JP4634779B2 - 培養装置 - Google Patents
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Description
本発明の培養装置の第2の特徴は、前記電磁弁は多連型電磁弁であることにある。
本発明の培養装置の第3の特徴は、前記経路がチューブであり、前記開閉手段がピンチ弁であることにある。
培養器手段の配置された外箱手段内は、ガス濃度調整手段によって二酸化炭素ボンベなどのガスボンベから供給されるガス濃度が調整されている。このように培養においては、二酸化炭素ガスなどの使用は必須である。そこで、このガスボンベのガス圧を動力源として利用して、薬品供給手段や廃液排出手段に用いられているエアシリンダなどの稼働部を駆動するようにしたものである。
培養装置127の動作開始であり、操作者が操作卓123の操作器126のスタートスイッチを押すことによってスタートする処理である。また、前述した図4に示すように複数の培養装置と制御監視装置がコンピュータネットワークに接続されている場合は、制御監視装置側でスタートスイッチを押すように構成してもよい。なお、この時点では既に培養器38や、各タンク67,68,69,70,71には薬品が培養装置127にセットされている。
ピンチ弁72が開放され、しごきポンプ37が動作して、培地タンク67内の培地がチューブ21を通って送液される。送液される培地は、矢印J1、矢印Jの経路を通り培養器38に流れ込み、培養器38で培地17となる。予め設定された量の培地が注入されたら、しごきポンプ37の動作を停止し、ピンチ弁72は閉じる。ここでの培地量の設定値は予めメモリ124に記憶されている。なお、この実施の形態では後述するポンプ101も同様であるが、液料を図る手段を設けずに、ポンプの動作時間において液料を決定している。
操作者が操作器の該当するスイッチを操作すると、シャッターモータ50が動作し、シャッター51が矢印A方向(上昇方向)にスライドする。シャッター51が所定量上昇した後、容器移動モータ63が動作し、ホルダーが矢印B方向(右方向)に移動する。この移動後、操作者は培養前細胞を入れた容器52をホルダー62に置く。その後、容器移動モータ63は上記と逆方向に回転し、ホルダー62は矢印B方向(左方向)に移動する。シャッターモータ50が回転し、シャッター51は矢印A方向(下降方向)に移動して、閉じる。
容器移動モータ63が小刻みに正逆回転し、容器52内の細胞を懸濁する。詳細は述べないが、ホルダー62内部に容器52を振動させるアクチュエータを備えても良い。この動作と前後して、ピペッタ回転動モータ57が動作し、ピペッタアーム55が回転する。次にピペッタ上下動モータ59が動作し、ピペッタアーム55が下降して、容器52内に針53が挿入する。ピンチ弁66が開放し、しごきポンプ37が動作する。これにより、容器52内の培養前細胞は吸いだされ、細胞は矢印J2→J方向へチューブ56を通って、送液され、チューブ21を通り、培養器38に注入される。この注入終了後、ピンチ弁66は閉じ、またしごきポンプ37は停止する。
モータ28が回転し、培養器38に注入した細胞を均一化・播種のため懸濁する。細胞の均一化・播種は、過度の細胞密度は細胞の変質を招く恐れがあるため、培養を効率高く行うために必要な処理である。なお、培養前細胞の注入が確認された後にモータ28が回転を始めるのではなく、培養細胞が接着依存性細胞(固形物を認識してこの固形物に接着することにより培養する細胞)の場合、培養前細胞が培養器38内部に注入されている最中に、モータ28を回転させた方が良い。なお、ステップS55の次にはステップS56に進む場合とステップS58にジャンプする場合がある。ここではステップS58にジャンプする場合で説明する。
このステップでは、培養前細胞は培養に入ることになるが、培養中は、温度センサ106及びヒータ108によりフレーム30内は培養に適した温度(37℃前後)に制御されており、またファン65によってフレーム30内部の大気も攪拌されて、温度ムラがないようにしてある。
