JP3470899B2 - 診断に使用するためのｈｔｌｖ−▲ｉ▼およびｈｔｌｖ−▲ｉｉ▼ｇｐ２１由来ペプチド - Google Patents

診断に使用するためのｈｔｌｖ−▲ｉ▼およびｈｔｌｖ−▲ｉｉ▼ｇｐ２１由来ペプチド

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Description

【発明の詳細な説明】 本出願は、1991年２月８日に出願された米国特許出願
番号第07/653,091号「HTLV−ＩおよびHTLV−IIペプチド
抗原および方法」の一部継続出願であり、上記出願は、
1989年６月13日に出願され（米国特許出願番号第366,31
3号）、現在では1991年11月19日に特許となった、米国
特許第5,066,579号である「HTLV−Ｉペプチド抗原およ
び方法」の一部継続出願であり、上記出願は1986年12月
31日に出願され（米国特許出願番号第948,270号）、現
在では放棄されている「HTLV−Ｉペプチド抗原および方
法」の継続出願である。
1.発明の分野 本発明は、HTLV特異的ペプチドおよびその抗原の調製
および使用のための方法に関する。
2.参考文献 Cann,A.J.,およびChen,I.S.Y.,Virology（Fields,B.
N.,編），第２版,Raven Press Ltd.,New York,NY pp.15
01（1990）． Carroll,W.P.,ら,J.Immunol.Meth.89:61（1986）． Cwirla,S.E.,ら,Proc Nat Acad.Sci,USA,87:6378（19
90）． Foung,S.K.H.,ら,J.Immunol.Methods 134:35（199
0）． Hadlock,K.G.,ら,Blood 79:190（1992）． Harlow,E.,ら,Antibodies,A Laboratory Manual,Cold
Spring Harbor,（1988） Huse,W.,ら,Science,246:1275（1989）． Huynh,T.V.,ら，“DNA Cloning,Volume 1"（D.M.Glov
er,編）Washington,D.C.:IRL Press,1985（第２章）． Kwok S.,ら,Blood.72:1117（1988） Laemmli,U.K.,Nature,227:680（1970）． Lal,R.B.,ら,J.Clin.Microbiol.30:296（1992）． Larrick,J.W.,ら（1989）Biotechnology 7:934−938. Larrick,J.W.,らMethods in Immunology,2:106−110
（1992）． Larrick,J.W.,ら,Immunol Rev,130（1992）． Lillehoj,E.P.,ら,J.Clin.Microbiol.28:2653（199
0）． Lipka,J.J.,ら,Proceedings of the 43 Meeting（199
0）． Lipka,J.J.,ら,J.Infect.Dis.164:400（1991）． Lipka,J.J.,ら,J.Infect.Dis.165:268（1992a）． Lipka,J.J.,ら,Proceedings of 5th Ann.Conf.on Hum
an Retrovirology HTLV,Kumamoto,Japan（1992b）． Maniatis,T.,ら,Molecular Cloning:A Laboratory Ma
nual,Cold Spring Harbor Laboratory（1982）． Matsushita,S.,ら,Proc Natl Acad Sci（USA），83:2
672（1986）． McCafferty,J.,ら,Nature 348:552（1990）． Mitchell A.R.,ら,J.Org Chem.43245（1978）． Miyoshi,I.,ら,Nature,294:770（1981）． Perkins,S.,ら,Electromanipulation in Hybridoma T
echnology,A Laboratory Manual（Borrebazck,I.,ら，
編）Stockton Press,New York,NY pp.47−70（1989）． Poiesz,B.J.,ら,Proc Natl Acad Sci（USA），77:741
5（1980）． Popovic,M.,ら,Science,29:856（1983）． Public health service working group.MMWR 37:736.
（1988）． Roberts,B.D.,ら,Proceedings of 5th Ann.Conf.on H
uman Retrovirology HTLV,Kumamoto,Japan（1992）． Roberts,B.D.,ら,J.Clin.Microbiol.,accepted for p
ublication. Samuel,K.P.,ら,Science,226:1094（1984）． Samuel,K.P.,Gene Anal Tech,２:60（1985） Scott,J.T.ら,Science,249:386（1990）． Seiki,M.,ら,Proc Natl Acad Sci（USA），80:3618
（1983）． Shimotokno,K.,ら,Proc Nat Acad Sci,USA,82:3101
（1985）． Urlaub,G.およびChasin,L.A.,Proc,Nat.Acad.Sci.（U
SA）77:4216（1980）． 3.発明の背景 ヒトＴ細胞白血病ウイルス（HTLV）は、３つの既知の
メンバーを有するＴ細胞レトロウイルスのファミリーを
示す。HTLVタイプＩ（HTLV−Ｉ）は、インビトロでの形
質転換活性を有し、成人Ｔ細胞白血病に病因学的に関連
し、世界の数カ所でその地域特有であることが知られて
いる。HTLV−IIは、インビトロで形質転換能を有する別
のレトロウイルスで、Ｔ細胞の変形である毛様細胞性白
血病の患者から単離された（HTLV−ＩおよびIIの再検討
についてはCannおよびChenを参照のこと）。HTLV−III
も、リンパ節症関連ウイルスと呼ばれ、現在ではヒト免
疫不全ウイルス（HIV）として知られている。これは、
特定の種類のＴ細胞を溶解し、そして後天性免疫不全症
候群（AIDS）の病因に関連している。HTLV−ＩおよびHT
LV−IIウイルスと異なり、HTLV−IIIは、インビトロで
形質転換活性を有することは知られていない。
HTLV−Ｉ感染の診断は、通常、HTLV−Ｉペプチド抗原
に対する血清抗体応答に基づく。これは普通、HTLV−Ｉ
ビリオンペプチドを用いるエンザイムイムノアッセイ
（EIA）に基づいて、HTLV−Ｉ抗体を同定するための初
期のスクリーニングアッセイを包含する。現在血液スク
リーニングに用いられるこのアッセイは、合衆国内の血
液提供者の約0.5％〜0.05％がHTLV−ＩおよびHTLV−II
陽性であることを検出する。これらの人々のうち５人に
４人が疑似陽性である。従って、陽性血清は、ウエスタ
ンブロットされたHTLV−Ｉウイルスのライゼートを用い
て、さらなる確認アッセイにおいて試験されなければな
らない。最近の血液試験手順は、各人がHTLV−I p24 ga
gタンパク質ならびにエンベロープタンパク質であるgp4
6およびgp68の内の少なくとも一つの両方に対する抗体
を有していることが必要とされる（public health serv
ice working group）。しかし、gp46またはgp68タンパ
ク質をウエスタンブロットアッセイを用いて検出するこ
とは技術的に困難であることがわかってきた。従って、
HTLV−Ｉエンベロープタンパク質に対する抗体反応を検
出するために、放射性免疫沈降アッセイをより頻繁に行
って第２段階の確認を行わなければならない。
この問題の部分的解決は、貫膜糖タンパク質gp21の13
4アミノ酸部分を分子クローニングすることにより提供
された（Samuelら）。組換えタンパク質を、p21Eタンパ
ク質と呼び、それは、HTLV−ＩおよびHTLV−IIの個体の
どちらの血清とも反応性である。そしてHTLV感染の確認
のためのウエスタンブロットアッセイで首尾良く取り込
まれた（Lillehojら、Lipkaら、1991）。しかし、p21E
タンパク質はまたHTLV陰性の血液提供者の0.6％とも反
応性であることがわかった（Lalら）。さらに、p21Eに
対する非常に高い反応率（米国の血液提供者の約５％）
が、HTLVスクリーニングEIA試験で反応性の個体で観察
されたが、彼らはHTLV確認アッセイによる試験では、HT
LV−I gagおよびenv遺伝子生成物のどちらに対する抗体
も有していないので、HTLV感染であることに関して確立
された基準には合致しない（Lalら;Lipkaら、1991）。
さらに、Lipkaら（Lipkaら、1991）の研究では、p21E反
応性−HTLV不確定の全ての個体は、HTLV−ＩおよびHTLV
−IIの特異的プライマーおよびプローブを用いるPCRに
よって試験される場合、HTLV−ＩおよびHTLV−IIの核酸
の存在に対して陰性であった。従って、HTLV−Ｉまたは
HTLV−IIに感染していない数個体は、p21E抗原と反応す
る抗体を有する。この事実により、特に、HTLVスクリー
ニングアッセイでは、p21E組換えタンパク質の使用が制
限される。このアッセイでは、HTLV−陰性血清と高い割
合で疑似陽性を示すので、提供された血液に不必要な処
理を施す結果となってしまう。
従って、HTLV−ＩおよびHTLV−II陽性血清を検出する
改良法を提供することが望まれる。特に、改良された試
験は、最小数の疑似陽性血清を用いて、全てのHTLV−Ｉ
およびHTLV−II陽性血清を検出し得、そしてHTLV−II感
染血清からHTLV−Ｉ感染血清を分離することも可能であ
る。
4.発明の要旨 本発明は、一つの局面において、配列番号１で同定さ
れたアミノ酸配列から本質的になる、HTLV特異的抗原領
域を有するペプチドを包含する。このペプチドは、
（ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染した被験者由来の
血清に対して免疫反応性であり、そして（ii）（１）HT
LV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトから得られ
るが、（２）HTLV−1 p21E抗原とは免疫反応性である血
清との非免疫反応性により特徴付けられる。
ヒト血清中のHTLV−ＩまたはHTLV−IIの感染の存在を
検出するキットもまた開示される。このキットは、
（ａ）固体支持体、（ｂ）その支持体に付着した上記HT
LV特異的ペプチド、および（ｃ）上記支持体に結合した
ヒト抗体の存在を検出するリポーター試薬を包含する。
一つの実施態様では、HTLV−ＩまたはHTLV−II感染を
検出することに用いるため、上記支持体は２つの反応ゾ
ーンを包含し、１つは上記HTLV特異的ペプチドでコード
され、そして第二ゾーンは、配列番号２で同定されるア
ミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域でコー
ドされている。このペプチドは、血清との免疫反応性に
より特徴付けられる。この血清は、（１）HTLV−Ｉまた
はHTLV−IIに感染していないヒトから得られるが、
（２）HTLV−1 p21E抗原とは免疫反応性である血清であ
る。
このキットはまた、HTLV−ＩおよびHTLV−IIの間の区
別が可能になるように設計された１つまたはそれより多
い反応ゾーンを包含する。このキットを用いるための一
つの好ましいペプチドは、配列番号３で同定される配列
から本質的になるHTLV−Ｉ特異的抗原領域を含むペプチ
ドである。あるいは、またはさらに、このキットは、配
列番号４で同定される配列から本質的になるHTLV−II特
異的抗原領域を有するペプチドである。
他の局面では、本発明は、ヒト被験者のHTLV−Ｉまた
はHTLV−II感染を明確に同定する方法を包含する。この
試験は、被験者の血清を、配列番号１で同定されるアミ
ノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域を含むペ
プチドと反応させて、免疫複合体、すなわちこのペプチ
ドとHTLV−ＩまたはHTLV−II感染被験体の血清中の抗体
を形成させることを包含する。次いでこのペプチドは免
疫複合体の存在について試験される。
さらに、個体をHTLV−ＩおよびHTLV−II感染に対して
免疫化するワクチン組成物も開示される。この組成物
は、配列番号１で同定されるアミノ酸配列から本質的に
なるHTLV特異的抗原領域を有するペプチドを包含する。
このペプチドは、担体タンパク質に結合する。
さらに別の局面では、本発明は、HTLVの受動ワクチン
による予防および治療、ならびに2B3Aペプチドに対して
