブランド因子およびビトロネクチンの結合を阻害するこの配列を認識する。これらのすべてのリガンドは少なくとも１つのＲＧＤ配列を含有する一方；フィブリノゲンは半分子当たりそれらの２つを含有する。血漿におけるその高濃度のため、インビボで、フィブリノゲンは主要なリガンドである。
従って、本発明は：
・バイオベクターが、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を標的にすることが可能である；
・バイオベクターが、特に、フィブリンを可溶性フィブリノゲン分子から区別するために、フィブリン単量体に対して選択的なペプチドを介して、フィブリンを標的化することが可能である、
ベクトル化された粒子（ＩＩＩ）に関する。
本発明は、特に、循環器系アプリケーションのために、バイオベクターがＲＧＤモチーフを含む生成物（ＩＩＩ）に関する。
例えば、国際公開第２００１／９１８８号パンフレット、米国特許第６５２１２１１号明細書、米国特許第６４０３０５６号明細書、Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９０，５２−６７，Ｎｕｃｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２８，２００１，５１５−５２６に記載のペプチド、ダイアチド（Ｄｉａｔｉｄｅ）社製アプシタイド、アキュテクト（Ａｃｕｔｅｃｔ）を使用することができる。
Ｂ）腫瘍学分野
本発明によって得られる特異的画像化は、１つの実施態様に従えば、既知の技術では得られない新血管形成、腫瘍細胞の特異的標的化または細胞外マトリクスの変更を入手、標識することを目的とする。腫瘍の発達に関連する多様な生物学的系（または機構）は、本発明に従う造影または治療薬剤の好適な標的である：葉酸受容体に結合することが可能な化合物に関与する系、ＭＭＰに関与する系、血管形成に関与する成長因子に関与する系が該当する。
１つの実施態様に従えば、本発明は、バイオベクターが、葉酸受容体を標的化することが可能な誘導体である生成物（ＩＩＩ）に関与し、このバイオベクターは、腫瘍細胞の特異的認識を提供することが可能である。特に、以下に記載の式（Ｅ）の葉酸誘導体：バイオベクチャー（ＢＩＯＶＥＣＴＥＵＲ）がバイオベクターとして使用される：
Figure 0004638738
 式中：
ａ）Ｇ１は、ハロ、Ｒｆ２、ＯＲｆ２、ＳＲｆ３、ＮＲｆ４Ｒｆ５よりなる群から独立して選択される；好ましくは、Ｇ１はＮＨ２またはＯＨである；
ｂ）Ｇ２は、ハロ、Ｒｆ２、ＯＲｆ２、ＳＲｆ３、およびＮＲｆ４Ｒｆ５よりなる群から独立して選択される；
ｃ）Ｇ３およびＧ４は、−（Ｒｆ６’）Ｃ＝、−Ｎ＝、−（Ｒｆ６’）Ｃ（Ｒｆ７’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’）−よりなる群から独立して選択される；
好ましくは、Ｇ３を含む環が芳香族である場合、Ｇ３は−Ｎ＝（葉酸）または−ＣＨ−（後に記載の化合物：ＣＢ３７１７、ラルチトレキセド、ＭＡＩ）であり、Ｇ３を含む環が非芳香族である場合、Ｇ３は−ＮＨ−または−ＣＨ２−（後に記載の化合物：ＡＧ−２０３４、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ））である；
好ましくは、Ｇ３を含む環が芳香族である場合、Ｇ４は−ＣＨ−または−Ｃ（ＣＨ３）−であり、Ｇ３を含む環が非芳香族である場合、−ＣＨ２−または−ＣＨ（ＣＨ３）−である；
ｅ）Ｇ５は存在しない（化合物ペメトレキセド）か、または−（Ｒｆ６’）Ｃ＝、−Ｎ＝、−（Ｒｆ６’）Ｃ（Ｒｆ７’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’）−から選択される；
ｆ）環Ｊは、おそらくヘテロ環式芳香族５または６員環であり、環の原子はＣ、Ｎ、Ｏ、Ｓである可能性がある；
ｖｉｉ）Ｇ６は、ＮまたはＣ（後に記載の化合物：３−デアザ−ＩＣＩ−１９８，５８３）である；
ｈ）Ｋ１およびＫ２は、−Ｃ（Ｚｆ）−、−Ｃ（Ｚｆ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｚｆ）−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−、−Ｃ（Ｚｆ）−Ｎ（Ｒｆ４）、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）、−Ｏ−Ｃ（Ｚ）−Ｎ（Ｒｆ４’’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）−Ｏ−、Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）−Ｎ（Ｒｆ５’’）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｒｆ６’’）（Ｒｆ７’’）−、−Ｎ（Ｃ≡ＣＨ）−、−Ｎ（ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）−、Ｃ１−Ｃ１２アルキルおよびＣ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択され；式中、ＺｆはＯまたはＳである；好ましくは、Ｋ１は−Ｎ（Ｒｆ４’’）−または−Ｃ（Ｒｆ６’’）（Ｒｆ７’’）−であって、Ｒｆ４’’、Ｒｆ６’’、Ｒｆ７’’はＨである；Ａ２は、おそらくアミノ酸に共有結合している；
ｉ）Ｒｆ１は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルおよびＣ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から選択される；Ｒｆ２、Ｒｆ３、Ｒｆ４、Ｒｆ４’、Ｒｆ４’’、Ｒｆ５、Ｒｆ５’’’、Ｒｆ６’’およびＲｆ７’’は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、Ｃ，−Ｃ、２アルカノイル、Ｃ，−Ｃ、２アルケニル、Ｃ１−Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ，−Ｃ、２アルキルアミノ）カルボニルよりなる群から独立して選択される；
ｊ）Ｒｆ６およびＲｆ７は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択されるか；またはＲｆ６およびＲｆ７は共にＯ＝を形成する；
ｋ）Ｒｆ６’およびＲｆ７’は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択されるか、またはＲｆ６’およびＲｆ７’は共にＯ＝を形成する；
ｌ）Ｌｆは、適切である場合、アミド結合を介するαアミノ基を介してＫ１またはＫ２に結合した天然のアミノ酸または天然のポリ（アミノ酸）を含む２価の連結である；
ｍ）ｎ、ｐ、ｒおよびｓは、独立して０または１である。
式（Ｅ）は、互変異性型、例えば、Ｇ１がＯＨ、ＳＨまたはＮＨである化合物を含む。
本発明の化合物では、基Ｋ１、Ｋ２、Ｒｆ１、Ｒｆ２、Ｒｆ３、Ｒｆ４、Ｒｆ４’、Ｒｆ４’’、Ｒｆ５、Ｒｆ５’’、Ｒｆ６、Ｒｆ７’’、Ｒｆ６、Ｒｆ７、Ｒｆ６’およびＲｆ７’の少なくとも１つは、水素原子またはアルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、アルカノイル、アルケニル、アルキニル、アルコキシカルボニルもしくはアルキルアミノカルボニル基を含み、基は、好ましくは、１〜６個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ６）、より好ましくは、１〜４個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ４）を含む。
腫瘍学分野におけるＭＭＰに関して、ＭＭＰは、２つの異なる機能を有することが公知である：
ａ）それらは、細胞外マトリクスを破壊することによって、腫瘍播種に寄与する；
ｂ）それらは、原発性および転移した腫瘍の増殖および血管形成を促進する環境を作製する。
主なヒト腫瘍において発現されるＭＭＰは、特に、以下の通りである：
・乳癌：ＭＭＰ−１、２、３、７、９、１１、１３、１４；
・直腸結腸癌：ＭＭＰ−１、２、３、７、９、１１；
・肺癌：ＭＭＰ−２、３、７、９、１１、１４；
・前立腺癌：ＭＭＰ−１、２、３、７、９。
腫瘍の進行の状態とＭＭＰの発現のレベルとの間には、緊密な相関関係が存在する。一般に、悪性腫瘍は、良性腫瘍よりも多量のＭＭＰを発現する。
従って、本発明は、バイオベクターが、腫瘍学分野におけるアプリケーションのためのＭＭＰ阻害剤である生成物（ＩＩＩ）に関する。好適な実施態様に従えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，８，４２５−４７４；Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ，１９９９，９９，２７３５−２７７６に記載の阻害剤から選択されるＭＭＰ阻害剤が使用される。特に、ＴＩＭＰと称されるＭＭＰ阻害剤を使用することができ、ＤＤＴ １巻、Ｎ°１，Ｊａｎｕａｒｙ １９９６，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６−１７；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ，２００１，１２，９６４−９７１において想起される。
血管形成に関して、研究により、血管形成は、異なった腫瘍、特に、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、結腸癌および脳癌、ならびにまた黒色腫における予後因子であることが示されている。
従って、本発明は、バイオベクターが血管形成マーカーを標的にすることが可能である生成物（ＩＩＩ）に関する。
所定の内皮増殖因子は腫瘍特異的であることが示されている。管内壁を構成する内皮細胞は、正常な成体において増殖する天然の傾向を示さない。一方、病理学的状況では、例えば、腫瘍の発達または転移の形成中に、酸素および栄養供給の必要性が、局所への誘引によって、増加するように変化する。従って、腫瘍は、それらの利益のために、新たな管ネットワークを誘導する（血管形成として既知の方法）。
血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）は、強力かつ選択的な血管形成増殖因子である。該因子は、大きなＲＴＫ（チロシン−キナーゼ受容体）ファミリーに属する細胞外膜上の少なくとも３つの受容体：ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）、ＶＥＧＦＲ−２（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）およびＮＰ−１を刺激することによって、作用する。ＶＥＧＦ受容体は大きなＲＴＫ（チロシンキナーゼ受容体）ファミリーに属する。インテグリンファミリーのこれらのタンパク質は、リガンド、膜貫通ドメインおよびチロシンキナーゼ活性を担持する細胞質領域を有する。ＶＥＧＦＲの場合、キナーゼドメインは、それぞれの受容体に特異的な短い配列によって中断される。
従って、本発明は、バイオベクターが、内皮細胞の表面に存在する血管形成受容体に結合することが可能な因子である生成物（ＩＩＩ）に関する。
特に、書面国際公開第０１／０１２８０９号パンフレット、国際公開第０１／８３６９３号パンフレット、国際公開第０２／０５７２９９号パンフレット（ＶＥＧＦＲ３を標的化する８アミノ酸のペプチド）；Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９９），２０，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ，１７９，２０６，２０００；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，２７５，１３５８８−１３５９６；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２７７，４５，４３１３７−４３１４２；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２００１，３１６，７６９−７８７；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，３７，１７７５４−１７７７２；Ｃｈｅｍ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２０００，１６，８０３−８０６に記載のバイオベクター（特に、ファージディスプレイによって得られるペプチド）を使用することができる。特に、（ｉ）キナゾリン、アミノチアゾールまたはアントラニルアミド化合物などのＶＥＧＦ関連酵素活性の阻害剤、（ｉｉ）ＶＥＧＦアンタゴニスト、特に、ジベンゾチオフェンなどの小さな分子および書面特願２００１−３５３０７５号公報、特願２０００−３９５４１３号公報の分子、抗体である化合物を使用することができる。血管形成の場合において過剰発現される受容体を標的化するための多くの薬剤について記載している書面、米国特許第６，６１０，２６９号明細書のバイオベクターを使用することもできる。
インテグリンαｖβ３が管系においては発現し難いが、腫瘍細胞（最終段階の膠芽腫、卵巣癌、黒色腫）では過剰発現する。αｖβ３は、多様な段階で血管形成に参加する：αｖβ３は、マトリクスへの内皮細胞付着を調節し、それはシグナルを細胞の核へ伝達し、内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ−２、ｆｌｋ）と協同することによって、プロ−血管原性である受容体である。αｖβ３は、膜型メタロプロテイナーゼ−１（ＭＴ１−ＭＭＰ）と共に作用し、細胞表面のメタロプロテイナーゼ−２の活性化を担う。ＲＧＤペプチドまたは抗体によるこの受容体、しかしまたαｖβ５の遮断は、細胞のアポトーシスを誘導する。αｖβ５は、αｖβ５と同様に、血管形成の増殖段階に特に関与する。多くのマトリクスタンパク質は、所定のインテグリンとの相互作用の部位として同定されている共通配列：Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤと称される）を有する。従って、このＲＧＤ配列を含む多数の血管形成阻害剤が開発されている。
従って、本発明は、バイオベクターが、腫瘍学におけるアプリケーションに適切なＲＧＤペプチドである生成物（ＩＩＩ）に関する。
αｖβ３を標的化するＲＧＤペプチドについては、本発明者らは、αｖβ３に対して高い親和性を示す（マトリクスタンパク質の結合を防止するため）が、αＩＩｂβ３に対しては低い親和性を示す血管形成を阻害するためのバイオベクターを選好する。事実、αＩＩｂβ３アンタゴニストは有害な出血の問題を生じ得ることが示されている。本発明者らは、特に、酵素分解に対してより安定であり、より良好な親和性および選択性を伴う環状ＲＧＤペプチド配列（ペプチドのコンホメーションは、回転に対する制限により有利な位置で維持される）を有するアンタゴニストを選好する。
より正確には、ＲＧＤペプチドの構造−活性解析後、本発明者らは、最も特定すれば、αｖβ３に対する親和性を維持するのに有利な条件下に置くため、酵素（エキソペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼ）による分解を防止するために、より堅牢にするために十分に短い環（６アミノ酸環より５アミノ酸環）を伴い、Ｄ型アミノ酸を伴う環状ＲＧＤペプチドを選好する。特に、アスパラギン酸およびアルギニンのβ−炭素間の距離は、αＩＩｂβ３（αＩＩｂβ３のその部位はαｖβ３の当該部位よりも大きい）よりもαｖβ３に対して高い選択性を有するために、６．６Å未満である。アスパラギン酸付近の疎水性アミノ酸もまた、より良好な選択性を促進する。そのような構造は、受容体部位における疎水性および親水性基の正確な露出に最適である。本発明者らは、特に、ペプチドのシクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄｐｈｅ−Ｖａｌ）を選好し、これはシクロ（ＲＧＤｆＶ）とも呼ばれ、小文字は対応するアミノ酸がＤ型であることを示す。該ペプチドは、ナノモルのＩＣ５０（２〜２．５ｎＭ）を示す。このペプチドは、ＦＲ誘導体と反応することができるリジン側鎖のアミン基に特に有利である。その合成については、Ｘ．ダイ（Ｘ．Ｄａｉ）、Ｚ．シュ（Ｚ．Ｓｕ）、Ｊ．Ｏ．リュウ（Ｊ．Ｏ．Ｌｉｕ）；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００），４１、６２９５〜６２９８頁に記載されている。
Figure 0004638738
それは、特に、ＣＯＯＨ−、スクアレート−またはイソチオシアネート−官能化されるＵＳＰＩＯ（官能化粒子）への結合を可能にする。本発明者らは、アミノ酸の保護基の選択、および結合媒体の選択に関する技術的困難を克服しなければならなかった。
制限された可撓性を伴うコンホメーションを有する化合物を使用することもでき、これらのペプチドは、αｖβ３に良好な親和性および選択性を有する：
・２つのシステインの間にＲＧＤモチーフが配置され、例えば、αｖβ３に対する活性が増加しているペプチド（シクロ（ＣＲＧＤＣ））；
・ＲＧＤ基は環状ではないが、２つの環が接しており、そのうち少なくとも１つは２つのシステイン間のジスルフィド架橋によって形成されたペプチド（国際公開第０２／２６７７６号パンフレット）。
・インビボで少なくとも１つの酵素、特に、ＭＭＰと相互作用するように選択され、この相互作用は、標的タンパク質とのより強力な結合を生じる、ポリペプチド；
・酵素切断部位を含み、該切断はコンホメーションの改変を生じる、バイオベクター；
・ＬＭ６０９などの抗体から誘導されるバイオベクター（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ ４，５，Ｍａｙ １９９８，６２３）
・キノロンまたはベンゾジアゼピン型の構造を有するＲＧＤペプチドを模倣するバイオベクター、
を使用することもできる。
本発明はまた、バイオベクターが腫瘍学分野におけるアプリケーションに適切なＲＧＤペプチドのペプチド模倣物である生成物（ＩＩＩ）に関する。
・チオアミド結合（ＣＳＮＨ）またはケトメチレン基（ＣＯＣＨ２）による１つまたは２つのペプチドの置換を伴い、但し、置換は重要なコンホメーションの変化を含まない、ペプチド；
・環状ペプチド（ＲＧＤｆＶ）のそれぞれのアミノ酸のＮ−メチル化を示すペプチド（ＥＭＤ１２１９７４、チレンジタイド（Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）とも呼ばれる：シクロ（ＲＧＤｆ−Ｎ（Ｍｅ）Ｖ））であって、このペプチドは、極めて高い親和性（ＩＣ５０＝０．５８ｎＭ）および極めて高い選択性（αＩＩｂβ３の１５００倍）を示す；
Figure 0004638738
 ・次の構造：シクロ（Ｘａａ−Ｙａａ−ＧＤ−マンブ（Ｍａｍｂ））を有するペプチドであって、Ｍａｍｂ基はＮ−アミノメチルベンゼン酸である。ＤＸａａ−Ｎ−ＭｅＡｒｇペプチドは、αＩＩｂβの極めて活性なアンタゴニストである一方、ＬＸａａ−Ａｒｇアンタゴニストはαｖβ３に対して選択的である；
Figure 0004638738
 ・アスパラギン酸に隣接するアミノ酸の疎水性の性質および水溶液においてペプチドの可撓性を低下させるＭａｍｂ基により、αｖβ３に対して極めて高い親和性（ＩＣ５０＝０．６ｎＭ、これに対し、αｖβ３に対しては１４μｍ）を示す環状ペプチド（ＲＧＤＤ（ｔＢｕＧ）Ｍａｍｂ）；
・基：シクロ（ＡＲＧＤ−Ｍａｍｂ）を有するペプチドＸＪ７３５（デュポン（ＤＵＰＯＮＴ））。これは、フィブリノゲンのαｖβ３受容体への結合を阻害する（ＩＣ５０＝７０ｎＭ）ことを可能にするが、他のインテグリン（αｖβ５、α５β１）を遮断しない；
・Ｄｐｈｅ−Ｖａｌ（またはｆＶ）の代わりに多様な基を対照ペプチドＲＧＤｆＶに導入することによって得られるペプチド、
を使用することができる。
Figure 0004638738
βＩＩ’ホールディングを模倣するが、γ−回転領域における可撓性も減少するためにこれらの基を合成した。最も活性な因子はシクロ（ＲＧＤ−（Ｒ）−ＡＮＣ）（ＩＣ５０＝０．８ｎＭ）である。配列シクロ（ＲＧＤＸ）のこれらの２つのアミノ酸（ｆＶ）の代わりに、ここで糖Ｘを導入することも可能である（ローホフＥ．（Ｌｏｈｏｆ Ｅ．）ら；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（２０００），３９（１５）、２７６１〜２７６４頁）；
・環に二重結合が導入されたペプチド（カワグチ（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２００１），２８８（３）、７１１〜７１７頁）；
Figure 0004638738
 ・Ｃｈｅｍｌｉｂｒａｒｙ．ｂｒｉ．ｎｒｃ．ｃａに記載のペプチド。
本発明はまた、バイオベクターが、腫瘍学におけるアプリケーションに適切なインテグリンαｖβ３を標的化する非ペプチド分子である生成物（ＩＩＩ）に関する。以下の表における化合物（そのナノモルでの親和性が実証されている）を使用することができる。
化合物
ベンゾジアゼピン−ベンゾゼピンおよび誘導体
Figure 0004638738
 ベンズアミド
Figure 0004638738
 および書面国際公開第０１／９７８６１号パンフレットの他の化合物
Figure 0004638738
アシルピリジン
Figure 0004638738
 および書面国際公開第９９／５２８９６号パンフレットの他の化合物
ヘテロ５員環コア
Figure 0004638738
 および書面ローホフＥ．（Ｌｏｈｏｆ Ｅ．）ら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ ２０００，３９（１５）、２７６１〜２７６４頁由来の他の化合物
Figure 0004638738
 および書面国際公開第００／００４８６号パンフレットのアセチルチオフェンに基づく他の化合物、
Figure 0004638738
 （およびデュポン・ファーマシューティカルズ（Ｄｕｐｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）由来の化合物ＳＧ２５６、ＳＭ２５６およびＸＪ７３５）
Figure 0004638738
 および書面国際公開第００／０３９７３号パンフレット由来の類似体
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炭水化物
Figure 0004638738
チオルチン（Ｔｈｉｏｌｕｔｉｎ）
Figure 0004638738
 およびピロチン基を伴う他の化合物。
また、書面米国特許第６５３７５２０号明細書（血管形成中に過剰発現されたαｖβ３を標的化するバイオベクター）および国際公開第０１／１９８２９４号パンフレット（インダゾールコア）に記載のバイオベクターを使用することもできる。場合によっては、同じ標的に到達する機会を増加するために、同じ化合物において異なるいくらかのバイオベクター、例えば、αｖβ３にＲＧＤペプチドおよびベンゾジアゼピンを使用することができる。上記のＲＧＤ型のバイオベクターまたは機能的等価物に加えて、詳細な説明に、インビトロまたはインビボスクリーニングを完結させることを可能にする実験プロトコルが記載されていることを知った上で、以下のＭＭＰ阻害化合物を使用することができる：
・特に、ビーチャム（Ｂａｃｈｅｍ）、アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の２００２年カタログにおける市販の阻害剤から選択される診断または治療に関して有効であるペプチド、ペプチド模倣物、機能的に等価な非ペプチド；
・書面国際公開第０１／６０４１６号パンフレット、国際公開第０１／６０８２０号パンフレット、国際公開第２００１／９２２４４号パンフレット、ＥＰ５５８６３５、ＥＰ６６３８２３に記載の阻害剤；
・書面ＥＰ７９３６４１、ＥＰ７６６６６５、ＥＰ７４０６５５、ＥＰ６８９５３８、ＥＰ５７５８４４、ＥＰ６３４９９８、国際公開第９９／２９６６７号パンフレット、ＥＰ９６５５９２、ＥＰ９２２７０２、国際公開第９９／５２８８９号パンフレット、国際公開第９９／４２４４３号パンフレット、国際公開第０１／６０４１６号パンフレットに記載のヒドロキサメート、ヒドロキサメートピロリジン、二環式ヒドロキサメート、シクロブチルヒドロキサメート、スクシニルヒドロキサメート、スルホンアミドヒドロキサメート、アラニンヒドロキサメートなどのタイプの阻害剤（デュポン（Ｄｕｐｏｎｔ）；特に、式ＩａおよびＩｂ）；
・書面ＥＰ７２５０７５、米国特許第５６７９７００号明細書、国際公開第９８／０３５１６号パンフレット、ＥＰ７１６０８６、国際公開第２０００ ７４６８１号パンフレット、国際公開第２０００ ０４０３０号パンフレットに記載のホスフィン酸に基づく阻害剤；
