JPH08509597A

JPH08509597A - 診断に使用するためのｈｔｌｖ−▲ｉ▼およびｈｔｌｖ−▲ｉｉ▼ｇｐ２１由来ペプチド

Info

Publication number: JPH08509597A
Application number: JP6518177A
Authority: JP
Inventors: ジー．ハドロック，ケネス; ゴー，チン−ジョー; ケイ．エイチ．フォン，スティーブン
Original assignee: ジェネラブステクノロジーズ，インコーポレイテッド; ザボードオブトラスティーズオブザルランドスタンフォードジュニアユニバーシティー
Priority date: 1993-02-05
Filing date: 1994-02-02
Publication date: 1996-10-15
Anticipated expiration: 2018-11-25
Also published as: CA2155001C; AU690540B2; DE69433787D1; ATE267253T1; SG49829A1; AU6132094A; ES2221664T3; EP0682703B1; JP3470899B2; EP0682703A1; WO1994018322A1; US5643714A; DE69433787T2; CA2155001A1

Abstract

(57)【要約】ヒト血清中のHTLV-IおよびHTLV-II感染を検出および確認する診断アッセイにおいて用いるための新しいHTLV-IおよびHTLV-IIペプチドが開示されている。このペブチドは、HTLV-IおよびHTLV-IIgp21エンベロープタンパク質のアナログ領域由来であり、そしてHTLV-IおよびHTLV-II感染の診断薬である。本発明はまた、ヒトにおけるHTLV-IおよびHTLV-IIを検出し、そしてそれらを識別するアッセイキットおよび方法を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】診断に使用するためのHTLV-I およびHTLV-II GP21由来ペプチド本出願は、1991年２月８日に出願された米国特許出願番号第07/653,091号「HT LV-IおよびHTLV-IIペプチド抗原および方法」の一部継続出願であり、上記出願は、1989年６月13日に出願され（米国特許出願番号第366,313号）、現在では199 1年11月19に特許となった、米国特許第5,066,579号である「HTLV-Iペプチド抗原および方法」の一部継続出願であり、上記出願は1986年12月31日に出願され（米国特許出願番号第948,270号）、現在では放棄されている「HTLV-Iペプチド抗原および方法」の継続出願である。１．発明の分野本発明は、HTLV特異的ペプチドおよびその抗原の調製および使用のための方法に関する。２．参考文献３．発明の背景ヒトＴ細胞白血病ウイルス（HTLV）は、３つの既知のメンバーを有するＴ細胞レトロウイルスのファミリーを示す。HTLV タイプI（HTLV-I）は、インビトロでの形質転換活性を有し、成人Ｔ細胞白血病に病因学的に関連し、世界の数カ所でその地域特有であることが知られている。 HTLV-IIは、インビトロで形質転換能を有する別のレトロウイルスで、Ｔ細胞の変形である毛様細胞性白血病の患者から単離された（HTLV-IおよびIIの再検討についてはCannおよびChenを参照のこと）。HTLV-IIIも、リンパ節症関連ウイルスと呼ばれ、現在ではヒト免疫不全ウイルス（HIV）として知られている。これは、特定の種類のＴ細胞を溶解し、そして後天性免疫不全症候群（AIDS）の病因に関連している。HTLV-IおよびHTLV-IIウイルスと異なり、HTLV-IIIは、インビトロで形質転換活性を有することは知られていない。 HTLV-I感染の診断は、通常、HTLV-Iペプチド抗原に対する血清抗体応答に基づく。これは普通、HTLV-Iビリオンペプチドを用いるエンザイムイムノアッセイ（ EIA）に基づいて、HTLV-I抗体を同定するための初期のスクリーニングアッセイを包含する。現在血液スクリーニングに用いられるこのアッセイは、合衆国内の血液提供者の約0.5％〜0.05％がHTLV-IおよびHTLV-II陽性であることを検出する。これらの人々のうち５人に４人が疑似陽性である。従って、陽性血清は、ウエスタンブロットされたHTLV-Iウイルスのライゼートを用いて、さらなる確認アッセイにおいて試験されなければならない。最近の血液試験手順は、各人がHTLV-I p24 gagタンパク質ならびにエンベロープタンパク質であるgp46およびgp68の内の少なくとも一つの両方に対する抗体を有していることが必要とされる（public healt h service working group）。しかし、gp46またはgp68タンパク質をウエスタンブロットアッセイを用いて検出することは技術的に困難であることがわかってきた。従って、HTLV-Iエンベロープタンパク質に対する抗体反応を検出するために、放射性免疫沈降アッセイをより頻繁に行って第２段階の確認を行わなければならない。この問題の部分的解決は、貫膜糖タンパク質gp21の134アミノ酸部分を分子クローニングすることにより提供された（Samuelら）。組換えタンパク質を、p21E タンパク質と呼び、それは、HTLV-IおよびHTLV-IIの個体のどちらの血清とも反応性である。そしてHTLV感染の確認のためのウエスタンブロットアッセイで首尾良く取り込まれた（Lillehojら、Lipkaら、1991）。しかし、p21Eタンパク質はまたHTLV陰性の血液提供者の0.6％とも反応性であることがわかった（Lalら）。さらに、p21Eに対する非常に高い反応率（米国の血液提供者の約５％）が、HTLV スクリーニングEIA試験で反応性の個体で観察されたが、彼らはHTLV確認アッセイによる試験では、HTLV-Igagおよびenv遺伝子生成物のどちらに対する抗体も有していないので、HTLV感染であることに関して確立された基準には合致しない（ Lalら；Lipkaら、1991）。さらに、Lipkaら（Lipkaら、1991）の研究では、p21E 反応性-HTLV不確定の全ての個体は、HTLV-IおよびHTLV-IIの特異的プライマーおよびプローブを用いるPCRによって試験される場合、HTLV-IおよびHTLV-IIの核酸の存在に対して陰性であった。従って、HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していない数個体は、p21E抗原と反応する抗体を有する。この事実により、特に、HTLVスクリーニングアッセイでは、p21E組換えタンパク質の使用が制限される。このアッセイでは、HTLV-陰性血清と高い割合で疑似陽性を示すので、提供された血液に不必要な処理を施す結果となってしまう。従って、HTLV-IおよびHTLV-II陽性血清を検出する改良法を提供することが望まれる。特に、改良された試験は、最小数の疑似陽性血清を用いて、全てのHTLV -IおよびHTLV-II陽性血清を検出し得、そしてHTLV-II感染血清からHTLV-I感染血清を分離することも可能である。４．発明の要旨本発明は、一つの局面において、配列番号１で同定されたアミノ酸配列から本質的になる、HTLV特異的抗原領域を有するペプチドを包含する。このペプチドは、（i）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染した被験者由来の血清に対して免疫反応性であり、そして（ii）（1）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られるが、（2）HTLV-I p21E抗原とは免疫反応性である血清との非免疫反応性により特徴付けられる。ヒト血清中のHTLV-IまたはHTLV-II感染の存在を検出するキットもまた開示される。このキットは、（a）固体支持体、（b）その支持体に付着した上記HTLV特異的ペプチド、および（c）上記支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリポーター試薬を包含する。一つの実施態様では、HTLV-IまたはHTLV-II感染を検出することに用いるため、上記支持体は２つの反応ゾーンを包含し、１つは上記HTLV特異的ペプチドでコードされ、そして第二ゾーンは、配列番号２で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域でコードされている。このペプチドは、血清との免疫反応性により特徴付けられる。この血清は、（1）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られるが、（2）HTLV-I p21E抗原とは免疫反応性である血清である。このキットはまた、HTLV-IおよびHTLV-IIの間の区別が可能になるように設計された１つまたはそれより多い反応ゾーンを包含する。このキットを用いるための一つの好ましいペプチドは、配列番号３で同定される配列から本質的になるHT LV-I特異的抗原領域を含むペプチドである。あるいは、またはさらに、このキットは、配列番号４で同定される配列から本質的になるHTLV-II特異的抗原領域を有するペプチドである。他の局面では、本発明は、ヒト被験者のHTLV-IまたはHTLV-II感染を明確に同定する方法を包含する。この試験は、被験者の血清を、配列番号１で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域を含むペプチドと反応させて、免疫複合体、すなわちこのペプチドとHTLV-IまたはHTLV-II感染被験体の血清中の抗体を形成させることを包含する。次いでこのペプチドは免疫複合体の存在について試験される。さらに、個体をHTLV-IおよびHTLV-II感染に対して免疫化するワクチン組成物も開示される。この組成物は、配列番号１て同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域を有するペプチドを包含する。このペプチドは、担体タンパク質に結合する。