特異的なヒトモノクローナル抗体またはヒト組換え抗体
を用いた受動ワクチン接種方法を包含する。
本発明のこれらのおよびその他の目的および特徴は、
以下の本発明の詳細な説明が、添付の図面と共に読まれ
る場合に、より十分に明らかにされる。
図面の簡単な説明 図１の１番上はHTLV−Ｉゲノム、中間はgp46およびgp
21エンベロープタンパク質のコーディング領域を包含す
るゲノムを拡大した部分、そして図の１番下の部分は、
gp21コーディング領域内の組換えHTLV−Ｉペプチドであ
るp21E、2A2B、2B3A、および3A3B、ならびにgp46コーデ
ィング領域内のHTLV−I MTA−１、MTA−４およびMTA−
５ペプチドに対応するコーディング領域を示す。
図2Aおよび2Bは、HTLV−Ｉのp21E envタンパク質のポ
リヌクレオチドコーディング配列（配列番号５）および
それに対応するアミノ酸配列（配列番号６）（図2A）、
ならびにHTLV−IIのgp21 envタンパク質のp21E領域のポ
リヌクレオチドコーディング配列（配列番号７）および
それに対応するアミノ酸配列（配列番号８）（図2B）を
示す。HTLV−Ｉ組換えペプチドの構築に用いられるオリ
ゴヌクレオチドプライマーのHTLV−Ｉ特異的配列の5'末
端が示される。
図3A〜3Cは、本明細書中で1A（配列番号９）、2A（配
列番号10）、MF1（配列番号11）、MF2（配列番号12）、
および3A（配列番号13）として同定している正方向プラ
イマー（図3A）、ならびに本明細書中で1B（配列番号1
4）、2B（配列番号15）、MR1（配列番号16）、MR2（配
列番号17）、および3B（配列番号18）として同定してい
る逆方向プライマー（図3B）のポリヌクレオチド配列を
示し、プライマー内に一する制限酵素認識配列には下線
が付されている。改変されたpGEXプラスミドpGEX−GLI
の制限酵素部位もまた示されている（配列番号44）（図
3C）。
図４は、p21E（配列番号６）、1A1B（配列番号19）、
2A2B（配列番号20）、2A3B（配列番号21）、2B3A（配列
番号22）、3A3B（配列番号30）、MF1R2（配列番号2
4）、およびMF2R1（配列番号25）として同定されている
HTLV−Ｉ組換えペプチドのアミノ酸配列を示す。
図５は、配列番号22から実際に構築されたペプチド2B
3Aのアミノ酸配列、および３つの異なるHTLV−Ｉ種（配
列番号26、27および28）の一致した配列、対応するHTLV
−II2B3Aペプチド（配列番号29）、および2A3Bペプチド
のコンセンサス配列（配列番号１）を示す。
図６は、配列番号23から実際に構築されたペプチド3A
3Bのアミノ酸配列、および３つの異なるHTLV−Ｉ種（配
列番号31、32、および２）の一致した配列、対応するHT
LV−II3A3Bペプチド（配列番号34）、および3A3Bペプチ
ドのコンセンサス配列（配列番号２）を示す。
図７は、HTLV−Ｉペプチド2B3A（配列番号35）と、相
同なHTLV−IIペプチド2B3A（II）（配列番号36）のポリ
ヌクレオチドコーディング配列の比較を示す。
図８は、HTLV−Ｉペプチド3A3B（配列番号37）と、相
同なHTLV−IIペプチド3A3B（II）（配列番号38）のポリ
ヌクレオチドコーディング配列の比較を示す。
図９は、図１でMTA−１（配列番号３）、MTA−４（配
列番号39）、およびMTA−５（配列番号40）として同定
されたgp46ペプチド領域内のHTLV−ＩおよびHTLV−II g
p46タンパク質の相同領域、さらにHTLV−ＩペプチドK16
3（配列番号41）、ならびに本明細書中でK15（配列番号
42）および４（配列番号４）として同定されたアナログ
HTLV−IIペプチドのアミノ酸配列を示す。
図10A〜10Dは、ヒト血清中のHTLV−ＩまたはHTLV−II
感染検出アッセイ法で用いるための第四ゾーンの固体相
アッセイプレート（10A）を説明し、HTLV−Ｉ陽性個体
（図10B）、HYLV−II陽性個体（図10C）、および疑似陽
性（図10D）についての代表的な結果を示している。
発明の詳細な説明 I.定義 他に言及しない限り、下記の用語は以下の意味を有す
る： 「HTLV混成env配列」は、異なる種のHTLV−ＩおよびH
TLV−IIのenv貫膜タンパク質の領域の相同なアミノ酸配
列を一直線に並べること、そして各位置で（ｉ）その位
置におけるコンセンサス配列、または（ii）その位置の
アミノ酸がHTLV−ＩとHTLV−IIの配列間で異なる場合に
は、その位置での全てのアミノ酸を変形体を選択するこ
とにより形成される。例えば、図５に示される2B3A HTL
V混成配列は、３つの異なるHILV−Ｉ種の2B3Aペプチド
（配列番号26、27、および28）、対応するHTLV−II 2B3
Aペプチド（配列番号29）、および2B3Aペプチドのコン
センサス配列（配列番号１）のアミノ酸配列内にアミノ
酸変異を包含する。
「HTLV特異的」ペプチドは、HTLV混成配列、すなわち
HTLV−Ｉアミノ酸配列、およびHTLV−IIアミノ酸配列、
あるいはHTLV混成配列の一つのいずれかを有するペプチ
ドを意味する。
「非感染個体」は、血清がおくつかのHTLV−Ｉまたは
HTLV−IIタンパク質（例えばp21Eタンパク質）と交差反
応性である抗体を有するが、その血清がHTLV−Ｉまたは
HTLV−IIの感染の証拠を示さないヒトをいい、1.＞確認
アッセイでHTLV gagおよびenvの両方に対する抗体が検
出されないこと、および／または2.＞ポリメラーゼ連鎖
反応（PCR）法を用いるHTLV特異的プライマーを用いた
配列増幅によるHTLV特異的配列が検出されないことによ
って判断される（Kwokら、Lipkaら、1991）。
II.HTLV−ＩおよびHTLV−II Envタンパク質 図１の上のフレームは、Env貫膜糖タンパク質gp46お
よびgp21内で発現されるHTLV−Ｉゲノムの１部を示す。
gp46のコーディング領域は塩基対の5180番目から6116番
目まで、gp21タンパク質は6117番目と6644番目の間に広
がっている（図１のゲノムの拡大部分）。
塩基の6096番目と6497番目の間のコーディング領域
は、p21Eと呼ばれる組換えタンパク質をコードし、この
タンパク質はHTLV−ＩまたはHTLV−II感染個体の血清と
反応することが知られているが、どちらのHTLVウイルス
にも感染していない個体の数パーセントとも反応する
（Lalら、Lipkaら、1991）。p21Eコーディング領域に含
まれ、図の右下に示されるのは、本明細書中で2A2B、2B
3A、および3A3Bとして同定される３つのHTLV−Ｉペプチ
ドのコーディング領域である。本発明は、2B3Aペプチ
ド、ならびに2B3Aペプチドを含む診断用アッセイキット
および診断方法を包含する。このキットおよび方法はま
た、3A3Bペプチドを含む。HTLV−ＩまたはHTLV−II感染
ヒト血清検出のためのアッセイキットおよび方法に関連
する2B3Aおよび3A3Bペプチドの性質は後に議論する。
5565番目〜5895番目のコーディング領域は、図の左下
に示され、1991年２月８日に出願された同時係属中の米
国特許出願「HTLV−ＩおよびHTLV−IIペプチド抗原およ
び方法」、出願番号第07/653,091号に記載され、そして
前記係属出願においておよび本明細書中でMTA−１、MTA
−４、およびMTA−５として同定された３つのMTAペプチ
ドのコーディング配列を含む。これらのペプチドはま
た、HTLV−ＩまたはHTLV−II感染ヒト血清のアッセイの
ためのキットおよび方法において、2B3Aペプチドと、ま
たは2B3Aペプチドおよび3A3Bペプチドと組み合わせて用
いられ得る。このようなキットおよび方法で用いるため
に適切なMTAペプチドの性質を下記に示す。
A.2B3Aペプチド 図４は、HTLV−Ｉ（配列番号22）由来の2B3Aペプチド
のアミノ酸配列を示す。下記で見られるように、このペ
プチドは、HTLV−ＩのMT2ウイルス株のPCR増幅により発
現される。ここでは、Seikiらによって単離されたHTLV
−Ｉ変異体であるATKのヌクレオチドコーディング配列
から設計されたプライマー（増幅されるコーディング領
域の各末端の７コドンを与える）が用いられる。従っ
て、このペプチドのいずれか一方の末端の７アミノ酸
は、HTLV−Ｉ種のATKの2B3Aペプチドの配列と一致し、
残りの内側のアミノ酸はHTLV−ＩのMT2株の2B3Aペプチ
ドと一致する。図中の１文字および３文字のアミノ酸コ
ードは、標準的な慣例（例えば、Maniatis）に従った。
本発明の重要な局面により、および以下に説明される
ように、このペプチドは、（ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−
IIに感染した被験者の血清と免疫反応性であるが、（i
i）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性である血清とは免疫
反応性でない。しかしそれは、例えば、以下に記載され
るように、血清試料中のウイルスの配列のPCR分析によ
って、HTLV−ＩまたはHTLV−IIの感染の証拠は示されな
い。
図５は、本明細書中ではATK、MT2、およびB41281とし
て同定される３つの異なるHTLV−Ｉ株の2B3Aを含むペプ
チド、および本明細書中でMO株として同定される１つの
HTLV−IIペプチドのアミノ酸配列を示す。これらのHTLV
変異体のこれらのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、
Genbank配列データベースから入手された。Genbankデー
タベースから配列を入手するために用いられ得る株の位
置の名称は以下の通りである;HTLV1A＝HTLV−Ｉ変異株
のATKのenv領域、HTVENVAA＝HTLV−Ｉ変異株のMT2のenv
領域、B41281＝別の一層変異した（divergent）HTLV−
Ｉ単離物、およびHL3V2CG＝HTLV−IIのMoT株。図はま
た、上の2B3A配列と、３つのHTLV−Ｉ株および１つのHT
LV−II株の対応する領域との間のアミノ酸配列の合致も
示す。一番上の2B3Aペプチドと個々のgp21タンパク質種
の対応する部分との間の配列相同性は、それぞれの種の
アミノ酸配列のすぐ上に示される。相同性の程度は、同
一配列が「：」によって、合致しないアミノ酸残基が空
白（ブランク）によって示される。
2B3A配列（すなわち、HTLV−Ｉペプチド抗原2B3Aに対
応するgp21アミノ酸配列の部分）は、図中で以下のよう
に同定される；配列番号26＝HTLV−ＩのATK変異体；配
列番号28＝HTLV−ＩのMT2変異体、および配列番号28＝
位置の名称B41281として同定されるHTLV変異体。Mo株由
来の対応するHTLV−II 2B3Aペプチドは、本明細書中で
配列番号29として同定される。下記の図５および図６に
示される種は、約30個の別種のHTLV−Ｉ、STLV、および
HTLV−IIから得られた異なるアミノ酸配列の代表である
（全ての変異種のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、
Genbankデータベースより入手し得る）。
５つの2B3A配列のコンセンサス配列、すなわち、この
領域のHTLV混成配列は、図の一番下に示され、本明細書
中では配列番号１として同定される。この配列は、コン
センサスアミノ酸から構築され、ここで、５つのペプチ
ドの間には完璧な一致があり、そしてアミノ酸中で既知
の変化については、６カ所（X1〜X6）でアミノ酸の変化
が起こっている。この配列では、X1はＫまたはＱ、X2は
ＬまたはＩ、X3はＫまたはＲ、X4はＩまたはＶ、そして
X5はＲまたはＣ、およびX6はＰまたはＬである。従っ
て、配列番号１は、配列番号22、配列番号26、配列番号
28、配列番号28、および配列番号29として上記のように
同定される５つの配列を包含する。配列番号１に特異的
に包含される置換以外のアミノ酸の置換もまた可能であ
るが、それはそれらが以下に記載するように2B3Aペプチ
ドの免疫反応性に本質的に影響を及ぼさない限りにおい
てである。より一般的には、本明細書の2B3Aペプチド
は、配列番号１によって同定されるアミノ酸配列から本
質的になるが、ここで、このペプチドは、以下のように
特徴付けられる： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染した被験者の血清
と免疫反応性であり、そして （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが、
（２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
ら得られる血清と非免疫反応性である。
B.3A3Bペプチド HTLV−Ｉ由来の3A3Bペプチドは、図４に示される上の
アミノ酸配列を有し、配列番号30として同定される。こ
