JP3467748B2 - 酸化防止能を持つメロン蛋白質抽出物、その調製方法、及び該抽出物を含有する化粧品、薬剤又は食品組成物 - Google Patents

酸化防止能を持つメロン蛋白質抽出物、その調製方法、及び該抽出物を含有する化粧品、薬剤又は食品組成物

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明の主題は、スーパーオキシ
ドジスムターゼ亢進活性及びおそらくカタラーゼ酵素活
性を有するメロン蛋白質抽出物であり、更に、該蛋白質
抽出物を調製するための方法である。
【０００２】また、その主題は、腫瘍の治療に使用でき
る薬剤、または、特に皮膚老化に対する外用局所適用の
ための上記抽出物を含有する薬剤又は化粧品である。更
に、その主題は、このような抽出物を含有する食品組成
物である。
【０００３】
【従来の技術】大気中酸素が、大気に暴露した有機物の
変性に関与する物質のひとつであることがずっと前から
公知であった。酸化防止剤類の探索は、こうした理由に
より、美容術、食品または医学の領域の両者で絶えざる
関心の的となってきた。
【０００４】フランス特許第 2,287,899号明細書には、
例えば、美容術におけるスーパーオキシドジスムターゼ
酵素の適用及び特に皮膚及びヘアケアのための化粧品の
調製におけるこれらの酵素類の用途が記載されている。
【０００５】スーパーオキシドジスムターゼは、反応： ２Ｏ2・- ＋２Ｈ+ → Ｈ2 Ｏ2 ＋ Ｏ2 によってスーパーオキシドイオン類の不均化を誘発可能
な酵素類である。
【０００６】これらのスーパーオキシドジスムターゼ類
は、特に、ウシ赤血球（Markovitz,J.Biol.Chem.234,p.
40,1959 ）から、大腸菌から（Keele 及びFridovitch、
J.Biol.,245,p.6176,1970 ）、及び海水細菌株から（フ
ランス特許第 2,225,443号及び第 2,240,277号明細
書）、抽出されている。
【０００７】しかし、現在、これらの物質類が含有する
かも知れない感染性物質類と特に関連した理由から、よ
り健康的であるといわれている植物界由来の物質を、後
者の代用とする傾向が見られる。これらの酸化防止酵素
類は、一部の植物中に種々の量で現に存在している。ま
た、スーパーオキシドジスムターゼ類がフリーラジカル
類Ｏ2・- をトラップすることによって消化器系中におい
て抗腫瘍作用を有することができることが公知である
（Montpellier 医学部及びINSERMのCrastes de Paulet
教授によるコミュニケーション）。
【０００８】スーパーオキシドジスムターゼの作用の結
果としての過酸化水素に対するカタラーゼ類の作用によ
って、産生された過酸化水素を除去することによって前
者の効果が実質的に増強されると報告されている。
【０００９】現在、食品保存用合成酸化防止剤類が一般
的に使用されている。使用されている前記２種の主要合
成酸化防止剤類は、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨ
Ｔ）またはブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）で
ある。しかし、最近になって、これらの合成分子類が有
毒で、特に発癌性があり、それ故に、ある用量では危険
であることが明らかとなり、従って、それらの代用とな
る植物由来の酸化防止剤の探索が行われている。Hemeda
等及び Farag等は、それぞれ、J. of Food Sciences 5
5,1,184及びJAOCS,66,6,p.800,1989 中において、これ
らの化合物類を植物から得た物質類で代用させることを
提案している。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】ところで、果実の分野
では、メロン（Cucumis melo）のようなある種のクリマ
クテリック型の果実中において、２２〜２４酵素単位／