・環式イミドに基づく阻害剤（米国特許第５８５４２７５号明細書）；
・三環系ホスホンアミドに基づく阻害剤（国際公開第２０００ ０６５６１号パンフレット）；
・オキソ酪酸に基づく阻害剤；
・ＴＩＭＰＳの誘導体（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ、２００１，１２，９６４−９７１）。
腫瘍学においてなお、バイオベクターがホスホネートまたはビスホスホネートに基づく化合物（ＩＩＩ）は、骨組織の癌に極めて有用である。これらの化合物もまた、免疫の問題（慢性関節リウマチなどの自己免疫疾患）、代謝疾患（骨粗鬆症など）および感染性疾患による骨問題に関連する疾患に有用である。
これらの化合物において、バイオベクターは、例えば、書面国際公開第０２／０６２３９８号パンフレットに記載のバイオベクターである。米国特許第６５３４４８８号明細書または米国特許第６５０９３２４号明細書に記載のビスホスホネート、エチドロネート、クロドロネート、パミドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、ＹＨ５９２またはＥＢ−１０５３などの市販のビスホスホネートを使用することもできる。
Ｃ）炎症性および変性疾患の領域
ＳＲＡ受容体（スカベンジャー受容体）またはＦｃ受容体（米国特許第２００２／５８２８４号明細書）などのマクロファージに位置する受容体に対するリガンドであるバイオベクターが特に標的化される。
アテローム性動脈硬化症の進行は、ＬＤＬの捕捉および次いで、プラークにおけるその酸化に関与する。マクロファージによるこれらの酸化型ＬＤＬの食作用は、スカベンジャー受容体（ＳＲ）と称される受容体の組によって仲介される。従って、膜結合型タンパク質のファミリーはマクロファージの泡沫細胞への逐次変換において重要な役割を果たす。ＳＲは、老化細胞に結合可能な膜結合型表面タンパク質であり、また、化学的または生物学的に修飾されたリポタンパク質である。主なＳＲのグループは、多様なクラスに分類される：
１／クラスＡ ＳＲ：Ｉ型、ＩＩ型およびＭＡＲＣＯ
２／クラスＢ ＳＲ：Ｉ型、ＩＩ型およびＣＤ３６
３／クラスＤ ＳＲ：ＣＤ６８
４／クラスＥおよびＦ ＳＲ、「レクチン様」：ＬＯＸ−１
５／最近の未分類のＳＲ：ＳＲ−ＰＳＯＸ。
書面米国特許第Ａ２００２／０１２７１８１号明細書およびデ・ウィンサー（Ｄｅ Ｗｉｎｔｈｅｒ）ら、ＡＴＶＢ ２０００；２０：２９０−２９７；クンジャツーア（Ｋｕｎｊａｔｈｏｏｒ）ら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２；２７７：４９９８２−４９９８８において想起されるように、ＳＲＡ受容体は、循環器系疾患（アテローム性動脈硬化症、アテローム性プラーク、冠動脈疾患、血栓症、虚血、心筋梗塞など）において、マクロファージにより過剰発現される。これらの病理に関連するＳＲＡを標的化するための本発明に従う生成物の使用は、本発明の部分である。
従って、本発明はまた、炎症性疾患の診断および／または処置のための、以下に関連する式（Ｉ）の化合物によって錯体形成する粒子を含む：
１）特に、ＳＲ標的化バイオベクター：
１ａ）書面米国特許第６２５５２９８号明細書、米国特許第６４５８８４５号明細書、国際公開第００／０６１４７号パンフレット、国際公開第００／０３７０４号パンフレット；
１ｂ）修飾されたリポタンパク質、特に、アセチル化ＬＤＬ（ａｃＬＤＬ；グルダッタ（Ｇｕｒｕｄｕｔｔａ）ら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００１ ２８：２３５−２４）および酸化型ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）；
１ｃ）エスバッハ（Ｅｓｂａｃｈ）ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９３１８：５３７；デ・リケ（Ｄｅ Ｒｉｊｋｅ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，１９９４，２６９：８２４；ファン・オーステン（Ｖａｎ Ｏｏｓｔｅｎ）ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９９８，６６：５１０７；ビジャスターボッシュ（Ｂｉｊｓｔｅｒｂｏｓｃｈ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９７ ２５：３２９０；ビーセン（Ｂｉｅｓｓｅｎ）ら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５３：２６２，１９９８；に記載のＡｃＬＤＬ、ＯｘＬＤＬおよびＬＰＳリガンド；
１ｄ）ＳＲ−ＡＩ受容体に結合可能な、ファージディスプレイによってスクリーニングされたペプチド；
２）マクロファージ活性化に関与する病理における使用のための葉酸受容体標的化バイオベクター（これらの葉酸受容体は、活性型マクロファージにおいて過剰発現される）；
３）特に、アルツハイマー病をもたらすアミロイドプラークを標的化するためのペプチド（例えば、国際公開第０１／７４３７４号パンフレット、米国特許第６３２９５３１号明細書に記載されている）；
４）例えば、米国特許第６４９１８９３号明細書に記載のＣＳＦ型のバイオベクター（ＧＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦなど）；
５）マクロファージ上に過剰発現される受容体（ＣＤ６８、ＭＲＰ８−１４など）を標的化する抗体または抗体フラグメント。
炎症性疾患の分野において、本発明者らは、特に、マクロファージ関連疾患の診断における使用のためのバイオベクターとしてホスファチジルセリンまたはホスファチジルセリンの誘導体を使用した。
ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、主に、細胞質側の細胞の内面に位置する膜リン脂質である。その全体的な負の電荷は、その極性を安定化し、細胞質膜を横切ってそれが拡散することを防止する。ＰＳは、マクロファージのための認識シグナルとしての役割を果たす。このシグナルの性質については、未だ不明である（直接認識、電荷密度、複数の受容体、誘導性シグナル受容体）。公開された最新の研究に従えば、それは、ホメオスタシスの破壊を経験する領域に存在する所定のマクロファージの表面のこの受容体の認識後のＰＳとＰＳ受容体（ＰＳＲ）との間の直接的相互作用であると考えられる。いくつかのマクロファージ細胞では、ＰＳもまた、アニオン性リン脂質のためのそれらの付着部位を介して、スカベンジャー受容体を相互作用する。ＰＳは、すべての精細胞の膜の内面上で発現される。細胞が患っている場合、またはアポトーシス方法の始めに、膜結合型トランスロカーゼは、ＰＳを細胞の細胞外面上に移動させる。この細胞外発現は、マクロファージのための認識シグナルを構成し、これは、患っている細胞を認識し、細胞内に取り込み、従って、局所の炎症を回避する。
本発明者らは、こららの多様な病理を画像化するために、マクロファージに能動的に取り込まれることを目的とした、ＰＳまたは誘導体に結合した造影剤を調製した。以下のＰＳバイオベクター（遊離のＮＨ２基に結合したキレート）を調製するために、いくつかの化学的技術的困難を克服した：
Figure 0004638738
最終生成物の構造を完全に制御するためには、正確に官能化されたＰＳ誘導体を調製する必要があった。ＰＳの極性部分のアミノ酸の存在は、さらなる困難の供給源であり、化学を実施して、遊離のアミンおよび酸性基を保護／脱保護することによって、制御しなければならない。アミノ酸残基を保護する基は、アミノ酸化学において使用される従来の基である（Ｂｏｃ、ｔＢｕ、Ｚ、Ｂｎなど）。ＰＳと超常磁性粒子との間の結合を提供するのに好適な基は、ＮＨ２、ＣＯＯＨおよびＳＨである。
本発明者らはまた、ホスファチジルセリンが少なくとも１つの脂肪鎖を欠き、妨害的様式で親和性が変更されているベクトル化された生成物を調製した。
本発明のアプリケーションにおいて上記で既に述べたものに加えて、さらに、以下のものを使用することができる：
１）書面国際公開第０１／９７８５０号パンフレット（ＶＥＧＦ受容体およびアンギオポエチンを標的化する）、米国特許第６，３７２，１９４号明細書（ポリヒスチジンなどのポリマー）、国際公開第２００１／９１８８号パンフレット（フィブリン標的化ポリペプチド）、国際公開第０１／７７１４５号パンフレット（インテグリン標的化ペプチド）、国際公開第０２／２６７７６号パンフレット（αｖβ３インテグリン標的化ペプチド）、国際公開第０３／０６２１９８号パンフレット（ＭＭＰメタロプロテイナーゼ標的化ペプチド）、国際公開第９９／４０９４７号パンフレット（例えば、Ｒ−Ｘ−Ｋ−Ｘ−ＨおよびＲ−Ｘ−Ｋ−Ｘ−Ｈ、またはＴｉｅ−１および２受容体を含むＫＤＲ／Ｆｌｋ−ｌ受容体を標的化するペプチド）、国際公開第０２／０６２８１０号パンフレットおよびミュラー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ，２００２，３９６６−３９７３（シアリル・ルイス・グリコシド）、国際公開第０２／４００６０号パンフレット（アスコルビン酸などの抗酸化剤）、米国特許第６，５２４，５５４号明細書（タフトシンの標的化）、国際公開第０２／０９４８７３号パンフレット（Ｇタンパク質受容体ＧＰＣＲ、特に、コレシストキニンの標的化）、米国特許第６，４８９，３３３号明細書（インテグリンアンタゴニストおよびグアニジン模倣物の組み合わせ）、米国特許第６，５１１，６４８号明細書（キノロン標的化αｖβ３またはαｖβ５）、米国特許第Ａ２００２／０１０６３２５号明細書、国際公開第０１／９７８６１号パンフレット（ベンゾジアゼピンおよび類似体標的化インテグリン）、α５β１を含むインテグリンを標的化するためのバイオベクター、国際公開第０１／９８２９４号パンフレット（イミダゾールおよび類似体）、国際公開第０１／６０４１６号パンフレット（ＭＭＰ阻害剤、特に、ヒドロキサメート）、国際公開第０２／０８１４９７号パンフレット（ＲＧＤＷＸＥなどのαｖβ３標的化ペプチド）、国際公開第０１／１０４５０号パンフレット（ＲＧＤペプチド）、米国特許第６，２６１，５３５号明細書（抗体または抗体フラグメント（ＴＮＦまたはＩＬによって誘導可能なＦＧＦ、ＴＧＦｂ、ＧＶ３９、ＧＶ９７、ＥＬＡＭ、ＶＣＡＭ））、米国特許第５７０７６０５号明細書（その標的との相互作用によって修飾された分子を標的化する）、国際公開第０２／２８４４１号パンフレット（アミロイド沈着標的化薬剤）、国際公開第０２／０５６６７０号パンフレット（カテプシン切断ペプチド）、米国特許第６，４１０，６９５号明細書（ミトキサントロンまたはキノン）、米国特許第６，３９１，２８０号明細書（上皮標的化ポリペプチド）、米国特許第６，４９１，８９３号明細書（ＧＣＳＦ）、米国特許第２００２／０１２８５５３号明細書、国際公開第０２／０５４０８８号パンフレット、国際公開第０２／３２２９２号パンフレット、国際公開第０２／３８５４６号パンフレット、国際公開第２００３／６０５９号パンフレット、米国特許第６，５３４，０３８号明細書、国際公開第９９／５４３１７号パンフレット（システインプロテアーゼ阻害剤）、国際公開第０１７７１０２号パンフレット、ＥＰ１１２１３７７、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（５２，ｎ°２，１７９；増殖因子ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦなど）、Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２２２，Ｗ．クラウス・スプリンガー（Ｗ．Ｋｒａｕｓｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ），Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１１，２００３，１３１９−１３４１；αｖβ３標的化テトラヒドロベンズアゼピノン誘導体）。
２）血管形成阻害剤、特に臨床治験または既に市販されている阻害剤、具体的には：
・ＳＵ１０１、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＺＤ４１９０、ＰＴＫ７８７、ＺＫ２２５８４６、アザ環式化合物などのＦＧＦＲまたはＶＥＧＦＲ受容体に関与する血管形成阻害剤（国際公開第００／２４４１５６号パンフレット、国際公開第０２／０５９１１０号パンフレット）；
・ＢＢ２５−１６（マリマスタット）、ＡＧ３３４０（プリノマスタット）、ソリマスタット、ＢＡＹ１２−９５６６、ＢＭＳ２７５２９１、メタスタット、ネオバスタットなどのＭＭＰに関与する血管形成阻害剤；
・ＳＭ２５６、ＳＧ５４５、ＥＣ−ＥＣＭ遮断付着分子などのインテグリンに関与する血管形成阻害剤（ＥＭＤ １２１−９７４、またはバイタクシン）；
・カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ４７０、スクアラミン、ＺＤ０１０１などの抗血管形成作用のより間接的な機構を伴う医薬製品；
・書面国際公開第９９／４０９４７号パンフレットに記載の阻害剤、ＫＤＲ受容体に対する結合に極めて選択的なモノクローナル抗体、ソマトスタチン類似体（国際公開第９４／００４８９号パンフレット）、セレクチン結合ペプチド（国際公開第９４／０５２６９号パンフレット）、増殖因子（ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦ、ＭＣＳＦ、インターロイキン）；Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９９，２０に記載のＶＥＧＦ標的化バイオベクター；
・書面国際公開第０２／０６６５１２号パンフレットの阻害ペプチド。
３）受容体：ＣＤ３６、ＥＰＡＳ−１、ＡＲＮＴ、ＮＨＥ３、Ｔｉｅ−１、１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｅｋ、ニューロピリン−１、エンドグリン、プレイオトロフィン、エンドシアリン、Ａｘｌ．、ａｌＰｉ、ａ２ｓｓｌ、ａ４Ｐ１、ａ５ｐｌ、ｅｐｈＢ４（エフリン）、ラミニンＡ受容体、ニュートロフィリン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｎ）６５受容体、ＯＢ−ＲＰレプチン受容体、ＣＸＣＲ−４ケモカイン受容体（および書面国際公開第９９／４０９４７号パンフレットに記載の他の受容体）、ＬＨＲＨ、ボムベシン／ＧＲＰ、ガストリン受容体、ＶＩＰ、ＣＣＫ、Ｔｌｎ４を標的化することが可能なバイオベクター。
４）チロシンキナーゼ阻害剤型のバイオベクター。
５）
（１）ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体に対するモノクローナル抗体のｆａｂフラグメント（アブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ））（レオプロ（ＲｅｏＰｒｏ）ＴＭ）
（２）エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）（インテグリン（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ）ＴＭ）およびチロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）（アグラスタット（Ａｇｇｒａｓｔａｔ）ＴＭ）などの静脈注射される小さなペプチドおよびペプチド模倣分子、から選択されるＩＩｂ／ＩＩＩａの阻害剤の既知の阻害剤。
６）フィブリノゲン受容体アンタゴニストであるペプチド（ＥＰ４２５２１２）、ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体リガンド、フィブリノゲンリガンド、トロンビンリガンドであるペプチド、アテロームプラーク、血小板、フィブリンを標的化することが可能なペプチド、ヒルディンに基づくペプチド、ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を標的化するグアニンに基づく誘導体。
７）抗トロンビン作用、抗血小板凝集作用、アテローム性動脈硬化症に対する作用、再狭窄に対する作用、および／または抗凝結作用を伴う他のバイオベクターまたは医薬製品として当業者に既知のバイオベクターの生物学的に活性なフラグメント。
８）αｖβ３を標的化する他のバイオベクターまたはバイオベクターの生物学的に活性なフラグメントであって、米国特許第６５３７５２０号明細書においてＤＯＴＡとの併用が記載されており、以下から選択される：マイトマイシン、トレチノイン、リボムスチン（ｒｉｂｏｍｓｔｉｎ）、ゲムシタビン、ビンクリスチン、エトポシド、クラドリビン、ミトブロニトール、メトトレキサート、ドキソルビシン、カルボコン、ペントスタチン、ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）、ジノスタチン、セトロレリクス、レトロゾール、ラルチトレキセド、ダウノルビシン、ファドロゾール、フォテムスチン、チマルファシン、ソブゾキサン、ネダプラチン、シタラビン、ビカルタミド、ビノレルビン、ベスナリノン、アミノグルテチミド、アムサクリン、プログルミド、エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）酢酸塩、ケタンセリン、ドキシフルリジン、エトレチナート、イソトレチノイン、ストレプトゾシン、ミヌスチン（ｍｉｎｕｓｔｉｎｅ）、ビンデシン、フルタミド、ドロゲニル（ｄｒｏｇｅｎｉｌ）、ブトシン（ｂｕｔｏｃｉｎ）、カルモフール、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、シゾフィラン、カルボプラチン、ミトラクトール、テガフール、イホスファミド、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ピシバニル、レバミソール、テニポシド、インプロスルファン、エノシタビン、リスリド、オキシメトロン、タモキシフェン、プロゲステロン、メピチオスタン、エピチオスタノール、ホルメスタン、α−インターフェロン、α２−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、コロニー刺激因子−１、コロニー刺激因子−２、デニロイキンジフチトクス、インターロイキン−２、黄体形成ホルモン放出因子。
９）特定のタイプの癌を標的化するいくつかのバイオベクターであって、例えば、直腸結腸癌に関連するＳＴ受容体、またはタキキニン受容体に関連するＳＴ受容体を標的化するペプチド。
１０）ホスフィン型化合物を使用するバイオベクター。
１１）Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチンを標的化するためのバイオベクター；例えば、モリカワ（Ｍｏｒｉｋａｗａ）ら、１９９６，９５１に記載の８アミノ酸ペプチド、およびまた多様な糖。
１２）アネキシンＶまたはアポトーシス方法を標的化するバイオベクター。
１３）ファージディスプレイなどの標的化技術によって得られた、場合により、非天然のアミノ酸で修飾された任意のペプチド（ｈｔｔｐ／／ｃｈｅｍｌｉｂｒａｒｙ．ｂｒｉ．ｎｒｃ．ｃａ）、例えば、ファージディスプレイライブラリー：ＲＧＤ、ＮＧＲ、ＣＲＲＥＴＡＷＡＣ、ＫＧＤ、ＲＧＤ−４Ｃ、ＸＸＸＹ＊ＸＸＸ、ＲＰＬＰＰ、ＡＰＰＬＰＰＲから誘導されるペプチド。
１４）特に、書面国際公開第２００３／０１４１４５号パンフレットに記載のアテロームプラークを標的化するための他の既知のペプチドバイオベクター。
１５）ビタミン。
１６）ホルモンおよびステロイドを含むホルモン受容体のためのリガンド。
１７）オピオイド受容体標的化バイオベクター。
１８）ＴＫＩ受容体標的化バイオベクター。
１９）ＬＢ４およびＶｎＲアンタゴニスト。
２０）Ｎｉ−トリイミダゾールおよびベンジルグアニジン化合物。
２１）Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２２２巻、２６０〜２７４頁、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｂａｓｅｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｍｅｔａｌｌｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにおいて想起されるバイオベクター、特に：
・腫瘍において過剰発現されるペプチド受容体（例えば、ＬＨＲＨ受容体、ボンベシン／ＧＲＰ、ＶＩＰ受容体、ＣＣＫ受容体、タキキニン受容体）を標的化するためのバイオベクター、特に、ソマトスタチン類似体またはボンベシン類似体、場合によりグリコシル化オクトレオチド由来ペプチド、ＶＩＰペプチド、α−ＭＳＨ、ＣＣＫ−Ｂペプチド；
・環状ＲＧＤペプチド、フィブリン−α鎖、ＣＳＶＴＣＲ、タフトシン、ｆＭＬＦ、ＹＩＧＳＲ（受容体：ラミニン）から選択されるペプチド。
２２）オリゴ糖、多糖およびノース誘導体（ｏｓｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、Ｇｌｕ標的化誘導体。
２３）スマート（ｓｍａｒｔ）型の製品に使用されるバイオベクター。
２４）心筋生存性のマーカー（テトロホスミンおよびヘキサキス−２−メトキシ−２−メチルプロピルイソニトリル）。
２５）糖および脂肪代謝のトレーサー。
２６）神経伝達物質受容体のためのリガンド（Ｄ、５ＨＴ、Ａｃｈ、ＧＡＢＡ、ＮＡ受容体）。
２７）オリゴヌクレオチド。
２８）組織因子
２９）国際公開第０３／２０７０１号パンフレットに記載のバイオベクター、特に、ＰＫ１１１９５、末梢性ベンゾジアゼピン受容体のためのリガンド。
３０）フィブリン性結合ペプチド、特に国際公開第０３／１１１１５号パンフレットに記載のペプチド配列。
３１）国際公開第０２／０８５９０３号パンフレットに記載のアミロイドプラーク凝集阻害剤。
３２）光学画像化において使用することができる蛍光色素のバイオベクター。
適切である場合、化合物（Ｉ）のリンカーＬの長さは、化合物（ＩＩＩ）の体内分布を最適化するおよび／または生物学的標的によるその特異的認識を促進するために、変動する。
最終粒子
本発明に関して、錯体形成され、場合により、バイオベクターに結合された、流体力学的外径が５ｎｍ〜２００ｎｍ、好ましくは、５〜６０ｎｍである最終粒子が好適である。
磁性粒子（ｐ）の組成物は、場合により、バイオベクターに結合されており、場合により、ＤＭＳＯ、アセトンまたはメタノールなどの水混和性有機溶媒の存在下で、一般に、水性懸濁液の形態であり、生体適合性懸濁液が特に好適である。
本発明の好適な変異体に従えば、錯体形成され、場合により、バイオベクターに結合された酸性磁性粒子（ｐ）の組成物は、１つもしくはそれ以上の薬学的に許容可能なビヒクルおよび／または添加物を含む。これに関して、滅菌組成物が特に好適である。
粒子を調製するための方法
別の局面に従えば、本発明の主体は、酸性磁性粒子（ｐ）の調製のための方法であって、プロトン化部位の少なくとも９０％は、式（Ｉ）の１つもしくはそれ以上の同一または異なるｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成しており、Ｘ基は少なくとも１つのバイオベクターに結合することが可能であり、前記方法は、鉄化合物に基づく酸性磁性粒子（ｐ）の酸性溶液を、十分量の上記で規定された式（Ｉ）の化合物に接触させること、および得られた錯体形成した粒子を回収することを含む。
別の局面に従えば、本発明の主体は、化合物（Ｉ）によって錯体形成され、バイオベクターで被覆された磁性ナノ粒子の組成物の調製のための方法であって、以下よりなる連続工程を含む：
ｉ）鉄化合物に基づく酸性磁性粒子（ｐ）の酸性溶液を、十分量の上記で規定された式（Ｉ）の化合物と接触させること、および得られた錯体形成した粒子を回収すること；
ｉｉ）磁性粒子（ｐ）の表面で錯体形成した式（Ｉ）の化合物のＸ基のすべてまたはいくつかを、バイオベクターと結合させること。
好ましくは、工程ｉ）は、以下の工程ｉ１）およびｉ２）を含む：
ｉ１）鉄化合物に基づく酸性磁性粒子（ｐ）の酸性溶液を調製すること；
ｉ．２）ｉ．１）由来の溶液を、十分量の上記で規定された式（Ｉ）の化合物と接触させること、および得られた錯体形成した粒子を回収すること。
本発明に従う方法の好適な実施態様に従えば、工程ｉ）において使用される酸性磁性流体は、フェライト、好ましくは、マグヘマイトまたはマグネタイトに基づく磁性粒子を含む。
一般に、工程ｉ）は、場合により、ＤＭＳＯ、アセトンまたはメタノールなどの水混和性有機溶媒の存在下で、酸性ｐＨ、好ましくは、１〜３のｐＨで水性媒体中で行われる。
