JP4369225B2

JP4369225B2 - バリオリン（ｖａｒｉｏｌｉｎ）誘導体および制癌剤としてのその利用

Info

Publication number: JP4369225B2
Application number: JP2003512229A
Authority: JP
Inventors: モデスト・レムイナン; ファン・ホセ・ゴンザレス; カルロス・デル・ポゾ; アンドレス・フランチェス; カルメン・クエヴァス; サイモン・ムント; イグナシオ・マンサナレス; リーガン・ジェームス・アンダーソン; ジョナサン・チャールズ・モリス
Original assignee: ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ
Priority date: 2001-07-11
Filing date: 2002-07-11
Publication date: 2009-11-18
Anticipated expiration: 2022-07-11
Also published as: GB0116966D0; NZ530556A; CN1553906B; RU2004103857A; WO2003006457A1; PL366894A1; NO20040113L; US20090197901A1; EP1404668A1; CA2453418A1; HUP0402658A2; IL159792A0; ATE480533T1; AU2002317329B2; IL159792A; ATE396987T1; DE60226869D1; US7495000B2; US7772241B2; ES2354991T3

Description

本発明は、抗腫瘍性化合物、特にバリオリンBおよびデオキシバリオリン(deoxyvariolin)Bを含めた新しい抗腫瘍性バリオリン化合物類似体に関する。

バリオリンは、希少で入手が困難な南極の海綿Kirkpatrickia varialosaから単離される一群の海生アルカロイドであり、バリオリンB(1)がその典型例である。バリオリンはすべて、バリオリンB(1)、バリオリンD(3)およびデオキシバリオリンB(4)のように、C_５に複素環式芳香族環またはエステル基が結合した縮合ピリド[3'.2':4.5]ピロロ[1.2-c]ピリミジン核(2)を含む。

バリオリンは、抗腫瘍活性および他の有用な諸特性を有することが明らかにされている。これらの化合物および関係化合物の完全な構造は、N. B. Perry等、Tetrahedron 1994、50、3987〜3992、およびG. Trimurtulu等、Tetrahedron 1994、50、3993〜4000に記載されている。

2-アミノピリミジンアルカロイドのバリオリンおよびメリディアニン(meridianin)の合成研究は、Tetrahedron Lett. 2000、41、4777〜4780の主題である。M. Alvarez等、Tetrahedron Lett. 2001、42、315〜317には、7-アザインドールから出発するデオキシバリオリンBの合成について記載されている。バリオリンの全合成の研究は、Tetrahedron Lett. 2001、42、311〜313に記載されている。バリオリンBの最初の全合成は、R. J. Anderson等 Tetrahedron Lett. 2001、42、8697〜8699に記載された。その後、P. Molina等 Tetrahedron Lett. 2002、43、1005〜1007にも、タンデム型アザ-ウィッティヒ(tandem aza-Wittig)/カルボジイミド環化によってなされたバリオリンBの合成が記載された。

2002年1月17日に公開された国際公開第0204447号には、簡単なモノ複素環式芳香族(monoheteroaromatic)出発物質からのバリオリンB(1)およびデオキシバリオリンB(4)の調製方法、ならびに新しいバリオリン誘導体の提供方法が記載されている。

2002年2月14日に公開された国際公開第0212240号は、バリオリンB誘導体に関する。
N. B. Perry等、Tetrahedron 1994、50、3987〜3992 G. Trimurtulu等、Tetrahedron 1994、50、3993〜4000 Tetrahedron Lett. 2000、41、4777〜4780 M. Alvarez等、Tetrahedron Lett. 2001、42、315〜317 Tetrahedron Lett. 2001、42、311〜313 R. J. Anderson等 Tetrahedron Lett. 2001、42、8697〜8699 P. Molina等 Tetrahedron Lett. 2002、43、1005〜1007 2002年1月17日に公開された国際公開第0204447号 2002年2月14日に公開された国際公開第0212240号 A. J. Majeed等 Tetrahedron 1989、45、993 Bergeron、1984 Schroeder、1981 Philip Skehan等(1990)、New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening、J. Natl. Cancer Inst.、82:1107〜1112 Faircloth、1988 Mosmann、1983

本発明は、バリオリン化合物の縮合ピリドピロロピリミジム(pyrimidime)環構造を有する一般式(5)の化合物を対象とする。

式中、X_２、R_１、R_２、R_３、R_６、R_７およびR_１２によって定義される置換基は各々独立に、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、カルボキシアルキル、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択され、R'基の各々は独立に、H、OH、SH、NO_２、NH_２、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)CH_３、CO_２H、CO_２CH_３、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、アリール、アラルキルおよび複素環式芳香族からなる群から選択され、R_１とR_２、R_２とR_３、R_３とR_１２、R_１２とR_６、またはR_６とR_７の各基の対は炭素環式環構造または複素環式環構造に結合していてもよい。

関係する態様において、本発明によって式(5a)の化合物が提供される。

式中、X_１、X_２、R_１、R_２、R_３、R_４、R_５、R_６およびR_７によって定義される置換基はそれぞれ独立に、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、カルボキシアルキル; C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択され、R'基の各々は独立に、H、OH、SH、NO_２、NH_２、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)CH_３、CO_２H、CO_２CH_３、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、アリール、アラルキルおよび複素環式芳香族からなる群から選択され、R_１とR_２、R_４とR_５、またはR_６とR_７の各基の対は、炭素環式環構造または複素環式環構造に結合していてもよい。

本発明の化合物における適切なハロゲン置換基は、F、Cl、BrおよびIなどである。

アルキル基は、好ましくは1〜約12個の炭素原子、より好ましくは1〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは1〜約6個の炭素原子、最も好ましくは1、2、3または4個の炭素原子を有する。メチル、エチル、およびイソプロピルを含めたプロピルが、本発明の化合物における特に好ましいアルキル基である。本明細書で使用するアルキルという用語は、特に修飾しない限り、環式基および非環式基の両方を指すが、環式基は環を構成する少なくとも3つの炭素を含む。

本発明の化合物における好ましいアルケニル基およびアルキニル基は、1つまたは複数の不飽和結合、および2〜約12個の炭素原子、より好ましくは2〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは2〜約6個の炭素原子、さらにより好ましくは2、3または4個の炭素原子を有する。

本明細書で使用するアルケニルおよびアルキニルという用語は、環式基および非環式基の両方を指すが、直鎖または分枝非環式基が一般により好ましい。

本発明の化合物における好ましいアルコキシ基としては、1つまたは複数の酸素結合、および1〜約12個の炭素原子、より好ましくは1〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは1〜約6個の炭素原子、最も好ましくは1、2、3または4個の炭素原子を有する基が挙げられる。

本発明の化合物における好ましいアルキルチオ基は、1つまたは複数のチオエーテル結合、および1〜約12個の炭素原子、より好ましくは1〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは1〜約6個の炭素原子を有する。1、2、3または4個の炭素原子を有するアルキルチオ基が特に好ましい。

本発明の化合物における好ましいアルキルスルフィニル基としては、1つまたは複数のスルホキシド(SO)基および1〜約12個の炭素原子、より好ましくは1〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは1〜約6個の炭素原子を有する基が挙げられる。1、2、3または4個の炭素原子を有するアルキルスルフィニル基が特に好ましい。

本発明の化合物における好ましいアルキルスルホニル基としては、1つまたは複数のスルホニル(SO2)基および1〜約12個の炭素原子、より好ましくは1〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは1〜約6個の炭素原子を有する基が挙げられる。1、2、3または4個の炭素原子を有するアルキルスルホニル基が特に好ましい。

好ましいアミノアルキル基としては、1つまたは複数の第一級、第二級および/または第三級アミン基、および1〜約12個の炭素原子、より好ましくは1〜約8個の炭素原子、さらにより好ましくは1〜約6個の炭素原子、さらにより好ましくは1、2、3または4個の炭素原子を有する基が挙げられる。第二級および第三級アミン基は、一般に、第一級アミン成分よりも好ましい。

適切なカルボキシアルキル基としては、モノおよびジカルボキシ置換アルキル基が挙げられる。このカルボキシ基は、一般に、COOR'の形をしており、特にR'は水素またはアルキル、好ましくは水素またはメチルである。

適切な複素環式基には、複素環式芳香族基およびヘテロ脂環式(heteroalicyclic)基が含まれる。本発明の化合物における適切な複素環式芳香族基には、N原子、O原子またはS原子から選択される1、2または3個のヘテロ原子が含まれ、例えば、8-クマリニルを含めたクマリニル、8-キノリニルを含めたキノリニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジル、フリル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、インドリル、ベンゾフラニルおよびベンゾチアゾールがある。本発明の化合物における適切なヘテロ脂環式基には、N原子、O原子またはS原子から選択される1、2または3個のヘテロ原子が含まれ、例えば、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロピラニル基、ピペリジニル基、モルフォリノ基およびピロリンジニル(pyrrolindinyl)基がある。

本発明の化合物における適切な炭素環式アリール基としては、単環化合物、ならびに離隔したアリール基および/または縮合アリール基を含有する多環化合物を含めた多環化合物が挙げられる。一般的な炭素環式アリール基には、1〜3個の離隔した環または縮合環、および6〜約18個の炭素環原子が含まれる。特に好ましい炭素環式アリール基としては、1つまたは複数のフェニル置換基がハロゲン、シアノ、ニトロ、アルカノイル、スルフィニル、スルホニルなどの基である2-置換フェニル、3-置換フェニル、4-置換フェニル、2.3-置換フェニル、2.4-置換フェニル、2.5-置換フェニル、2.6-置換フェニル、3.4-置換フェニル、3.5-置換フェニル、3.6-置換フェニル、2.3.4-置換フェニル、2.3.5-置換フェニル、2.3.6-置換フェニル、2.4.5-置換フェニル、2.4.6-置換フェニル、3.4.5-置換フェニルなどの置換フェニルを含めたフェニル;1-ナフチルおよび2-ナフチルを含めたナフチル;ビフェニル;フェナントリル;およびアントラシル(anthracyl)が挙げられる。

本明細書における本発明の化合物の置換R'基は、1つまたは複数の可能な位置において、1つまたは複数の適切な基、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード(yodo)などのハロゲン;シアノ;ヒドロキシル;ニトロ;アジド;アシルなどのC1〜6アルカノイル基などのアルカノイル;カルボキサミド;1〜約12個の炭素原子または1〜約6個の炭素原子、より好ましくは1〜3個の炭素原子を有する基を含めたアルキル基;1つまたは複数の不飽和結合、および2〜約12個の炭素または2〜約6個の炭素原子を有する基を含めたアルケニル基およびアルキニル基;1つまたは複数の酸素結合、および1〜約12個の炭素原子または1〜約6個の炭素原子を有する基を含めたアルコキシ基;フェノキシなどのアリールオキシ;1つまたは複数のチオエーテル結合、1〜約12個の炭素原子または1〜約6個の炭素原子を有する成分を含めたアルキルチオ基;1つまたは複数のスルフィニル結合、1〜約12個の炭素原子または1〜約6個の炭素原子を有する成分を含めたアルキルスルフィニル基;1つまたは複数のスルホニル結合、および1〜約12個の炭素原子または1〜約6個の炭素原子を有する成分を含めたアルキルスルホニル基;1つまたは複数のN原子、および1〜約12個の炭素原子または1〜約6個の炭素原子を有する基などのアミノアルキル基;6個以上の炭素を有するカルボサイリック(carbocylic)アリール、特にフェニル(例えば、Rは置換または非置換ビフェニル成分である);ベンジルなどのアラルキルで置換することができる特定の成分を指す。

本発明の範囲から好ましく除外されるのは、既知の化合物であるバリオリンA、バリオリンB、バリオリンD、N(3')メチルテトラヒドロバリオリンBおよびデオキシバリオリンBである。