ｍｇ・蛋白質のオーダーのスーパーオキシドジスムター
ゼ活性と３５〜４０酵素単位／ｍｇ・蛋白質のオーダー
のカタラーゼ活性とが注目されている。トマトの場合、
スーパーオキシドジスムターゼ活性は、１０酵素活性単
位／ｍｇ・蛋白質付近にある。
【００１１】クリマクテリック型果実は、非クリマクテ
リック型果実と特に成熟プロセスが異なっている。果実
の成熟相は酸化性現象に対応しており、膜系の破壊と代
謝活性の低下がそこで観察される。具体的に述べると、
いわゆるクリマクテリック型果実は、成熟相の開始点で
自己触媒的にエチレンを放出する。エチレンは、これら
の果実において成熟の生理的全過程を惹起し、調和さ
せ、及び加速させるようである。
【００１２】対照的に、非クリマクテリック型果実は、
その成熟相の開始点においてこの自己触媒的エチレンク
ライシスを示さず、エチレンの適用によって成熟を改変
することはできない。
【００１３】非クリマクテリック型果実類は、特に柑橘
類、ブドウ及び苺類であり、クリマクテリック型果実類
は、特に、リンゴ、なし、トマト、メロン及びバナナで
ある。
【００１４】本発明では、驚くべきことにスーパーオキ
シドジスムターゼ及びカタラーゼ増強酵素活性を有する
メロンの新規蛋白質抽出物類が発見された。
【００１５】また、本発明では、該抽出物が適切な化粧
品の形態で、特に皮膚の老化に対して、美容術において
使用でき有益であることが発見された。
【００１６】また、本発明のもうひとつの目的は、特に
ある種の腫瘍の治療に有用であるこの新規抽出物を活性
成分として含有する新規薬剤を提供することである。
【００１７】本発明のもうひとつの目的は、酸化防止剤
として上記蛋白質抽出物を含有する食品組成物を提供す
ることであり、この食品組成物は、特に合成酸化防止分
子類ＢＨＴ及びＢＨＡ等の代用となる。
【００１８】
【課題を解決するための手段】本請求項１に記載された
発明に係る酸化防止能を持つ可溶性メロン蛋白質抽出物
では、可溶性蛋白質抽出物で、それが９５ＬＳ４４４細
胞株又は９５ＬＳ４４４由来のハイブリッド株類の一種
のメロンのパルプから得られること及びそれが３０ U/m
g・蛋白質を超えるスーパーオキサイドジスムターゼ酵素
活性を有したものである。
【００１９】本請求項２に記載された発明に係る可溶性
蛋白質抽出物では、請求項１に記載された可溶性蛋白質
抽出物が、４５ U/mg・蛋白質を超えるカタラーゼ酵素活
性を有したものである。
【００２０】本請求項３に記載の発明に係る可溶性蛋白
質抽出物では、請求項１又は２に記載された可溶性蛋白
質抽出物が、５０ U/mg・蛋白質を超えるスーパーオキサ
イドジスムターゼ酵素活性を有したものである。
【００２１】本請求項４に記載の発明に係る可溶性蛋白
質抽出物では、請求項１又は２に記載された可溶性蛋白
質抽出物が、６０ U/mg・蛋白質を超えるスーパーオキサ
イドジスムターゼ酵素活性を有したものである。
【００２２】
【００２３】
【００２４】
【００２５】本請求項５に記載された発明に係る可溶性
蛋白質抽出物では、請求項１〜４の何れか１項に記載の
可溶性蛋白質抽出物が、水性媒体中で５から９のｐＨで
メロン種のパルプを粉砕または加圧すること、次に該上
清を回収することによって得られたものである・
【００２６】本請求項６に記載された発明に係る可溶性
メロン蛋白質抽出物調整方法では、請求項１〜５の何れ
かに記載のメロン種のパルプが粉砕されること及び該上
清を分離によって回収するものである。
【００２７】本請求項７に記載された発明に係る可溶性
メロン蛋白質抽出物調整方法では、請求項６の分離が、
遠心分離又は他のいかなるろ過技術によっても実施され
るものである。
【００２８】本請求項８に記載された発明に係る外用局
所適用薬剤又は化粧品では、請求項１〜５の何れか１項
による蛋白質抽出物を活性成分として含有するものであ
る。
【００２９】本請求項９に記載された発明に係る外用局
所適用薬剤又は化粧品では、請求項８に記載の蛋白質抽
出物の量が、０．０１〜５重量％、好適には０．０１〜
１重量％のスーパーオキサイドジスムターゼからなるも