のペプチドは2B3Aペプチドと組み合わせて、HTLV−Ｉま
たはHTLV−IIの感染に関して、ヒト血清をスクリーニン
グするアッセイキットおよび方法に用いることを意図し
ている。
上記のように、HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染した患
者から得た血清は、HTLV−I gp21タンパク質およびgp21
由来のp21E組換えタンパク質と免疫反応性である抗体を
含む。従ってこれらのペプチドは、ヒトのHTLV（Ｉまた
はII）感染を検出する免疫アッセイ法およびキットに日
常的に用いられている。しかし、このペプチドはまた、
特定の割合の非感染者の血清に含まれる抗体とも交差反
応性であり、アッセイにおいて疑似陽性となる。少なく
とも統計を利用し得る米国内の特定の地域では、交差反
応性の頻度は、HTLV陰性血液提供者の約１％である。
上記の2B3Aペプチドは、HTLV感染個体由来の血清と免
疫反応性であるが、上記で議論したように、非感染個体
とは免疫反応性ではない。このペプチドは、p21Eタンパ
ク質によって生じる疑似陽性を検出することなく、HTLV
感染を検出する有用な抗原を提供する。HTLVアッセイに
おいては、試験される血清が、たとえそれがp21Eタンパ
ク質と交差反応性であっても非感染であることの確認と
して、非感染p21E陽性個体を検出するが、HTLV感染個体
は検出しないタンパク質を提供することはさらに有用で
ある。
本明細書で記載される3A3Bペプチドは、所望の性質を
有する。すなわち、このペプチドは血清との免疫反応性
によって特徴付けられ、この血清は、（１）HTLV−Ｉま
たはHTLV−IIに感染していないヒトから得られるが、
（２）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性である。
このペプチドは、HTLV−Ｉ変異株ATK由来のプライマ
ー（増幅されるコーディング領域の各末端の７コドンを
提供する）を用いて、HTLV−ＩのMT2株をPCR増幅したコ
ーディング領域配列によって発現される。従って、この
ペプチドのいずれか一方の末端の７アミノ酸は、HTLV−
Ｉ変異株ATK由来の3A3Bペプチドと配列において一致
し、残りの内部のアミノ酸は、HTLV−ＩのMT2株の3A3B
ペプチドと配列において一致する。対応するHTLV−II由
来のペプチドは、本明細書中で配列番号34と命名され、
図６の一番上に示されるアミノ酸配列を有し、そして本
明細書中で配列番号34として同定される。
図６は、３つの異なるHTLV−Ｉ株の3A3Bを含むペプチ
ドのアミノ酸配列を示す。3A3B配列は、図中で以下のよ
うに同定される；配列番号31＝HTLV−ＩのATK変異株；
配列番号32＝HTLV−ＩのMT2変異株、および配列番号33
＝位置名称HTVENVCHによって同定されるHTLV変異株。Mo
株由来の対応するHTLV−II 3A3Bペプチドは、本明細書
中で配列番号34として同定される。この株のこれらのヌ
クレオチドおよびアミノ酸配列は、上記のようにGenban
kデータベースより入手された。
この図はまた、上の3A3B配列と、３つのHTLV−Ｉ株の
対応する領域および一つのHTLV−II株との間のアミノ酸
配列の一致を示す。一番上の3A3Bペプチドと個々の種の
gp21タンパク質の対応する部分との間の配列相同性は、
それぞれの種のアミノ酸配列の真上に示される。各配列
についての相同性の程度は「：」によって、一致してい
ないアミノ酸残基については空白（ブランク）によって
示される。
５つの3A3Bの配列のコンセンサス配列、すなわち、こ
の領域におけるHTLV混成配列は、図の一番下に示され、
そして本明細書中では配列番号２として同定される。上
記のように、この配列は、一致したアミノ酸から構築さ
れ、ここでは５つのペプチドの間に完全な一致があり、
そしてアミノ酸中の既知の変化により、８カ所（X1〜
X8）でアミノ酸変化が起こっている。この配列では、X1
はＲまたはＣ、X2はＰまたはＬ、X3はＴまたはＳ、X4は
ＳまたはＴ、X5はＳまたはＰ、X6はＩ、ＭまたはＶ、X7
はＮまたはＫ、およびX8はＬまたはＩである。従って、
配列番号２は、配列番号30、配列番号31、配列番号32、
配列番号33、および配列番号34として上記のように同定
される５つの配列を包含する。配列番号２に含まれる置
換以外のアミノ酸の置換が予想されるが、それはそれら
が以下のように3A3Bペプチドの免疫反応性に本質的に影
響を及ぼさない限りにおいてである。
より一般的には、この3A3Bペプチドは、配列番号２と
して同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異
的ペプチドを包含する。ここで、このペプチドは、血清
との免疫反応性によって特徴付けられるが、この血清
は、（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが、
（２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
ら得られる血清である。
C.HTLV−ＩおよびHTLV−II特異的ペプチド 2B3Aペプチド、および上記の2B3Aおよび3A3Bペプチド
の組み合わせは、HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒ
ト血清を検出する免疫アッセイ法およびキットで用いる
ために設計される。このセクションで述べるHTLV−I MT
Aペプチドおよび対応するHTLV−II由来のgp46ペプチド
は、HTLV−Ｉによる感染とHTLV−II感染による感染症と
を区別するアッセイおよびキットにおいて有用である。
MTAペプチドの調製および性質および対応するHTLV−I
Iペプチドは、1991年２月８日に出願された同時係属中
の米国特許出願「HTLV−ＩおよびHTLV−IIペプチド抗原
および方法」、出願番号第07/653,091号および対応する
PCT特許出願番号pct/us92/00823号（1992年８月20日公
開）に既に記載され、本明細書中に参考として援用され
ている。MTA−１、MTA−４、およびMTA−５として同定
されるMTAペプチドのコーディング領域は、図１に示さ
れ、第5565塩基と第5895塩基の間の領域を囲んでいる。
図９は、MTA−１（配列番号３）、MTA−４（配列番号
39）、およびMTA−５（配列番号40）のアミノ酸配列を
示す。３つの全てのペプチドは、特にHTLV−Ｉ感染血清
に対して免疫反応性であり、すなわちそれは、HTLV−II
感染血清に対しては免疫反応性ではないということであ
る。一つのより小さいHTLV−Ｉペプチドは、図10でK163
（配列番号41）として同定され、特にHTLV−Ｉ感染血清
に対して免疫反応性である。
図９の下部は、特にHTLV−II血清に対して免疫反応性
である、すなわち、HTLV−Ｉのみに感染している患者由
来の血清とは反応性を示さない、対応するHTLV−II配列
を示す。これらは、K15（配列番号42）、K34（配列番号
43）、および４（配列番号４）を包含する。より小さい
ペプチド抗原K34は、より大きなペプチド抗原K15および
K55に対するのと本質的に同じ免疫反応性を、HTLV−II
感染血清に対して有することを示した。
上記のHTLV−ＩおよびHTLV−II特異的ペプチドは、上
記PCT出願第PCT/US92/00823号に記載の組換え方法によ
り調製され得る。
II.2B3Aおよび3A3Bペプチドの同定 p21Eポリヌクレオチドコーディング配列は、本明細書
中で配列番号５として同定され、p21Eクローニングベク
ター（Samuelら）由来の第6096塩基〜第6497塩基を拡大
して、図２に示す。この領域内の多くのペプチドが、HT
LV−ＩおよびHTLV−II感染血清との免疫反応性、ならび
にp21Eペプチドと免疫反応性である非感染血清との免疫
反応性について試験された。
A.細菌ライゼートの調製 構築されたペプチドを図４に示す。これらは、p21E
（配列番号６）、1A1B（配列番号19）、2A2B（配列番号
20）、2A3B（配列番号21）、2B3A（配列番号22）、3A3B
（配列番号30）、MF1R2（配列番号24）、およびMF2R1
（配列番号25）として同定された組換えペプチドを包含
する。
このペプチドは、実施例1Aに詳しく説明するように、
（ｉ）HTLV−Ｉ株MT2から選択されたコーディング領域
のPCR増幅、増幅されたコーディング領域のpGEX−GL1発
現ベクターへの挿入、およびその発現ベクターを用いた
コンピテントE.coli宿主細胞の形質転換、により調製さ
れた。
図3Aおよび3Bは、ペプチドコーディング領域の構築に
用いられる４つの正方向プライマーおよび４つの逆方向
プライマーのそれぞれの配列を示す。これらは、FP−1A
（配列番号９）、FP−2A（配列番号10）、FP−MF1（配
列番号11）、およびFP−3A（配列番号13）として同定さ
れる正方向プライマー、ならびにRP−1B（配列番号1
4）、RP−2B（配列番号15）、RP−MR1（配列番号16）、
およびRP−3B（配列番号18）として本明細書中で同定さ
れる逆方向プライマーを含む。このプライマーの5'末端
は、一つまたはそれ以上の次の制限酵素、Nco I、BamH
I、およびEcoR Iの認識配列を有している。次いで、増
幅されたDNAは、適切な制限酵素で切断し、同様に切断
されたpGEX−GLI発現ベクターに連結し得る。pGEX−GLI
のクローニング部位もまた、図3Cに示す。
それぞれの選択されたペプチドコーディング領域は、
選択された正方向および逆方向プライマーを用いるPCR
増幅によって構築される。例えば、1A1Bペプチドのコー
ディング領域を構築するために、正方向プライマーFP−
1Aおよび逆方向プライマーRP−1Bを用いてp21コーディ
ング領域を増幅する。2B3Aペプチドのコーディング領域
を構築するために、正方向プライマーMF1および逆方向
プライマーMR1が、その配列のPCR増幅に用いられる。
B.細胞ライゼートのスクリーニング 上記の組換えペプチドは、実施例1Cに記載のウエスタ
ンブロットアッセイ方式でスクリーニングされた。簡単
にいえば、選択された発現ベクターを用いて形質転換さ
れた全細胞細菌ライゼートは、SDS/PAGE（Laemmli）に
よって分画され、ニトロセルロース上へエレクトロブロ
ットされ、そして（ｉ）HTLV−Ｉ感染個体由来のEBV活
性化リンパ球から得られた抗HTLV−Ｉ抗体（実施例1
B）、ならびに（ii）HTLV感染血清およびコントロール
血清との免疫反応性について試験された。詳細を下記の
実施例1Cに示す。
結果を下記の表１に示す。表中の「ND」は、「行われ
なかった」ことを意味し；「Ｉ」は、HTLV−Ｉ感染個体
の血清を示し；「II」は、HTLV−Ｉ感染個体の血清を示
し、ここでHTLV−ＩおよびHTLV−IIの診断は、PCRによ
って確認され；「UnInf」は、非感染者の血清を示す。
「Sup」は、HTLV−Ｉ陽性提供者由来のEBV活性化末梢Ｂ
細胞培養物の組織培養上清（1:2に希釈された）を示
す；そして「Ind」は、組換えタンパク質p21Eと反応性
であるが、HTLV−ＩおよびHTLV−II特異的プライマーお
よびプローブを用いるPCRによれば、HTLV−ＩまたはHTL
V−IIの存在が陰性である血清を示す。
試験されたHTLV−I/IIに感染した10個体の10の全ての
血清が、比較的大きなp21E組換えタンパク質2A3Bと強く
反応した。しかし、10個のHTLV−I/II抗血清の内２個の
みが、2A2Bまたは3A3B組換えタンパク質のいずれかと反
応した。同様に、抗p21E EBV活性化Ｂ細胞株細胞培養上
清を試験した場合、それらはどれも組換えタンパク質2A
3Bとは反応するが、2A2Bまたは3A3Bのどちらとも反応し
ない。このことは、2A3Bの中心部分はHTLV−I gp21の免
疫優性エピトープを含むことを示す。
このことは、2A3Bの中心部分の44アミノ酸を含む組換
えタンパク質2B3Aを試験したときに確認された。試験さ
れた10個のHTLV−I/II血清のうちの10個が2B3A組換えタ
ンパク質と反応した。さらに、試験された抗p21E EBVI/
II血清の両方とも2B3A組換えタンパク質と反応した。さ
らに、試験された抗p21E EBV活性化Ｂ細胞の両方が、2B
3Aを認識する抗体を産生した。
p21E組換えタンパク質と反応するが、PCRによるHTLV
−ＩまたはHTLV−II核酸に対しては陰性である血清によ
って認識されるエピトープの位置もまた決定された。７
個のp21E不確定血清の内の７個が、2A3Bおよび3A3Bの組
換えタンパク質と反応した。2B3A組換えタンパク質と反
応したp21E不確定血清は、７つの内一つもなかった。従
って、HTLV−Ｉ感染個体および感染はしていないがp21E
を認識する抗体を有する個体由来の血清によって認識さ
れるエピトープが識別可能である。
再度図４を参照すると、2B3Aペプチドが、MF1R1およ