本発明の化合物は、以下の逆合成に基づいて簡単なモノ複素環式芳香族出発物質から核となるバリオリン骨格が構築される国際公開第0204447号に記載の方法を用いて合成することができる。

選択するモノ複素環式芳香族出発物質(6)および(7)に応じて、本明細書に例示する広範なバリオリン類似体が利用可能なようにこの方法を容易に拡張することができる。

国際公開第0212240号には、バリオリン化合物合成の手引きも提供されている。

したがって、本発明は、本発明の化合物の合成経路も提供する。

これらの化合物の抗腫瘍活性には、白血病、肺癌、大腸癌、腎臓癌、頚部癌、前立腺癌、卵巣癌、すい臓癌、内皮癌、乳癌、肉腫およびメラノーマが含まれる。

したがって、本発明は、癌を発症した哺乳動物、特にヒトを治療する方法であって、患者に治療有効量の本発明の化合物またはその薬剤組成物を投与することを含む方法を提供する。

本発明の別の特に好ましい実施形態は、本発明の化合物を活性成分として含有する、制癌剤として有用な薬剤組成物、ならびにその調製方法である。

薬剤組成物の例としては、適切な組成を有し、経口、局所または非経口で投与される任意の固体(錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤など)または液体(液剤、懸濁液剤または乳剤)が挙げられる

本発明の化合物または組成物の投与は、静脈内注入、経口製剤、腹腔内製剤、静脈内製剤など任意の適切な方法とすることができる。

R_１は、好ましくは水素、アルキルまたはハロゲンであり、より好ましくは水素、メチルまたはクロロである。あるいは、R_１とR_２は、好ましくは縮合環、より好ましくは縮合芳香族環、最も好ましくは縮合ベンゼン環を形成している。このような環は、置換基、例えばOR'、NR'_２またはハロゲン、より好ましくはヒドロキシ、アルコキシ、アミノまたはハロゲン、最も好ましくはヒドロキシ、メトキシ、アミノ、フルオロまたはクロロを有することができる。

R_２は、好ましくは水素またはハロゲンであり、より好ましくは水素、フルオロまたはクロロである。あるいは、上述したように、R_１とR_２は好ましくは縮合環を形成している。

R_３は、好ましくは水素、OR'、NR'_２またはハロゲンであり、より好ましくは水素、ヒドロキシ、アルコキシ、保護されたヒドロキシ、アミノ、保護されたアミノまたはハロゲンであり、最も好ましくは水素、ヒドロキシ、メトキシ、ベンジルオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノまたはクロロである。

R_３が水素のときにより高い活性が得られ、次にヒドロキシ、ハロゲン(クロロ)、メトキシ、アミノが続くと考えられる。

R_４は好ましくは水素である。

R_５は好ましくは水素である。

R_６は好ましくは水素である。

R_７は好ましくは水素である。

R_１２は、好ましくはアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、より好ましくはアルキル、フェニル、または5もしくは6個の環原子および1もしくは2個のヘテロ原子を含むヘテロアリールであり、最も好ましくはイソプロピル、フェニル、ピリミジニル、チオフェニルまたはピリジニルである。アリール基またはヘテロアリール基は、非置換であるか、またはOR'、特にメトキシなどのアルコキシもしくはニトロから選択される好ましい置換基を有し、ピリミジニルの場合は、示した置換基X_１を有してもよい。

式(5a)のようにR_１２が4-ピリミジニルのときにより高い活性が得られると考えられる。

X_１は、好ましくは水素、アルキル、OR'、NR'_２、SR'、SOR'、SO_２R'、カルボキシアルキルまたはアラルキルであり、より好ましくは水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、保護されたアミノ、チオアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニルまたはジカルボキシアルキルであり、最も好ましくは水素、メチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、フェノキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノ、チオメチル、メチルスルフィニル、メチルスルホニルまたはジメチルカルボキシエチルである。

X_１がSR'、SOR'、SO_２R'のときに、頚部癌に対する選択性が高いと考えられる。Hela細胞系に対する試験では、その活性が2、3桁増加した。特に、X_１は、好ましくはSアルキル、SOアルキルまたはSO_２アルキルであり、アルキルは通常メチルである。

X_２は、好ましくはNR'_２またはSR'であり、より好ましくはNH_２またはチオアルキルであり、最も好ましくはNH_２またはチオメチルである。

したがって、本発明の好ましい化合物は式(5)であり、式中、各置換基は、これらの好ましく、より好ましく、または最も好ましく定義した置換基の1個または複数個、好ましくはすべてに合致する。

本発明の特に好ましい実施形態は、一般構造が(10)、(11)および(29)であるバリオリン様化合物である。

式中、X_１およびX_２で定義される置換基は、それぞれ独立に、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、カルボキシアルキル、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択されるが、最も好ましくはNH_２、SMe、SOMe,またはSO_２Meである。

式中、R_８は、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択されるが、最も好ましくはH、メチルまたはClである。

式中、R_９は、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=O、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択されるが、最も好ましくはHまたはOMeである。

式中、R_１０は、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=0、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択されるが、最も好ましくはH、OH、Cl、F、NH_２またはOMeである。

式中、R_１１は、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=0、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択されるが、最も好ましくはH、ClまたはFである。

式中、R_１２は、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、=0、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択されるが、最も好ましくはアルキル、置換または非置換アリール、または置換もしくは非置換複素環式芳香族であり、さらにより好ましくはアルキル、置換または非置換フェニル、または置換もしくは非置換チオフェニル、ピイジニル(pyidinyl)またはピリミジニルである。ただし、好ましい置換基は、アルコキシまたはニトロ、特にメトキシまたはニトロ、ならびにX_１基に対して許容された規定の置換基などである。

式中、R'基の各々は独立に、H、OH、SH、NO_２、NH_２、CN、ハロゲン、=0、C(=O)H、C(=O)CH_３、CO_２H、CO_２CH_３、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、アリール、アラルキルおよび複素環式芳香族からなる群から選択される。

式(10)の化合物の特定の実施形態としては、1つまたは複数の置換基が以下の置換基である化合物が挙げられる。すなわち、
X_１が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めて定義した置換基である。
X_２が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めて定義した置換基である。
R_８が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めてR_１に対して定義した置換基である。
R_１０が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めてR_３に対して定義した置換基である。
R_１１が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めてR_２に対して定義した置換基である。

式(11)の化合物の特定の実施形態としては、1つまたは複数の置換基が以下の置換基である化合物が挙げられる。すなわち、
X_１が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めて定義した置換基である。
X_２が、好ましい選択肢、より好ましい選択肢、および最も好ましい選択肢を含めて定義した置換基である。
R_９が、水素またはアルコキシ、好ましくは水素またはメトキシなどのアリール環に対して許容された置換基の1つである。

式(29)の化合物の特定の実施形態としては、1つまたは複数の置換基が以下の置換基である化合物が挙げられる。すなわち、
X_２は定義したとおりである。
R_１２が、ピリミジニルではなく、ピリミジニル以外の好ましくはアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、より好ましくはアルキル、フェニル、または5もしくは6個の環原子および1もしくは2個のヘテロ原子を含むヘテロアリールであり、最も好ましくはイソプロピル、フェニル、チオフェニルまたはピリジニルである。アリールまたはヘテロアリール基は、置換されておらず、またはOR'、特にメトキシなどのアルコキシまたはニトロから選択される好ましい置換基を有する。

一般式(10)、(11)および(29)の化合物は、国際公開第0204447号および国際公開第0212240号に記載された方法を改変した方法を用いて合成することができる。

本発明の化合物を生成する好ましい方法のいくつかを、一般的な置換基の例と共に以下の反応スキームに記載する。これらの一般的な置換基は、本発明を限定するものではなく、コード文字によって示される各アイデンティティに特に配慮せずに一般的な意味でこのプロセスを理解すべきである。

活性な抗腫瘍性化合物がこれらの化合物から多数調製されたが、本開示の教示に従いさらに多数の化合物を形成できると考えられる。

R_９がHまたはOMeである一般式(11)の化合物の調製について以下に示す。

R_８がメチルであり、R_１０およびR_１１がHである一般式(10)の化合物の調製について示す。

R_８がHまたはClであり、R_１０がHであり、R_１１がFまたはClである一般式(10)の化合物の調製について示す。

R_８、R_１０およびR_１１がHである一般式(10)の化合物の調製について示す。

基本となる中間体(8b、国際公開第0204447号の実施例17:化合物18)を既知の方法を用いて得るために、2-クロロニコチノイルクロライド(7b)とヨードピリミジン(13)を-100℃で反応させる必要があった。この反応をスケールアップしようとすると、本発明者らは、反応物内の温度を-95℃よりも低く保つために添加時間を延長しなければならなかった。この時間延長によって副反応が増加し、収率が低下した。

(8b)の形成におけるこの極端に低い温度を回避するために、本発明者らは(8b)を得るための新しい経路を開発した。すなわち、(7b)を対応するWeinrebアミド(30)に転化し、それを(13)のマグネシウム誘導体と-5℃で反応させてケトン(31)を得た。(30)から(8b)への変換を2つの方法、すなわち、a)(13)のマグネシウム誘導体を用いて0℃で、またはb)Barbierの条件に(13)のリチウム誘導体を用いて-78℃で行った。両方の方法において、反応は容易にスケールアップされ、収率は元の方法よりも高くなる。

この発見に基づいて、本発明は、式(8z)のバリオリン中間体を調製する方法を提供する。

(式中、halはハロゲンであり、それ以外の置換基は先に定義したとおりである)。この方法は、式(31z)の化合物

(式中、各置換基は先に定義したとおりである)を、式(13z)の化合物

(式中、各置換基は先に定義したとおりである)と反応させることを含む。

この反応において、X_１およびX_２は同じでも異なっていてもよく、好ましくは共に-SMeであり、halは通常Clであり、R'は一般にHまたはAcであり、それ以外の置換基は通常Hまたは本発明の好ましい化合物に対して用いるものである。

式(31z)の化合物は、式(30z)の化合物

(式中、各置換基は先に定義したとおりである)を、式(13z)の化合物と反応させることによって適切に作製される。式(30z)の化合物と反応させるために使用する式(13z)の化合物は、式(31z)の化合物と反応させるために使用する式(13z)の化合物と同じでも異なっていてもよい。

一般式(10)の化合物の調製について、R_８およびR_１１がHであり、R_１０がOBnである例を示す。

一般式(29)の化合物の調製について、R_１２が置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族である例を示す。

したがって、様々な簡単な複素環式芳香族分子を、潜在的な抗腫瘍治療活性を有するいくつかの中間体および誘導体に転換することができる。

一般式(10)および(11)の化合物の場合、様々な簡単な官能基の相互変換によって、以下に示す様々な置換基X_１、X_２およびR_１０を有する多種多様な誘導体がさらに得られる。

本発明の化合物の生物活性の例を、本明細書の最後にある表Iに示す。

本願は、英国特許出願の優先権を主張するものである。本発明者らは、本明細書には含まれていないその英国特許出願の明細書のあらゆる開示を参照により本明細書に明示的に援用する。

実験手順、および化合物の物理化学的諸特性は以下のとおりである。

一般的な実験の詳細
特段の記載がない限り、すべての反応を、前もって乾燥したガラス器具中、アルゴン雰囲気下で実施した。

化合物13

ヨードピリミジン(13)を、A. J. Majeed等 Tetrahedron 1989、45、993の文献に記載された実験手順に従って調製した。

化合物14a

方法A
4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(5.13 g、20.3 mmol)のテトラヒドロフラン(75 mL)溶液を-100℃でn-BuLi(8.1 mL、20.3 mmol、へキサン中2.5 M)を用いて処理した。この反応混合物を-100℃で45分間撹拌し、2-クロロ-3-キノリンカルボキシアルデヒド12a(3.0 g、15.7 mmol)のテトラヒドロフラン(60 mL)溶液を用いて-100℃で2.5時間処理した。この反応物を塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、23℃に加熱し、酢酸エチルと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜1:1)で分離して黄色固体14a(4.0 g、81%)を得た。