のである。
【００３０】
【００３１】本請求項１０に記載された発明に係る食品
組成物では、請求項１〜５の何れか１項による蛋白質抽
出物を活性成分として含有するものである。
【００３２】この理由により、本発明の蛋白質抽出物
は、まず第１に、メロンのパルプから得られるものであ
り、また、３０酵素単位／ｍｇ・可溶性蛋白質を超える
スーパーオキサイドジスムターゼ酵素活性、及び、好適
には４５酵素単位／ｍｇ・可溶性蛋白質を超えるカタラ
ーゼ酵素活性を有することを特徴とする。
【００３３】この蛋白質抽出物は、一般に、ほとんどの
メロン類から得られた公知の蛋白質抽出物に比較して、
増強されたスーパーオキシドジスムターゼ及びおそらく
はカタラーゼ活性を有している。本発明による抽出物
は、多数のメロン類からの選択の結果である。
【００３４】カタラーゼ活性単位（Ｕ）は、１分間に還
元されたＨ2 Ｏ2 のミリモル数を示す。尚、公知の方法
では、新鮮メロン材料１グラムは、約１０ｍｇの可溶性
蛋白質類を供する。
【００３５】スーパーオキシドジスムターゼ活性（ＳＯ
Ｄ活性）は、可溶性蛋白質１ｍｇ当たりの単位で公知の
方法で測定される。本発明の蛋白質抽出物は、その最も
一般的形態において、新鮮材料１グラムについて、可溶
性蛋白質１０ｍｇが回収される。通常のメロンの蛋白質
抽出物は、同一条件下において、遥かに低いＳＯＤ及び
カタラーゼ活性を生ずるであろう（場合に応じて、２分
の１〜４分の１以下）。
【００３６】したがって、該抽出物は、また、使用した
抽出方法に応じて、他の可溶性メロン蛋白質類からな
る。
【００３７】好適な変異株によれば、本発明の蛋白質抽
出物は、５０酵素単位／ｍｇを超えるスーパーオキシド
ジスムターゼ酵素活性及びおそらく６０酵素単位／ｍｇ
を超えるカタラーゼ酵素活性を有し、６０単位／ｍｇを
超えるスーパーオキシドジスムターゼ酵素活性及びおそ
らく１００単位／ｍｇを超えるカタラーゼ酵素活性を有
するのが好都合である。
【００３８】さらに好適には、前記ＳＯＤ活性は、８０
単位／ｍｇを超え、及びおそらくカタラーゼ活性は、１
００単位／ｍｇまたはおそらく１１０単位／ｍｇを超え
るであろう。
【００３９】したがって、この抽出物は、上述の値によ
れば、ＳＯＤ活性を有する１種以上の酵素類及びカタラ
ーゼ活性を有する１種以上の酵素類を驚くべきことに含
有している。
【００４０】別の好適な変異株によれば、該蛋白質抽出
物は、エチレンクライシス後に安定なエチレン産生を示
す、すなわち、エチレン産生が定常期（プラトー）を示
し数日間続くようなメロンから得られる。一般に、メロ
ンのようなクリマクテリック型果実類は、保存に関し
て、エチレンクライシスの激発に続いて成熟状態から過
成熟状態に急激に移行するという性質を有している。周
知であるように、メロンにおけるエチレンクライシスは
極めて実質的であり果実はその後まもなく組織分解され
始め、その市場価値が低下する。対照的に、本発明によ
る蛋白質抽出物を提供可能なメロンの場合、エチレンの
放出は、エチレンクライシス後好適には少なくとも５日
間、さらに好都合であるのは少なくとも７日間、安定な
プラトーを呈する。
【００４１】この種類のメロンは、その所有者が本出願
人の会社である国際出願公開第９２／０２６２２号明細
書に記載されている。
【００４２】本特許出願によれば、遺伝子交差によって
得られたメロン変種は、約５日間という従来の種類の保
存期間よりも長い保存期間（１０〜１４日以上のオーダ
ー）を有している。
【００４３】国際出願公開第９２／０２６２２号明細書
に記載されているように、メロン切片で実施した顕微鏡
検査から、組織構造が成熟によって破壊されていないこ
と（細胞の破壊及びメロン中の老化細胞の特徴に関連し
たガラス状状態または液状化のいずれも観察されていな
い）が明らかとされている。
【００４４】出願人はいかなる科学的解釈に拘束される
ことも望んでいないが、上述の国際特許出願に記載され
ているようなメロンの長期保存期間が大量の酸化防止剤
類の存在に関連しているかも知れないという仮説をたて