さらに別の局面では、本発明は、HTLVの受動ワクチンによる予防および治療、ならびに2B3Aペプチドに対して特異的なヒトモノクローナル抗体またはヒト組換え抗体を用いた受動ワクチン接種方法を包含する。本発明のこれらのおよびその他の目的および特徴は、以下の本発明の詳細な説明が、添付の図面と共に読まれる場合に、より十分に明らかにされる。図面の簡単な説明図１の１番上はHTLV-Iゲノム、中間はgp46およびgp21エンベロープタンパク質のコーディング領域を包含するゲノムを拡大した部分、そして図の１番下の部分は、gp21コーディング領域内の組換えHTLV-Iペプチドであるp21E、2A2B、2B3A、および3A3B、ならびにgp46コーディング領域内のHTLV-I MTA-1、MTA-4およびMTA -5ペプチドに対応するコーディング領域を示す。図２Ａおよび２Ｂは、HTLV-Iのp21E envタンパク質のポリヌクレオチドコーディング配列（配列番号５）およびそれに対応するアミノ酸配列（配列番号６）（図２Ａ）、ならびにHTLV-IIのgp21 envタンパク質のp21E領域のポリヌクレオチドコーディング配列（配列番号７）およびそれに対応するアミノ酸配列（配列番号８）（図２Ｂ）を示す。HTLV-I組換えペプチドの構築に用いられるオリゴヌクレオチドプライマーのHTLV-I特異的配列の５’末端が示される。図３Ａ〜３Ｃは、本明細書中で1A（配列番号９）、2A（配列番号10）、MF1（配列番号11）、MF2（配列番号12）、および3A（配列番号13）として同定している正方向プライマー（図３Ａ）、ならびに本明細書中で1B（配列番号14）、2B（配列番号15）、MR1（配列番号16）、MR2（配列番号17）、および3B（配列番号18 ）として同定している逆方向プライマー（図３Ｂ）のポリヌクレオチド配列を示し、プライマー内に位置する制限酵素認識配列には下線が付されている。改変されたpGEXプラスミドpGEX-GLIの制限酵素部位もまた示されている（配列番号44）（図３Ｃ）。図４は、p21E（配列番号６）、1A1B（配列番号19）、2A2B（配列番号20）、2A 3B（配列番号21）、2B3A（配列番号22）、3A3B（配列番号30）、MF1R2（配列番号24）、およびMF2R1（配列番号25）として同定されているHTLV-I組換えペプチドのアミノ酸配列を示す。図５は、配列番号22から実際に構築されたペプチド2B3Aのアミノ酸配列、および３つの異なるHTLV-I種（配列番号26、27、および28）の一致した配列、対応するHTLV-II2B3Aペプチド（配列番号29）、および2A3Bペプチドのコンセンサス配列（配列番号１）を示す。図６は、配列番号23から実際に構築されたペプチド3A3Bのアミノ酸配列、および３つの異なるHTLV-I種（配列番号31、32、および２）の一致した配列、対応するHTLV-II3A3Bペプチド（配列番号34）、および3A3Bペプチドのコンセンサス配列（配列番号２）を示す。図７は、HTLV-Iペプチド2B3A（配列番号35）と、相同なHTLV-IIペプチド2B3A （II）（配列番号36）のポリヌクレオチドコーディング配列の比較を示す。図８は、HTLV-Iペプチド3A3B（配列番号37）と、相同なHTLV-IIペプチド3A3B （II）（配列番号38）のポリヌクレオチドコーディング配列の比較を示す。図９は、図１でMTA-1（配列番号３）、MTA-4（配列番号39）、およびMTA-5（配列番号40）として同定されたgp46ペプチド領域内のHTLV-IおよびHTLV-II gp46 タンパク質の相同領域、さらにHTLV-IペプチドK163（配列番号41）、ならびに本明細書中でK15（配列番号42）および４（配列番号４）として同定されたアナログHTLV-IIペプチドのアミノ酸配列を示す。図10A〜10Dは、ヒト血清中のHTLV-IまたはHTLV-II感染検出アッセイ法で用いるための第四ゾーンの固体相アッセイプレート（10A）を説明し、HTLV-I陽性個体（図10B）、HYLV-II陽性個体（図10C）、および疑似陽性（図10D）についての代表的な結果を示している。発明の詳細な説明Ｉ．定義他に言及しない限り、下記の用語は以下の意味を有する：「HTLV混成env配列」は、異なる種のHTLV-IおよびHTLV-IIのenv貫膜タンパク質の領域の相同なアミノ酸配列を一直線に並べること、そして各位置で（i）その位置におけるコンセンサス配列、または（ii）その位置のアミノ酸がHTLV-Iと HTLV-IIの配列間で異なる場合には、その位置での全てのアミノ酸を変形体を選択することにより形成される。例えば、図５に示される2B3A HTLV混成配列は、３つの異なるHTLV-I種の2B3Aペプチド（配列番号26、27、および28）、対応する HTLV-II 2B3Aペプチド（配列番号29）、および2B3Aペプチドのコンセンサス配列（配列番号１）のアミノ酸配列内にアミノ酸変異を包含する。「HTLV特異的」ペプチドは、HTLV混成配列、すなわちHTLV-Iアミノ酸配列、およびHTLV-IIアミノ酸配列、あるいはHTLV混成配列の一つのいずれかを有するペプチドを意味する。「非感染個体」は、血清がいくつかのHTLV-IまたはHTLV-IIタンパク質（例えばp21Eタンパク質）と交差反応性である抗体を有するが、その血清がHTLV-IまたはHTLV-IIの感染の証拠を示さないヒトをいい、１．＞確認アッセイでHTLV gag およびenvの両方に対する抗体が検出されないこと、および/または２．＞ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）法を用いるHTLV特異的プライマーを用いた配列増幅によるHTLV特異的配列が検出されないことによって判断される（Kwokら、Lipkaら、1 991）。 II．HTLV-IおよびHTLV-II Envタンパク質図１の上のフレームは、env貫膜糖タンパク質gp46およびgp21内で発現されるH TLV-Iゲノムの１部を示す。gp46のコーディング領域は塩基対の5180番目から611 6番目まで、gp21タンパク質は6117番目と6644番目の間に広がっている（図１のゲノムの拡大部分）。塩基の6096番目と6497番目の間のコーディング領域は、p21Eと呼ばれる組換えタンパク質をコードし、このタンパク質はHTLV-IまたはHTLV-II感染個体の血清と反応することが知られているが、どちらのHTLVウイルスにも感染していない個体の数パーセントとも反応する（Lalら、Lipkaら、1991）。p21Eコーディング領域に含まれ、図の右下に示されるのは、本明細書中で2A2B、2B3A、および3A3Bとして同定される３つのHTLV-Iペプチドのコーディング領域である。本発明は、2B 3Aペプチド、ならびに2B3Aペプチドを含む診断用アッセイキットおよび診断方法を包含する。このキットおよび方法はまた、3A3Bペプチドを含む。HTLV-Iまたは HTLV-II感染ヒト血清検出のためのアッセイキットおよび方法に関連する2B3Aおよび3A3Bペプチドの性質は後に議論する。 5565番目〜5895番目のコーディング領域は、図の左下に示され、1991年２月８日に出願された同時係属中の米国特許出願「HTLV-IおよびHTLV-IIペプチド抗原および方法」、出願番号第07/653,091号に記載され、そして前記係属出願においておよび本明細書中でMTA-1、MTA-4、およびMTA-5として同定された３つのMTAペプチドのコーディング配列を含む。これらのペプチドはまた、HTL V-IまたはHTLV-II感染ヒト血清のアッセイのためのキットおよび方法において、 2B3Aペプチドと、または2B3Aペプチドおよび3A3Bペプチドと組み合わせて用いられ得る。このようなキットおよび方法で用いるために適切なMTAペプチドの性質を下記に示す。Ａ．2B3Aペプチド図４は、HTLV-I（配列番号２２）由来の2B3Aペプチドのアミノ酸配列を示す。下記で見られるように、このペプチドは、HTLV-IのMT2ウイルス株のPCR増幅により発現される。ここでは、Seikiらによって単離されたHTLV-I変異体であるATKのヌクレオチドコーディング配列から設計されたプライマー（増幅されるコーディング領域の各末端の７コドンを与える）が用いられる。従って、このペプチドのいずれか一方の末端の７アミノ酸は、HTLV-I種のATKの2B3Aペプチドの配列と一致し、残りの内側のアミノ酸はHTLV-IのMT2株の2B3Aペプチドと一致する。図中の１文字および３文字のアミノ酸コードは、標準的な慣例（例えば、Maniatis）に従った。本発明の重要な局面により、および以下に説明されるように、このペプチドは、（i）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染した被験者の血清と免疫反応性であるが、（ ii）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性である血清とは免疫反応性でない。しかしそれは、例えば、以下に記載されるように、血清試料中のウイルスの配列のPCR分析によって、HTLV-IまたはHTLV-IIの感染の証拠は示されない。図５は、本明細書中てはATK、MT2、およびB41281として同定される３つの異なるHTLV-I株の2B3Aを含むペプチド、および本明細書中でMO株として同定される１つのHTLV-IIペプチドのアミノ酸配列を示す。これらのHTLV変異体のこれらのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、Genbank配列データベースから入手された。G enbankデータベースから配列を入手するために用いられ得る株の位置の名称は以下の通りである；HTLV1A＝HTLV-I変異株のATKのenv領域、HTVENVAA＝HTLV-I変異株のMT2のenv領域、B41281＝別の一層変異した（divergent）HTLV-I単離物、およびHL3V2CG＝HTLV-IIのMoT株。図はまた、上の2B3A配列と、３つのHTLV-I株および１つのHTLV-II株の対応する領域との間のアミノ酸配列の合致も示す。