びMF2R2ペプチドによって大まかに半分に分けられるこ
とがわかる。本発明を支持するために行われた予備的な
研究により、どのペプチドも2B3Aペプチドと強く反応す
る２個のHTLV−Ｉ血清および２個のHTLV−II血清と免疫
反応性ではないことが示された。このことは、2B3Aペプ
チドの配列の大部分が、HTLV陽性血清と免疫反応性であ
るために必要であることを示す。
C.精製タンパク質の調製 組換え2A2B、2B3A、および3A3Bペプチドは、実施例1D
に詳しく説明するように、形質転換された細菌の細菌ラ
イゼートから調製された。簡単にいえば、細胞を組換え
タンパク質の発現を誘導する条件下で培養し、遠心分離
によりペレット化し、そして凍結と溶解を数回反復する
ことにより溶菌した。溶菌の後、タンパク質はTriton−
X100TMの添加により可溶化され、そして不溶性細胞片は
遠心分離によりペレット化した。
上清画分をグルタチオンアガロースカラムに通し、そ
して吸着したタンパク質を、5mMグルタチオンで溶出さ
せた。タンパク質を含む画分をプールした。プールした
タンパク質画分は、タンパク質画分のSDS−PAGE分析に
より決定されたように、非常に均一であった。
2B3Aおよび3A3Bペプチドは、例えば、Mitchellらによ
って記載された固相ペプチド合成法、あるいは他の組換
え系によって直接調製され得ることが好ましいことが理
解され得る。
D.精製タンパク質の免疫反応性 上記から精製された2A2B、2B3A、および3A3Bペプチド
は、ウエスタンブロット方式で、下表２で同定される様
に、HTLV陽性個体の56個の血清、HTLV陰性の個体の７個
の血清、およびp21E反応性でHTLV不確定個体の18個の血
清との免疫反応性について試験し、表２の下に示すよう
に同定した。一見してわかるように、2B3Aペプチドは、
全てのHTLV−ＩおよびHTLV−II陽性血清と免疫反応性で
あるが、非感染血清とは交差反応性ではなかった。対照
的に、3A3BペプチドはいくつかのHTLV陽性血清と反応性
であったが、非感染血清18個全て（これらもまたp21Eペ
プチドと免疫反応性であった）と反応した。
IV.HTLV−ＩおよびHTLV−II診断方法およびキット 本発明の2B3Aペプチド（混成2B3Aペプチドを含むと定
義された）の４つの基本的タイプの診断用途が記載され
る。
第１の一般的なアッセイタイプは、HTLV−ＩまたはHT
LV−II感染に関して、ヒト血清をスクリーニングするエ
ンザイムイムノアッセイである。このアッセイ方式で
は、表面結合2B3Aペプチドを有する固相試薬が、試薬上
のペプチドに抗体が結合し得る条件下で、被検体血清と
反応する。このアッセイはまた、固相に結合しているさ
らなるHTLVペプチド、すなわち組換え型またはHTLVウイ
ルスライゼート由来のいずれかを利用する。試薬を洗浄
して非結合の血清成分を除去した後、試薬をリポーター
標識抗ヒト抗体と反応させ、2B3Aペプチドおよび固体支
持体に結合している他の全てのHTLVペプチドに結合した
抗HTLV−ＩまたはHTLV−II抗体の量に比例して、リポー
ターを試験に結合させた。試薬を再び洗浄して未結合の
抗体を除去し、試薬に結合したリポーターの量を測定し
た。リポーター標識抗体、およびリポーター検出に必要
とされるさらなる試薬を、本明細書中では、固体支持体
上のペプチド抗原に結合したヒト抗体の存在を検出する
ためのリポーター手段という。
第２のアッセイタイプは、HTLV−ＩおよびHTLV−IIに
対する抗体の検出およびHTLV−ＩおよびHTLV−II感染個
体の区別の両方のためのエンザイムイムノアッセイであ
る。このアッセイ方式では、HTLV−Ｉ、またはHTLV−I
I、またはHTLV−ＩとHTLV−IIとの両方に対する抗体を
特異的に検出し得る組換えペプチド抗原が、異なる位置
で固相試薬に結合する。試験される血清の２つの試料
は、固相試薬の適切な領域に添加され、その後、本質的
に上記のようにアッセイが行われる。
図10Aは、このタイプの固相試薬の一つの特異的な実
施態様を示す。この試薬は、ヒト血清試料中のHTLV−Ｉ
またはHTLV−II感染の検出に用いるキットの部分を形成
する固体支持体10を含む。この支持体は、第１、第２、
第３および第４の反応ゾーンを有し、それぞれ12、14、
16、および18に示される。反応ゾーン12は、2B3Aペプチ
ド分子が結合した表面を有する。このゾーンは、HTLV陽
性血清試料（HTLV−ＩまたはHTLV−II感染）由来の抗体
と免疫反応性であるが、p21Eペプチドとは免疫反応性で
あるがHTLV−ＩまたはHTLV−II感染の証拠を示さない
「疑似陽性」とは、免疫反応性ではない。
反応ゾーン14は、3A3Bペプチド分子が結合した表面を
有する。このゾーンは、次の抗体と免疫反応性である。
すなわち、HTLV−I p21Eペプチドと交差反応性である
が、血清自身がHTLV−ＩまたはHTLV−II感染の証拠、例
えばHTLV特異的配列のPCR検出を示さない抗体である。
反応ゾーン16は、特異的にHTLV−Ｉ感染個体由来の血
清抗体と免疫反応性であるペプチド分子が結合した表面
を有する。一つの好ましいHTLV−Ｉペプチドは、上記で
（配列番号３）として同定されたMTA−１ペプチドであ
る。種々の関連gp46ペプチドは、MTA−４、MTA−５、お
よびK163（全て図11に示す）を包含し、それらもまた用
いられ得る。
反応ゾーン18は、特異的にHTLV−II感染個体由来の血
清抗体と免疫反応性であるペプチド分子が結合した表面
を有する。一つの好ましいHTLV−Ｉペプチドは、上記で
（配列番号４）として同定されたＫ−55ペプチドであ
る。その他の好ましいHTLV−IIペプチドは、上記で（配
列番号４および配列番号43として）同定されたK15およ
びK34ペプチドである。
上記アッセイの固相試薬は、ポリマー支持体などのよ
うなタンパク質物質を固体支持体に結合させるための既
知の技術によって調製される。この支持体は、アミンア
ルデヒド、カルボキシル、アルコールまたはスルフヒド
リル基のような反応性表面基を提供し得る。このペプチ
ド結合法は、一般にタンパク質の支持体への非特異的吸
着、またはタンパク質の共有結合、すなわち代表的には
遊離のアミン基を介して、固体支持体上の活性化カルボ
キシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド基のよう
な化学的反応性基への結合、を包含する。非特異的吸着
または化学的誘導のどちらかによってペプチドを支持体
表面に結合させる方法は、良く知られている。
代表的なアッセイ法では、血清試料の適切な希釈物
が、固相試薬の４つの反応ゾーンのそれぞれと接触して
置かれる。一般に、血清試料は、ゾーンを覆うために十
分な量、例えば50〜200μｌ血清試料が各ゾーンに置か
れる。この血清は、血清抗体が支持体結合ペプチドと免
疫反応性であるに十分な条件下で、試薬と共にインキュ
ベートされる。代表的には、反応条件は37℃で30〜60分
である。
インキュベーションの後、この試薬を生理的緩衝液な
どで洗浄し、非結合のおよび非特異的結合の血清物質を
除去した。次いで、洗浄された各ゾーンに、酵素標識抗
ヒト抗体のような検出試薬を１滴添加して、固体支持体
上に結合した抗HTLV−Ｉ抗体量に比例して酵素を試薬に
結合させた。試薬を再び洗浄して非結合の抗体を除去
し、そして試薬に結合した酵素の量を測定した。
図10Bは、HTLV−Ｉ感染個体由来の血清試料中に観察
され得る反応パターンを示し、ここで斜線で陰を付けた
部分は検出可能な免疫反応を示す。この場合では、第二
ゾーンとの反応は起こらないが、いくつかのHTLV−Ｉ試
料が第二ゾーンの3A3Bペプチドと免疫反応性であり得る
（上の表２）。第四ゾーンではなく第三ゾーンとの反応
は、HTLV−Ｉのみの感染を示す。
図10Cは、HTLV−II感染個体由来の血清試料中に観察
され得る反応ゾーンパターンを示す。この場合、血清抗
体は、3A3Bペプチドおよび2B3Aペプチドと免疫反応性で
ある（上の表２）。第三ゾーンではなく第四ゾーンとの
反応は、HTLV−IIのみの感染を示す。
最後に、図10Dは、非感染だが交差反応性血清の血清
試料に観察され得る反応ゾーンパターンを示す。第一ゾ
ーンとの反応がないのは、たとえ血清が3A3Bペプチドを
認識する交差反応性抗体を含んでいても、個体が、HTLV
−ＩまたはHTLV−IIには感染していないことを示す。第
三または第四ゾーンのいずれかとの反応がないことによ
り、試験血清中にHTLV−ＩまたはHTLV−II感染がないこ
とがさらに確かになる。
第３の一般的なアッセイタイプは、HTLV−ＩまたはHT
LV−II抗血清の確認に用いるウエスタンブロットアッセ
イである。このアッセイ方式は、本発明で記載されるg2
1ペプチド抗原の一つに加え、米国特許第__号およびPCT
特許出願番号第PCT/US92/00823号に記載される、HTLV−
ＩおよびHTLV−IIに対する血清抗体の検出および識別に
効果的である一つまたはそれ以上のgp46組換えペプチド
を含む。一つの好ましい方式では、確認のペプチドは、
HTLV−Ｉウイルスライゼート由来のp24 gagタンパク
質、およびHTLV−I gp21エンベロープタンパク質の大き
な部分を含むp21E組換えエンベロープタンパク質を含
む。このHTLV−Ｉウイルスライゼートは、HTLV−Ｉおよ
び／またはHTLV−II gagタンパク質に対する抗体を含む
ほとんど全ての血清を検出する。HTLV−ＩおよびHTLV−
II env領域に対する抗体は、p21E組換えタンパク質によ
って検出されるが、非感染個体由来のいくつかの血清も
また、p21Eタンパク質と反応する（Lalら;Lipkaら、199
1）。この血清は、HTLV−I gp46ペプチド抗原MTA1およ
びHTLV−II gp46ペプチド抗原K55に対してそれが示す反
応性によって、HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染している
と診断される。従って、もしも特定の感染血清がK55で
はなくMTA1と反応すれば、その個体は、HTLV−Ｉに感染
している。もし逆が真実なら、個体はHTLV−IIに感染し
ていると診断され得る。このウエスタンブロット確認ア
ッセイの評価は、出願人および共同研究者によって報告
された（Robertsら;Lipkaら、1992b）。これらの研究で
は、記載されたアッセイは99％の特異性を有し、HTLV−
ＩおよびHTLV−IIに感染した個体の検出感度は99％であ
った。このブロット手順の詳細は、実施例2B、および引
用文献に提供されている。
ウエスタンブロットアッセイの他の実施態様では、p2
1E組換えタンパク質は、本発明で記載されるgp21ペプチ
ド2B3Aで置き換えられる。この方式では、2B3Aペプチド
のHTLV−ＩまたはHTLV−IIバージョンのいずれかが、HT
LV−ＩまたはHTLV−II gp21タンパク質のいずれかに対
する抗体を検出する。2B3Aペプチドは、p21E組換えタン
パク質と交差反応する非感染個体由来の血清との反応性
を欠くため、このアッセイは、HTLV感染個体に対してよ
り高い特異性を有し、p21E組換えタンパク質を用いる試
験によって現在示された感度と本質的に同じ感度を有す
ることが期待される。
最後の実施態様は、2B3Aおよび3A3Bペプチドの両方を
含む。実際、HTLV感染個体は、2B3Aと反応し、そしてお
そらく3A3Bペプチドとも反応する。HTLV−ＩまたはHTLV
−IIには感染していないが、p21E組換えタンパク質と交
差反応する抗体を有し、従ってHTLVスクリーニングアッ
セイで陽性となり得る個体は、3A3Bタンパク質とのみ反
応する。この実施態様は、本当にHTLVに感染している個
体、および感染していないHTLV不確定個体の両方に対し
て陽性シグナルを発する抗原を提供するという利点を有
する。このことにより、与えられた個体の血清反応性
が、より正確に測定される。
V.HTLV−ペプチドワクチン組成物 本発明はまた、ペプチドが結合する2B3Aペプチド免疫
原ペプチド担体を含有するワクチン組成物を含む。より
詳細には、ワクチンは、本質的には配列番号22で同定さ
れたアミノ酸配列からなるHTLV特異的抗原領域を有する
ペプチドを免疫原ペプチド担体と組み合わせて含有す
る。
ペプチドにとって特に有用な免疫原担体は、スカシガ
イのヘモシアニン（KLH）、破傷風トキソイド、ポリ−
１−（Lys:Glu）、ピーナツ凝集素、ポリ−Ｄ−リジ
ン、ジフテリアトキソイド、卵白アルブミン、ダイズ凝
集素、ウシ血清アルブミン（BSA）、ヒト血清アルブミ
ンなどを包含する。
2B3Aペプチドを化学的誘導を含む種々の公知の方法お
よび遺伝子工学技術により担体に結合し得る。この後者
の技術は、Gerald Quinnan、「Proceedings of a Works
hop」、1984年11月13〜14日によりさらに詳細に開示さ
れている。本発明のワクチンおよび接種物は、通常筋内
注射または皮下注射、腸溶カプセルまたは錠剤による経