方法B
4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(5.1 g、20.3 mmol)のトルエン(40 mL)溶液を、i-PrMgCl(10 mL、20.0 mmol、テトラヒドロフラン中2 M)を用いて0℃で1時間処理し、2-クロロ-3-キノリンカルボキシアルデヒド12a(3.0 g、15.7 mmol)のトルエン(150 mL)溶液にカニューレを用いて0℃で添加した。この反応混合物を0℃で16時間撹拌し、塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、23℃に加温し、塩化アンモニウムの飽和水溶液と酢酸エチルに分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜1:1)で分離して黄色固体14a(3.5 g、70%)を得た。

化合物14b

4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(3.4 g、13.5 mmol)のテトラヒドロフラン(60 mL)溶液を、n-BuLi(5.4 mL、へキサン中2.5 M、13.5 mmol)を用いて-100℃で処理し、-100℃で45分間撹拌した。その後、2-クロロ-6-メトキシ-3-キノリンカルボキシアルデヒド12b(1.7 g、7.9 mmol)のテトラヒドロフラン(35 mL)溶液を-100℃で添加し、2.5時間撹拌した。この反応物を塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、23℃に加温し、酢酸エチルと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜3:1)で分離して黄色固体14b(1.8 g、67%)を得た。

化合物15a

14a(4.0 g、12.6 mmol)とPDC(7.1 g、18.9 mmol)のCH_２Cl_２(50 mL)溶液を、23℃で24時間撹拌した。反応混合物をセライトを通してろ過し、濃縮し、クロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1)で分離して白色固体15a(3.0 g、75%)を得た。

化合物15b

14b(1.8 g、5.2 mmol)のCH_２Cl_２(50 mL)溶液をPDC(2.9 g、7.8 mmol)を用いて23℃で48時間処理した。反応混合物をセライトを通してろ過し、濃縮し、クロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、3:1)で分離して白色固体15b(1.5 g、82%)を得た。

化合物16a

4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(0.50 g、2.0 mmol)の乾燥トルエン(12 mL)溶液を0℃でi-PrMgCl(1.0 mL、テトラヒドロフラン中2 M、2 mmol)を用いて1時間処理した。形成されたアリールマグネシウムをカニューレを用いて15a(0.32 g、1.0 mmol)の乾燥トルエン(30 mL)溶液に0℃で移し、25分間撹拌し、過剰の塩化アセチル(2.0 mL)で処理し、23℃で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜1:1)で分離して、黄色固体16a(150 mg、15%)を得た。

化合物16b

4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(2.1 g、8.3 mmol、2.0当量)のテトラヒドロフラン(50 mL)溶液をn-BuLi(3.3 mL、へキサン中2.5 M、8.3 mmol)を用いて-100℃で処理し、-100℃で45分間撹拌した。その後、15b(1.4 g、4.1 mmol)の-78℃テトラヒドロフラン(20 mL)溶液を、カニューレを用いて-100℃を維持しながら徐々に添加した。反応混合物を-100℃で3時間撹拌した。反応物を塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、23℃に加温し、酢酸エチルと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜2:1)で分離して白色固体16b(1.48 g、76%)を得た。

化合物17a

16a(680 g、1.40 mmol)、トリエチルシラン(2.70 mL、16.9 mmol)およびトリフルオロ酢酸(0.23 mL、2.95 mmol)の混合物を、封管中のジクロロエタン(3 mL)中80℃で32時間還流させた。冷却後、赤色の残渣をCH_２Cl_２(50 mL)で希釈し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(50 mL)およびNaCl飽和水溶液(50 mL)で洗浄した。それらの混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:酢酸エチル、100:0〜30:1)で分離してオレンジ色の固体17a(226 mg、41%)を得た。

化合物17b

16b(113 mg、0.24 mmol)とTFA(37 μL、0.48 mmol)の1.2-ジクロロエタン(0.5 mL)懸濁液をEt_３SiH(0.3 mL、1.9 mmol)を用いて封管中100℃で43時間処理した。反応混合物を冷却し、CH_２Cl_２と炭酸水素ナトリウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜2:1)で分離して黄色固体17b(34 mg、34%)を得た。

化合物18a

1.4-ジオキサン(5 mL)とNH_４OH(8 mL、32%)の混合液中の17a(15.3 mg、0.039 mmol)溶液を封管中85℃で16時間加熱した。反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、98:2)で分離して、黄色固体18a(9.3 mg、67%)を得た。

化合物18b

17b(21.0 mg、0.05 mmol)の1.4-ジオキサン:NH_４OH 32%、2:3(25 mL)溶液を封管中90℃で16時間加熱した。反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、98:2)で分離して黄色固体18b(10 mg、52%)を得た。

化合物19a

17a(26.7 mg、0.068 mmol)の-30℃のCH_２Cl_２(3 mL)溶液を、mCPBA(12.5 mg、0.051 mmol、2.4当量、77%)のCH_２Cl_２(1 mL)溶液を滴下して処理し、0℃で30分間加温した。反応混合物をNa_２S_２O_３飽和水溶液で処理し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その反応粗製物を1.4-ジオキサン:NH_４OH(32%)に溶解し、封管中80℃で16時間加熱した。反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:CH_３OH、98:2〜94:6)で分離して黄色固体19a(4.5 mg、20%)を得た。

化合物42

19a(2.1 mg、0.006 mmol)をHClの1.4-ジオキサン溶液(0.5 mL、3.8 M)を用いて23℃で5分間処理した。反応混合物を濃縮して黄色固体42(2.5 mg、100%)を得た。

化合物19b

17b(18.0 mg、0.04 mmol)のCH_２Cl_２(5 mL)溶液を、mCPBA(24.7 mg、0.11 mmol、77%)のCH_２Cl_２(3 mL)溶液を用いて-30℃で処理した。反応混合物を0℃に30分間加温し、Na_２S_２O_３飽和水溶液で処理した。反応混合物をCH_２Cl_２と炭酸水素ナトリウム飽和水溶液に分配し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体19b(2.8 mg、20%)を得た。

化合物20

塩化オキサリル(5.4 mL、10.6 mmol)と2-クロロ-6-メチルニコチン酸(1.69 g、9.8 mmol)のCH_２Cl_２(45 mL)懸濁液にDMF(2滴)を添加した。この混合物を23℃で3時間撹拌し、その溶媒を減圧下で蒸発させて褐色オイル(1.8 g、97%)を得た。このオイルをさらに精製せずに使用した。

化合物21

n-BuLi(11.6 mL、へキサン中2.5 M、28.8 mmol)を、4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(7.16 g、28.4 mmol)のテトラヒドロフラン(60 mL)溶液に-100℃で滴下した。その黒色溶液を-100℃で15分間撹拌した。2-クロロ-6-メチルニコチノイルクロライド20(1.8 g、9.47 mmol)のテトラヒドロフラン(10 mL)溶液をカニューレを用いて-100℃で添加した。その濃赤色混合物を-95℃で1時間撹拌し、塩化アセチル(3.4 mL、47.3 mmol)を慎重に添加した。その赤色混合物を23℃で4時間撹拌し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100 mL)を添加した。それらの層を分離させ、水層をジエチルエーテル(3×150 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。その赤色残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、1:5〜1:1.5)で分離して淡赤色固体21(2.3 g、54%)を得た。

化合物22

21(2.3 g、5.1 mmol)、Et_３SiH(6.6 mL、41.1 mmol)およびトリフルオロ酢酸(0.83 mL、10.7 mmol)の混合物を封管中のジクロロエタン(10 mL)中で3時間還流させた。冷却後、その赤色残渣をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、CH_２Cl_２(300 mL)と炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(300 mL)の混合液中に注いだ。その褐色混合物を23℃で1時間撹拌し、層分離させた。水層をCH_２Cl_２(3×200 mL)で抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮して黄色固体22(1.1 g、61%)を得た。

化合物24

予め硫酸ナトリウムで脱水したmCPBA(45 mg、0.18 mmol、77%)のCH_２Cl_２(2 mL)溶液を、22(29.5 mg、0.083 mmol)のCH_２Cl_２(4 mL)冷却(-30℃)溶液に滴下した。その黄色溶液を0℃で15分間撹拌した。Na_２S_２O_３飽和水溶液(5 mL)を添加し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(5 mL)で洗浄した。その混合水層をCH_２Cl_２(3×10 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。中間体23を、1.4-ジオキサン(4 mL)を含む封管中に注ぎ、アンモニア溶液32%(14 mL)を添加した。その褐色混合物を14時間85℃で加熱した。得られた褐色混合物を真空中で濃縮し、CH_２Cl_２:MeOH(10:1、11 mL)を添加し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、溶媒を減圧で蒸発させた。その黄色固体を、CH_２Cl_２:MeOH(2%)〜CH_２Cl_２:MeOH(5%)を溶離液として用いたフラッシュクロマトグラフィー法によって精製して、黄色固体24(4 mg、17%、2ステップ)を得た。

化合物44

化合物24(30 mg)を、HClの1.4-ジオキサン溶液(6 mL、3.8 N)に0℃で懸濁させた。その淡褐色混合物を0℃で15分間撹拌し、真空中で濃縮した。CH_２Cl_２(5 mL)を添加し、1分間撹拌し、再度濃縮した。1.4-ジオキサン(5 mL)を添加し、その淡褐色固体をろ過し、さらに1.4-ジオキサン(3 mL)で洗浄して30 mgの44を得た。

化合物43

アンモニア溶液32%(4 mL)を、22(11 mg、0.031 mmol)の1.4-ジオキサン(2 mL)溶液に添加した。その褐色混合物を封管中85℃で14時間加熱した。得られた黄色混合物を真空中で濃縮し、CH_２Cl_２(5 mL)を添加し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、その溶媒を減圧蒸発させた。その黄色固体を、(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)を溶離液として用いたフラッシュクロマトグラフィー法によって精製して黄色固体43(3 mg、67%BRSM)を得た。

化合物45

4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(0.76 g、3.0 mmol)の乾燥テトラヒドロフラン(10 mL)溶液を、nBuLi(1.2 mL、へキサン中2.5 M、3.0 mmol)を用いて-100℃で処理し、そのオレンジ色の溶液を-100℃で20分間撹拌した。2.5-ジクロロニコチノイルクロライド(0.21 g、1.0 mmol)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液を、予め調製した有機リチウム誘導体の溶液に滴下し、その反応混合物を3時間-100℃で撹拌した。その後、その粗製反応物を塩化アンモニウム飽和水溶液(20 mL)でクエンチし、酢酸エチル(3×20 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣のフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、50:50)によって、対応するカルビノール(0.11 g、26%)を得た。

このカルビノール(0.11 g、0.26 mmol)のテトラヒドロフラン(10 mL)溶液を、NaH(16 mg、0.4 mmol、60%)のテトラヒドロフラン(5 mL)懸濁液に添加した。その暗赤色混合物を23℃で10分間撹拌した。次いで、塩化アセチル(0.071 mL、1.0 mmol)を滴下し、得られた黄色スラリーを23℃で5時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム(20 mL)の飽和水溶液を添加し、その水層をCH_２Cl_２(3×20 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して褐色オイル45(0.11 g、90%、全収率24%)を得た。このオイルをさらに精製せずに使用した。

化合物46

4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(2.3 g、9.0 mmol)の乾燥テトラヒドロフラン(10 mL)溶液を、nBuLi(3.6 mL、へキサン中2.5 M、9.1 mmol)を用いて-100℃で処理し、そのオレンジ色の溶液をこの温度で20分間撹拌した。2.6-ジクロロ-5-フルオロニコチノイルクロライド(0.69 g、3.0 mmol)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液を、予め調製した有機リチウム誘導体の溶液に滴下し、その反応混合物を-100℃で3時間撹拌した。その後、その粗製反応物を塩化アンモニウム飽和水溶液(20 mL)でクエンチし、酢酸エチル(3×20 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣のフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、50:50)によって、対応するカルビノール(0.15 g、11%)を得た。

