JP3774430B2 - ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法 - Google Patents
ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3774430B2 JP3774430B2 JP2002349756A JP2002349756A JP3774430B2 JP 3774430 B2 JP3774430 B2 JP 3774430B2 JP 2002349756 A JP2002349756 A JP 2002349756A JP 2002349756 A JP2002349756 A JP 2002349756A JP 3774430 B2 JP3774430 B2 JP 3774430B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oligosaccharide
- penicillium
- arabino
- arabinan
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】
【０００２】
本発明は、ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法に関し、詳細には、農産副産物であるビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分を原料として用いた、オリゴ糖含有物の製造方法に関する。
【０００３】
【従来の技術】
【０００４】
農産副産物であるビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕のアラビナン含有繊維分は、家畜飼料や燃料として使用する場合もあるが、大半が廃棄物として焼却処理等されている。
そのため、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕のアラビナン含有繊維分について、有効利用の開発が望まれていた。
【０００５】
なお、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕等のアラビナン含有繊維分を分解する酵素としては、細菌［バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）］、糸状菌［アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）］などを起源としたものが知られている。
しかしながら、前記の酵素から生成、遊離される糖は、単糖であるアラビノースが大半を占め、アラビノオリゴ糖含有物の製造方法として適したものではない。
【０００６】
また、原料として１，５−アラビナンを用い、該原料にバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来の酵素を作用させたアラビノオリゴ糖の製造方法が報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００７】
【非特許文献１】
バイオケミカル バイオフィルジカル アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ），４１０，１９７５年，ｐ．３５４−３６０
【０００８】
しかしながら、前記方法で原料として用いる１，５−アラビナンを得るためには、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕等のアラビナン含有繊維分に対し、アルカリ処理及び酵素処理を行った後に、ゲル濾過クロマトグラフィーによる精製を繰り返して行う必要があった。
従って、１，５−アラビナンを原料とした場合、効率的にアラビノオリゴ糖を製造することは困難であった。
また、この方法によると、有用成分も除去してしまう恐れもあった。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明が解決しようとする課題は、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分の有効利用を図り、ビート搾汁粕などを直接作用させるため効率的にアラビノオリゴ糖含有物を製造する手段を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の課題を解決するための手段は、次のとおりである。
【００１３】
第１に、ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）ＧＡＬＡ２２を培養してオリゴ糖生成酵素を調製し、該オリゴ糖生成酵素を用いてアラビナン含有繊維分を加水分解し、オリゴ糖を製造することを特徴とする、ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
第２に、オリゴ糖がアラビノオリゴ糖である、上記第１に記載のペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
ここで、アラビナン含有繊維分としては、ビート搾汁粕、ビートファイバー、ビートパルプ、リンゴ搾汁粕、リンゴファイバーの他にも、落花生粕、柑橘類の果皮又は果肉、オカラ、ダイズファイバーのいずれか一つ以上のものを使用できる。
第３に、前記アラビナン含有繊維分として、ビート搾汁粕を用いる、上記第１または第２に記載のペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
第４に、ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養して調製した、オリゴ糖含有物生成酵素。
【００１４】
本発明におけるアラビノオリゴ糖とは、アラビノースが１〜１０分子含まれる２〜１０糖からなるオリゴ糖である。その結合様式は、α−１，５結合からなる直鎖状のものに限らず、α−１，２及びα−１，３結合を初めとする各種の分岐構造を有するものも含まれる。これには、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース及びガラクツロン酸のようなアラビノース以外の糖の少なくとも一つが、還元末端や非還元末端、もしくは分子内に結合しているものも含まれる。
【００１５】
ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２は、アラビノオリゴ糖生成酵素を高力価で産生するもので、本発明者らが、農産副産物を分解利用する微生物に着目し、自然界よりアラビノオリゴ糖生成酵素の産生が可能な微生物を見い出すべく鋭意研究を行った結果、得られたものである。
そして、このペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する糸状菌に由来するアラビノオリゴ糖生成酵素を用いることで、農産副産物であるアラビナン含有繊維分からアラビナンを分離抽出することなく直接作用させることにより、効率的にアラビノオリゴ糖含有物を製造する方法を見い出し、本発明を完成させるに至った。