口的な方法、坐剤、鼻スプレー、および投与に適したそ
の他の経路によって投与され得る。ヒト患者にとって、
ポリペプチドの適切な用量は、選択した投与経路および
多くの他の要因にいくぶん依存する。これらの要因の中
には、免疫化される哺乳類の体重、用いる担体、用いる
アジュバント、および用いることが所望される接種回数
が包含される。
ヒト被験体に対する個々の接種物は、ポリペプチドが
結合し得る担体を除いて、典型的には約10マイクログラ
ム〜約100ミリグラムのポリペプチドの単位用量を含有
する。所望する場合には、一連の用量が至適免疫のため
の期間中ずっと投与され得る。ワクチンの単位投与量剤
型（unit dosage forms）はまた、所望する場合には、
前述量のポリペプチドを含有するように提供され得る。
いずれにしても、ワクチンおよび接種物に含有される
免疫原は、「有効量」で存在し、この量は、免疫学分野
で周知の種々の要因（例えば、免疫化される哺乳類の体
重、用いる担体部分、用いるアジュバント、求められる
防御期間、および所望される免疫化プロトコル）に依存
する。
VI.抗2B3Aペプチド抗体 このセクションは、2B3Aペプチドに対して特異的なヒ
トモノクローナル抗体（Mab）の調製、2B3Aペプチドに
対して特異的なヒト組換え抗体（Rab）の調製、およびH
TLV−Ｉウイルス感染に対する受動ワクチンとしての抗
体の使用を記載する。
A.ヒト抗2B3A Mabの調製 抗2B3A抗体を生産するハイブリドーマは、当該技術分
野で既知のハイブリドーマ生産技術（Harlow）を用い
て、HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒトのＢリンパ
球から単離した抗2B3A抗体生産リンパ球と融合パートナ
ーミエローマ細胞との融合により生成され得る。
ハイブリドーマ生産の１つの模範的な方法では、無症
候性HTLV−Ｉに感染した個体の末梢血液から単離したＢ
リンパ球をエプスタイン・バーウイルス（EBV）で活性
化し、そして次に実施例1Bに記載のとおり、2B3Aペプチ
ドと免疫反応性である抗体を選択する。
陽性抗2B3A活性を示す細胞の培養物を増幅させ、そし
て融合誘導因子（fusogen）としてポリエチレングリコ
ール（PEG）を用いて、以下の材料のセクションに記載
するGLI−H7ミエローマパートナー細胞のような適切な
ヒトまたはマウス−ヒトミエローマ融合パートナーと融
合させる。次いで、ハイブリドーマを、十分に確立され
た基準（Mitchell）に従って、ヒポキサンチン、アミノ
プテリン、チミジン、およびウアバインを含有する培地
での成長により選択する。
ハイブリドーマ培養物の上清は、例えば実施例２に記
載の方法を用いて、2B3Aペプチドと免疫反応性である免
疫グロブリンの存在について試験する。
上記の工程により同定される陽性ハイブリドーマ培養
物を、限界希釈によりサブクローニングし、そして2B3A
ペプチドとの免疫反応性の再試験をした。陽性サブクロ
ーンを増幅させ、そして免疫グロブリンイソタイプおよ
び2B3Aペプチド免疫反応性についてさらに試験する。
B.ヒト組換え抗2B3A抗体の調製 抗2B3A Mabを生産するハイブリドーマの培養物は上記
のように調製される。周知の方法（MAniatis）に従い、
メッセンジャーRNA（mRNA）を細胞から単離し、そして
このmRNAを用いて、相対的なcDNAを生産する。
免疫グロブリン遺伝子のＬ鎖およびＨ鎖の可変部領域
のコーディング配列を、Ｈ鎖およびＬ鎖IgG可変部領域
について既知のPCRプライマーを用いてPCR法により増幅
する（Larrick,1989,1991,1992）。公開された手順（La
rrick,1989,1991,1992）に従い、Ｌ鎖可変部領域の増幅
したコーディング配列断片を精製し、適切な制限酵素で
切断し、IgGのＬ鎖の発現のために適切な発現ベクター
に挿入する。本明細書でpSXRD.κ−IgGとして同定され
た１つの適切な発現ベクターの構築を実施例３に示す。
公開された手順（Larrick,1989,1991）に従い、Ｈ鎖
可変部領域の増幅したコーディング配列断片を同様に精
製し、適切な制限酵素で切断し、IgGのＨ鎖の発現のた
めに適切な発現ベクターに挿入する。Ｈ鎖可変部領域の
発現のための１つの適切な発現ベクターは、pcDNA1/ne
o.IgG1ベクターである。このベクターは、IgG H鎖定常
コーディング領域を付加することによる、pcDNA1ベクタ
ー（Invitrogen,San Diego,CA）の改変により構築され
得る（Larrick,1992）。次いで、２つのプラスミドをリ
ポフェクションまたはエレクトロポレーションを用い
て、CHO細胞またはGLI−H7細胞のいずれかに同時トラン
スフェクションする。重プラスミドの選択を抗生物質GE
NETICINTM（G418,BRL ＃860−1811I）を用いて行った。
細胞をIgG生産についてアッセイし、そしてサブクロー
ニングする。サブクローンを2B3Aペプチドへの結合につ
いてアッセイする。陽性クローンを数回サブクローニン
グし、確実に純粋にした。
あるいは、記載されたようなクローン選択方法（Hus
e,McCafferty）が、HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染した
ヒトから単離したＢリンパ球から調製したcDNAをＢリン
パ球の可変部領域コーディング領域の供給源として使用
し、組換え抗2B3A抗体を得るために用いられ得る。
cDNAをファージベクターに挿入し、ベクターを適切な
E.coli細菌宿主で発現させ、そして放出したファージを
抗原を含有する固体支持体への親和性結合により選択す
る。次いで、捕獲されたファージを用いて、細菌宿主を
再感染する。
C.受動ワクチン組成物 上記で調製したヒト抗2B3A MabまたはRabは、HTLV−
Ｉおよび／またはHTLV−II感染の治療および／または予
防に用いるためのワクチン組成物に使用される。この手
法では、2B3Aペプチドを認識するMabまたはRabを、HTLV
−ＩまたはHTLV−IIに曝され、そして／またはHTLV−Ｉ
またはHTLV−IIに感染した個体に投与される。HTLV−Ｉ
に感染した細胞にこれらの抗体を結合することにより、
次いで、マクロファージが抗HTLV−Ｉ抗体が結合してい
るＢリンパ球を破壊する体液性免疫応答が提供される。
ワクチン組成物を作製するために、抗HTLV−Ｉ抗体
は、適切な注射（一般的に非経口）用溶液に処方され
る。その組成物は、非感染個体におけるHTLV感染の阻止
または感染個体におけるウイルス複製の阻害に有効な量
で投与される。好ましい抗体用量は、約0.5〜5mgの抗体
/kg体重の範囲である。感染個体を処置するのに、その
組成物は、ある一定期間をあけて、好ましくは、約１週
間から４週間間隔で、投与される。ワクチン接種は、予
測される感染の前に、または既存のHTLV−Ｉ感染を処置
する際に行われ得る。
一つの一般的な使用では、HTLV−Ｉに感染していると
診断された母親の幼児にその抗体組成物を注射し、ウイ
ルス感染を防止する。特に、幼児が長期におよぶ母乳育
ちの場合である。その抗体は、免疫予防によってHTLV−
Ｉを処置または予防する方法として、例えば筋肉内注
射、皮下注射、または静脈注射、または幼児の場合はま
た、経口投与によっても投与され得る。
VII.交差反応タンパク質3A3Bの同定 HTLV−非感染ヒトと特異的に交差反応するHTLVエピト
ープ3A3Bの同定は、このセクションで述べられている方
法によって、交差反応抗体を誘導する原因となるタンパ
ク質を同定するのに用いられ得る。
A.タンパク質の抗体同定 3A3Bペプチドに特異的なポリクローナルまたはモノク
ローナル抗体は、交差反応個体の血清に存在する交差反
応ペプチドを単離・同定するのに使用され得る。その個
体は、例えばHTLVウイルスの存在には陰性であるが、血
清はHTLV p21E抗原と交差反応するといった個体であ
る。
この抗3A3B抗体は、慣例の方法（3A3Bをペプチド抗原
として使用）（Harlow）にて作成されるポリクローナル
またはモノクローナル抗体であり得る。このペプチド抗
原は、好ましくは、スカシガイのヘモシアニンといった
適切な担体タンパク質に結合しており、ポリクローナル
抗体を作製するためウサギ、またはMabを作製するため
マウスといった適切な動物に注射される。
あるいは、この抗体は、既知のアフィニティー精製方
法（Harlow）を用いて、3A3Bペプチドを固体支持体に結
合させそしての交差反応性個体からの抗体を捕獲するこ
とによるアフィニティー精製によって精製され得る。
交差反応する被験体から交差反応タンパク質を単離す
るため、上記の抗3A3B抗体を標準的な誘導体化方法にて
固体支持体に結合させ、3A3B交差反応の個体から単離し
たプラズマまたは全細胞ライゼートの試料を支持体層に
通し、その支持体に交差反応タンパク質を捕捉させた。
その捕捉したタンパク質はカラムから遊離され得、候補
となるタンパク質が分取SDS−PAGEまたはクロマトグラ
フィーにより精製され得る。そしてその精製タンパク質
は標準的な方法を用いて配列決定され得る。
一旦、部分的にタンパク質の配列を得ると、当該分野
で周知の方法（Maniatisら、SISPA特許）を用いてペプ
チドの原因となっているコーディング配列を同定するこ
とが可能である。そのような一つの方法は、3A3B交差反
応個体由来の血清および／またはPBMC試料から核酸を単
離し、次いでλgt10ライブラリーを構築することを包含
する。得られたライブラリーを標識した縮重プライマー
でプローブし、単離した3A3B交差反応タンパク質をコー
ドし得る血清中のハイブリダイズ配列を含むクローンを
同定する。その他の方法論（この適用の範囲の及ばな
い）もまた使用され得る。
以下の実施例は、発明の種々の局面を説明するが、し
かしその範囲に限定することを意図としない。
材料 以下の実施例で用いた材料は以下のとおりである： 酵素:DNAase IおよびアルカリホスファターゼはBoehr
inger Mannheim Biochemicals（BMB,Indianapolis,IN）
から入手した;EcoR I、EcoR Iメチラーゼ、DNAリガー
ゼ、およびポリメラーゼＩは、New England Biolabs（N
EB,Beverly,MA）から入手した；そしてRNaseはSigma（S
t.Louis,MO）から入手した。
その他の試薬:EcoR IリンカーはNEBから入手した；そ
してニトロブルーテトラゾリウム（NBT）、５−ブロモ
−４−クロロ−３−インドリルホスフェート（BCIP）、
５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシド（Ｘ−gal）およびイソプロピルβ−
Ｄ−チオガラクトピラノシド（IPTG）はSigmaから入手
した。
GLI−H7細胞株はCarrollにより記載されるように、マ
ウスNS−１ミエローマとヒト活性化Ｂリンパ球との融合
から構築したヒト−マウスヘテロミエローマ融合パート
ナー細胞株である。HEp−２細胞株はアメリカンタイプ
カルチャーコレクション（ATCC）、Rockville,MD（ATCC
−CCL−23）から入手した類表皮腫（ヒト喉頭由来）細
胞株である。チャイニーズハムスター卵巣細胞（DUX−B
11）はL.A.Chasin（Urlaub）から入手した。
細胞培養培地（PFHM、RPMI、IMDM）はGibco Laborato
riesから入手した。
実施例１ 2B3Aおよび3A3B組換えペプチドの調製 A.発現ベクターの構築 HTLV−Ｉゲノム由来の完全コピーDNA挿入物を含有す
るプラスミドは、Laboratory of T−Cell Biology,Nati
onal Institutes of Health（Bethesda,MD）のDr.R.C.G
alloおよびF.Wons−Staalから入手した。
gp21コーディング領域（図２）は、Dr.Wong−Stahlか
ら入手したHTLV−Ｉクローンsp65 MT−２に存在するgp2
1コーディング領域に由来した。HTLV−I gp21の選択し
た部分を増幅するように設計したオリゴヌクレオチドプ
ライマー（図３）を、製造会社の説明書に従い、自動合
成機（Applied Biosystems,Foster City,CA）で合成し
た。全てのプライマーは、それらの5'末端に位置するBa
mH I、Nco Iおよび／またはEcoR I部位のいずれかを含
有し、pGEX−GLI発現系にインフレーム（in−frame）な
挿入となるように、増幅したDNAのクローニングを促進
した。
PCRを製造会社の説明書に従って行い（Perkin−Elmer
/Cetus,Norwalk,CT）、そして全てのPCR反応物は鋳型と
して2ngのHTLV−Ｉクローンsp65 MT−２（Dr.F.Wong−S
taalにより寛大にも提供された）および1.0μＭの適切
なオリゴヌクレオチドプライマーを含んだ。PCR増幅を
