JP3442265B2 - 抗−腫瘍免疫誘導のための二−および三特異抗体 - Google Patents
抗−腫瘍免疫誘導のための二−および三特異抗体Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は人間および動物にお
ける抗−腫瘍免疫誘導のための無傷の二特異抗体の使用
に関する。
ける抗−腫瘍免疫誘導のための無傷の二特異抗体の使用
に関する。
【０００２】
【従来の技術】最近数年間で達成された化学療法および
放射療法における進歩にもかかわらず、人間の悪性疾
病、例えば末期乳癌、は依然として非常に好ましくない
予後を有する。これらの疾病は治癒することが不可能で
ある。従って、新しい処置方法を開発することが必要で
ある。これに関しては、患者の免疫系が腫瘍を拒絶しう
るような免疫療法方式に大きな期待がかかっている。腫
瘍−会合抗原が腫瘍細胞上に存在すること並びに原則的
には免疫系がこれらの抗原を認識しそして悪性細胞を攻
撃しうることは知られている。しかしながら、腫瘍は例
えば腫瘍−会合抗原の不十分な発現および／または一般
的に存在する腫瘍−特異Ｔ細胞の不十分な活性化によっ
てそれらが免疫反応を回避しうるようなある種の策略を
次第に示すようになってきた。
放射療法における進歩にもかかわらず、人間の悪性疾
病、例えば末期乳癌、は依然として非常に好ましくない
予後を有する。これらの疾病は治癒することが不可能で
ある。従って、新しい処置方法を開発することが必要で
ある。これに関しては、患者の免疫系が腫瘍を拒絶しう
るような免疫療法方式に大きな期待がかかっている。腫
瘍−会合抗原が腫瘍細胞上に存在すること並びに原則的
には免疫系がこれらの抗原を認識しそして悪性細胞を攻
撃しうることは知られている。しかしながら、腫瘍は例
えば腫瘍−会合抗原の不十分な発現および／または一般
的に存在する腫瘍−特異Ｔ細胞の不十分な活性化によっ
てそれらが免疫反応を回避しうるようなある種の策略を
次第に示すようになってきた。
【０００３】１年当たり約４３,０００件の新しい症例
では、乳癌がドイツにおける女性の癌統計で首位を占め
ている。診断時にリンパ節侵襲に罹っていた女性の１／
３未満しか再発せずに１０年間生存しない。この背景に
対して、高−投与量化学療法に関連する自己骨髄および
幹細胞移植により広範囲のリンパ節侵襲および遠隔転移
を罹っている女性患者の寿命の延長または治癒を行おう
とする試みが数年来にわたりなされている。高−投与量
化学療法に対する高い応答率にもかかわらず、転移段階
における永久的な治癒はまれにしか得られない。
では、乳癌がドイツにおける女性の癌統計で首位を占め
ている。診断時にリンパ節侵襲に罹っていた女性の１／
３未満しか再発せずに１０年間生存しない。この背景に
対して、高−投与量化学療法に関連する自己骨髄および
幹細胞移植により広範囲のリンパ節侵襲および遠隔転移
を罹っている女性患者の寿命の延長または治癒を行おう
とする試みが数年来にわたりなされている。高−投与量
化学療法に対する高い応答率にもかかわらず、転移段階
における永久的な治癒はまれにしか得られない。
【０００４】 現在までは、乳癌の処置に関する免疫療
法方式は例えばＢＣＧまたはレバミゾールを用いる処理
の如き非特異刺激方法並びにＩＬ−２と一緒のＬＡＫ細
胞およびＮＫ細胞の使用に制限されていた（１５、１
６）。使用する免疫療法のタイプによる寿命延長の証拠
はこれまではなく、ＢＣＧでの処置ではむしろ不利にな
った（１５）。細胞の非特異活性化は他の腫瘍タイプで
もほとんど成功を収めていないため、特異免疫反応を行
う試みがなされた。例えば、Ｔ細胞−再指示二特異抗体
が腫瘍療法で使用された。これらの抗体は、１つの結合
アームによりＴ細胞受容体複合体と、そして第二の結合
アームにより腫瘍細胞上の腫瘍−特異抗原と結合しう
る。生じたＴ細胞の活性化および腫瘍細胞の空間的近接
のために、後者は細胞消滅によりまたはサイトカイン
類、例えばＴＮＦ−αもしくはパーフォリン、により死
滅する。
法方式は例えばＢＣＧまたはレバミゾールを用いる処理
の如き非特異刺激方法並びにＩＬ−２と一緒のＬＡＫ細
胞およびＮＫ細胞の使用に制限されていた（１５、１
６）。使用する免疫療法のタイプによる寿命延長の証拠
はこれまではなく、ＢＣＧでの処置ではむしろ不利にな
った（１５）。細胞の非特異活性化は他の腫瘍タイプで
もほとんど成功を収めていないため、特異免疫反応を行
う試みがなされた。例えば、Ｔ細胞−再指示二特異抗体
が腫瘍療法で使用された。これらの抗体は、１つの結合
アームによりＴ細胞受容体複合体と、そして第二の結合
アームにより腫瘍細胞上の腫瘍−特異抗原と結合しう
る。生じたＴ細胞の活性化および腫瘍細胞の空間的近接
のために、後者は細胞消滅によりまたはサイトカイン
類、例えばＴＮＦ−αもしくはパーフォリン、により死
滅する。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題および課題を解決するた
めの手段】本発明の目的は人間における悪性疾病の治療
のための新規な医薬を提供することである。
めの手段】本発明の目的は人間における悪性疾病の治療
のための新規な医薬を提供することである。
【０００６】本発明によると、この目的は請求項１にさ
らに詳細に特定されている特徴により達成される。本発
明の好適な態様は従属請求項から明らかである。それ
故、本発明は人間または動物に有効量の下記の性質およ
び効果、すなわち（ａ）それが第一の活性化信号を仲介
するＴ細胞への結合、（ｂ）腫瘍細胞上の腫瘍−会合抗
原への結合、（ｃ）そのＦｃ部分（二特異抗体の場合）
または第三特異性（三特異抗体の場合）によるＦｃ受容
体−陽性細胞のＦｃ受容体への結合、（ｄ）Ｆｃ受容体
−陽性細胞に結合しそしてそれによりサイトカイン類お
よび／または共−刺激抗原の発現を開始または増加させ
ることによるＦｃ受容体−陽性細胞の活性化、（ｅ）活
性化標識の上方−調節、腫瘍細胞の死滅、および／また
はＴ細胞増殖により示されるようなＴ細胞の生理的活性
化用に必要な少なくとも第二の活性化信号の共−刺激抗
原および／またはサイトカイン類によるＴ細胞への伝達
を有する無傷の二特異または三特異抗体またはその組み
合わせを投与することによる抗−腫瘍免疫の誘導医薬を
開示する。
らに詳細に特定されている特徴により達成される。本発
明の好適な態様は従属請求項から明らかである。それ
故、本発明は人間または動物に有効量の下記の性質およ
び効果、すなわち（ａ）それが第一の活性化信号を仲介
するＴ細胞への結合、（ｂ）腫瘍細胞上の腫瘍−会合抗
原への結合、（ｃ）そのＦｃ部分（二特異抗体の場合）
または第三特異性（三特異抗体の場合）によるＦｃ受容
体−陽性細胞のＦｃ受容体への結合、（ｄ）Ｆｃ受容体
−陽性細胞に結合しそしてそれによりサイトカイン類お
よび／または共−刺激抗原の発現を開始または増加させ
ることによるＦｃ受容体−陽性細胞の活性化、（ｅ）活
性化標識の上方−調節、腫瘍細胞の死滅、および／また
はＴ細胞増殖により示されるようなＴ細胞の生理的活性
化用に必要な少なくとも第二の活性化信号の共−刺激抗
原および／またはサイトカイン類によるＴ細胞への伝達
を有する無傷の二特異または三特異抗体またはその組み
合わせを投与することによる抗−腫瘍免疫の誘導医薬を
開示する。
【０００７】好適には、本発明の医薬で使用される抗体
は（ｅ）に記載されている二特異または三特異抗体との
結合でそれらのＴ細胞受容体を介してＭＨＣ種Ｉおよび
／または種IIにより腫瘍細胞上に表れる腫瘍−特異ペプ
チドを認識する腫瘍−特異Ｔ細胞を活性化しうる。さら
に、本発明に従い使用される抗体はアネルギー状態にあ
る腫瘍−特異Ｔ細胞を再活性化しうる。さらに、それら
は腫瘍−反応性補体−結合抗体を誘導しそしてそれによ
り体液性免疫反応を誘導しうる。
は（ｅ）に記載されている二特異または三特異抗体との
結合でそれらのＴ細胞受容体を介してＭＨＣ種Ｉおよび
／または種IIにより腫瘍細胞上に表れる腫瘍−特異ペプ
チドを認識する腫瘍−特異Ｔ細胞を活性化しうる。さら
に、本発明に従い使用される抗体はアネルギー状態にあ
る腫瘍−特異Ｔ細胞を再活性化しうる。さらに、それら
は腫瘍−反応性補体−結合抗体を誘導しそしてそれによ
り体液性免疫反応を誘導しうる。
【０００８】Ｔ細胞への結合はＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ
５、ＣＤ２８、および／またはＣＤ４４を介して行われ
る。Ｆｃ受容体−陽性細胞は少なくとも１つのＦｃγ受
容体Ｉ、II、またはIIIを有する。本発明に従い使用さ
れる抗体はＦｃγ受容体Ｉ−陽性細胞である単球、マク
ロファージおよび／または樹枝状細胞と結合しうる。
５、ＣＤ２８、および／またはＣＤ４４を介して行われ
る。Ｆｃ受容体−陽性細胞は少なくとも１つのＦｃγ受
容体Ｉ、II、またはIIIを有する。本発明に従い使用さ
れる抗体はＦｃγ受容体Ｉ−陽性細胞である単球、マク
ロファージおよび／または樹枝状細胞と結合しうる。
【０００９】本発明に従い使用される抗体は、Ｆｃ受容
体−陽性細胞により共−刺激抗原であるＣＤ４０、ＣＤ
８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ−１、および／もしくはＬＦ
Ａ−３の発現並びに／またはサイトカイン類の分泌の開
始または増加をもたらす。好適には、サイトカイン類は
ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、
ＩＬ−１２、および／またはＴＮＦ−αである。好適に
は、Ｔ細胞への結合はＴ細胞のＴ細胞受容体複合体を介
して起きる。
体−陽性細胞により共−刺激抗原であるＣＤ４０、ＣＤ
８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ−１、および／もしくはＬＦ
Ａ−３の発現並びに／またはサイトカイン類の分泌の開
始または増加をもたらす。好適には、サイトカイン類は
ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、
ＩＬ−１２、および／またはＴＮＦ−αである。好適に
は、Ｔ細胞への結合はＴ細胞のＴ細胞受容体複合体を介
して起きる。
【００１０】本発明で使用される二特異抗体は好適には
抗−ＣＤ３ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または
抗−ＣＤ２ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または
抗−ＣＤ５ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または
抗−ＣＤ２８ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／また
は抗−ＣＤ４４ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体である。
抗−ＣＤ３ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または