いかなる理論にも制限を加えることを所望しないのであれば、磁性粒子（ｐ）の錯体形成よりなる工程中、磁性粒子（ｐ）の最初にプロトン化された部位は、Ｎ．フォーコニー（Ｎ．Ｆａｕｃｏｎｎｉｅｒ）ら：Ｐｒｏｇ．Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．（１９９６），１００，２１２〜２１６頁による刊行物において詳細に記載されているように、プロトンの排除を介して、式（Ｉ）の化合物のｇｅｍ−ビスホスホネート末端と相互作用する。従って、酸性磁性粒子（ｐ）のプロトン化された部位は、式（Ｉ）の化合物のｇｅｍ−ビスホスホネート基の磁性粒子表面への「付着箇所または結合箇所」とみなすことができる。
特に好適な実施態様に従えば、手順は、粒子（ｐ）の表面でプロトン化されたヒドロキシル部位のモル数に対して、１〜３モル等量の範囲の量の存在下で、磁性粒子（ｐ）のプロトン化された部位の少なくとも７０％、より好ましくは９０％が錯体形成するように、行われる。これは、一般に、そのサイズに依存して、粒子あたり約４０〜２００の式（Ｉ）の化合物を表し、表面プロトン化された部位の数は、酸性磁性粒子（ｐ）の表面に比例する。
有利なことに、式（Ｉ）の化合物のモル数対酸性磁性粒子（ｐ）のプロトン化された部位のモル数の比を規定するグラフト化の程度の評価は、Ｃ、ＰおよびＦｅ元素分析などの従来の方法によって、容易に決定することができる。具体的には、化合物（Ｉ）のグラフト化前の酸性磁性粒子（ｐ）は、リンも炭素原子も含まない。ここで、化合物（Ｉ）の粒子表面へのグラフト化後、リン／鉄比の決定により、酸性磁性粒子（ｐ）上にグラフトされた化合物（Ｉ）のモル数を決定することが可能である。
さらに、磁性粒子のプロトン化された部位の数は、電気伝導度測定または酸に基づくアッセイなどの当業者に公知の従来の技術に従って、入手可能である。
これらの分析ツールにより、究極的に入手しようと所望しているグラフト化の程度に従って、式（Ｉ）の化合物の量を調整することが可能である。
従って、有利なことに、この方法は、式（Ｉ）の化合物による磁性粒子（ｐ）のグラフト化を制御することが可能にする。
すべての予想に反して、特に有利なことに、酸性粒子を使用しない先行技術と比較して、本発明者らはまた、アルカリ性粒子へのグラフト化の場合と異なり、式（Ｉ）の化合物でグラフトされた酸性磁性粒子（ｐ）は、３〜１２のｐＨ内、特に、タンパク質または抗体を含むバイオベクターを、それらを分解または変性することなく、後に結合を行うのに主な利点を構成する生理学的ｐＨでは特に、最も一般的に安定であることを示した。
一般に、磁性粒子の表面へのいかなる錯化剤のグラフト化も、粒子の表面電荷、従って、ｐＨおよびイオン強度の関数として、それらの安定性の範囲を変更することを考えると、この特性は明白ではない。
意外にも、本発明者らはまた、ｇｅｍ−ビスホスホネート基と反応性Ｘ基との間に極めて良好な選択性を観察した：ｇｅｍ−ビスホスホネート基のみが、磁性粒子の表面で錯体形成した。
有利なことに、先行技術とは異なり、錯体形成した磁性粒子は、例えば、透析または樹脂上での処置を使用する労力を要するいかなる精製工程をも必要としない。
錯体形成後、式（Ｉ）の化合物によって錯体形成した酸性磁性粒子（ｐ）は、好適な実施態様に従って、簡単な磁性分離化によって反応媒体から単離することができる凝集体を形成する。
工程（ｉｉ）の前に、反応しなかった過剰な式（Ｉ）の化合物を除去するように、回収した凝集体を水で数回洗浄する。
工程（ｉ）の終了時、回収した凝集体は、一般に、凝集体の解離（解膠）およびコロイド溶液の精製を生じる６〜７のｐＨを有する水溶液中に懸濁される。
好適な実施態様に従えば、６〜７のｐＨに戻す前に、工程（ｉ）において形成された凝集体を１０〜１１の塩基性ｐＨを有する水溶液に懸濁することよりなる先の工程が行われる。塩基性ｐＨでのこの処置は、事実、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物の酸性磁性粒子（ｐ）の表面への結合を強化することを目的とする。
有利な局面に従えば、工程（ｉ）の終了時に得られた、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成した酸性磁性粒子（ｐ）は比較的非多分散であり、出発時の酸性磁性流体に極めて類似の「流体力学的サイズ」プロフィールを示す。従って、この錯体形成工程は、凝集のいずれの現象も生じず、任意のさらなるろ過工程を回避することが可能である。
別の有利な局面に従えば、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成した酸性磁性粒子は、極めて良好な鉄収率、一般に、７０〜９５％の間で得られる。
式（Ｉ）の化合物でグラフトされた酸性磁性粒子（ｐ）は、有利なことに、場合により、磁性流体媒体において直接的にバイオベクターの結合を行うことを可能にする溶媒の存在下において、生理学的ｐＨで安定である。
先行技術は、いかなる方法においても、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物の酸性粒子上へのグラフト化を示唆しなかった。
別の有利な局面に従えば、粒子の表面にグラフトされた式（Ｉ）の化合物の反応性Ｘ基は、バイオベクターに対して極めて良好な反応性を有し、高い結合収率を得ることを可能にする。従って、これは、使用したバイオベクターの消失を減少し、従って、究極的に得られる特定の磁性粒子の費用を減少することを可能にする。
別の特定の有利な局面は、式（Ｉ）の化合物でグラフトされた磁性粒子（ｐ）へのバイオベクターの結合の程度の決定である。事実、式（Ｉ）の化合物でグラフトされた磁性粒子（ｐ）の元素分析（Ｃ、Ｐ、Ｆｅ）によって決定される組成物は、リン／鉄比を正確に決定することを可能にし、バイオベクターがグラフトされる最終粒子の元素分析は、同じ方法で窒素／リンまたは炭素／リン比を決定することを可能にし、これは、各粒子上のバイオベクターの数を算出することを可能にする。コーティングポリマーの多分散性質のため、このタイプの分析は、特異的親和性分子がグラフトされているデキストランなどのポリマーで被覆された、「モルデイ（Ｍｏｌｄａｙ）」合成によって得られた磁性粒子に対しては完全に不可能である。
工程（ｉｉ）は、周囲温度で数時間撹拌しながら、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成した磁性粒子（ｐ）を、一般に、磁性流体媒体において、十分量のバイオベクターと接触させることからなり、使用するバイオベクターの量は、入手しようと所望している結合の程度の関数として、確定される。
工程ｉｉ）の終了時に、反応しなかった可能性のあるバイオベクターから、バイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）を分離するために、ろ過工程を行うことができる。
好適な変異体に従えば、工程（ｉ）において使用される磁性粒子（ｐ）は：
ａ）酸性磁性流体のコロイド溶液を調製すること；
ｂ）工程ａ）において得られる溶液を硝酸溶液で処置すること；
ｃ）工程ｂ）において得られる酸性凝集体を単離すること；
ｄ）解膠を行うこと、
よりなる工程を含む方法に従って得られる。
工程ａ）〜ｃ）は、この変異体において、上記の工程ｉ．１）およびｉ．２）に対応する。
工程ａ）において行われる酸性磁性流体のコロイド溶液の調製については周知であり、多くの参考文献に記載されている。特に、特許ＦＲ７９１８８４２ならびに刊行物Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃ．Ｐａｒｉｓ（７／０７／１９８０），ｔ．２９１−ｓｅｒｉｅｓ ＣおよびＩＥＥ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ，１９８１，ｖｏｌ．ＭＡＧ−１７，ｎ°２、１２４７頁を挙げることができる。
標示として、「酸性」および「アルカリ性」磁性流体は、一般に、Ｆｅ２＋およびＦｅ３＋塩を適切な割合で含有する水溶液を、塩基性溶液、一般に、アンモニア水と接触させることによって、得られる。
一般に、過塩素酸または硝酸の酸性溶液で得られるゼラチン上の沈殿物の解膠または解離により、「酸性」磁性流体が得られる一方、水酸化テトラメチルアンモニウム（ＴＭＡＯＨ）の溶液での解膠により、「アルカリ性」磁性流体が得られる。
「アルカリ性」磁性流体は、それらを得るための方法が、粒子の流体力学的サイズを実際に制御できるものではなく、式（Ｉ）の化合物のグラフト化後、それらは、透析または樹脂上でのろ過などの長期かつ労力を要する精製工程を必要とする点で、本発明には適切ではない。さらに、ＴＭＡＯＨは毒性であるため、得られるアルカリ性磁性粒子をバイオメディカルに適用することは、ＴＭＡＯＨのすべての痕跡を取り除くことを目的としたさらなる処置を行わなければならないことを意味する。
一方、本発明に関して、文献、特に次の刊行物：Ｒ．マサート（Ｒ．Ｍａｓｓａｒｔ）、Ｖ．カブイル（Ｖ．Ｃａｂｕｉｌ）（Ｊｏｕｒｎａｌ ｄｅ Ｃｈｉｍｉｅ−Ｐｈｙｓｉｑｕｅ［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ｐｈｙｓｉｃｓ］，１９８７，８４，ｎ°７−８，９６７〜９７３頁）；Ｒ．マサート（Ｒ．Ｍａｓｓａｒｔ）、ＣＲ Ａｃａｄ．Ｓｃ．Ｐａｒｉｓ，ｔ．２９１（Ｊｕｌｙ ７，１９８０），ｓｅｒｉｅｓ Ｃ１に記載の方法に従う「アルカリ性」磁性粒子から変換した「酸性」磁性流体の使用を想定することが可能である。
本発明に従う方法の好適な実施態様に従えば、工程ａ）において使用される酸性磁性流体は、フェライト、好ましくは、マグヘマイトまたはマグネタイトに基づく磁性粒子を含む。
これに関して、Ｆｅ（ＮＯ３）３の溶液でのさらなる処置から生じるフェライトに基づく酸性磁性粒子が特に好適である。工程ａ）の終了時に行われるこのさらなる処置は、フェライトに基づく磁性粒子（ｐ）のコアの酸化を行い、有利なことに、Ｆｅ２＋イオンの存在に関連する細胞毒性の現象の減少を可能にする。さらに、この処置は、工程ｄ）の終了時で得られる最終磁性流体溶液の安定性を増加することが可能である。
有利なことに、工程ｂ）において使用される処置は、工程ａ）において得られる磁性粒子の流体力学的サイズを制御することを可能にする。
従って、本発明者らは、意外にも、濃度および硝酸での処置期間を調整すれば、工程ａ）において得られる磁性粒子のサイズを減少させることができることを発見した。
好ましくは、工程ｂ）において、１．５〜４モル／Ｌの濃度を有する硝酸溶液を使用する。特に、この場合、処置は、一般に、１時間〜４８時間の範囲の期間、好ましくは少なくとも２時間以上および好ましくは２４時間未満の期間、適用される。
この処置の終了時に、得られる凝集体は、工程ｃ）において、簡単な磁性分離によって有利に単離され、アセトンなどの有機溶媒で数回洗浄される。
最終的に、工程ｃ）において単離される凝集体は、水性溶媒の容積において、場合により、解膠、即ち、凝集体の解離および酸性磁性流体のコロイド溶液の生成を可能にする水混和性有機溶媒の存在下で、懸濁される。
本発明はまた、それ自体が、式（Ｉ）の化合物によって錯体形成し、工程（ｉ）および（ｉｉ）を含む方法によって得ることができるバイオベクターに結合した酸性磁性粒子（ｐ）を含む組成物を目的とする。
別の局面に従えば、本発明の主体は、それ自体が、本発明に従う方法の工程（ｉ）において得ることができる式（Ｉ）の化合物によって錯体形成した酸性磁性粒子（ｐ）を含む組成物である。
また、これらの磁性粒子とバイオベクターに結合した磁性粒子との混合物を含む組成物も本発明に含まれる。
アプリケーション
本発明はまた、場合によりバイオベクターに結合され、場合により、薬学的に許容可能なビヒクルおよび薬学的に許容可能な添加物と組み合わされた酸性磁性粒子（ｐ）の組成物を含む医用磁気共鳴画像の造影生成物に関する。
粒子がバイオベクターに結合していない場合、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物のＸ基は、それがインビボで毒性反応を含まないように選択される。これに関して、Ｘが−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２を表すのが特に好適である。バイオベクターの結合の非存在下では、式（Ｉ）の化合物で錯体形成した磁性粒子（ｐ）の組成物は、例えば、ＭＲＩによる血管造影、およびまた他のＭＲＩアプリケーションのための造影剤として使用することができる。
式（Ｉ）の化合物で錯体形成しバイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）の組成物は、特異的磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、特に、器官または病理の特異的磁気共鳴画像に特に有用である。
バイオベクターの結合の非存在下では、式（Ｉ）の化合物で錯体形成した磁性粒子の組成物は、例えば、ＭＲＩによる血管造影、およびまた他の非特異的ＭＲＩアプリケーションのための造影剤として使用することができる。
磁性造影生成物の緩和度ｒ１およびｒ２により、その磁性効率が測定され、記録されたシグナルに対するその影響を評価することを可能にする。
これに関連して、本発明者らは、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成する磁性粒子（ｐ）の組成物は、極めて有利な緩和度ｒ１およびｒ２を示し、プロトン緩和率（Ｒ１＝１／Ｔ１およびＲ２＝１／Ｔ２）を大幅に増加させることが可能である。次いで、緩和率に対するこのような効果は、標的化された領域におけるＭＲＩの極めて良好なコントラストを得ることが可能である。
磁性粒子をバイオベクター、特に、所定の標的生物学的受容体に特異的なリガンドに結合させる場合、本発明の組成物を、ＭＲＩによる特異的が増加、特に多くの病理における特徴付けおよび治療モニタリングのための造影剤として使用することができる：標示として、循環器系疾患（アテロームプラーク画像化）、癌（腫瘍、転移）、炎症性および変性疾患（多発性硬化症、慢性関節リウマチ、アルツハイマー病）を挙げることができる。
従って、別の局面に従えば、本発明の主体は、場合により、少なくとも１つのバイオベクターに結合した酸性磁性粒子（ｐ）を含む組成物が患者に投与され、磁気共鳴により患者の器官または病理を可視化することを可能にする診断または治療モニタリングの方法である。
例として、使用されるバイオベクターが葉酸誘導体、メタロプロテアーゼ阻害剤または抗体、例えば、抗ＣＥＡもしくは抗ムチン型である最終粒子組成物は、腫瘍の検出および特徴付けならびに癌の拡張（転移）の全体的病像を得るための腫瘍学におけるＭＲＩ造影剤として、特に有用であり得る。
同様に、ホスファチジルセリン誘導体などのバイオベクターに結合した最終粒子の組成物は、炎症性および変性疾患、アテロームプラークまたはストレスを標的化することを可能にする。
同様に、ＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）配列を含有するペプチドなどのバイオベクターに結合した最終粒子の組成物は、血管形成中ならびに血栓症および炎症現象において発現されるインテグリンを標的化することを可能にする。従って、それらを使用して、ＭＲＩにより、癌腫学における抗血管形成処置または心臓学における抗血栓処置の効果をモニターすることができる。
一般に、モノクローナル抗体またはそのフラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ｓＦｖ）などのバイオベクターの使用は、使用した抗体に対応する受容体が過剰発現される病理学的領域を標的化するために、インビボで高い特異性を達成することを可能にする。
有利なことに、式（Ｉ）の化合物によって錯体形成し、バイオベクターに結合した粒子（ｐ）の緩和度は、バイオベクターを伴わない中間体の緩和度と比較して、変化しないことが示された。さらに、これらの組成物の有効性は、式（Ｉ）の化合物によって錯体形成した粒子（ｐ）に結合したバイオベクターの性質に依存しない。
バイオベクターに結合してもまたは結合していなくてもよい磁性粒子の組成物もまた、合成中に放射性鉄同位体を使用する核医学に有用である。
別の局面に従えば、本発明に従うバイオベクターに結合した酸性磁性粒子（ｐ）の組成物は、磁性標的化による医薬製品を送達するために、使用することができる。これに関して、磁性粒子（ｐ）は、場合により、標的化された領域における高周波電界の作用下で放出させることができる薬理学的および／または細胞障害性特性を有するバイオベクターに結合される。
従って、本発明の主体は、少なくとも１つのバイオベクターに結合された酸性磁性粒子（ｐ）を含む組成物が、薬学的に許容可能なビヒクルと組み合わせて、治療を必要とする患者に投与される、治療的処置のための方法である。
本発明に従うバイオベクターに結合した酸性磁性粒子（ｐ）の組成物はまた、病理学的領域の温熱療法による処置に有用である。これに関して、標的化された領域に存在する受容体に特定の親和性を有するバイオベクターが一般的に選択され、高周波電界、好ましくは、外部の代替的高周波電界が、前記標的化された領域に対向から適用される。
本発明に従うバイオベクターに結合した酸性磁性粒子（ｐ）の組成物はまた、細胞標識化、特にインビトロまたはエクスビボで行うことができる幹細胞の標識化に有用である。
従って、別の局面に従えば、本発明の主体は、細胞のインビトロ検出および／または分離のための方法であって：
ｉ）細胞を、細胞を標識することが可能な少なくとも１つのバイオベクターに結合された酸性磁性粒子（ｐ）を含む組成物と接触させること；ならびに
ｉｉ）得られた標識された細胞を検出および／または分離すること、
を含む。
好ましくは、バイオベクターは、標識しようとする細胞から発現される生物学的受容体に特異的なリガンドである。
これに関して、幹細胞受容体に特異的に結合することが可能なバイオベクターは、磁性粒子（ｐ）に結合される。従って、標識され、患者に投与された幹細胞は、次いで、磁場の適用下で、ＭＲＩ可視化によって外来性細胞の運動、局在および生存を追跡することを可能にする。このような適用は細胞機能不全に関連する病理を検出するのに特に有用である。
従って、本発明の主体は、細胞機能不全に関連する病理の診断のための方法であって：
ｉ）上記の方法に従って患者由来の幹細胞をエクスビボで標識すること、ならびに
ｉｉ）前記患者に標識された幹細胞を投与すること；
を含み、磁場の適用下でＭＲＩ可視化によって外来性細胞の運動、局在および生存を追跡し、そのようにして細胞機能不全に関連する病理を検出することを可能にする。
最後に、バイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）の組成物は、インビトロで行われる磁性セルソーティングに特に有用である。この場合、バイオベクターは、一般に、前記バイオベクターに対する受容体を有する化合物を、前記受容体を有さない化合物から識別および／または分別するように選択されるリガンドである。例として、バイオベクターは、特定のアネキシン、Ｃａ２＋の存在下でホスファチジルセリン（ＰＳ）またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）に結合可能なリガンドを表す。この場合、本発明に従う使用は、異常な状態を示す、即ち、アネキシンバイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）に結合可能な細胞を、これらの粒子に結合することができない正常細胞から識別および／または分別することを可能にする。
用語「薬学的に許容可能な」は、適切な様式で動物または人に投与される場合に、任意のアレルギー反応、副作用もしくは有害作用を生じない組成物あるいは分子実体を指す。
表現「薬学的に許容可能なビヒクル」は、本説明に関して、溶媒、分散媒体、抗菌剤および抗真菌剤を示すことができる。そのような媒体および薬剤の使用は、当業者の能力内に当てはまる。
従来の媒体または薬剤が式（Ｉ）の化合物によって錯体形成し、バイオベクターに結合された磁性粒子（ｐ）に不適合でない限り、診断組成物におけるそれらの使用を想定することができる。さらなる有効成分を本発明に従う組成物に組み入れることもできる。
本発明の処置の方法では、組成物は、標的化された病理、患者の症状、患者の重量、患者の年齢などに依存して、当業者によって調製することができる治療有効量で投与されることが理解される。
本発明の組成物は、好ましくは、非経口的、または経口的に投与されるが、例えば、直腸投与などの他の投与経路は除外されず、静脈注射の形態の投与が特に好適である。
経口投与が想定される場合、本発明の組成物は、ゼラチンカプセル、発泡錠、裸錠またはコーティング錠、サシェ、糖衣錠、経口用アンプルもしくは溶質、細粒の剤型または徐放もしくは定時間放出の剤型である。
非経口投与が想定される場合、本発明の組成物は、緩徐な静脈輸注あるいはボーラスとしての静脈注射のための容易に再構成される凍結乾燥物またはアンプルもしくは瓶もしくは予め充填されたシリンジ内に包装された注射用溶質および懸濁液の剤型である。
経口投与のための剤型は、場合により、バイオベクター、特に、活性な物質に結合した磁性粒子（ｐ）と、賦形剤または充填剤、崩壊剤、結合剤、染料、風味増強剤などのビヒクルとを混合し、次いで、ゼラチンカプセル、特に定時間放出型ゼラチンカプセルにおいて混合物を処方することによって、調製される。
本発明の粒子の水溶性および低い重量オスモル濃度は、注射のための高濃度および許容可能な粘度の等張水溶液を調製することを可能にする。
非経口投与のための剤型は、場合により、バイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）と、緩衝剤、安定化剤、保存剤、可溶化剤、等張剤および懸濁剤とを混合することによって、従来の様式で得られる。次いで、既知の技術に従って、これらの混合物は滅菌され、次いで、静脈内注射または容易に再構築される凍結乾燥物の剤型で、滅菌された薬学的に許容可能なビヒクルにおいて包装される。
溶液は、場合により、バイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）を含有する凍結乾燥粉末ならびに場合により、添加物および滅菌溶媒から即座に調製することができるか、あるいはバイオベクターに結合した磁性粒子の溶液における顕著な安定性のため、瓶、アンプル、シリンジまたはバック中の溶液が放射線取扱者に提供される。
坐剤の調製のために、本発明に従う磁性粒子は、それ自体既知の様式で、ポリエチレングリコールまたは半合成グリセリドなどの適切な基剤構成成分と混合される。
単位用量は、バイオベクターに結合した磁性粒子（ｐ）の組成、投与経路、確立しようする診断のタイプ、およびまた患者に依存する。単位用量は、平均サイズ（７５ｋｇ）の個体について、一般に、０．０１μモル〜１００μモルの磁性粒子である。
実施例において実証されるように、本発明者らは、被覆剤として、ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物を使用し、安定かつ特異的である化合物を得ることに成功した。より広範には、出願人は、第１に、磁性粒子、第２に少なくとも１つのバイオベクターに結合可能な被覆剤について研究していることを明記する。式Ｙ１−Ｙ２−Ｙ３の多様な被覆剤が研究され、Ｙ１はナノ粒子に結合可能な少なくとも１つの基であり、Ｙ３は少なくとも１つのバイオベクターに相互作用可能な少なくとも１つの基であり、存在してもまたは存在しなくてもよいＹ２は、Ｙ１とＹ３との間のリンカーである。Ｙ１の間で、ホスホネート、ホスフェート、ビスホスホネートおよびｇｅｍ−ビスホスホネート以外の類似体、ヒドロキサメートまたはｇｅｍ−ヒドロキサメートが特に研究される。
以下では、本発明に従う組成物の調製の実施例について、例示によって説明する。
以下の実施例では、以下の一般性について明記する。
以下において、略語Ｍ、Ｍ／Ｌ、理論的Ｍ、ＮおよびＭ／ｚ、ＥＳ＋、ＥＳ−、ｋＤおよびＴＬＣは、以下の意味を有する：
ＭまたはＭ／Ｌ：モル濃度（モル／リットル）
理論的Ｍ：理論的分子量
Ｎ：正常
Ｍ／ｚ：質量分析によって決定される質量電荷
ＥＳ＋：正イオンモードエレクトロスプレー
ＥＳ−：負イオンモードエレクトロスプレー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ｋＤ：分子質量の単位（キロダルトン）
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
Ｚａｖｅ：ＰＣＳによって測定される流体力学的直径
ポリσ：ＰＣＳによって測定される多分散系。
以下の化学命名法は、ＩＵＰＡＣ規則に従うＡＣＤ／ＮＡＭＥソフトフェア（アドバンスト・ケミストリー・ディベロプメント・インク（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｉｎｃ）、加国トロント（Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ））から誘導される。
総鉄アッセイ：
鉄は、濃ＨＣｌで無機質化および標準範囲の鉄イオン（０、５、１０、１５および２０ｐｐｍ）に対する希釈後の原子吸光分光（ＶＡＲＩＡＮ ＡＡ１０分光光度計）によってアッセイする。