ることも可能であろう。
【００４５】当業者は、この特許出願を参考にし、本発
明に従って蛋白質抽出物を産生可能なメロンを利用でき
るであろう。
【００４６】特に、ブダペスト協定に従って1990年７月
１９日に第40310 号としてＮＣＩＭＢコレクション（Na
tional Collection of Industrial and Marine Bacteri
a-ABERDEEN AB2 IRY(Scotland-GB)23 St.Machar Drive
）に種子が寄託されているメロン株９５ＬＳ４４４で
出発し、ハイブリッド形成によって、例えば本発明に従
って前記蛋白質抽出物を得ることが可能な同一特性を有
するヴァクルシーン(Vauclusien)，クリッパ(Clipper)
及びサポータ(Supporter) タイプの変種のような他のメ
ロン変種を得ることも可能である。
【００４７】したがって、本発明の主題は、また、エチ
レンクライシス後に、好都合には少なくとも５日間、好
適には少なくとも７日間、エチレン産生プラトーを有す
るメロン種から得ることができる可溶性蛋白質抽出物で
ある。
【００４８】好適には、前記蛋白質抽出物は、前記９５
ＬＳ４４４細胞株または９５ＬＳ４４４由来ハイブリッ
ド株類のひとつから得ることができるものである。
【００４９】これらの蛋白質抽出物は、前記可溶性物質
類を回収可能とする当技術のいかなる方法によっても入
手できるものである。
【００５０】これらの蛋白質抽出物類は、好都合には、
水性媒体中で、上述のようなメロン種を約７．５のｐＨ
で粉砕または加圧し、その後、上清を回収することによ
って、得られるようなものである。
【００５１】本発明の主題は、また、上述のようなメロ
ン蛋白質抽出物を調製する方法で、上述のようにエチレ
ン激発後にエチレン産生プラトーを示すメロンを適切な
ｐＨで水性媒体中で粉砕すること及び上清を特に遠心分
離またはろ過によって回収し、その後の精製可能性に備
えることを特徴とする。
【００５２】このような方法のためのｐＨは、好適には
５乃至９であり、適切な生理的条件下に留まることを可
能とする（ＳＯＤｓ及びカタラーゼ類の変性なし）。
【００５３】好適には、これは、膜残渣を除去可能とす
る遠心分離である。
【００５４】これらのメロンは、好適には、国際出願公
開第９２／０２６２２号明細書に記載されているもので
ある。
【００５５】本発明の主題は、また、３０酵素単位／ｍ
ｇを超えるスーパーオキシドジスムターゼ酵素活性及び
好都合には４５酵素単位／ｍｇを超えるカタラーゼ酵素
活性を示すメロン蛋白質抽出物を活性成分として含有す
る皮膚老化予防またはヘアケア用の薬剤または化粧品で
ある。
【００５６】また、本発明は、上述の好適な変異株類の
蛋白質抽出物を含有する化粧品または薬剤に関する。
【００５７】この化粧品は、前記蛋白質抽出物に加え
て、美容術技術で周知の不活性賦形剤類を有している。
【００５８】好適には、前記蛋白質抽出物は、皮膚に適
用された化粧品が老化に対する正の効果を供するかまた
は毛髪に対して正の効果を供するだけの十分な量であ
る。
【００５９】蛋白質抽出物の量は、通常、この化粧品
が、０．０１乃至５重量％、好適には、０．０１〜１重
量％のスーパーオキシドジスムターゼからなるような量
である。
【００６０】これらの組成物類は、特に、当業者が参照
することができるフランス特許第２，２８７，８９９号
明細書に記載されており、例えば、ローションタイプの
溶液、脂肪相を水相等に分散させて得られるミルクタイ
プの液体または半流動粘稠度のエマルジョン、または軟
質粘稠度のクリームまたはゲルタイプ懸濁液またはエマ
ルジョンである。これらの組成物類は、通常の方法で調
製される。
【００６１】上述の皮膚製剤に通常使用される不活性賦
形剤として、界面活性剤、着色剤、香料、保存剤、乳化
剤、水のような液体担体、ミルク状またはクリーム状脂
肪相を構成することを意図した天然または合成油脂類の
ような脂肪物質類、三級アミン類及び特にトリエタノー
ルアミンのようなアミノアルコール類によって中和され