抗−ＣＤ２ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または
抗−ＣＤ５ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または
抗−ＣＤ２８ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／また
は抗−ＣＤ４４ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体である。
【００１１】本発明に従い使用される三特異抗体は好適
には追加の抗−Ｆｃ受容体結合アームを有する抗−ＣＤ
３ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−ＣＤ
２Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−ＣＤ
５ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−ＣＤ
２８ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−Ｃ
Ｄ４４ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体である。
には追加の抗−Ｆｃ受容体結合アームを有する抗−ＣＤ
３ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−ＣＤ
２Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−ＣＤ
５ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−ＣＤ
２８ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体および／または抗−Ｃ
Ｄ４４ Ｘ 抗−腫瘍−会合抗原抗体である。
【００１２】特徴（ａ）に関すると、第一の信号は例え
ばＴ細胞のＴ細胞受容体複合体を介して形質導入され、
そしてその結果として非生理的Ｔ細胞活性化をそれ自身
で生ずる。これにより、細胞はアネルギー化されそして
Ｔ細胞受容体−仲介刺激と反応しえない。さらに、第二
の活性化信号は同時に本発明の二特異または三特異抗体
によりＦｃ受容体−陽性細胞上の共−刺激抗原を介して
Ｔ細胞に形質導入され、それがＴ細胞の生理的活性化を
生じそして引き続き腫瘍細胞の死滅および／またはＴ細
胞の増殖をもたらす。Ｔ細胞活性化に関する別の基準と
して、例えばＣＤ２、ＣＤ２５、および／もしくはＣＤ
２８の如き細胞表面抗原の上方−調節、並びに／または
例えばＩＬ−２の如きサイトカイン類の分泌を使用して
もよい。それ故、本発明により記載されたｂｓＡｂの使
用によりＴ細胞は活性化されそして腫瘍細胞に対して再
標的化される。一般的には、Ｔ細胞の非特異活性化の使
用は免疫療法においてほとんど成功を収めていなかっ
た。
ばＴ細胞のＴ細胞受容体複合体を介して形質導入され、
そしてその結果として非生理的Ｔ細胞活性化をそれ自身
で生ずる。これにより、細胞はアネルギー化されそして
Ｔ細胞受容体−仲介刺激と反応しえない。さらに、第二
の活性化信号は同時に本発明の二特異または三特異抗体
によりＦｃ受容体−陽性細胞上の共−刺激抗原を介して
Ｔ細胞に形質導入され、それがＴ細胞の生理的活性化を
生じそして引き続き腫瘍細胞の死滅および／またはＴ細
胞の増殖をもたらす。Ｔ細胞活性化に関する別の基準と
して、例えばＣＤ２、ＣＤ２５、および／もしくはＣＤ
２８の如き細胞表面抗原の上方−調節、並びに／または
例えばＩＬ−２の如きサイトカイン類の分泌を使用して
もよい。それ故、本発明により記載されたｂｓＡｂの使
用によりＴ細胞は活性化されそして腫瘍細胞に対して再
標的化される。一般的には、Ｔ細胞の非特異活性化の使
用は免疫療法においてほとんど成功を収めていなかっ
た。
【００１３】好適な抗体は下記のイソタイプの組み合わ
せの１種もしくはそれ以上から選択される異種二特異抗
体である： ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−ＩｇＧ２ａ、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−ＩｇＧ２ｂ、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−ＩｇＧ３； ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ１、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ２、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ３［オリエンタルア
ロタイプＧ３ｍ（ｓｔ）＝蛋白質Ａへの結合］、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ４； ラット−ＩｇＧ２ｂ／ラット−ＩｇＧ２ｃ； マウス−ＩｇＧ２ａ／ヒト−ＩｇＧ３［コーカサスアロ
タイプＧ３ｍ（ｂ＋ｇ）＝蛋白質Ａへの結合なし、以下
では＊として示される］ マウス−ＩｇＧ２ａ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ａ／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ａ／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−Ｃ
Ｌ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−
[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１
／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ
１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ４
／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ
４−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２のＮ−末端部]−
ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：＞ａａ位置２
５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３]ラット -IgG2b/マウス-[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−Ｉ
ｇＧ２−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３] ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ３−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３、オ
リエンタルアロタイプ] ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ４−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ
２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ２[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ２[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[Ｃ
Ｈ２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[Ｃ
Ｈ２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ２／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ２−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ
２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ４／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ４−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ
２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ４／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ４−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２の
Ｎ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：＞
ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ｂ／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−Ｃ
Ｌ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−
[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３]。
せの１種もしくはそれ以上から選択される異種二特異抗
体である： ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−ＩｇＧ２ａ、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−ＩｇＧ２ｂ、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−ＩｇＧ３； ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ１、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ２、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ３［オリエンタルア
ロタイプＧ３ｍ（ｓｔ）＝蛋白質Ａへの結合］、 ラット−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−ＩｇＧ４； ラット−ＩｇＧ２ｂ／ラット−ＩｇＧ２ｃ； マウス−ＩｇＧ２ａ／ヒト−ＩｇＧ３［コーカサスアロ