粒子サイズ
グラフト化粒子の流体力学的直径（Ｚａｖｅ）＝ＰＣＳサイズ：
注射用調製物のために水で約１ミリモルにまで希釈し、０．２２μｍを介してろ過したサンプルに対して、ＰＣＳ（マルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）４７００デバイス、９０°でのレーザー４８８ｎｍ）によって決定する。
ＰＣＳ＝光子相関法−参考文献：Ｒ．ペコラ（Ｒ．Ｐｅｃｏｒａ）、Ｊ．ｏｆ Ｎａｎｏ．Ｒｅｓ．（２０００），２，１２３〜１３１頁。
磁性粒子（ｐ）の直径（グラフト化前）
多様な温度で磁化曲線（ＳＱＵＩＤ磁力計上で測定する）のデコンヴォルーションにより決定する。［参考文献：Ｒ．Ｗ．チャントレル（Ｒ．Ｗ．Ｃｈａｎｔｒｅｌｌ）、ＩＥＥＥ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ（１９７８），１４（５），９７５〜９７７頁］。
マイクロア解析によるグラフト化の程度の決定
化合物Ａ：１００モルの総鉄あたりのモルで表現される。
他の化合物：１００モルの鉄あたりのモルおよび１００モルの化合物Ａあたりのモルで表現される。
構造解析：
エレクトロスプレー供給源を伴う質量分析（ＭＩＣＲＯＭＡＳＳ ＶＧ クアトロ（Ｑｕａｔｔｒｏ）ＩＩデバイス）による。
緩和度の測定：
緩和時間Ｔ１およびＴ２を、ミニスペック（Ｍｉｎｉｓｐｅｃ）１２０デバイス（バルカー（Ｂｒｕｋｅｒ））上、２０Ｍｈｚ（０．４７Ｔ）および３７℃で、標準的な手順により決定した。縦緩和時間Ｔ１は、反転回復法を使用して測定し、横緩和時間Ｔ２は、ＣＰＭＧ技術によって測定する。
緩和率Ｒ１（＝１／Ｔ１）およびＲ２（＝１／Ｔ２）は、水溶液中、３７℃での多様な濃度の総金属（０．１×１０−３〜１×１０−３ｍｏｌ／Ｌの範囲）について算出した。濃度の関数としてのＲ１またはＲ２間の相関関係は線状であり、勾配は緩和度ｒ１（Ｒ１／Ｃ）またはｒ２（Ｒ２／Ｃ）を表し、（１／秒）×（１／ｍｍｏｌ／Ｌ）、即ち（ｍＭ−１・ｓ−１）として表現される。
式（Ｉ）の化合物の例
実施例１：化合物Ａの調製：
Figure 0004638738
１）ジエチル−１−［エトキシホスホリル］ビニル ホスホネート
１３ｇ（０．４３３モル）のパラホルムアルデヒド１０ｍｌ（０．０９７モル）のジエチルアミンを熱条件下、２５０ｍｌのメタノール中に可溶化する。次いで、２４ｇ（８．６７×１０−２モル）のジエチル［エトキシ（プロピル）ホスホリル］メチルホスホネートを添加する。混合物を２４時間還流する。反応媒体を減圧下で濃縮する。濃縮物を、２５０ｍｌのトルエンで２回採取し、次いで、減圧下で濃縮する。
得られるオイルを１２５ｍｌのトルエンに可溶化する。０．１４ｇのパラ−トルエンスルホン酸を添加する。混合物を、ディーン−スターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）トラップで２４時間還流し、次いで、減圧下で乾燥状態まで濃縮する。
生成物を、５００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、次いで、２５０ｍｌの水で２回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。
粗生成物を、６２５ｇのメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカゲル（４０〜６３μｍ）上で精製する。溶出：ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン−５０／５０（ＴＬＣ−ＳｉＯ２：Ｒｆ＝０．４５）。
１８．４ｇが７１％の収率で単離される。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝３０１．４（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝３００．２
Ｃ１３スペクトル：（ｓ）１４８．８ｐｐｍ、（ｔ）１３４．８−１３１．５−１２８．２ｐｐｍ、（ｓ）６２．２ｐｐｍ、（ｓ）１６．７ ｐｐｍ
Ｈ１スペクトル：（ｔ）６．９−６．８−６．６ｐｐｍ、（未分解ピーク）３．９ｐｐｍ、（ｔ）１．１５ｐｐｍ。
２）ジエチル２−［２．２−ビス（ジエチルホスホリル）エチル］マロネート
１．６ｇ（０．０１モル）のジエチルマロネート、０．０７ｇ（０．００１モル）のナトリウムエトキシドおよび３ｇ（０．０１モル）のジエチル［エトキシ（プロピル）ホスホリル］ビニルホスホネートを、１５分間、１５ｍｌのエタノール中で撹拌する［ＴＬＣ：ＳｉＯ２；溶出ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン５０／５０−Ｒｆ＝０．６］。
５ｍｌの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液をエタノール溶液に添加する。混合物を減圧下で濃縮する。残渣を、３０ｍｌの酢酸エチルで抽出し、および５ｍｌの水で２回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで、乾燥状態までエバポレートする。
得られるオイルを２００ｇのメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上で精製する。溶出：ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン５０／５０ Ｒｆ＝０．６
３．８ｇが８２％の収率で単離される。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ ４６０．９（ＥＳ＋）、理論的Ｍ＝４６０。
３）４，４−ジホスホノブタン酸
７ｇ（１５．７×１０−２モル）のジエチル２−［２．２−ビス（ジエチルホスホリル）エチル］マロネートを８時間、３５０ｍｌのＨＣｌ［５Ｎ］中で還流する。
得られる褐色のオイルを、６０ｇのシラン処理したシリカ６０（０．０６３〜０．２００ｍｍ）上で精製し、水で溶出させる［ＨＰＬＣモニタリング］。
３．６ｇが９２％の収率で単離される。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ ２４９（ＥＳ＋）、理論的Ｍ＝２４８
ＨＰＬＣ：カラム：ハイパーカルブ（Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ）（登録商標）２５０×４ｍｍ 検出：２０２ｎｍ
定組成溶離 ９９／１：０．０３４ Ｎ Ｈ２ＳＯ４／ＣＨ３ＣＮ−Ｔｒ＝８分
実施例２〜７：バイオベクターの調製
実施例２：化合物 Ｂの調製：
１）エチル−２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート
９．７ｇ（０．１モル）のマレイミドを、５０ｍｌの酢酸エチルおよび１．１ｍｌのＮ−メチルモルホリンに、５℃で可溶化する。
１．１ｍｌのエチルクロロホルメートを段階的に添加する。混合物を、１／２時間、撹拌する。不溶性材料をろ過によって取り出す。ろ過物を、５０ｍｌの水で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで、減圧下で濃縮する。得られるオイルをメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカゲル（４０〜６３μｍ）上で精製する。溶出：ＣＨ２Ｃｌ２／ＡＣＯＥｔ ６６／３４。
１６．９ｇが５０％の収率で単離される。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝１７０．１ （ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝１６９
２）ｔｅｒｔ−ブチル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１ｙｌ）プロピルカルバメート
０．５１５ｇ（２．９６×１０−３モル）の化合物Ｂ１）を２０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３に可溶化する。溶液を、０．４５μｍの孔を有するフィルターを介してろ過し、次いで、０℃にまで冷却する。
２５ｍｌのテトラヒドロフランの溶液中０．５ｇ（２．９６×１０−３モル）のエチルカルボニルマレイミドを段階的に添加する。混合物を１５分間、撹拌する。
２５ｍｌのテトラヒドロフランを添加し、反応媒体を４５分間撹拌する。十分量（ｑｓ）のＨＣｌ［１Ｎ］で、ｐＨを６に調整する。生成物を２×２００ｍｌの酢酸エチルで抽出する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。
７３７ｍｇが９８％の収率で単離される。
３）１−（３−アミノプロピル）１Ｈ−ピロール−２．５−ジオン
０．７ｇ（２．７５×１０−３モル）の化合物Ｂ２）を、２５ｍｌのＨＣｌ［２Ｎ］中で２４時間、撹拌する。
溶液を減圧下で濃縮する。５００ｍｇが８８％の収率で得られる。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝１５５．１（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝１５４．１
実施例３：化合物Ｃの調製：
１−デオキシ−１−［（２，３−ジヒドロプロピル）アミノ］ヘキシトール
１７３ｇ（１．９モル）の３−アミノ−１，２−プロパンジオールを、１リットルのメタノールに可溶化する。３６０ｇ（２モル）のを添加する。混合物を２４時間、周囲温度で撹拌する。この溶液を、２０バールの水素下、６０℃、５０ｇのパラジウム−炭（ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−ｃｈａｒｃｏａｌ）および４５０ｍｌの水で６時間、還元する。
反応媒体をクラーセル（ｃｌａｒｃｅｌ）上、３５℃でろ過する。ろ液を８５０ｍｌの容積まで濃縮する。次いで、濃縮物を、熱水浴で３５℃に保持した３リットルのイソプロピルアルコールに注ぐ。沈殿物を取り除き、減圧下で乾燥する。２７２ｇが５３％の収率で単離される。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝２５６．４（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝２５３．３
実施例４：化合物Ｄの調製：Ｎ−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）−（２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）］−２，４，６−トリブロモ−５−（グリシルアミノ）イソフタルアミド
２５５ｇ（１．９モル）の化合物Ｃを、８０℃で、２．５リットルの１−メチル−２−ピロリジノン中に、３０分間溶解する。１７０℃で乾燥した６７．１ｇ（０．６３５モル）のＮａ２ＣＯ３および４０７．８ｇ（０．６３５ モル）の５−フタルアミド（アセトアミド）−２，４，６−トリアミノイソフタル酸塩化物を添加し、４５℃未満に保持する前に、反応媒体を４０℃に冷却する。
媒体を４０℃で２時間維持し、次いで、クラーセル（Ｃｌａｒｃｅｌ）上での鉱物のろ過の前に２０℃に冷却する。
６１０ｍｌの水をろ過物に添加し、次いで、４４．８ｍｌのヒドラジン水和物（０．８８９モル）の添加の前に、混合物を７０℃に加熱する。反応媒体を９０℃で２時間加熱する。
十分量のＨＣｌ［１２Ｎ］でｐＨを１に調整する。ろ過により沈殿物を取り出す。ろ液を３０リットルのエタノールに注ぐ。
得られる生成物を３．６リットルの水に溶解し、十分量の水酸化ナトリウム［２Ｎ］でｐＨを６．５に調整し、溶液を透析ろ過する。精製物のＨＰＬＣモニタリング。ＨＰＬＣ純度＝９８．２％。
ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｃ１８シンメトリー（Ｓｙｍｅｔｒｙ）（登録商標）２５０×４ｍｍ（５μｍ）。検出：２５４ｎｍ。
定組成溶離：９９／１：Ｈ２ＳＯ４ ０，０３４Ｎ／ＣＨ３ＣＮ
臭素アッセイ＝２３．６％（即ち、９７．２％の純度）
実施例５：化合物Ｅの調製：Ｎ−Ｎ’−［ビス（２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）］−２，４，６−トリブロモ−５−（グリシルアミノ）イソフタルアミド
Figure 0004638738
化合物Ｅは、特許：ＥＰ０９２２７００Ａ１に記載の手順に従って、調製することができる。
実施例６：化合物Ｆの調製：（１８Ｓ）−１−アミノ−１８｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−１５−オキソ−４−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸
Figure 0004638738
９．７４ｇ（０．０２１４ モル）の（２Ｓ）−２−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−５−メトキシ−５−オキソペンタン酸 （Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９７，１１９，１０００４−１００１３の手順に従って調製することができる）を、６０ｍｌのＤＭＳＯに周囲温度で可溶化する。２３５ｍｌ（１，０７モル）の４，７，１０−トリオキサ−１，１３−トリデカンジアミンを添加する。混合物を４８時間、周囲温度で撹拌する。
反応媒体を１．５ｌのＣＨ３ＣＮおよび１．５ｌのエチルエーテルの混合物に注ぐ。得られる沈殿物をろ過して取り除き、減圧下で乾燥する。
粗生成物を１００ｍｌのピリジン［０．１Ｎ］に可溶化し、１ｋｇのシラン処理したシリカ６０（０．０６３〜０．２００ｍｍ）上で精製し、９／１ピリジン［０．１Ｎ］−メタノールで溶出させる［ＨＰＬＣモニタリング］。２．７ｇが２６％の収率で単離され、９７．３％のＨＰＬＣ純度が得られる。
ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｃ１８シンメトリー（Ｓｙｍｅｔｒｙ）（登録商標）２５０×４ｍｍ（５μｍ）。検出：２５４ｎｍ
定組成溶離：９９／１：０．０３４ Ｎ Ｈ２ＳＯ４／ＣＨ３ＣＮ。
実施例７：化合物Ｇの調製：
Ｌ−プロピル−Ｌ−ロイシル−Ｎ１−ヒドロキシグリシンアミド
１ｇ（２．３×１０−３モル）の１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−プロピル−Ｌ−ロイシル−Ｎ１−ヒドロキシグリシンアミド１００ｍｌのメタノールに溶解する。
１００ｍｇの５０％Ｐｄ／Ｃ水和物を溶液に添加する。混合物を６時間、周囲温度、５０ＰＳＩの水素下で、撹拌する。
ろ過により触媒を取り出し、ろ過物を減圧下で濃縮する。生成物を４℃で保存する。
定量的収率。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝３７１．２（ＥＳ−） 理論的Ｍ＝３７２．４
実施例８および９：酸性磁性粒子（ｐ）のコロイド溶液の調製の実施例
実施例８：
１５０ｍｌのＨ２Ｏ中３６ｇ（０．１８１モル）のＦｅＣｌ２．４Ｈ２Ｏおよび２０ｍｌのＨＣｌ（３７％）の溶液を、３リットルの水および１４３ｍｌ（０．３０２モル）のＦｅＣｌ３（２７％）に導入する。２５０ｍｌのＮＨ４ＯＨ（２５％）を、激しく撹拌しながら、迅速に導入する。混合物を、３０分間撹拌する。磁性分離により、液を取り出す。磁性流体を、２リットルの水で連続的に３回、洗浄する。
硝酸磁性流体を１５分間、２００ｍｌのＨＮＯ３［２Ｍ］と共に撹拌し、磁性分離により上清を取り出す。
硝酸磁性流体を６００ｍｌの水および２００ｍｌのＦｅ（ＮＯ３）３［１Ｍ］で３０分間還流する。磁性分離により上清を取り出す。
硝酸磁性流体を１５分間、２００ｍｌのＨＮＯ３［２Ｍ］と共に撹拌し、磁性分離により上清を取り出す。
硝酸磁性流体を３リットルのアセトンで３回洗浄し、次いで、４００ｍｌの水で採取する。２５０ｍｌの最終濃度が得られるまで、溶液を減圧下でエバポレートする。
Figure 0004638738
実施例９：
４５０ｍｌのＨ２Ｏ中１０８ｇ（０．５４３モル）のＦｅＣｌ２．４Ｈ２Ｏを、４リットルの水および４２９ｍｌ（０．９０６ モル）のＦｅＣｌ３（２７％）の溶液に導入する。７５０ｍｌのＮＨ４ＯＨ（２５％）を、撹拌（１２００ｒｐｍ）しながら、迅速に導入する。混合物を３０分間撹拌する。磁性分離により、液を取り出す。磁性流体を、３リットルの水で連続的に２回、洗浄する。
硝酸磁性流体を１／４時間、３リットルのＨＮＯ３［２Ｍ］と共に撹拌し、磁性分離により上清を取り出す。
硝酸磁性流体を、１３００ｍｌの水および７００ｍｌのＦｅ（ＮＯ３）３［１Ｍ］と共に３０分間、還流する（６００ ｒｐｍ）。磁性分離により上清を取り出す。
硝酸磁性流体を１５分間、３リットルのＨＮＯ３［２Ｍ］と共に撹拌し、磁性分離により上清を取り出す。
硝酸磁性流体を３リットルのアセトンで３回洗浄し、次いで、６００ｍｌの水で採取する。２５０ｍｌの最終濃度が得られるまで、溶液を減圧下でエバポレートする。
※この段階で、以下の特徴が得られる：
Figure 0004638738
※処置：
２００ｍｌの先の溶液を、２，４リットルのＨＮＯ３中、４時間、撹拌する。磁性分離により上清を取り出す。硝酸磁性流体を３リットルのアセトンで２回洗浄し、次いで、４００ｍｌの水で採取する。２５０ｍｌの最終濃度が得られるまで、溶液を減圧下でエバポレートする。
Figure 0004638738
実施例１０〜１２：式（Ｉ）の化合物による磁性粒子（ｐ）の錯体形成の実施例
実施例１０：
４．８５Ｍ／Ｌでの実施例８の５０ｍｌを３リットルの水で希釈する。１００ｍｌの水中実施例１由来の化合物Ａの１．３ｇ（５．２４×１０−３モル）の溶液を段階液に導入する。撹拌を３０分間維持する。磁性分離により凝集体を単離し、次いで、３リットルの水で３回洗浄する。
十分量のＮａＯＨ［１Ｎ］によりｐＨ７．２とした７００ｍｌの水でそれを再溶解する。最終溶液を、０．２２μｍ膜を介してろ過する。
鉄力価＝０．２５２Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝６７．９ｎｍ
Ｆｅ＝６１．７％質量／質量
Ｐ＝１．２１％質量／質量
Ｃ＝１．０４％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．８６％モル／モル
実施例１１：
４．７３Ｍ／Ｌでの実施例８の５０ｍｌを３リットルの水で希釈する。８０ｍｌの水中実施例１由来の化合物Ａの１．３ｇ（５．２４×１０−３モル）の溶液を段階液に導入する。撹拌を３０分間維持する。磁性分離により凝集体を単離し、次いで、３リットルの水で３回洗浄する。
十分量のＮａＯＨ［１Ｎ］によりｐＨ１１とした７００ｍｌの水でそれを再溶解し、次いで、十分量のＨＣｌ［１Ｎ］によりｐＨ７．２で安定化する。最終溶液を、０．２２μｍ膜を介してろ過する。
鉄力価＝０．２７９Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝４０．３ｎｍ ポリσ＝０．１９
Ｆｅ＝６３．９％質量／質量
Ｐ＝１．３８％質量／質量
Ｃ＝１．０７％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．９５％モル／モル
実施例１２：
２．７４２Ｍ／Ｌ（ＰＣＳサイズ＝２１．３ｎｍ）での実施例９の１００ｍｌを３リットルの水で希釈する。
１００ｍｌの水中実施例１由来の化合物Ａの１．５ｇ（６．０３×１０−３モル）の溶液を段階液に導入する。撹拌を３０分間維持する。磁性分離により凝集体を単離し、次いで、３リットルの水で３回洗浄する。
十分量のＮａＯＨ［１Ｎ］によりｐＨ１１とした７００ｍｌの水でそれを再溶解し、次いで、十分量のＨＣｌ［１Ｎ］によりｐＨ７．２で安定化する。最終溶液を、０．２２μｍ膜を介してろ過する。
鉄力価＝０．２８５Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２５．６ｎｍ
Ｆｅ＝６２．９％質量／質量
Ｐ＝１．３２％質量／質量
Ｃ＝１．２２％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．９０％モル／モル
緩和度：
２０ＭＨｚ（０．４７Ｔ）−３７℃−水溶液中
Figure 0004638738
実施例１３〜１８：式（Ｉ）の化合物によって錯体形成した酸性磁性粒子のバイオベクターとの結合
実施例１３：
３６ｍｇ（１．８８×１０−４モル）の化合物Ｂを、０．２５２Ｍ／Ｌでの実施例１０の５０ｍｌに溶解する。十分量のＨＣｌ［１Ｎ］でｐＨを５．８に調整する。
トリエチルアミンの１滴および７２ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を、反応媒体に添加し、混合物を周囲温度で１８時間撹拌する。
溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。３５ｍｌの最終溶液を得るために、６００ｍｌのろ過物を取り出す。
［Ｆｅ］＝０．２１２Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝６９．２ｎｍ
Ｆｅ＝６２．８％質量／質量
Ｐ＝１．２１％質量／質量
Ｃ＝２．２３％質量／質量
Ｎ＝０．４８％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．７４％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｂ／Ｆｅ］＝１．３７％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｂ／化合物Ａ］＝７８．６％
実施例１４：
実施例３由来の０．１９３ｇ（７．６×１０−４モル）の化合物Ｃを、０．２７９Ｍ／Ｌでの１３．５５ｍｌの実施例１１に溶解する。ｐＨを６．２に調整する。
１７１ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を、周囲温度で、２４時間撹拌する。溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。５００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を３０ｍｌに調整する。
［Ｆｅ］＝０．１５５Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝４３．７ｎｍ
Ｆｅ＝５８．４％質量／質量
Ｐ＝１．１７％質量／質量
Ｃ＝２．８０％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．８０％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｃ／Ｆｅ］＝１．６７％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｃ／化合物Ａ］＝９３％
実施例１５：
実施例４由来の０．３５８ｇ（３．７８×１０−４モル）の化合物Ｄを、０．２７９Ｍ／Ｌでの１３．５５ｍｌの実施例１１に溶解する。
８６ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を、周囲温度で、２４時間撹拌する。溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。５００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を３０ｍｌに調整する。
［Ｆｅ］＝０．１３４Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝４１．３ｎｍ
Ｆｅ＝５１．２％質量／質量
Ｐ＝１．１６％質量／質量
Ｃ＝５．７９％質量／質量
Ｂｒ＝３．０７％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝２％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｄ／Ｆｅ］＝１．４％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｄ／化合物Ａ］＝６８．４％
実施例１６：
実施例５由来の０．８５３ｇ（７．６×１０−４モル）の化合物Ｅを、０．２７９Ｍ／Ｌでの１３．５５ｍｌの実施例１１に溶解する。ｐＨを６．２に調整する。
１７１ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を、周囲温度で、２４時間撹拌する。溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。５００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を３０ｍｌに調整する。
［Ｆｅ］＝０．１３２Ｍ／ＬＰＣＳサイズ＝４１．６ｎｍ ポリσ＝０．２２