一番上の2B3Aペプチドと個々のgp21タンパク質種の対応する部分との間の配列相同性は、それぞれの種のアミノ酸配列のすぐ上に示される。相同性の程度は、同一配列が「:」によって、合致しないアミノ酸残基が空白（ブランク）によって示される。 2B3A配列（すなわち、HTLV-Iペプチド抗原2B3Aに対応するgp21アミノ酸配列の部分）は、図中で以下のように同定される；配列番号26＝HTLV-IのATK変異体；配列番号28＝HTLV-IのMT2変異体、および配列番号28＝位置の名称B41281として同定されるHTLV変異体。Mo株由来の対応するHTLV-II 2B3Aペプチドは、本明細書中で配列番号29として同定される。下記の図５および図６に示される種は、約30個の別種のHTLV-I、STLV、およびHTLV-IIから得られた異なるアミノ酸配列の代表である（全ての変異種のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、Genbankデータベースより入手し得る）。５つの2B3A配列のコンセンサス配列、すなわち、この領域のHTLV混成配列は、図の一番下に示され、本明細書中では配列番号１として同定される。この配列は、コンセンサスアミノ酸から構築され、ここで、５つのペプチドの間には完璧な一致があり、そしてアミノ酸中で既知の変化については、６カ所（Ｘ₁〜Ｘ₆）でアミノ酸の変化が起こっている。この配列では、Ｘ₁はＫまたはＱ、Ｘ₂はＬまたはＩ、Ｘ₃はＫまたはＲ、Ｘ₄はＩまたはＶ、そしてＸ₅はＲまたはＣ、およびＸ₆ はＰまたはＬである。従って、配列番号１は、配列番号22、配列番号26、配列番号28、配列番号28、および配列番号29として上記のように同定される５つの配列を包含する。配列番号１に特異的に包含される置換以外のアミノ酸の置換もまた可能であるが、それはそれらが以下に記載するように2B3Aペプチドの免疫反応性に本質的に影響を及ぼさない限りにおいてである。より一般的には、本発明の2B 3Aペプチドは、配列番号１によって同定されるアミノ酸配列から本質的になるが、ここで、このペプチドは、以下のように特徴付けられる：（i）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染した被験者の血清と免疫反応性であり、そして（ii）（1）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性てあるが、（2）HTLV- IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られる血清と非免疫反応性である。Ｂ．3A3Bペプチド HTLV-I由来の3A3Bペプチドは、図４に示される上のアミノ酸配列を有し、配列番号30として同定される。このペプチドは2B3Aペプチドと組み合わせて、HTLV-I またはHTLV-IIの感染に関して、ヒト血清をスクリーニングするアッセイキットおよび方法に用いることを意図している。上記のように、HTLV-IまたはHTLV-IIに感染した患者から得た血清は、HTLV-I gp21タンパク質およびgp21由来のp21E組換えタンパク質と免疫反応性である抗体を含む。従ってこれらのペプチドは、ヒトのHTLV（IまたはII）感染を検出する免疫アッセイ法およびキットに日常的に用いられている。しかし、このペプチドはまた、特定の割合の非感染者の血清に含まれる抗体とも交差反応性であり、アッセイにおいて疑似陽性となる。少なくとも統計を利用し得る米国内の特定の地域では、交差反応性の頻度は、HTLV陰性血液提供者の約１％である。上記の2B3Aペプチドは、HTLV感染個体由来の血清と免疫反応性であるが、上記で議論したように、非感染個体とは免疫反応性ではない。このペプチドは、p21E タンパク質によって生じる疑似陽性を検出することなく、HTLV感染を検出する有用な抗原を提供する。HTLVアッセイにおいては、試験される血清が、たとえそれがp21Eタンパク質と交差反応性であっても非感染であることの確認として、非感染p21E陽性個体を検出するが、HTLV感染個体は検出しないタンパク質を提供することはさらに有用である。本明細書で記載される3A3Bペプチドは、所望の性質を有する。すなわち、このペプチドは血清との免疫反応性によって特徴付けられ、この血清は、（1）HTLV- IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られるが、（2）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性である。このペプチドは、HTLV-I変異株ATK由来のプライマー（増幅されるコーディング領域の各末端の７コドンを提供する）を用いて、HTLV-IのMT2株をPCR増幅したコーディング領域配列によって発現される。従って、このペブチドのいずれか一方の末端の７アミノ酸は、HTLV-I変異株ATK由来の3A3Bペプチドと配列において一致し、残りの内部のアミノ酸は、HTLV-IのMT2株の3A3Bペプチドと配列において一致する。対応するHTLV-II由来のペプチドは、本明細書中で配列番号34と命名され、図６の一番上に示されるアミノ酸配列を有し、そして本明細書中で配列番号34として同定される。図６は、３つの異なるHTLV-I株の3A3Bを含むペプチドのアミノ酸配列を示す。 3A3B配列は、図中で以下のように同定される；配列番号31＝HTLV-IのATK変異株；配列番号32＝HTLV-IのMT2変異株、および配列番号33＝位置名称HTVENVCHによって同定されるHTLV変異株。Mo株由来の対応するHTLV-II 3A3Bペプチドは、本明細書中で配列番号34として同定される。この株のこれらのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、上記のようにGenbankデータベースより入手された。この図はまた、上の3A3B配列と、３つのHTLV-I株の対応する領域および一つの HTLV-II株との間のアミノ酸配列の一致を示す。一番上の3A3Bペプチドと個々の種のgp21タンパク質の対応する部分との間の配列相同性は、それぞれの種のアミノ酸配列の真上に示される。各配列についての相同性の程度は「:」によって、一致していないアミノ酸残基については空白（ブランク）によって示される。５つの3A3Bの配列のコンセンサス配列、すなわち、この領域におけるHTLV混成配列は、図の一番下に示され、そして本明細書中では配列番号２として同定される。上記のように、この配列は、一致したアミノ酸から構築され、ここでは５つのペプチドの間に完全な一致があり、そしてアミノ酸中の既知の変化により、８カ所（Ｘ₁〜Ｘ₈）でアミノ酸変化が起こっている。この配列では、Ｘ₁はＲまたはＣ、Ｘ₂はＰまたはＬ、Ｘ₃はＴまたはＳ、Ｘ₄はＳまたはＴ、Ｘ₅はＳまたはＰ、Ｘ₆はＩ、Ｍ、またはＶ、Ｘ₇はＮまたはＫ、およびＸ₈はＬまたはＩである。従って、配列番号２は、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、および配列番号34として上記のように同定される５つの配列を包含する。配列番号２に含まれる置換以外のアミノ酸の置換が予想されるが、それはそれらが以下のように3A3Bペプチドの免疫反応性に本質的に影響を及ぼさない限りにおいてである。より一般的には、この3A3Bペプチドは、配列番号２として同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的ペプチドを包含する。ここで、このペプチドは、血清との免疫反応性によって特徴付けられるが、この血清は、（1）HTLV-I p2 1E抗原と免疫反応性であるが、（2）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られる血清である。Ｃ．HTLV-IおよびHTLV-II特異的ペプチド 2B3Aペプチド、および上記の2B3Aおよび3A3Bペプチドの組み合わせは、HTLV-I またはHTLV-IIに感染したヒト血清を検出する免疫アッセイ法およびキットで用いるために設計される。このセクションで述べるHTLV-I MTAペプチドおよび対応するHTLV-II由来のgp46ペプチドは、HTLV-Iによる感染とHTLV-II感染による感染症とを区別するアッセイおよびキットにおいて有用である。 MTAペプチドの調製および性質および対応するHTLV-IIペプチドは、1991年２月８日に出願された同時係属中の米国特許出願「HTLV-IおよびHTLV-IIペプチド抗原および方法」、出願番号第07/653,091号および対応するPCT特許出願番号pct/u s92/00823号（1992年８月20日公開）に既に記載され、本明細書中に参考として援用されている。MTA-1、MTA-4、およびMTA-5として同定されるMTAペプチドのコーディング領域は、図１に示され、第5565塩基と第5895塩基の間の領域を囲んでいる。図９は、MTA-1（配列番号３）、MTA-4（配列番号３９）、および MTA-5（配列番号40）のアミノ酸配列を示す。３つの全てのペプチドは、特にHTL V-I感染血清に対して免疫反応性であり、すなわちそれは、HTLV-II感染血清に対しては免疫反応性ではないということである。一つのより小さいHTLV-Iペプチドは、図10でK163（配列番号41）として同定され、特にHTLV-I感染血清に対して免疫反応性である。図９の下部は、特にHTLV-II血清に対して免疫反応性である、すなわち、HTLV- Iのみに感染している患者由来の血清とは反応性を示さない、対応するHTLV-II配列を示す。これらは、K15（配列番号42）、K34（配列番号43）、および４（配列番号４）を包含する。より小さいペプチド抗原K34は、より大きなペプチド抗原K 15およびK55に対するのと本質的に同じ免疫反応性を、HTLV-II感染血清に対して有することを示した。上記のHTLV-IおよびHTLV-II特異的ペプチドは、上記PCT出願第PCT/US92/00823 号に記載の組換え方法により調製され得る。 II．2B3Aおよび3A3Bペプチドの同定 p21Eポリヌクレオチドコーディング配列は、本明細書中で配列番号５として同定され、p21Eクローニングベクター（Samuelら）由来の第6096塩基〜第6497塩基を拡大して、図２に示す。