【００１６】
本発明のアラビノオリゴ糖生成酵素を産生する菌株は、その菌学的性質及び２８ＳｒＤＮＡ−Ｄ２塩基配列解析から、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する新規な菌株と同定された。
本発明者らは、本菌株をペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）ＧＡＬＡ２２と命名して、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託し、寄託番号ＦＥＲＭＰ−１８９４１を得た。
【００１７】
ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２の菌学的性質は、次のとおりである。
【００１８】
（１）ＣＹＡ寒天プレート
３７℃及び５℃での生育が確認された。
菌糸は、ビロードからフェルト状でｗｈｉｔｅ（Ａ１）を呈し、平坦なコロニー形状を示した。
培養一週間の生育は、２５℃プレートで直径４３ｍｍ程度、３７℃プレートで直径４５ｍｍ程度に達した。
滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）及び可溶性色素（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔ）の産生は、認められなかった。
ＣＹＡスライド培養検体の光学顕微鏡による観察では、ペニシラス様の分生子形成構造が確認された。
分生子柄は、最大で三輪性（ｔｅｒｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｅ）で、一輪性（ｍｏｎｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｅ）や二輪性（ｂｉｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｅ）のものも多く観察された。
分生子形成細胞は、フィアロ型（ｐｈｉａｌｉｄｉｃ）であった。
柄（ｓｔｉｐｅ）は、中程度のものが多く観察された。
表面は、やや粗面（ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｒｏｕｇｈ）となった。
メトレ（ｍｅｔｕｌａ）は、柄先端より２−３軸の分岐（ｂｒａｎｃｈｉｎｇ）を示し、比較的長いものが大半となった。
メトレ先端部に、頂嚢（ｖｅｓｉｃｌｅ）は認められなかった。
フィアライド（ｐｈｉａｌｉｄｅ）は、メトレ及び柄の先端部より４−７本輪生し、首の長い針状（ａｃｅｒｏｓｅ）となった。
メトレ、フィアライド共に、表面は粗面（ｒｏｕｇｈ）であった。
フィアライドは、圧着（ａｐｐｒｅｓｓｅｄ）していた。
分生子は、１細胞性で表面は粗面、形状は長楕円形（ｌｏｎｇ ｅｌｌｉｐｓｏｉｄａｌ）から紡錘形（ｆｕｊｉｆｏｒｍ）となった。
分生子は、鎖状に連なった。
長期培養の検体からもテレオモルフの形成は確認されなかった。
（２）ＭＥＡ寒天プレート
菌糸は、ビロードからフェルト状でｗｈｉｔｅ（Ａ１）を呈し、平坦なコロニー形状を示した。
培養開始後３日目より分生子によるコロニー色調の変化が認められ、ｇｒｅｅｎｉｓｈ ｇｒｅｙ−ｄｕｌｌ ｇｒｅｅｎ（２６Ｃ−Ｄ２−４）の分生子を形成した。
裏面色調は、表面とほぼ同様となった。
培養一週間の生育は、５５ｍｍ程度に達した。
滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）及び可溶性色素（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔ）の産生は、認められなかった。
長期培養の検体からもテレオモルフの形成は確認されなかった。
（３）Ｇ２５Ｎ寒天プレート
菌糸は、ビロードからフェルト状でｗｈｉｔｅ（Ａ１）を呈し、平坦なコロニー形状を示した。
培養開始後３日目より分生子によるコロニー色調の変化が認められ、Ｇｒｅｅｎｉｓｈ ｇｒｅｙ−ｄｕｌｌ ｇｒｅｅｎ（２６Ｃ−Ｄ２−４）の分生子を形成した。
裏面色調は、表面とほぼ同様となった。
培養一週間の生育は、４ｍｍに達した。
滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）及び可溶性色素（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔ）の産生は、認められなかった。
長期培養の検体からもテレオモルフの形成は確認されなかった。
【００１９】
また、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２の２８ＳｒＤＮＡ−Ｄ２の塩基配列は、次のとおりである。
【００２０】
【００２１】
【発明の実施の形態】
【００２２】
次に、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２によるアラビノオリゴ糖含有物の製造方法について説明する。
まず、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養し、アラビノオリゴ糖生成酵素を調製する。
【００２３】
該本菌株の培養は、炭素源、窒素源、無機塩類等を含む液体培地あるいは固形培地を用いて好気的条件下で実施する。
炭素源としては、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分などが使用される。
これら繊維分は、粉砕処理などを実施したものを用いることもできる。
窒素源としては、微生物により利用可能な窒素化合物、例えば酵母エキス、ペプトン、麦芽エキス、コーンスティープリカー等が使用される。
無機塩類としては、例えば硫酸マグネシウム、硝酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、水酸化カルシウム等の塩類が使用される。
尚、これらの炭素源、窒素源、無機塩類の他に、更に必要に応じて、糸状菌の生育に必要な各種の有機物、無機物を添加することができる。
上記の培地での培養方法は、固体培養あるいは液体培養の何れを用いても良いが、振盪培養あるいは発酵糟等を用いた通気攪拌培養が望ましい。
培養温度は、生育出来る範囲内なら特に限定されないが、３０℃付近が望ましい。
培養ｐＨは、生育出来る範囲内なら特に限定されないが、ｐＨ３〜５付近が望ましい。
培養時間は、特に限定されないが、２４〜１６８時間程度が望ましい。
【００２４】
上記のようにして培養した後、培養物中から、目的物であるアラビノオリゴ糖生成酵素を採取及び精製するには、通常使用されている周知の手段、例えば濾過、遠心分離、イオン交換またはゲル濾過クロマトグラフィー、脱塩、膜濃縮、膜分離等の操作を必要に応じて適宜組み合わせて用いることができる。
一例を挙げれば、培養液から濾過、遠心分離等によって菌体を除去し、透析膜による脱塩操作を行なったものを酵素液として用いることができる。
ここで、酵素液は回収し、繰り返し使用することも可能である。