Ｆｅ＝５２．３％質量／質量
Ｐ＝０．７７％質量／質量
Ｃ＝５．８６％質量／質量
Ｂｒ＝２．６５％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．３３％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／Ｆｅ］＝１．１８％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／化合物Ａ］＝８９％
実施例１７：
実施例６由来の１．３５ｇ／Ｌの化合物Ｆを含有する９０ｍｌの溶液を、０．２８５Ｍ／Ｌでの６６．３ｍｌの実施例１２に導入する。１２１．７ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。ｐＨを６．８に調整し、混合物を周囲温度で１８時間撹拌する。
反応媒体を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。濃縮液を１００ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２１３Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２９ｎｍ
Ｆｅ＝５９．６％質量／質量
Ｐ＝１．２９％質量／質量
Ｃ＝２．６７％質量／質量
Ｎ＝０．３８％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．９５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｆ／Ｆｅ］＝０．２８％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｆ／化合物Ａ］＝１４．５％
緩和度：
２０ＭＨｚ（０．４７Ｔ）−３７℃−水溶液中
Figure 0004638738
これらの結果は、バイオベクターの結合が非結合中間体の緩和度を改変しないことを示す（実施例１２）。
実施例１８：
０．２８５Ｍ／Ｌでの実施例１２の１００ｍｌの溶液を、パル（ＰＡＬＬ）（登録商標）３０ＫＤ撹拌セルを介して、限外濾過する。実施例７由来の２０２ｍｇの化合物Ｇをこの溶液に添加する。十分量のＨＣｌ［０．１Ｎ］で、ｐＨを６．１に調整する。
２０３ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加し、混合物を周辺温度で６時間、撹拌する。
反応媒体を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。８００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を１４０ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２２３ Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２８．４ｎｍ
Ｆｅ＝５７．９％質量／質量
Ｐ＝１．３７％質量／質量
Ｃ＝３．４９％質量／質量
Ｎ＝０．８９％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝２．１３％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｇ／Ｆｅ］＝１．５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｇ／化合物Ａ］＝７１％
実施例１９〜２１：「アルカリ性」磁性流体前駆体から誘導されるｇｅｍ−ビスホスホネート化合物により錯体形成し、バイオベクターに結合する磁性粒子と、「酸性」磁性流動体前駆体から誘導される該磁性粒子との比較
実施例１９：ＴＭＡＯＨ媒体における「アルカリ性」磁性流体の調製
２．９６ｍｌのＦｅＣｌ３（２７％）、および４０ｍｌの水中０．６ｇのＦｅＣｌ２．４Ｈ２Ｏの溶液よりなる混合物を、２００ｍｌの水酸化テトラメチルアンモニウム［１Ｍ］に注ぐ。混合物を１時間、周囲温度で撹拌する。溶液を、０．２２μｍ膜を介してろ過し、窒素下４℃で保持する。
［Ｆｅ］：０．０４０３Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝６８．２ｎｍ 多分散系σ＝０．４８
実施例２０：実施例１由来のｇｅｍ−ビスホスホネート化合物による実施例１９由来の「アルカリ性」磁性流体の錯体形成
５ｍｌの水における溶液中実施例１由来の４１６ｍｇの化合物Ａよりなる溶液を、２５ｍｌの実施例１９に誘導する。混合物を１時間撹拌し、次いで、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。
６００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を４０ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍ膜を介してろ過する。
実施例２１：実施例２０由来の錯体形成した磁性粒子と実施例５由来の化合物Ｅとの結合
１．７ｇの化合物Ｅを、実施例２０由来の４０ｍｌの溶液に添加する。ｐＨを６．２に調整する。次いで、３４５ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加し、混合物を２４時間、周辺温度で撹拌する。
反応媒体を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、限外濾過する。
７００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を４０ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
ＰＣＳサイズ＝６０ｎｍ 多分散系σ＝０．６０
Ｆｅ＝３７．９％質量／質量
Ｐ＝１．７０％質量／質量
Ｃ＝１２．９６％質量／質量
Ｎ＝１．８４％質量／質量
Ｂｒ＝６．４２％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝４．０４％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／Ｆｅ］＝３．９５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／化合物Ａ］＝９７．７％
前駆体
Figure 0004638738
最終分子（酸性または塩基性磁性流体＋ｇｅｍ−ビスホスホネート化合物（Ｉａ）＋バイオベクター化合物Ｅ）：
Figure 0004638738
結論：
実施例１９および２１について、本発明者らは、有利なことに、書面Ｊ．ｏｆ Ｃｏｌｌ．ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，２３８，３７〜４２頁において使用される磁性流体に匹敵するアルカリ性磁性流体が使用される場合、流体力学的サイズは前駆体工程（アルカリ性磁性流体−実施例１９）からより大きくなり、多分散系が、酸性磁性流体（σ＝０．２２）と比較して高く（σ＝０．４８）；これは、さらに大きな分散系（σ＝０．６）を有する（化合物Ｉａおよびバイオベクター−化合物Ｅのグラフト化後の）最終生成物の流体力学的サイズに影響を及ぼすことを実証した。酸性磁性流体または塩基性流体のそれぞれから誘導される２つのタイプの最終粒子の間に認められる差異（％）（化合物Ａ／鉄）は、「アルカリ性」前駆体が使用される場合に化合物Ｉ（ｇｅｍ−ビスホスホネート）の二重層が限定的に形成されることを示しており、これは、良好な安定性に不利である。本発明に従う方法では、９０％の部位は式（Ｉ）の化合物とグラフトし、有利なことに単層を形成する。
実施例２２〜２５：他のバイオベクターの調製：
実施例２２：化合物Ｈの調製：
Figure 0004638738
 １）ベンジル５−｛［（２Ｒ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチルカルバメート
１５．６３ｇの（（２Ｒ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸）を、周囲温度、３００ｍｌのテトラヒドロフラン中で可溶化する。
１０ｇの（ベンジル−５−アミノペンチルカルバメート）および次いで、５．１ｍｌのトリエチルアミンを添加する。混合物を、５分間、周囲温度で撹拌する。
５．９４ｇのヒドロキシ−１−ベンゾトリアゾール水和物および次いで、８．４３ｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を続いて、反応媒体に添加する。混合物を２４時間、周囲温度で撹拌する。
不溶性材料をろ過によって取り出す。ろ過物を、減圧下で濃縮する。
得られるオイルを１５０ｍｌの水に注ぎ、１時間、周囲温度で撹拌する。
得られる沈殿物をろ過し、１００ｍｌの水中で３０分間、周囲温度で激しく撹拌しながら洗浄する。
沈殿物をろ過で取り除き、次いで、２００ｍｌのエチルエーテルで洗浄し、次いで、減圧下で乾燥する。２２．７８ｇが９６．４％の収率で単離される。
Ｒｆ＝ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（８／２）中シリカ（メルク（ＭＥＲＣＫ））上０．９４
ＨＰＬＣ：水Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム、５μｍ、（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
勾配：水−ＴＦＡ（ｐＨ２．９５）／ＣＨ３ＣＮ：
λ＝２１０ｎｍ
Figure 0004638738
予想精製物の保持時間：４２分
質量スペクトル：ｍ／ｚ＝６４５．３（ＥＳ＋モード）（理論的Ｍ＝６４４）
２）ベンジル５−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチルカルバメート
２０ｇの（ベンジル５−｛［（２Ｒ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチルカルバメート）を、周囲温度、２８０ｍｌのテトラヒドロフラン中に可溶化する。
次いで、４１．４ｍｌのピペリジンおよび２０ｍｌの水を添加する。混合物を３時間、
周囲温度で撹拌する。反応媒体を減圧下で濃縮する。
得られるオイルを１４００ｇのメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上で精製する。溶出：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ （９５／５）。
１２．７７ｇが９７．４％の収率で単離される。
ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（９５／５）中シリカ（メルク（ＭＥＲＣＫ））上Ｒｆ＝０．６４
ＨＰＬＣ：水 Ｃ１８ シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム、５μｍ、（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
勾配：水−ＴＦＡ（ｐＨ２．９５）／ＣＨ３ＣＮ：
λ＝２１０ｎｍ
Figure 0004638738
予想生成物の保持時間：１８．２分
質量スペクトル：ｍ／ｚ＝４２３．２（ＥＳ＋モード）（理論的Ｍ＝４２２）
３）Ｔｅｒｔ−ブチル（１２Ｒ）−１２−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１５−イソブチル−３，１１，１４−トリオキソ１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１３−トリアザヘプタデカン−１７−オアート
（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８、第４１巻（２）：２０９頁）に記載の手順に従って、合成した９．１６ｇの（２−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルペンタン酸）を、周囲温度で、１６０ｍｌのテトラヒドロフラン中に可溶化する。
１６５ｍｌのテトラヒドロフラン中１６．８１ｇ（０．０３９モル）の（ベンジル５−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチルカルバメート）を構成する均質な溶液のすべてを一度に添加し、続いて、連続的に、８．３ｍｌのトリエチルアミン、６．４５ｇのヒドロキシ−１−ベンゾトリアゾール水和物および９．５ｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。
混合物を１２時間、周囲温度で撹拌する。不溶性物質をろ過により取り出す。ろ過物を減圧下で濃縮する。
得られるオイルを１９００ｇのメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上で精製する。ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（９８／２）による正確な精製物の溶出。
２４ｇが９５．３％の収率で単離される。
ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（９５／５）中シリカ（メルク（ＭＥＲＣＫ））上Ｒｆ＝０．４２
ＨＰＬＣ：水 Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム、５μｍ、（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
勾配：水−ＴＦＡ（ｐＨ２．９５）／ＣＨ３ＣＮ：
λ＝２２０ｎｍ
Figure 0004638738
予想される精製物の保持時間：２５．７分
質量スペクトル：ｍ／ｚ＝６３５．６（ＥＳ＋モード）（理論的Ｍ＝６３４）
４）（１２Ｒ）−１２−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１５−イソブチル−３，１１，１４−トリオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１３−トリアザヘプタデカン−１７−酸
１．４ｇのジチオエリトリトールを、１００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２および１００ｍｌのトリフルオロ酢酸を構成する溶液に添加する。次いで、１０ｇの（ｔｅｒｔ−ブチル（１２Ｒ）−１２−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１５−イソブチル−３，１１，１４−トリオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１３−トリアザヘプタデカン−１７−オアート）を添加する。混合物を３０分間、周囲温度で撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。
得られるオイルを７００ｇのメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上で精製する。ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（９８／２）による正確な精製物の溶出。
６．１９ｇが６８％の収率で単離される。
ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（８／２）中シリカ（メルク（ＭＥＲＣＫ））上Ｒｆ＝０．５７
ＨＰＬＣ：水 Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム、５μｍ、（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
勾配：水−ＴＦＡ（ｐＨ２．９５）／ＣＨ３ＣＮ：
λ＝２１０ｎｍ
Figure 0004638738
予想される精製物の保持時間：２０．８分
質量スペクトル：ｍ／ｚ＝５７９．０（ＥＳ＋モード）（理論的Ｍ＝５７８）
５）ベンジル（８Ｒ）−８−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１１−イソブチル−７，１０，１３−トリオキソ−１６−フェニル−１５−オキサ−６，９，１４−トリアザヘキサデカ−１−イルカルバメート
６．１１ｇの（（１２Ｒ）−１２−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１５−イソブチル−３，１１，１４−トリオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１３−トリアザヘプタデカン−１７−酸）を、周囲温度で、１６０ｍｌのテトラヒドロフランに可溶化する。反応媒体を０℃にまで冷却する。
１．６９ｇのＯ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩、３ｍｌのトリエチルアミン、１．８６ｇのヒドロキシ−１−ベンゾトリアゾール水和物および次いで、２．６３ｇの１−（３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を、連続的に反応媒体に添加し、反応物を２４時間、周囲温度で撹拌する。
不溶性材料をろ過によって取り出す。ろ過物を、減圧下で濃縮する。
得られるオイルを２００ｍｌの水に注ぐ。得られる沈殿物をろ過で取り除き、１００ｍｌの水中、周囲温度で洗浄する。
沈殿物をろ過で取り除き、減圧下で乾燥する。
５．７ｇが７９．２％の収率で単離される。
Ｒｆ＝ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮ（５／５）中シリカ（メルク（ＭＥＲＣＫ））上０．２９
ＨＰＬＣ：Ｃ１８ 水 シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム、５μｍ、（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
勾配：水−ＴＦＡ（ｐＨ２．９５）／ＣＨ３ＣＮ：
λ＝２１０ｎｍ
Figure 0004638738
予想精製物の保持時間：２２．７分
質量スペクトル：ｍ／ｚ＝６８４．３（ＥＳ＋モード）（理論的Ｍ＝６８３）
６）Ｎ１−［（１Ｒ）−２−［（５−アミノペンチル）アミノ］−１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソエチル］−Ｎ４−ヒドロキシ−２−イソブチルスクシンアミド
０．３２ｇの（ベンジル（８Ｒ）−８−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１１−イソブチル−７，１０，１３−トリオキソ−１６−フェニル−１５−オキサ−６，９，１４−トリアザヘキサデカ−１−イルカルバメート）を３０ｍｌのメタノールに溶解する。スパチュラ半量分の５０％Ｐｄ／Ｃ水和物を溶液に添加する。
混合物を４時間３０分間、周囲温度、５０ＰＳＩの水素下で撹拌する。結晶物を、クラーセル（ｃｌａｒｃｅｌ）上でのろ過によって取り出し、ろ過物を減圧下で濃縮する。定量的収率。
得られる生成物を、５ｇのメルク（Ｍｅｒｃｋ）シラン処理シリカ６０ゲル（６３〜２００μｍ）上で精製する。予想精製物のＨ２Ｏによる溶出。
０．１１ｇが５１％の収率で単離される。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８水シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム、５μｍ、（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
勾配：水−ＴＦＡ（ｐＨ２．９５）／ＣＨ３ＣＮ：
λ＝２２０ｎｍ
Figure 0004638738
予想精製物の保持時間：９．４分
質量スペクトル：ｍ／ｚ＝４６０．３（ＥＳ＋モード）（理論的Ｍ＝４５９）
実施例２３：化合物Ｉの調製：
１）Ｏ−（２−パラ−トルエンスルホニルエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール１１００
平均質量１１００の１６．２ｇのポリエチレングリコールモノメチルエーテル（フルカ（Ｆｌｕｋａ）（登録商標））を２５ｍｌのジクロロメタンに溶解する。この溶液を５℃の温度にまで冷却する。
次いで、０．４ｇのトリエチルベンジルアンモニウム塩化物、１０．４ｍｌの３０％水酸化ナトリウム水溶液および次いで、１５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中２．９４ｇのパラ−トルエンスルホニル塩化物溶液を、５℃で添加する。
反応を、２４時間、周囲温度で継続させる。マグネシウム上での乾燥およびエバポレーション後、反応媒体の抽出により、１７．２ｇの固体が生じる。収率は９５％である。
ＴＬＣ：メルク（Ｍｅｒｃｋ）（登録商標）ＳｉＯ２ 溶出：ジクロロメタン／メタノール：９／１。
検出：ＵＶ２５４ｎｍおよびドラゲンドルフ（Ｄｒａｇｇｅｎｄｏｒｆ）：Ｒｆ＝０．４
◆赤外線：１３５６ｃｍ−１（ν：Ｒ−Ｏ−ＳＯ２−Ｒ）
２）Ｏ−（２−アジドエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール１１００
１２．４ｇのＯ−（２−パラトルエンスルホニルエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール１１００を、周囲温度で、９０ｍｌのＤＭＦに溶解する。次いで、２ｇのアジ化ナトリウムを導入する。１８時間、周囲温度で、撹拌を維持する。エバポレーション後、ＣＨ２Ｃｌ２による反応媒体の抽出により、４．４ｇの化合物を生じる。収率は４０％である。
ＴＬＣ：メルク（Ｍｅｒｃｋ）（登録商標）ＳｉＯ２ 溶出：ジクロロメタン／メタノール：９／１。
検出：ＵＶ２５４ｎｍおよびドラゲンドルフ（Ｄｒａｇｇｅｎｄｏｒｆ）：Ｒｆ＝０．３９
◆赤外線：２１０４ｃｍ−１（ν：Ｎ３）
３）Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール１１００
４．３ｇのＯ−（２−アジドエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール１１００および１００ｍｌのエタノール中０．４ｇのＰｄ／Ｃ（５％）をオートクレーブに導入する。２．５バールの水素圧、２５℃、４時間で反応を行う。
セライト上でのろ過により、結晶物を取り出す。エバポレーション後、このように、３．５ｇが８５％の収率で単離される。
ＴＬＣ：メルク（Ｍｅｒｃｋ）（登録商標）ＳｉＯ２ 溶出：ジクロロメタン／メタノール：９／１。
検出：「１級アミン」特異的ニンヒドリン
◆赤外線：３３９０ｃｍ−１（νＮＨ２）
実施例２４：化合物Ｊの調製：
１）Ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−［２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ］エトキシ｝プロピルカルバメート
５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した５ｇのジ（ｔｅｒｔ−ブチル）ジカルボネートの溶液を、滴下漏斗によって、１００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した１５ｇの３−｛２−［２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ］エトキシ｝−１−プロパンアミンに滴下する。
反応媒体を、周囲温度で１８時間撹拌し、次いで、水（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥および濃縮するように、半分に濃縮する。得られる溶液を、メルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上で、酢酸エチルおよび次いで、メタノールによりろ過する。
４．７ｇの生成物を６４％の収率で得る。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝３２１．３（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝３２０．４
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．０５；シリカ（Ｓｉｌｉｃａ）ＳｉＯ２；溶出＝ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（９３／７／トレース）
２）Ｔｅｒｔ−ブチル１６−クロロ−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザヘキサデク（ａｚａｈｅｘａｄｅｃ）−１−イルカルバメート