タイプＧ３ｍ（ｂ＋ｇ）＝蛋白質Ａへの結合なし、以下
では＊として示される］ マウス−ＩｇＧ２ａ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ａ／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ａ／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−Ｃ
Ｌ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−
[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１
／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ
１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ４
／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ
４−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２のＮ−末端部]−
ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：＞ａａ位置２
５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３]ラット -IgG2b/マウス-[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−ヒト−Ｉ
ｇＧ２−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３] ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ３−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３、オ
リエンタルアロタイプ] ラット−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ４−[ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ
２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ２[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ２[ＣＨ２
のＮ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：
＞ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[Ｃ
Ｈ２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ１／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]
−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[Ｃ
Ｈ２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ２／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ２−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ
２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ４／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ４−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−[ＣＨ
２−ＣＨ３] ヒト−ＩｇＧ４／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−ＣＬ]−
ヒト−ＩｇＧ４−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ４[ＣＨ２の
Ｎ末端部]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ２のＣ−末端部：＞
ａａ位置２５１]−ヒト−ＩｇＧ３＊[ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ｂ／ラット−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ｂ／ヒト−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−Ｃ
Ｌ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊−
[ＣＨ２−ＣＨ３] マウス−ＩｇＧ２ｂ／マウス−[ＶＨ−ＣＨ１、ＶＬ−
ＣＬ]−ヒト−ＩｇＧ１−[ヒンジ]−ヒト−ＩｇＧ３＊
−[ＣＨ２−ＣＨ３]。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明を添付図面によりさらに詳
細に説明する。本発明の目的は腫瘍細胞に対して有効な
Ｔ細胞応答を高めることにより抗−腫瘍免疫誘導をそし
て特に長期にわたる抗−腫瘍免疫誘導を目指している。
この目的は無傷の二特異抗体（ｂｓＡｂ）による腫瘍細
胞に対するＴ細胞の再指定および同時に起きるｂｓＡｂ
のＦｃ部分へのＦｃ受容体−陽性細胞の結合により達成
された。これに関すると、Ｆｃ受容体への固定された無
傷のｂｓＡｂの（それぞれＴ細胞または腫瘍細胞におけ
る）結合によりＦｃ受容体−陽性細胞が活性化されるこ
とに注目することが重要である。本発明による「長期に
わたる抗−腫瘍免疫」とは少なくとも５、６年間にわた
る時間の期間であることを意味する。
細に説明する。本発明の目的は腫瘍細胞に対して有効な
Ｔ細胞応答を高めることにより抗−腫瘍免疫誘導をそし
て特に長期にわたる抗−腫瘍免疫誘導を目指している。
この目的は無傷の二特異抗体（ｂｓＡｂ）による腫瘍細
胞に対するＴ細胞の再指定および同時に起きるｂｓＡｂ
のＦｃ部分へのＦｃ受容体−陽性細胞の結合により達成
された。これに関すると、Ｆｃ受容体への固定された無
傷のｂｓＡｂの（それぞれＴ細胞または腫瘍細胞におけ
る）結合によりＦｃ受容体−陽性細胞が活性化されるこ
とに注目することが重要である。本発明による「長期に
わたる抗−腫瘍免疫」とは少なくとも５、６年間にわた
る時間の期間であることを意味する。
【００１５】本発明の方法で記載されている二特異およ
び三特異抗体は特に請求項に記載されている特徴により
同定されそして好適にはもちろん請求項１に記載されて
いる特徴（ａ）−（ｅ）により同定される。それ故、こ
れらの抗体は抗−腫瘍免疫、好適には特に請求項１の項
目（ａ）−（ｅ）に記載されている特徴により引き起こ
されるであろう人間および動物における長期にわたる抗
−腫瘍免疫、の誘導のために使用できる。
び三特異抗体は特に請求項に記載されている特徴により
同定されそして好適にはもちろん請求項１に記載されて
いる特徴（ａ）−（ｅ）により同定される。それ故、こ
れらの抗体は抗−腫瘍免疫、好適には特に請求項１の項
目（ａ）−（ｅ）に記載されている特徴により引き起こ
されるであろう人間および動物における長期にわたる抗
−腫瘍免疫、の誘導のために使用できる。
【００１６】好適には、それぞれｂｓＡｂの個別の副種
もしくは副種の組み合わせが、または三特異抗体の場合
にはＦｃ受容体を認識する結合アームがｂｓＡｂによる
Ｆｃ受容体−陽性細胞の活性化用に使用される。例え
ば、試験管内実験はマウス−ＩｇＧ２ａ／ラット−Ｉｇ
Ｇ２ｂ副種組み合わせのｂｓＡｂはＦｃ受容体−陽性細
胞に結合しそして同時に活性化してそれぞれ例えばこれ
らの細胞の表面上のＣＤ４０、ＣＤ８０、またはＣＤ８
６の如き共−刺激抗原の上方−調節または新規な生成
（発現）をもたらしうるが、マウス−ＩｇＧ１／ラット
−ＩｇＧ２ｂ副種組み合わせのｂｓＡｂはＦｃ受容体−
陽性細胞と結合しうる（Haagen et al., Interaction o
f human monocyte Fcγ receptors with rat IgG2b, J.
Immunology,1995, 154:1852-1860）がこれらの細胞を
匹敵する程度に明らかに活性化しえない（Gast G.C., H
aagen I.-A., van Houten A.A., Klein S., Duits A.
J., de Weger R.A., Vroom T.M., Clark M.R., J. Phil
lips, van Dijk A.J.G., de LauW.B.M., Bast B.J.E.G.
CD8 T-cell activation after intravenous administr
ation of CD3xCD19 bispecific antibody in patients
with non-Hodgkin lymphoma. Cancer Immunol. Immunot
her. 40: 390, 1995）ことを示していた。
もしくは副種の組み合わせが、または三特異抗体の場合
にはＦｃ受容体を認識する結合アームがｂｓＡｂによる
Ｆｃ受容体−陽性細胞の活性化用に使用される。例え
ば、試験管内実験はマウス−ＩｇＧ２ａ／ラット−Ｉｇ
Ｇ２ｂ副種組み合わせのｂｓＡｂはＦｃ受容体−陽性細
胞に結合しそして同時に活性化してそれぞれ例えばこれ
らの細胞の表面上のＣＤ４０、ＣＤ８０、またはＣＤ８
６の如き共−刺激抗原の上方−調節または新規な生成
（発現）をもたらしうるが、マウス−ＩｇＧ１／ラット
−ＩｇＧ２ｂ副種組み合わせのｂｓＡｂはＦｃ受容体−
陽性細胞と結合しうる（Haagen et al., Interaction o
f human monocyte Fcγ receptors with rat IgG2b, J.
Immunology,1995, 154:1852-1860）がこれらの細胞を
匹敵する程度に明らかに活性化しえない（Gast G.C., H
aagen I.-A., van Houten A.A., Klein S., Duits A.
J., de Weger R.A., Vroom T.M., Clark M.R., J. Phil
lips, van Dijk A.J.G., de LauW.B.M., Bast B.J.E.G.
CD8 T-cell activation after intravenous administr
ation of CD3xCD19 bispecific antibody in patients
with non-Hodgkin lymphoma. Cancer Immunol. Immunot
her. 40: 390, 1995）ことを示していた。