【００２５】
アラビノオリゴ糖含有物は、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分に、上記の方法で得られた酵素液を加えることにより糖化を行うことで製造する。
反応温度は、酵素が失活しない範囲内、即ち２０〜７０℃、好ましくは４０〜６０℃の範囲がよい。
酵素反応ｐＨは、酵素の至適条件下で反応を行うことが望ましく、ｐＨ３〜９、好ましくはｐＨ４〜７の範囲とする。
反応時間は、使用するアラビナン含有繊維分の組成や形状と酵素添加量に依存するが、通常３〜７２時間に設定するのが作業上好ましい。
反応が進むにつれ、アラビナン含有繊維分が加水分解され、アラビノオリゴ糖が生成、遊離するので、これを反応終了後、常法によって反応液中から分離する。
即ち、かかる場合に当該分野において通常使用されている周知の手段、例えば濾過、遠心分離、イオン交換または吸着クロマトグラフィー、膜濃縮、膜分離、溶媒抽出、減圧濃縮、結晶化等の操作を必要に応じて適宜組み合わせて用いることができる。
一例を挙げれば、反応液から濾過、遠心分離等によって繊維分等の残渣を除去し、次いでこの溶液を活性炭で処理して着色物質などを除き、更にイオン交換樹脂により脱イオンした後、濃縮してシロップあるいは粉末状にすることができる。
【００２６】
次に、本発明を実施例等により詳しく説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２７】
【実施例１】
【００２８】
ａ）酵素液の調製
粉砕処理したビート搾汁粕２．０ｇ、リン酸二水素カリウム０．３ｇ、硫酸マグネシウム０．０５ｇ、コーンスティープリカー０．０５ｇからなる培地１００ｍｌを含む５００ｍｌ容坂口フラスコに、スラントから白金耳でペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を、１エーゼ接種した。
３０℃、１２５ｒｐｍで９６時間振盪培養した後、遠心分離（５０００Ｇ、１０分）及びフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により、菌体及び培地残渣を除去した。
続いて、分画分子量５０００の透析膜にて、２４時間透析した溶液を酵素液とした。
【００２９】
ｂ）アラビノオリゴ糖含有物の製造
２ｍｌマイクロチューブに、上記で調製した酵素液０．５ｍｌ、２００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）０．５ｍｌ及び粉砕処理したビート搾汁粕０．０２ｇを加え、２００ｒｐｍ、５０℃、２４時間振盪した。
５分間の煮沸で酵素を失活させた後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により有用糖質を含む溶液を得た。
この溶液中の構成糖は、高速陰イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
その結果、ビート搾汁粕１ｇ当たり、６１．７ｍｇのアラビノオリゴ糖が生成、遊離したことが確認された。
【００３０】
【比較例１】
【００３１】
農産副産物を分解利用する微生物アスペルギルス・ニガーＩＦＯ０６６６２、アスペルギルス・ニガーＩＦＯ０１５４０、アスペルギルス・ニガーＩＦＯ１５４３及びアスペルギルス・アワモリＩＦＯ１６１７の４種類の菌株を用いて、実施例１と同様の条件及び操作方法で、酵素液を調製した。
得られた各酵素液を用いて実施例１と同様の条件及び操作方法で、ビート搾汁粕を分解し、ビート搾汁粕からの生成、遊離糖量を測定した。
その結果は、次のとおりであった。
【００３２】
アスペルギルス・ニガーＩＦＯ６６６２は、１０．９ｍｇであった。
アスペルギルス・ニガーＩＦＯ１５４０は、８．３ｍｇであった。
アスペルギルス・ニガーＩＦＯ１５４３は、１０．４ｍｇであった。
アスペルギルス・アワモリＩＦ０１６１７は、１１．５ｍｇであった。
【００３３】
上記の全ての菌株においてビート搾汁粕１ｇ当たり約１０ｍｇのオリゴ糖が生成、遊離したことが確認された。
これに対し、実施例１では、ビート搾汁粕１ｇ当たり６１．７ｍｇのオリゴ糖が得られている。
したがって、本発明の製造法により、ビート搾汁粕などを直接作用させるため、効率的にアラビノオリゴ糖を得ることができることが確認された。
【００３４】
【実施例２】
【００３５】
ａ）酵素液の調製
ビート搾汁粕を粉末状に加工したビートファイバー（日本甜菜製糖製）２０．０ｇ、リン酸二水素カリウム３．０ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、コーンスティープリカー０．５ｇからなる培地１リットルを含むジャーファーメンター（サクラ精機製、培養槽容量１．５Ｌ）に、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養したスラントへ、滅菌水５ｍｌと消泡剤を数滴入れ懸濁させたものを無菌的に植菌し、温度３０℃、ｐＨ５．０、通気量０．５Ｌ／ｍｉｎ、回転数３００ｒｐｍで７２時間通気撹拝培養した。
培養終了後、遠心分離（５０００Ｇ、１０分）及び孔径０．４５μｍのフィルターにより、菌体及び培地残渣を除去した。
続いて、分画分子量１００００の限外濾過膜にて、２０倍量まで濃縮した溶液を酵素液とした。
【００３６】
ｂ）アラビノオリゴ糖含有物の製造
２０ｍｌ用のバイアル瓶へ、上記で調製した酵素液０．３５ｍｌに５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）９．２５ｇと粉砕処理したビート搾汁粕０．４ｇを加えて、５０℃、２４時間、マグネティックスターラーにて撹拌した。
５分間の煮沸で酵素を失活させた後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により、有用糖質を含む溶液を得た。
溶液中の糖組成は、高速陰イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
ビート搾汁粕１ｇ中からの各構成糖の遊離糖量（ｍｇ）を、次に示す。
【００３７】
アラビノースが、３６．２ｍｇであった。
アラビノビオースが、３１．１ｍｇであった。
アラビノトリオースが、２２．４ｍｇであった。
アラビノテトラオースが、６．４ｍｇであった。
アラビノペンタオースが、１．０ｍｇであった。
アラビノヘキサオースが、１．１ｍｇであった。
アラビノヘプタオースが、２．１ｍｇであった。
アラビノオクタオースが、１．０ｍｇであった。
ガラクツロン酸が、２９．９ｍｇであった。
その他の単糖が、１．９ｍｇであった。
【００３８】
上記結果に示すように、本実施例においては、アラビノビオース及びアラビノトリオースを主成分とするアラビノオリゴ糖が、ビート搾汁粕１ｇ当たり、６５．１ｍｇ生成、遊離したことが確認された。
【００３９】
【比較例２】
【００４０】
ビート搾汁粕を酸加水分解し、アラビノオリゴ糖の生成量を測定した。
即ち、２０ｍｌ用のバイアル瓶へ、０．１Ｎ塩酸９．６ｇに粉砕処理したビート搾汁粕０．４ｇを加え、１２１℃、１気圧、１時間の加水分解処理をした。