この領域内の多くのペプチドが、HTLV-IおよびHTLV-I I感染血清との免疫反応性、ならびにp21Eペプチドと免疫反応性である非感染血清との免疫反応性について試験された。Ａ．細菌ライゼートの調製構築されたペプチドを図４に示す。これらは、p21E（配列番号６）、1A1B（配列番号19）、2A2B（配列番号20）、2A3B（配列番号21）、2B3A（配列番号22）、 3A3B（配列番号30）、MF1R2（配列番号24）、およびMF2R1（配列番号25）として同定された組換えペプチドを包含する。このペプチドは、実施例１Ａに詳しく説明するように、（i）HTLV-I株MT2から選択されたコーディング領域のPCR増幅、増幅されたコーディング領域のpGEX-GL 1発現ベクターへの挿入、およびその発現ベクターを用いたコンピテントE.coli 宿主細胞の形質転換、により調製された。図３Ａおよび３Ｂは、ペプチドコーディング領域の構築に用いられる４つの正方向プライマーおよび４つの逆方向プライマーのそれぞれの配列を示す。これらは、FP-1A（配列番号９）、FP-2A（配列番号10）、FP-MF1（配列番号11）、およびFP-3A（配列番号１３）として同定される正方向プライマー、ならびにRP-1B（配列番号14）、RP-2B（配列番号15）、RP-MR1（配列番号16）、およびRP-3B（配列番号18）として本明細書中で同定される逆方向プライマーを含む。このプライマーの５’末端は、一つまたはそれ以上の次の制限酵素、Nco I、BamH I、およびEcoR Iの認識配列を有している。次いで、増幅されたDNAは、適切な制限酵素で切断し、同様に切断されたpGEX-GLI発現ベクターに連結し得る。pGEX-GLIのクローニング部位もまた、図３Ｃに示す。それぞれの選択されたペプチドコーディング領域は、選択された正方向および逆方向プライマーを用いるPCR増幅によって構築される。例えば、1A1Bペプチドのコーディング領域を構築するために、正方向プライマーFP-1Aおよび逆方向プライマーRP-1Bを用いてp21コーディング領域を増幅する。2B3Aペプチドのコーディング領域を構築するために、正方向プライマーMF1および逆方向プライマーMR1 が、その配列のPCR増幅に用いられる。Ｂ．細菌ライゼートのスクリーニング上記の組換えペプチドは、実施例１Ｃに記載のウエスタンブロットアッセイ方式でスクリーニングされた。簡単にいえば、選択された発現ベクターを用いて形質転換された全細胞細菌ライゼートは、SDS/PAGE（Laemmli）によって分画され、ニトロセルロース上へエレクトロブロットされ、そして（i）HTLV-I感染個体由来のEBV活性化リンパ球から得た抗HTLV-I抗体（実施例１Ｂ）、ならびに（ii ）HTLV感染血清およびコントロール血清との免疫反応性について試験された。詳細を下記の実施例１Ｃに示す。結果を下記の表１に示す。表中の「ND」は、「行われなかった」ことを意味し；「I」は、HTLV-I感染個体の血清を示し；「II」は、HTLV-I感染個体の血清を示し、ここでHTLV-IおよびHTLV-IIの診断は、PCRによって確認され；「UnInf」は、非感染者の血清を示す。「Sup」は、HTLV-I陽性提供者由来のEBV活性化末梢Ｂ細胞培養物の組織培養上清（1:2に希釈された）を示す；そして「Ind」は、組換えタンパク質p21Eと反応性であるが、HTLV-IおよびHTLV-II特異的プライマーおよびプローブを用いるPCRによれば、HTLV-IまたはHTLV-IIの存在が陰性である血清を示す。試験されたHTLV-I/IIに感染した10個体の10の全ての血清が、比較的大きなp21 E組換えタンパク質2A3Bと強く反応した。しかし、10個のHTLV-I/II抗血清の内２個のみが、2A2Bまたは3 A3B組換えタンパク質のいずれかと反応した。同様に、抗p21E EBV活性化Ｂ細胞株組織培養上清を試験した場合、それらはどれも組換えタンパク質2A3Bとは反応するが、2A2Bまたは3A3Bのどちらとも反応しない。このことは、2A3Bの中心部分はHTLV-I gp21の免疫優性エピトープを含むことを示す。このことは、2A3Bの中心部分の44アミノ酸を含む組換えタンパク質2B3Aを試験したときに確認された。試験された10個のHTLV-I/II血清のうちの10個が2B3A組換えタンパク質と反応した。さらに、試験された抗p21E EBVI/II血清の両方とも 2B3A組換えタンパク質と反応した。さらに、試験された抗p21E EBV活性化Ｂ細胞の両方が、2B3Aを認識する抗体を産生した。 p21E組換えタンパク質と反応するが、PCRによるHTLV-IまたはHTLV-II核酸に対しては陰性である血清によって認識されるエピトープの位置もまた決定された。７個のp21E不確定血清の内の７個が、2A3Bおよび3A3Bの組換えタンパク質と反応した。2B3A組換えタンパク質と反応したp21E不確定血清は、７つの内一つもなかった。従って、HTLV-I感染個体および感染はしていないがp21Eを認識する抗体を有する個体由来の血清によって認識されるエピトープが識別可能である。再度図４を参照すると、2B3Aペプチドが、MF1R1およびMF2R2ペプチドによって大まかに半分に分けられることがわかる。本発明を支持するために行われた予備的な研究により、どのペプチドも2B3Aペプチドと強く反応する２個のHTLV-I血清および２個のHTLV-II血清と免疫反応性ではないことが示された。このことは、2B3Aペプチドの配列の大部分が、HTLV陽性血清と免疫反応性であるために必要であることを示す。Ｃ．精製タンパク質の調製組換え2A2B、2B3A、および3A3Bペプチドは、実施例１Ｄに詳しく説明するように、形質転換された細菌の細菌ライゼートから調製された。簡単にいえば、細胞を組換えタンパク質の発現を誘導する条件下で培養し、遠心分離によりペレット化し、そして凍結と溶解を数回反復することにより溶菌した。溶菌の後、タンパク質はTriton-X100^TMの添加により可溶化され、そして不溶性細胞片は遠心分離によりペレット化した。上清画分をグルタチオンアガロースカラムに通し、そして吸着したタンパク質を、５mMグルタチオンで溶出させた。タンパク質を含む画分をプールした。プールしたタンパク質画分は、タンパク質画分のSDS-PAGE分析により決定されたように、非常に均一であった。 2B3Aおよび3A3Bペプチドは、例えば、Mitchellらによって記載された固相ペプチド合成法、あるいは他の組換え系によって直接調製され得ることが好ましいことが理解され得る。Ｄ．精製タンパク質の免疫反応性上記から精製された2A2B、2B3A、および3A3Bペプチドは、ウエスタンブロット方式で、下表２で同定される様に、HTLV陽性個体の56個の血清、HTLV陰性の個体の７個の血清、およびp21E反応性でHTLV不確定個体の18個の血清との免疫反応性について試験し、表２の下に示すように同定した。一見してわかるように、2B3Aペプチドは、全ての HTLV-IおよびHTLV-II陽性血清と免疫反応性であるが、非感染血清とは交差反応性ではなかった。対照的に、3A3BペプチドはいくつかのHTLV陽性血清と反応性であったが、非感染血清18個全て（これらもまたp21Eペプチドと免疫反応性であった）と反応した。 IV．HTLV-IおよびHTLV-II診断方法およびキット本発明の2B3Aペプチド（混成2B3Aペプチドを含むと定義された）の４つの基本的タイプの診断用途が記載される。第１の一般的なアッセイタイプは、HTLV-IまたはHTLV-II感染に関して、ヒト血清をスクリーニングするエンザイムイムノアッセイである。このアッセイ方式では、表面結合2B3Aペプチドを有する固相試薬が、試薬上のペプチドに抗体が結合し得る条件下で、被検体血清と反応する。このアッセイはまた、固相に結合しているさらなるHTLVペプチド、すなわち組換え型またはHTLVウイルスライゼート由来のいすれかを利用する。試薬を洗浄して非結合の血清成分を除去した後、試薬をリポーター標識抗ヒト抗体と反応させ、2B3Aペプチドおよび固体支持体に結合している他の全てのHTLVペプチドに結合した抗HTLV-Iまたは HTLV-II抗体の量に比例して、リポーターを試薬に結合させた。試薬を再び洗浄して未結合の抗体を除去し、試薬に結合したリポーターの量を測定した。リポーター標識抗体、およびリポーター検出に必要とされるさらなる試薬を、本明細書中では、固体支持体上のペプチド抗原に結合したヒト抗体の存在を検出するためのリポーター手段という。第２のアッセイタイプは、HTLV-IおよびHTLV-IIに対する抗体の検出およびHTL V-IおよびHTLV-II感染個体の区別の両方のためのエンザイムイムノアッセイである。このアッセイ方式では、HTLV-I、またはHTLV-II、またはHTLV-IとHTLV-IIとの両方に対する抗体を特異的に検出し得る組換えペプチド抗原が、異なる位置で固相試薬に結合する。試験される血清の２つの試料は、固相試薬の適切な領域に添加され、その後、本質的に上記のようにアッセイが行われる。図10Ａは、このタイプの固相試薬の一つの特異的な実施態様を示す。この試薬は、ヒト血清試料中のHTLV-IまたはHTLV-II感染の検出に用いるキットの部分を形成する固体支持体10を含む。この支持体は、第１、第２、第３および第４の反応ゾーンを有し、それぞれ12、14、16、および18に示される。反応ゾーン12は、2B 3Aペプチド分子が結合した表面を有する。このゾーンは、HTLV陽性血清試料（HT LV-IまたはHTLV-II感染）由来の抗体と免疫反応性であるが、p21Eペプチドとは免疫反応性であるがHTLV-IまたはHTLV-II感染の証拠を示さない「疑似陽性」とは、免疫反応性ではない。反応ゾーン14は、3A3Bペプチド分子が結合した表面を有する。このゾーンは、次の抗体と免疫反応性である。すなわち、HTLV-I p21Eペプチドと交差反応性であるが、血清自身がHTLV-IまたはHTLV-II感染の証拠、例えばHTLV特異的配列のP CR検出を示さない抗体である。