このカルビノール(0.15 g、0.3 mmol)のテトラヒドロフラン(3 mL)溶液を、NaH(20 mg、0.5 mmol、60%)のテトラヒドロフラン(2 mL)懸濁液に添加した。その暗赤色混合物を23℃で10分間撹拌した。次いで、塩化アセチル(0.10 mL、1.3 mmol)を滴下し、得られた黄色スラリーを23℃で5時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム(20 mL)の飽和水溶液を添加し、その水層をCH_２Cl_２(3×20 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して褐色オイル46(0.13 g、83%、全収率9%)を得た。このオイルをさらに精製せずに使用した。

化合物47

45(110 mg、0.23 mmol)とトリフルオロ酢酸(0.04 mL、0.52 mmol)の1.2-ジクロロエタン(2 mL)溶液を、トリエチルシラン(0.33 mL、2.08 mmol)を含有するゴムセプタム付きYoung管に移した。アルゴンの強力な気流下で、セプタムをテフロン(登録商標)製ねじ蓋に代え、密封反応容器を100℃で48時間加熱した。冷却後、反応器を開け、内容物をCH_２Cl_２(10 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(10 mL)で中和し、層分離させた。水層をCH_２Cl_２で繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、33%)で精製してRf.が同じ2つの生成物の混合物を得た。ジエチルエーテル(15 mL)を添加し、ろ過して黄色固体47(20 mg、20%)を得た。

化合物48

46(200 mg、0.42 mmol)とトリフルオロ酢酸(64 μL、0.82 mmol)の1.2-ジクロロエタン(2 mL)溶液を、トリエチルシラン(0.52 mL、3.28 mmol)を含有するゴムセプタム付きYoung管に移した。アルゴンの強力な気流下で、セプタムをテフロン(登録商標)製ねじ蓋に代え、密封反応容器を140℃で96時間加熱した。冷却後、反応器を開け、内容物をCH_２Cl_２(10 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(10 mL)で中和し、層分離させた。水層をCH_２Cl_２で繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、33%)で精製してRf.が同じ2つの生成物の混合物を得た。ジエチルエーテル(15 mL)を添加し、ろ過して黄色固体48(26 mg、16%)を得た。

化合物49

化合物47(20 mg、0.054 mmol)を、-30℃に冷却したクロロホルム(5 mL)に溶解した。m-クロロ過安息香酸(19 mg、0.11 mmol、77%)のCH_２Cl_２(5 mL)予冷溶液(-30℃)を滴下し、0℃で15分間撹拌した。その溶液を23℃に加温し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で中和し、CH_２Cl_２で繰り返し抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して黄色固体のスルホキシドを得た。これをさらに精製せずに使用した。その粗製酸化物質を過剰のp-メトキシベンジルアミン(1 mL)と共に85℃で15時間加熱した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、50:50)によって精製した。生成物を、トリフリック酸(0.5 mL)を用いて23℃で3時間処理した。その反応混合物を0℃に冷却して、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(1 mL、32%)で連続処理した。

沈殿物をろ過して取り出し、MeOH(5 mL)およびジエチルエーテル(5 mL)で洗浄し、乾燥して黄色固体49(10 mg、全収率60%)を得た。

化合物50

化合物48(26 mg、0.066 mmol)をクロロホルム(5 mL)に溶解して、-30℃に冷却した。m-クロロ過安息香酸(23 mg、0.132 mmol)のCH_２Cl_２(5 mL)予冷溶液(-30℃)を滴下し、0℃で15分間撹拌した。その溶液を23℃に加温し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で中和し、CH_２Cl_２で繰り返し抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮してスルホキシドの黄色固体を得た。それをさらに精製せずに使用した。その粗製酸化物質を過剰のp-メトキシベンジルアミン(1 mL)と共に85℃で15時間加熱した。反応混合物を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、50:50)によって精製した。その生成物を、トリフリック酸(0.5 mL)を用いて23℃で3時間処理した。反応混合物を0℃に冷却して、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(1 mL、32%)で連続処理した。

沈殿物をろ過し、MeOH(5 mL)およびジエチルエーテル(5 mL)で洗浄し、乾燥して黄色固体50(3 mg、全収率14%)を得た。

化合物8b

方法A
i-プロピルマグネシウムブロマイド溶液(5.0 mL、10.0 mmol、テトラヒドロフラン中2.0 M)を、4-ヨード-2メチルチオピリミジン13(2.52 g、10.0 mmol)のトルエン(60 mL)溶液に0℃で滴下した。その褐色溶液を0℃で1時間撹拌した。この溶液を、31(1.06 g、4 mmol)のトルエン(40 mL)溶液にカニューレを用いて20分間にわたり滴下した。添加終了後、さらに15分間0℃で反応混合物を撹拌し、次いで塩化アセチル(0.99 mL、14.0 mmol)でクエンチした。氷浴を取り外し、得られた褐色スラリーを23℃で3時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100 mL)を添加し、水層を酢酸エチル(3×50 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製残渣のフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン:、50:50)によって、淡いオレンジ色の泡沫状固体8b(1.28 g、74%)を得た。その生成物を、反応の副生成物として形成される少量の32と共に単離した。この両方の化合物の混合物を次のステップに用いた。

方法B
-78℃に予冷したn-BuLi(9 mL、22.6 mmol、へキサン中2.5 M)を、-78℃の31(3 g、11.3 mmol)と4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(5.71 g、22.6 mmol)のテトラヒドロフラン(75 mL)溶液に滴下した。その暗褐色混合物を-78℃で15分間撹拌し、塩化アセチル(3.2 mL、45.3 mmol)を慎重に添加した。その暗緑色スラリーを23℃で3.5時間撹拌し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(150 mL)でクエンチし、ジエチルエーテル(2×150 mL)で抽出した。混合有機層をMgSO_４で脱水し、ろ過し、濃縮した。その赤色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:4〜100:0)によって精製して、淡赤色固体8b(3 g、61%)を得た。

化合物9

8b(1.6 g、3.7 mmol)、トリフルオロ酢酸(0.6 mL、7.74 mmol)およびEt_３SiH(4.7 mL、29.5 mmol)の混合物を、1.2-ジクロロエタン(8 mL)を含有するYoung管に注いだ。この密封反応容器を90℃で24時間加熱した。冷却後、容器を開け、内容物をクロロホルム(100 mL)で希釈した。その溶液を、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100 mL)で中和し、層分離させた。水層をクロロホルムで繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その暗赤色残渣を、ジエチルエーテル(100 mL)を添加して精製し、明赤色の沈殿物をろ過して9(0.85 g、68%)を得た。

デオキシバリオリン4

予め硫酸ナトリウムで脱水したmCPBA(98 mg、0.39 mmol、77%)のCH_２Cl_２(4 mL)溶液を、9(61 mg、0.18 mmol)のCH_２Cl_２(5 mL)冷却(-30℃)溶液に滴下した。その黄色溶液を0℃で15分間撹拌した。Na_２S_２O_３飽和水溶液(5 mL)を添加し、有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(5 mL)で洗浄した。混合水層をCH_２Cl_２(3×10 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。1.4-ジオキサン(4 mL)を含む封管に28を注ぎ、アンモニア溶液32%(8 mL)を添加した。その褐色混合物を85℃で14時間加熱した。得られた黄色混合物を真空中で濃縮し、CH_２Cl_２:MeOH(10:1、11 mL)を添加し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、その溶媒を減圧蒸発させた。その黄色固体を、CH_２Cl_２:MeOH(2%)〜CH_２Cl_２:MeOH(5%)を溶離液としたフラッシュクロマトグラフィー法によって精製して、黄色固体のデオキシバリオリン4(14 mg、29%、2ステップ)を得た。

化合物51

デオキシバリオリン4(6 mg、0.024 mmol)を、HClの1.4-ジオキサン溶液(2 mL、5.3 M)で処理し、23℃で2時間撹拌した。その懸濁液をろ過して黄色固体51(3 mg)を得た。

化合物30

激しく撹拌したN,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(33.2 g、0.34 mol)のテトラヒドロフラン(1.2 L)懸濁液に、トリエチルアミン(59 mL、0.426 mol)を添加し、その反応混合物を23℃で20分間撹拌した。その後、2-クロロニコチノイルクロライド7b(50 g、0.284 mol)をそのまま添加し、その反応物を23℃で終夜撹拌した。その粗製混合物を、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液でクエンチし、CH_２Cl_２(3×750 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して、黄色固体30(49.4 g、87%)を得た。これをさらに精製せずに使用した。

化合物31

4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(20.3 g、80.5 mmol)の乾燥トルエン溶液に、i-PrMgCl(40.2 mL、80.5 mmol、テトラヒドロフラン中2.0 M)を-4℃で滴下した。形成された淡褐色懸濁液を-4℃で45分間撹拌した。30(12.9 g、64.4 mmol)のテトラヒドロフラン(50 mL)溶液をカニューレを用いて15分間添加し、得られた暗褐色混合物を0℃で1時間撹拌した。その反応混合物を、塩化アンモニウム(200 mL)飽和溶液を添加して停止させ、酢酸エチル(2×200 mL)で抽出した。その混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して、褐色固体(18 g)を得た。その残渣をジエチルエーテルとへキサン(3:1、40 mL)の混合物で粉砕し、ろ過して淡褐色固体31(13.6 g、80%)を得た。

化合物33

方法A
4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(15.6 g、62 mmol)のテトラヒドロフラン(200 mL)溶液をn-BuLi(24.8 mL、へキサン中2.5 M、62 mmol)を用いて-100℃で処理した。添加後、反応混合物を-100℃で30分間撹拌し、ジエチル炭酸塩(3.8 mL、31 mmol)のテトラヒドロフラン(6 mL)溶液を用いて-110℃で30分間処理した。反応混合物を-80℃に加温し、塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、酢酸エチルと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。残渣を、クロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜3:1)で分離して、黄色固体33(5.3 g、61%)を得た。

方法B
4-ヨード-2-メチルチオピリミジン13(50.4 g、200 mmol)のトルエン(420 mL)溶液をi-PrMgCl(100 mL、テトラヒドロフラン中2 M、200 mmol)を用いて-10℃で2時間処理した。カニューレを用いてピリミジンマグネシウムを-10℃のEtOCOOEt(72 mL、594.4 mmol)に移し、0℃で2.5時間撹拌した。反応混合物を塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、23℃に加温し、酢酸エチルと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。残渣をCH_２Cl_２で粉砕し、ろ過した。ろ液を濃縮し、クロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜3:1)で分離して黄色固体33(13.3 g、48%)を得た。

化合物34

4-ベンジルオキシ-2-(1H)ピリドン(3.0 g、5.0 mmol)の新たに蒸留したPOCl_３(18 mL)懸濁液を、90℃で15時間加熱した。反応混合物を冷却し、濃縮した。残渣を氷上に注ぎ、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で処理して、CH_２Cl_２で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。得られた残渣をクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、100:1)で分離して白色固体34(2.5 g、75%)を得た。

化合物35

34(1.5 g、6.8 mmol)のテトラヒドロフラン(20 mL)溶液をn-BuLi(2.7 mL、6.8 mmol、へキサン中2.5 M)を用いて-100℃で処理し、-78℃に加温し、この温度で4時間維持した。反応混合物を-100℃に冷却し、-78℃に予冷した33(1.9 g、6.8 mmol)のテトラヒドロフラン(15 mL)溶液でカニューレを用いて処理した。反応混合物を-78℃で3時間撹拌し、-50℃で30分間加温し、-78℃に再冷却し、キノリン下で予め蒸留した塩化アセチル(2.0 mL、28 mmol)で処理し、23℃に加温し、終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、2:1〜1:1)で分離して白色固体35(2.9 g、78%)を得た。