鋳型の変性（１分間、94℃）、プライマーのアニール
（２分間、50℃）、およびプライマー伸長（２分間、72
℃）の25サイクルで行った。増幅したDNAを精製し、適
切な制限酵素で２時間切断し、そして発現ベクターpGEX
−GLIに連結した。このベクターは、市販のベクターpGE
X−２（Pharmacia,Piscataway,NJ）の改変バージョンで
あり、これはすでに同じ制限酵素で切断されている。
B.スクリーニングのための抗体の調製 末梢性Ｂ細胞を、すでに記載されているとおり（Perk
ins;Foung）、無症候性HTLV−Ｉに感染した個体から単
離し、96ウェルマイクロタイタープレートに１ウェルあ
たり104細胞でエプスタイン・バーウイルス（EBV）で活
性化した。２日間の培養後、特異的な抗HTLV−I IgG活
性をHTLV−Ｉウイルスライゼートに基づくエンザイムイ
ムノアッセイ（Diagnostic Biotechnology,Singapore）
を用いて評価した。抗HTLV−Ｉ活性を検出し、そして次
いで、EMB不滅化Ｂ細胞を培養物が消費する上清が残っ
ている間の約１ヶ月間培養した。HTLV−Ｉ確認アッセイ
（Diagnostic Biotechnology）を用いた次のウエスタン
ブロット分析で、３つのEBV活性化Ｂ細胞株（3E9、5G
4、および6E9と称される）が、組換えenvタンパク質p21
Eと強く反応することが分かった。次いで上清をBLOTTO
で1/2に希釈し、そして単離したgp21組換えタンパク質
をスクリーニングするために用いた。その次に、マウス
−ヒトヘテロミエローマ細胞への融合において、これら
３つのEBV活性化Ｂ細胞株はどれもうまく融合せず、結
局、EBV活性化Ｂ細胞の抗体生産を中止した。しかし、
活性化Ｂ細胞の上清は、以下に記載のスクリーニング手
順で有用な高特異的抗体調製を提供した。さらに、３つ
の独立したEBV活性化Ｂ細胞から2B3Aに対する抗体が単
離されたことで、2B3Aペプチド抗原に対する抗体が感染
個体のHTLV−ＩまたはHTLV−IIに対する免疫応答の主要
素であることが確認された。
C.免疫原ペプチドのスクリーニング プラスミドを含有する細菌を、形質転換E.coliの2ml
の培養物から調製した粗ライゼートのウエスタンブロッ
ト分析により、タンパク質生産についてスクリーニング
した。全細胞ライゼートの10分の１の体積をレーン毎に
流し、そして12.0％ポリアクリルアミドSDSゲル（Laemm
li）で電気泳動した。生じたゲルをニトロセルロースフ
ィルター紙（Schleicher and Schuell,Keene,NH）の上
にエレクトロブロットし、そしてHTLV−Ｉウエスタンブ
ロットを、1/2に希釈したEBV活性化Ｂ細胞組織培養上清
（実施例1B）、または1/100に希釈したHTLV感染抗血清
もしくは1/100に希釈したコントロール抗血清とともに
室温で、一晩インキュベートした。全ての血清および上
清をBLOTTO（10mM TRIS−HCl、pH7.4、５％脱脂粉乳、
2.5％正常ヤギ血清、および0.5％ Tween−20）に希釈し
た。ウエスタンブロットをTTBS洗浄緩衝液（10mM TRIS
−HCl pH7.4、150mM NaCl、0.05％ Tween−20）で３
回、各５分間洗浄した。
結合ヒトIgGをアルカリホスファターゼ（Promega,Mad
ison,WI）と結合したヤギ抗ヒトIgGとともに１時間イン
キュベーションすることで検出した。これを次にTTBSで
４、５分濯いだ。結合二次抗体を、100mM TRIS−HCl、p
H9.5、および50mM MgCl2中に５−ブロモ−４−クロロ３
−インドリホスフェート（BCIP）およびニトロブルーテ
トラゾリウム（NBT）を含有する基質溶液中で細片（str
ip）をインキュベートすることにより検出した。生じた
ウエスタンブロットをHTLV−Ｉ感染個体または非感染個
体からの血清でスクリーニングした。これらの分析の結
果を表１に示す。
組換えクローン2A3B、2A2B、2B3A、および3A3Bは、ジ
デオキシターミネーション手順（Maniatisら）により全
てのDNA塩基配列を決定された。得られたDNA挿入物の塩
基配列はそれらの構築で用いたプライマーおよび鋳型の
DNA塩基と一致したので、これにより所望する組換えタ
ンパク質の生産が可能になり得る。
D.組換え抗原の精製 組換え融合タンパク質の精製を本質的には記載のとお
り（20）に行った。簡単に言うと、目的とする組換えプ
ラスミドを含有する細菌の一晩培養した10mlを、100μg
/mlアンピシリンをともなう500ml NZYDT培地（Maniatis
ら）が入っているフラスコに1/100希釈した。融合タン
パク質の発現を対数期の培養物へのIPTG添加（最終濃度
0.2mM）により誘導した。培養物をさらに３〜４時間、3
7℃、細菌が5000×ｇで10分間の遠心によりペレットと
なる時点で生育させた。細胞を20ml冷MTBSに再懸濁し、
そして凍結および解凍のサイクルをいくらか行うことに
より溶菌した。溶菌後、タンパク質をTriton−X100（Si
gma,St.Louis,MO）を1.0％となるまで、DNAse Iを１μg
/mlとなるまで、そしてアプロチニンを1.0％となるまで
添加することによりタンパク質を可溶化した。25℃で５
分間のインキュベートした後に、不溶性細胞片を10,000
×ｇで10分間の遠心を２回行ってペレット化し、そして
上清を残しておいた。ペレットおよび上清画分の両方か
らのアリコートをSDS−PAGE（Laemmli）により分析し、
組換えタンパク質が上記の手順により可溶化されたかど
うかを決定した。
2A3B、2A2B、および3A3B組換えタンパク質は全て可溶
性画分に存在した。３つ全ての組換えタンパク質につい
て、１リットル培養は、約50％の純度で１〜2mgの融合
タンパク質の精製を生じた。次いで、製造会社の推奨の
とおり前処理した0.8mlグルタチオンアガロース含有カ
ラム（Pharmacia,Piscataway,NJ）に上清を通した。カ
ラムを１％Toritonおよび１％アポプロトニン（Apoprot
nin）を加えた10mlのMTBSで洗浄し、続いて5mlのMTBSの
みで洗浄した。結合タンパク質を50mM Tris pH8.0中に5
mMグルタチオンを含有する緩衝液で溶出し、そして10、
1mlの画分を収集した。溶出したタンパク質のピークの
位置を280nmでの画分の吸光度の測定および画分のアリ
コートのSDS−PAGE分析により決定した。多量のタンパ
ク質を含有する画分をプールし、そしてこのプールのア
リコートを−70℃で次の分析のために冷凍した。
実施例２ 精製p21E組換え体対HTLV−Ｉ、HTLV−II、およびp21E不
確定血清の血清学的パネリング A.抗血清 これらの分析で用いた抗血清は、26人のHTLV−Ｉ感染
個体および28人のHTLV−II感染個体由来の血清の十分に
特徴づけられたパネルを包含した（Lipkaら、1991;Hadl
ockら、1992）。HTLV−ＩおよびHTLV−IIの全ての血清
は、HTLV感染についての標準的な基準に適合する抗体プ
ロフィールを有した（p24gagおよびgp46および／または
gp68envタンパク質に対する抗体）。さらに、血清を、
組換えHTLV−Ｉ抗原MTA1に対する陽性反応性および／ま
たはHTLV−Ｉ特異的オリゴヌクレオチドプライマーおよ
びプローブを用いるPCRの両方により、HTLV−Ｉに感染
しているとして分類した（Lipkaら、1992b）。同様に、
32人のHTLV−II感染個体を、組換えHTLV−II抗原K55に
対する反応性および／またはHTLV−II特異的プライマー
およびプローブを用いるPCRにより同定した（Lipkaら、
1992b）。
gp21ペプチド抗原はまた、HTLV−ＩおよびHTLV−Ｉの
特異的プライマーおよびプローブを用いるPCRにより試
験をした場合に、HTLV−Ｉ陰性の７人の個体由来の血
清、およびp21E組換えタンパク質と反応するがHTLV核酸
の存在について陰性である18人の個体由来の血清との免
疫反応性について試験した。さらに、これら18のp21E反
応性血清は、HTLV感染していることの血清学的基準に合
わなかった。HTLV−ＩおよびHTLV−Ｉに感染した個体
は、HTLV−Ｉ感染の日本人の血液提供者由来の抗血清J1
03を除いて、すべて北カリフォルニア地区からであっ
た。非感染血清は、全てStanford University Blood Ba
nkの血液提供者に由来していた。18のp21E反応性HTLV陰
性の血清は、北カリフォルニア地区からの血液提供者由
来の血清、またはCenter for Disease Control,Atlant
a,Georgiaにより提供された血清のいずれかである。
B.精製組換えペプチドの血清反応性 組換えタンパク質2A2B、2B3A、および3A3Bを実施例１
のように調製した。精製したタンパク質のアリコートを
還元条件下で1.5％ポリアクリルアミドゲル（Laemmli）
上で分離した。分離したタンパク質をニトロセルロース
メンブレン上にエレクトロブロットし、BLOTTOでブロッ
クし、風乾し、そして3mm幅の細片に切断した。
アッセイで、上記からの試験細片を最初にTTBS緩衝液
中で再水和し、そして細片をヒト試験血清と共に一晩イ
ンキュベートし、BLOTTOで1:50に希釈した。細片を洗浄
緩衝液で数回洗浄し、次いで、アルカリホスファターゼ
と結合したヤギ抗ヒトIgG（Bio−Rad,Hercules,CA）と
ともに１時間インキュベートした。洗浄後、100mM Tris
−HCl緩衝液、pH9.5、50mM MgCl2中にNBTおよびBCIPを
含有する基質溶液中に細片をインキュベートすることに
より、発色を成し遂げた。発色は、細片上に一様なバッ
クグランドが現れるまで継続し、脱イオン水で２回細片
を濯ぐことにより停止した。組換えタンパク質2A2B、2B
3A、および3A3Bを実施例2Aに記載のとおりHTLV感染血清
および陰性血清のパネルに対して試験した。イムノアッ
セイの結果を上記の表２に示した。
実施例３ pSXRD.κ−Igの構築 哺乳類発現ベクターpSXRD.κ−Igの構築を幾つかの工
程で行った。基となるベクターはpUC18である。pUC18の
BamH I部位に、ポリアデニル化シグナルを含むHBV表面
抗原遺伝子からの585bpのBamH I−BGl II断片を挿入し
た（Larrickら、1992）。方向は、HBV挿入物のBamH I部
位がベクターのEcoR I部位に最も近くなるようにした。
ポリリンカーのHind III部位およびHinc II部位の間の
領域をこれら２つの酵素でプラスミドを切断し、そして
DNAポリメラーゼのKlenow断片を用いてHind III部位を
平滑化することにより除去した。連結後、生じたプラス
ミドをpUCHBV3'と名付けた。独自のSal I部位を、合成
オリゴヌクレオチドプライマーを用いてBamH I部位に挿
入した。
独特のEcoR I部位およびSal I部位の間に、一連の連
結で以下の断片を挿入した：（ａ）SV40初期プロモータ
ー、EcoR I部位に結合（上記SV40プロモーターの直前に
位置するPvu II部位および上記Ｔ抗原開始コドンの直前
に位置するHind III部位に合成オリゴヌクレオチドを加
えることにより作製）、（ｂ）Hind III部位に結合しそ
してXba I部位で終わる、関連性のないcDNA由来のスタ
ッファー断片（stuffer fragment）、（ｃ）SV40ポリア
デニル化シグナルおよびRSVプロモーターを含有するpcD
NA1/neo由来のXba I−Bgl II断片。Xba I部位をベクタ
ーに提供し、そしてBgl II部位をPCRクローニングを用
いてRSVプロモーターおよびNeo選択性マーカーの間の連
結部に位置するように挿入する、および（ｄ）ネズミDH
RF cDNA、3'末端のBgl II部位に結合。制限部位をPCRを
用いて挿入した。
本発明は、特定の実施態様、構築方法、および用途に
関して記載されているが、種々の他の用途、処方、およ
び実施方法が本発明の考慮される範囲内にあることは当
業者にとって明確である。
配列表 （１）一般的情報： （ｉ）出願人：ハドロック，ケネス ジー．ゴー，チ
ン−ジョーフォン，スティーブン ケイ．エイチ． （ii）発明の名称:HTLVについての方法およびアッセ
イ （iii）配列数:46 （iv）連絡住所 （Ａ）住所人：ロー オフィシーズ オブ ピータ
ー デリンジャー （Ｂ）番地：スイート 300,ケンブリッジ アベニ
ュー 350 （Ｃ）市：パロ アルト （Ｄ）州：カリフォルニア （Ｅ）国：アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号:94306 （ｖ）コンピューター読み出し形態： （Ａ）媒体型：フロッピーディスク （Ｂ）コンピューター:IBM PC互換用 （Ｃ）OS:PC−DOS/MS−DOS （Ｄ）ソフトウェア：パテントイン リリース＃1.