たカルボキシビニルまたは無水マレイン酸タイプの樹脂
類が挙げられる。
【００６２】本発明による毛髪用組成物は、水性、アル
コール性または水性−アルコール性溶液の形態であるこ
とができ、またはクリーム、ゲル、エマルジョンの形態
であることができ、これとは別に、加圧した噴射剤も含
有するエアゾールスプレーの形態をとることもできる。
それらは、例えば、シャンプー、ヘアセットローショ
ン、トリートメントローション、スタイリングジェルま
たはクリーム、毛染め用組成物類等からなる。これらの
組成物類は、これらの毛髪用組成物中に通常存在する種
々のアジュバント類を含有でき、例えば、香料、着色
剤、保存剤、シークイストランツ(sequestrants)（金属
イオン封鎖剤）、チック(thickeners)等を含有できる。
【００６３】本発明の主題は、また、上述のようなメロ
ン蛋白質抽出物を活性成分として含有する消化管腫瘍の
治療に特に有用な、この用途に適応させた１種以上の不
活性賦形剤と併用した薬剤組成物である。
【００６４】これらの組成物類は、経口または非経口形
態でまたは所望の治療と両立するいかなるその他の経路
によっても投与できる。
【００６５】本発明の主題は、また、上述のメロン蛋白
質抽出物を酸化防止剤として有効量含有する食品組成物
である。
【００６６】本発明は、また、手引きとして示した下記
の実施例によって例示されるが、本発明の範囲をいかよ
うにも限定するものではない。
【００６７】
【実施例】実施例１〜８；種々の成熟段階における抽出
物の調製及び本発明によるメロン抽出物の酵素活性の測
定 異なる実施例１〜８を構成する種々の成熟段階にある９
５ＬＳ４４４細胞株由来ハイブリッドメロン種（国際特
許出願第９２／０２６２２号明細書に記載）のパルプ５
ｇを使用する。
【００６８】収穫第１日からのこの変異株のエチレン産
生曲線を唯一の付属図面に示してあるが、本曲線につい
ては、該国際特許出願において本出願人が既に記載して
いる。
【００６９】一般的調製方法に従って、パルプ５ｇを冷
温で乳鉢中で粉砕する。植物体積の３倍に等しい５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ：７．５；１ｍＭ ＥＤＴＡ；５
％グリセロール）１容量を添加する。
【００７０】ホモジナイズした後、懸濁液を５０００ｇ
で３０分間、４℃で遠心分離した。次に上清を回収しろ
過する；この粗抽出物を用いて、カタラーゼ及びスーパ
ーオキシドジスムターゼ活性ならびに蛋白質含量を測定
する。
【００７１】カタラーゼ活性は、２３０ｎｍで２５℃で
Ｈ2 Ｏ2 基質の消失をモニタリングすることによって、
測定する。スーパーオキシドジスムターゼ活性は、 Bio
xytech社が供与している525 SOD アッセイキットによっ
て、測定した。この方法は、McCord及びFridovitch法
（キサンチン−キサンチンオキシダーゼによるチトクロ
ームＣ還元のＳＯＤ阻害）によって得られるものに匹敵
する結果をもたらす。可溶性蛋白質類は、Bradford法
（１９７６）によって測定した。
【００７２】結果を下記の表１にまとめた。
【００７３】
【表１】
【００７４】比較実施例９〜１６；種々の成熟段階にお
ける対照メロン抽出物の調製及びメロン抽出物の酵素活
性の測定 ９５ＬＳ４４４株から得たハイブリッドメロンと同一の
成熟段階にあるCharenteタイプの通常のメロンについて
同一試験を実施し、繰り返す。
【００７５】結果を同様に、下記の表２に示した。
【００７６】これらの結果は、本発明による蛋白質抽出
物の場合カタラーゼ及びスーパーオキシドジスムターゼ
活性が極めて高いことを示している。
【００７７】
【表２】
【００７８】
【発明の効果】以上のように、本発明では、３０単位／
ｍｇ・蛋白質を超えるスーパーオキシドジスムターゼ酵
素活性ならびに好適には４５単位／ｍｇ・蛋白質を超え
るカタラーゼ酵素活性を有する可溶性メロン蛋白質抽出
物を提供することができる。
【００７９】好適には、本発明による蛋白質抽出物は、
遺伝子交差によって得られたメロン変種のパルプから得