１０ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−｛２−［２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ］エトキシ｝プロピル−カルバメートを、アセトンおよび氷の浴を具備した三口フラスコ中、５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。５０ｍｌの水に溶解した５ｇのＫ２ＣＯ３および５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した５ｇの塩化クロロアセチルを、滴下漏斗によって、段階的および同時に添加する。添加中、媒体の温度を０℃で維持する。
すべての試薬を添加するとき、試薬媒体を磁気撹拌により、周囲温度で、１時間維持する。
得られる２つの相を分離し、クロロメチレン相を、中性のｐＨになるまで水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、次いで、濃縮する。
１１．２ｇの生成物を９０％の収率で得る。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝３９７．４（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝３９６．９
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６；シリカＳｉＯ２；溶出＝ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）
３）Ｔｅｒｔ−ブチル３０−アミノ−１５−オキソ−４，７，１０，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１４，１７−ジアザトリアコン（ｄｉａｚａｔｒｉａｃｏｎｔ）−１−イルカルバメート
６．８ｇの３−｛２−［２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ］エトキシ｝プロピルアミンを、Ｋ２ＣＯ３の存在下で、５０ｍｌのＣＨ３ＣＮに希釈する。２５ｍｌのＣＨ３ＣＮに溶解した３．５ｇのｔｅｒｔ−ブチル１６−クロロ−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザヘキサデカ−１−イルカルバメートを、滴下漏斗により、この懸濁液に添加する。
反応媒体を２時間還流し、次いで、焼結ガラス上でのろ過のために周囲温度におく。次いで、ろ過物を乾燥状態までエバポレートする。
２０ｍｌの水で４回の洗浄を実施するために、得られる残渣を５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。クロロメチレン相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（５０／５０）の溶出（保持比Ｒｆ＝０．１５）によるメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）の直接精製を想定して、十分に濃縮する。
１．８ｇの生成物を５０％の収率で得る。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝１．８分を有する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝５８１（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝５８０．７
４）Ｔｅｒｔ−ブチル３０−［（２−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル）アミノ］−１５−オキソ−４，７，１０，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１４，１７−ジアザトリアコント−１−イルカルバメート
０．２５ｇのｔｅｒｔ−ブチル３０−アミノ−１５−オキソ−４，７，１０，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１４，１７−ジアザトリアコント−１−イルカルバメートを１．５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。５７．５μｌの３，４−ジエトキシ−３−シクロブテン−１，２−ジオンを添加する。
反応媒体を磁気的に１８時間、周囲温度で撹拌する。この中間体は単離しない。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝２．３０分を有する。
５）Ｔｅｒｔ−ブチル１７−アセチル−３０−［（２−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル）アミノ］−１５−オキソ−４，７，１０，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１４，１７−ジアザトリアコント−１−イルカルバメート
４０．６μｌの無水酢酸を、工程４）において得られる反応媒体に添加する。反応媒体を周囲温度撹拌し、次いで、５ｇのメルク・ゲデュラン（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上、大気圧で、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ（９／１）による溶出により、直接精製する。
オイル形態の０．２７ｇの生成物を、６０％の収率で得る。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝７４８（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝７４６．９
６）１−（｛２−［（１４−アセチル−３４，３４−ジメチル１６，３２−ジオキソ−４，７，１０，２１，２４，２７，３３−ヘプタオキサ−１４，１７，３１−トリアザペンタトリアコント−１−イル）アミノ］−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル｝アミノ）−１８−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−６−ｐｔｅｒｉｄｉｎｙｌ）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸
０．１６ｇのｔｅｒｔ−ブチル１７−アセチル−３０−［（２−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル）アミノ］−１５−オキソ−４，７，１０，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１４，１７−ジアザトリアコント−１−イルカルバメートおよび０．２０５ｇの実施例６（化合物Ｆ）を、３ｍｌの水に可溶化する。
Ｎａ２ＣＯ３で飽和した水を、ｐＨ＝９．２になるように媒体に滴下する。媒体を磁気的に１８時間撹拌し、次いで、ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎｎ）紙を介してろ過し、ＨＣｌ（１Ｎ）で中和し、１５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に採取する。
クロロメチレン相を１ｍｌの水で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、エバポレートする。１００ｍｌのＥｔ２から沈殿させるために、残渣を１０ｍｌのＥｔＯＨ中に採取する。
０．２ｇの結晶物（濃黄橙色）を、６９％の収率で得る。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝２．４０分を有する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝６７３（ｚ＝２；ＥＳ＋）理論的Ｍ＝１３４４．５
７）１−（｛２−［（１４−アセチル−３０−アミノ−１６−オキソ−４，７，１０，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１４，１７−ジアザトリアコント−１−イル）アミノ］−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル｝アミノ）−１８−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−６−プテリジニル）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸
０．２ｇの１−（｛２−［（１４−アセチル−３４，３４−ジメチル−１６，３２−ジオキソ−４，７，１０，２１，２４，２７，３３−ヘプタオキサ−１４，１７，３１−トリアザペンタトリアコント−１−イル）アミノ］−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル｝アミノ）−１８−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−６−プテリジニル）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸を、周囲温度で、２ｍｌのトリフルオロ酢酸に溶解する。
次いで、反応媒体を２０ｍｌのＥｔ２Ｏにおいて沈殿させ、ろ過し、エチルエーテルで徹底的に洗浄する。
０．１８ｇの結晶物を７８％の収率で得る。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝１．９分を有する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝１２４５（ＥＳ＋）理論的Ｍ＝１２４４．４
実施例２５：化合物Ｋ：
１）ｔｅｒｔ−ブチル３５−［（２−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル）アミノ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコント−１−イルカルバメート
０．８ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３５−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコント−１−イルカルバメートを周囲温度で、４ｍｌのＥｔＯＨに可溶化する。１６５μｌの３，４−ジエトキシ−３−シクロブテン−１，２−ジオンをこの溶液に添加する。
混合物を、周囲温度で１８時間撹拌する。溶液のエバポレーション後、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５／５）より構成される溶出液により３０ｇのメルク・ゲデュラン（ＭＥＲＣＫ Ｇｅｄｕｒａｎ）（登録商標）シリカ（４０〜６３μｍ）上で精製されるように、得られる残渣を５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。
０．６ｇのオイルを７０％の収量で得る。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５；シリカＳｉＯ２；溶出液＝ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝２．７８分を有する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝７６９．５（ＥＳ＋）理論的Ｍ＝７６８．９
２）１８−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−６−プテリジニル）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−１−（｛２−［（３９，３９−ジメチル−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３８−ドデカオキサ−３６−アザテトラコント−１−イル）アミノ］−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル｝アミノ）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸
０．３ｇのｔｅｒｔ−ブチル３５−［（２−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル）アミノ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコント−１−イルカルバメートおよび０．３４ｇの実施例６（化合物Ｆ）を、４．５ｍｌの水および０．７ｍｌのＥｔＯＨに可溶化する。
媒体のｐＨを、Ｎａ２ＣＯ３−飽和水の滴下によって、９．２にまで上昇させる。反応媒体を周囲温度で４８時間、ｐＨを９．２で維持しながら撹拌する。
エタノールのエバポレーション後、得られる水溶液を、Ｋ０２６０３３カートリッジ（ＲＰ１８；２５〜４０μｍ）を有し、水／ＣＨ３ＣＮ（９８／２）による溶出および２０ｍｌ／分の流速を伴う「スーパーバリオフラッシュ（Ｓｕｐｅｒｖａｒｉｏｆｌａｓｈ）（登録商標）」クロマトグラフィーカラムシステム上で精製する。
１００ｍｇの生成物を２５％の収率で得る。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ（２７５ｎｍ）
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝２．４０分を有する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝６８４（ｚ＝２；ＥＳ＋）理論的Ｍ＝１３６６．５
３）１８−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−６−プテリジニル）メチル］アミノ｝ベンゾイル）アミノ］−１−（｛２−［（３５−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコント−１−イル）アミノ］−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル｝アミノ）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸
０．３ｇの１８−［（４−｛［（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−６−プテリジニル）メチル］アミノ｝−ベンゾイル）アミノ］−１−（｛２−［（３９，３９−ジメチル−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３８−ドデカオキサ−３６−アザテトラコント−１−イル）アミノ］−３，４−ジオキソ−１−シクロブテン−１−イル｝アミノ）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザノナデカン−１９−酸を、０．３ｍｌのトリフルオロ酢酸に可溶化する。
１５分間の周囲温度での撹拌後、反応媒体をエバポレートし、３０ｍｌのＥｔ２Ｏ中に採取する。
ろ過、Ｅｔ２Ｏでの洗浄および乾燥後、０．２９ｇの生成物を得る。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８シンメトリー（ｓｙｍｍｅｔｒｙ）カラム（３．５μｍ）５０×２．１ｍｍ
− 検出器：ＵＶ（２７５ｎｍ）
− 移動相：Ａ：水＋ＴＦＡ（ｐＨ２．８）
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝１．８７分を有する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝１２６７（ＥＳ＋）理論的Ｍ＝１２６６．４
実施例２６〜３７：式（Ｉ）の化合物によって錯体形成した酸性磁性粒子（ｐ）とバイオベクターとの結合
実施例２６：
１）実施例６由来の１０２．５ｍｇの化合物Ｆを、０．２８５Ｍ／Ｌでの５０ｍｌの実施例１２に導入する。７６．６ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。ｐＨを６．２に調整し、混合物を１８時間、周囲温度で撹拌する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を６５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過し、溶液Ａを得る。
Ｆｅ＝６７％質量／質量
Ｐ＝１．２９％質量／質量
Ｃ＝１．９５％質量／質量
Ｎ＝０．２６％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．７４％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｆ／Ｆｅ］＝０．１７％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｆ／化合物Ａ］＝９．８％。
２）実施例５由来の３ｇの化合物Ｅを、工程１）で得られる５０ｍｌの溶液Ａに導入する。６００ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。ｐＨを６．２に調整し、混合物を１８時間、周囲温度で撹拌する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を４０ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２８９Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２９．６ｎｍ
Ｆｅ＝５６．６％質量／質量
Ｐ＝１．１％質量／質量
Ｃ＝７．２７％質量／質量
Ｎ＝１．１％質量／質量
Ｂｒ＝２．６％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．７５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／Ｆｅ］＝１．０７％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／化合物Ａ］＝６１％
実施例２７
実施例２２由来の３６．５ｍｇの化合物Ｈを、０．２８５Ｍ／Ｌでの３０ｍｌの実施例１２に導入する。ｐＨを６．２に調整し、１８ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を１８時間、周囲温度で撹拌する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を６５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２９２Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝３２．２ｎｍ
Ｆｅ＝６６．０％質量／質量
Ｐ＝１．４８％質量／質量
Ｃ＝３．３５％質量／質量
Ｎ＝０．６９％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝２．０２％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｈ／Ｆｅ］＝０．８３％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｈ／化合物Ａ］＝４１％
実施例２８：
１）９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル６−（ホスホノオキシ）ヘキシルカルバメート
１．３３ｍｌのＰＯＣｌ３および１．８３ｍｌのトリエチルアミンを、９ｍｌのヘプタンに可溶化する。３０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中３ｇの６−（ＦＭＯＣ−アミノ）−１−ヘキサノール溶液を先の溶液に、０℃の温度を維持しながら段階的に導入する。
反応媒体を１時間、０℃、次いで、１８時間、周囲温度で撹拌する。３０ｍｌの水を添加し、混合物を２時間、周囲温度で撹拌する。
有機相を水で洗浄し、次いで、減圧下で濃縮する。得られる固体を水で採取し、ろ過し、乾燥する。
３ｇの生成物を８１％の収率および６０％のＨＰＬＣ純度で得る。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８Ｘ−テラ（ＴＥＲＲＡ）カラム（５μｍ）２５０×４．６ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：炭酸アンモニウムの溶液、ｐＨ＝９
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝１４．１分を有する。
２）ｔｅｒｔ−ブチル１５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−１２−ヒドロキシ−３−オキソ−２，１１，１３−トリオキサ−４−アザ−１２−ホスファヘキサデカン−１６−オアート１２−オキシド
３ｇの９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル６−（ホスホノオキシ）ヘキシルカルバメートおよび３．７３ｇのＢｏｃ−セリン−ＯｔＢｕを、５４ｍｌのピリジンに溶解する。４２ｍｌのピリジン中６．４９ｇのトリイソプロピルベンゼンスルホクロリドを段階的に添加する。混合物を周囲温度で４８時間撹拌する。
３０ｍｌの水を添加し、混合物を４℃で撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。得られる残渣を１００ｍｌのエチルエーテル中に採取する。
不溶性材料をろ過により取り出す。ろ過物を減圧下で濃縮し、次いで、シリカ（溶出：９５％ＣＨ２Ｃｌ２−５％ＭｅＯＨ）上で精製する。
ＨＰＬＣ：Ｃ１８Ｘ−テラ（ＴＥＲＲＡ）カラム（５μｍ）２５０×４．６ｍｍ
− 検出器：ＵＶ２０１ｎｍ
− 移動相：Ａ：炭酸アンモニウムの溶液、ｐＨ＝９
Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
Figure 0004638738
予想生成物は、保持時間＝２０分を有する。
３）ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［［（６−アミノヘキシル）オキシ］（ヒドロキシ）ホスホリル］オキシ｝−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパノエート
３ｇのｔｅｒｔ−ブチル１５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−１２−ヒドロキシ−３−オキソ−２，１１，１３−トリオキサ−４−アザ−１２−ホスファヘキサデカン−１６−オアート１２−オキシドを、０．６２ｍｌのピペリジンおよび３ｍｌの水中、１２時間、周囲温度で撹拌する。反応媒体をろ過し、得られる結晶物を５０ｍｌのアセトニトリルで２回洗浄し、次いで、１００ｍｌのアセトニトリルで再結晶化する。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝４４１．３（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝４４０
４）１６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１３−ヒドロキシ−２０，２０−ジメチル−１３−オキシド−４，１８−ジオキソ−１−ホスホノ−１２，１４，１９−トリオキサ−５，１７−ジアザ−１３−ホスファヘニコサ−１−イルホスホン酸
２ｍｌの水中１０６ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル３−｛［［（６−アミノヘキシル）オキシ］（ヒドロキシ）ホスホリル］オキシ｝−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパノエート溶液を、４ｍｌの水中実施例１由来の５０ｍｇの化合物Ａ溶液に導入する。ｐＨを６．２に調整し、６０ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を２４時間、周囲温度で撹拌する。
得られる生成物を、勾配（水／メタノール）中の溶出を伴うメルク（Ｍｅｒｃｋ）シラン処理シリカ６０ゲル（６３〜２００μｍ）上で精製し、ＨＰＬＣによりモニターする。
７０ｍｇを５２％の収量で得る。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝６７１．２（ＥＳ＋）理論的Ｍ＝６７０
５）１７−アミノ−１，１，１４−トリヒドロキシ−５−オキソ−２−ホスホノ−１３，１５−ジオキサ−６−アザ−１λ5，１４−ジホスファオクタデカン−１８−酸１，１４−ジオキシド