【００１７】無傷のｂｓＡｂはＴ細胞に１つの結合アー
ム（例えばＣＤ３またはＣＤ２）で結合しそしてそれを
同時に活性化するが、ｂｓＡｂのＦｃ部分と結合したＦ
ｃ受容体−陽性細胞からの共−刺激信号はＴ細胞に伝達
されうる。このことは、ｂｓＡｂの１つの結合アームを
介するＴ細胞活性化とＦｃ受容体−陽性細胞からＴ細胞
への共−刺激信号の同時仲介の組み合わせだけが有効な
Ｔ細胞活性化をもたらすことを意味する（図１Ａ）。
ム（例えばＣＤ３またはＣＤ２）で結合しそしてそれを
同時に活性化するが、ｂｓＡｂのＦｃ部分と結合したＦ
ｃ受容体−陽性細胞からの共−刺激信号はＴ細胞に伝達
されうる。このことは、ｂｓＡｂの１つの結合アームを
介するＴ細胞活性化とＦｃ受容体−陽性細胞からＴ細胞
への共−刺激信号の同時仲介の組み合わせだけが有効な
Ｔ細胞活性化をもたらすことを意味する（図１Ａ）。
【００１８】 また、腫瘍細胞部位において不十分に活
性化されそしてその結果としてアネルギー状態のままで
ある腫瘍−特異Ｔ細胞を上記の本発明の原則により再活
性化してもよい（図１Ｂ）。それ故、驚くべきことに無
傷のＴ細胞−再指定ｂｓＡｂの本発明の使用により長期
にわたる抗−腫瘍免疫を本発明により誘導することがで
きた。これは１）例えばＴ細胞受容体複合体を介するＴ
細胞に対するｂｓＡｂの結合、および２）ｂｓＡｂのＦ
ｃ部分に結合するＦｃＲ＋細胞による共−刺激信号の同
時伝達による腫瘍−再標的化Ｔ細胞の生理的活性化に基
づいている。それ故、抗−腫瘍免疫の効果的な誘導のた
めの重要な予備条件はこの現象によりそれら自身活性化
されるＦｃＲ＋細胞に結合することができそしてそれに
よりＴ細胞に対する共−刺激信号を仲介することができ
るＦｃ部分を有するｂｓＡｂ類の使用である。
性化されそしてその結果としてアネルギー状態のままで
ある腫瘍−特異Ｔ細胞を上記の本発明の原則により再活
性化してもよい（図１Ｂ）。それ故、驚くべきことに無
傷のＴ細胞−再指定ｂｓＡｂの本発明の使用により長期
にわたる抗−腫瘍免疫を本発明により誘導することがで
きた。これは１）例えばＴ細胞受容体複合体を介するＴ
細胞に対するｂｓＡｂの結合、および２）ｂｓＡｂのＦ
ｃ部分に結合するＦｃＲ＋細胞による共−刺激信号の同
時伝達による腫瘍−再標的化Ｔ細胞の生理的活性化に基
づいている。それ故、抗−腫瘍免疫の効果的な誘導のた
めの重要な予備条件はこの現象によりそれら自身活性化
されるＦｃＲ＋細胞に結合することができそしてそれに
よりＴ細胞に対する共−刺激信号を仲介することができ
るＦｃ部分を有するｂｓＡｂ類の使用である。
【００１９】この機構のために、腫瘍−特異アネルギー
Ｔ細胞（腫瘍細胞上のＭＨＣ分子と会合する腫瘍−特異
ペプチド類を認識するＴ細胞受容体［ＴＣＲ］を有す
る）は腫瘍細胞部位において再活性化可能でありそして
それにより腫瘍耐性を逆転させることができる。
Ｔ細胞（腫瘍細胞上のＭＨＣ分子と会合する腫瘍−特異
ペプチド類を認識するＴ細胞受容体［ＴＣＲ］を有す
る）は腫瘍細胞部位において再活性化可能でありそして
それにより腫瘍耐性を逆転させることができる。
【００２０】腫瘍−特異Ｔ細胞はそれらのＴＣＲを介す
ることによってｂｓＡｂがその抗−腫瘍結合アームを介
してよりも異なるペプチド類／蛋白質類を完全に認識す
ることができるため、最初にｂｓＡｂにより認識されな
かったｂｓＡｂによるＴ細胞の活性化後に追加の腫瘍細
胞を認識しそして死滅させることができる。このこと
は、使用されるｂｓＡｂが腫瘍細胞の全てを認識してそ
の後に全ての腫瘍細胞を含む抗−腫瘍免疫を誘導するこ
とは必ずしも必要ないことを意味する。この知識から引
き出される別の結論は、本発明の抗−腫瘍免疫を得るた
めには相対的に少量（１００μｇ−５ｍｇ／患者）の無
傷のｂｓＡｂで十分であることである。そのような抗−
腫瘍免疫の誘導はある程度の時間がかかるため、患者は
治療開始時に少量の残存腫瘍細胞を有する最少残余疾病
（ＭＲＤ）状態でなければならない。ＭＲＤは、例えば
原発性腫瘍の除去のための手術手段の如き適当な方法を
使用する比較的大きい腫瘍部分の減少後の期間であり且
つその間には検出されないかもしれないがある時間後に
再発の恐れのある残存腫瘍細胞が依然として存在するよ
うな時間の期間を意味する。
ることによってｂｓＡｂがその抗−腫瘍結合アームを介
してよりも異なるペプチド類／蛋白質類を完全に認識す
ることができるため、最初にｂｓＡｂにより認識されな
かったｂｓＡｂによるＴ細胞の活性化後に追加の腫瘍細
胞を認識しそして死滅させることができる。このこと
は、使用されるｂｓＡｂが腫瘍細胞の全てを認識してそ
の後に全ての腫瘍細胞を含む抗−腫瘍免疫を誘導するこ
とは必ずしも必要ないことを意味する。この知識から引
き出される別の結論は、本発明の抗−腫瘍免疫を得るた
めには相対的に少量（１００μｇ−５ｍｇ／患者）の無
傷のｂｓＡｂで十分であることである。そのような抗−
腫瘍免疫の誘導はある程度の時間がかかるため、患者は
治療開始時に少量の残存腫瘍細胞を有する最少残余疾病
（ＭＲＤ）状態でなければならない。ＭＲＤは、例えば
原発性腫瘍の除去のための手術手段の如き適当な方法を
使用する比較的大きい腫瘍部分の減少後の期間であり且
つその間には検出されないかもしれないがある時間後に
再発の恐れのある残存腫瘍細胞が依然として存在するよ
うな時間の期間を意味する。
【００２１】これはここに記載したタイプの療法に関し
て下記の利点を有する： −腫瘍細胞の数そしてその結果としていわゆる「エスケ
ープ突然変異体」、すなわち例えばもはや免疫系により
認識される腫瘍−特異ペプチドを表示しない腫瘍変異
体、の出現の可能性が大きく減じられる。 −「免疫化」が起きた後に非常に急速に成長し且つ攻撃
的な腫瘍変異体が多かれ少なかれ免疫系を蔓延する傾向
が少ない。
て下記の利点を有する： −腫瘍細胞の数そしてその結果としていわゆる「エスケ
ープ突然変異体」、すなわち例えばもはや免疫系により
認識される腫瘍−特異ペプチドを表示しない腫瘍変異
体、の出現の可能性が大きく減じられる。 −「免疫化」が起きた後に非常に急速に成長し且つ攻撃
的な腫瘍変異体が多かれ少なかれ免疫系を蔓延する傾向
が少ない。
【００２２】ｂｓＡｂを用いる従来の癌療法と比べて主
な差は以下の通りである： １.比較的少ない抗体の投与量（５μｇ−１０ｍｇ、好
適には１０μｇ−１００μｇ、さらに１００μｇ−５ｍ
ｇ／患者）、および ２.疾病期（好適にはＭＲＤ状態にある）に関するｂｓ
Ａｂの投与時期、このタイプの療法は例えば原発性腫瘍
の除去後に腫瘍細胞が再び検出可能となるまで待たず
に、その代わりに無傷のｂｓＡｂの投与により患者の癌
細胞に対するある種の患者の予防免疫化が行われる、 ３.そのような投与される少量の無傷のｂｓＡｂでは大
きな利点、すなわち治癒することができない転移のない
こと、を制してしまうような大きな副作用は予期されな
いためこれは可能である、 ４.腫瘍細胞を死滅させうる補体−固定抗体（人間にお
けるイソタイプ類ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ
３）に伴われる体液性免疫反応の誘導。
な差は以下の通りである： １.比較的少ない抗体の投与量（５μｇ−１０ｍｇ、好
適には１０μｇ−１００μｇ、さらに１００μｇ−５ｍ
ｇ／患者）、および ２.疾病期（好適にはＭＲＤ状態にある）に関するｂｓ
Ａｂの投与時期、このタイプの療法は例えば原発性腫瘍
の除去後に腫瘍細胞が再び検出可能となるまで待たず
に、その代わりに無傷のｂｓＡｂの投与により患者の癌
細胞に対するある種の患者の予防免疫化が行われる、 ３.そのような投与される少量の無傷のｂｓＡｂでは大
きな利点、すなわち治癒することができない転移のない
こと、を制してしまうような大きな副作用は予期されな
いためこれは可能である、 ４.腫瘍細胞を死滅させうる補体−固定抗体（人間にお
けるイソタイプ類ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ
３）に伴われる体液性免疫反応の誘導。
【００２３】好適には、本発明に従う抗体は例えばＦ
ｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ(ａｂ)2断片を有する
モノクローン、キメラ、組み換え体、合成、半−合成、
または化学的に改質された無傷の抗体である。
ｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ(ａｂ)2断片を有する
モノクローン、キメラ、組み換え体、合成、半−合成、
または化学的に改質された無傷の抗体である。
【００２４】 本発明の医薬で使用される抗体を生体内
療法で使用する場合には、好適には人間源の抗体または
誘導体または断片を使用するかまたは抗体は人間におけ
る使用に適合するように改質する（いわゆる「人間化さ
れた抗体」）（例えば Shalaby et al., J. Exp. Med.
175 (1992), 217; Mocikat et al.,Transplantation 57
(1994), 405 参照）。上記の異なるタイプの抗体およ
び抗体断片の製造は当技術の専門家には自明である。好
適には哺乳動物源の、例えば人間、ラット、マウス、
兎、または山羊の、モノクローン抗体の製造は例えば K
ohler und Milstein (Nature 256 (1975),495)、Harlow
und Lane (Antibodies, A Laboratory Manual (1988),
Cold Spring Harbor) または Galfre (Meth. Enzymol.
73 (1981), 3) に記載されているもののような一般的
な方法を使用して行うことができる。専門技術者に自明
の技術に従う組み換え体ＤＮＡ技術により上記の抗体を
生成することも可能である（Kurucz et al., J. Immuno
l. 154 (1995), 4576; Hollinger et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 90 (1993), 6444 参照）。
療法で使用する場合には、好適には人間源の抗体または
誘導体または断片を使用するかまたは抗体は人間におけ
る使用に適合するように改質する（いわゆる「人間化さ
れた抗体」）（例えば Shalaby et al., J. Exp. Med.
175 (1992), 217; Mocikat et al.,Transplantation 57
(1994), 405 参照）。上記の異なるタイプの抗体およ
び抗体断片の製造は当技術の専門家には自明である。好
適には哺乳動物源の、例えば人間、ラット、マウス、
兎、または山羊の、モノクローン抗体の製造は例えば K
ohler und Milstein (Nature 256 (1975),495)、Harlow
und Lane (Antibodies, A Laboratory Manual (1988),
Cold Spring Harbor) または Galfre (Meth. Enzymol.