化合物52

35(740 mg、1.37 mmol)とTFA(221 μL、2.86 mmol)の1.2-ジクロロエタン(3.0 mL)溶液をEt_３SiH(1.8 mL、11 mmol)を含むYoung管にAr下で添加した。このYoung管を閉じ、80℃で24時間加熱した。反応混合物をクロロホルムに溶解し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル 4:1) で分離して黄色固体52(420 mg、69%)を得た。

化合物53

52(1.9 g、4.3 mmol)のクロロホルム(50 mL)溶液を、mCPBA(2.4 g、10.9 mmol、77%)のクロロホルム(20 mL)溶液を用いて-30℃で処理した。添加後、反応混合物を0℃に加温し、20分間撹拌し、Na_２S_２O_３飽和水溶液でクエンチした。有機層を、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。残渣を、p-メトキシベンジルアミン(10 mL、76.5 mmol)を用いて90℃で24時間処理した。過剰のp-メトキシベンジルアミンを、Kugelrohr装置(140℃、0.5 mmHg)を用いて蒸留除去し、残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、1:1〜0:100)で分離して黄色固体53(1.5 g、55%)を得た。

バリオリンB1

53(204 mg、0.33 mmol)のTfOH(0.5 mL)溶液を23℃で4時間撹拌した。反応混合物を0℃に冷却し、MeOH(3 mL)およびNH_４OH溶液(4 mL、32%)を滴下して処理した。反応混合物をろ過し、H_２0、MeOHおよびジエチルエーテルで洗浄した。得られた固体をクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5〜85:15)で分離して黄色固体のバリオリンB 1(70 mg、72%)を得た。

化合物54

バリオリンB(19 mg、0.065 mmol)を無水HClの1.4-ジオキサン溶液(3.0 mL、3.8 M)を用いて23℃で5時間処理した。反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄してオレンジ色の固体54を得た。

化合物36

3-メトキシフェニルマグネシウムブロマイド溶液(3.2 mL、3.2 mmol、テトラヒドロフラン中1 M)を、31(0.7 g、2.65 mmol)のテトラヒドロフラン(10 mL)溶液に0℃で滴下した。その褐色混合物を、0℃で2時間撹拌した。塩化アセチル(0.75 mL、10.6 mmol)を添加し、混合物を23℃で2時間撹拌した。塩化アンモニウム飽和水溶液(50 mL)を添加し、水層をジエチルエーテル(3×40 mL)で抽出した。混合有機層をMgSO_４で脱水し、ろ過し、濃縮した。オレンジ色の残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:3〜1:1.5)によって精製し、無色のオイル36(0.6 g、59%)を得た。

化合物57

36(0.38 g、0.91 mmol)、トリフルオロ酢酸(0.15 mL、1.9 mmol)およびトリエチルシラン(1.17 mL、7.3 mmol)の混合物を、1.2-ジクロロエタン(4 mL)を含有するYoung管に注いだ。この密封反応容器を90℃で22時間加熱した。冷却後、容器を開け、内容物をクロロホルム(50 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(60 mL)で中和し、層分離させた。水層をクロロホルムで繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その暗赤色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:4〜1:3)によって精製して黄色固体57(20 mg、54%)を得た。

化合物62

水性NH_４OH(15 mL、32%)を57(150 mg、0.46 mmol)の1.4-ジオキサン(10 mL)溶液に添加した。その黄色混合物を封管中90℃で30時間撹拌した。得られた黄色混合物を減圧濃縮し、その黄色残渣を、CH_２Cl_２:MeOH(2%)〜CH_２Cl_２:MeOH(3%)を溶離液として用いたフラッシュクロマトグラフィー法によって精製して黄色固体62(64 mg、65%BRSM)を得た。

化合物67

化合物62(10 mg、0.03 mmol)を、HClの1.4-ジオキサン溶液(3 ml、3.5 M)で処理し、23℃で2時間撹拌した。その無色溶液を濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄し、ろ過して黄色固体67(11 mg)を得た。

化合物37

PhLi溶液(0.58 mL、1.04 mmol、シクロへキサン:エーテル中1.8 M)を、31(190 mg、0.73 mmol)のテトラヒドロフラン(6 mL)溶液に-78℃で滴下した。その暗赤色混合物を-78℃で3時間撹拌した。塩化アンモニウム飽和水溶液(25 mL)を添加し、水層をジエチルエーテル(3×40 mL)で抽出した。混合有機層をMgSO_４で脱水し、ろ過し、濃縮した。そのオレンジ色の残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン 25%〜35%)によって精製して淡黄色オイルのアルコール(0.11 g、44%)を得た。アルコール(94 mg、0.27 mmol)のテトラヒドロフラン(2 mL)溶液を、NaH 60%(22 mg、0.54 mmol)のテトラヒドロフラン(1 mL)懸濁液に添加した。その暗赤色混合物を23℃で10分間撹拌した。塩化アセチル(0.6 mL、8.5 mmol)を滴下し、得られた黄色スラリーを23℃で5時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(20 mL)を添加し、水層をCH_２Cl_２(3×25 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その褐色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、25%〜35%)によって精製し、無色オイルの37(52 mg、2ステップで50%、22%)を得た

化合物58

37(51 mg、0.13 mmol)、トリフルオロ酢酸(22 μL、0.28 mmol)およびトリエチルシラン(0.17 mL、1.07 mmol)の混合物を1.2-ジクロロエタン(0.5 mL)を含有するYoung管に注いだ。この密封反応容器を85℃で22時間加熱した。冷却後、容器を開けて、内容物をクロロホルム(25 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(30 mL)で中和し、層分離させた。水層をクロロホルムで繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その暗赤色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:4〜1:3)によって精製して黄色固体58(0.19 g、66%)を得た。

化合物63

水性NH_４OH(5 mL、32%)を、58(19 mg、0.065 mmol)の1.4-ジオキサン(2 mL)溶液に添加した。その黄色混合物を封管中90℃で24時間撹拌した。得られた黄色混合物を減圧濃縮し、その黄色残渣を、CH_２Cl_２:MeOH(1%)〜CH_２Cl_２:MeOH(2%)を溶離液として用いたフラッシュクロマトグラフィー法によって精製して黄色固体63(8 mg、98%BRSM)を得た。

化合物38

nBuLi溶液(0.83 mL、2.075 mmol、へキサン中2.5 M)を、-78℃の1-ヨード-2-ニトロベンゼン(0.51 g、2.0 mmol)テトラヒドロフラン(8 mL)溶液に滴下した。その黒色混合物を-78℃で10分間撹拌し、31(0.45 g、1.7 mmol)のテトラヒドロフラン溶液(8 mL)をカニューレを用いて添加した。その暗色混合物を-40℃まで2時間かけて徐々に加温した。塩化アセチル(0.36 mL、5.0 mmol)を添加し、その混合物を23℃で2時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(50 mL)を添加し、水層をジエチルエーテル(2×50 mL)で抽出した。混合有機抽出物をMgSO_４で脱水し、ろ過し、濃縮した。その褐色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:4〜1:1)によって精製し、淡褐色オイル38(0.14 g、19%)を得た。

化合物59

38(140 mg、0.32 mmol)、トリフルオロ酢酸(53 μL、0.68 mmol)およびトリエチルシラン(0.42 mL、2.6 mmol)の混合物を、1.2-ジクロロエタン(2 mL)を含有するYoung管に注いだ。この反応容器を密封し、90℃で22時間加熱した。冷却後、容器を開け、内容物をクロロホルム(100 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(50 mL)で中和し、層分離させた。水層をクロロホルムで繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その暗赤色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:4〜1:3)によって精製してオレンジ色の固体59(72 mg、23%)を得た。

化合物64

水性NH_４OH(6 mL、32%)を、59(48 mg、0.14 mmol)の1.4-ジオキサン(5 mL)溶液に添加した。その黄色混合物を封管中105℃で48時間加熱した。得られた褐色混合物を減圧濃縮し、その黄色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)によって精製し、黄色固体64(5 mg、12%)を得た。

化合物39

n-BuLi溶液(1.4 mL、3.50 mmol、へキサン中2.5 M)を、2-ヨードチオフェン(0.37 mL、3.40 mmol)のテトラヒドロフラン(12 mL)溶液に-78℃で滴下した。その赤褐色混合物を-78℃で15分間撹拌し、31(0.75 g、2.83 mmol)のテトラヒドロフラン溶液をカニューレを用いて添加した。その褐色混合物を-78℃で2時間撹拌した。塩化アセチル(0.6 mL、17.0 mmol)を添加し、その混合物を23℃で2時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(50 mL)を添加し、水層をCH_２Cl_２(2×50 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その褐色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:3〜1:2)によって精製して淡褐色固体39(0.61 g)を得た。39はやや不安定であることが判明したので、即座に次のステップに使用した。
MS(ESI) m/z: 392(M+1)^＋

化合物60

39(610 mg、1.56 mmol)、トリフルオロ酢酸(0.25 mL、3.27 mmol)およびトリエチルシラン(2 mL、12.4 mmol)の混合物を、1.2-ジクロロエタン(2.5 mL)を含有するYoung管に注いだ。この反応容器を密封し、90℃で16時間加熱した。冷却後、容器を開け、内容物をCH_２Cl_２(250 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(200 mL)で中和し、層分離させた。水層をCH_２Cl_２で繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その暗赤色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:4〜1:2)によって精製して黄色固体60(72 mg、23%)を得た。

化合物65

水性NH_４OH(2.5 mL、32%)を、60(13.5 mg、0.045 mmol)の1.4-ジオキサン(1.5 mL)溶液に添加した。その黄色混合物を封管中90℃で12時間加熱した。得られた黄色混合物を減圧濃縮し、その黄色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、2%〜3%)によって精製して黄色固体65(8 mg、67%)を得た。

化合物40

n-BuLi(0.94 mL、2.36 mmol、へキサン中2.5 M)溶液を、2-ブロモピリジン(0.21 mL、2.27 mmol)のテトラヒドロフラン(10 mL)溶液に-78℃で滴下した。その赤褐色混合物を-78℃で15分間撹拌し、31(0.5 g、1.89 mmol)のテトラヒドロフラン溶液をカニューレを用いて添加した。その褐色混合物を-78℃で1時間撹拌した。塩化アセチル(0.4 mL、5.67 mmol)を添加し、その混合物を23℃で2時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(50 mL)を添加し、水層をCH_２Cl_２(2×50 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。オレンジ色の残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:3〜1:1)によって精製し、無色オイル40(0.25 g、35%)を得た。

化合物55

40(250 mg、0.65 mmol)、トリフルオロ酢酸(0.1 mL、1.36 mmol)およびトリエチルシラン(0.83 mL、5.18 mmol)の混合物を、1.2-ジクロロエタン(2 mL)を含有するYoung管に注いだ。この反応容器を密封し、90℃で24時間加熱した。冷却後、容器を開け、内容物をCH_２Cl_２(150 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100 mL)で中和し、層分離させた。水層をCH_２Cl_２で繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その暗赤色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、1:3〜1:1)によって精製し黄色固体55(34 mg、19%)を得た。

化合物56

mCPBA(34 mg、0.14 mmol、70%)の予め硫酸ナトリウムで脱水したCH_２Cl_２(2 mL)溶液を、55(34 mg、0.12 mmol)のCH_２Cl_２(3 mL)溶液に0℃で滴下した。その黄色溶液を0℃で30分間撹拌した。Na_２S_２O_３飽和水溶液(5 mL)を添加し、有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(10 mL)で洗浄した。混合水層をCH_２Cl_２(3×10 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その黄色残渣を、1.4-ジオキサン(4 mL)を含む封管中に注ぎ、NH_４OH溶液(8 mL、32%)を添加した。その褐色混合物を85℃で14時間加熱した。得られた黄色混合物を、真空中で濃縮した。その黄色固体を、フラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)によって精製して黄色固体56(6 mg、2ステップで20%)を得た。