反応ゾーン16は、特異的にHTLV-I感染個体由来の血清抗体と免疫反応性であるペプチド分子が結合した表面を有する。一つの好ましいHTLV-Iペプチドは、上記で（配列番号３）として同定されたMTA-1ペプチドである。種々の関連gp46ペプチドは、MTA-4、MTA-5、およびK163（全て図11に示す）を包含し、それらもまた用いられ得る。反応ゾーン18は、特異的にHTLV-II感染個体由来の血清抗体と免疫反応性であるペプチド分子が結合した表面を有する。一つの好ましいHTLV-Iペプチドは、上記で（配列番号４）として同定されたK-55ペプチドである。その他の好ましいHT LV-IIペプチドは、上記で（配列番号４および配列番号43として）同定されたK15 およびK34ペプチドである。上記アッセイの固相試薬は、ポリマー支持体などのようなタンパク質物質を固体支持体に結合させるための既知の技術によって調製される。この支持体は、アミンアルデヒド、カルボキシル、アルコールまたはスルフヒドリル基のような反応性表面基を提供し得る。このペプチド結合法は、一般にタンパク質の支持体への非特異的吸着、またはタンパク質の共有結合、すなわち代表的には遊離のアミン基を介して、固体支持体上の活性化カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド基のような化学的反応性基への結合、を包含する。非特異的吸着または化学的誘導のどちらかによってペプチドを支持体表面に結合させる方法は、良く知られている。代表的なアッセイ法では、血清試料の適切な希釈物が、固相試薬の４つの反応ゾーンのそれぞれと接触して置かれる。一般に、血清試料は、ゾーンを覆うために十分な量、例えば50〜200μl血清試料が各ゾーンに置かれる。この血清は、血清抗体が支持体結合ペプチドと免疫反応性であるに十分な条件下で、試薬と共にインキュベートされる。代表的には、反応条件は37℃で30〜60分である。インキュベーションの後、この試薬を生理的緩衝液などで洗浄し、非結合のおよび非特異的結合の血清物質を除去した。次いで、洗浄された各ゾーンに、酵素標識抗ヒト抗体のような検出試薬を１滴添加して、固体支持体上に結合した抗HT LV-I抗体量に比例して酵素を試薬に結合させた。試薬を再び洗浄して非結合の抗体を除去し、そして試薬に結合した酵素の量を測定した。図10Ｂは、HTLV-I感染個体由来の血清試料中に観察され得る反応パターンを示し、ここで斜線で陰を付けた部分は検出可能な免疫反応を示す。この場合では、第二ゾーンとの反応は起こらないが、いくつかのHTLV-I試料が第二ゾーンの3A3B ペプチドと免疫反応性であり得る（上の表２）。第四ゾーンではなく第三ゾーンとの反応は、HTLV-Iのみの感染を示す。図10Ｃは、HTLV-II感染個体由来の血清試料中に観察され得る反応ゾーンパターンを示す。この場合、血清抗体は、3A3Bペプチドおよび2B3Aペプチドと免疫反応性である（上の表２）。第三ゾーンではなく第四ゾーンとの反応は、HTLV-II のみの感染を示す。最後に、図10Ｄは、非感染だが交差反応性血清の血清試料に観察され得る反応ゾーンパターンを示す。第一ゾーンとの反応がないのは、たとえ血清が3A3Bペプチドを認識する交差反応性抗体を含んでいても、個体が、HTLV-IまたはHTLV-II には感染していないことを示す。第三または第四ゾーンのいずれかとの反応がないことにより、試験血清中にHTLV-IまたはHTLV-II感染がないことがさらに確かになる。第３の一般的なアッセイタイプは、HTLV-IまたはHTLV-II抗血清の確認に用いるウエスタンブロットアッセイである。このアッセイ方式は、本発明で記載されるg21ペプチド抗原の一つに加え、米国特許第号およびPCT特許出願番号第PC T/US92/00823号に記載される、HTLV-IおよびHTLV-IIに対する血清抗体の検出および識別に効果的である一つまたはそれ以上のgp46組換えペプチドを含む。一つの好ましい方式では、確認のペプチドは、HT LV-Iウイルスライゼート由来のp24 gagタンパク質、およびHTLV-I gp21エンベロープタンパク質の大きな部分を含むp21E組換えエンベロープタンパク質を含む。このHTLV-Iウイルスライゼートは、HTLV-Iおよび/またはHTLV-II gagタンパク質に対する抗体を含むほとんど全ての血清を検出する。HTLV-IおよびHTLV-II env 領域に対する抗体は、p21E組換えタンパク質によって検出されるが、非感染個体由来のいくつかの血清もまた、p2lEタンパク質と反応する（Lalら；Lipkaら、19 91）。この血清は、HTLV-I gp46ペプチド抗原MTA1およびHTLV-II gp46ペプチド抗原K55に対してそれが示す反応性によって、HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していると診断される。従って、もしも特定の感染血清がK55ではなくMTA1と反応すれば、その個体は、HTLV-Iに感染している。もし逆が真実なら、個体はHTLV-IIに感染していると診断され得る。このウエスタンブロット確認アッセイの評価は、出願人および共同研究者によって報告された（Robertsら；Lipkaら、1992b）。これらの研究では、記載されたアッセイは99％の特異性を有し、HTLV-IおよびHT LV-IIに感染した個体の検出感度は99％であった。このブロット手順の詳細は、実施例２Ｂ、および引用文献に提供されている。ウエスタンブロットアッセイの他の実施態様では、p21E組換えタンパク質は、本発明で記載されるgp2lペプチド2B3Aで置き換えられる。この方式では、2B3AペプチドのHTLV-IまたはHTLV-IIバージョンのいずれかが、HTLV-IまたはHTLV-II gp21タンパク質のいすれかに対する抗体を検出する。2B3Aペプチドは、p21E組換えタンパク質と交差反応する非感染個体由来の血清との反応性を欠くため、このアッセイは、HTLV感染個体に対してより高い特異性を有し、p21E組換えタンパク質を用いる試験によって現在示された感度と本質的に同じ感度を有することが期待される。最後の実施態様は、2B3Aおよび3A3Bペプチドの両方を含む。実際、HTLV感染個体は、2B3Aと反応し、そしておそらく3A3Bペプチドとも反応する。HTLV-Iまたは HTLV-IIには感染していないが、p21E組換えタンパク質と交差反応する抗体を有し、従ってHTLVスクリーニングアッセイで陽性となり得る個体は、3A3Bタンパク質とのみ反応する。この実施態様は、本当にHTLVに感染している個体、および感染していないHTLV不確定個体の両方に対して陽性シグナルを発する抗原を提供するという利点を有する。このことにより、与えられた個体の血清反応性が、より正確に測定される。Ｖ．HTLV-ペプチドワクチン組成物本発明はまた、ペプチドが結合する2B3Aペプチド免疫原ペプチド担体を含有するワクチン組成物を含む。より詳細には、ワクチンは、本質的には配列番号22で同定されたアミノ酸配列からなるHTLV特異的抗原領域を有するペプチドを免疫原ペプチド担体と組み合わせて含有する。ペプチドにとって特に有用な免疫原担体は、スカシガイのヘモシアニン（KLH ）、破傷風トキソイド、ポリ-1-（Lys:Glu）、ピーナツ凝集素、ポリ-D-リジン、ジフテリアトキソイド、卵白アルブミン、ダイズ凝集素、ウシ血清アルブミン（BSA）、ヒト血清アルブミンなどを包含する。 2B3Aペプチドを化学的誘導を含む種々の公知の方法および遺伝子工学技術により担体に結合し得る。この後者の技術は、Gerald Quinnan、「Proceedings of a Workshop」、1984年11月13〜14日によりさらに詳細に開示されている。本発明のワクチンおよび接種物は、通常筋内注射または皮下注射、腸溶カプセルまたは錠剤による経口的な方法、坐剤、鼻スプレー、および投与に適したその他の経路によって投与され得る。ヒト患者にとって、ポリペプチドの適切な用量は、選択した投与経路および多くの他の要因にいくぶん依存する。これらの要因の中には、免疫化される哺乳類の体重、用いる担体、用いるアジュバント、および用いることが所望される接種回数が包含される。ヒト被験体に対する個々の接種物は、ポリペプチドが結合し得る担体を除いて、典型的には約10マイクログラム〜約100ミリグラムのポリペプチドの単位用量を含有する。所望する場合には、一連の用量が、至適免疫のための期間中ずっと投与され得る。ワクチンの単位投与量剤型（unit dosage forms）はまた、所望する場合には、前述量のポリペプチドを含有するように提供され得る。いずれにしても、ワクチンおよび接種物に含有される免疫原は、「有効量」で存在し、この量は、免疫学分野で周知の種々の要因（例えは、免疫化される哺乳類の体重、用いる担体部分、用いるアジュバント、求められる防御期間、および所望される免疫化プロトコル）に依存する。 VI．抗2B3Aペプチド抗体このセクションは、2B3Aペプチドに対して特異的なヒトモノクローナル抗体（ Mab）の調製、2B3Aペプチドに対して特異的なヒト組換え抗体（Rab）の調製、およびHTLV-Iウイルス感染に対する受動ワクチンとしての抗体の使用を記載する。Ａ．ヒト抗2B3A Mabの調製抗2B3A抗体を生産するハイブリドーマは、当該技術分野で既知のハイブリドーマ生産技術（Harlow）を用いて、HTLV-IまたはHTLV-IIに感染したヒトのＢリンパ球から単離した抗2B3A抗体生産リンパ球と融合パートナーミエローマ細胞との融合により生成され得る。ハイブリドーマ生産の１つの模範的な方法では、無症候性HTLV-Iに感染した個体の末梢血液から単離したＢリンパ球をエプスタイン・バーウイルス（EBV）で活性化し、そして次に実施例１Ｂに記載のとおり、2B3Aペプチドと免疫反応性である抗体を選択する。陽性抗2B3A活性を示す細胞の培養物を増幅させ、そして融合誘導因子（fusogen）としてポリエチレングリコール（PEG）を用いて、以下の材料のセクションに記載するGLI-H7ミエローマパートナー細胞のような適切なヒトまたはマウス-ヒトミエローマ融合パートナーと融合させる。