73 (1981), 3) に記載されているもののような一般的
な方法を使用して行うことができる。専門技術者に自明
の技術に従う組み換え体ＤＮＡ技術により上記の抗体を
生成することも可能である（Kurucz et al., J. Immuno
l. 154 (1995), 4576; Hollinger et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 90 (1993), 6444 参照）。
【００２５】２つの異なる特異性を有する抗体、すなわ
ちいわゆる二特異抗体、の製造は例えば組み換え体ＤＮ
Ａ技術を使用して行うことができるがいわゆるハイブリ
ッドハイブリドーマ融合技術（例えば Milstein et a
l., Nature 305 (1983), 537参照）により行うこともで
きる。この技術は所望する特異性の１つを有する抗体を
生成する各々がハイブリドーマ細胞系を融合しそして両
方の特異性を有する抗体を生成する組み換え体細胞系を
同定しそして単離することからなっている。二特異また
は三特異抗体が請求項１に同定されている性質および効
果を示すなら、本発明の基礎をなす問題をこれらの抗体
を使用して克服することができる。以下で、それぞれ２
つおよび３つの特異性を示す抗体の製造をさらに詳細に
記載する。そのような二特異性および三特異性抗体を与
えることは先行技術から既知であり、そしてそのような
製造方法を記載している参考文献はここでは引用するこ
とにより本発明の内容となる。
ちいわゆる二特異抗体、の製造は例えば組み換え体ＤＮ
Ａ技術を使用して行うことができるがいわゆるハイブリ
ッドハイブリドーマ融合技術（例えば Milstein et a
l., Nature 305 (1983), 537参照）により行うこともで
きる。この技術は所望する特異性の１つを有する抗体を
生成する各々がハイブリドーマ細胞系を融合しそして両
方の特異性を有する抗体を生成する組み換え体細胞系を
同定しそして単離することからなっている。二特異また
は三特異抗体が請求項１に同定されている性質および効
果を示すなら、本発明の基礎をなす問題をこれらの抗体
を使用して克服することができる。以下で、それぞれ２
つおよび３つの特異性を示す抗体の製造をさらに詳細に
記載する。そのような二特異性および三特異性抗体を与
えることは先行技術から既知であり、そしてそのような
製造方法を記載している参考文献はここでは引用するこ
とにより本発明の内容となる。
【００２６】本発明の基本的問題を解決するために適す
る３つの特異性を示す抗体、いわゆる三特異抗体、の製
造は例えば「単一鎖可変断片」（ｓｃＦｖ）の形態であ
る追加の特異性を有する第三の抗原結合部位を二特異抗
体のＩｇＧ重鎖の１つと結合させることにより例えば行
うことができる。ｓｃＦｖを例えば Ｓ−Ｓ(Ｇ4Ｓ)nＤ−Ｉ−リンカー （Ｓ＝セリン、Ｇ＝グリシン、Ｄ＝アスパルテート、Ｉ
＝イソロイシン）を使用して重鎖の１つと結合させるこ
とができる。同様に、三特異Ｆ(ａｂ)2構造は二特異抗
体の１つの特異性の重鎖のＣＨ２−ＣＨ３部分を第三の
特異性を有するｓｃＦｖにより置換することにより製造
することができるが、他の特異性を有する重鎖のＣＨ２
−ＣＨ３部分は例えば停止コドン（「ヒンジ」部分の終
点）のコード付け遺伝子中への挿入により、例えば同種
組み換えにより（図４参照）、除去することができる。
３つの異なる特異性を表示する３つのＶＨ−ＶＬ部分が
連続して配置されている三特異ｓｃＦｖ構造を製造する
こともできる（図５）。
る３つの特異性を示す抗体、いわゆる三特異抗体、の製
造は例えば「単一鎖可変断片」（ｓｃＦｖ）の形態であ
る追加の特異性を有する第三の抗原結合部位を二特異抗
体のＩｇＧ重鎖の１つと結合させることにより例えば行
うことができる。ｓｃＦｖを例えば Ｓ−Ｓ(Ｇ4Ｓ)nＤ−Ｉ−リンカー （Ｓ＝セリン、Ｇ＝グリシン、Ｄ＝アスパルテート、Ｉ
＝イソロイシン）を使用して重鎖の１つと結合させるこ
とができる。同様に、三特異Ｆ(ａｂ)2構造は二特異抗
体の１つの特異性の重鎖のＣＨ２−ＣＨ３部分を第三の
特異性を有するｓｃＦｖにより置換することにより製造
することができるが、他の特異性を有する重鎖のＣＨ２
−ＣＨ３部分は例えば停止コドン（「ヒンジ」部分の終
点）のコード付け遺伝子中への挿入により、例えば同種
組み換えにより（図４参照）、除去することができる。
３つの異なる特異性を表示する３つのＶＨ−ＶＬ部分が
連続して配置されている三特異ｓｃＦｖ構造を製造する
こともできる（図５）。
【００２７】 本発明によると、例えば無傷の二特異抗
体が使用される。無傷の二特異抗体は各々が特異性を表
示する２つの抗体半−分子（各々がＨおよびＬ免疫グロ
ブリン鎖を有する）並びにさらに既知のエフェクター機
能を果すＦｃ部分を有する更なる同様な正常抗体からな
っている。それらは好適にはグアドローマ技術を用いて
製造される。この製造方法はＤＥ−Ａ−４４ １９ ３９
９に例示されている。完全な開示のためにこの文献全体
は二特異抗体の定義に関して引用することにより本発明
の内容となる。他の製造方法もそれらが本発明に従い要
求される上記の定義に従う無傷の二特異抗体を生ずる限
り有用であることは理解すべきである。例えば、無傷の
二特異抗体を新たに開発された製造方法（１）を用いて
十分な量で製造することができる。乳癌細胞上の２つの
異なる腫瘍−会合抗原（例えばｃ−ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｐ
−ｃａｍ、例えばＧＡ−７３３−２＝Ｃ２１５）に対し
て指定された２つの二特異抗体の組み合わせが抗原の１
つだけを表示する腫瘍細胞が未同定である危険性を最少
にする。
体が使用される。無傷の二特異抗体は各々が特異性を表
示する２つの抗体半−分子（各々がＨおよびＬ免疫グロ
ブリン鎖を有する）並びにさらに既知のエフェクター機
能を果すＦｃ部分を有する更なる同様な正常抗体からな
っている。それらは好適にはグアドローマ技術を用いて
製造される。この製造方法はＤＥ−Ａ−４４ １９ ３９
９に例示されている。完全な開示のためにこの文献全体
は二特異抗体の定義に関して引用することにより本発明
の内容となる。他の製造方法もそれらが本発明に従い要
求される上記の定義に従う無傷の二特異抗体を生ずる限
り有用であることは理解すべきである。例えば、無傷の
二特異抗体を新たに開発された製造方法（１）を用いて
十分な量で製造することができる。乳癌細胞上の２つの
異なる腫瘍−会合抗原（例えばｃ−ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｐ
−ｃａｍ、例えばＧＡ−７３３−２＝Ｃ２１５）に対し
て指定された２つの二特異抗体の組み合わせが抗原の１
つだけを表示する腫瘍細胞が未同定である危険性を最少
にする。
【００２８】二特異抗体は１つの結合アームでＴ細胞上
のＴ細胞受容体複合体とそして第二の結合アームで腫瘍
細胞上の腫瘍−会合抗原と結合することができる。それ
により、Ｔ細胞は活性化され、それがサイトカイン類の
放出によりまたは細胞消滅−仲介機構により腫瘍細胞を
死滅させる。さらに、Ｔ細胞が腫瘍−特異抗原をそれら
の受容体により二特異抗体による活性化中に認識しそし
てそれにより長期にわたる免疫化が開始される可能性も
ある（図１Ｂ）。これに関して特に重要なものは例えば
単球／マクロファージ／樹枝状細胞の如き補助細胞への
結合を仲介してこれらの細胞に細胞毒性を生成させ、お
よび／または重要な共−刺激信号をＴ細胞に同時に伝達
する二特異抗体の無傷のＦｃ部分である（図１）。この
方法で、今までに知られていない腫瘍−特異ペプチド類
に対してＴ細胞反応も誘導されるかもしれない。
のＴ細胞受容体複合体とそして第二の結合アームで腫瘍
細胞上の腫瘍−会合抗原と結合することができる。それ
により、Ｔ細胞は活性化され、それがサイトカイン類の
放出によりまたは細胞消滅−仲介機構により腫瘍細胞を
死滅させる。さらに、Ｔ細胞が腫瘍−特異抗原をそれら
の受容体により二特異抗体による活性化中に認識しそし
てそれにより長期にわたる免疫化が開始される可能性も
ある（図１Ｂ）。これに関して特に重要なものは例えば
単球／マクロファージ／樹枝状細胞の如き補助細胞への
結合を仲介してこれらの細胞に細胞毒性を生成させ、お
よび／または重要な共−刺激信号をＴ細胞に同時に伝達
する二特異抗体の無傷のＦｃ部分である（図１）。この
方法で、今までに知られていない腫瘍−特異ペプチド類
に対してＴ細胞反応も誘導されるかもしれない。
【００２９】ｂｓＡｂによる腫瘍細胞へのおそらくアネ
ルギー化された腫瘍−特異Ｔ細胞の再指定およびｂｓＡ