化合物41

i-PrMgCl(0.75 mL 1.5 mmol、テトラヒドロフラン中2.0 M)を31(0.40 g、1.5 mmol)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液に0℃で滴下し、その混合物を0℃で3時間撹拌した。塩化アンモニウム飽和水溶液(25 mL)を添加し、水層を酢酸エチル(3×25 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、33%)によって精製して透明オイル41(0.28 g、61%)を得た。

化合物61

41(0.28 g、0.91 mmol)とトリフルオロ酢酸(0.15 mL、2.0 mmol)の1.2-ジクロロエタン(3 mL)溶液を、トリエチルシラン(1.28 mL、8 mmol)を含有するゴムセプタム付きYoung管に移した。アルゴンの強力な気流下で、セプタムをテフロン(登録商標)製ねじ蓋に代え、密封し、その反応容器を100℃で48時間加熱した。冷却後、反応器を開け、内容物をCH_２Cl_２(20 mL)で希釈した。その溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(20 mL)で中和し、層分離させた。水層をCH_２Cl_２で繰り返し抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、5%)で精製して黄色オイル61(176 mg、75%)を得た。

化合物66

61(146 mg、0.56 mmol)の1.4-ジオキサン(15 mL)溶液を封管中で水性NH_４OH(30 mL、32%)を用いて90℃で24時間処理した。反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(酢酸エチル:へキサン、33%)で分離して黄色固体66(50 mg、39%)を得た。

化合物25

NH_４OH溶液(3 mL、32%)を9(12 mg、0.035 mmol)の1.4-ジオキサン(2 mL)溶液に添加した。その褐色混合物を封管中85℃で14時間加熱した。得られた黄色混合物を真空中で濃縮し、CH_２Cl_２(5 mL)を添加し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、溶媒を減圧蒸発させた。その黄色固体をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、2%〜3%)によって精製して黄色固体25(8 mg、73%)を得た。

化合物68

化合物25(0.6 g、1.95 mmol)を、HClの1.4-ジオキサン溶液(45 mL、5.0 N)で処理し、23℃で20時間撹拌した。その褐色懸濁液を濃縮し、ジエチルエーテル(30 mL)、ジオキサン(30 mL)で洗浄し、ろ過してオレンジ色の固体68(0.65 g)を得た。

化合物69および26

塩化アセチル(1.5 mL、0.019 mmol)を、25(6 mg、0.019 mmol)とEt_３N(3 mL、0.029 mmol)のテトラヒドロフラン(2 mL)溶液に添加した。その黄色溶液を23℃で終夜撹拌し、減圧濃縮した。その黄色残渣をCH_２Cl_２(5 ml)に溶解し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(4 mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。その黄色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、0.5% 1%)によって精製して黄色オイル69(2 mg、39%BRSM)および26(2.5 mg、47%BRSM)を得た。

化合物28

ベンジルアミン(0.5 mL、4.5 mmol)と27(160 mg、0.45 mmol)の混合物のテトラヒドロフラン(2.5 mL)溶液を14時間還流させた。溶媒を蒸発させ、その黄色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、99:1〜97:3)によって精製して黄色オイル28(90 mg、44%)を得た。

化合物72および73

mCPBA(70 mg、0.30 mmol、70%)の予め硫酸ナトリウムで脱水したCH_２Cl_２(3 mL)溶液を、25(39 mg、0.13 mmol)のCH_２Cl_２(7 mL)溶液に滴下した。その黄色溶液を23℃で2時間撹拌した。Na_２S_２O_３飽和水溶液(5 mL)を添加し、有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(5 mL)で洗浄した。混合水層をCH_２Cl_２(3×20 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その黄色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、2%〜5%)によって精製して黄色オイル72(15 mg、35%)および黄色固体73(25 mg、58%)を得た。

化合物70

25(29 mg、0.09 mmol)の1.2 ジクロロエタン(0.5 mL)懸濁液をPd/C(3 mg、10%)、TFA(14 μL、0.18 mmol)およびEt_３SiH(110 μL、0.7 mmol)を用いて封管中100℃で72時間処理した。その反応混合物をCH_２Cl_２:MeOH(20:1)で溶解し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、50:1〜95:5)で分離して25(6.5 mg)を回収し、黄色固体70(7.5 mg、39%BRSM)を得た。

化合物71

化合物70(6.5 mg、0.025 mmol)をHClの1.4-ジオキサン溶液(1.0 mL、3.8 M)で15分間処理した。その反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄し、MeOHに溶解し、濃縮してオレンジ色の固体71(7.0 mg、94%)を得た。

化合物74

マロン酸ジメチル(0.013 mL、0.11 mmol)を、23℃のNaH(4.4 mg、0.1 mmol、60%)テトラヒドロフラン(2.5 mL)懸濁液に滴下した。10分後、73(4 mg、0.011 mmol)を一括添加し、その黄色スラリーを23℃で終夜撹拌した。その反応をTLCによって追跡し、出発物質のみを観測した。その混合物を3時間還流し、冷却し、塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチした。水層をCH_２Cl_２(3×10 mL)で抽出し、混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その黄色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)によって精製して黄色固体74(1.5 mg、36%)を得た。

化合物75

メチルマグネシウムブロマイド溶液(0.037 mL、テトラヒドロフラン中3 M)を、73(25 mg、0.073 mmol)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液に0℃で滴下した。その褐色混合物を0℃で2時間および23℃で1時間撹拌した。塩化アンモニウム飽和水溶液(25 mL)を添加し、水層をCH_２Cl_２(3×20 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。そのオレンジ色の残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)によって精製して黄色固体75(14 mg、69%)を得た。

化合物76

72(5.8 mg、0.017 mmol)のMeOH(2 mL)溶液を、NaMeOの0℃MeOH(2 mL)溶液に添加した。その黄色溶液を23℃で4時間撹拌し、塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、酢酸エチル(3×10 mL)で抽出した。その混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。その黄色残渣をフラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)によって精製し黄色固体76(2.6 mg、53%)を得た。

化合物81

化合物76(30 mg)を、5.3 N HClの1.4-ジオキサン(7 mL)溶液に懸濁させた。その淡褐色混合物を23℃で2時間撹拌し、真空中で濃縮した。CH_２Cl_２(5 mL)を添加し、1分間撹拌し、再度濃縮した。1.4-ジオキサン(5 mL)を添加し、その淡褐色固体をろ過し、さらに1.4-ジオキサン(3 mL)で洗浄して81(30 mg)を得た。

化合物77

72(150 mg、0.46 mmol)のEtOH(2 mL)溶液を、過剰のNaをEtOHに添加して新たに調製したEtONaのEtOH(3 mL)溶液に0℃で添加した。その黄色溶液を23℃で5時間撹拌し、塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチし、クロロホルム(3×10 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。その黄色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、1%〜3%)によって精製して黄色固体77(96 mg、68%)を得た。

化合物82

化合物77(35 mg、0.11 mmol)をHClの1.4-ジオキサン溶液(4 mL、5.3 M)で処理し、23℃で3時間撹拌した。懸濁液を濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄し、ろ過して黄色固体82(32 mg)を得た。

化合物78

PhOH(116 mg、1.2 mmol)を、NaH(50 mg、1.2 mmol、60%)のテトラヒドロフラン(3 mL)懸濁液に0℃で添加した。72(50 mg、0.15 mmol)のテトラヒドロフラン(5 mL)懸濁液を0℃で添加し、その黄色溶液を23℃で24時間撹拌し、NaCl飽和水溶液(50 mL)でクエンチし、クロロホルム(3×50 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。その黄色残渣を、フラッシュクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、0.5%〜1.5%)によって精製して黄色固体78(20 mg、53%BRSM)を得た。

化合物79

p-メトキシベンジルアルコール(0.085 mL、0.67 mmol)を、NaH(27 mg、0.67 mmol、60%)のテトラヒドロフラン(1 mL)懸濁液に0℃で添加した。72(23 mg、0.06 mmol)のテトラヒドロフラン(2 mL)懸濁液を0℃で添加し、その黄色溶液を23℃で5時間撹拌し、塩化アンモニウム飽和水溶液(10 mL)でクエンチし、クロロホルム(3×10 mL)で抽出した。混合有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。その黄色残渣を、CH_２Cl_２:MeOH(2%)を溶離液として用いたフラッシュクロマトグラフィー法によって精製した。その黄色残渣をジエチルエーテルで洗浄し黄色固体79(12 mg、46%)を得た。

化合物80

化合物79(10 mg、0.025 mmol)を純粋なトリフリック酸(0.5 mL)に溶解し、23℃で3時間撹拌した。そのフラスコを0℃に冷却し、MeOH(1 mL)を滴下した。水性NH_４OH(1 mL、32%)を添加すると、明黄色沈殿物が生成し、それをろ過し、エーテルで洗浄して80(6 mg、78%)を得た。

化合物84

52(250 mg、0.56 mmol)のPOCl_３(2 mL)溶液を封管中100℃で48時間撹拌した。反応混合物を氷上に注ぎ、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液でpH7まで処理し、クロロホルムで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1)で分離して黄色固体84(154 mg、74%)を得た。

化合物85

84(20 mg、0.053 mmol)のp-メトキシベンジルアミン(0.2 mL)溶液を100℃で16時間撹拌した。反応混合物をクロマトグラフィー法(へキサン:酢酸エチル、4:1〜1:1)で分離して黄色固体85(29 mg、97%)を得た。

化合物86

85(40 mg、0.071 mmol)のCH_２Cl_２(5 mL)溶液を、mCPBA(20 mg、0.09 mmol、1.25当量、77%)のCH_２Cl_２(1 mL)溶液を用いて-30℃で処理し、0℃に30分間加温し、Na_２S_２O_３飽和水溶液でクエンチした。反応混合物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した(×4)。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、100:3)で分離して黄色固体86(26 mg、63%)を得た。

化合物89

84(14 mg、0.037 mmol)の乾燥CH_２Cl_２(3 mL)溶液を、mCPBA(18 mg、0.08 mmol、2.2当量、77%)のCH_２Cl_２(2 mL)溶液を用いて-30℃で処理した。その黄色溶液を0℃に30分間加温し、Na_２S_２O_３飽和水溶液で処理し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した(3×)。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して粗製ビス-スルホキシドを得た。これを4-メトキシベンジルアミン(0.1 mL、0.76 mmol)を用いて100℃で15時間処理した。その反応混合物をクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、98:2)で分離して黄色オイル89(11 mg、46%)を得た。

化合物90

化合物89(10 mg、0.015 mmol)をトリフリック酸(0.2 mL)を用いて23℃で2時間処理した。その反応混合物を0℃に冷却し、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(1 mL、32%)で処理した。その反応混合物を濃縮し、MeOH:H_２O 1:4に溶解し、MeOH:H_２O 1:1でプレコンディショニングした逆相シリカパックにかけた。そのカラムをMeOH:H_２O 1:4で洗浄して塩を除去し、MeOH:H_２O 4:1で90(1.5 mg、34%)を溶出させた。

化合物90はMeOHに不溶であり、そのトリフルオロ酢酸塩の形にしてNMRを測定した。

化合物91

化合物90(19 mg、0.065 mmol)を、無水HClの1.4-ジオキサン(3 mL、3.8 M)溶液を用いて23℃で1時間処理した。その反応混合物を濃縮し、エチルエーテルで洗浄してオレンジ色の固体91(20 mg)を得た。

化合物92

85(29 mg、0.051 mmol)のトリフリック酸(0.2 mL)溶液を23℃で2時間撹拌した。その反応混合物を0℃に冷却し、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(32%)(1 mL)で処理し、ろ過し、H_２O、MeOHおよびジエチルエーテルで洗浄して黄色固体92(10 mg、61%)を得た。