このステップは、ステップS58を実行する前に適宜に実行できるステップであり、ピンチ弁24と、ピンチ弁104が開放され、しごきポンプ101が動作して、培養器38内の培地17がチューブ23を通って、廃液タンク102に培地が送液(排出)される。送液(排出)完了後、しごきポンプ101が停止し、ピンチ弁24と、ピンチ弁104は閉じる。
このステップも同様にステップ6を実行する前に適宜に実行できるステップであり、ピンチ弁72が開放し、しごきポンプ37を動作させ、培養器38内に新しい培地が注入される。この培地の注入後、ピンチ弁72は閉じ、しごきポンプ37は停止する。
上記培養中において、予め時間を決めておいてもよいし、操作卓にスイッチを設けて、術者が動作を指示するようにしてもよいが、次のように画像を利用すると細胞の品質安定化に寄与する。すなわち、適宜に光源34が発光し、CCDカメラ31が培養器38内で培養されている細胞の画像を取得する。培養初期段階の細胞は多くの箇所で密度が非常に低く、部分的に密な状態(コロニー)を形成する場合が多い。そのコロニーを培養器駆動モータ28の動作によりCCDカメラ31が捉え、計測する。このコロニー部分の細胞がコンフルエントに到達していなければ、引き続き培養される。コンフルエントか否かの判断は、後述するステップS60の細胞数カウントと同じでよい。その時必要であれば、ステップS56とす57の処理を行なってからステップS58に進む。また、コンフルエントに到達していれば、継代のタイミングということになり、次のステップS60に進む。
CCDカメラ31からの情報を元に細胞数をカウント又は演算する。その結果として、細胞数が予め操作者が設定した値に達していれば、ステップS68に進み、目標細胞数に達していなければ、ステップS61に進む。
ステップS61〜ステップS67の処理は、細胞数が予め操作者が設定した値に達していなかった場合に実行される処理である。まず、このステップでは、ピンチ弁24とピンチ弁104が開放され、しごきポンプ101が動作して、培養器38内の培地17がチューブ23を通って、廃液タンク102に培地が送液(排出)される。送液(排出)完了後に、しごきポンプ101が停止し、ピンチ弁24と、ピンチ弁104は閉じる。
ピンチ弁105が開放し、しごきポンプ37が動作して、緩衝液タンク68から緩衝液が培養器38に注入される。注入後、ピンチ弁105が閉じ、しごきポンプ37が停止する。培養器駆動モータ28が回転し、培養器38を回動させ緩衝液を培養器底面に行き渡らせる。その後、ピンチ弁24が開放し、しごきポンプ101が動作して、廃液タンク102に培養器38内の緩衝液を送液する。
ピンチ弁73が開放され、しごきポンプ37が動作し、細胞剥離剤タンク69から細胞剥離剤が培養器38に注入される。注入後、ピンチ弁73が閉じ、しごきポンプ37が停止する。培養器駆動モータ28が回転し、細胞剥離剤を培養器底面に行き渡らせる。
ここでは中和剤を培地としている。上述の細胞剥離剤としては様々なものが利用されているが、ここでは培地には血清が含まれるものとして、この血清により中和される細胞剥離剤を想定している。従って、動作としては、上述のステップS52と同様で、ピンチ弁74を開放してタンク70から中和剤が注入される。
ステップS55と同一の処理が行なわれる。すなわち、モータ28が回転し、培養器38に注入した細胞を均一化・播種のため懸濁する。そして、所定時間経過後すなわち細胞が接着した後に、次のステップS66に進む。
ピンチ弁24とピンチ弁104が開放され、しごきポンプ101が動102に培地が送液(排出)される。送液(排出)完了後に、しごきポンプ101が停止し、ピンチ弁24と、ピンチ弁104が閉じる。
ステップS52と同一の処理が行なわれる。すなわち、ピンチ弁72が開放され、しごきポンプ37が動作して、培地タンク67内の培地がチューブ21を通って送液される。送液される培地は、矢印J1、矢印Jの経路を通り培養器38に流れ込み、培養器38で培地17となる。予め設定された量の培地が注入されたら、しごきポンプ37の動作を停止し、ピンチ弁72は閉じる。