ｂのＦｃ部分と結合する補助細胞によるそのような細胞
の同時の共−刺激により、ＣＴＬ類のアネルギー状態を
逆転することができる。すなわち、本発明によると腫瘍
に対して予め存在している患者のＴ細胞耐性を無傷のｂ
ｓＡｂにより逆転させそしてその結果として長期にわた
る抗−腫瘍免疫が誘導される。このことは、同系腫瘍お
よび無傷のｂｓＡｂを用いる処理後のそのような長期に
わたる抗−腫瘍免疫に指定されたマウスを用いる実験か
らの最初の生体内データにより支持される。これらの実
験では、最初の腫瘍注入後にｂｓＡｂで処置して成功を
収めた１４匹の試験動物のうちの１４匹は生存してお
り、追加のｂｓＡｂは投与せずに最初の注入から１４４
日後にさらに腫瘍注入を行った（実施例１参照）。
ルギー化された腫瘍−特異Ｔ細胞の再指定およびｂｓＡ
ｂのＦｃ部分と結合する補助細胞によるそのような細胞
の同時の共−刺激により、ＣＴＬ類のアネルギー状態を
逆転することができる。すなわち、本発明によると腫瘍
に対して予め存在している患者のＴ細胞耐性を無傷のｂ
ｓＡｂにより逆転させそしてその結果として長期にわた
る抗−腫瘍免疫が誘導される。このことは、同系腫瘍お
よび無傷のｂｓＡｂを用いる処理後のそのような長期に
わたる抗−腫瘍免疫に指定されたマウスを用いる実験か
らの最初の生体内データにより支持される。これらの実
験では、最初の腫瘍注入後にｂｓＡｂで処置して成功を
収めた１４匹の試験動物のうちの１４匹は生存してお
り、追加のｂｓＡｂは投与せずに最初の注入から１４４
日後にさらに腫瘍注入を行った（実施例１参照）。
【００３０】本発明に従う免疫方式は例えばＦｃγＲＩ
＋細胞に対してそれらのＦｃ部分を介して結合しうる無
傷のｂｓＡｂを使用する。さらに、本発明に従い使用さ
れるｂｓＡｂは腫瘍細胞−結合特異性の他に第二の特異
性として例えば抗−ＣＤ３を有しており、すなわちそれ
らは第二の結合アームを介してＴ細胞と結合しうる。そ
れ故、本発明に従い使用されるｂｓＡｂによってＴ細胞
が活性化されそして腫瘍細胞に対して再指定される。
＋細胞に対してそれらのＦｃ部分を介して結合しうる無
傷のｂｓＡｂを使用する。さらに、本発明に従い使用さ
れるｂｓＡｂは腫瘍細胞−結合特異性の他に第二の特異
性として例えば抗−ＣＤ３を有しており、すなわちそれ
らは第二の結合アームを介してＴ細胞と結合しうる。そ
れ故、本発明に従い使用されるｂｓＡｂによってＴ細胞
が活性化されそして腫瘍細胞に対して再指定される。
【００３１】抗−ｃ−ｅｒｂ−Ｂ２×抗−ＣＤ６４特異
性を有する二特異Ｆ(ａｂ′)２断片を用いる処理により
抗−腫瘍免疫を得ることが試みられた。ｂｓＦ(ａｂ′)
２断片の主な欠点は、使用される特異性のためにＦｃγ
ＲＩ＋細胞だけが腫瘍に再指定されることである。Ｔ細
胞はこの二特異抗体によって腫瘍に対して再指定されな
い。ｂｓＦ(ａｂ′)２断片は腫瘍を直接的に死滅させる
能力を有するがそれら自身では抗−腫瘍免疫を確立する
ことはできない。その特異Ｔ細胞受容体を有するＴ細胞
だけが抗−腫瘍免疫を与えることができる。ＦｃγＲＩ
＋細胞は例えば腫瘍細胞成分の食作用後の腫瘍−特異ペ
プチド類の（それぞれＭＨＣ ＩまたはＭＨＣ IIを介す
る）表示により腫瘍−特異Ｔ細胞を間接的に活性化させ
うるが、この場合の抗−腫瘍免疫の誘導効率は高くない
（患者の３０％だけ）。
性を有する二特異Ｆ(ａｂ′)２断片を用いる処理により
抗−腫瘍免疫を得ることが試みられた。ｂｓＦ(ａｂ′)
２断片の主な欠点は、使用される特異性のためにＦｃγ
ＲＩ＋細胞だけが腫瘍に再指定されることである。Ｔ細
胞はこの二特異抗体によって腫瘍に対して再指定されな
い。ｂｓＦ(ａｂ′)２断片は腫瘍を直接的に死滅させる
能力を有するがそれら自身では抗−腫瘍免疫を確立する
ことはできない。その特異Ｔ細胞受容体を有するＴ細胞
だけが抗−腫瘍免疫を与えることができる。ＦｃγＲＩ
＋細胞は例えば腫瘍細胞成分の食作用後の腫瘍−特異ペ
プチド類の（それぞれＭＨＣ ＩまたはＭＨＣ IIを介す
る）表示により腫瘍−特異Ｔ細胞を間接的に活性化させ
うるが、この場合の抗−腫瘍免疫の誘導効率は高くない
（患者の３０％だけ）。
【００３２】ｂｓＡｂの上記のｂｓＦ(ａｂ′)２断片と
比べたＴ細胞を再指定しうる無傷の他の利点を以下に詳
細に記載する。 １.Ｆｃ受容体−陽性細胞は無傷のｂｓＡｂと結合しそ
して一方ではＡＤＣＣ（抗体−依存性細胞−仲介細胞毒
性）を介する腫瘍死滅に直接的に寄与しそして他方では
以上で詳細に記載されているようにＴ細胞の活性化に寄
与することが可能である。 ２.Ｆｃ部分を有するｂｓＡｂの循環時間は例えばｂｓ
Ｆ(ａｂ′)２またはｂｓ(ｓｃＦｖ)抗体断片より相当長
いため、匹敵する抗−腫瘍効果を得るには無傷のａｂ分
子のかなり少ない投与量しか必要としない。 ３.本発明に従う無傷の二特異抗体の使用は特に残存腫
瘍細胞／微量転移の死滅に向けられる。上記の抗体断片
が有利である固体腫瘍または比較的大きい転移の処置と
は対照的に、それらはそれらの比較的小さい寸法のため
に比較的良好な腫瘍浸透を可能とする。 ４.無傷のＴ細胞−再指定ｂｓＡｂは、アネルギー化さ
れた腫瘍−特異Ｔ細胞を本発明に従い腫瘍部位において
直接的に再活性化できる腫瘍細胞に向ける機能を果す。
これは抗−ＣＤ６４Ｘ抗−腫瘍−会合抗原特異性を有す
るｂｓＦ(ａｂ′)２断片を用いて得ることは不可能であ
る。 ５.抗−ＣＤ６４Ｘ抗−腫瘍−会合抗原特異性を有する
ｂｓＦ(ａｂ′)２断片は患者の３０％でしか抗−腫瘍免
疫を得ることができないが、本発明によるとマウスを用
いる実験でＴ細胞−再指定の無傷ｂｓＡｂを用いて動物
の１００％の保護が得られた。
比べたＴ細胞を再指定しうる無傷の他の利点を以下に詳
細に記載する。 １.Ｆｃ受容体−陽性細胞は無傷のｂｓＡｂと結合しそ
して一方ではＡＤＣＣ（抗体−依存性細胞−仲介細胞毒
性）を介する腫瘍死滅に直接的に寄与しそして他方では
以上で詳細に記載されているようにＴ細胞の活性化に寄
与することが可能である。 ２.Ｆｃ部分を有するｂｓＡｂの循環時間は例えばｂｓ
Ｆ(ａｂ′)２またはｂｓ(ｓｃＦｖ)抗体断片より相当長
いため、匹敵する抗−腫瘍効果を得るには無傷のａｂ分
子のかなり少ない投与量しか必要としない。 ３.本発明に従う無傷の二特異抗体の使用は特に残存腫
瘍細胞／微量転移の死滅に向けられる。上記の抗体断片
が有利である固体腫瘍または比較的大きい転移の処置と
は対照的に、それらはそれらの比較的小さい寸法のため
に比較的良好な腫瘍浸透を可能とする。 ４.無傷のＴ細胞−再指定ｂｓＡｂは、アネルギー化さ
れた腫瘍−特異Ｔ細胞を本発明に従い腫瘍部位において
直接的に再活性化できる腫瘍細胞に向ける機能を果す。
これは抗−ＣＤ６４Ｘ抗−腫瘍−会合抗原特異性を有す
るｂｓＦ(ａｂ′)２断片を用いて得ることは不可能であ
る。 ５.抗−ＣＤ６４Ｘ抗−腫瘍−会合抗原特異性を有する
ｂｓＦ(ａｂ′)２断片は患者の３０％でしか抗−腫瘍免
疫を得ることができないが、本発明によるとマウスを用
いる実験でＴ細胞−再指定の無傷ｂｓＡｂを用いて動物
の１００％の保護が得られた。
【００３３】Ｆｃγ−ＲＩへのｂｓＡｂの結合は最適な
抗−腫瘍効果に関する下記の２つの本質的利点を示す：
Ｆｃγ−ＲＩ−陽性細胞はＡＤＣＣにより腫瘍細胞を排
除する能力を有しており（２）そしてその結果としてｂ
ｓＡｂにより腫瘍に指定された細胞毒性Ｔ細胞の抗−腫
瘍効果に相乗的に寄与することができる（３）。 １.ＦｃγＲＩ−陽性細胞（例えば単球／マクロファー
ジ／樹枝状細胞）はＴ細胞に対して抗原表示と同様な重
要な共−刺激信号を与えそしてそれによりＴ細胞のアネ
ルギー化を防止することができる。さらに、図１に示さ
れているように、腫瘍−特異ペプチド類（腫瘍細胞上に
ＭＨＣ抗原を介して表示される）を認識するＴ細胞受容
体を有するＴ細胞でも補助細胞および腫瘍細胞を有する
Ｔ細胞のｂｓＡｂ−仲介相互作用により望ましい副生物
として刺激することができる。この条件で、Ｔ細胞の正
確な活性化に必要な共−刺激が補助細胞（例えば単球）
により与えられるであろう。それ故、直接的なＴ細胞受
容体−非依存性ｂｓＡｂ−仲介腫瘍死滅（図１Ａ）の他
に本発明の解決法は腫瘍−特異Ｔ細胞を活性化および発
生させることができるはずであり（図１Ｂ）、この細胞
はｂｓＡｂの分解後に患者の監視を続行する。これは、
無傷のｂｓＡｂによる遺伝子療法方式（例えば腫瘍細胞
中へのＢ−７の如き共−刺激抗原の導入による）と同様
に患者における腫瘍耐性を逆転できることを意味する。
これに関しては、各々の細胞上のＦｃγ−ＲＩの発現を
Ｇ−ＣＳＦ処置後に上方−調節することも有利である。
抗−腫瘍効果に関する下記の２つの本質的利点を示す：