次いで、ハイブリドーマを、十分に確立された基準（Mitchell）に従って、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン、およびウアバインを含有する培地での成長により選択する。ハイブリドーマ培養物の上清は、例えば実施例２に記載の方法を用いて、2B3A ペプチドと免疫反応性である免疫グロブリンの存在について試験する。上記の工程により同定される陽性ハイブリドーマ培養物を、限界希釈によりサブクローニングし、そして2B3Aペプチドとの免疫反応性の再試験をした。陽性サブクローンを増幅させ、そして免疫グロブリンイソタイプおよび2B3Aペプチド免疫反応性についてさらに試験する。Ｂ．ヒト組換え抗2B3A抗体の調製抗2B3A Mabを生産するハイブリドーマの培養物は上記のように調製される。周知の方法（Maniatis）に従い、メッセンジャーRNA（mRNA）を細胞から単離し、そしてこのmRNAを用いて、相対的なcDNAを生産する。免疫グロブリン遺伝子のＬ鎖およびＨ鎖の可変部領域のコーディング配列を、Ｈ鎖およびＬ鎖IgG可変部領域について既知のPCRプライマーを用いてPCR法により増幅する（Larrick， 1989,1991,1992）。公開された手順（Larrick，1989,1991,1992）に従い、Ｌ鎖可変部領域の増幅したコーディング配列断片を精製し、適切な制限酵素で切断し、IgGのＬ鎖の発現のために適切な発現ベクターに挿入する。本明細書でpSXRD. κ-IgGとして同定された１つの適切な発現ベクターの構築を実施例３に示す。公開された手順（Larrick，1989,1991）に従い、Ｈ鎖可変部領域の増幅したコーディング配列断片を同様に精製し、適切な制限酵素で切断し、IgGのＨ鎖の発現のために適切な発現ベクターに挿入する。Ｈ鎖可変部領域の発現のための１つの適切な発現ベクターは、pcDNA1/neo.IgG1ベクターである。このベクターは、I gG Ｈ鎖定常コーディング領域を付加することによる、pcDNA1ベクター（Invitro gen，San Diego，CA）の改変により構築され得る（Larrick，1992）。次いで、２つのプラスミドをリポフェクションまたはエレクトロポレーションを用いて、 CHO細胞またはGLI-H7細胞のいずれかに同時トランスフェクションする。重プラスミドの選択を抗生物質GENETICIN^TM（G418，BRL #860-18111）を用いて行った。細胞をIgG生産についてアッセイし、そしてサブクローニングする。サブクローンを2B3Aペプチドへの結合についてアッセイする。陽性クローンを数回サブクローニングし、確実に純粋にした。あるいは、記載されたようなクローン選択方法（Huse，McCafferty）が、HTLV -IまたはHTLV-IIに感染したヒトから単離したＢリンパ球から調製したcDNAをＢリンパ球の可変部領域コーディング領域の供給源として使用し、組換え抗2B3A抗体を得るために用いられ得る。 cDNAをファージベクターに挿入し、ベクターを適切なE. coli細菌宿主で発現させ、そして放出したファージを抗原を含有する固体支持体への親和性結合により選択する。次いで、捕獲されたファージを用いて、細菌宿主を再感染する。Ｃ．受動ワクチン組成物上記で調製したヒト抗2B3A MabまたはRabは、HTLV-Iおよび／またはHTLV-II感染の治療および／または予防に用いるためのワクチン組成物に使用される。この手法では、2B3Aペプチドを認識するMabまたはRabを、HTLV-IまたはHTLV-IIに曝され、そして／またはHTLV-IまたはHTLV-IIに感染した個体に投与される。HTLV- Iに感染した細胞にこれらの抗体が結合することにより、次いで、マクロファージが抗HTLV-I抗体が結合しているＢリンパ球を破壊する体液性免疫応答が提供される。ワクチン組成物を作製するために、抗HTLV-I抗体は、適切な注射（一般的に非経口）用溶液に処方される。その組成物は、非感染個体におけるHTLV感染の阻止または感染個体におけるウイルス複製の阻害に有効な量で投与される。好ましい抗体用量は、約0.5〜5mgの抗体/kg体重の範囲である。感染個体を処置するのに、その組成物は、ある一定期間をあけて、好ましくは、約１週間から４週間間隔で、投与される。ワクチン接種は、予測される感染の前に、または既存のHTLV-I 感染を処置する際に行われ得る。一つの一般的な使用では、HTLV-Iに感染していると診断された母親の幼児にその抗体組成物を注射し、ウイルス感染を防止する。特に、幼児が長期におよぶ母乳育ちの場合である。その抗体は、免疫予防によってHTLV-Iを処置または予防する方法として、例えば筋肉内注射、皮下注射、または静脈注射、または幼児の場合はまた、経口投与によっても投与され得る。 VII．交差反応タンパク質3A3Bの同定 HTLV-非感染ヒトと特異的に交差反応するHTLVエピトープ3A3Bの同定は、このセクションで述べられている方法によって、交差反応抗体を誘導する原因となるタンパク質を同定するのに用いられ得る。Ａ．タンパク質の抗体同定 3A3Bペプチドに特異的なポリクローナルまたはモノクローナル抗体は、交差反応個体の血清に存在する交差反応ペプチドを単離・同定するのに使用され得る。その個体は、例えばHTLVウイルスの存在には陰性であるが、血清はHTLV p21E抗原と交差反応するといった個体である。この抗3A3B抗体は、慣例の方法（3A3Bをペプチド抗原として使用）（Harlow）にて作成されるポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。このペプチド抗原は、好ましくは、スカシガイのヘモシアニンといった適切な担体タンパク質に結合しており、ポリクローナル抗体を作製するためウサギ、またはMabを作製するためマウスといった適切な動物に注射される。あるいは、この抗体は、既知のアフィニティー精製方法（Harlow）を用いて、 3A3Bペプチドを固体支持体に結合させそしての交差反応性個体からの抗体を捕獲することによるアフィニティー精製によって精製され得る。交差反応する被験体から交差反応タンパク質を単離するため、上記の抗3A3B抗体を標準的な誘導体化方法にて固体支持体に結合させ、3A3B交差反応の個体から単離したプラズマまたは全細胞ライゼートの試料を支持体層に通し、その支持体に交差反応タンパク質を捕捉させた。その捕捉したタンパク質はカラムから遊離され得、候補となるタンパク質が分取SDS-PAGEまたはクロマトグラフィーにより精製され得る。そしてその精製タンパク質は標準的な方法を用いて配列決定され得る。一旦、部分的にタンパク質の配列を得ると、当該分野で周知の方法（Maniatis ら、SISPA特許）を用いてペプチドの原因となっているコーディング配列を同定することが可能である。そのような一つの方法は、3A3B交差反応個体由来の血清および/またはPBMC試料から核酸を単離し、次いでλgt10ライブラリーを構築することを包含する。得られたライブラリーを標識した縮重プライマーでプローブし、単離した3A3B交差反応タンパク質をコードし得る血清中のハイブリダイズ配列を含むクローンを同定する。その他の方法論（この適用の範囲の及ばない）もまた使用され得る。以下の実施例は、発明の種々の局面を説明するが、しかしその範囲に限定することを意図としない。材料以下の実施例で用いた材料は以下のとおりである：酵素：DNAaseIおよびアルカリホスファターゼはBoehringer Mannheim Biochem icals（BMB，Indianapolis，IN）から入手した；EcoRI、EcoRIメチラーゼ、DNA リガーゼ、およびポリメラーゼIは、New England Biolabs（NEB，Beverly，MA）から入手した；そしてRNaseはSigma（St．Louis，MO）から入手した。その他の試薬：EcoRIリンカーはNEBから入手した；そしてニトロブルーテトラゾリウム（NBT）、5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルホスフェート（BCIP）、5- ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトピラノシド（X-gal）およびイソプロピルβ-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）はsigmaから入手した。 GLI-H7細胞株はCarrollにより記載されるように、マウスNS-1ミエローマとヒト活性化Bリンパ球との融合から構築したヒト-マウスヘテロミエローマ融合パートナー細胞株である。HEp-2細胞株はアメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）、Rockville，MD（ATCC-CCL-23）から入手した類表皮腫（ヒト喉頭由来）細胞株である。チャイニーズハムスター卵巣細胞（DUX-B11）はL.A．Chasin（Urlaub）から入手した。細胞培養培地（PFHM、RPMI、IMDM）はGibco Laboratoriesから入手した。実施例１ 2B3Aおよび3A3B組換えペプチドの調製Ａ．発現ベクターの構築 HTLV-Iゲノム由来の完全コピーDNA挿入物を含有するプラスミドは、Laborator y of T-Cell Biology，National Institutes of Health（Bethesda，MD）のDr.R .C．GalloおよびF．Wong-Staalから入手した。 gp21コーディング領域（図２）は、Dr．Wong-Stahlから入手したHTLV-Iクローンsp65 MT-2に存在するgp21コーディング領域に由来した。HTLV-I gp21の選択した部分を増幅するように設計したオリゴヌクレオチドプライマー（図３）を、製造会社の説明書に従い、自動合成機（Applied Biosystems，Foster City，CA）で合成した。全てのプライマーは、それらの5'末端に位置するBamHI、NcoIおよび/またはEcoRI部位のいずれかを含有し、pGEX-GLI発現系にインフレーム（in-f rame）な挿入となるように、増幅したDNAのクローニングを促進した。 