Figure 0004638738
 ６０ｍｇの１６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１３−ヒドロキシ−２０，２０−ジメチル−１３−オキシド−４，１８−ジオキソ−１−ホスホノ−１２，１４，１９−トリオキサ−５，１７−ジアザ−１３−ホスファヘニコス（ｐｈｏｓｐｈａｈｅｎｉｃｏｓ）−１−イル−ホスホン酸を、１ｍｌのＴＦＡ中で２時間、撹拌する。
溶液を減圧下でエバポレートし、４６ｍｇの生成物を定量的収率で得る。
質量スペクトル：Ｍ／ｚ＝５１５．１（ＥＳ＋） 理論的Ｍ＝５１４
６）１０ｍｌの水中３１ｍｇの１７−アミノ−１，１，１４−トリヒドロキシ−５−オキソ−２−ホスホノ−１３，１５−ジオキサ−６−アザ−１λ5，１４−ジホスファオクタデカン−１８−酸１，１４−ジオキシド溶液を、１００ｍｌの水で希釈した２．７４２Ｍ／Ｌでの１ｍｌの実施例９（酸性磁性流体）の溶液に段階的に添加する。混合物を２０分間、周囲温度で撹拌し、ｐＨを７．２に調整する。
得られる溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して限外濾過する。１０ｍｌの最終溶液を得るように、３００ｍｌのろ過物を取り出す。
［Ｆｅ］：０．２６２Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２８．１ｎｍ
Ｆｅ＝６７．６％質量／質量
Ｐ＝１．９％質量／質量
Ｃ＝３．１５％質量／質量
Ｎ＝０．５７％質量／質量
実施例２９：
実施例２３由来の１．７５ｇの化合物Ｉを、０．２８５Ｍ／Ｌでの３０ｍｌの実施例１２に溶解し、ｐＨを６．５に調整する。３６８ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を周囲温度で２４時間撹拌する。溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して限外濾過する。８００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を１５ｍｌに調整する。
［Ｆｅ］：０．４９６Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２７．１ｎｍ
Ｆｅ＝５９．２％質量／質量
Ｐ＝１．０９％質量／質量
Ｎ＝０．３２％質量／質量
Ｃ＝６．８％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．６６％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｉ／Ｆｅ］＝０．９７％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｉ／化合物Ａ］＝５４％
実施例３０：
０．９ｇの化合物Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール７５０［アミノ−ＰＥＧ７５０；フルカ（Ｆｌｕｋａ）］を、０．２８５Ｍ／Ｌでの２２ｍｌの実施例１２に溶解し、ｐＨを６．５に調整する。２８０ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を周囲温度で２４時間撹拌する。溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して限外濾過する。８００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を２０ｍｌに調整する。
［Ｆｅ］：０．２８５Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝２４．９ｎｍ
Ｆｅ＝５３．２％質量／質量
Ｐ＝１．３０％質量／質量
Ｎ＝０．３５％質量／質量
Ｃ＝５．８７％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝２．２％モル／モル
グラフト化の程度［化合物アミノ−ＰＥＧ７５０／Ｆｅ］＝１．３３％モル／モル
グラフト化の程度［化合物アミノ−ＰＥＧ７５０／化合物Ａ］＝６０．３％。
実施例３１：
３．１５ｇの化合物Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール２０００［アミノ−ＰＥＧ２０００；フルカ（Ｆｌｕｋａ）］を、０．２８５Ｍ／Ｌでの３０ｍｌの実施例１２に溶解し、ｐＨを６．２に調整する。３６８ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を添加する。混合物を周囲温度で２４時間撹拌する。溶液を、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して限外濾過する。８００ｍｌのろ過物を取り出す。濃縮液を２５ｍｌに調整する。
［Ｆｅ］：０．２９０Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝３２．２ｎｍ
Ｆｅ＝４６．３％質量／質量
Ｐ＝１．０７％質量／質量
Ｎ＝０．３％質量／質量
Ｃ＝１０．３％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝２．０８％モル／モル
グラフト化の程度［化合物アミノ−ＰＥＧ２０００／Ｆｅ］＝１．０７％モル／モル
グラフト化の程度［化合物アミノ−ＰＥＧ２０００／化合物Ａ］＝５０．４％。
実施例３２：
実施例２４由来の１８０ｍｇの化合物Ｊを、４６ｍｌの実施例１２（濃度：鉄の０．２８５モル／Ｌ）に導入し、ｐＨを６．２に調整する。
５０ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩をこの溶液に添加する。混合物を８時間、周囲温度で撹拌する。さらに５０ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を反応媒体に添加し、１６時間撹拌を維持する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。
濃縮液を５５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２７３Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝７２．４ｎｍ
Ｆｅ＝６２．４％質量／質量
Ｐ＝１．１６％質量／質量
Ｃ＝２．３１％質量／質量
Ｎ＝０．３７％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．６８％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｊ／Ｆｅ］＝０．１８５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｊ／化合物Ａ］＝１１．０％
実施例３３：
７５０ｍｇの化合物Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール７５０（アミノ−ＰＥＧメチルエステル７５０（登録商標）；フルカ（Ｆｌｕｋａ））を、０．２７３Ｍ／Ｌの鉄での２０ｍｌの実施例３２に導入し、ｐＨを６．２に調整する。
２００ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を先の溶液に添加する。混合物を８時間、周囲温度で撹拌する。次いで、さらに２００ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を反応媒体に添加し、１６時間撹拌を維持する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を２５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２６８Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝６９ｎｍ
Ｆｅ＝５９．７％質量／質量
Ｐ＝１．０６％質量／質量
Ｃ＝６．３％質量／質量
Ｎ＝０．６５％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．６％モル／モル
グラフト化の程度［アミノ−ＰＥＧ７５０／Ｆｅ］＝１．９％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｊ／Ｆｅ］＝０．１９％モル／モル
実施例３４：
１．１３ｇの実施例５（化合物Ｅ）を、０．２７３Ｍ／Ｌの鉄での２０ｍｌの実施例３２に導入し、ｐＨを６．２に調整する。
２００ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩をこの溶液に添加する。混合物を８時間、周囲温度で撹拌する。
次いで、さらに２００ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を反応媒体に添加し、１６時間撹拌を維持する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を２５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．１８８Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝７９ｎｍ
Ｆｅ＝５５．１％質量／質量
Ｐ＝０．９１％質量／質量
Ｃ＝７．２１％質量／質量
Ｎ＝１．０９％質量／質量
Ｂｒ＝３．０８％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／Ｆｅ］＝１．３％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｊ／Ｆｅ］＝０．１９％モル／モル
実施例３５：
実施例２５由来の０．２９ｇの化合物Ｋを、７４ｍｌの実施例１２（濃度：鉄の０．２８５モル／Ｌ）に導入し、ｐＨを６．２に調整する。
８２ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩をこの溶液に添加し、混合物を８時間、周囲温度で撹拌する。８時間後、さらに８２ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を反応媒体に添加し、１６時間撹拌を維持する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を７５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２７３Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝６０．８ｎｍ
Ｆｅ＝６３．１％質量／質量
Ｐ＝１．２３％質量／質量
Ｃ＝４．１％質量／質量
Ｎ＝０．３７％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．７６％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｋ／Ｆｅ］＝０．２２％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｋ／化合物Ａ］＝１２．５％
実施例３６：
１ｇのＯ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール７５０（アミノ−ＰＥＧメチルエステル７５０；フルカ（Ｆｌｕｋａ））を、２５ｍｌの実施例３５（Ｃ＝鉄の０．２７３Ｍ／Ｌ）に導入し、ｐＨを６．２に調整する。
２７４ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩をこの溶液に添加する。混合物を８時間、周囲温度で撹拌する。８時間後、次いで、さらに２７４ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を反応媒体に添加し、１６時間撹拌を維持する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を２５ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２６１Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝５９ｎｍ
Ｆｅ＝６２．４％質量／質量
Ｐ＝１．１３％質量／質量
Ｃ＝７．５６％質量／質量
Ｎ＝０．８％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．６３％モル／モル
グラフト化の程度［アミノ−ＰＥＧ７５０／Ｆｅ］＝１．５９％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｋ／Ｆｅ］＝０．２２％モル／モル
実施例３７：
１．６１ｇの実施例５（化合物Ｅ）を、２５ｍｌの実施例３５（Ｃ＝鉄の０．２７３Ｍ／Ｌ）に導入し、ｐＨを６．２に調整する。
２７４ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩をこの溶液に添加する。混合物を８時間、周囲温度で撹拌する。８時間後、次いで、さらに２７４ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を反応媒体に添加し、１６時間撹拌を維持する。
反応媒体は、３０ｋＤのカットオフ閾値を有するパル（ＰＡＬＬ）（登録商標）撹拌セルを介して、直接限外濾過する。濃縮液を２８ｍｌに調整し、次いで、０．２２μｍを介してろ過する。
［Ｆｅ］：０．２４０Ｍ／Ｌ ＰＣＳサイズ＝６５．６ｎｍ
Ｆｅ＝６１．５％質量／質量
Ｐ＝１．０２％質量／質量
Ｃ＝８．０％質量／質量
Ｎ＝１．２１％質量／質量
Ｂｒ＝３．８％質量／質量
グラフト化の程度［化合物Ａ／Ｆｅ］＝１．５％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｅ／Ｆｅ］＝１．４％モル／モル
グラフト化の程度［化合物Ｋ／Ｆｅ］＝０．２２％モル／モル
式（Ｉ）の化合物によって錯体形成し、バイオベクターに結合した酸性磁性粒子（Ｐ）の特定の生物学的標的に対する親和性のアッセイ
１／バイアコア（ＢｉａＣｏｒｅ）技術による実施例１７の葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）に対する親和性のアッセイ
Figure 0004638738
ＨＢＳ緩衝液：１０ｍＭヘペス（Ｈｅｐｅｓ）、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、４．３ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．００５％ ＮＰ２０
ＰＧＭ緩衝液：１００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７、１０％グリセロールおよび４ｍＭβ−メルカプトエタノール
ＦＢＰの免疫化は、アミンへの結合のために、ＢＩＡコア（ＢＩＡｃｏｒｅ）が推奨するプロトコルに従って、ＰＧＭ緩衝液中１ｍｇ／ｍｌで、行った。この後、残りの活性なカルボキシル化された基を、１ＭのエタノールアミンｐＨ＝８で飽和した。付着したＦＢＰの量は、約１．５ｎｇ／ｍｍ２に対応する。
実施例１７は、０．１７０モル／Ｌの鉄の濃度であったが、これは、粒子の１．９×１０−５モル／Ｌ（７．５ｎｍの結晶物、即ち、８９００原子の鉄／粒子とみなす）に対応する。
葉酸の付着が４つの異なる濃度（１２５、２５０、５００および１０００μＭ）で行われた後一方で、実施例１７の付着を１０μｍおよび１０ｎＭ（粒子／Ｌのモルとして表現される）で行った。会合および解離については、２５μｌ／分の流動で研究した。会合および解離相は５分間である。
Figure 0004638738
これらの結果は、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）に対する実施例１７の親和性が極めて高く、ピコモルレベルの親和定数ＫＤ（粒子／Ｌのモルとして表現される）より低いことを実証する。
葉酸受容体（ここではＦＢＰと表される）は、所定の腫瘍細胞（卵巣癌、肺癌、結腸癌および乳癌）および炎症部位（特に、慢性関節リウマチ）において極めて高度に過剰発現されることを考えれば、実施例１７は、腫瘍学および炎症疾患における特異的ＭＲＩ造影剤として有利に使用することができる。
２／ヒトメタロプロテアーゼＭＭＰ−１およびＭＭＰ−３に対する実施例２７の阻害活性
実施例２７の表面を、アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）（亜鉛メタロプロテアーゼ（マトリックスメタロプロテイナーゼ：ＭＭＰ）の強力なインヒビターとして認められた擬ペプチド）から誘導されるバイオベクター（実施例２２：化合物Ｈ）で被覆する。
ヒトマトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ−１およびＭＭＰ−３に対する実施例２７の阻害活性をインビトロで評価した。該阻害活性を、実施例１２（化合物Ｈで官能化されていない粒子）および参照ペプチド、アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）の阻害活性と比較した。ＭＭＰ−１に対する多様な精製物の阻害効果を測定するためのプロトコルは、以下の通りであった。
・原理：蛍光（λｅｘ＝３４０ｎｍ、λｅｍ＝４４０ｎｍ；基質ＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｃｈａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−（ｎ−Ｍｅ−Ａｂｚ）−ＮＨ２）の切断によるＣｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−（ｎ−Ｍｅ−Ａｂｚ）−ＮＨ２の形成の測定）により定量されるヒトＭＭＰ−１（慢性関節リウマチ関節液由来のヒト線維芽細胞から単離した）の活性に対して試験する生成物の阻害効果の評価；参考文献ビケット（Ｂｉｃｋｅｔｔ）ら、（１９９３）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．；２１２：５８に記載のプロトコル。
このアッセイにおいて使用した参照生成物は、ＧＭ６００１（アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）、ガラーディン（Ｇａｌａｒｄｉｎ）ＩＣ５０＝１．９×１０−９Ｍ）であった。
より正確には、試験生成物、または参照生成物もしくは水を、７ｎＭのＭＭＰ−１を含有する緩衝溶液、ｐＨ＝７に添加した。この媒体の蛍光強度を、プレートリーダー（ジェミニＸＳ（ＧｅｍｉｎｉＸＳ）、モレキュラー・デバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ））によりλｅｘ＝３４０ｎｍおよびλｅｍ＝４４０ｎｍで迅速に評価した。このｔ＝０での測定は、蛍光検出に伴う生成物の任意の可能な干渉を確認するのに役立つ。次いで、１０μＭの濃度で基質ＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｃｈａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−（ｎ−Ｍｅ−Ａｂｚ）−ＮＨ２を添加することによって、酵素反応を開始した。４０分間、３７℃でのインキュベーション後、前回と同じ条件（ｔ＝４０分間）下で再度蛍光を評価した。ｔ＝４０分間で測定したシグナルからｔ＝０で測定したシグナルを差し引くことによって、酵素活性を決定した。最終結果は、酵素活性の阻害の百分率で表す。
ＭＭＰ−３に対する多様な生成物の阻害効果を測定するためのプロトコルは、以下の通りであった。
・原理：蛍光（λｅｘ＝３４０ｎｍ、λｅｍ＝４０５ｎｍ；基質Ｍｃａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｎｖａ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）−ＮＨ２（ＮＦＦ２））の切断によるＭｃａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａの形成の測定）により定量されるヒトＭＭＰ−３（ｓＦ９細胞株によって発現される組換え酵素の使用）の活性に対して試験する生成物の阻害効果の評価；参考文献ナガセ（Ｎａｇａｓｅ）ら、（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．；２６９：２０９５２に記載のプロトコル。
このアッセイにおいて使用した参照生成物は、ＧＭ６００１（アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）、ガラーディン（Ｇａｌａｒｄｉｎ）ＩＣ５０＝１．３×１０−７Ｍ）であった。
より正確には、試験生成物、または参照生成物もしくは水を、６ｎＭのＭＭＰ−３を含有する緩衝溶液、ｐＨ＝６に添加した。この媒体の蛍光を、３０分間、３７℃でのプレインキュベーション（ｔ＝０）後、プレートリーダー（ジェミニＸＳ（ＧｅｍｉｎｉＸＳ）、モレキュラー・デバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ））によりλｅｘ＝３４０ｎｍおよびλｅｍ＝４０５ｎｍで評価した。このｔ＝０での測定は、蛍光検出に伴う生成物の任意の可能な干渉を確認するのに役立つ。次いで、１０μＭで基質ＮＦＦ−２を添加することによって、酵素反応を開始した。９０分間、３７℃でのインキュベーション後、前回と同じ条件（ｔ＝９０分間）下で再度蛍光を評価した。ｔ＝９０分間で測定したシグナルからｔ＝０で測定したシグナルを差し引くことによって、酵素活性を決定した。
最終結果は、酵素活性の阻害の百分率で表す。
実施例２７によるヒトＭＭＰ−１およびヒトＭＭＰ−３の阻害の結果を表１に示す。
Figure 0004638738
実施例２７は、０．８７×１０−１０〜０．８７×１０−８Ｍ（化合物Ｈの濃度として表現される）の間でＭＭＰ−１を阻害し、これは、参照ペプチド−アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）−（ＩＣ５０＝１．９×１０−９Ｍ）に対して得られた実験値と一致する。
実施例２７は、０．８７×１０−８〜０．８７×１０−６Ｍ（化合物Ｈの濃度として表現される）の間でＭＭＰ−３を阻害し、これは、参照ペプチド−アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）−（ＩＣ５０＝１．３×１０−７Ｍ）に対して得られた実験値と一致する。
ＭＭＰ−１およびＭＭＰ−３に対する実施例２７により得られた結果は、出願人が調製した酸化鉄の粒子が、参照ペプチド（アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ））に極めて類似の様式で挙動することを示す。実施例２７の化合物は、メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９）に対して広範なスペクトルを有する阻害剤として、また、これらの多様なＭＭＰが過剰発現される病理学的領域を画像化するのに極めて有用な特異的ＭＲＩ造影剤としても使用することができる。

Claims (35)

  1. 鉄化合物に基づく酸性磁性粒子（ｐ）を含む磁気共鳴画像用組成物であって、前記酸性磁性粒子（ｐ）は、式Ｉ
    Ｘ−Ｌ−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２ （Ｉ）
    （式中：
    ・Ｌは、
    基−（ＣＨ２）ｐ（式中、ｐは１〜５の整数である）；
    場合により置換されるフェニレン基（Ｘおよびｇｅｍ−ビスホスホネート基がオルト、メタまたはパラ位であることが可能である）；
    芳香族で置換された１〜６個の炭素原子を含む線状脂肪族鎖；
    基−Ｌ１−ＮＨＣＯ−Ｌ２（式中、Ｌ１およびＬ２は同一または異なるものであり、１〜６個の炭素原子を含む線状脂肪族鎖もしくは芳香族で置換された１〜６個の炭素原子を含む線状脂肪族鎖を表し、前記基は、メチル、ヒドロキシ、メトキシ、アセトキシ、アミド基または塩素、ヨウ素もしくは臭素原子によって置換されることが場合により可能である）
    から選択され；
    ・Ｘは、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＣＳ、−ＮＨ−ＮＨ２、−ＣＨＯ、マレイミジル、アルキルピロカルボニル、アシルアジジル、イミノカルボネート、ビニルスルフリル、ピリジルジスルフリル、ハロアセチル、ジクロロトリアジニルおよびハロゲンから選択されるバイオベクターと反応可能な化学基を表し；前記粒子の前記Ｘ基のすべてまたはいくつかはバイオベクターに場合により結合されており、