Ｆｃγ−ＲＩ−陽性細胞はＡＤＣＣにより腫瘍細胞を排
除する能力を有しており（２）そしてその結果としてｂ
ｓＡｂにより腫瘍に指定された細胞毒性Ｔ細胞の抗−腫
瘍効果に相乗的に寄与することができる（３）。 １.ＦｃγＲＩ−陽性細胞（例えば単球／マクロファー
ジ／樹枝状細胞）はＴ細胞に対して抗原表示と同様な重
要な共−刺激信号を与えそしてそれによりＴ細胞のアネ
ルギー化を防止することができる。さらに、図１に示さ
れているように、腫瘍−特異ペプチド類（腫瘍細胞上に
ＭＨＣ抗原を介して表示される）を認識するＴ細胞受容
体を有するＴ細胞でも補助細胞および腫瘍細胞を有する
Ｔ細胞のｂｓＡｂ−仲介相互作用により望ましい副生物
として刺激することができる。この条件で、Ｔ細胞の正
確な活性化に必要な共−刺激が補助細胞（例えば単球）
により与えられるであろう。それ故、直接的なＴ細胞受
容体−非依存性ｂｓＡｂ−仲介腫瘍死滅（図１Ａ）の他
に本発明の解決法は腫瘍−特異Ｔ細胞を活性化および発
生させることができるはずであり（図１Ｂ）、この細胞
はｂｓＡｂの分解後に患者の監視を続行する。これは、
無傷のｂｓＡｂによる遺伝子療法方式（例えば腫瘍細胞
中へのＢ−７の如き共−刺激抗原の導入による）と同様
に患者における腫瘍耐性を逆転できることを意味する。
これに関しては、各々の細胞上のＦｃγ−ＲＩの発現を
Ｇ−ＣＳＦ処置後に上方−調節することも有利である。
【００３４】
【実施例】二特異抗体による抗−腫瘍免疫誘導問題を研
究するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに最初に５×１０
3個の同系Ｂ１６腫瘍細胞を注入した。２日後に、 グア
ドローマ技術（１）を使用して製造しそして腫瘍細胞上
のｅｐＣＡＭ標的構造（Ｃ２１５＝腫瘍−会合抗原）並
びにＴ細胞上のＣＤ３を認識する無傷のｂｓＡｂを用い
てマウスの１群（ｎ＝１８）を処理した。このｂｓＡｂ
はＩｇＧ２ａ／ラットＩｇＧ２ｂ副種組み合わせであっ
た。第二群（ｎ＝６）はｂｓＡｂ中に含有された等モル
量の二特異性Ｆａｂ断片だけを摂取した。Ｆａｂ対照群
の動物の全ては５６日以内に死ぬかまたは入眠したが、
ｂｓＡｂで処理した１８匹の動物のうちの１４匹が生存
していた。生存動物は腫瘍細胞の最初の注入から１４４
日後に追加投与量の７５０Ｂ１６腫瘍細胞のｉｐ注入を
受けたが、この時点ではｂｓＡｂの投与はなかった。同
量の腫瘍細胞を対照として使用する５匹の未処置動物に
投与した。未処置対照群の最後の動物は腫瘍注入から６
６日後に入眠したが、ｂｓＡｂで処置した動物の全ては
生存していた（監視期間：腫瘍細胞の第２回注入後から
１２０日間）。図２Ａおよび２Ｂ：上記の２つの連続実
験の生存曲線も参照のこと。これらの実験は本発明に従
い与えられる二特異抗体および三特異抗体を使用すると
長期にわたる抗−腫瘍免疫を誘導できることを示してい
る。これらの現象は人間にも適用できることが予測で
き、その場合には少なくとも５、６年間にわたり持続す
る長期の抗−腫瘍免疫を予測することができる。
究するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに最初に５×１０
3個の同系Ｂ１６腫瘍細胞を注入した。２日後に、 グア
ドローマ技術（１）を使用して製造しそして腫瘍細胞上
のｅｐＣＡＭ標的構造（Ｃ２１５＝腫瘍−会合抗原）並
びにＴ細胞上のＣＤ３を認識する無傷のｂｓＡｂを用い
てマウスの１群（ｎ＝１８）を処理した。このｂｓＡｂ
はＩｇＧ２ａ／ラットＩｇＧ２ｂ副種組み合わせであっ
た。第二群（ｎ＝６）はｂｓＡｂ中に含有された等モル
量の二特異性Ｆａｂ断片だけを摂取した。Ｆａｂ対照群
の動物の全ては５６日以内に死ぬかまたは入眠したが、
ｂｓＡｂで処理した１８匹の動物のうちの１４匹が生存
していた。生存動物は腫瘍細胞の最初の注入から１４４
日後に追加投与量の７５０Ｂ１６腫瘍細胞のｉｐ注入を
受けたが、この時点ではｂｓＡｂの投与はなかった。同
量の腫瘍細胞を対照として使用する５匹の未処置動物に
投与した。未処置対照群の最後の動物は腫瘍注入から６
６日後に入眠したが、ｂｓＡｂで処置した動物の全ては
生存していた（監視期間：腫瘍細胞の第２回注入後から
１２０日間）。図２Ａおよび２Ｂ：上記の２つの連続実
験の生存曲線も参照のこと。これらの実験は本発明に従
い与えられる二特異抗体および三特異抗体を使用すると
長期にわたる抗−腫瘍免疫を誘導できることを示してい
る。これらの現象は人間にも適用できることが予測で
き、その場合には少なくとも５、６年間にわたり持続す
る長期の抗−腫瘍免疫を予測することができる。
【００３５】 無傷のｂｓＡｂによる体液性免疫反応の
誘導の検出および患者または動物の生存予後に関するそ
の重要性 記述： 主としてＴ細胞により維持される細胞免疫の他に、体液
性免疫は腫瘍認識および死滅においても同様に重要な役
割を演ずる。このための証拠は多くの研究、例えば Rod
olfo et al. (J. Immunol. 157, 5536, 1996) の研究、
から得られていた。Rodolfo 他は（１）腫瘍−特異Ｔ細
胞がそれぞれＩＬ−１２またはＩＬ−２により形質導入
された腫瘍細胞ワクチンの投与により誘導されること、
（２）補体−固定抗体との有効な体液性免疫反応はＩＬ
−１２形質導入腫瘍細胞を使用してのみ発生できるとい
うことを示すことができた。興味あることに、これらの
実験では抗−腫瘍特異性を有する補体−固定抗体を生成
した動物だけが生存した。本発明に従い実施された試験
管内実験により我々はここに記載した無傷の二特異抗体
を使用するとそれらの結合およびＦｃγ受容体−陽性細
胞の活性化（図１参照）により後者が例えばＩＬ−１２
の如きサイトカイン類を発生および分泌しうる（表１参
照）ことを示すことができた。それ故、ここに記載した
無傷のｂｓＡｂにより、そうでない場合には遺伝子療法
方式の枠組内の遺伝子伝達を使用してのみ発現しうるサ
イトカイン類の生成を遺伝子伝達なしで誘導することが
できた。この観察は、ＩＬ−１２が抗−腫瘍免疫の誘導
において重要な役割を明らかに演じたため、重要であ
る。上記の実施例で示された動物実験では腫瘍投与から
１４３日目のｂｓＡｂ処置後に生存するマウスの尾の血
液中で腫瘍−反応性補体−固定抗体を検出することがで
きた。このことは、死亡した動物ではこれらの抗体は全
くまたは少量しか検出できないためそのような抗体が動
物の生存に少なくとも寄与することを示している。上記
の実験は二特異抗体を使用して行われた。二特異抗体の
代わりに、本明細書中に記載されている三特異抗体を使
用しても同様な結果を得ることができる。上記の如く、
本発明に従い提供される二特異および三特異抗体を用い
る処置により体液性免疫反応の誘導を示す腫瘍−反応性
補体−結合抗体が発生する。これが例えばＩＬ−１２の
如きサイトカイン類の生成の誘導と一緒になって本発明
に従う長期にわたる抗−腫瘍免疫の誘導に対しておそら
く少なくとも寄与することとなる。従って、腫瘍患者の
疾病進行（予後）の検査のために本発明に従う二特異ま
たは三特異抗体を用いる処理により誘導される量の補体
−結合腫瘍−反応性抗体を使用することもできる。腫瘍
−反応性補体−固定抗体の量が多くなればなるほど、腫
瘍患者の予後は好ましい。例えば本発明に従い開示され
ている無傷の二特異抗体の使用は原発性腫瘍の処置後
に、好適には最少残余疾病（ＭＲＤ）状態にある患者に
おいて、行われる。本発明に従う無傷の二特異抗体の使
用は少量の残存腫瘍細胞を有するが高い再発の危険性の
ある患者においてのみ重要性を増すであろう。
誘導の検出および患者または動物の生存予後に関するそ
の重要性 記述： 主としてＴ細胞により維持される細胞免疫の他に、体液
性免疫は腫瘍認識および死滅においても同様に重要な役
割を演ずる。このための証拠は多くの研究、例えば Rod
olfo et al. (J. Immunol. 157, 5536, 1996) の研究、
から得られていた。Rodolfo 他は（１）腫瘍−特異Ｔ細
胞がそれぞれＩＬ−１２またはＩＬ−２により形質導入
された腫瘍細胞ワクチンの投与により誘導されること、
（２）補体−固定抗体との有効な体液性免疫反応はＩＬ
−１２形質導入腫瘍細胞を使用してのみ発生できるとい
うことを示すことができた。興味あることに、これらの
実験では抗−腫瘍特異性を有する補体−固定抗体を生成
した動物だけが生存した。本発明に従い実施された試験
管内実験により我々はここに記載した無傷の二特異抗体
を使用するとそれらの結合およびＦｃγ受容体−陽性細
胞の活性化（図１参照）により後者が例えばＩＬ−１２
の如きサイトカイン類を発生および分泌しうる（表１参