0、バージョン＃1.25 （vi）現在の出願データ： （Ａ）出願番号:US 08/014,153 （Ｂ）出願日:1993年２月５日 （Ｃ）分類： （vii）先願データ： （Ａ）出願番号:US 07/653,091 （Ｂ）出願日:1991年２月８日 （vii）先願データ： （Ａ）出願番号:US 07/366,313 （Ｂ）出願日:1989年６月13日 （vii）先願データ： （Ａ）出願番号:US 06/948,270 （Ｂ）出願日:1986年12月31日 （viii）代理人／事務所情報： （Ａ）氏名：ファビアン，ギャリー アール． （Ｂ）登録番号:33,875 （Ｃ）照会／記録番号:4600−0106 （ix）電話回線情報： （Ａ）電話：（415）324−0880 （Ｂ）テレファックス：（415）324−0960 （２）配列番号１の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:44アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3AC,Fig.5 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:6 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＫまたはＱ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:8 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＬまたはＩ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:10 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＫまたはＲ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:11 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＩまたはＶ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:36 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＬまたはＩ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:41 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＲまたはＣ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:43 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＰまたはＬ
である」 （xi）配列：配列番号1: （２）配列番号２の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:34アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3BC,Fig.6 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:5 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＲまたはＣ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:7 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＰまたはＬ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:10 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＴまたはＳ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:12 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＳまたはＴ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:15 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＳまたはＰ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:16 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＩ、Ｍ、ま
たはＶである」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:25 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＮまたはＫ
である」 （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号:Modified−site （Ｂ）存在位置:28 （Ｄ）他の情報：注記＝「ここでXaaはＬまたはＩ
である」 （xi）配列：配列番号2: （２）配列番号３の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:48アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MTA−1,Fig.9 （xi）配列：配列番号3: （２）配列番号４の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:44アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:K55 or“4,"Fig.9 （xi）配列：配列番号4: （２）配列番号５の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:427塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:p21E（Ｉ）CS,Fig.2A （xi）配列：配列番号5: （２）配列番号６の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:142アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:p21E（Ｉ）,Fig.2A （xi）配列：配列番号6: （２）配列番号７の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:480塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:p21E（II）CS,Fig.2B （xi）配列：配列番号7: （２）配列番号８の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:160アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:p21E（II）,Fig.2B （xi）配列：配列番号8: （２）配列番号９の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:39塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:FP−1A,Fig.3A （xi）配列：配列番号9: （２）配列番号10の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:36塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:FP−2A,Fig.3A （xi）配列：配列番号10: （２）配列番号11の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:36塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:FP−MF1,Fig.3A （xi）配列：配列番号11: （２）配列番号12の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:34塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MF2,Fig.3A （xi）配列：配列番号12: （２）配列番号13の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:42塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:FP−3A,Fig.3A （xi）配列：配列番号13: （２）配列番号14の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:48塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:RP−1B,Fig.3B （xi）配列：配列番号14: （２）配列番号15の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:30塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:RP−2B,Fig.3B （xi）配列：配列番号15: （２）配列番号16の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:26塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:RP−MR1,Fig.3B （xi）配列：配列番号16: （２）配列番号17の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:31塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MR2,Fig.3B （xi）配列：配列番号17: （２）配列番号18の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:30塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:RP−3B,Fig.3B （xi）配列：配列番号18: （２）配列番号19の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:18アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:1A1B,Fig.4 （xi）配列：配列番号19: （２）配列番号20の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:47アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2A2B,Fig.4 （xi）配列：配列番号20: （２）配列番号21の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:86アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2A3B,Fig.4 （xi）配列：配列番号21: （２）配列番号22の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:44アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3A,Fig.5 （xi）配列：配列番号22: （２）配列番号23の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:34アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3B,Fig.6 （xi）配列：配列番号23: （２）配列番号24の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:25アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MF1R2,Fig.4 （xi）配列：配列番号24: （２）配列番号25の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:21アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MF2R1,Fig.4 （xi）配列：配列番号25: （２）配列番号26の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:63アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3AS,Fig.5 （xi）配列：配列番号26: （２）配列番号27の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:63アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3AM,Fig.5 （xi）配列：配列番号27: （２）配列番号28の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:63アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3AB,Fig.5 （xi）配列：配列番号28: （２）配列番号29の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:63アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3AMO,Fig.5 （xi）配列：配列番号29: （２）配列番号30の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:8アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3B,Fig.4 （xi）配列：配列番号30: （２）配列番号31の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:53アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3BS,Fig.6 （xi）配列：配列番号31: （２）配列番号32の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:53アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3BM,Fig.6 （xi）配列：配列番号32: （２）配列番33の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:53アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3BCH,Fig.6 （xi）配列：配列番号33: （２）配列番号34の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:53アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3BMO,Fig.6 （xi）配列：配列番号34: （２）配列番号35の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:133塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3A（Ｉ）,Fig.7 （xi）配列：配列番号35: （２）配列番号36の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:133塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:2B3A（II）,Fig.7 （xi）配列：配列番号36: （２）配列番号37の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:102塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3B（Ｉ）,Fig.8 （xi）配列：配列番号37: （２）配列番号38の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:102塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:3A3B（II）,Fig.8 （xi）配列：配列番号38: （２）配列番号39の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:47アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MTA−4,Fig.9 （xi）配列：配列番号39: （２）配列番号40の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:77アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:MTA−5,Fig.9 （xi）配列：配列番号40: （２）配列番号41の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:18アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:K163,Fig.9 （xi）配列：配列番号41: （２）配列番号42の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:49アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:K15,Fig.9 （xi）配列：配列番号42: （２）配列番号43の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:17アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:K34,Fig.9 （xi）配列：配列番号43: （２）配列番号44の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:68塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類:Genomic DNA （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名：改変型pGEX,FIG.3C （ix）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号CDS （Ｂ）存在位置:3..68 （xi）配列：配列番号44: （２）配列番号45の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:21アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （xi）配列：配列番号45: （２）配列番号46の情報： （ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ:99アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル配列:NO （vi）起源： （Ｃ）個体・単離生物名:P21E,Fig.4 （xi）配列：配列番号46:
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｒ 1:19 Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 ハドロック，ケネス ジー. アメリカ合衆国 カリフォルニア 94587，ヘイワード，リージェンツ ブ ールバード 32757 (72)発明者 ゴー，チン−ジョー シンガポール共和国 シンガポール 2159，ヤラン レイアン レイアン，35 (72)発明者 フォン，スティーブン ケイ．エイチ. アメリカ合衆国 カリフォルニア 94305，スタンフォード，メイフィール ド アベニュー 668 (56)参考文献 特開 平３−232491（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−31674（ＪＰ，Ａ) 特表 平４−502773（ＪＰ，Ａ) 国際公開91／012325（ＷＯ，Ａ１) 国際公開90／015075（ＷＯ，Ａ１) 国際公開91／007510（ＷＯ，Ａ１) 国際公開92／013946（ＷＯ，Ａ１) 米国特許5066579（ＵＳ，Ａ) Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．ＵＳＡ，1983年，80，3618−3622 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．ＵＳＡ，1991年，88，7694−7698 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 14/15 ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ ｅｑ ＰｕｂＭｅｄ