PCRを製造会社の説明書に従って行い（Perkin-Elmer/Cetus，Norwalk，CT）、そして全てのPCR反応物は鋳型として2ngのHTLV-Iクローンsp65 MT-2（Dr．F．Wo ng-Staalにより寛大にも提供された）および1.0μMの適切なオリゴヌクレオチドプライマーを含んだ。PCR増幅を鋳型の変性（１分間、94℃）、プライマーのアニール（２分間、50℃）、およびプライマー伸長（２分間、72℃）の25サイクルで行った。増幅したDNAを精製し、適切な制限酵素で２時間切断し、そして発現ベクターpGEX-GLIに連結した。このベクターは、市販のベクターpGEX-2（Pharmacia，P iscataway，NJ）の改変バージョンであり、これはすでに同じ制限酵素で切断されている。Ｂ．スクリーニングのための抗体の調製末梢性Ｂ細胞を、すでに記載されているとおり（Perkins；Foung）、無症候性 HTLV-Iに感染した個体から単離し、96ウェルマイクロタイタープレートに１ウェルあたり10⁴細胞でエプスタイン・バーウイルス（EBV）で活性化した。２日間の培養後、特異的な抗HTLV-I IgG活性をHTLV-Iウイルスライゼートに基づくエンザイムイムノアッセイ（Diagnostic Biotechnology，Singapore）を用いて評価した。抗HTLV-I活性を検出し、そして次いで、EMB不滅化Ｂ細胞を培養物が消費する上清が残っている間の約１ヶ月間培養した。HTLV-I確認アッセイ（Diagnostic Biotechnology）を用いた次のウエスタンブロット分析で、３つのEBV活性化Ｂ細胞株（3E9、5G4、および6E9と称される）が、組換えenvタンパク質p21Eと強く反応することが分かった。次いで上清をBLOTTOで1/2に希釈し、そして単離したg p21組換えタンパク質をスクリーニングするために用いた。その次に、マウス-ヒトヘテロミエローマ細胞への融合において、これら３つのEBV活性化Ｂ細胞株はどれもうまく融合せず、結局、EBV活性化Ｂ細胞の抗体生産を中止した。しかし、活性化Ｂ細胞の上清は、以下に記載のスクリーニング手順で有用な高特異的抗体調製を提供した。さらに、３つの独立したEBV活性化Ｂ細胞から2B3Aに対する抗体が単離されたことで、2B3Aペプチド抗原に対する抗体が感染個体のHTLV-IまたはHTLV-IIに対する免疫応答の主要素であることが確認された。Ｃ．免疫原ペプチドのスクリーニングプラスミドを含有する細菌を、形質転換E．coliの2mlの培養物から調製した粗ライゼートのウエスタンブロット分析により、タンパク質生産についてスクリーニングした。全細胞ライゼートの10分の1の体積をレーン毎に流し、そして12.0 ％ポリアクリルアミドSDSゲル（Laemmli）で電気泳動した。生じたゲルをニトロセルロースフィルター紙（Schleicher and Schuell，Keene，NH）の上にエレクトロブロットし、そしてHTLV-Iウエスタンブロットを、1/2に希釈したEBV活性化Ｂ細胞組織培養上清（実施例1B）、または1/100に希釈したHTLV感染抗血清もしくは1/100に希釈したコントロール抗血清とともに室温で、一晩インキュベートした。全ての血清および上清をBLOTTO（10mM TRIS-HCl、pH7.4、5％脱脂粉乳、2 .5％正常ヤギ血清、および0.5％ Tween-20）に希釈した。ウエスタンブロットを TTBS洗浄緩衝液（10mM TRIS-HCl pH7.4、150mM NaCl、0.05％Tween-20）で３回、各５分間洗浄した。結合ヒトIgGをアルカリホスファターゼ（Promega，Madison，WI）と結合したヤギ抗ヒトIgGとともに１時間インキュベーションすることで検出した。これを次にTTBSで4、5分濯いだ。結合二次抗体を、100mM TRIS-HCl、pH9.5、および50m M MgCl₂中に5-ブロモ-4-クロロ3-インドリホスフェート（BCIP）およびニトロブル−テトラゾリウム（NBT）を含有する基質溶液中で細片（strip）をインキュベートすることにより検出した。生じたウエスタンブロットをHTLV-I感染個体または非感染個体からの血清でスクリーニングした。これらの分析の結果を表１に示す。組換えクローン2A3B、2A2B、2B3A、および3A3Bは、ジデオキシターミネーション手順（Maniatisら）により全てのDNA塩基配列を決定された。得られたDNA挿入物の塩基配列はそれらの構築で用いたプライマーおよび鋳型のDNA塩基配列と一致したので、これにより所望する組換えタンパク質の生産が可能になり得る。Ｄ．組換え抗原の精製組換え融合タンパク質の精製を本質的には記載のとおり（20）に行った。簡単に言うと、目的とする組換えプラスミドを含有する細菌の一晩培養した10mlを、 100μg/mlアンピシリンをともなう500ml NZYDT培地（Maniatisら）が入っているフラスコに1/100希釈した。融合タンパク質の発現を対数期の培養物へのIPTG添加（最終濃度0.2mM）により誘導した。培養物をさらに3〜4時間、37℃、細菌が5000×gで10分間の遠心によりペレットとなる時点で生育させた。細胞を20ml冷MTBSに再懸濁し、そして凍結および解凍のサイクルをいくらか行うことにより溶菌した。溶菌後、タンパク質をTriton-X100（Sigma， St．Louis，MO）を1.0％となるまで、DNAse Iを１μg/mlとなるまで、そしてアプロチニンを1.0％となるまで添加することによりタンパク質を可溶化した。25 ℃で５分間のインキュベートした後に、不溶性細胞片を10,000×gで10分間の遠心を２回行ってペレット化し、そして上清を残しておいた。ペレットおよび上清画分の両方からのアリコートをSDS-PAGE（Laemmli）により分析し、組換えタンパク質が上記の手順により可溶化されたかどうかを決定した。 2A3B、2A2B、および3A3B組換えタンパク質は全て可溶性画分に存在した。３つ全ての組換えタンパク質について、１リットル培養は、約50％の純度で1〜2mgの融合タンパク質の精製を生じた。次いで、製造会社の推奨のとおり前処理した0. 8mlグルタチオンアガロース含有カラム（Pharmacia，Piscataway，NJ）に上清を通した。カラムを１％Tritonおよび１％アポプロトニン（Apoprotnin）を加えた 10mlのMTBSで洗浄し、続いて5mlのMTBSのみで洗浄した。結合タンパク質を50mM Tris pH8.0中に5mMグルタチオンを含有する緩衝液で溶出し、そして10、1mlの画分を収集した。溶出したタンパク質のピークの位置を280nmでの画分の吸光度の測定および画分のアリコートのSDS-PAGE分析により決定した。多量のタンパク質を含有する画分をプールし、そしてこのプールのアリコートを-70℃で次の分析のために冷凍した。実施例２精製p21E組換え体対HTLV-I、HTLV-II、およびp21E不確定血清の血清学的パネリングＡ．抗血清これらの分析で用いた抗血清は、26人のHTLV-I感染個体および28人のHTLV-II 感染個体由来の血清の十分に特徴づけられたパネルを包含した（Lipkaら、1991 ；Hadlockら、1992）。HTLV-IおよびHTLV-IIの全ての血清は、HTLV感染についての標準的な基準に適合する抗体プロフィールを有した（p24gagおよびgp46および /またはgp68envタンパク質に対する抗体）。さらに、血清を、組換えHTLV-I抗原 MTAIに対する陽性反応性および/またはHTLV-I特異的オリゴヌクレオチドプライマーおよびプローブを用いるPCRの両方により、HTLV-Iに感染しているとして分類した（Lipkaら、1992b）。同様に、32人のHTLV-II感染個体を、組換えHTLV-II 抗原K55に対する反応性および/またはHTLV-II特異的プライマーおよびプローブを用いるPCRにより同定した（Lipkaら、1992b）。 gp21ペプチド抗原はまた、HTLV-IおよびHTLV-Iの特異的プライマーおよびプローブを用いるPCRにより試験をした場合に、HTLV-I陰性の７人の個体由来の血清、およびp21E組換えタンパク質と反応するがHTLV核酸の存在について陰性である 18人の個体由来の血清との免疫反応性について試験した。さらに、これら18のp21E反応性血清は、HTLV感染していることの血清学的基準に合わなかった。HTLV-Iおよび HTLV-Iに感染した個体は、HTLV-I感染の日本人の血液提供者由来の抗血清J103を除いて、すべて北カリフォルニア地区からであった。非感染血清は、全てStanfo rd University Blood Bankの血液提供者に由来していた。18のp21E反応性HTLV陰性の血清は、北カリフォルニア地区からの血液提供者由来の血清、またはCenter for Disease Control，Atlanta，Georgiaにより提供された血清のいずれかである。Ｂ．精製組換えペプチドの血清反応性組換えタンパク質2A2B、2B3A、および3A3Bを実施例１のように調製した。精製したタンパク質のアリコートを還元条件下で11.5％ポリアクリルアミドゲル（La emmli）上で分離した。分離したタンパク質をニトロセルロースメンブレン上にエレクトロブロットし、BLOTTOでブロックし、風乾し、そして3mm幅の細片に切断した。アッセイで、上記からの試験細片を最初にTTBS緩衝液中で再水和し、そして細片をヒト試験血清と共に一晩インキュベートし、BLOTTOで１：50に希釈した。細片を洗浄緩衝液で数回洗浄し、次いで、アルカリホスファターゼと結合したヤギ抗ヒトIgG（Bio-Rad，Hercules，CA）とともに１時間インキュベートした。洗浄後、100mM Tris-HCl緩衝液、pH9.5、50mM MgCl ₂ 中にNBTおよびBCIPを含有する基質溶液中に細片をインキュベートすることにより、発色を成し遂げた。発色は、細片上に一様なバックグランドが現れるまで継続し、脱イオン水で２回細片を濯ぐことにより停止した。組換えタンパク質2A2B 、2B3A、および3A3Bを実施例2Aに記載のとおりHTLV感染血清および陰性血清のパネルに対して試験した。イムノアッセイの結果を上記の表２に示した。