化合物93

化合物92を無水HClの1.4-ジオキサン(1 mL、3.8 M)溶液を用いて23℃で15分間処理した。その反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄してオレンジ色の固体93(10 mg)を得た。

化合物87

86の溶液を、MeOH(4 mL)中Na(30 mg、1.3 mmol)から23℃で16時間かけて調製したMeONaのMeOH溶液で処理した。その反応混合物を濃縮し、CH_２Cl_２に溶解し、塩化アンモニウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、100:3)で分離して、黄色固体87(24 mg、97%)を得た。

化合物88

化合物87(23 mg、0.04 mmol)をTfOH(0.2 mL)を用いて23℃で2.5時間処理した。その反応混合物を0℃に冷却し、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(2 mL、32%)で処理した。形成された黄色固体をテフロン(登録商標)フィルターを通してろ過し、H_２0(5 mL)、EtOH(5 mL)およびジエチルエーテル(5 mL)で洗浄してオレンジ色の固体88(15 mg)を得た。この化合物は、クロロホルムに不溶であり、そのトリフルオロ酢酸塩として特徴付けられた。

化合物94

52(100 mg、0.22 mmol)の1.4-ジオキサン(10 mL)溶液を水性NH_４OH 32%(20 mL)を用いて封管中90℃で24時間処理した。その反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、97:3)で分離して黄色固体94(83 mg、89%)を得た。

化合物95

化合物94(62 mg、0.15 mmol)をTfOH(0.3 mL)を用いて23℃で1時間処理した。その反応混合物をMeOH(1 mL)、水性NH_４OH(2 mL、32%)で処理し、ろ過し、H_２0(5 mL)、MeOH(5 mL)およびジエチルエーテル(4 mL)で洗浄した。得られた固体をクロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体95(45 mg、92%)を得た。

化合物97

化合物95(45 mg、0.14 mmol)をHClの1.4-ジオキサン(3 mL、3.8 M)溶液を用いて23℃で15分間処理した。その反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄(2×)して黄色固体97(36 mg、71%)を得た。

化合物98

Young管中の94(65 mg、0.157 mmol)、Pd/C(6 mg、10%)およびTFA(28 μL、0.36 mmol)の混合物の1.2-ジクロロエタン(1 mL)溶液を、Ar下でEt_３SiH(220 μL、1.4 mmol)を用いて100℃で72時間処理した。その反応混合物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で処理し、CH_２Cl_２で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、98:2)で分離して淡黄色固体98(13 mg、23%)を得た。

化合物100

化合物98(11 mg、0.030 mmol)をTfOH(0.3 mL)を用いて23℃で1時間処理した。その反応混合物を0℃に冷却し、MeOH(2 mL)および水性NH_４OH 32%(2 mL)で処理した。オレンジ色固体が形成され、それをろ過して取り出し、H_２0、EtOHおよびジエチルエーテルで洗浄し、TFAで処理して100(9.0 mg、76%)を得た。

化合物101

化合物100(35 mg、0.13 mmol)をHClの1.4-ジオキサン(4 mL、3.8 M)溶液を用いて0℃で10分間処理した。その反応混合物を濃縮し、MeOHに溶解し、濃縮して黄色固体101(36 mg、88%)を得た。

化合物99

94(83 mg、0.20 mmol)のCH_２Cl_２(10 mL)溶液を、0℃でmCPBA(112 mg、0.5 mmol、2.5当量、77%)溶液で処理し、23℃に3時間加温した。その反応混合物をNa_２S_２O_３飽和水溶液でクエンチし、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した(3×)。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体99(25 mg、28%)を得た。

化合物102

99(10 mg、0.022 mmol)の懸濁液を、MeOH 1 mL中でNa(15 mg、0.66 mmol)を用いて予め調製したMeONaのMeOH溶液を用いて0℃で処理した。その反応混合物を23℃で5時間撹拌した。次いで、それをCH_２Cl_２と塩化アンモニウム飽和水溶液の間に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮して黄色固体102(5.6 mg、64%)を得た。

化合物103

99(10 mg、0.022 mmol)の懸濁液を、EtOH(1 mL)中のNa(15 mg、0.66 mmol)を用いて予め調製したEtONaのEtOH溶液を用いて0℃で6時間処理した。その反応混合物をクロロホルムと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体103(8 mg、88%)を得た。

化合物104

NaH(18 mg、0.44 mmol、60%)のテトラヒドロフラン(2 mL)懸濁液をベンジルアルコール(45 μL、0.44 mmol)で処理した。99(10 mg、0.022 mmol)の乾燥テトラヒドロフラン(3 mL)溶液を滴下し、23℃で6時間撹拌した。その反応混合物をクロロホルムと塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２〜CH_２Cl_２:MeOH 95:5)で分離して黄色固体104(9.0 mg、86%)を得た。

化合物105

102(4.0 mg、0.01 mmol)のトリフリック(triflic acid)酸(0.2 mL)溶液を23℃で1時間撹拌した。その反応混合物を0℃で冷却して、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(32%)(1 mL)を滴下して処理した。その反応混合物をろ過し、H_２0、MeOHおよびジエチルエーテルで洗浄し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体105(1.8 mg、58%)を得た。

化合物106

104(7 mg、0.017 mmol)のトリフリック酸(0.2 mL)溶液を23℃で1.5時間撹拌した。その反応混合物を、MeOH(1 mL)および水性NH_４OH(32%)(1 mL)を用いて0℃で処理し、ろ過し、H_２0、EtOHおよびジエチルエーテルで洗浄してオレンジ色の固体106(6.6 mg、95%)を得た。

化合物96

52(24 mg、0.05 mmol)のCH_２Cl_２(3 mL)溶液を、mCPBA(30 mg、0.14 mmol、77%)のCH_２Cl_２溶液を用いて-30℃で処理した。その反応混合物を0℃に加温し、30分間撹拌した。その反応混合物をNa_２S_２O_３飽和水溶液および炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その粗製物を1.4-ジオキサン(6 mL)に溶解し、封管中で水性NH_４OH(32%)(10 mL)で処理し、100℃で16時間撹拌した。その反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、98:2〜95:5)で分離して黄色固体96(6 mg、29%)を得た。

化合物107

84(50 mg、0.135 mmol)の1.4-ジオキサン:H_２0(50:50、8 mL)混合物溶液を、封管中100℃で16時間撹拌した。その反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、98:2)で分離して黄色固体107(40 mg、86%)を得た。

化合物108

化合物107(25 mg、0.073 mmol)を、無水HCl(0.5 mL、1.4-ジオキサン中3.8 N)を用いて23℃で10分間処理した。その反応混合物を濃縮し、MeOHに溶解し、濃縮して黄色固体108(28 mg、100%)を得た。

化合物109

化合物107(10 mg、0.029 mmol)を、Na(30 mg、1.3 mmol)とMeOH(4 mL)から新たに調製したMeONaのMeOH溶液を用いて80℃で22時間処理した。その反応混合物を濃縮し、CH_２Cl_２と塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体109(15 mg、53%)を得た。

化合物110および111

107(50 mg、0.146 mmol)のCH_２Cl_２(10 mL)溶液を、mCPBA(82 mg、77%、0.37 mmol)のCH_２Cl_２(1 mL)溶液を用いて-30℃で処理した。その反応混合物を23℃で2時間撹拌し、Na_２S_２O_３飽和水溶液で処理し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液とCH_２Cl_２に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体110(23 mg、44%)および111(29 mg、53%)を得た。

化合物112

化合物111(29 mg、0.077 mmol)を、Na(30 mg、1.3 mmol)とMeOH(4 mL)から新たに調製したメタノール性(methanolic)MeONaのMeOH溶液を用いて、23℃で6時間処理した。その反応混合物を濃縮し、CH_２Cl_２と塩化アンモニウム飽和水溶液に分配した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体112(17 mg、68%)を得た。

化合物113

84(50 mg、0.14 mmol)のCH_２Cl_２(10 mL)溶液を、mCPBA(76 mg、0.34 mmol、77%)のCH_２Cl_２(2 mL)溶液を用いて-30℃で処理した。その反応混合物を0℃に加温し、30分間撹拌した。その反応混合物を、Na_２S_２O_３飽和水溶液および炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で処理した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その反応粗製物を1.4-ジオキサン(4 mL)に溶解し、水性NH_４OH(32%)(4 mL)で処理した。その反応混合物を封管に注ぎ、85℃で16時間撹拌した。その反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH、95:5)で分離して黄色固体113(17 mg、40%)を得た。

化合物83

化合物113(12 mg、0.038 mmol)を無水HClの1.4-ジオキサン(0.5 mL、3.8 N)を用いて23℃で10分間処理した。その反応混合物を濃縮し、MeOH(1 mL)に溶解し、濃縮して黄色固体83(13.9 mg、95%)を得た。

化合物115

113(5.0 mg、0.016 mmol)、18-クラウン-6(10 mg、0.038 mmol)および乾燥KF(60 mg、1.2 mmol)の混合物のDMSO(0.5 mL)溶液を封管中140℃で16時間加熱した。その反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH 95:5)で分離して黄色固体115(3.5 mg、74%)を得た。

化合物114

化合物113(10 mg、0.032 mmol)を、MeOHにNa(30 mg、1.3 mmol)を添加して調製したMeONaのMeOH:テトラヒドロフラン2:1(6 mL)溶液を用いて90℃で40時間処理した。その反応混合物を濃縮し、CH_２Cl_２に溶解し、塩化アンモニウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。その残渣を、クロマトグラフィー法(CH_２Cl_２:MeOH 95:5)で分離して黄色固体114(4.0 mg、41%)を得た。

化合物116

化合物114(1-7 mg、0.006 mmol)をHClの1.4-ジオキサン(0.5 mL、5 N)を用いて23℃で20分間処理した。その反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルに懸濁し、濃縮して黄色固体116(1.2 mg、57%)を得た。

抗腫瘍スクリーニングのためのバイオアッセイ
これらのアッセイの最終目的は、腫瘍細胞を継続的に試験試料にさらすことによって、「インビトロでの」腫瘍細胞培養物の増殖を中断させることである。

細胞系
名称 N°ATCC 種組織特性
P-388 CCL-46 マウス腹水リンパ腫
K-562 CCL-243 ヒト白血病赤白血病(胸水)
A-549 CCL-185 ヒト肺肺癌「NSCL」
SK-MEL-28 HTB-72 ヒトメラノーマ悪性メラノーマ
HT-29 HTB-38 ヒト結腸結腸腺癌
LoVo CCL-229 ヒト結腸結腸腺癌
LoVo-Dox ヒト結腸結腸腺癌(MDR)
SW620 CCL-228 ヒト結腸結腸腺癌(リンパ節転移)
DU-145 HTB-81 ヒト前立腺前立腺癌、アンドロゲン
受容体ではない
LNCaP CRL-1740 ヒト前立腺アンドロゲン受容体を有する前立腺腺癌
SK-BR-3 HTB-30 ヒト乳房乳房腺癌、Her2/neu+、(胸水)
MCF-7 HTB-22 ヒト乳房乳房腺癌、(胸水)
MDA-MB-231 HTB-26 ヒト乳房乳房腺癌、Her2/neu+、(胸水)
IGROV-1 ヒト卵巣卵巣腺癌
IGROV-ET ヒト卵巣 ET-743耐性細胞の特徴を示す卵巣腺癌
SK-OV-3 HTB-77 ヒト卵巣卵巣腺癌(悪性腹水症)
OVCAR-3 HTB-161 ヒト卵巣卵巣腺癌
HeLa CCL-2 ヒト頚部頚部類上皮細胞癌
HeLa-APL CCL-3 ヒト頚部アプリジン(aplidine)耐性細胞の特徴を
示す頚部類上皮細胞癌
A-498 HTB-44 ヒト腎臓腎臓癌
PANC-1 CRL-1469 ヒトすい臓すい臓類上皮細胞癌
HMEC1 ヒト内皮