この溶液を水酸化ナトリウムで中和した後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）することにより有用糖質を含む溶液を得た。
溶液中の糖組成は、高速陰イオンクロマトグラフィ一（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
ビート搾汁粕１ｇ中からの各構成糖の遊離糖量（ｍｇ）を、次に示す。
【００４１】
アラビノースは、１４７．７ｍｇであった。
アラビノビオースは、２．３ｍｇであった。
アラビノトリオースは、０．３ｍｇであった。
アラビノテトラオースは、０．７ｍｇであった。
アラビノペンタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘキサオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘプタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノオクタオースは、０．０ｍｇであった。
ガラクツロン酸は、１５．５ｍｇであった。
その他の単糖は、７２．１ｍｇであった。
【００４２】
上記結果に示すとおり、本比較例においては、アラビノビオリゴ糖は殆ど見られず、アラビノースばかり生成、遊離したことが確認された。
【００４３】
【比較例３】
【００４４】
繊維質を分解する市販酵素を用いて、ビート搾汁粕を分解し、アラビノオリゴ糖の生成量を測定した。
即ち、２０ｍｌ用のバイアル瓶へ、５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）９．５８ｇ、粉砕処理したビート搾汁粕０．４ｇおよびスミチームＡＲＳ（新日本化学工業製）０．０２ｇを加え、５０℃、２４時間、マグネティックスターラーにて撹拌した。
５分間の煮沸で酵素を失活させた後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により有用糖質を含む溶液を得た。
溶液中の糖組成は、高速陰イオンクロマトグラフィ一（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
ビート搾汁粕１ｇ中からの各構成糖の遊離糖量（ｍｇ）を、次に示す。
【００４５】
アラビノースは、９０．０ｍｇであった。
アラビノビオースは、１．１ｍｇであった。
アラビノトリオースは、２．３ｍｇであった。
アラビノテトラオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノペンタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘキサオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘプタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノオクタオースは、０．０ｍｇであった。
ガラクツロン酸は、１．１ｍｇであった。
その他の単糖は、１３．８ｍｇであった。
【００４６】
上記結果に示すとおり、本比較例においては、アラビノビオリゴ糖は殆ど見られず、アラビノースばかり生成、遊離したことが確認された。
【００４７】
【発明の効果】
【００４８】
本発明によると、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分の有効利用が可能になり、効率的にアラビノオリゴ糖含有物の製造が可能になる。また、農産副産物の有効利用への道を切り開くことで、廃棄物を減らすことが可能になり、廃棄物の処理による環境への影響も低減しうる。
【発明が属する技術分野】
【０００２】
本発明は、ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法に関し、詳細には、農産副産物であるビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分を原料として用いた、オリゴ糖含有物の製造方法に関する。
【０００３】
【従来の技術】
【０００４】
農産副産物であるビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕のアラビナン含有繊維分は、家畜飼料や燃料として使用する場合もあるが、大半が廃棄物として焼却処理等されている。
そのため、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕のアラビナン含有繊維分について、有効利用の開発が望まれていた。
【０００５】
なお、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕等のアラビナン含有繊維分を分解する酵素としては、細菌［バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）］、糸状菌［アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）］などを起源としたものが知られている。
しかしながら、前記の酵素から生成、遊離される糖は、単糖であるアラビノースが大半を占め、アラビノオリゴ糖含有物の製造方法として適したものではない。
【０００６】
また、原料として１，５−アラビナンを用い、該原料にバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来の酵素を作用させたアラビノオリゴ糖の製造方法が報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００７】
【非特許文献１】
バイオケミカル バイオフィルジカル アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ），４１０，１９７５年，ｐ．３５４−３６０
【０００８】
しかしながら、前記方法で原料として用いる１，５−アラビナンを得るためには、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕等のアラビナン含有繊維分に対し、アルカリ処理及び酵素処理を行った後に、ゲル濾過クロマトグラフィーによる精製を繰り返して行う必要があった。
従って、１，５−アラビナンを原料とした場合、効率的にアラビノオリゴ糖を製造することは困難であった。
また、この方法によると、有用成分も除去してしまう恐れもあった。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明が解決しようとする課題は、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分の有効利用を図り、ビート搾汁粕などを直接作用させるため効率的にアラビノオリゴ糖含有物を製造する手段を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の課題を解決するための手段は、次のとおりである。