実施例３ pSXRD.κ-Igの構築哺乳類発現ベクターpSXRD.κ-Igの構築を幾つかの工程で行った。基となるベクターはpUC18である。pUC18のBamHI部位に、ポリアデニル化シグナルを含むHBV 表面抗原遺伝子からの585bpのBamHI-BGIII断片を挿入した（Larrickら、1992）。方向は、HBV挿入物のBamHI部位がベクターのEcoRI部位に最も近くなるようにした。ポリリンカ−のHindIII部位およびHincII部位の間の領域をこれら２つの酵素でプラスミドを切断し、そしてDNAポリメラーゼのKlenow断片を用いてHindI II部位を平滑化することにより除去した。連結後、生じたプラスミドをpUCHBV3' と名付けた。独特のSalI部位を、合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いてBa mHI部位に挿入した。独特のEcoRI部位およびSalI部位の間に、一連の連結で以下の断片を挿入した：（a）SV40初期プロモーター、EcoRI部位に結合（上記SV40プロモーターの直前に位置するPvuII部位および上記Ｔ抗原開始コドンの直前に位置するHindIII部位に合成オリゴヌクレオチドを加えることにより作製）、（b）HindIII部位に結合しそしてXbaI部位で終わる、関連性のないcDNA由来のスタッファー断片（stuffer fragment）、（c）SV4 0ポリアデニル化シグナルおよびRSVプロモーターを含有するpcDNA1/neo由来のXb aI-BglII断片。XbaI部位をベクターに提供し、そしてBglII部位をPCRクローニングを用いてRSVプロモーターおよびNeo選択性マーカーの間の連結部に位置するように挿入する、および（d）ネズミDHRF cDNA、3'末端のBglII部位に結合。制限部位をPCRを用いて挿入した。本発明は、特定の実施態様、構築方法、および用途に関して記載されているが、種々の他の用途、処方、および実施方法が本発明の考慮される範囲内にあることは当業者にとって明確である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｐ 21/08 8310−2ＪＧ０１Ｎ 33/569 ＨＧ０１Ｎ 33/53 9284−4ＣＡ６１Ｋ 39/21 33/569 9162−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 Ｃ // Ａ６１Ｋ 39/21 9162−4ＢＢ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ 9281−4Ｂ 5/00 ＢＣ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ハドロック，ケネスジー. アメリカ合衆国カリフォルニア 94587, ヘイワード，リージェンツブールバード 32757 (72)発明者ゴー，チン−ジョーシンガポール共和国シンガポール 2159，ヤランレイアンレイアン，35 (72)発明者フォン，スティーブンケイ．エイチ. アメリカ合衆国カリフォルニア 94305, スタンフォード，メイフィールドアベニュー 668

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号１で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域を有するペプチドであって、該ペプチドが以下により特徴づけられる、ペプチド：（ｉ）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染したヒト被験体由来の血清との免疫反応性、および（ii）（１）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性であるが、しかし（２）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られる血清との非免疫反応性。２．前記ペプチド配列が配列番号１の中に包含される配列番号22で同定される、請求項１に記載のペプチド。３．前記ペプチド配列が配列番号１の中に包含される配列番号29で同定される、請求項１に記載のペプチド。４．ヒト血清試料においてHTLV-IまたはHTLV-IIの感染を検出する固相アッセイでの使用のための、請求項１に記載のペプチドであって、該ペプチドが固体支持体上に保持されている、ペプチド。５．ヒト血清においてHTLV-IまたはHTLV-IIの感染を検出するキットであって、（ａ）固体支持体；（ｂ）第一反応ゾーンで、支持体に結合した、配列番号１で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異抗原領域を有するペプチドであって、該ペプチドが、以下により特徴づけられる、ペプチド：（ｉ）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染したヒト被験体由来の血清との免疫反応性、および（ii）（１）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性であるが、しかし（２）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られる血清との非免疫反応性；および（ｃ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリポーター手段、を包含するキット。６．前記ペプチド配列が配列番号１の中に包含される配列番号22で同定される、請求項５に記載のキット。７．前記ペプチド配列が配列番号１の中に包含される配列番号29で同定される、請求項５に記載のキット。８．請求項５に記載のキットであって、さらに前記固体支持体中に第二反応ゾーン、およびこの第二ゾーンに結合した、配列番号２で同定されるアミノ酸配列から本質的になり、そして（１）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られるが、しかし（２）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性である血清との免疫反応性により特徴づけられる、第二HTLV特異的抗原領域を含有する、キット。９．請求項５に記載のキットであって、さらに前記固体支持体中に第三反応ゾーン、およびこの第三ゾーンに結合した、HTLV-IおよびHTLV-IIに対して特異的な血清抗体間を識別し得る第三HTLV特異的抗原領域を含有する、キット。１０．前記第二ペプチドが配列番号３で同定される配列から本質的になるHTLV-I 特異的抗原領域を含む、請求項９に記載のキット。１１．前記第二ペプチドが配列番号４で同定される配列から本質的になるHTLV-I I特異的抗原領域を含む、請求項９に記載のキット。１２．ヒト血清においてHTLV-IまたはHTLV-II感染の存在を検出するキットであって、（ａ）第一および第二、ならびに第三反応ゾーンを有する固体支持体、（ｂ）該第一反応ゾーンで固定化された、配列番号１で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域を有する第一ペプチドであって、該ペプチドが、以下により特徴づけられる、ペプチド：（ｉ）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染したヒト被験体由来の血清との免疫反応性、および（ii）（１）HTLV-I p21E抗原と免疫反応性であるが、しかし（２）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られる血清との非免疫反応性；（ｃ）該第二ゾーンで固定化された、配列番号２で同定されるアミノ酸配列から本質的になり、そして（１）HTLV-I p2lE抗原と免疫反応性であるが、しかし（２）HTLV-IまたはHTLV-IIに感染していないヒトから得られる血清との免疫反応性により特徴づけられる、HTLV特異的抗原領域を有する第二ペプチド；（ｄ）該第三ゾーンで固定化された、HTLV-IおよびHTLV-IIに対して特異的な血清抗体間を識別し得る、第三HTLV特異的抗原；および（ｅ）該支持体に結合したヒト抗体の存在を検出するリポーター手段、を包含する、キット。１３．前記第一ペプチド配列が配列番号１の中に包含される配列番号２２で同定され、そして前記第二ペプチド配列が配列番号２の中に包含される配列番号３０で同定される、請求項１２に記載のキット。１４．請求項１２に記載のキットであって、前記第三ペプチド配列が配列番号３で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV-I特異的抗原領域を有し、該ペプチドが、以下により特徴づけられる、キット：（Ａ）HTLV-Iに感染したヒト被験体由来の血清との免疫反応性、および（ii）HTLV-IIのみに感染したヒト被験体由来の血清との非免疫反応性。１５．請求項１２に記載のキットであって、前記第三ペプチド配列が配列番号４で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV-II特異的抗原領域を有し、該ペプチドが、以下により特徴づけられる、キット：（Ａ）HTLV-IIに感染したヒト被験体由来の血清との免疫反応性、および（ii）HTLV-Iのみに感染したヒト被験体由来の血清との非免疫反応性。１６．ヒト被験体においてHTLV-IまたはHTLV-II感染を陽性で同定する方法であって、該被験体由来の血清と、配列番号１で同定されるアミノ酸配列から本質的になるHTLV特異的抗原領域を含むペプチドとを反応させる工程、該反応により、HTLV-IまたはHTLV-II感染を有する被験体由来の血清中に、前記ペプチドと抗体との間で免疫複合体を形成させる工程、および、該免疫複合体の存在についてペプチドを試験し、血清中のHTLV-IまたはHTLV-I I抗体の存在を明らかにする工程、を包含する方法。１７．前記ペプチド配列が、配列番号２の中に包含される配列番号３０で同定される、請求項１６に記載の方法。