Claims (17)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】配列番号１で同定されるアミノ酸配列から
    なるペプチドであって、該ペプチドは、以下： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒト被験体由
    来の血清との免疫反応性、および （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが
    （２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
    ら得られる血清との非免疫反応性 により特徴づけられる、ペプチド。
  2. 【請求項２】配列番号22で同定されるアミノ酸配列から
    なる、ペプチド。
  3. 【請求項３】配列番号29で同定されるアミノ酸配列から
    なる、ペプチド。
  4. 【請求項４】ヒト血清試料においてHTLV−ＩまたはHTLV
    −IIの感染を検出する固相アッセイでの使用のための、
    請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチドであっ
    て、該ペプチドが固体支持上に保持されている、ペプチ
    ド。
  5. 【請求項５】ヒト血清においてHTLV−Ｉ感染またはHTLV
    −II感染の存在を検出するキットであって、該キット
    は、以下： （ａ）固体支持体； （ｂ）第一反応ゾーンで、支持体に結合した、配列番号
    １で同定されるアミノ酸配列からなるペプチドであっ
    て、以下： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒト被験体由
    来の血清との免疫反応性、および （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが
    （２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
    ら得られる血清との非免疫反応性 により特徴づけられる、ペプチド；ならびに （ｃ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリ
    ポーター手段、 を包含する、キット。
  6. 【請求項６】ヒト血清においてHTLV−Ｉ感染またはHTLV
    −II感染の存在を検出するキットであって、該キット
    は、以下： （ａ）固体支持体； （ｂ）第一反応ゾーンで、支持体に結合した、配列番号
    22で同定されるアミノ酸配列からなるペプチドであっ
    て、以下： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒト被験体由
    来の血清との免疫反応性、および （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが
    （２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
    ら得られる血清との非免疫反応性 により特徴づけられる、ペプチド；ならびに （ｃ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリ
    ポーター手段、 を包含する、キット。
  7. 【請求項７】ヒト血清においてHTLV−Ｉ感染またはHTLV
    −II感染の存在を検出するキットであって、該キット
    は、以下： （ａ）固体支持体； （ｂ）第一反応ゾーンで、支持体に結合した、配列番号
    29で同定されるアミノ酸配列からなるペプチドであっ
    て、以下： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒト被験体由
    来の血清との免疫反応性、および （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが
    （２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
    ら得られる血清との非免疫反応性 により特徴づけられる、ペプチド；ならびに （ｃ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリ
    ポーター手段、 を包含する、キット。
  8. 【請求項８】請求項５〜７のいずれか１項に記載のキッ
    トであって、該キットは、以下： 前記固体支持体中に第二反応ゾーン、および この第二ゾーンに結合した、配列番号２で同定されるア
    ミノ酸配列からなり、そして（１）HTLV−ＩまたはHTLV
    −IIに感染していないヒトから得られるが（２）HTLV−
    I p21E抗原と免疫反応性である血清との免疫反応性によ
    り特徴づけられる、第二抗原 をさらに含有する、キット。
  9. 【請求項９】請求項８に記載のキットであって、該キッ
    トは、以下： 前記固体支持体中に第三反応ゾーン、および この第三ゾーンに結合した、HTLV−Ｉに対して特異的な
    血清抗体とHTLV−IIに対して特異的な血清抗体との間を
    識別し得る第三HTLV特異的抗原 をさらに含有する、キット。
  10. 【請求項１０】前記第三HTLV特異的抗原が、配列番号３
    で同定される配列からなる、請求項９に記載のキット。
  11. 【請求項１１】前記第三HTLV特異的抗原が、配列番号４
    で同定される配列からなる、請求項９に記載のキット。
  12. 【請求項１２】ヒト血清においてHTLV−Ｉ感染またはHT
    LV−II感染の存在を検出するキットであって、該キット
    は、以下： （ａ）第一反応ゾーン、第二反応ゾーンおよび第三反応
    ゾーンを有する固体支持体； （ｂ）該第一反応ゾーンで固定化された、配列番号１で
    同定されるアミノ酸配列からなる第一ペプチドであっ
    て、以下： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒト被験体由
    来の血清との免疫反応性、および （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが
    （２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
    ら得られる血清との非免疫反応性 により特徴づけられる、ペプチド； （ｃ）該第二ゾーンで固定化された、配列番号２で同定
    されるアミノ酸配列からなり、そして（１）HTLV−I p2
    1E抗原と免疫反応性であるが（２）HTLV−ＩまたはHTLV
    −IIに感染していないヒトから得られる血清との免疫反
    応性により特徴づけられる、第二ペプチド； （ｄ）該第三ゾーンで固定化された、HTLV−Ｉに対して
    特異的な血清抗体とHTLV−IIに対して特異的な血清抗体
    との間を識別し得る、第三ペプチド；ならびに （ｅ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリ
    ポーター手段、 を包含する、キット。
  13. 【請求項１３】ヒト血清においてHTLV−Ｉ感染またはHT
    LV−II感染の存在を検出するキットであって、該キット
    は、以下： （ａ）第一反応ゾーン、第二反応ゾーンおよび第三反応
    ゾーンを有する固体支持体； （ｂ）該第一反応ゾーンで固定化された、配列番号22で
    同定されるアミノ酸配列からなる第一ペプチドであっ
    て、以下： （ｉ）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染したヒト被験体由
    来の血清との免疫反応性、および （ii）（１）HTLV−I p21E抗原と免疫反応性であるが
    （２）HTLV−ＩまたはHTLV−IIに感染していないヒトか
    ら得られる血清との非免疫反応性 により特徴づけられる、ペプチド； （ｃ）該第二ゾーンで固定化された、配列番号30で同定
    されるアミノ酸配列からなり、そして（１）HTLV−I p2
    1E抗原と免疫反応性であるが（２）HTLV−ＩまたはHTLV
    −IIに感染していないヒトから得られる血清との免疫反
    応性により特徴づけられる、第二ペプチド； （ｄ）該第三ゾーンで固定化された、HTLV−Ｉに対して
    特異的な血清抗体とHTLV−IIに対して特異的な血清抗体
    との間を識別し得る、第三ペプチド；ならびに （ｅ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリ
    ポーター手段、 を包含する、キット。
  14. 【請求項１４】請求項12または13に記載のキットであっ
    て、前記第三ペプチドが、配列番号３で同定されるアミ
    ノ酸配列からなり、該ペプチドが、以下： （ｉ）HTLV−Ｉに感染したヒト被験体由来の血清との免
    疫反応性、および （ii）HTLV−IIのみに感染したヒト被験体由来の血清と
    の非免疫反応性 により特徴づけられる、キット。
  15. 【請求項１５】請求項12または13に記載のキットであっ
    て、前記第三ペプチドが、配列番号４で同定されるアミ
    ノ酸配列からなり、該ペプチドが、以下： （ｉ）HTLV−IIに感染したヒト被験体由来の血清との免
    疫反応性、および （ii）HTLV−Ｉのみに感染したヒト被験体由来の血清と
    の非免疫反応性 により特徴づけられる、キット。
  16. 【請求項１６】ヒト被験体においてHTLV−Ｉ感染または
    HTLV−II感染を陽性で同定する方法であって、該方法
    は、以下の工程： 該被験体由来の血清を、配列番号１で同定されるアミノ
    酸配列からなるペプチドと反応させる工程、 該反応により、HTLV−Ｉ感染またはHTLV−II感染を有す
    る被験体由来の血清中に、前記ペプチドと抗体との間で
    免疫複合体を形成させる工程、および、 該免疫複合体の存在についてペプチドを試験し、血清中
    のHTLV−Ｉ抗体またはHTLV−II抗体の存在を明らかにす
    る工程、 を包含する、方法。
  17. 【請求項１７】ヒト被験体においてHTLV−Ｉ感染または
    HTLV−II感染を陽性で同定する方法であって、該方法
    は、以下の工程： 該被験体由来の血清を、配列番号22で同定されるアミノ
    酸配列のペプチドと反応させる工程、 該反応により、HTLV−Ｉ感染またはHTLV−II感染を有す
    る被験体由来の血清中に、前記ペプチドと抗体との間で
    免疫複合体を形成させる工程、および、 該免疫複合体の存在についてペプチドを試験し、血清中
    のHTLV−Ｉ抗体またはHTLV−II抗体の存在を明らかにす
    る工程、 を包含する、方法。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2001295441A1 (en) * 2000-10-17 2002-04-29 Besst-Test Aps Assay for directly detecting a biological cell in a body fluid sample
RU2008140688A (ru) * 2008-10-15 2010-04-20 Михаил Аркадьевич Шурдов (RU) Иммуносупрессивный пептид
JP2015215244A (ja) * 2014-05-12 2015-12-03 富士レビオ株式会社 免疫測定における抗ｈｔｌｖ抗体の検出感度を向上させる方法
CN107356753B (zh) * 2017-07-21 2019-02-05 苏州华益美生物科技有限公司 人t淋巴细胞病毒(htlv)抗体检测试剂盒及其应用和制备
CN116790823B (zh) * 2023-08-17 2023-12-08 中国人民解放军空军特色医学中心 同步检测htlv-1和htlv-2的双重定量rt-pcr检测组合物、试剂盒和方法

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4446122A (en) * 1979-12-28 1984-05-01 Research Corporation Purified human prostate antigen
JPS58187861A (ja) * 1982-04-26 1983-11-02 Otsuka Pharmaceut Co Ltd 成人型ｔ細胞性白血病関連抗体の測定法
JPS5962527A (ja) * 1982-09-30 1984-04-10 Eisai Co Ltd 成人ｔ細胞白血病関連抗原の製造方法
JPS59104325A (ja) * 1982-12-07 1984-06-16 Japan Found Cancer ヒト白血病ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ
US4645738A (en) * 1983-09-30 1987-02-24 Memorial Sloan-Kettering Institute Cancer Center Method for differential diagnosis of T cell leukemias using monoclonal antibodies
US4724258A (en) * 1984-02-03 1988-02-09 Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research Adult T cell leukemia virus antigen polypeptide
US4663436A (en) * 1984-04-24 1987-05-05 Scripps Clinic And Research Foundation Leukemia-associated virus immunogen, vaccine and assay
JPS60249058A (ja) * 1984-05-25 1985-12-09 Eisai Co Ltd Ａｔｌウイルス抗体の測定方法および試薬
US4731326A (en) * 1984-06-04 1988-03-15 Ortho Diagnostic Systems Inc. Disease diagnosis by detection of shed normal tissue antigens
US4689398A (en) * 1984-06-20 1987-08-25 Ortho Diagnostic Systems Inc. HTLV test using synthetic peptides
JPS62500452A (ja) * 1984-09-19 1987-02-26 ザ　リ−ジエンツ　オブ　ザ　ユニバ−シテイ　オブ　カリフオルニア ヒト細胞形質転換に関連するレトロウイルスポリペプチド
US4722888A (en) * 1985-03-29 1988-02-02 United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Cell line producing human monoclonal antibody which binds to HTLV-I producing cells
US4661445A (en) * 1985-05-24 1987-04-28 Saxinger W Carl Competitive ELISA for the detection of HTLV-III antibodies
JP2564268B2 (ja) * 1985-08-28 1996-12-18 協和醗酵工業株式会社 融合抗原ポリペプチド
US4735896A (en) * 1986-03-04 1988-04-05 United Biomedical, Inc. Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions
EP0246101A3 (en) * 1986-05-14 1989-06-07 FUJIREBIO KABUSHIKI KAISHA also trading as FUJIREBIO INC. Protein having htlv-1 antigenic activity and preparation thereof
JP2501569B2 (ja) * 1986-11-14 1996-05-29 協和醗酵工業株式会社 抗成人ｔ細胞白血病ウイルス抗体の検出法
US5079351A (en) * 1986-11-26 1992-01-07 Cetus Corporation Oligonucleotides and kits for detection of htlvi and htlvii viruses by hybridization
US5066579A (en) * 1986-12-31 1991-11-19 Genelabs Incorporated HTLV-I peptide antigen and assay
US5614366A (en) * 1986-12-31 1997-03-25 Genelabs Technologies, Inc. HTLV-I peptide antigens and kit
US5039604A (en) * 1987-08-21 1991-08-13 Cellular Products, Inc. Test device and method of preparing same, assay kit and method for the simultaneous detection of two HTLV or HIV antibodies
US5017687A (en) * 1988-03-10 1991-05-21 Virovahl, S.A. Peptides for the detection of HTLV-1 infection
US5003043A (en) * 1988-05-25 1991-03-26 Triton Biosciences Inc. Peptides representing epitopic sites for the major HTLV-I envelope protein, antibodies thereto, and uses thereof
EP0345792A3 (en) * 1988-06-10 1991-05-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Htlv-i / hiv-1 fusion proteins
AU5827590A (en) * 1989-06-01 1991-01-07 E.I. Du Pont De Nemours And Company Htlv-1 env gene products expressed in (e. coli)
SE467542B (sv) * 1989-06-13 1992-08-03 Syntello Ab Syntetiska peptidantigener, immuniserande komposition och immunanalys foer htlv-1 antikroppar
JPH0319789A (ja) * 1989-06-14 1991-01-28 Fanuc Ltd レーザロボットの制御方式
ES2072346T3 (es) * 1989-10-23 1995-07-16 Hoffmann La Roche Peptidos sinteticos de la cubierta del htlv-i.
IE904083A1 (en) * 1989-11-13 1991-05-22 Cambridge Biotech Corp Diagnostic proteins to test for more than one antibody
WO1991007510A1 (en) * 1989-11-17 1991-05-30 Amgen Inc. A method of detecting htlv-i antibodies in human body fluids

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８３年，８０，３６１８−３６２２
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９１年，８８，７６９４−７６９８

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