1°-細胞計数による細胞増殖の阻害
このアッセイ法では、直径16 mmの24ウェルマルチディッシュを使用する(Bergeron、1984; Schroeder、1981)。使用する腫瘍細胞系は、DBA/2マウス由来のリンパ新生物の懸濁液培養物であるP-388(ATCC CCL 46)、ヒト肺癌の単層培養物であるA-549(ATCC CCL 185)、ヒト結腸癌の単層培養物であるHT-29(ATCC HTB-38)、ヒトメラノーマの単層培養物であるMEL-28(ATCC HTB-72)、およびヒト前立腺癌の単層培養物であるDU-145(ATCC HTB-81)である。

アールの平衡塩類、非必須アミノ酸、2.0 mM L-グルタミンを含み、炭酸水素ナトリウムを含まず(EMEM/neaa)、10%ウシ胎児血清(FCS)、10^−２ M炭酸水素ナトリウムおよび0.1 U/lペニシリン G + 0.1 g/l硫酸ストレプトマイシンを補充したEagleの最小必須培地において、対数増殖期に細胞を維持した。実験のために、集密前の培養物からトリプシンを用いて細胞を採取し、新鮮な培地に再懸濁してから平板培養を行った。

16 mm直径のウェル中の様々な濃度の試験試料を含有する、1 mlの一定分量のEMEM 5%FCS中に、P-388細胞を1×10^４細胞/ウェルで播種した。細胞が依然として確実に対数増殖期にあるようにするために、薬物を含まない別の組の培養物を増殖対照として播種した。すべての測定を2回繰り返した。湿度98%の雰囲気中、37℃、5%CO_２での3日間のインキュベーション後、薬物を含むウェルにおける増殖を対照ウェルにおける増殖と比較することによって概略のIC50を決定した。

16 mm直径のウェル中の様々な濃度の試験試料を含有する、1 mlの一定分量のEMEM 5%FCS中に、A-549、HT-29、MEL-28およびDU-145の各細胞を1×10^４細胞/ウェルで播種した。細胞が依然として確実に対数増殖期にあるようにするために、薬物を含まない別の組の培養物を増殖対照として播種した。すべての測定を2回繰り返した。湿度98%の雰囲気中、37℃、5%CO_２での3日間のインキュベーション後、0.1%クリスタルバイオレットで細胞を染色した。薬物を含むウェルにおける増殖を対照ウェルにおける増殖と比較することによって概略のIC50を決定した。

活性を定量するために、インキュベーション期間後、細胞をトリプシン処理し、コールターカウンターZMで数えた。カウント(ウェル当たりの正味細胞数)はすべて、反復実験のウェル2個の平均値である。%G、薬物を含まない培養物に対する増殖パーセント。これらのアッセイの結果を用いて用量-応答曲線を作成し、それからより正確なIC50値(50%細胞増殖阻害をもたらす試料濃度)を決定する。

得られた結果から、ある種の薬物の癌治療候補としての有用性を予測することができる。この技術では、1μg/mlよりも小さなIC50値を示す化合物を選択してさらに試験を続行する。IC50のデータによって、ある薬物が細胞増殖抑制性だけでなく、腫瘍を縮小させる能力も有し得るかどうかを予測することが可能である。

2°- 比色アッセイによる細胞増殖の阻害
スルホローダミンB(SRB)反応を使用した比色型のアッセイを、[Philip Skehan等(1990)、New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening、J. Natl. Cancer Inst.、82:1107〜1112に記載された技術に従い]細胞増殖および生存度の定量測定に応用した。

このアッセイ方法は、直径9 mmの96ウェル細胞培養マイクロプレートを使用する(Faircloth、1988; Mosmann、1983)。細胞系の大部分は、American Type Culture Collection(ATCC)から得られ、様々なタイプのヒトの癌に由来する。

各細胞を、0.1 g/lペニシリンおよび0.1 g/l硫酸ストレプトマイシンを補充したRPMI 1640 10% FBS中に維持し、次いで37℃、5%CO_２および湿度98%でインキュベートする。実験では、集密前の培養物からトリプシンを用いて細胞を採取し、新鮮な培地に再懸濁してから平板培養を行った。

96ウェルマイクロタイタープレートにおいて、195μlの一定分量の培地中に5×10^３細胞/ウェルで細胞を播種し、薬物のない培地で18時間増殖させることによってプレート表面に細胞を付着させる。その後、DMSO/EtOH/PBS(0.5:0.5:99)に溶解した10〜10^−８μg/mlの試料を5μlの一定分量添加した。48時間暴露した後、SRB法によって抗腫瘍効果を測定する。すなわち、50%(wt/vol)冷トリクロロ酢酸(TCA)50μlを添加し、60分間4℃でインキュベートすることによって細胞を固定する。プレートを脱イオン水で洗浄し乾燥させる。SRB溶液(1%酢酸中0.4%wt/vol)100μlを各マイクロタイターウェルに添加し、室温で10分間インキュベートする。未結合のSRBを1%酢酸で洗浄して除去する。プレートを風乾し、結合している染料をトリス緩衝液で溶解する。自動分光光度プレートリーダーにより、490 nmの単一波長で光学密度を読み取る。

反復実験のウェル3個から、データの平均+/-SD値を計算する。細胞応答に対するいくつかのパラメータ、すなわち、GI=増殖阻害、TGI=総増殖阻害(細胞静止作用)およびLC=細胞死滅(細胞傷害効果)を計算することができる。

得られた結果から、ある種の薬物の癌治療候補としての有用性を予測することができる。この技術では、10μg/mlよりも小さなIC50値を示す化合物を選択してさらに試験を続行する。IC50のデータによって、ある薬物が細胞増殖抑制性だけでなく、腫瘍を縮小させる能力も有し得るかどうかを予測することが可能である。

「参考文献」

Claims

一般式(5a)の化合物：

(式中、R _１は、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO _２ R'、NO _２、NH _２、NHR'、N(R') _２、NHCOR'、NHSO _２ R'、CN、ハロゲン、C(=O)H、C(=O)R'、CO _２ H、CO _２ R'、カルボキシアルキル、C _１〜C _１２アルキル、C _２〜C _１２アルケニル、C _２〜C _１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択され、
X _１、X_２、R _２、R_３、R _４、R _５、R_６、およびR_７がそれぞれ独立に、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO_２R'、NO_２、NH_２、NHR'、N(R')_２、NHCOR'、NHSO_２R'、CN、ハロゲン、C(=O)H、C(=O)R'、CO_２H、CO_２R'、カルボキシアルキル、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択され、R'基の各々が独立に、H、OH、SH、NO_２、NH_２、CN、ハロゲン、C(=O)H、C(=O)CH_３、CO_２H、CO_２CH_３、C_１〜C_１２アルキル、C_２〜C_１２アルケニル、C_２〜C_１２アルキニル、アリール、アラルキルおよび複素環式芳香族からなる群から選択され、R_１とR_２の各基の対は結合して縮合ベンゼン環構造を形成してもよく、
前記複素環式芳香族の基は、N原子、O原子またはS原子から選択される1、2または3個のヘテロ原子を含む)。
R_１がC _１〜C _６アルキルまたはハロゲンである、請求項1に記載の化合物。
R_１がメチルまたはクロロである、請求項2に記載の化合物。
R_１とR_２が縮合ベンゼン環を形成している、請求項1に記載の化合物。
前記縮合環がOR'から選択される置換基を有する、請求項4に記載の化合物。
前記縮合環の前記置換基が1つまたは複数のヒドロキシまたはC _１〜C _４アルコキシを含む、請求項5に記載の化合物。
前記縮合環の前記置換基が1つまたは複数のヒドロキシまたはメトキシを含む、請求項6に記載の化合物。
R_２が水素またはハロゲンである、請求項1ないし3のいずれか一項に記載の化合物。
R_２が水素、フルオロまたはクロロである、請求項8に記載の化合物。
R_３が水素、OR'、NR'_２またはハロゲンである、請求項1ないし9のいずれか一項に記載の化合物。
R_３が水素、ヒドロキシ、C _１〜C _６アルコキシ、ベンジルオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノまたはハロゲンである、請求項10に記載の化合物。
R_３が水素、ヒドロキシ、メトキシ、ベンジルオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノまたはクロロである、請求項11に記載の化合物。
R_３が水素である、請求項12に記載の化合物。
R_６が水素である、請求項1ないし13のいずれか一項に記載の化合物。
R_７が水素である、請求項1ないし14のいずれか一項に記載の化合物。
R_４が水素である、請求項1ないし15のいずれか一項に記載の化合物。
R_５が水素である、請求項1ないし16のいずれか一項に記載の化合物。
X_１が水素、アルキル、OR'、NR'_２、SR'、SOR'、SO_２R'、カルボキシアルキルまたはアラルキルである、請求項1ないし17のいずれか一項に記載の化合物。
X_１が水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニルまたはジカルボキシアルキルである、請求項18に記載の化合物。
X_１が水素、メチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、フェノキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノ、メチルチオ、メチルスルフィニル、メチルスルホニルまたはジメチルカルボキシエチルである、請求項19に記載の化合物。
X_２がNR'_２またはSR'である、請求項1ないし20のいずれか一項に記載の化合物。
X_２がNH_２またはアルキルチオである、請求項21に記載の化合物。
X_２がNH_２またはメチルチオである、請求項22に記載の化合物。
式(11)の化合物である、請求項1に記載の化合物：

(式中、X _１、X _２、及びR _９で定義される置換基は、それぞれ独立に、H、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO _２ R'、NO _２、NH _２、NHR'、N(R') _２、NHCOR'、NHSO _２ R'、CN、ハロゲン、C(=O)H、C(=O)R'、CO _２ H、CO _２ R'、カルボキシアルキル、C _１〜C _１２アルキル、C _２〜C _１２アルケニル、C _２〜C _１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択され、
R'基の各々は独立に、H、OH、SH、NO _２、NH _２、CN、ハロゲン、C(=O)H、C(=O)CH _３、CO _２ H、CO _２ CH _３、C _１〜C _１２アルキル、C _２〜C _１２アルケニル、C _２〜C _１２アルキニル、アリール、アラルキルおよび複素環式芳香族からなる群から選択される)。
1つまたは複数の前記置換基が以下のとおり、すなわち、
X_１が水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニルまたはジカルボキシアルキルであり、
X_２がNH_２またはアルキルチオであり、
R_１がアルキルまたはハロゲンであり、
R_３が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ベンジルオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノまたはハロゲンであり、
R_２が水素またはハロゲンである、
請求項1に記載の化合物。
1つまたは複数の前記置換基が以下のとおり、すなわち、
X_１が水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、メトキシベンジルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニルまたはジカルボキシアルキルであり、
X_２がNH_２またはアルキルチオであり、
R_９が水素またはアルコキシである
式(11)の化合物である、請求項24に記載の化合物。
活性成分として請求項1から26のいずれか一項に記載の化合物を含有する薬剤組成物。
癌治療に使用する薬物の調製における、請求項1から26のいずれか一項に記載の化合物の使用。
下式：

の、請求項24に記載の化合物。
下式：

の、請求項1に記載の化合物。
下式：

の、請求項1に記載の化合物。
下式：

の化合物。
R _１が、OH、OR'、SH、SR'、SOR'、SO _２ R'、NO _２、NH _２、NHR'、N(R') _２、NHCOR'、NHSO _２ R'、CN、ハロゲン、C(=O)H、C(=O)R'、CO _２ H、CO _２ R'、カルボキシアルキル、C _２〜C _１２アルケニル、C _２〜C _１２アルキニル、置換または非置換アリール、置換または非置換アラルキル、および置換または非置換複素環式芳香族からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。