ステップS61と同一の処理が行なわれる。すなわち、ピンチ弁24とピンチ弁104が開放され、しごきポンプ101が動作して、培養器38内の培地17がチューブ23を通って、廃液タンク102に培地が送液(排出)される。送液(排出)完了後に、しごきポンプ101が停止し、ピンチ弁24と、ピンチ弁104は閉じる。
ステップS62と同一の処理が行なわれる。すなわち、ピンチ弁105が開放し、しごきポンプ37が動作して、緩衝液タンク68から緩衝液が培養器38に注入される。注入後、ピンチ弁105が閉じ、しごきポンプ37が停止する。培養器駆動モータ28が回転し、培養器38を回動させ緩衝液を培養器底面に行き渡らせる。その後、ピンチ弁24が開放し、しごきポンプ101が動作して、廃液タンク102に培養器38内の緩衝液を送液する。
ステップS63と同一の処理が行なわれる。すなわち、ピンチ弁73が開放され、しごきポンプ37が動作し、細胞剥離剤タンク69から細胞剥離剤が培養器38に注入される。注入後、ピンチ弁73が閉じ、しごきポンプ37が停止する。培養器駆動モータ28が回転し、細胞剥離剤を培養器底面に行き渡らせる。
ステップS64と同一の処理が行なわれる。すなわち、ピンチ弁74を開放してタンク70から中和剤が注入される。そして、所定時間経過後すなわち細胞が接着した後に、次のステップS72に進む。
ステップ66と同一の処理が行なわれる。すなわち、ピンチ弁24とピンチ弁104が開放され、しごきポンプ101が動102に培地が送液(排出)される。送液(排出)完了後に、しごきポンプ101が停止し、ピンチ弁24と、ピンチ弁104が閉じる。
ピペッタ回転動モータ88が動作し、ピペッタアーム85を回転させる。次にピペッタ上下動モータ90が動作し、ピペターアーム85が下降して、容器84内に針83が挿入される。ピンチ弁24、103が開放し、しごきポンプ101が動作する。これにより、培養器38内の培養後細胞は吸いだされ、細胞は矢印P1方向にチューブ23を通って、送液(移送)される。そして、チューブ86を通り、細胞保管容器84に注入される。
シャッターモータ81が動作し、シャッター82が上昇する。所定量上昇後、容器移動モータ94が動作し、ホルダーが矢印G方向に移動する。これによって、操作者は培養された細胞が入った細胞保管容器84を取得できる。
操作者は培養前と比較し、コンタミネーションのない純粋な培養細胞が入った容器84を取得することができる。なお、上記ステップS53にて、容器52に入れた培養前細胞が骨髄液に含まれる細胞である場合、目的とする細胞以外の不要な細胞(血液関係の細胞)を取り除くために、ステップS62,ステップS63,ステップS64,ステップS66をステップS56とステップS57との間に入れるとよい。
(1)初回の培養:培地、緩衝液、細胞剥離剤、中和剤を排出する時にピンチ弁186,187,188を開放する。
(2)継代1回後の培養:培地、緩衝液、細胞剥離剤、中和剤を注入する時にピンチ弁186を開放する。また、培地、緩衝液、細胞剥離剤、中和剤を排出する時にはピンチ弁187,188を開閉する。
(3)継代2回後の培養:培地、緩衝液、細胞剥離剤、中和剤を注入する時にピンチ弁186,187を開放する。また、培地、緩衝液、細胞剥離剤、中和剤を排出する時にはピンチ弁188を開閉する。
2…可撓性管部材
3…ポンプ
4…リザーブタンク
5…可撓性管部材
6…ポンプ
7…廃液タンク
8…駆動手段
9…カメラ
10…光源
11…システムコントローラ
15…本体
16…ガス透過膜
17…培地
18…チューブ接続部材
19…チューブ接続部材
20…堰
21…供給チューブ
22…ロータ
23…廃液チューブ
24…ピンチ弁
25…ケーブルドラム
26…巻き取りドラム
27…カムフォロア
28…ピニオン
29…培養器駆動モータ
30…保温箱(フレーム)
31…CCDカメラ
32…観察窓
33…フィルター
34…光源
35…ガイド部材
36…チューブ固定部材
37…しごきポンプ
38…培養器
381…傾斜部
39…針
40…エアーフィルター
41…針
42…エアーフィルター
50…シャッターモータ
51…シャッター
52…培養前細胞を貯留する容器
53…針
56…細胞注入チューブ
55…ピペッターアーム
54…軸