    ・バイオベクターは場合により組換えもしくは変異されたタンパク質、糖タンパク質、レクチン、ビオチン、ビタミン、リン脂質、葉酸誘導体、抗体または抗体フラグメント、ペプチドおよびその誘導体、単糖または多糖、アビジン、ストレプトアビジン、受容体基質もしくは阻害剤、ステロイドおよびその類似体、オリゴヌクレオチド、リボ核酸、デオキシリボ核酸、ホルモンまたはホルモン様物質、アミノ酸および誘導体、薬理学的活性を有する有機分子、アミノアルコール、インテグリン標的化剤またはＭＭＰ標的化剤から選択される。）
    の１つのｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成している、上記組成物。
  2. 前記Ｘ基のすべてまたはいくつかがバイオベクターに結合されている、請求項１に記載の組成物。
  3. Ｌが基−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｎ（式中、ｍおよびｎは０〜５の整数を表す）を表す、請求項１に記載の組成物。
  4. Ｘが−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２を表す、請求項１に記載の組成物。
  5. 式（Ｉ）の前記化合物のすべてまたはいくつかは、以下の式（Ｉａ）：
    ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２ （Ｉａ）
    を有する、請求項１あるいは４に記載の組成物。
  6. 前記粒子（ｐ）が、平均して、それらのプロトン化された部位の少なくとも９０％において、式（Ｉ）の化合物によって錯体形成する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記プロトン化された部位が、異なる構造を有する式（Ｉ）の少なくとも２つのｇｅｍ−ビスホスホネート化合物によって錯体形成する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記プロトン化された部位が、同一な構造を有する式（Ｉ）の少なくとも２つの化合物によって錯体形成する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記磁性粒子（ｐ）のすべてまたはいくつかが水酸化鉄、水酸化鉄水和物、フェライト、混合型鉄酸化物またはそれらの混合物よりなる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 前記磁性粒子（ｐ）のすべてまたはいくつかがフェライトよりなる、請求項９に記載の組成物。
  11. 前記フェライトがマグヘマイトもしくはマグネタイトまたはそれらの混合物である、請求項１０に記載の組成物。
  12. 前記粒子（ｐ）が超常磁性である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
  13. 式（Ｉ）の化合物の前記Ｘ基の１〜７０％がバイオベクターに結合されている、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
  14. 式（Ｉ）の化合物の前記Ｘ基の１〜５０％がバイオベクターに結合されている、請求項１３に記載の組成物。
  15. 式（Ｉ）の化合物の前記Ｘ基が少なくとも２つの異なるバイオベクターに結合されている、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
  16. 前記バイオベクターがペプチド誘導体を表す、請求項１に記載の組成物。
  17. 前記バイオベクターがインテグリン標的化剤あるいはＭＭＰ標的化剤である、請求項１６に記載の組成物。
  18. 前記バイオベクターが抗葉酸または葉酸誘導体を表す、請求項１に記載の組成物。
  19. 前記バイオベクターがリン脂質誘導体またはセラミド誘導体を表す、請求項１に記載の組成物。
  20. 前記バイオベクターがホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトールもしくはスフィンゴミエリンを表す、請求項１９に記載の組成物。
  21. 前記バイオベクターが場合により組換えもしくは変異されたタンパク質を表す、請求項１に記載の組成物。
  22. 前記バイオベクターが、場合により官能化されている抗体または抗体フラグメントを表す、請求項１に記載の組成物。
  23. 前記バイオベクターが、場合により官能化されたファーマコフォアを表す、請求項１に記載の組成物。
  24. 前記バイオベクターが、式（ＩＩ）
    Figure 0004638738
    （式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なるものであり、６〜１０個のヒドロキシル基によって置換されていてよい２〜６個の炭素原子を含む脂肪族炭化水素鎖、あるいは、４〜８個のヒドロキシル基によって置換されていてよく、かつＲ１および／またはＲ２が酸素原子によって中断されている２〜６個の炭素原子を含む脂肪族炭化水素鎖を表す）
    のアミノアルコールから選択される、請求項１に記載の組成物。
  25. 前記バイオベクターがアミノポリエチレングリコールから選択される、請求項１に記載の組成物。
  26. Ｒ１は基−（ＣＨ２）−（ＣＨＯＨ）４−ＣＨ２ＯＨまたは−（ＣＨ２）−ＣＨＯＨ−ＣＨ２ＯＨを表し、Ｒ２は基−ＣＨ２−（ＣＨＯＨ）４−ＣＨ２ＯＨを表す、請求項２５に記載の組成物。
  27. −ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＯＣＯ、−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−、−Ｃ−Ｓ−、−Ｎ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｎ−ＣＨ２−、−Ｎ−ＣＳ−Ｎ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｎ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｎ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ、−ＣＨ＝ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−または−Ｏ−Ｎ＝ＣＨ−、およびまた以下の式
    Figure 0004638738
    のタイプの前記Ｘ基が、前記バイオベクターと共有結合を形成する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
  28. 錯体形成し、前記バイオベクターに結合された前記粒子が、５ｎｍ〜２００ｎｍの流体力学的直径を有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
  29. 前記組成物における前記粒子（ｐ）の濃度が、金属イオンの全モル数で表現して２μｍｏｌＬ−１〜４ｍｏｌＬ−１である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. １つもしくはそれ以上の薬学的に許容可能なビヒクルおよび／または添加物を含む、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
  31. 無菌的である、請求項３０に記載の組成物。
  32. 細胞を標識するための、請求項２〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
  33. 幹細胞を標識するための、請求項３２に記載の組成物。
  34. 請求項１〜３１のいずれか一項に記載の組成物の調製方法であって、
    （ｉ）鉄化合物に基づく酸性磁性粒子（ｐ）の酸性溶液を、十分量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物と接触させ、得られた錯体形成した粒子を回収すること；
    適切である場合
    （ｉｉ）前記磁性粒子（ｐ）の表面で錯体形成した式（Ｉ）の前記化合物の前記Ｘ基のすべてまたはいくつをバイオベクターと結合させること、
    よりなる連続工程を含む、上記方法。
  35. 工程（ｉ）において使用される前記磁性粒子（ｐ）は：
    ａ）酸性磁性流体のコロイド溶液を調製すること；
    ｂ）工程ａ）において得られる溶液を硝酸溶液で処置すること；
    ｃ）工程ｂ）において得られる凝集体を単離すること；および
    ｄ）解膠を行うこと、
    よりなる工程を含む方法に従って得られる、請求項３４に記載の方法。
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Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8263739B2 (en) * 2000-06-02 2012-09-11 Bracco Suisse Sa Compounds for targeting endothelial cells, compositions containing the same and methods for their use
AU2003232887A1 (en) * 2002-02-07 2003-09-02 The General Hospital Corporation STRUCTURE OF INTEGRIN AlphaV-Beta3 EXTRACELLULAR DOMAIN COMPLEXED WITH LIGAND
EP1635878B1 (en) * 2003-06-25 2010-12-29 Guerbet Peptide conjugate for magnetic resonance imaging of matrix metalloproteinases
FR2856689A1 (fr) * 2003-06-25 2004-12-31 Guerbet Sa Composes specifiques a forte relaxivite
US8118754B1 (en) 2007-11-15 2012-02-21 Flynn Edward R Magnetic needle biopsy
US8060179B1 (en) 2006-11-16 2011-11-15 Scientific Nanomedicine, Inc. Biomagnetic detection and treatment of Alzheimer's Disease
US20050251233A1 (en) * 2004-05-07 2005-11-10 John Kanzius System and method for RF-induced hyperthermia
US7627381B2 (en) * 2004-05-07 2009-12-01 Therm Med, Llc Systems and methods for combined RF-induced hyperthermia and radioimmunotherapy
US7510555B2 (en) * 2004-05-07 2009-03-31 Therm Med, Llc Enhanced systems and methods for RF-induced hyperthermia
US20070250139A1 (en) * 2004-05-07 2007-10-25 John Kanzius Enhanced systems and methods for RF-induced hyperthermia II
CA2570916C (en) 2004-06-16 2013-06-11 Tap Pharmaceutical Products, Inc. Pulsed release dosage form of a ppi
US9964469B2 (en) 2005-02-28 2018-05-08 Imagion Biosystems, Inc. Magnetic needle separation and optical monitoring
US7598199B2 (en) * 2005-05-10 2009-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Catalytic nanoparticles for nerve-agent destruction
US8986650B2 (en) 2005-10-07 2015-03-24 Guerbet Complex folate-NOTA-Ga68
EP1940841B9 (fr) 2005-10-07 2017-04-19 Guerbet Composes comprenant une partie de reconnaissance d'une cible biologique, couplee a une partie de signal capable de complexer le gallium
JP5147699B2 (ja) * 2005-12-20 2013-02-20 富士フイルム株式会社 タンパク質ナノ粒子およびその使用
FR2904784B1 (fr) * 2006-08-10 2010-09-03 Surfactis Technologies Procede de recouvrement de surfaces metalliques et minerales par de monocouches autoassemblees de composes bisphosphoniques et leurs utilisations
US8447379B2 (en) 2006-11-16 2013-05-21 Senior Scientific, LLC Detection, measurement, and imaging of cells such as cancer and other biologic substances using targeted nanoparticles and magnetic properties thereof
FR2913886B1 (fr) * 2007-03-22 2012-03-02 Guerbet Sa Utilisation de nanoparticules metalliques dans le diagnostique de la maladie d'alzheimer
FR2914303A1 (fr) 2007-03-28 2008-10-03 Guerbet Sa Composes pour le diagnostic de l'apoptose.
FR2914304B1 (fr) 2007-03-28 2012-11-16 Guerbet Sa Composes pour le diagnostic de maladies liees a l'expression de vcam.
FR2921838A1 (fr) * 2007-10-05 2009-04-10 Guerbet Sa Nouveau procede de preparation de nanoparticules recouvertes d'une couche stabilisatrice gem-bisphosphonate couplee a des ligands de biodistribution hydrophile
FR2921837B1 (fr) * 2007-10-05 2015-07-31 Guerbet Sa Nouveau procede de preparation de nanoparticules recouvertes d'une couche stabilisatrice organique couplee a des ligands de ciblage
JP2011515535A (ja) * 2008-03-17 2011-05-19 キャボット コーポレイション リン酸塩遊離が低減した改質顔料、ならびにそれからの分散体およびインクジェットインク組成物
US8057976B2 (en) * 2008-08-21 2011-11-15 Empire Technology Development Llc Method for producing toner
US9205155B2 (en) 2009-10-30 2015-12-08 General Electric Company Treating water insoluble nanoparticles with hydrophilic alpha-hydroxyphosphonic acid conjugates, the so modified nanoparticles and their use as contrast agents
US10194825B2 (en) 2009-11-06 2019-02-05 Imagion Biosystems Inc. Methods and apparatuses for the localization and treatment of disease such as cancer
CA2780148C (en) 2009-11-06 2017-02-28 Scientific Nanomedicine, Inc. Detection, measurement, and imaging of cells such as cancer and other biologic substances using targeted nanoparticles and magnetic properties thereof
WO2012009852A1 (en) * 2010-07-21 2012-01-26 Rhodia (China) Co., Ltd. Method of coating an inorganic substrate with a stable organic layer
KR101805873B1 (ko) * 2011-08-03 2018-01-10 한화케미칼 주식회사 단당류 인산 또는 그 유도체로 표면이 개질된 친수성 나노입자, 그의 콜로이드 용액 및 그 용도
IT1401882B1 (it) 2010-10-01 2013-08-28 Rosa De Nanoparticelle autoassemblanti per il rilascio di bifosfonati nel trattamento di tumori.
FR2968562B1 (fr) 2010-12-14 2013-01-11 Guerbet Sa Composes pour le diagnostic de maladies liees a l'expression de muc5ac
BR112013013929A2 (pt) * 2010-12-15 2016-09-13 Gen Electric composição de nanopartícula, e, processos para fabricar uma composição de nanopartícula e de formação de imagem de diagnóstico
US8895068B2 (en) 2010-12-15 2014-11-25 General Electric Company Nanoparticle composition and associated methods thereof
US8889103B2 (en) 2010-12-15 2014-11-18 General Electric Company Diagnostic agent composition and associated methods thereof
EP2572736A1 (en) * 2011-09-23 2013-03-27 Spago Imaging AB Nanostructures comprising manganese
FR2990433A1 (fr) * 2012-05-10 2013-11-15 Surfactis Technologies Compositions catanioniques de recouvrement de surface par des molecules phosphoniques et amines
CN105524492A (zh) * 2016-01-12 2016-04-27 四川大学 一种简易低成本的磁性微粒表面活性基团引入方法
US11020425B2 (en) * 2016-12-19 2021-06-01 The Chinese University Of Hong Kong Injectable hydrogels that promote mineralization and afford sustained release of bioactive ions
CN111840547B (zh) * 2020-06-15 2023-04-28 山西振东泰盛制药有限公司 注射用培美曲塞磁性自组装纳米复合颗粒制备方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4440646A (en) * 1965-08-24 1984-04-03 Plains Chemical Development Co. Chelation
GB1435295A (en) * 1973-11-19 1976-05-12 Research Corp Bone seeking technetium-99m complex
US4120890A (en) * 1976-01-21 1978-10-17 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Diphosphonoalkane carboxylic acids, process of preparation and methods of use
FR2461521A1 (fr) * 1979-07-20 1981-02-06 Anvar Fluides magnetiques, notamment ferrofluides, et procede pour leur obtention
FR2680507B1 (fr) * 1991-08-23 1993-10-08 Adir Cie Nouvelles naphtylethylurees et naphtylethylthiourees, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
JP3436760B2 (ja) * 1994-07-27 2003-08-18 ハーバート ピルグリム 超常磁性粒子
JPH08268987A (ja) * 1995-02-24 1996-10-15 Bristol Myers Squibb Co テトラリニル−，及びインダニル−エチルアミド誘導体
FR2736197B1 (fr) * 1995-06-29 1997-09-12 Univ Paris Curie Nanoparticules magnetiques couplees a de l'annexine et leur utilisation
US6365362B1 (en) * 1998-02-12 2002-04-02 Immunivest Corporation Methods and reagents for the rapid and efficient isolation of circulating cancer cells
US6514481B1 (en) * 1999-11-22 2003-02-04 The Research Foundation Of State University Of New York Magnetic nanoparticles for selective therapy
DE10016559A1 (de) * 2000-04-03 2001-10-18 Eucro Europe Contract Res Gmbh System für den Transport von Aktivstoffen in einem biologischen System
US6517814B2 (en) * 2001-01-09 2003-02-11 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Macrocyclic chelants useful for metallopharmaceuticals
US20020122806A1 (en) * 2001-03-05 2002-09-05 Chinnaiyan Arul M. Compositions and methods for in situ and in vivo imaging of cells and tissues

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