【００１３】
第１に、ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）ＧＡＬＡ２２を培養してオリゴ糖生成酵素を調製し、該オリゴ糖生成酵素を用いてアラビナン含有繊維分を加水分解し、オリゴ糖を製造することを特徴とする、ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
第２に、オリゴ糖がアラビノオリゴ糖である、上記第１に記載のペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
ここで、アラビナン含有繊維分としては、ビート搾汁粕、ビートファイバー、ビートパルプ、リンゴ搾汁粕、リンゴファイバーの他にも、落花生粕、柑橘類の果皮又は果肉、オカラ、ダイズファイバーのいずれか一つ以上のものを使用できる。
第３に、前記アラビナン含有繊維分として、ビート搾汁粕を用いる、上記第１または第２に記載のペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
第４に、ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養して調製した、オリゴ糖含有物生成酵素。
【００１４】
本発明におけるアラビノオリゴ糖とは、アラビノースが１〜１０分子含まれる２〜１０糖からなるオリゴ糖である。その結合様式は、α−１，５結合からなる直鎖状のものに限らず、α−１，２及びα−１，３結合を初めとする各種の分岐構造を有するものも含まれる。これには、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース及びガラクツロン酸のようなアラビノース以外の糖の少なくとも一つが、還元末端や非還元末端、もしくは分子内に結合しているものも含まれる。
【００１５】
ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２は、アラビノオリゴ糖生成酵素を高力価で産生するもので、本発明者らが、農産副産物を分解利用する微生物に着目し、自然界よりアラビノオリゴ糖生成酵素の産生が可能な微生物を見い出すべく鋭意研究を行った結果、得られたものである。
そして、このペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する糸状菌に由来するアラビノオリゴ糖生成酵素を用いることで、農産副産物であるアラビナン含有繊維分からアラビナンを分離抽出することなく直接作用させることにより、効率的にアラビノオリゴ糖含有物を製造する方法を見い出し、本発明を完成させるに至った。
【００１６】
本発明のアラビノオリゴ糖生成酵素を産生する菌株は、その菌学的性質及び２８ＳｒＤＮＡ−Ｄ２塩基配列解析から、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する新規な菌株と同定された。
本発明者らは、本菌株をペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）ＧＡＬＡ２２と命名して、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託し、寄託番号ＦＥＲＭＰ−１８９４１を得た。
【００１７】
ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２の菌学的性質は、次のとおりである。
【００１８】
（１）ＣＹＡ寒天プレート
３７℃及び５℃での生育が確認された。
菌糸は、ビロードからフェルト状でｗｈｉｔｅ（Ａ１）を呈し、平坦なコロニー形状を示した。
培養一週間の生育は、２５℃プレートで直径４３ｍｍ程度、３７℃プレートで直径４５ｍｍ程度に達した。
滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）及び可溶性色素（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔ）の産生は、認められなかった。
ＣＹＡスライド培養検体の光学顕微鏡による観察では、ペニシラス様の分生子形成構造が確認された。
分生子柄は、最大で三輪性（ｔｅｒｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｅ）で、一輪性（ｍｏｎｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｅ）や二輪性（ｂｉｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｅ）のものも多く観察された。
分生子形成細胞は、フィアロ型（ｐｈｉａｌｉｄｉｃ）であった。
柄（ｓｔｉｐｅ）は、中程度のものが多く観察された。
表面は、やや粗面（ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｒｏｕｇｈ）となった。
メトレ（ｍｅｔｕｌａ）は、柄先端より２−３軸の分岐（ｂｒａｎｃｈｉｎｇ）を示し、比較的長いものが大半となった。
メトレ先端部に、頂嚢（ｖｅｓｉｃｌｅ）は認められなかった。
フィアライド（ｐｈｉａｌｉｄｅ）は、メトレ及び柄の先端部より４−７本輪生し、首の長い針状（ａｃｅｒｏｓｅ）となった。
メトレ、フィアライド共に、表面は粗面（ｒｏｕｇｈ）であった。
フィアライドは、圧着（ａｐｐｒｅｓｓｅｄ）していた。
分生子は、１細胞性で表面は粗面、形状は長楕円形（ｌｏｎｇ ｅｌｌｉｐｓｏｉｄａｌ）から紡錘形（ｆｕｊｉｆｏｒｍ）となった。
分生子は、鎖状に連なった。
長期培養の検体からもテレオモルフの形成は確認されなかった。
（２）ＭＥＡ寒天プレート
菌糸は、ビロードからフェルト状でｗｈｉｔｅ（Ａ１）を呈し、平坦なコロニー形状を示した。
培養開始後３日目より分生子によるコロニー色調の変化が認められ、ｇｒｅｅｎｉｓｈ ｇｒｅｙ−ｄｕｌｌ ｇｒｅｅｎ（２６Ｃ−Ｄ２−４）の分生子を形成した。
裏面色調は、表面とほぼ同様となった。
培養一週間の生育は、５５ｍｍ程度に達した。
滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）及び可溶性色素（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔ）の産生は、認められなかった。
長期培養の検体からもテレオモルフの形成は確認されなかった。
（３）Ｇ２５Ｎ寒天プレート
菌糸は、ビロードからフェルト状でｗｈｉｔｅ（Ａ１）を呈し、平坦なコロニー形状を示した。
培養開始後３日目より分生子によるコロニー色調の変化が認められ、Ｇｒｅｅｎｉｓｈ ｇｒｅｙ−ｄｕｌｌ ｇｒｅｅｎ（２６Ｃ−Ｄ２−４）の分生子を形成した。
裏面色調は、表面とほぼ同様となった。
培養一週間の生育は、４ｍｍに達した。
滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）及び可溶性色素（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔ）の産生は、認められなかった。