57…ピペッタ回転動モータ
58…回転部材
59…ピペッタ上下動モータ
60…プーリ
62…ホルダー部
61…ベルト
63…モータ
65…ファン
66a,66b…ピンチ弁
67…培地タンク
68…緩衝液タンク
69,70,71…細胞剥離剤タンク
72,105,73,74,75…ピンチ弁
78,79…空気流入口
80…断熱箱
81…シャッターモータ
82…シャッター
83…針
84…培養後細胞を貯留する容器
85…ピペッタアーム
87…軸
88…ピペッタ回転動モータ
89…回転部材
90…ピペッタ上下動モータ
91…プーリ
92…ベルト
93…ホルダー部
94…モータ
95…送りねじ
96,97…スタンド
98…廃液回収箱
99…ガイド部材
100…チューブ固定部材
101…しごきポンプ
102…廃液タンク
103…ピンチ弁
104…ピンチ弁
106…温度センサ
107…継ぎ手
108…ヒータ
120…I/O
121…バス
122…CPU
123…操作卓
124…メモリ
125…コンピュータネットワークドライバ
126…操作器
127,128,129…培養装置
130…制御監視装置
167,168,169…培養器
170a〜170d…培養器
171…チューブ
174a〜174d…チューブ接続部材
175a〜175d…チューブ接続部材
182…供給チューブ
183,184…接続チューブ
185…廃液チューブ
186,187,188…ピンチ弁
191,192…培養補助板
195…培養器本体
197…供給チューブ
199…蓋
201,202…培養補助板
250…画像取り込みボード
278,279,282,283,284,285…鏡
280…CCDカメラ
281…光源
286…フィルター
288…ユニット
300…培養器本体
301…蓋
302…供給用チューブ接続部材
307,308,309,310…磁石
303,304,305,306…球状部材
314…供給用チューブ接続部材
315…棒状部材
320…供給チューブ
321,327…栓
322,328…針
323…供給チューブ
324…シリンジ
325…培養器
326…廃液チューブ
329…廃液チューブ
381…傾斜部
140…培養器
141…第1ポート
142…第2ポート
143…第3ポート
141b…廃液チューブ
144,145…しごきポンプ
142b…供給チューブ
142c…供給チューブ
142d…補助供給チューブ
146,147…しごきポンプ
146a,147a…ピンチ弁
143a…チューブ
143b…エアーフィルター
148…保持リング
149…フック
150…レバー
151…チルトモータ
153…ロータ
160…保温箱(インキュベータ)
170…加温バッグ
172…ピンチ弁
173…エアーフィルター
177…ペーハー測定部
29a…培養器駆動モータ
109…ペルチェ素子
110…放熱ヒートシンク
111…吸熱ヒートシンク
201〜204…ヒータ
205,206…放熱板
205…二酸化炭素センサ
Claims (3)
- 内部で培養を行う培養器手段と、
前記培養器手段を内部に有し、前記培養器手段を培養に適した状態に設定する保温箱と、
前記保温箱内の前記培養器手段に前記保温箱の外部から薬品を供給する薬品供給手段と、
前記保温箱内の前記培養器手段から不要な廃液を前記保温箱の外側に排出する廃液排出手段と、を備えた培養装置であって、
ガスボンベから前記保温箱内にガスを供給し、前記保温箱内のガス濃度を調整するガス濃度調整手段と、
前記薬品供給手段の供給経路と、
前記廃液排出手段の排出経路と、
前記ガスボンベのガスを、前記供給経路及び前記排出経路のうち少なくとも一つに導く、レギュレータおよび電磁弁と、
前記ガスにより前記供給経路及び前記排出経路のうち少なくとも一つの開路および閉路を行う開閉手段と、
を有することを特徴とする培養装置。 - 前記電磁弁は多連型電磁弁であることを特徴とする請求項1記載の培養装置。
- 前記経路はチューブであり、前記開閉手段はピンチ弁であることを特徴とする請求項1または2記載の培養装置。
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