られ、９５ＬＳ４４４株またはこの株から得られたハイ
ブリッド類の一種のように、１４日のオーダーの貯蔵期
間を有するものである。
【００８０】この可溶性メロン蛋白質抽出物は、化粧品
目的（皮膚の老化、ヘアケア）、医薬品目的（消化器系
用抗癌剤、酸化防止剤）、食品目的（合成酸化防止剤の
代用）のための用途で適用することができ、活性成分類
として、適宜精製された蛋白質抽出物を含有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 9/02 Ｃ１２Ｎ 9/02 (72)発明者 フィリップ・ロシュ フランス国、13630 エラガ、シェマー ン・デ・ラ・ガルディ（番地なし) (72)発明者 ジャン・クロード・バッコー フランス国、34080 モンペリエール、 リュ・アザラー・ダルティエ 82 (72)発明者 ドミニク・ラカン フランス国、34190 サン・ボージレ・ デ・ピュトワ、シェマーン・デ・カバル ーネ（番地なし) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 14/415 C12N 9/02 - 9/08 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (10)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 可溶性蛋白質抽出物で、それが９５ＬＳ
    ４４４細胞株又は９５ＬＳ４４４由来のハイブリッド株
    類の一種のメロンのパルプから得られること及びそれが
    ３０ U/mg・蛋白質を超えるスーパーオキサイドジスムタ
    ーゼ酵素活性を有したことを特徴とする酸化防止能を持
    つ可溶性蛋白質抽出物。
  2. 【請求項２】 ４５ U/mg・蛋白質を超えるカタラーゼ酵
    素活性を有したことを特徴とする請求項１に記載の可溶
    性蛋白質抽出物。
  3. 【請求項３】 ５０ U/mg・蛋白質を超えるスーパーオキ
    サイドジスムターゼ酵素活性を有したことを特徴とする
    請求項１又は２に記載の可溶性蛋白質抽出物。
  4. 【請求項４】 ６０ U/mg・蛋白質を超えるスーパーオキ
    サイドジスムターゼ酵素活性を有したことを特徴とする
    請求項１又は２に記載の可溶性蛋白質抽出物。
  5. 【請求項５】 水性媒体中で５から９のｐＨでメロン種
    のパルプを粉砕または加圧すること、次に該上清を回収
    することによって得られたことを特徴とする請求項１〜
    ４の何れか１項に記載の可溶性蛋白質抽出物。
  6. 【請求項６】 請求項１〜５の何れかに記載のメロン種
    のパルプが粉砕されること及び該上清を分離によって回
    収することを特徴とする可溶性メロン蛋白質抽出物調整
    方法。
  7. 【請求項７】 該分離が、遠心分離又は他のいかなるろ
    過技術によっても実施されることを特徴とする請求項６
    に記載の調整方法。
  8. 【請求項８】 請求項１〜５の何れか１項による蛋白質
    抽出物を活性成分として含有することを特徴とする外用
    局所適用薬剤又は化粧品。
  9. 【請求項９】 前記蛋白質抽出物の量が、０．０１〜５
    重量％、好適には０．０１〜１重量％のスーパーオキサ
    イドジスムターゼからなるものであることを特徴とする
    請求項８に記載の外用局所適用薬剤又は化粧品。
  10. 【請求項１０】 請求項１〜５の何れか１項による蛋白
    質抽出物を活性成分として含有することを特徴とする食
    品組成物。
JP06887495A 1994-03-03 1995-03-03 酸化防止能を持つメロン蛋白質抽出物、その調製方法、及び該抽出物を含有する化粧品、薬剤又は食品組成物 Expired - Lifetime JP3467748B2 (ja)

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