照）ことを示すことができた。それ故、ここに記載した
無傷のｂｓＡｂにより、そうでない場合には遺伝子療法
方式の枠組内の遺伝子伝達を使用してのみ発現しうるサ
イトカイン類の生成を遺伝子伝達なしで誘導することが
できた。この観察は、ＩＬ−１２が抗−腫瘍免疫の誘導
において重要な役割を明らかに演じたため、重要であ
る。上記の実施例で示された動物実験では腫瘍投与から
１４３日目のｂｓＡｂ処置後に生存するマウスの尾の血
液中で腫瘍−反応性補体−固定抗体を検出することがで
きた。このことは、死亡した動物ではこれらの抗体は全
くまたは少量しか検出できないためそのような抗体が動
物の生存に少なくとも寄与することを示している。上記
の実験は二特異抗体を使用して行われた。二特異抗体の
代わりに、本明細書中に記載されている三特異抗体を使
用しても同様な結果を得ることができる。上記の如く、
本発明に従い提供される二特異および三特異抗体を用い
る処置により体液性免疫反応の誘導を示す腫瘍−反応性
補体−結合抗体が発生する。これが例えばＩＬ−１２の
如きサイトカイン類の生成の誘導と一緒になって本発明
に従う長期にわたる抗−腫瘍免疫の誘導に対しておそら
く少なくとも寄与することとなる。従って、腫瘍患者の
疾病進行（予後）の検査のために本発明に従う二特異ま
たは三特異抗体を用いる処理により誘導される量の補体
−結合腫瘍−反応性抗体を使用することもできる。腫瘍
−反応性補体−固定抗体の量が多くなればなるほど、腫
瘍患者の予後は好ましい。例えば本発明に従い開示され
ている無傷の二特異抗体の使用は原発性腫瘍の処置後
に、好適には最少残余疾病（ＭＲＤ）状態にある患者に
おいて、行われる。本発明に従う無傷の二特異抗体の使
用は少量の残存腫瘍細胞を有するが高い再発の危険性の
ある患者においてのみ重要性を増すであろう。
【００３６】「腫瘍免疫」という語は腫瘍疾病に罹って
いる人間または動物の腫瘍に対して指定されている体液
性および／または細胞免疫に関する誘導を含む。これ
は、腫瘍に対して指定されている腫瘍特異抗体および／
または腫瘍特異Ｔ細胞または他の免疫細胞が誘導される
ことを意味する。
いる人間または動物の腫瘍に対して指定されている体液
性および／または細胞免疫に関する誘導を含む。これ
は、腫瘍に対して指定されている腫瘍特異抗体および／
または腫瘍特異Ｔ細胞または他の免疫細胞が誘導される
ことを意味する。
【００３７】
【００３８】
【００３９】参考文献
１. Lindhofer et al, Preferential species-restrict
ed heavy-light chain pairing in rat-mouse guadroma
s: Implications for a single step purification of
bispecific antibodeis, J. Immunology 1995, 155:219 2. Valerius et al., Involvement of the high-affini
ty receptor for IgG (FcγRI; CD64) in enhanced tum
or cell cytotoxicity of nuetrophils duringgranuloc
yte colony-stimulating factor therapy, Blood, 199
3, 82:931-939 ３. Weiner et al., The role of T cell activation i
n anti-CD3 x antitumorbispecific antibody therapy,
J. Immunology, 1994, 152:2385
ed heavy-light chain pairing in rat-mouse guadroma
s: Implications for a single step purification of
bispecific antibodeis, J. Immunology 1995, 155:219 2. Valerius et al., Involvement of the high-affini
ty receptor for IgG (FcγRI; CD64) in enhanced tum
or cell cytotoxicity of nuetrophils duringgranuloc
yte colony-stimulating factor therapy, Blood, 199
3, 82:931-939 ３. Weiner et al., The role of T cell activation i
n anti-CD3 x antitumorbispecific antibody therapy,
J. Immunology, 1994, 152:2385
【図１】 二特異抗体を使用する腫瘍の免疫療法におけ
る補助細胞の役割を示す図である。
る補助細胞の役割を示す図である。
【図２】 生体内実験で得られた結果の図表である。
【図３】 本発明に従う二特異抗体の例である。
【図４】 三特異Ｆ(ａｂ)2抗体を示す図である。
【図５】 三特異ｓｃＦｖ抗体を示す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 ホルスト・リントホーファー
ドイツ・Ｄ−82194・グレーベンツェ
ル・ピルゼンジーヴェーク・４
(72)発明者 ハンス−ヨッヘム・コルプ
ドイツ・Ｄ−80804・ミュンヘン・レル
ヒェナウアーシュトラーセ・39
(72)発明者 シュテファン・ティアフェルダー
ドイツ・Ｄ−82223・アイヒェナウ・ビ
ルケンハイン・５
(56)参考文献 特表 平１−501200（ＪＰ，Ａ)
特表 平１−500195（ＪＰ，Ａ)
特表 平６−502410（ＪＰ，Ａ)
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，152：2385〜
2392（1994)
Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ 61：509
〜515（1995)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 39/395
C07K 16/30
C12N 15/00
Claims (7)
- 【請求項１】 次の(ａ)ないし(ｅ)の性質および効果： （ａ）Ｔ細胞への結合およびそれに対する第一の活性化
信号の仲介、 （ｂ）腫瘍細胞上の腫瘍−特異抗原への結合、 （ｃ）そのＦｃ部分を介するＦｃ受容体−陽性細胞のＦ
ｃ受容体への結合、 （ｄ）Ｆｃ受容体−陽性細胞に結合しそしてそれにより
サイトカイン類および／または共−刺激抗原の発現を開
始または増加させることによるＦｃ受容体−陽性細胞の
活性化、 （ｅ）活性化標識の上方−調節、腫瘍細胞の死滅、およ
び／またはＴ細胞増殖により示される、Ｔ細胞の生理的
活性化用に必要な少なくとも第二の活性化信号の共−刺
激抗原および／またはサイトカイン類によるＴ細胞への
伝達を有する、腫瘍細胞上のｅｐＣＡＭ標的構造並びに
Ｔ細胞上のＣＤ３を認識する、マウスＩｇＧ２ａ／ラッ
トＩｇＧ２ｂサブクラス副種組み合わせより成る無傷の
二特異抗体を有効量含む抗−腫瘍免疫の誘導薬である医
薬。 - 【請求項２】 上記抗体がＦｃγ受容体Ｉ、II、または
IIIを有するＦｃ受容体−陽性細胞と結合しうることを
特徴とする、請求項１に記載の医薬。 - 【請求項３】 上記抗体がＦｃγ受容体Ｉ−陽性細胞で
ある単球、マクロファージおよび／または樹枝状細胞と
結合しうることを特徴とする、請求項１または２に記載
の医薬。 - 【請求項４】 Ｆｃ受容体−陽性細胞により、共−刺激
抗原ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ−１、お
よび／もしくはＬＦＡ−３の発現並びに／またはサイト
カイン類の分泌を開始または増加させることを特徴とす
る、請求項１に記載の医薬。 - 【請求項５】 サイトカイン類がＩＬ−１、ＩＬ−２、
ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、および／
またはＴＮＦ−αであることを特徴とする、請求項４に
記載の医薬。 - 【請求項６】 Ｔ細胞への上記結合がＴ細胞のＴ細胞受
容体複合体を介して起きることを特徴とする、請求項１
に記載の医薬。 - 【請求項７】 最少残余疾病（ＭＲＤ）状態の治療薬
で、投与が５μｇ−１０ｍｇ／患者である、請求項１に
記載の医薬。
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