長期培養の検体からもテレオモルフの形成は確認されなかった。
【００１９】
また、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２の２８ＳｒＤＮＡ−Ｄ２の塩基配列は、次のとおりである。
【００２０】
【発明の実施の形態】
【００２２】
次に、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２によるアラビノオリゴ糖含有物の製造方法について説明する。
まず、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養し、アラビノオリゴ糖生成酵素を調製する。
【００２３】
該本菌株の培養は、炭素源、窒素源、無機塩類等を含む液体培地あるいは固形培地を用いて好気的条件下で実施する。
炭素源としては、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分などが使用される。
これら繊維分は、粉砕処理などを実施したものを用いることもできる。
窒素源としては、微生物により利用可能な窒素化合物、例えば酵母エキス、ペプトン、麦芽エキス、コーンスティープリカー等が使用される。
無機塩類としては、例えば硫酸マグネシウム、硝酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、水酸化カルシウム等の塩類が使用される。
尚、これらの炭素源、窒素源、無機塩類の他に、更に必要に応じて、糸状菌の生育に必要な各種の有機物、無機物を添加することができる。
上記の培地での培養方法は、固体培養あるいは液体培養の何れを用いても良いが、振盪培養あるいは発酵糟等を用いた通気攪拌培養が望ましい。
培養温度は、生育出来る範囲内なら特に限定されないが、３０℃付近が望ましい。
培養ｐＨは、生育出来る範囲内なら特に限定されないが、ｐＨ３〜５付近が望ましい。
培養時間は、特に限定されないが、２４〜１６８時間程度が望ましい。
【００２４】
上記のようにして培養した後、培養物中から、目的物であるアラビノオリゴ糖生成酵素を採取及び精製するには、通常使用されている周知の手段、例えば濾過、遠心分離、イオン交換またはゲル濾過クロマトグラフィー、脱塩、膜濃縮、膜分離等の操作を必要に応じて適宜組み合わせて用いることができる。
一例を挙げれば、培養液から濾過、遠心分離等によって菌体を除去し、透析膜による脱塩操作を行なったものを酵素液として用いることができる。
ここで、酵素液は回収し、繰り返し使用することも可能である。
【００２５】
アラビノオリゴ糖含有物は、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分に、上記の方法で得られた酵素液を加えることにより糖化を行うことで製造する。
反応温度は、酵素が失活しない範囲内、即ち２０〜７０℃、好ましくは４０〜６０℃の範囲がよい。
酵素反応ｐＨは、酵素の至適条件下で反応を行うことが望ましく、ｐＨ３〜９、好ましくはｐＨ４〜７の範囲とする。
反応時間は、使用するアラビナン含有繊維分の組成や形状と酵素添加量に依存するが、通常３〜７２時間に設定するのが作業上好ましい。
反応が進むにつれ、アラビナン含有繊維分が加水分解され、アラビノオリゴ糖が生成、遊離するので、これを反応終了後、常法によって反応液中から分離する。
即ち、かかる場合に当該分野において通常使用されている周知の手段、例えば濾過、遠心分離、イオン交換または吸着クロマトグラフィー、膜濃縮、膜分離、溶媒抽出、減圧濃縮、結晶化等の操作を必要に応じて適宜組み合わせて用いることができる。
一例を挙げれば、反応液から濾過、遠心分離等によって繊維分等の残渣を除去し、次いでこの溶液を活性炭で処理して着色物質などを除き、更にイオン交換樹脂により脱イオンした後、濃縮してシロップあるいは粉末状にすることができる。
【００２６】
次に、本発明を実施例等により詳しく説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２７】
【実施例１】
【００２８】
ａ）酵素液の調製
粉砕処理したビート搾汁粕２．０ｇ、リン酸二水素カリウム０．３ｇ、硫酸マグネシウム０．０５ｇ、コーンスティープリカー０．０５ｇからなる培地１００ｍｌを含む５００ｍｌ容坂口フラスコに、スラントから白金耳でペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を、１エーゼ接種した。
３０℃、１２５ｒｐｍで９６時間振盪培養した後、遠心分離（５０００Ｇ、１０分）及びフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により、菌体及び培地残渣を除去した。
続いて、分画分子量５０００の透析膜にて、２４時間透析した溶液を酵素液とした。
【００２９】
ｂ）アラビノオリゴ糖含有物の製造
２ｍｌマイクロチューブに、上記で調製した酵素液０．５ｍｌ、２００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）０．５ｍｌ及び粉砕処理したビート搾汁粕０．０２ｇを加え、２００ｒｐｍ、５０℃、２４時間振盪した。
５分間の煮沸で酵素を失活させた後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により有用糖質を含む溶液を得た。
この溶液中の構成糖は、高速陰イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
その結果、ビート搾汁粕１ｇ当たり、６１．７ｍｇのアラビノオリゴ糖が生成、遊離したことが確認された。
【００３０】
【比較例１】
【００３１】
農産副産物を分解利用する微生物アスペルギルス・ニガーＩＦＯ０６６６２、アスペルギルス・ニガーＩＦＯ０１５４０、アスペルギルス・ニガーＩＦＯ１５４３及びアスペルギルス・アワモリＩＦＯ１６１７の４種類の菌株を用いて、実施例１と同様の条件及び操作方法で、酵素液を調製した。
得られた各酵素液を用いて実施例１と同様の条件及び操作方法で、ビート搾汁粕を分解し、ビート搾汁粕からの生成、遊離糖量を測定した。
その結果は、次のとおりであった。
【００３２】
アスペルギルス・ニガーＩＦＯ６６６２は、１０．９ｍｇであった。
アスペルギルス・ニガーＩＦＯ１５４０は、８．３ｍｇであった。
アスペルギルス・ニガーＩＦＯ１５４３は、１０．４ｍｇであった。
アスペルギルス・アワモリＩＦ０１６１７は、１１．５ｍｇであった。
【００３３】
上記の全ての菌株においてビート搾汁粕１ｇ当たり約１０ｍｇのオリゴ糖が生成、遊離したことが確認された。
これに対し、実施例１では、ビート搾汁粕１ｇ当たり６１．７ｍｇのオリゴ糖が得られている。
したがって、本発明の製造法により、ビート搾汁粕などを直接作用させるため、効率的にアラビノオリゴ糖を得ることができることが確認された。
【００３４】
【実施例２】
【００３５】
ａ）酵素液の調製
