JP4503334B2 - 免疫測定に供する検体浮遊液調製用媒体組成物及びそれを用いる免疫測定方法 - Google Patents
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(1)金コロイド抗体の調製
10mLの金コロイドを取り、100mM炭酸カリウムでpHを7.0に調製した。2mMホウ酸溶液で透析、遠心分離し精製した抗A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を2mMホウ酸溶液で100μg/mLの濃度になるように調製した。調製した抗A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体の最終濃度が4μg/mLとなる量を十分撹拌させながら金コロイドに加えた。5分後10%BSAを1mL加え、穏やかに10分間ローテーターで撹拌した。全量を遠心管に移し、14000rpm、30分、4℃で遠心する。遠心後上清を吸引廃棄し、沈殿している金コロイドと抗A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体の感作されたものに、最終濃度が20mMトリス塩酸緩衝液、1%BSA、150mM塩化ナトリウムを含む溶液1mLで浮遊した。
前項で作製した金コロイド抗体を陽圧噴霧装置(BioDot社製、BioJet)を用いて8.0OD520、10μL/cmの速度、及び量で10mmx300mmのポリスチレン不織布に噴霧する。次いで減圧装置内で1時間減圧乾燥し、乾燥金コロイド抗体パッドとした。使用時には7mm間隔で裁断し、用いた。
ニトロセルロースフィルターへの抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体(マウス)を以下のとおりに固定化した。プロテインAカラムでアフィニティー精製した抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体(マウス)を用意した。抗体が浮遊されている緩衝液をSephadexG-25ゲル濾過カラムを用いて0.1%トレハロース加10mMクエン酸緩衝液(pH4.0)に置き換えた。280nmでの吸光度が1.0となるように0.1%トレハロース加10mMクエン酸緩衝液(pH4.0)で希釈し、適量を(例えばフロースルー検出(診断)装置の場合10μL/装置(デバイス)となるように)検出装置に装着したニトロセルロース上に滴下、次いで45℃、40分間静置、乾燥した。
A型インフルエンザウイルスを含むと思われるサンプル(吸引カテーテルにより採取した鼻腔吸引液から綿棒で検体を採取)を以下の検体浮遊液調製用媒体組成物に浮遊させた。
従来品;1w/v%BSA、20mM MES緩衝液(pH6.0)、50mM NaCl、4w/v%TritonX-100(商品名)、2w/v%アルギニン(比較例1)、
(i)1w/v%BSA、10mM MES(pH6.0)、50mM NaCl、4w/v%TritonX-100(商品名)、3w/v%グリシンエチルエステル(実施例1)
(ii)1w/v%BSA、10mM MES(pH6.0)、50mM NaCl、4w/v%TritonX-100(商品名)、3w/v%グリシンエチルエステル、0.25v/v%ドデシルトリメチルアンモニウムクロライド(実施例2)
(iii)1w/v%BSA、10mM MES(pH6.0)、50mM NaCl、4w/v%TritonX-100(商品名)、3w/v%グリシンエチルエステル、0.7v/v%ラウリルジメチルアミンオキサイド(実施例3)
(iv) 1w/v%BSA、10mM MES(pH6.0)、50mM NaCl、3w/v%NonidetP-40、3w/v%グリシンエチルエステル(実施例4)
その溶液500μLと金コロイド抗体8.0OD520、50μLを混合し反応させた。一定時間反応後、フィルター(例えば、0.22μm)で濾過した後、検出装置(デバイス)へ全量滴下した。液が膜部材に全て吸収された後、抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を吸着させた部分の膜部材が金コロイドの色(例えば、赤色〜赤褐色)に着色していれば、サンプル中にA型インフルエンザウイルスが存在していると確認される。色調の変化がなく膜部材の色のままであれば、サンプル中にA型インフルエンザウイルスが存在していないことになる。
(1)金コロイド抗体の調製及び金コロイド抗体の乾燥化
上記実施例1〜4、比較例1と同様にして行なった。
A型インフルエンザウイルスを検出する膜部材上に抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体をごく少量(約2μL)滴下し、一定時間(10分〜60分)放置し膜部材に吸着させた。
A型インフルエンザウイルスを含むと思われるサンプル(吸引カテーテルにより採取した鼻腔吸引液から綿棒で検体を採取)を実施例1〜4及び比較例1と同じ組成物に浮遊させた(それぞれ実施例5〜8、比較例2)。その溶液200μLと金コロイド抗体1.0OD520、30μLを混合し反応させた。一定時間反応後フィルター(例えば、0.22μm)で濾過した後、パッドへ全量滴下した。液が膜部材を展開し、抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を吸着させた部分の膜部材が金コロイドの色(例えば、赤色〜赤褐色)に着色していれば、サンプル中にA型インフルエンザウイルスが存在していたと確認される。色調の変化がなく膜部材の色のままであれば、サンプル中にA型インフルエンザウイルスが存在していないことになる。
Claims (13)
- グリシンメチルエステル、グリシンエチルエステル、グリシンプロピルエステル、グリシンブチルエステル又はグリシンアミドであるグリシン誘導体を含む、免疫測定に供する検体浮遊液調製用媒体組成物。
- 非イオン性界面活性剤及び/又はイオン性界面活性剤をさらに含む請求項1記載の組成物。
- 前記非イオン性界面活性剤がHLB値10以上のポリオキシエチレン系界面活性剤である請求項2記載の組成物。
- 前記ポリオキシエチレン系界面活性剤のHLB値が13以上である請求項3記載の組成物。
- 前記イオン性界面活性剤が第四級アンモニウム塩界面活性剤である請求項2ないし4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記イオン性界面活性剤がアルキルベタイン系界面活性剤である請求項2ないし4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記イオン性界面活性剤がアルキルアミンオキサイド系界面活性剤である請求項2ないし4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記グリシン誘導体を組成物全体の重量に対し0.01から10w/v%の範囲で含有する請求項1ないし7のいずれか1項に記載の組成物。
- 非イオン性界面活性剤を含有し、該非イオン性界面活性剤を組成物全体の重量に対し0.01w/v%から10w/v%の範囲で含有する請求項1ないし8のいずれか1項に記載の免疫測定用検体浮遊液組成物。
- イオン性界面活性剤を含有し、該イオン性界面活性剤を組成物全体の重量に対し0.01w/v%から10w/v%の範囲で含有する請求項1ないし9のいずれか1項に記載の免疫測定用検体浮遊液組成物。
- 請求項1ないし10のいずれか1項に記載の組成物を使用して行なうことを特徴とする免疫測定方法。
- イムノクロマトグラフィー法である請求項11記載の方法。
- メンブレンを用いたフロースルーアッセイ法である請求項11記載の方法。
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