ビート搾汁粕を粉末状に加工したビートファイバー（日本甜菜製糖製）２０．０ｇ、リン酸二水素カリウム３．０ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、コーンスティープリカー０．５ｇからなる培地１リットルを含むジャーファーメンター（サクラ精機製、培養槽容量１．５Ｌ）に、ペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養したスラントへ、滅菌水５ｍｌと消泡剤を数滴入れ懸濁させたものを無菌的に植菌し、温度３０℃、ｐＨ５．０、通気量０．５Ｌ／ｍｉｎ、回転数３００ｒｐｍで７２時間通気撹拝培養した。
培養終了後、遠心分離（５０００Ｇ、１０分）及び孔径０．４５μｍのフィルターにより、菌体及び培地残渣を除去した。
続いて、分画分子量１００００の限外濾過膜にて、２０倍量まで濃縮した溶液を酵素液とした。
【００３６】
ｂ）アラビノオリゴ糖含有物の製造
２０ｍｌ用のバイアル瓶へ、上記で調製した酵素液０．３５ｍｌに５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）９．２５ｇと粉砕処理したビート搾汁粕０．４ｇを加えて、５０℃、２４時間、マグネティックスターラーにて撹拌した。
５分間の煮沸で酵素を失活させた後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により、有用糖質を含む溶液を得た。
溶液中の糖組成は、高速陰イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
ビート搾汁粕１ｇ中からの各構成糖の遊離糖量（ｍｇ）を、次に示す。
【００３７】
アラビノースが、３６．２ｍｇであった。
アラビノビオースが、３１．１ｍｇであった。
アラビノトリオースが、２２．４ｍｇであった。
アラビノテトラオースが、６．４ｍｇであった。
アラビノペンタオースが、１．０ｍｇであった。
アラビノヘキサオースが、１．１ｍｇであった。
アラビノヘプタオースが、２．１ｍｇであった。
アラビノオクタオースが、１．０ｍｇであった。
ガラクツロン酸が、２９．９ｍｇであった。
その他の単糖が、１．９ｍｇであった。
【００３８】
上記結果に示すように、本実施例においては、アラビノビオース及びアラビノトリオースを主成分とするアラビノオリゴ糖が、ビート搾汁粕１ｇ当たり、６５．１ｍｇ生成、遊離したことが確認された。
【００３９】
【比較例２】
【００４０】
ビート搾汁粕を酸加水分解し、アラビノオリゴ糖の生成量を測定した。
即ち、２０ｍｌ用のバイアル瓶へ、０．１Ｎ塩酸９．６ｇに粉砕処理したビート搾汁粕０．４ｇを加え、１２１℃、１気圧、１時間の加水分解処理をした。
この溶液を水酸化ナトリウムで中和した後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）することにより有用糖質を含む溶液を得た。
溶液中の糖組成は、高速陰イオンクロマトグラフィ一（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
ビート搾汁粕１ｇ中からの各構成糖の遊離糖量（ｍｇ）を、次に示す。
【００４１】
アラビノースは、１４７．７ｍｇであった。
アラビノビオースは、２．３ｍｇであった。
アラビノトリオースは、０．３ｍｇであった。
アラビノテトラオースは、０．７ｍｇであった。
アラビノペンタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘキサオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘプタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノオクタオースは、０．０ｍｇであった。
ガラクツロン酸は、１５．５ｍｇであった。
その他の単糖は、７２．１ｍｇであった。
【００４２】
上記結果に示すとおり、本比較例においては、アラビノビオリゴ糖は殆ど見られず、アラビノースばかり生成、遊離したことが確認された。
【００４３】
【比較例３】
【００４４】
繊維質を分解する市販酵素を用いて、ビート搾汁粕を分解し、アラビノオリゴ糖の生成量を測定した。
即ち、２０ｍｌ用のバイアル瓶へ、５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）９．５８ｇ、粉砕処理したビート搾汁粕０．４ｇおよびスミチームＡＲＳ（新日本化学工業製）０．０２ｇを加え、５０℃、２４時間、マグネティックスターラーにて撹拌した。
５分間の煮沸で酵素を失活させた後、遠心分離（５０００Ｇ、５分）とフィルター濾過（孔径０．４５μｍ）により有用糖質を含む溶液を得た。
溶液中の糖組成は、高速陰イオンクロマトグラフィ一（ＨＰＡＥＣ）分析により測定した。
ビート搾汁粕１ｇ中からの各構成糖の遊離糖量（ｍｇ）を、次に示す。
【００４５】
アラビノースは、９０．０ｍｇであった。
アラビノビオースは、１．１ｍｇであった。
アラビノトリオースは、２．３ｍｇであった。
アラビノテトラオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノペンタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘキサオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノヘプタオースは、０．０ｍｇであった。
アラビノオクタオースは、０．０ｍｇであった。
ガラクツロン酸は、１．１ｍｇであった。
その他の単糖は、１３．８ｍｇであった。
【００４６】
上記結果に示すとおり、本比較例においては、アラビノビオリゴ糖は殆ど見られず、アラビノースばかり生成、遊離したことが確認された。
【００４７】
【発明の効果】
【００４８】
本発明によると、ビート搾汁粕やリンゴ搾汁粕などのアラビナン含有繊維分の有効利用が可能になり、効率的にアラビノオリゴ糖含有物の製造が可能になる。また、農産副産物の有効利用への道を切り開くことで、廃棄物を減らすことが可能になり、廃棄物の処理による環境への影響も低減しうる。
Claims (4)
- ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養してオリゴ糖生成酵素を調製し、該オリゴ糖生成酵素を用いてアラビナン含有繊維分を加水分解し、オリゴ糖を製造することを特徴とする、ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
- オリゴ糖がアラビノオリゴ糖である、請求項１に記載のペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法。
- 前記アラビナン含有繊維分として、ビート搾汁粕を用いる、請求項１または２に記載のペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法
- ＦＥＲＭＰ−１８９４１として寄託されているペニシリウム・エスピーＧＡＬＡ２２を培養して調製した、アラビナン含有繊維分を基質とするオリゴ糖含有物生成酵素液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002349756A JP3774430B2 (ja) | 2002-12-02 | 2002-12-02 | ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002349756A JP3774430B2 (ja) | 2002-12-02 | 2002-12-02 | ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004180556A JP2004180556A (ja) | 2004-07-02 |
| JP3774430B2 true JP3774430B2 (ja) | 2006-05-17 |
Family
ID=32752202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002349756A Expired - Fee Related JP3774430B2 (ja) | 2002-12-02 | 2002-12-02 | ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3774430B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5900792B2 (ja) * | 2011-02-21 | 2016-04-06 | 国立大学法人信州大学 | フェルラ酸結合型糖質の製造方法 |
-
2002
- 2002-12-02 JP JP2002349756A patent/JP3774430B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2004180556A (ja) | 2004-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPWO2014007189A1 (ja) | 糖液の製造方法 | |
| CN114214251B (zh) | 一种生产d-阿洛酮糖用枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用 | |
| CN100345974C (zh) | S－(+)－2,2－二甲基环丙甲酰胺的微生物制备方法 | |
| CN102220244B (zh) | 一种哈茨木霉菌株及其用该菌株制备右旋糖酐酶的方法 | |
| Gomes et al. | Komagataeibacter intermedius V-05: An acetic acid bacterium isolated from vinegar industry, with high capacity for bacterial cellulose production in soybean molasses medium | |
| Kim et al. | Optimization of culture conditions and continuous production of chitosan by the fungi, Absidia coerulea | |
| JP3774430B2 (ja) | ペニシリウム・エスピーによるオリゴ糖含有物の製造方法 | |
| KR102090063B1 (ko) | 알돈산 생산능을 갖는 신규 미생물 및 이를 이용한 알돈산의 생산 방법 | |
| CN115305226B (zh) | 一株降解烟碱并产氢的抗辐射不动杆菌zj-22及其应用 | |
| JP2013223489A (ja) | バイオマス糖化酵素群を有する微生物およびその利用 | |
| CN113564215B (zh) | 一种以二氧化碳和/或木质纤维素为底物的生物表面活性剂制备方法 | |
| JPH0358715B2 (ja) | ||
| JPH10316702A (ja) | 微生物由来のキトサンおよびその製造方法 | |
| JP3845912B2 (ja) | エリスリトールの製造方法 | |
| CN110358687B (zh) | 一株产d泛解酸内酯水解酶的赤霉菌及应用、发酵方法 | |
| JPH0889274A (ja) | セロビオースの製造方法 | |
| JP4194152B2 (ja) | エリスリトールの製造方法 | |
| JP3899462B2 (ja) | ガン細胞アポトーシス誘導剤 | |
| JP2002065292A (ja) | 多糖類の製造法 | |
| JP3032817B2 (ja) | キシログルカンオリゴ９糖の大量製造方法 | |
| JP3840538B2 (ja) | Ｄ‐タガトースの製造方法 | |
| JP3656762B2 (ja) | ラミナリトリオースの製造法 | |
| EP0318543B1 (fr) | Procede de production de cellulose bacterienne a partir de matiere d'origine vegetale | |
| WO2023171644A1 (ja) | ろ過助剤、ろ過処理方法およびセルラーゼの製造方法 | |
| CN114134057B (zh) | 一株酿酒酵母swgcjm001及其培养方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051206 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051221 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20060131 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20060217 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090224 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100224 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100224 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110224 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110224 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120224 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120224 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130224 Year of fee payment: 7 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |